JP2020022392A - 乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
乳酸菌凍結乾燥菌体の製造:
(1)分散媒懸濁液の調製
MRS培地で前培養したラクトバチルス・カゼイ YIT 9029(以下、「LcS」ということもある)の培養液を、別のMRS培地4Lに0.1%接種後、37℃で16時間(定常期に達するまで)静置培養した。次いで、培養液を遠心(4℃、14000×g、30分間)し、菌体を生理食塩水で1回洗浄後、LcSの菌体を分散媒(脱脂粉乳10%、トレハロース5%、アスコルビン酸0.5%を含有する水溶液)に添加・混合し、分散媒懸濁液を得た。分散媒を4等分し、5N水酸化ナトリウムにてpH7.0、8.0、9.0または10.0にpHを調整した後、馬鈴薯デンプンを5%添加・混合し、分散媒懸濁液を得た。
(1)で得た分散媒懸濁液を凍結乾燥器(TF20−80TANN:(株)宝製作所製)にてマイナス40℃で2日間凍結後、棚温20℃で2日間凍結乾燥を行った。この凍結乾燥物を粉砕し、LcS凍結乾燥菌体を得た。
(2)で得たLcS凍結乾燥菌体を、チャック付きラミネート袋(ラミジップ:生産日本社製)に分包し、乾燥剤(ケアドライCP-5、大江化学工業(株))を入れ、空気をよくぬきチャックを閉めた。その後、37℃にて表1に記載の期間保存し、保存前、保存後の生菌数を測定した。生菌数の測定は、スパイラルプレーター(EDDY JET、IUL Instruments)で行った。また、生菌数から各保存期間後の生残率を算出した。それらの結果も表1に示した。さらに、pH7.0に調整した生菌数を100%とした時に、pH9.0の生菌数との生菌数の比がいくつになるかを以下の式で算出した。
乳酸菌凍結乾燥菌体の製造:
実施例1において、ラクトバチルス・カゼイYIT9029に代えてラクトバチルス・クリスパータス YIT 12319(以下、「LcY」ということもある)を用い、培養液の遠心条件を4℃、4500×g、7分間とし、分散媒のpHを7.0または9.0にする以外は同様にしてLcY凍結乾燥菌体を得た。これらについて実施例1と同様にして生菌数を測定した。その結果を表2に示した。また、pH7.0の生菌数を100%とした時に、pH9.0の生菌数との生菌数の比がいくつになるかを実施例1と同様にして算出した。
乳酸菌凍結乾燥菌体の製造:
(1)分散媒懸濁液の調製
SMB培地(大豆ペプトン2%、酵母エキス(ミーストP1G:登録商標、アサヒビール食品(株)製)2%、発酵大麦エキス(バーレックス:登録商標、三和酒類(株)製)6%、モノオレイン酸デカグリセリン(サンソフトQ17−S:登録商標、太陽化学(株)製)0.1%、ラクトース2%を含有するpH6.7の培地)で前培養したLcYの培養液を、SMB培地2Lに0.1%ずつ接種後、37℃で12時間(定常期に達するまで)静置培養した。次いで、培養液をそれぞれ遠心(4℃、4500×g、7分間)し、菌体を生理食塩水で1回洗浄後、LcYの菌体を分散媒(脱脂粉乳20%、トレハロース10%、アスコルビン酸1%を含有する水溶液)に添加・混合した(pH5.1)。pHを調整しない系では、さらに馬鈴薯デンプンを10%添加・混合し、分散媒懸濁液を得た。一方、分散媒のpHを調整する系では5N水酸化ナトリウムにてpH7.0および9.0にpHを調整した後、馬鈴薯デンプンを10%添加・混合し、分散媒懸濁液を得た。
(1)で得た分散媒懸濁液を凍結乾燥器(TF20−80TANN:(株)宝製作所製)にてマイナス40℃で2日間凍結後、棚温20℃で2日間凍結乾燥を行った。この凍結乾燥物を粉砕し、LcY凍結乾燥菌体を得た。
(2)で得たLcY凍結乾燥菌体を、チャック付きラミネート袋(ラミジップ:生産日本社製)に分包し、空気をよくぬきチャックを閉めた。その後、37℃にて表3に記載の期間保存し、保存前、保存後の生菌数を測定した。生菌数の測定は、スパイラルプレーター(EDDY JET、IUL Instruments)で行った。また、実施例1と同様にして生残率を算出した。さらに、pH無調整の生菌数を100%とした時に、pH7.0または9.0の生菌数との生菌数の比がいくつになるかを以下の式で算出した。それらの結果も表3に示した。また、pH7.0の生菌数を100%とした時に、pH9.0の生菌数との生菌数の比がいくつになるかを実施例1と同様にして算出した。
乳酸菌凍結乾燥菌体の製造:
実施例3において、静置培養を37℃で12時間行うのに代えて、30℃で22時間行う以外は同様にしてLcY凍結乾燥菌体を得た。これらについて実施例1と同様にして生菌数を測定し、生残率を算出した。また、pH7.0の生菌数を100%とした時に、pH9.0の生菌数との生菌数の比がいくつになるかを実施例1と同様にして算出した。その結果を表4に示した。
Claims (8)
- 乳酸菌菌体を分散媒に分散し、当該分散媒のpHを7.5〜10.5に調整した後、凍結乾燥することを特徴とする乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法。
- 分散媒が、脱脂粉乳、トレハロース、アスコルビン酸および馬鈴薯デンプンからなる群から選ばれる1種以上を含有する水溶液である請求項1記載の乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法。
- 乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である請求項1または2記載の乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法。
- 乳酸菌が、ラクトバチルス・クリスパータスおよび/またはラクトバチルス・カゼイである請求項1または2記載の乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法。
- 乳酸菌凍結乾燥菌体を37℃で8週間保存後の生菌数が、乳酸菌菌体を分散媒に分散し、当該分散媒のpHを7.0に調整した後、凍結乾燥して得られる乳酸菌凍結乾燥菌体を37℃で8週間保存後の生菌数を100%とした時の120%以上である請求項1〜4の何れか1項記載の乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法。
- 37℃で8週間保存後の生菌数が、乳酸菌菌体を分散媒に分散し、当該分散媒のpHを7.0に調整した後、凍結乾燥して得られる乳酸菌凍結乾燥菌体を37℃で8週間保存後の生菌数を100%とした時の120%以上であることを特徴とする乳酸菌凍結乾燥菌体。
- 乳酸菌が、ラクトバチルス属乳酸菌である請求項6記載の乳酸菌凍結乾燥菌体。
- 乳酸菌が、ラクトバチルス・クリスパータスおよび/またはラクトバチルス・カゼイである請求項6または7記載の乳酸菌凍結乾燥菌体。
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