JP2018535204A - Ｃｄ８０細胞外ドメインポリペプチドと、がん治療でのそれらの使用 - Google Patents

Ｃｄ８０細胞外ドメインポリペプチドと、がん治療でのそれらの使用 Download PDF

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Abstract

本願は、ＣＤ８０（Ｂ７−１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ポリペプチド及びＣＤ８０−ＥＣＤ融合分子、ならびにそれらを単独で、かつ他の治療剤（免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）と組み合わせてがんの治療に使用することに関するものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ポリペプチドまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を提供する。いくつかの実施形態では、この融合分子は、ＣＤ８０ ＥＣＤと、免疫グロブリン（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４など）のＦｃドメイン、アルブミンまたはポリマー（ＰＥＧなど）を含む少なくとも１つの融合パートナーとを含む。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１６年８月１１日に提出された米国特許仮出願第６２／３７３，６５４号と、２０１５年１１月２日に提出された同第６２／２４９，８３６号に基づく優先権を主張するものであり、これらの仮出願はいずれも、参照により、その全体が本明細書に援用される。
本願は、ＣＤ８０（Ｂ７−１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ポリペプチド及びＣＤ８０−ＥＣＤ融合分子、ならびに、がん治療において、それらを単独で、または免疫刺激剤など他の治療剤（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）と組み合わせて使用することに関するものである。
ＣＤ８０（Ｂ７−１としても知られている）は、そのリガンド結合活性を通じて、共刺激または共阻害応答をもたらすことによって、免疫調節に関与する膜結合タンパク質のＢ７ファミリーの１つである。Ｂ７タンパク質ファミリーの他のメンバーとしては、ＣＤ８６（Ｂ７−２）、誘導性共刺激因子リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、プログラム死−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１）、プログラム死−２リガンド（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２）、Ｂ７−Ｈ３及びＢ７−Ｈ４が挙げられる。ＣＤ８０は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び単球の表面で発現する膜貫通タンパク質であり、レセプターのＣＤ２８、ＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２）及びＰＤ−Ｌ１に結合する。ＣＤ８０及びＣＤ８６、ならびにそれらのレセプターのＣＴＬＡ４及びＣＤ２８は、共刺激−共阻害系として機能して、例えば、Ｔ細胞の活性化、増加、分化及び生存を制御する。ＣＤ８０及びＣＤ８６のＣＤ２８との相互作用により、例えば、Ｔ細胞応答を活性化させる共刺激シグナルが生成される。そして、ＣＤ８０は、ＣＴＬＡ４のアップレギュレーションを刺激し、このＣＴＬＡ４は、ＣＤ８０に結合すると、ＣＤ８０／ＣＤ２８相互作用によって以前に誘発されたＴ細胞応答を抑制するように作用する。このフィードバックループにより、免疫応答を細かく制御可能になる。
ＣＤ８０は、ＣＤ２８に対する親和性が同程度である別のＢ７ファミリーメンバーＰＤ−Ｌ１と相互作用することも示されているが、ＣＤ８６は、ＰＤ−Ｌ１とは相互作用しない。ＰＤ−Ｌ１は、プログラム死−１（ＰＤ−１）タンパク質（このタンパク質もＴ細胞の調節に関与する）の２つのリガンドのうちの１つである。具体的には、Ｔ細胞が活性化した後に、Ｔ細胞でのＰＤ−１の発現が誘導されることがあり、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１への結合は、Ｔ細胞の不活化を促すことによって、Ｔ細胞活性をダウンレギュレートする。多くの腫瘍細胞は、その表面にＰＤ−Ｌ１を発現して、場合によって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用と、その腫瘍に対するＴ細胞応答の阻害をもたらす。この観察により、患者の腫瘍に対する自然免疫応答を刺激するように設計したがん治療剤として、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用のインヒビターの開発に至っている。
ＣＤ８０のＰＤ−Ｌ１への結合は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用をブロックして、腫瘍部位においてＴ細胞応答の阻害を防ぐための代替的な機構として機能し得る。しかしながら、同時に、ＣＤ８０レベルの向上は、ＣＤ２８に結合するとともに、ＣＴＬＡ４を誘導するのにも利用可能となり得るので、Ｔ細胞応答を誘導または阻害する。いくつかの可溶型のＣＤ８０も、内因性ＣＤ８０活性をブロックすることによって、ＣＴＬＡ４の活性化をブロックするように機能し得る。加えて、異なる可溶性ＣＤ８０タンパク質形態は、そのタンパク質形態と腫瘍細胞との別の相互作用（その影響は、検査前には予測できない）を通じて、腫瘍の成長に対して異なる作用を有し得る。実際に、インビボにおいて、どれほど多様な可溶型ＣＤ８０が腫瘍の成長に影響を及ぼすのかについても、これまでは直接的な調査は行われていない。本発明者は、マウスモデルにおいて、単独で投与したときと、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと併せて投与したときの両方において、腫瘍の成長に対して特に強力な作用を持つ一連のＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子を開発した。下記の実施例に示されているデータに基づくと、本発明の実施形態は、がん治療において、優れた治療効果をもたらすことができる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ポリペプチドまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を提供する。いくつかの実施形態では、この融合分子は、ＣＤ８０ ＥＣＤと、免疫グロブリン（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４など）のＦｃドメイン、アルブミンまたはポリマー（ＰＥＧなど）を含む少なくとも１つの融合パートナーとを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、ヒトＣＤ８０（配列番号５のヒトＣＤ８０など）、またはＣＤ８０アイソフォーム２もしくはアイソフォーム３由来のヒトＣＤ８０ ＥＣＤ（配列番号３及び４）を含む。いくつかの実施形態では、この融合分子は、Ｆｃドメイン（配列番号９〜１６から選択した配列を含むＦｃドメインなど）を含む。いくつかの実施形態では、この融合分子は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（配列番号１４のような野生型配列、あるいは、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓというアミノ酸置換を有する変異配列（配列番号１２の配列など）を有するドメインなど）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号２０及び配列番号２１から選択したアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の融合パートナーは、ＣＤ８０ ＥＣＤアミノ酸配列のＣ末端アミノ酸または成熟ＣＤ８０ ＥＣＤアミノ酸配列のＮ末端アミノ酸に直接結合している。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、リンカーペプチド（ＧＳリンカーなど）を介して、ＣＤ８０ ＥＣＤに結合していてよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子のシアル酸含有量は、１０〜６０モルのシアル酸（ＳＡ）／１モルのタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モルのＳＡ（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルのＳＡなど）／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかのこのような実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、例えば、野生型Ｆｃドメイン（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメインなど）、またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓという置換を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメインを有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号２０及び配列番号２１から選択したアミノ酸配列を含む。上記のいくつかの実施形態では、融合分子の、マウス同系または異種移植モデル（ＣＴ２６マウスモデルなど）における腫瘍成長阻害率は、同一のアミノ酸配列であるが、ＳＡ含有量の少ない融合分子よりも高い。融合分子が、少なくとも１０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含む上記のいくつかの実施形態では、融合分子の、マウス同系または異種移植モデル（ＣＴ２６マウスモデルなど）における腫瘍成長阻害率は、それぞれ、同一のアミノ酸配列であるが、１０モル未満のＳＡ／１モルのタンパク質、１５モル未満のＳＡ／１モルのタンパク質または２０モル未満のＳＡ／１モルのタンパク質である融合分子よりも高い。
本発明のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのマウス同系または異種移植がんモデル（ＣＴ２６モデルなど）において、少なくとも１０日の期間にわたって（少なくとも２週間、例えば、１０日〜２週間、２〜３週間または少なくとも３週間の期間にわたってなど）、腫瘍細胞成長を少なくとも５０％（少なくとも６０％、例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％など）阻害できるＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を含む。
いくつかの実施形態では、マウスに、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子を０．３〜３ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）、１〜３回投与する。いくつかのこのような実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子のシアル酸含有量は、１０〜６０モルのシアル酸（ＳＡ）／１モルのタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）でもある。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は融合パートナーとして、Ｆｃ（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインなど）を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号２０及び配列番号２１から選択したアミノ酸配列を含む。融合分子が、少なくとも１０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含む上記のいくつかの実施形態では、この分子の、マウス同系または異種移植モデル（ＣＴ２６マウスモデルなど）における腫瘍成長阻害率は、それぞれ、同一のアミノ酸配列であるが、１０モル未満のＳＡ／１モルのタンパク質、１５モル未満のＳＡ／１モルのタンパク質または２０モル未満のＳＡ／１モルのタンパク質である融合分子よりも大きい。融合分子が、少なくとも１０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含む上記のいくつかの実施形態では、この分子の、マウス同系または異種移植モデル（ＣＴ２６マウスモデルなど）における腫瘍成長阻害率は、少なくとも１０日後、少なくとも２週間後または少なくとも３週間後（１０日〜２週間後、または２〜３週間後など）、抗ＣＴＬＡ４抗体（抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９など）よりも大きい。
上記の実施形態のいくつかでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子は、同系または異種移植腫瘍モデル（ＣＴ２６モデルなど）のマウスにおいて、完全な腫瘍退縮を誘導することもできる。
また、本明細書で提供するのは、上記の実施形態のいずれかのＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を含むとともに、少なくとも１つの製薬学的に許容可能な担体をさらに含む組成物である。いくつかのこのような組成物は、少なくとも１つの追加の治療剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、少なくとも１つの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）インヒビターを含む。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗体（抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体など）、ペプチド、融合分子、または小分子であってよい。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含むか、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むか、または完全アミノ酸配列を含む抗体など）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲ、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域または完全アミノ酸配列を含む抗体など）である。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、ＰＤ−１融合分子（ＡＭＰ−２２４）またはポリペプチド（ＡＵＲ−０１２など）である。
また、本発明に含まれるのは、対象のがんの治療方法であって、上記の実施形態のＣＤ８０ ＥＣＤ、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質または組成物を有効量、対象に投与することを含む方法である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、大腸がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、頭頚部扁平上皮癌、卵巣がん、膵臓がん、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱がん及び子宮体がんから選択する。いくつかの実施形態では、がんは、手術、化学療法、放射線療法またはこれらを組み合わせたものから選択した療法の後、再発性または進行性のものである。
本発明の方法のいくつかでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子または組成物は、少なくとも１つの追加の治療剤と組み合わせて投与する。いくつかのこのような実施形態では、追加の治療剤は、同じ組成物の一部として、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子とともに包装してよく、例えば、１つの組成物において併せて混合したり、別々の容器、バイアルまたはその他のパッケージに入れたりしてよい。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、少なくとも１つの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）インヒビターを含む。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗体（抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体など）、ペプチド、融合分子、または小分子であってよい。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗ＰＤ−１抗体（ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含むか、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むか、または完全アミノ酸配列を含む抗体など）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲ、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域または完全アミノ酸配列を含む抗体など）である。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、ＰＤ−１融合分子（ＡＭＰ−２２４など）またはポリペプチド（ＡＵＲ−０１２など）である。
本発明の方法のいくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、追加の治療剤（免疫刺激剤、例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）は、同時または順次に投与してよい。いくつかのケースでは、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与する前に、１用量以上のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを投与する。いくつかのケースでは、対象は、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の投与前に、免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療クールを完了した者である。いくつかのケースでは、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療の２クール目の最中に投与する。いくつかのケースでは、対象は、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の投与前に、少なくとも１用量、少なくとも２用量、少なくとも３用量または少なくとも４用量の免疫刺激剤（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）を投与された者である。いくつかのケースでは、少なくとも１用量の免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターをＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と同時に投与する。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤（免疫刺激剤、例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）を投与する前に、１用量以上のＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与する。いくつかのこのようなケースでは、対象は、免疫刺激剤（例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）の投与前に、少なくとも１用量、少なくとも２用量、少なくとも３用量または少なくとも４用量のＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与された者である。いくつかのケースでは、少なくとも１用量のＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと同時に投与する。
本発明の方法のいずれでも、対象は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療に耐性のある者であってよい。いくつかのこのようなケースでは、対象は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療を以前受けた者であるが、別のこのようなケースでは、対象は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療をこれまで受けたことがないが、他の手段（特定の表現型形質など）を通じて、耐性があると特定されている者である。
上記の方法のいずれでも、対象に、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子に加えて、少なくとも１つの化学療法剤、増殖阻害剤、血管新生阻害剤及び／または抗腫瘍組成物を含む追加の治療剤を投与してよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、免疫刺激剤（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）を組み合わせたものであって、対象に投与するものは、ＣＤ８０ ＥＣＤもしくは融合分子または免疫刺激剤（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）のいずれかの単独による治療と比べて、少なくとも１つのマウス同系または異種移植がんモデルにおいて、腫瘍の成長を相乗的に低下または阻害することが示されている。いくつかの実施形態では、このマウスモデルは、マウス大腸癌ＣＴ２６細胞を有する大腸がんモデルである。別の実施形態では、モデルは、ＭＣ３８モデルまたはＢ１６モデルであってよい。
上記方法の実施形態のいずれでも、対象に投与するＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、少なくとも１つのマウス同系または異種移植がんモデルにおいて、１週間、１０日、２週間または３週間の期間にわたって、腫瘍の成長を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９８％阻害できるか、または患者において、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月もしくは１年の期間にわたって、腫瘍の成長を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９８％阻害できる。上記方法の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与すると、例えば１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年の期間にわたって、動物またはヒト対象の少なくとも１つの腫瘍の体積を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％縮小できる。いくつかのこのような実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。
上記併用療法の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を追加の治療剤（免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）と組み合わせて、対象に投与すると、少なくとも１つのマウス同系または異種移植がんモデルにおいて、１週間、１０日、２週間または３週間の期間にわたって、腫瘍の成長を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９８％阻害できるか、または患者において、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月もしくは１年の期間にわたって、腫瘍の成長を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９８％阻害できる。上記併用療法の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を追加の治療剤（免疫刺激剤、例えばＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）と組み合わせて、対象に投与すると、例えば１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年の期間にわたって、動物またはヒト対象の少なくとも１つの腫瘍の体積を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％縮小できる。いくつかのこのような実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。
上記の併用療法の実施形態のいくつかでは、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、１０〜６０モルのシアル酸（ＳＡ）／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含むＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子である。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかのこのような実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、融合パートナーとして、Ｆｃドメイン（野生型Ｆｃドメイン、例えば、野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインなど）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、配列番号５、配列番号１２、配列番号１４、配列番号２０及び配列番号２１から選択したアミノ酸配列を含む。いくつかのこのような実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、少なくとも１０日の期間にわたって（少なくとも２週間、例えば、少なくとも３週間、例えば、１０日〜２週間または２〜３週間の期間にわたってなど）、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９０％（少なくとも９５％または少なくとも９８％など）低下できる。いくつかの実施形態では、マウスに、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子を０．３〜３ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）、１〜３回投与した後に、これらの結果が得られる。
また、本発明に含まれるのは、ヒトＣＤ８０ ＥＣＤポリペプチドと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃなど）とを含むＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子であって、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含むＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合分子は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この分子は、少なくとも１０日の期間にわたって（少なくとも２週間、例えば、少なくとも３週間、例えば、１０日〜２週間または２〜３週間の期間にわたってなど）、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９０％（少なくとも９５％または少なくとも９８％など）低下させることができる。いくつかの実施形態では、マウスに、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子を０．３〜３ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）、１〜３回投与した後に、これらの結果が得られる。
また、含まれるのは、ＣＤ８０ ＥＣＤ ＩｇＧ１ Ｆｃを含むとともに、少なくとも１つの製薬学的に許容可能な担体をさらに含む組成物である。このような組成物は、追加の治療剤も含んでよい。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、少なくとも１つの免疫刺激剤（プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）インヒビターなど）である。いくつかのケースでは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗体（抗ＰＤ−１抗体、例えば、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブなど）である。例えば、この抗体は、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲまたは重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有してよい。別の実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを有してよく、または、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６もしくはＭＳＢ００１０７１８Ｃの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含んでよい。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択する。あるいは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、ＰＤ−１融合分子（ＡＭＰ−２２４など）またはポリペプチド（ＡＵＲ−０１２など）であってよい。
本開示は、対象のがんの治療方法であって、上記のようなＣＤ８０ ＥＣＤ ＩｇＧ１ Ｆｃ融合分子を有効量、対象に投与することを含む方法も含む。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍（大腸がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、頭頚部扁平上皮癌、卵巣がん、膵臓がん、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱がん及び子宮体がんから選択したがんなど）である。いくつかの実施形態では、がんは、手術、化学療法、放射線療法またはこれらを組み合わせたものから選択した療法後、再発性または進行性のものである。
これらの方法の実施形態のいくつかでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃは、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含む。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合分子は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この分子は、マウスに腫瘍細胞を接種後、２または３週間の期間にわたって、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９０％低下させることができる。いくつかの実施形態では、この分子は、マウスに腫瘍細胞を接種後、２または３週間の期間にわたって、マウスにおいて、ＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９５％（少なくとも９８％など）低下させることができる。例えば、マウスに、ＥＣＤ Ｆｃ融合分子を０．３〜３．０ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）、１〜３用量投与すると、このような結果を得ることができる。この方法の実施形態のいくつかでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃは、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を含み、このＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃは、１０モル未満のＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を含む同じアミノ酸配列のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質よりも、２または３週間の期間にわたって、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を大きく低下させる。本明細書における開示は、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質が対象のがんを治療する効力の増強方法であって、そのＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質におけるシアル酸（ＳＡ）のレベルを向上させるか、またはＳＡレベルの向上したＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質を用意することと、レベルの向上したＳＡを含むＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質を対象に投与することとを含む方法も含む。いくつかのこのような実施形態では、ＳＡレベルは、５モル、１０モル、２０モル、３０モル、４０モルまたは５０モル／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質だけ向上させる。これらの方法の実施形態のいくつかでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃは、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含む。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合分子は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この分子は、２または３週間の期間にわたって、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９０％低下させることができる。いくつかの実施形態では、この分子は、少なくとも１０日の期間にわたって（少なくとも２週間、例えば、少なくとも３週間、１０日〜２週間または２〜３週間の期間にわたってなど）、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９５％（少なくとも９８％など）低下させることができる。いくつかの実施形態では、マウスに、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子を０．３〜３ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）、１〜３用量投与した後、これらの結果が得られる。
これらの方法の実施形態のいくつかでは、効力の増強は、動物またはヒト対象における全生存率の向上、無病生存率の向上または少なくとも１つの腫瘍の成長の低下度の向上として測定する。換言すると、ＳＡ含有量の多いＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与すると、ＳＡ含有量の少ないＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と比べて、これらのパラメーターの１つ以上が改善する。別の実施形態では、効力の増強は、マウス同系または異種移植モデル（ＣＴ２６マウスモデルなど）における腫瘍の成長の低下度の向上として、または動物またはヒト対象におけるクリアランス速度の低下として測定する。いくつかの実施形態では、効力は、対象における少なくとも１つの腫瘍の成長の低下度の向上、または少なくとも１つのマウス同系または異種移植モデルにおける腫瘍の成長の低下度の向上として測定し、ＳＡレベルの向上したＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与すると、腫瘍の成長はさらに、ＳＡレベルの向上していないＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与した場合と比べて、少なくとも１０％（少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％など）低下する。
上記の大まかな説明と、下記の詳細な説明はいずれも、例示と説明のためのものに過ぎず、請求項を制限するものではないことを理解されたい。本明細書で使用されている項の見出しは、構成上のためのものに過ぎず、説明されている主題を限定するものとして解釈すべきではない。本明細書で引用されているすべての参照文献は、特許出願及び刊行物を含め、参照により、あらゆる目的のために、その全体が本明細書に援用される。
図１ａ〜１ｂは、マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６細胞を移植したマウスに、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子を投与することの作用を、ＣＴＬＡ４ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子と、コントロールの生理的食塩水と比較したものを示している。図１ａは、マウスにＣＴ２６細胞を接種してから２１日までの腫瘍体積を示している。図に示されているように、ＣＴＬＡ４ ＥＣＤ Ｆｃでは、腫瘍の成長が拡大したが、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃは、コントロールの生理的食塩水と比べて、統計的に有意な形で腫瘍の成長を阻害した。Ｐ値は、調査の各日における腫瘍体積計算値の独立両側ｔ検定解析を用いて計算した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。図１ｂは、３つの群に関して、接種から１９日目における個々の腫瘍体積を示している。 図２ａ〜２ｂは、マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６細胞を移植したマウスに、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子もしくは抗ＰＤ−１抗体、またはこれらの２つを組み合わせたものを投与することの作用を、コントロールの生理的食塩水と比較したものを示している。図２ａは、接種から１４日までの腫瘍体積を示している。ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃと抗ＰＤ−１を組み合わせたものを投与されたマウスでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ｐ＜０．０１、９日目の後に開始）または抗ＰＤ−１（１４日目のｐ＜０．０１）のいずれによる単剤療法と比べて、腫瘍の成長の統計的に有意な低下が見られた。統計的な有意性は、併用群をＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ群と比較した両側独立ｔ検定によって割り出した。図２ｂは、１４日目における個々の腫瘍体積を示している。 図３ａ〜ｂは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子が、マウスにおけるＣＴ２６腫瘍の成長に及ぼす作用に、Ｆｃ融合ポリペプチド配列が及ぼす作用を示している。具体的には、マウスに、コントロールの生理的食塩水、またはヒトＩｇＧ１野生型Ｆｃドメイン融合パートナー（ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴ）を有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃもしくは変異（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン融合パートナーを有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴ）を投与した。図３ａは、接種から２１日までの腫瘍体積の変化を示している。Ｆｃドメインの変異により、抗腫瘍活性が増強され、この増強は、統計的に有意な形で、接種から１４日目に開始された（ｐ＜０．０１）。統計的な有意性は、両側独立ｔ検定によって割り出した。図３ｂは、接種から２１日目における個々の腫瘍体積を示している。 図４ａ〜ｂは、コントロールの生理的食塩水または野生型及び変異Ｆｃ融合パートナーのいずれかを有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子への暴露後、ＣＤ３＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞が存在するかに関して、マウス腫瘍細胞を染色したものを示している。図４ａは、生理的食塩水、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴまたはＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴの注射から７日目に採取したＣＴ２６腫瘍におけるＣＤ３＋細胞（上方の画像）と、対応するＤＡＰＩ染色（核、下方の画像）を示す代表的な画像を示している。ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴとＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴのいずれも、ビヒクルと比べて、腫瘍内のＣＤ３＋細胞の数を増加させたが、その増加の程度は、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴの後の方が大きかった。画像は、１０倍の対物レンズを用いて取得した。図４ｂは、生理的食塩水、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴまたはＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴの注射から７日目に採取したＣＴ２６腫瘍におけるＣＤ３＋細胞（上の列）とＣＤ４＋細胞（下の列）を示す代表的な画像を示している。これらの画像は、同じ視野だが、異なるチャンネルで撮影した。ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴとＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴのいずれも、ビヒクルと比べて、浸潤ＣＤ４＋細胞の数を増加させた。ＣＤ３＋細胞のＣＤ４＋細胞に対する比率は、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴによる方が、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴと比べて向上した。画像は、１０倍の対物レンズを用いて取得した。 図４ａ〜ｂは、コントロールの生理的食塩水または野生型及び変異Ｆｃ融合パートナーのいずれかを有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子への暴露後、ＣＤ３＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞が存在するかに関して、マウス腫瘍細胞を染色したものを示している。図４ａは、生理的食塩水、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴまたはＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴの注射から７日目に採取したＣＴ２６腫瘍におけるＣＤ３＋細胞（上方の画像）と、対応するＤＡＰＩ染色（核、下方の画像）を示す代表的な画像を示している。ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴとＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴのいずれも、ビヒクルと比べて、腫瘍内のＣＤ３＋細胞の数を増加させたが、その増加の程度は、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴの後の方が大きかった。画像は、１０倍の対物レンズを用いて取得した。図４ｂは、生理的食塩水、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴまたはＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴの注射から７日目に採取したＣＴ２６腫瘍におけるＣＤ３＋細胞（上の列）とＣＤ４＋細胞（下の列）を示す代表的な画像を示している。これらの画像は、同じ視野だが、異なるチャンネルで撮影した。ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴとＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴのいずれも、ビヒクルと比べて、浸潤ＣＤ４＋細胞の数を増加させた。ＣＤ３＋細胞のＣＤ４＋細胞に対する比率は、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴによる方が、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴと比べて向上した。画像は、１０倍の対物レンズを用いて取得した。 図５ａ〜ｄは、０．０１μｇ／ウェル、０．１μｇ／ウェルまたは１μｇ／ウェルのＣＤ８０ ＥＣＤ ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン融合分子（ＣＤ８０−Ｆｃ）でコーティングしたプロテインＡビーズに暴露した、９６ウェル組織培養プレートにおけるＴ細胞からのサイトカイン（ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−α）の放出を示している。図５ａ及び５ｃは、可溶性サイトカインの産生によって測定したところ、ビーズ固定化ＣＤ８０−Ｆｃ単独では、Ｔ細胞の有意な活性化が起きなかったことを示している。図５ｂ及び５ｄは、少量のＯＫＴ３−ｓｃＦｖ（非常に少ないので、それ自体では、Ｔ細胞の刺激を引き起こさない）をＣＤ８０−Ｆｃとともに固定化したところ、サイトカインの放出が観察されたことを示している。 図５ａ〜ｄは、０．０１μｇ／ウェル、０．１μｇ／ウェルまたは１μｇ／ウェルのＣＤ８０ ＥＣＤ ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン融合分子（ＣＤ８０−Ｆｃ）でコーティングしたプロテインＡビーズに暴露した、９６ウェル組織培養プレートにおけるＴ細胞からのサイトカイン（ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−α）の放出を示している。図５ａ及び５ｃは、可溶性サイトカインの産生によって測定したところ、ビーズ固定化ＣＤ８０−Ｆｃ単独では、Ｔ細胞の有意な活性化が起きなかったことを示している。図５ｂ及び５ｄは、少量のＯＫＴ３−ｓｃＦｖ（非常に少ないので、それ自体では、Ｔ細胞の刺激を引き起こさない）をＣＤ８０−Ｆｃとともに固定化したところ、サイトカインの放出が観察されたことを示している。 コントロールの生理的食塩水、または３つの異なるシアル酸（ＳＡ）含有量を有する３つの異なるロットのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子（用量０．３ｍｇ／ｋｇもしくは０．６ｍｇ／ｋｇ）による治療後のマウスＣＴ２６腫瘍の成長を示している。ロットＡは、５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有し、ロットＤは、１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有し、ロットＥは、２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有する。ロットＥのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．６ｍｇ／ｋｇによる治療を行ったところ、コントロールと比べて、腫瘍の成長が９３％及び９８％阻害された（Ｐ＜０．００１）。ロットＤのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．６ｍｇ／ｋｇによる治療を行ったところ、コントロールと比べて、腫瘍の成長が９３％及び９５％阻害された（Ｐ＜０．００１）。比較によって、ロットＡのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇによる治療を行ったところ、コントロールと比べて、腫瘍の成長が阻害されず、０．６ｍｇ／ｋｇで投与した場合のみに、腫瘍の成長の７０％の阻害が誘導された（Ｐ＜０．００１）。 １０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ２ｂ、０．３ｍｇ／ｋｇのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ＳＡ２０モル／モル）、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９及び１．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９で処置したＣＴ２６腫瘍の成長を示している。矢印は、マウスに投与した時点を示している。アスタリスクのシンボル（＊）は、０．３ｍｇ／ｋｇのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ＳＡ２０モル／モル）と他の治療剤との統計的に有意な差を示している。 １０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ２ｂ、３ｍｇ／ｋｇのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ＳＡ２０モル／モル）、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９及び１．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９で処置したＭＣ３８腫瘍の成長を示している。矢印は、マウスに投与した時点を示している。アスタリスクのシンボル（＊）は、３ｍｇ／ｋｇのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ＳＡ２０モル／モル）と他の治療剤との統計的に有意な差を示している。 １０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ２ｂ、３ｍｇ／ｋｇのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ＳＡ２０モル／モル）、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９及び１．５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９で処置したＢ１６腫瘍の成長を示している。矢印は、マウスに投与した時点を示している。アスタリスクシンボル（＊）は、３ｍｇ／ｋｇのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ＳＡ２０モル／モル）と他の治療剤との統計的に有意な差を示している。
定義
別段の定めのない限り、本発明との関連で用いる科学用語及び技術用語は、当業者によって広く理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段に定められる場合を除き、単数形の用語には、複数形が含まれるものとし、複数形の用語には、単数形が含まれるものとする。
本願では、「または」の使用は、別段の記載のない限り、「及び／または」を意味する。多数従属クレームにおいては、「または」の使用は、前の２つ以上の独立または従属クレームに択一的に引用するものである。また、特に別段の記載のない限り、「要素」または「成分」などの用語には、１つのユニットを含む要素及び成分と、２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分の両方が含まれる。
組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチドの合成、組織の培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応との関連で用いられる例示的な技法、ならびに精製技法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））などに説明されている。
本開示に従って使用する場合、下記の用語は、別段に示されていない限り、下記の意味を有すると理解するものとする。
「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、同義的に使用してよく、ヌクレオチドのポリマーを指す。このようなヌクレオチドポリマーは、天然及び／または非天然のヌクレオチドを含んでよく、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びＰＮＡが挙げられるが、これらに限らない。「核酸配列」とは、核酸分子またはポリヌクレオチドを含む直鎖状のヌクレオチド配列を指す。
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指す目的で同義的に使用し、最小長に限らない。このようなアミノ酸残基ポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含んでよく、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体及び多量体が挙げられるが、これらに限らない。完全長タンパク質と、その断片のいずれもが、この定義に含まれる。この用語には、ポリペプチドが発現後修飾されたもの、例えば、糖鎖付加、シアリル化、アセチル化、リン酸化されたものなども含まれる。さらに、本発明の目的においては、「ポリペプチド」とは、天然型配列の欠失、付加及び置換（概して保存的な性質のものである）などの修飾を含むタンパク質を指し、ただし、そのタンパク質が所望の活性を保持することを条件とする。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発法によるような意図的なものであっても、そのタンパク質を産生する宿主の変異またはＰＣＲ増幅によるエラーによるような偶発的なものであってもよい。
「ＣＤ８０細胞外ドメイン」または「ＣＤ８０ ＥＣＤ」とは、ＣＤ８０の細胞外ドメインポリペプチドを指し、その天然のバリアントと操作バリアントを含む。ＣＤ８０ ＥＣＤの非限定的な例としては、配列番号−−が挙げられる。「ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子」とは、ＣＤ８０ ＥＣＤと融合パートナー（Ｆｃドメイン、アルブミンまたはＰＥＧなど）とを含む分子を指す。この融合パートナーは、例えば、ＣＤ８０ ＥＣＤのＮ末端もしくはＣ末端に共有結合していても、内側の位置にあってもよい。ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の非限定的な例としては、配列番号−−が挙げられる。
「プログラム細胞死タンパク質１」及び「ＰＤ−１」という用語は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制レセプターを指す。ＰＤ−１は主に、インビボにおいて、すでに活性化しているＴ細胞上に発現し、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２という２つのリガンドに結合する。「ＰＤ−１」という用語には、本明細書で使用する場合、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）、ｈＰＤ−１のバリアント、アイソフォーム及び種相同体、ならびにｈＰＤ−１と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類縁体が含まれる。完全ｈＰＤ−１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３に見ることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１は、配列番号−−（シグナル配列を有する前駆体）または配列番号−−（シグナル配列を有さない成熟体）のアミノ酸配列を有するヒトＰＤ−１である。
「プログラム細胞死１リガンド１」及び「ＰＤ−Ｌ１」という用語は、ＰＤ−１に結合すると、Ｔ細胞の活性化とサイトカインの分泌をダウンレギュレートする、ＰＤ−１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドのうちの１つを指す（もう一方はＰＤ−Ｌ２である）。「ＰＤ−Ｌ１」という用語には、本明細書で使用する場合、ヒトＰＤ−Ｌ１（ｈＰＤ−Ｌ１）、ｈＰＤ−Ｌ１のバリアント、アイソフォーム及び種相同体、ならびにｈＰＤ−Ｌ１と少なくとも１つの共通のエピトープを有する類縁体が含まれる。完全ｈＰＤ−Ｌ１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号Ｑ９ＮＺＱ７で見ることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１は、配列番号−−（シグナル配列を有する前駆体）または配列番号−−（シグナル配列を有さない成熟体）のアミノ酸配列を有するヒトＰＤ−Ｌ１である。
「免疫刺激剤」という用語は、本明細書で使用する場合、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニストとして機能するか、または共抑制分子を含む免疫抑制分子のアンタゴニストとして機能するかのいずれかによって、免疫系を刺激する分子を指す。免疫刺激剤は、生体物質（抗体もしくは抗体断片など）、その他のタンパク質またはワクチンであっても、小分子薬であってもよい。「免疫刺激分子」には、免疫応答を増強するか、刺激するか、誘導するかまたは別段の形で「オンする」ように機能するレセプターまたはリガンドが含まれる。本明細書で定義されているような免疫刺激分子には、共刺激分子が含まれる。「免疫抑制分子」には、免疫応答を低下させるか、阻害するか、抑制するかまたは別段の形で「オフする」ように機能するレセプターまたはリガンドが含まれる。本明細書で定義されているような免疫抑制分子には、共抑制分子が含まれる。このような免疫刺激分子と免疫抑制分子は、例えば、免疫細胞（Ｔ細胞など）で見られるか、または自然免疫に関与する細胞（ＮＫ細胞など）で見られるレセプターまたはリガンドであってよい。
「ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビター」という用語は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１のシグナル伝達経路を破壊する部分を指す。いくつかの実施形態では、このインヒビターは、ＰＤ−１及び／またはＰＤ−Ｌ１に結合することによって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１のシグナル伝達経路を阻害する。いくつかの実施形態では、このインヒビターは、ＰＤ−Ｌ２にも結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合をブロックする。非限定的な例示的ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターとしては、ＰＤ−１に結合する抗体、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体、融合タンパク質（ＡＭＰ−２２４など）、及びペプチド（ＡＵＲ−０１２など）が挙げられる。
「ＰＤ−１を阻害する抗体」という用語は、ＰＤ−１に結合するか、またはＰＤ−Ｌ１に結合することによって、ＰＤ−１及び／またはＰＤ−Ｌ１のシグナル伝達を阻害する抗体を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１を阻害する抗体は、ＰＤ−１に結合して、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合をブロックする。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１を阻害する抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合して、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１への結合をブロックする。ＰＤ−１を阻害する抗体のうち、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と称してよい。ＰＤ−１を阻害する抗体のうち、ＰＤ−１に結合する抗体は、抗ＰＤ−１抗体と称してよい。
ＣＤ８０ ＥＣＤ及びＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子に関しては、リガンド「の結合をブロックする」という用語と、その文法的な変形表現は、ＣＤ８０とＣＤ８０リガンド（ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４またはＰＤ−Ｌ１など）との相互作用を阻害できることを指す。このような阻害は、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が結合においてＣＤ８０リガンドと競合することによることを含むいずれかの機構を通じて生じ得る。
抗ＰＤ−１抗体及びＰＤ−１融合分子またはペプチドに関しては、リガンド（ＰＤ−Ｌ１など）「の結合をブロックする」という用語と、その文法的な変形表現は、ＰＤ−１とＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１など）との相互作用を阻害できることを指す目的で使用する。このような阻害は、例えば、ＰＤ−１上の結合部位の重複、及び／もしくはリガンドの親和性などを変化させる抗体によって誘導される、ＰＤ−１のコンフォメーション変化による、リガンド結合への直接干渉、または、ＰＤ−１融合分子もしくはペプチドのケースでは、結合におけるＰＤ−１リガンドとの競合によることを含むいずれかの機構を通じて生じ得る。
「親和性」または「結合親和性」とは、分子（例えばポリペプチド）の単結合部位とその結合パートナー（例えばリガンド）との非共有相互作用の合計の強さを指す。いくつかの実施形態では、「結合親和性」とは、結合対（例えば、ポリペプチドとリガンド）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は概して、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。
「抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、重鎖の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む分子であって、抗原に結合できる分子を指す。「抗体」という用語としては、抗原に結合できる断片（Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２など）が挙げられるが、これらに限らない。また、「抗体」という用語としては、キメラ抗体、ヒト化抗体及び様々な種（マウス、ヒト、カニクイザルなど）の抗体などが挙げられるが、これらに限らない。
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域と、重鎖定常領域の少なくとも一部とを含む少なくとも１本の重鎖と、軽鎖可変領域と、軽鎖定常領域の少なくとも一部とを含む少なくとも１本の軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、２本の重鎖（その各重鎖は、重鎖可変領域と、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む）と、２本の軽鎖（その各軽鎖は、軽鎖可変領域と、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む）を含む。本明細書で使用する場合、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または例えば、６個のすべてのＣＤＲ（３個の重鎖ＣＤＲと、３個の軽鎖ＣＤＲ）を含む１本のポリペプチド鎖を含むいずれかの他の抗体は、重鎖と軽鎖を有するものとみなす。いくつかのこのような実施形態では、重鎖は、３個の重鎖ＣＤＲを含む抗体領域であり、軽鎖は、３個の軽鎖ＣＤＲを含む抗体領域である。
「重鎖可変領域」という用語は、重鎖ＨＶＲ１と、フレームワーク（ＦＲ）２と、ＨＶＲ２と、ＦＲ３と、ＨＶＲ３とを含む領域を指す。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、ＦＲ１の少なくとも一部及び／またはＦＲ４の少なくとも一部も含む。
「重鎖定常領域」という用語は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３という少なくとも３個の重鎖定常ドメインを含む領域を指す。非限定的な例示的重鎖定常領域としては、γ、δ及びαが挙げられる。非限定的な例示的な重鎖定常領域としては、ε及びμも挙げられる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体は、ＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体は、ＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体は、ＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体は、ＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体は、ＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプはさらに、サブクラスに細分化できる。例えば、ＩｇＧ抗体としては、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）という抗体が挙げられるが、これらに限らない。ＩｇＡ抗体としては、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）という抗体が挙げられるが、これらに限らず、ＩｇＭ抗体としては、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が挙げられるが、これらに限らない。
「重鎖」という用語は、リーダー配列を有するか、またはリーダー配列を有さない状態で、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「完全長重鎖」という用語は、リーダー配列を有するか、またはリーダー配列を有さない状態で、重鎖可変領域と重鎖定常領域とを含むポリペプチドを指す。
「軽鎖可変領域」という用語は、軽鎖ＨＶＲ１と、フレームワーク（ＦＲ）２と、ＨＶＲ２と、ＦＲ３と、ＨＶＲ３とを含む領域を指す。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、ＦＲ１及び／またはＦＲ４も含む。
「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的軽鎖定常領域としては、λ及びκが挙げられる。
「軽鎖」という用語は、リーダー配列を有するか、またはリーダー配列を有さない状態で、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。「完全長軽鎖」という用語は、リーダー配列を有するか、またはリーダー配列を有さない状態で、軽鎖可変領域と軽鎖定常領域とを含むポリペプチドを指す。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列において超可変性であり及び／または構造的に定義されるループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。概して、ネイティブな４本鎖抗体は、６個のＨＶＲ（ＶＨに３個（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）と、ＶＬに３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３））を含む。ＨＶＲは概して、超可変ループ及び／または「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）に由来するアミノ酸残基を含み、ＣＤＲは、配列可変性が最も高く、及び／または抗原の認識に関与する。例示的な超可変ループは、２６〜３２番目（Ｌ１）、５０〜５２番目（Ｌ２）、９１〜９６番目（Ｌ３）、２６〜３２番目（Ｈ１）、５３〜５５番目（Ｈ２）及び９６〜１０１番目（Ｈ３）のアミノ酸残基に見られる（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１の２４〜３４番目、Ｌ２の５０〜５６番目、Ｌ３の８９〜９７番目、Ｈ１の３１〜３５Ｂ番目、Ｈ２の５０〜６５番目、Ｈ３の９５〜１０２番目のアミノ酸残基に見られる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。超可変領域（ＨＶＲ）及び相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語はいずれも、抗原結合領域を形成する可変領域部分を指す。
「キメラ抗体」とは、本明細書で使用する場合、第１の種（マウス、ラット、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの可変領域と、第２の種（ヒト、カニクイザルなど）に由来する少なくとも１つの定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのラット可変領域と、少なくとも１つのマウス定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体のすべての可変領域は、第１の種に由来しており、キメラ抗体のすべての定常領域は、第２の種に由来している。
「ヒト化抗体」とは、本明細書で使用する場合、ヒト以外の可変領域のフレームワーク領域における少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域の対応するアミノ酸に置き換えられている抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、ヒトで産生される抗体と、ヒト以外の動物で産生される抗体のうち、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む抗体（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）など）と、インビトロ法（ファージディスプレイなど）を用いて選択した抗体であって、その抗体レパートリーが、ヒト免疫グロブリン配列に基づいている抗体を指す。
「リーダー配列」という用語は、ポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列であって、哺乳動物細胞からポリペプチドの分泌を促す配列を指す。リーダー配列は、ポリペプチドが哺乳動物細胞から輸送されて、成熟タンパク質が形成されると、切断することができる。リーダー配列は、天然のものであっても、合成したものであってもよく、その配列が結合するタンパク質に対して異種のものであっても、同種のものであってもよい。非限定的な例示的リーダー配列としては、異種のタンパク質に由来するリーダー配列も挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は、リーダー配列を欠損している。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも１つのリーダー配列を含み、その配列は、ネイティブな抗体リーダー配列と異種のリーダー配列から選択してよい。
「単離されている」という用語は、本明細書で使用する場合、天然においては、その分子とともに典型的には存在する成分の少なくとも一部から分離した分子を指す。例えば、ポリペプチドは、そのポリペプチドを産生した細胞の成分の少なくとも一部から分離されているときには、「単離されている」ものと称する。ポリペプチドが、発現後、細胞によって分泌される場合、そのポリペプチドを産生した細胞から、そのポリペプチドを含む上清を物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」とみなす。同様に、ポリヌクレオチドは、それよりも大きいポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドのケースでは、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡなど）であって、天然においては、そのポリヌクレオチドが典型的に含まれる大きいポリヌクレオチドの一部ではないとき、または、そのポリヌクレオチドを産生した細胞の成分の少なくとも一部から分離されているとき（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドのケース）には、「単離されている」ものと称する。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれているＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離されている」と称してよい。ただし、そのポリヌクレオチドが、天然において、そのベクター内に存在しないことを条件とする。
「低下する」という用語は、腫瘍体積などのパラメーターに適用するときには、そのパラメーターのレベルが観察可能かつ測定可能な形で低下することを意味する。いくつかの実施形態では、その低下の度合いは、少なくとも１０％（少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％など）であってよい。いくつかの実施形態では、その低下の度合いは、別の治療またはコントロールと比べて統計的に有意であってよい。
「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では、ヒトを指す目的で同義的に使用する。いくつかの実施形態では、他の哺乳動物（齧歯動物、類人猿、ネコ科動物、イヌ科動物、ウマ科動物、ウシ亜科動物、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類の実験動物、哺乳類の家畜、哺乳類の競技用動物及び哺乳類のペットが挙げられるが、これらに限らない）の治療方法も提供する。
「耐性」または「非応答性」という用語は、治療剤による治療に関して使用するときには、対象において、標準的な用量の治療剤に対するその対象の過去の応答と比べて、または同様の障害を有する同様の対象において予測される、標準的な用量の治療剤に対する応答と比べて、標準的な用量の治療剤に対する応答の低下または応答の欠如が見られることを意味する。したがって、いくつかの実施形態では、対象は、治療剤に耐性のある者であるが、過去にその治療剤を投与されたことのない者であっても、過去の１回以上の治療において、その治療剤に応答した後、その治療剤に対する耐性を発現した者であってもよい。
「試料」という用語は、本明細書で使用する場合、対象から採取するか、またはその対象に由来する組成物であって、例えば、物理的、生化学的、化学的及び／または生理的特徴に基づき、特徴付け、定量及び／または同定が行われる細胞的及び／またはその他の分子的実体を含む組成物を指す。例示的な試料は、組織試料である。
「組織試料」という用語は、対象の組織から得られる類似の細胞の一群を指す。組織試料の供給源は、未処理であるか、凍結したか及び／または保存した器官、組織試料、生検体または吸引体に由来するような固形組織、血液またはいずれかの血液成分、体液（脳脊髄液、羊水、腹水、滑液または間質液など）、対象の胎児時または発生時のいずれかの時点の細胞であってよい。いくつかの実施形態では、組織試料は、滑膜生検組織試料及び／または滑液試料である。いくつかの実施形態では、組織試料は、滑液試料である。組織試料は、初代細胞、培養細胞または細胞株であってもよい。任意に応じて、組織試料は、疾患組織／器官から採取する。組織試料は、天然ではその組織と混合されていない化合物（保存剤、抗凝固剤、緩衝剤、固定剤、栄養素、抗生物質など）を含んでよい。「コントロール試料」または「コントロール組織」とは、本明細書で使用する場合、治療を行っている対象の疾患に罹患していないことが知られているか、または罹患していないと考えられる供給源から得られる試料、細胞または組織を指す。
本発明での目的では、組織試料の「切片」は、組織試料の一部または一片（固形組織試料から切り出した組織または細胞の薄片など）を意味する。
「がん」という用語は、本明細書では、異常に高いレベルの増殖と成長を示す細胞群を指す目的で使用する。がんは、良性（良性腫瘍ともいう）、前癌性または悪性であってよい。がん細胞は、固形がん細胞（すなわち「固形腫瘍」）であっても、白血病のがん細胞であってもよい。「がんの成長」という用語は、本明細書では、がんのサイズまたは程度の、付随する増大をもたらすがんを含む１つの細胞または複数の細胞による増殖または成長を指す目的で使用する。
がんの例としては、癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が挙げられるが、これらに限らない。このようながんの、より具体的な非限定的な例としては、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺がん（扁平上皮非小細胞肺がんを含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠肉腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、結腸がん、大腸がん、子宮体癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、腎細胞癌、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、脳腫瘍、子宮体がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ及び様々なタイプの頭頸部がん（頭頚部扁平上皮癌を含む）が挙げられる。
「治療」とは、本明細書で使用する場合、治療的処置と予防措置の両方を指し、その目的は、標的の病的状態または障害を予防または遅延（抑制）することである。特定の実施形態では、「治療」という用語は、哺乳動物（ヒトを含む）の疾患に対する治療剤のいずれかの投与または塗布を網羅し、疾患もしくは疾患の進行を阻害もしくは遅延すること、例えば退縮を引き起こすことによって、疾患を部分的もしくは完全に緩和すること、喪失した機能、欠失した機能もしくは異常な機能を回復または修復すること、非効率的なプロセスを刺激すること、または疾患を安定させて、重症度を低下させることを含む。「治療」という用語には、いずれかの表現型の特徴の重症度を低下させること、及び／またはその特徴の発生、程度もしくは可能性を低下させることも含まれる。治療の必要な者としては、すでに疾患を有する者と、疾患を罹患する傾向のある者、または障害を予防すべき者が挙げられる。
「効力」という用語は、本明細書で使用する場合、１年、５年または１０年などの期間にわたる１つ以上のパラメーター（生存率または無病生存率など）と、対象における１つ以上の腫瘍の成長の低下のようなパラメーターから判断してよい。薬物動態パラメーター（バイオアベイラビリティなど）と基本的なパラメーター（クリアランス速度など）も、効力に影響を及ぼすことがある。したがって、「効力の増強」（すなわち、効力の改善）は、薬物動態パラメーターの改善と、効能の改善によることがあり、試験動物またはヒト対象におけるクリアランス速度と腫瘍の成長と、生存率、再発率または無病生存率のようなパラメーターを比較することによって測定できる。
「有効量」または「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬物量を指す。特定の実施形態では、有効量とは、必要な投与量と期間で、所望の治療結果または予防結果をもたらすのに有効な量を指す。ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の治療有効量は、疾患の状態、個体の年齢、性別、体重、薬物が個体において所望の応答を惹起する能力などの要因によって変化し得る。治療有効量には、薬物のいずれかの毒性作用または有害な作用よりも、治療上有益な作用が上回る量が含まれる。いくつかの実施形態では、「有効量」という表現は、がんの治療に有効な薬物量を指す。
１つ以上のさらなる治療剤（免疫刺激剤など）「と組み合わせて」投与することには、同時投与といずれかの順番による連続（順次）投与が含まれる。
「製薬学的に許容可能な担体」とは、治療剤とともに使用する無毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材、調合補助剤または当該技術分野における従来の担体であって、対象に投与するための「医薬組成物」を共に構成する物質を指す。製薬学的に許容可能な担体は、使用する用量及び濃度において、被投与者に対して無毒性のものであり、その製剤の他の成分と適合するものである。製薬学的に許容可能な担体は、用いる製剤に適するものである。例えば、治療剤を経口投与する場合には、担体は、ゲルカプセルであってよい。治療剤を皮下投与する場合には、担体は理想的には、皮膚を刺激しないものであり、注射部位の反応を引き起こさないものである。
例示的なＣＤ８０細胞外ドメインと細胞外ドメイン融合分子
本発明では、ＣＤ８０ ＥＣＤとＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を提供する。ＣＤ８０ ＥＣＤは例えば、ヒトＣＤ８０アイソフォーム１、アイソフォーム２及びアイソフォーム３のＥＣＤを含んでよい（配列番号１〜３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤは、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい。
ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、ポリマー、ポリペプチド、親油性部分及びサクシニル基のような融合パートナーを含んでよい。例示的なポリペプチド融合パートナーとしては、血清アルブミン及びＩｇＧ Ｆｃドメインが挙げられるが、これらに限らない。さらなる例示的なポリマー融合パートナーとしては、ポリエチレングリコール（分岐鎖及び／または直鎖を有するポリエチレングリコールを含む）が挙げられるが、これらに限らない。特定の例示的なＦｃドメインのアミノ酸配列は、本明細書の配列番号９〜１６に示されている。
特定の実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、シグナルペプチドを欠損している。特定の実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、少なくとも１つのシグナルペプチドを含み、このシグナルペプチドは、ネイティブなＣＤ８０シグナルペプチド（配列番号７もしくは配列番号１の１〜３４番目のアミノ酸）及び／または異種のシグナルペプチドから選択してよい。
ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子のケースでは、融合パートナーは、そのポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに連結していてよい。特定の実施形態では、ポリペプチドと融合パートナーは、共有結合している。融合パートナーもポリペプチド（「融合パートナーポリペプチド」）である場合には、ポリペプチドと融合パートナーポリペプチドは、連続するアミノ酸配列の一部であってよい。このようなケースでは、ポリペプチドと融合パートナーポリペプチドは、ポリペプチドと融合パートナーポリペプチドの両方をコードするコード配列から、１つのポリペプチドとして翻訳できる。いくつかのこのようなケースでは、これらの２つのポリペプチドは、配列内で直接連結していて、一方のポリペプチドのＮ末端のすぐ後に、介在するアミノ酸なしに、もう一方のＣ末端が続くようになっている。別のケースでは、これらの２つのポリペプチドの間に、リンカーペプチド配列（ＧＳリンカー配列など）が挿入されている。特定の実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤと融合パートナーは、他の手段（例えば、ペプチド結合以外の化学結合など）を通じて、共有結合している。特定の実施形態では、ポリペプチドと融合パートナーは、非共有結合している。このような特定の実施形態では、これらは、例えば、結合対を用いて連結していてもよい。例示的な結合対としては、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン、抗体とその抗原などが挙げられるが、これらに限らない。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、配列番号２０または２１の配列を含む。
ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、その生成方法に応じて、特定の糖鎖付加修飾を異なるレベルで有してよい。例えば、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、ＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質の濃度に対して、異なる濃度のシアル酸残基を有してよい。いくつかの実施形態では、シアル酸含有量が多いほど、体内でのクリアランス時間が長くなることがあるので、全体的バイオアベイラビリティが向上し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子のシアル酸含有量は、１０〜６０モルのシアル酸（ＳＡ）／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子のシアル酸含有量は、１５〜６０モルのシアル酸（ＳＡ）／１モルのタンパク質である。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、１０モル、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質（少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、少なくとも２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、少なくとも３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、少なくとも３５モルのＳＡ／１モルのタンパク質または少なくとも４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかのこのような実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃドメイン（ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインなど）である。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子のＳＡ含有量は、現行のＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と比べて、増加しているか、または相対的に高いレベルに保持されている。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量の増加（５モル、１０モル、１５モル、２０モル、３０モル、４０モルまたは５０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質分の増加など）により、少なくとも１つのマウス同系または異種移植腫瘍モデルにおける効力の増強をもたらすことができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量の増加（５モル、１０モル、１５モル、２０モル、３０モル、４０モルまたは５０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質分の増加など）が見られると、マウス腫瘍モデルにおける腫瘍の成長を、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％さらに低下させることができる。
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子（１０〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む融合分子など）は、少なくとも１つのマウス同系または異種移植がんモデルにおいて、腫瘍細胞の接種後、少なくとも１０日、少なくとも２週間または少なくとも３週間（１０日〜２週間または２〜３週間など）の期間にわたって、腫瘍細胞の成長を少なくとも８０％（少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％など）阻害できる。いくつかのこのような実施形態では、この分子は、少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質（少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）または１５〜３０モル、１５〜２５モルもしくは２０〜３０モルの範囲のＳＡ／１モルのタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、マウスモデルは、ＣＴ２６、ＭＣ３８またはＢ１６マウス腫瘍モデルである。いくつかの実施形態では、腫瘍が最小体積に達したら、マウスに、上記の分子を０．３〜３．０ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）で、例えば１週間の期間にわたって、１〜３用量投与する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、配列番号２０または２１の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子は、同一のアミノ酸配列であるが、タンパク質１モル当たりのＳＡレベルが低いＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合タンパク質よりも、接種後、少なくとも１０日、少なくとも２週間または少なくとも３週間（１０日〜２週間または２〜３週間など）の期間にわたって、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を大きく低下させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子は、抗ＣＴＬＡ４抗体（抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９など）よりも、マウスにおいて、接種後、少なくとも１０日または少なくとも２週間（１０日〜２週間または２〜３週間など）の期間にわたって、ＣＴ２６腫瘍の成長を大きく低下させる。いくつかのこのような実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ分子は、１〜３回、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇまたは３．０ｍｇ／ｋｇで投与し、抗ＣＴＬＡ４抗体は、同じ回数、１．５または１０ｍｇ／ｋｇで投与する。いくつかのこのような実施形態では、モデルは、ＣＴ２６、ＭＣ３８またはＢ１６マウス腫瘍モデルである。
本発明の実施例６では、例えば、１５または２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有するＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子で、マウス同系腫瘍モデルを治療したところ、０．３ｍｇ／ｋｇを１用量投与後、腫瘍の成長が少なくとも９３％阻害されたが、５モルのＳＡ／１モルのタンパク質しか有さない分子で、同じ治療を行ったところ、腫瘍の成長を有意には阻害しなかったことを示すデータを提供する。同様に、１５または２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有するＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を０．６ｍｇ／ｋｇ投与したところ、腫瘍の成長が９５％〜９８％阻害されたが、５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有する分子で、同じ治療を行ったところ、腫瘍の成長は７０％しか阻害されなかった。（図６を参照されたい。）阻害の程度は、腫瘍の接種後、約３週間評価した。
さらに、本発明の実施例７では、３つの異なる同系マウス腫瘍モデル（ＣＴ２６、ＭＣ３８及びＢ１６モデル）において、２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子（マウスサロゲート）を０．３ｍｇ／ｋｇ（ＣＴ２６）または３．０ｍｇ／ｋｇ（ＭＣ３８及びＢ１６）投与した場合を、１．５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの用量での抗ＣＴＬＡ４抗体（クローン９Ｄ９）と比べたデータを示している。各タンパク質は、図７〜９（矢印は投与日を示している）に示されているように、腫瘍細胞の接種から数日後、７日の期間にわたって、３回投与した。各ケースにおいて、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃでは、２〜３週間の調査を通じて、抗ＣＴＬＡ４抗体よりも腫瘍の成長の阻害が優れていた（図７〜９）。例えば、ＣＴ２６モデルでは、腫瘍細胞の接種から２１日目に、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子では、腫瘍の成長が９０％低下したのに対して、２つの用量レベルの抗ＣＴＬＡ４では、７５％または５３％であったことが示された。ＭＣ３８モデルでは、接種から１９日目に、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ分子では、腫瘍の成長阻害が約８０％低下したのに対して、用量の多い方の抗ＣＴＬＡ４では、腫瘍の成長が２１％のみであったとともに、用量の少ない方の抗ＣＴＬＡ４では、腫瘍の成長が阻害されなかったことが示された。Ｂ１６モデルでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子では、接種から１３日目に、腫瘍の成長が４１％阻害していたのに対して、抗ＣＴＬＡ４抗体は、いずれの用量レベルでも、腫瘍の成長を阻害しなかったことが示された。（図７〜９を参照されたい。）
これらの調査に基づき、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、少なくとも２週間の期間にわたって、腫瘍の成長を特定の割合で阻害できると見られ、例えば、マウスに腫瘍細胞を接種し、融合分子を投与してから約２週間、治療したマウスにおいて、示されている割合程度の腫瘍平均成長阻害率が観察される。ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、２〜３週間の期間にわたって、腫瘍の成長を特定の割合で阻害できると見られ、例えば、マウスに腫瘍細胞を接種し、融合分子を投与してから２〜３週間、治療したマウスにおいて、示されている割合程度の腫瘍平均成長阻害率が観察される。
実施例６及び７では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子で治療した多くのＣＴ２６モデルマウスにおいて、これらの２〜３週間の期間で、腫瘍が完全に退縮したことも示されている。さらに、ＳＡ含有量の多いＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の方が、比較用治療剤よりも、腫瘍が完全に退縮したマウスの割合が大きかったとともに、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の方が、抗ＣＴＬＡ４抗体よりも、腫瘍が完全に退縮したマウスの割合が大きかった。したがって、いくつかの実施形態では、同系または異種移植モデル（ＣＴ２６、ＭＣ３８またはＢ１６など）のマウスにおいて、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子（０．３ｍｇ／ｋｇ〜０．６ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子または０．３ｍｇ／ｋｇ〜３．０ｍｇ／ｋｇのＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子など）で治療すると、腫瘍を完全に退縮し得る。
例示的なＦｃドメイン融合パートナー
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、融合パートナーとしてＦｃドメインを有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、野生型配列（野生型ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２（例えばＩｇＧ２ａ）配列など）を有する。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、天然のバリアントまたは操作したバリアントのいずれかである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのＦｃと１つ以上のＦｃγレセプターとの相互作用を変化させたものを選択する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのＦｃと１つ以上の補体因子との相互作用を変化させたものを選択する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのＦｃと１つ以上のＦｃγレセプターとの相互作用を変化させたとともに、そのＦｃと１つ以上の補体因子との相互作用を変化させたものを選択する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＷＯ２０１４／１４４９６０に記載されているような少なくとも１つの点変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９またはＰ３３１という位置のうちの１つ以上に置換を有するヒトＦｃドメインである（これらの位置の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるものである）。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５及び／またはＰ３３１に変異を有するヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓという置換を有するヒトＦｃドメインである。（例えば、配列番号１２を参照されたい。）いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｎ２９７の位置にアミノ酸置換を有する。（例えば、配列番号１３を参照されたい。）いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｃ２３７Ｓという変異を含む。（例えば、配列番号９を参照されたい。）
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合パートナーの変異によって、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子では、Ｆｃドメイン変異以外は同じアミノ酸配列を有するＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と比べて、１つ以上のＦｃγレセプターとの相互作用が変化している。いくつかの実施形態では、ＦｃのＦｃγレセプター（ＦｃＲＮ、ＲＩ、ＲＩＩＡ、ＲＩＩＢ及びＲＩＩＩの１つ以上など）に対する親和性が、野生型Ｆｃドメインと比べて低下している。いくつかの実施形態では、ＦｃのＦｃＲＮ、ＲＩ、ＲＩＩＡ、ＲＩＩＢ及びＲＩＩＩのすべてに対する親和性が、野生型Ｆｃドメインと比べて低下している。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合パートナーの変異によって、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子では、１つ以上の補体因子（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４など）と、それらの切断産物（Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２ａ、Ｃ２ｂ、Ｃ３ａ及びＣ３ｂなど）との相互作用が変化している。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合パートナーの変異によって、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子では、１つ以上の補体因子との相互作用が、Ｆｃドメイン変異以外は同じアミノ酸配列を有するＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の相互作用と比べて変化している。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤと融合パートナー（Ｆｃ融合パートナーなど）は、直接連結していて、ＦｃのＮ末端またはＣ末端アミノ酸が、ＣＤ８０ ＥＣＤ配列のＮ末端またはＣ末端アミノ酸の直前または直後に位置するようになっている。（例えば、配列番号２０及び２１を参照されたい。）別の実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤと融合パートナーは、リンカー分子（リンカーペプチド配列、例えばＧＳリンカー配列など）によって連結されている。
治療用組成物と治療方法
がんの治療方法
いくつかの実施形態では、がんの治療方法であって、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を有効量投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、がんは、良性（良性腫瘍ともいう）、前癌性または悪性であってよい。いくつかの実施形態では、がんは、固形がん細胞（すなわち「固形腫瘍」）を含んでもよく、あるいは、白血病のがん細胞を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、ヒトもしくは動物対象、または治療するがんのマウス同系もしくは異種移植モデルにおいて、がんの成長を低下させるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、治療するがんのマウス同系または異種移植モデルなどにおいて、腫瘍体積を縮小させるのに有効である。
治療してよい特定のがんの例としては、癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が挙げられるが、これらに限らない。このようながんの、より具体的な非限定的な例としては、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺がん（扁平上皮非小細胞肺がんを含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠肉腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、結腸がん、大腸がん、子宮体癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、腎細胞癌、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、脳腫瘍、子宮体がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ及び様々なタイプの頭頸部がん（頭頚部扁平上皮癌を含む）が挙げられるが、これらに限らない。
上記方法の実施形態のいずれでも、対象に投与するＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、マウス同系異種移植がんモデルにおいて、１週間、１０日、２週間または３週間の期間にわたって、腫瘍の成長を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％阻害できる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、ＣＴ２６マウス異種移植腫瘍モデルにおいて、接種から２週間または３週間で、腫瘍の成長を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％阻害できる。いくつかのこのようなケースでは、融合分子は、１〜３回、０．３〜３ｍｇ／ｋｇ（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇなど）で投与してよい。上記方法の実施形態のいずれでも、対象に投与するＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の投与は、ヒトまたは動物対象において、例えば、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年の期間にわたって、少なくとも１つの腫瘍の体積を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％縮小できる。いくつかのケースでは、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子は、マウス腫瘍モデル（ＣＴ２６モデルなど）において、例えば、試験したマウスの有意な部分（マウスの少なくとも４０％または少なくとも５０％など）において、腫瘍を完全に退縮させることができると見られる。
これらの方法のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含むＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃであってよい。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合分子は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む。
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを含む免疫刺激剤との併用治療
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与して、有効量の少なくとも１つの免疫刺激剤と組み合わせて、上記のがんの１つを治療する。免疫刺激剤としては、例えば、小分子薬物または生体物質を挙げてよい。生体的な免疫刺激剤の例としては、抗体、抗体断片、例えば、レセプターとリガンドの結合をブロックするレセプターまたはリガンドポリペプチドの断片、ワクチン及びサイトカインが挙げられるが、これらに限らない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、免疫刺激分子（共刺激分子を含む）のアゴニストを含み、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、免疫抑制分子（共抑制分子を含む）のアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、免疫細胞（Ｔ細胞など）で見られる免疫刺激分子（共刺激分子を含む）のアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、免疫細胞（Ｔ細胞など）で見られる免疫抑制分子（共抑制分子を含む）のアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、自然免疫に関与する細胞（ＮＫ細胞など）で見られる免疫刺激分子（共刺激分子を含む）のアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、自然免疫に関与する細胞（ＮＫ細胞など）で見られる免疫抑制分子（共抑制分子を含む）のアンタゴニストを含む。いくつかの実施形態では、この併用により、治療する対象における抗原特異的なＴ細胞応答を増強し、及び／または対象における自然免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、併用により、ＣＤ８０ ＥＣＤもしくはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子または免疫刺激剤を単独で投与した場合と比べて、動物がんモデル（同系または異種移植モデルなど）において、抗腫瘍応答が改善する。いくつかの実施形態では、併用により、ＣＤ８０ ＥＣＤもしくはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子または免疫刺激剤を単独で投与した場合と比べて、動物がんモデル（同系または異種移植モデルなど）において、相乗的な応答が生じる。
上記併用療法の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を免疫刺激剤（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）と組み合わせたものであって、対象に投与するものは、マウス同系または異種移植がんモデルにおいて、１週間、１０日、２週間または３週間の期間にわたって、腫瘍の成長を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％阻害できる。上記併用療法の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を免疫刺激剤（ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターなど）と組み合わせたものであって、対象に投与するものは、対象または動物モデルにおいて、例えば、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年の期間にわたって、少なくとも１つの腫瘍の体積を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％縮小できる。
併用療法のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含むＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃであってよい。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合分子は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、免疫刺激剤は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである刺激または抑制分子を標的とする。例えば、免疫刺激剤は、ポリペプチドのＢ７ファミリーの別のメンバーを標的とする（またはその別のメンバーに特異的に結合する）薬剤であってよい。免疫刺激剤は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバー、またはＴＮＦファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激もしくは共抑制レセプターを標的とする薬剤であってよい。免疫刺激剤の標的としてよい例示的なＴＮＦ及びＴＮＦＲファミリーメンバーとしては、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα １β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ及びＮＧＦＲが挙げられる。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、（ｉ）Ｔ細胞の活性化を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイントインヒビター）（ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−４及びＩＬＴ４など）のアンタゴニストを含んでよく、ならびに／または（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化を刺激するタンパク質（Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３及びＣＤ２８Ｈなど）のアゴニストを含んでよい。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ及びその他の免疫抑制サイトカイン）を阻害するか、またはそのアンタゴニストである薬剤を含んでよく、いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化を刺激するサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＦＮαなど）のアゴニスト（例えば、サイトカイン自体）である薬剤を含んでよい。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ケモカイン（ＣＸＣＲ２（例えばＭＫ−７１２３）、ＣＸＣＲ４（例えばＡＭＤ３１００）、ＣＣＲ２またはＣＣＲ４（モガムリズマブ）など）のアンタゴニストを含んでよい。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤としては、ＮＫ細胞上の抑制レセプターのアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化レセプターのアゴニストを挙げてよい。例えば、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、ＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせることができる。
免疫刺激剤としては、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する薬剤、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド及びイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療剤（例えばアントラサイクリン）も挙げてよい。
免疫刺激剤としては、メソセリン標的ワクチンまたは弱毒化リステリアがんワクチン（ＣＲＳ−２０７など）のような特定のワクチンも挙げてよい。
免疫刺激剤は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇またはブロックする薬剤（ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤など）も含んでよい。
免疫刺激剤は、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する薬剤も含んでよい。
免疫刺激剤は、アデノシンの形成を阻害するか、またはアデノシンＡ２Ａレセプターを阻害する薬剤も含んでよい。
免疫刺激剤は、Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を逆転／予防する薬剤と、腫瘍部位において自然免疫の活性化及び／または炎症を誘発する薬剤も含んでよい。
いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＣＤ４０アゴニスト（ＣＤ４０アゴニスト抗体など）を含んでよい。ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、免疫経路の複数の要素を標的とするコンビナトリアルなアプローチ（腫瘍抗原提示を増強する少なくとも１つの薬剤（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）、例えば、ＣＴＬＡ４経路を阻害するか、及び／またはＴｒｅｇもしくはその他の免疫抑制細胞を枯渇もしくはブロックすることによって、負の免疫調節を阻害する少なくとも１つの薬剤、例えば、ＣＤ−１３７、ＯＸ−４０及び／もしくはＧＩＴＲ経路を刺激し、ならびに／またはＴ細胞のエフェクター機能を刺激するアゴニストによって、正の免疫調節を刺激する療法、抗腫瘍Ｔ細胞の出現頻度を全身的に向上させる少なくとも１つの薬剤、例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えばダクリズマブ）を用いるか、またはエキソビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇法によって、Ｔｒｅｇ（腫瘍におけるＴｒｅｇなど）を枯渇または阻害する療法、腫瘍におけるサプレッサー骨髄系細胞の機能に影響を及ぼす少なくとも１つの薬剤、腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療剤（例えばアントラサイクリン）、遺伝子改変細胞、例えば、キメラ抗原レセプターによって改変した細胞（ＣＡＲ−Ｔ療法）を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入、代謝酵素（インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンテターゼなど）を阻害する少なくとも１つの薬剤、Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を逆転／予防する少なくとも１つの薬剤、腫瘍部位において自然免疫の活性化及び／または炎症を誘発する療法、免疫刺激サイトカインの投与、または免疫抑制サイトカインのブロックのうちの１つ以上など）とも組み合わせてよい。
例えば、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、正の共刺激レセプターをライゲーションする１つ以上のアゴニスト剤と、抑制レセプターを通じてシグナル伝達を減弱させる１つ以上のアンタゴニスト（ブロッキング剤）（腫瘍微小環境内の別個の免疫抑制経路を抑えるアンタゴニストなど）と、（例えば、ＣＤ２５を阻害することによって）抗腫瘍免疫細胞（Ｔ細胞など）の出現頻度を全身的に向上させ、Ｔｒｅｇを枯渇または阻害する１つ以上の薬剤と、代謝酵素（ＩＤＯなど）を阻害する１つ以上の薬剤と、Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を逆転／予防する１つ以上の薬剤と、腫瘍部位において自然免疫の活性化及び／または炎症を誘発する１つ以上の薬剤とともに用いることができる。
一実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト（アンタゴニストＣＴＬＡ４抗体など）を含む。好適なＣＴＬＡ４抗体としては、例えば、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブが挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＬＡＧ−３アンタゴニスト（アンタゴニストＬＡＧ−３抗体など）を含む。好適なＬＡＧ−３抗体としては、例えば、ＢＭＳ−９８６０１６（ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８）、またはＩＭＰ−７３１もしくはＩＭＰ−３２１（ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ０９／４４２７３）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニスト（アゴニストＣＤ１３７抗体など）を含む。好適なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブまたはＰＦ−０５０８２５６６（ＷＯ１２／３２４３３）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＧＩＴＲアゴニスト（アゴニストＧＩＴＲ抗体など）を含む。好適なＧＩＴＲ抗体としては、例えば、ＴＲＸ−５１８（ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６）、ＭＫ−４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）またはＷＯ２０１５／０３１６６７に開示されているＧＩＴＲ抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＯＸ４０アゴニスト（アゴニストＯＸ４０抗体など）を含む。好適なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ−６３８３、ＭＥＤＩ−６４６９またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８、ＷＯ０６／０２９８７９）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＤ２７アゴニスト（アゴニストＣＤ２７抗体など）を含む。好適なＣＤ２７抗体としては、例えば、バルリルマブ（ＣＤＸ−１１２７）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｂ７Ｈ３を標的とするＭＧＡ２７１（ＷＯ１１／１０９４００）を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＫＩＲアンタゴニスト（リリルマブなど）を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＩＤＯアンタゴニストを含む。ＩＤＯアンタゴニストとしては、例えば、ＩＮＣＢ−０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）またはＦ００１２８７が挙げられる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔｏｌｌ様レセプターアゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、カルメット・ゲラン桿菌）、ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、Ｈｉｌｔｏｎｏｌまたはイミキモド）、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えばＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）またはＴＬＲ９アゴニスト（例えばＣｐＧ７９０９）を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＴＧＦ−βインヒビター、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７またはＩＭＣ−ＴＲ１を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与して、有効量のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと組み合わせて、上記のがんの１つを治療する。
例示的なＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビター
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターとしては、抗体、融合タンパク質及びペプチドが挙げられる。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターである非限定的な例示的融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）である。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターである非限定的な例示的ペプチドは、ＡＵＲ−０１２である。その他の例示的なＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターとしては、ＰＤ−１を阻害する抗体（抗ＰＤ−１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ１抗体など）が挙げられる。このような抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体及びヒト抗体であってよい。
いくつかの実施形態では、併用すると、動物がんモデル（異種移植モデルなど）において、ＣＤ８０ ＥＣＤもしくはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターのいずれかを単独で投与した場合と比べて、抗腫瘍応答が改善する。いくつかの実施形態では、併用すると、動物がんモデル（異種移植モデルなど）において、ＣＤ８０ ＥＣＤもしくはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターのいずれかを単独で投与した場合と比べて、相乗的な応答が生じる。
ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞によって発現される重要な免疫チェックポイントレセプターであり、免疫抑制を媒介する。ＰＤ−１は、レセプターのＣＤ２８ファミリーのメンバーであり、このファミリーメンバーとしては、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１及びＢＴＬＡが挙げられる。ＰＤ−１に対する２つの細胞表面糖タンパク質リガンド（プログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）とプログラム死リガンド−２（ＰＤ−Ｌ２））が同定されている。これらのリガンドは、抗原提示細胞と多くのヒトがんで発現し、ＰＤ−１に結合すると、Ｔ細胞の活性化とサイトカインの分泌をダウンレギュレートすることが示されている。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の相互作用の阻害によって、前臨床モデルにおいて、強力な抗腫瘍活性が媒介される。
ＰＤ−１に高い親和性で特異的に結合するヒトモノクローナル抗体（ＨｕＭＡｂ）は、米国特許第８，００８，４４９号に開示されている。その他の抗ＰＤ−１ ｍＡｂは、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，１６８，７５７号及び同第８，３５４，５０９号、ならびに国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載されている。米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ−１ ＨｕＭＡｂはそれぞれ、（ａ）１×１０−７Ｍ以下のＫＤ（Ｂｉｏｃｏｒｅのバイオセンサーシステムを用いて表面プラズモン共鳴によって判定）で、ヒトＰＤ−１に結合し、（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４またはＩＣＯＳには実質的には結合せず、（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞の増殖を増大させ、（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいて、インターフェロン−γの産生を増大させ、（ｅ）ＭＬＲアッセイにおいて、ＩＬ−２の分泌を増大させ、（ｆ）ヒトＰＤ−１とカニクイザルＰＤ−１に結合し、（ｇ）ＰＤ−Ｌ１及び／もしくはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害し、（ｈ）抗原特異的なメモリー応答を刺激し、（ｉ）抗体応答を刺激し、ならびに／または（ｊ）インビボにおいて、腫瘍細胞の成長を阻害する。本発明で有用な抗ＰＤ−１抗体としては、ヒトＰＤ−１に特異的に結合する抗体が挙げられ、これらの抗体は、上記の特徴（ａ）〜（ｊ）のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたは少なくとも５つを示す。
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブ（「Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）」としても知られており、以前は、５Ｃ４、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６またはＯＮＯ−４５３８と称されていた）は、ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）との相互作用を選択的に防ぐことによって、抗腫瘍Ｔ細胞の機能のダウンレギュレーションをブロックする完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ−１免疫チェックポイントインヒビター抗体である（米国特許第８，００８，４４９号、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２（９）：８４６−５６）。
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブ（「Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）」、ランブロリズマブ及びＭＫ−３４７５としても知られている）は、ヒト細胞表面レセプターＰＤ−１（プログラム死−１またはプログラム細胞死−１）に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，９００，５８７号で説明されており、「ｗｗｗ．ｄｏｔ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ？ｃｄｒｉｄ＝６９５７８９」というアドレスのサイト（最終アクセス：２０１４年１２月１４日）も参照されたい。ペムブロリズマブは、再発性または難治性メラノーマの治療用として、ＦＤＡに承認されている。
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１レセプターに対するモノクローナル抗体であるＭＥＤＩ０６０８（以前はＡＭＰ−５１４）である。ＭＥＤＩ０６０８は、例えば、米国特許第８，６０９，０８９Ｂ２号またはｗｗｗ．ｄｏｔ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ？ｃｄｒｉｄ＝７５６０４７（最終アクセス：２０１４年１２月１４日）で説明されている。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒト化モノクローナル抗体であるピジリズマブ（ＣＴ−０１１）である。ピジリズマブは、米国特許第８，６８６，１１９Ｂ２号またはＷＯ２０１３／０１４６６８Ａ１で説明されている。
開示されている方法において有用な抗ＰＤ−１抗体としては、ヒトＰＤ−１に特異的に結合するとともに、ヒトＰＤ−１への結合に対して、ニボルマブと交差競合する単離抗体も挙げられる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。抗体が、抗原への結合に対して交差競合する能力によって、これらの抗体が、抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差結合抗体のその特定のエピトープ領域への結合を立体的に妨害することが示される。これらの交差競合抗体は、ＰＤ−１の同じエピトープ領域に結合することから、ニボルマブの機能的特性と非常に似た機能的特性を有すると予測される。交差競合抗体は、ニボルマブと交差競合する能力に基づき、標準的なＰＤ−１結合アッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ解析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなど）において、容易に同定できる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。
特定の実施形態では、ヒトＰＤ−１への結合に対してニボルマブと交差競合するか、または、ヒトＰＤ−１のエピトープ領域うち、ニボルマブと同じエピトープ領域に結合する抗体は、モノクローナル抗体である。これらの交差競合抗体は、ヒト対象への投与用に、キメラ抗体であることも、またはヒト化抗体もしくはヒト抗体であることもできる。
開示されている発明の方法において有用な抗ＰＤ−１抗体としては、上記の抗体の抗原−結合部分も挙げられる。例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片が挙げられる。
ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質を免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと組み合わせて投与すること
いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを同時に投与する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを順次に投与する。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの投与前に、少なくとも１用量、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも５用量または少なくとも１０用量のＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０融合分子を投与する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０融合分子の投与前に、少なくとも１用量、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも５用量または少なくとも１０用量の免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを投与する。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの最後の用量は、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０融合分子の最初の用量の少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１週間、２週間、３週間、５週間、１２週間または２４週間前に投与する。いくつかの他の実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０融合分子の最後の用量は、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの最初の用量の少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１週間、２週間、３週間、５週間、１２週間または２４週間前に投与する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療を受けたことがあるか、または受けている者であり、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０融合分子を治療レジメンに加える。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分な者である（すなわち、１つ以上の免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する耐性を示す者である）。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分な対象は、例えば、以前は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに応答したことがあってよく、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答性が低下した者であっても、または、その対象は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに応答したことがなくてもよい。免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する不十分な応答とは、標準的な用量のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの投与後に改善すると予測された状態の特徴が改善しないか、及び／または標準的な用量を上回る用量を投与した場合のみに改善が見られることを意味する。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分な者は、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間または少なくとも１２週間、標準的な用量の投与を受けた後に、その薬物に対する応答が不十分であったことがあるか、または不十分である。免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの「標準的な」用量は、医療専門家が判断でき、対象の年齢、体重、病歴、疾患の重症度、投与頻度などに左右されることがある。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分な者は、抗ＰＤ−１抗体及び／または抗ＰＤ−Ｌ１抗体に対する応答が不十分であったことがあるか、または不十分である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分な者は、ＡＭＰ−２２４に対する応答が不十分であったことがあるか、または不十分である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分な者は、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択したＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターに対する応答が不十分であったことがあるか、または不十分である。
上記の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子をＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと組み合わせたものであって、対象に投与するものは、マウス同系または異種移植がんモデルにおいて、１週間、１０日または２週間の期間にわたって、腫瘍の成長を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％阻害できる。上記併用療法の実施形態のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子をＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと組み合わせたものであって、対象に投与するものは、対象または動物モデル対象において、少なくとも１つの腫瘍の体積を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％、例えば、１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年の期間にわたって縮小できる。
これらの併用療法のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含むＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃであってよい。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、上記の融合分子は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む。
投与経路と担体
様々な実施形態では、ポリペプチドと融合分子は、インビボで、様々な経路（経口経路、動脈内経路、非経口経路、鼻腔内経路、静脈内経路、筋肉内経路、心臓内経路、脳室内経路、気管内経路、口腔内経路、直腸経路、腹腔内経路、皮内経路、局所経路、経皮及び髄腔内経路、または別段に、埋入もしくは吸入による経路が挙げられるが、これらに限らない）によって投与してよい。対象組成物は、固体、半固体、液体または気体形状の調製物（錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、座剤、注腸剤、注射剤、吸入剤及びエアゾール剤が挙げられるが、これらに限らない）に調合してよい。文献に説明されているように、ポリペプチドをコードする核酸分子を金微粒子にコーティングして、粒子ボンバードメント器具または「遺伝子銃」によって皮内送達してよい（例えば、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５６：１５２−１５４（１９９２）を参照されたい）。適切な調合と投与経路は、意図する用途に従って選択してよい。
様々な実施形態では、ポリペプチドを含む組成物は、広範な製薬学的に許容可能な担体とともに、製剤中で提供する（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）、Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。様々な製薬学的に許容可能な担体（ビヒクル、アジュバント及び希釈剤が挙げられる）が入手可能である。さらに、様々な製薬学的に許容可能な補助物質（ｐＨ調整剤、ｐＨ緩衝剤、浸透圧調整剤、安定剤、湿潤剤など）も入手可能である。非限定的な例示的担体としては、生理的食塩水、緩衝生理的食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール及びこれらを組み合わせたものが挙げられる。
様々な実施形態では、ポリペプチドと融合分子を含む組成物は、それらを水性または非水性溶媒（植物油またはその他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールなど）に、所望に応じて、従来の添加剤（溶解補助剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤及び保存剤など）とともに、溶解、懸濁または乳化することによって、皮下投与を含む注射用に調合してよい。様々な実施形態では、この組成物は、例えば、加圧した許容可能な噴射剤（ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など）を用いて、吸入用に調合してよい。この組成物は、様々な実施形態では、生分解性または非生分解性ポリマーによるなどして、徐放マイクロカプセル剤に調合してもよい。非限定的な例示的生分解性調合物としては、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーが挙げられる。非限定的な例示的非生分解性調合物としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。このような調合物を作成する特定の方法は、例えば、ＥＰ１ １２５ ５８４Ａ１で説明されている。
１つ以上の容器であって、それぞれ、１用量以上のポリペプチドまたはポリペプチドを組み合わせたものを含む医薬パック及びキットも提供する。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の薬剤とともに、または１つ以上の追加の薬剤なしに、ポリペプチドまたはポリペプチドを組み合わせたものを含む組成物を所定量含む単位投与量を提供する。いくつかの実施形態では、このような単位投与量は、予め充填する使い捨ての注射用シリンジ内に供給する。様々な実施形態では、この単位投与量に含まれる組成物は、生理的食塩水、スクロースなど、緩衝剤（ホスフェート）などを含んでよく、及び／または安定かつ有効なｐＨ範囲内に調合してよい。あるいは、いくつかの実施形態では、この組成物は、適切な液体、例えば滅菌水を加えると再構成できる凍結乾燥粉末として供給してよい。いくつかの実施形態では、この組成物は、タンパク質の凝集を阻害する１つ以上の物質（スクロース及びアルギニンが挙げられるが、これらに限らない）を含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／またはプロテオグリカンを含む。
医薬組成物は、具体的な適応症の治療または予防に有効な量で投与する。治療有効量は典型的には、治療する対象の体重、その対象の身体的状態もしくは健康状態、治療する状態の広範性、または治療する対象の年齢に左右される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビター（抗体または融合タンパク質など）は、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子とともに、１〜４ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターは、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。
投与頻度の判断は、主治医などの当業者が、治療する状態、治療する対象の年齢、治療する状態の重症度、治療する対象の全般的な健康状態などの検討に基づき行ってよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の有効用量を対象に１回以上投与する。様々な実施形態では、有効用量を対象に、１カ月に１回、１カ月に１回未満（例えば、２カ月ごとまたは３カ月ごと）投与する。別の実施形態では、１カ月に１回超（例えば、３週間ごと、２週間ごとまたは毎週など）、有効用量を投与する。いくつかの実施形態では、１週間、２週間、３週間、４週間または５週間に１回、有効用量を投与する。いくつかの実施形態では、１週間に２回または３回、有効用量を投与する。少なくとも１回、有効用量を対象に投与する。いくつかの実施形態では、複数回（少なくとも１カ月、少なくとも６カ月または少なくとも１年の期間を含む）、有効用量を投与してよい。
追加の併用療法
ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、単独で投与しても、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビター及び／または他の治療様式とともに投与してもよい。ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、他の治療様式、例えば、手術、化学療法、放射線療法または別の生体物質の投与の前、実質的に同時または後に与えてもよい。いくつかの実施形態では、がんは、手術、化学療法及び放射線療法、またはこれらを組み合わせた療法から選択した療法の後に再発または進行したものである。
がんの治療のために、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、１つ以上の追加の抗がん剤（化学療法剤、増殖阻害剤、血管新生阻害剤及び／または抗腫瘍組成物など）と併せて投与してよい。本発明の抗体と併用できる化学療法剤、増殖阻害剤、血管新生阻害剤、抗がん剤及び抗腫瘍組成物の非限定的な例は、下記の定義に示されている。
上記併用療法の実施形態のいずれでも、対象に行う療法は、マウス同系または異種移植がんモデルにおいて、１週間、１０日または２週間の期間にわたって、腫瘍の成長を、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％阻害できる。上記併用療法の実施形態のいずれでも、対象に行う療法は、対象または動物モデル対象において、少なくとも１つの腫瘍の体積を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％、例えば１カ月、２カ月、３カ月、６カ月または１年の期間にわたって縮小できる。
これらのさらなる併用療法のいずれでも、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子は、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質（１５〜６０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）を含むＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃであってよい。いくつかの実施形態では、この含有量は、１０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質（１５〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、２０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質または３０〜４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質など）である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、少なくとも１５モル（少なくとも２０モル、少なくとも２５モル、少なくとも３０モル、少なくとも３５モルまたは少なくとも４０モルなど）のＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＳＡ含有量は、１５モル、２０モル、２５モル、３０モル、３５モルまたは４０モルのＳＡ／１モルのタンパク質である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合分子は、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む。
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、アルキル化剤（チオテパ及びＣｙｔｏｘａｎ（登録商標）というシクロホスファミドなど）、アルキルスルホネート（ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなど）、アジリジン（ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ及びウレドーパなど）、エチレンイミン及びメチルメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロールメラミンを含む）、アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）、カンプトテシン（合成類似体トポテカン）、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体を含む）、クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似体のＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン、スポンジスタチン、ナイトロジェンマスタード（クロラムブシル、クロロナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドハイドロクロライド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど）、ニトロソウレア（カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチンなど）、抗生物質（エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）など）、ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）、ビスホスホネート（クロドロネートなど）、エスペラミシン、ネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）というドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗剤（メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）、葉酸類似体（デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセートなど）、プリン類縁体（フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど）、ピリミジン類縁体（アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど）、アンドロゲン（カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど）、抗副腎剤（アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）、葉酸補充剤（フロリン酸など）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトレキサート、デフォファミン、デメコルチン、ジアジクオン、エルフォルニチン、エリプチニウムアセテート、エポチロン、エトグルシド、ガリウムニトレート、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダミン、メイタンシノイド（メイタンシン及びアンサマイトシンなど）、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（登録商標）という多糖複合体（オレゴン州ユージーンのＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えばＴａｘｏｌ（登録商標）というパクリタキセル（ニュージャージー州プリンストンのＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）というパクリタキセルのクレモフォア無添加アルブミン改変ナノ粒子製剤（イリノイ州シャンバーグのＡｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒ）及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）というドキセタキセル（フランスのアントニーのＲｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）、クロランブシル、Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）というゲムシタビン、６−チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキセート、白金類縁体（シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンなど）、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ−１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）というビノレルビン、ノバントロン、テニポシド、エダトレキサート、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼローダ、イバンドロネート、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）（イリノテカンと、５−ＦＵ及びロイコボリンとの治療レジメンを含む）、トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイド（レチノイン酸など）、カペシタビン、コンブレタスタチン、ロイコボリン（ＬＶ）、オキサリプラチン（オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む）、細胞の増殖を低下させる、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ及びＶＥＧＦ−Ａのインヒビター（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）））、ならびに上記のいずれかの製薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体が挙げられるが、これらに限らない。
さらなる非限定的な例示的化学療法剤としては、ホルモンのがんに対する作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤（抗エストロゲン及び選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）というタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）というトレミフェンを含む）など）、副腎でのエストロゲンの産生を調節する酵素のアロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター（例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）というメゲストロールアセテート、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）というエキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）というボロゾール、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）というレトロゾール及びＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）というアナストロゾールなど）、抗アンドロゲン（フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリンなど）、トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、接着細胞の増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子（例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｌｆ及びＨ−Ｒａｓなど）の発現を阻害するもの、リボザイム（ＶＥＧＦ発現インヒビター（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）というリボザイムなど）及びＨＥＲ２発現インヒビターなど）、ワクチン（遺遺伝子療法ワクチン、例えば、Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）というワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）というワクチン及びＶａｘｉｄ（登録商標）というワクチンなど）、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）というｒＩＬ−２、Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）というトポイソメラーゼ１インヒビター、Ａｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）というｒｍＲＨ、ならびに上記のいずれかの製薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体が挙げられる。
「血管新生阻害剤」または「血管新生インヒビター」とは、血管新生、脈管形成または望ましくない血管透過性を直接または間接的に阻害する小分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、抑制ＲＮＡ（ＲＮＡｉもしくはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離タンパク質、組み換えタンパク質、抗体、またはそのコンジュゲート体もしくは融合タンパク質を指す。血管新生阻害剤には、血管新生因子またはそのレセプターと結合し、その血管新生活性をブロックする薬剤が含まれることを理解されたい。例えば、血管新生阻害剤は、血管新生物質に対する抗体またはその他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体（例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）））またはＶＥＧＦ−Ａレセプターに対する抗体（例えばＫＤＲレセプターもしくはＦｌｔ−１レセプター）、抗ＰＤＧＦＲインヒビター（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシレート））、ＶＥＧＦレセプターのシグナル伝達をブロックする小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵ１１２４８（スニチニブマレート）、ＡＭＧ７０６または例えば国際公開第２００４／１１３３０４号に記載されているもの）である。抗血管新生剤には、ネイティブな血管新生インヒビター、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７−３９、Ｓｔｒｅｉｔ ａｎｄ Ｄｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２−３１７９（例えば、悪性メラノーマにおける抗血管新生療法を列挙している表３）、Ｆｅｒｒａｒａ ＆ Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９−１３６４、Ｔｏｎｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９−６５５６（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙している表２）及びＳａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００−２０６（例えば、臨床試験で用いた抗血管新生剤を列挙している表１）を参照されたい。
「増殖阻害剤」とは、本明細書で使用する場合、インビトロまたはインビボのいずれかで、細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の成長を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、増殖阻害剤は、Ｓ期における細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の割合を有意に低下させる薬剤であってよい。増殖阻害剤の例としては、（Ｓ期以外の周期に）細胞周期の進行をブロックする薬剤（Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤など）が挙げられるが、これらに限らない。古典的なＭ期ブロッカーとしては、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩインヒビター（ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド及びブレオマイシンなど）が挙げられる。Ｇ１を停止するこれらの薬剤は、Ｓ期停止にまで影響を及ぼし、例えば、ＤＮＡアルキル化剤（タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル及びａｒａ−Ｃなど）である。さらに、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，“Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ”ｂｙ Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば１３ページで情報を得ることができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）はいずれも、イチイに由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセルとドセタキセルは、脱重合を防いで、細胞における有糸***の阻害を導くことによって、チューブリン二量体からの微小管の重合を促し、微小管を安定化する。
「抗腫瘍組成物」という用語は、がんの治療に有用な組成物であって、少なくとも１つの活性治療剤を含む組成物を指す。治療剤の例としては、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞障害剤、放射線療法で用いる薬剤、血管新生阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの他のがん免疫治療剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するためのその他の薬剤（抗ＨＥＲ−２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮細胞成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼインヒビター）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲインヒビター（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来成長因子インヒビター（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシレート））、ＣＯＸ−２インヒビター（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ−４インヒビター（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ−Ｌ２インヒビター（例えば、抗ＰＤ−Ｌ２抗体）、ＴＩＭ３インヒビター（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、サイトカイン、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ３またはＶＥＧＦレセプター（複数可）という標的の１つ以上に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ならびにその他の生物活性有機化学剤など）が挙げられるが、これらに限らない。これらを組み合わせたものも、本発明に含まれる。
下記で論じられている実施例は、本発明を純粋に例示するものとして意図されており、本発明を限定するものと決してみなすべきではない。下記の実験が、実施したすべてまたは唯一の実験であることを表すようには実施例は意図されていない。使用した数値（例えば、量、温度など）は、正確になるように努めたが、ある程度の実験誤差及び偏差を考慮する必要がある。別段に示されていない限り、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、摂氏温度であり、圧力は、大気圧または大気圧近傍である。
実施例１：ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子は、マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６を移植したマウスにおいて、腫瘍の成長を低下させる
雌の７週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、２週間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６をマウスの右側腹部に、１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで皮下移植した。接種前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気において成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の１：１混合物に、１ミリリットル当たり５×１０６細胞で再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて、各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。７日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に治療群に割り当てた。治療群に登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、１７５ｍｍ３であった。ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）によって、マウスに、生理的食塩水またはプラスミドＤＮＡを投与した。ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）によって投与したプラスミドＤＮＡは、マウスＣＤ８０またはＣＴＬＡ４の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と、ヒトＩｇＧ２ａのＦｃドメインの配列を含んでいた。腫瘍体積が、マウスの体重の１０％を超えるか、または約２０００ｍｍ３になるまで、腫瘍の測定を少なくとも週に２回続けた。
マウスにＣＴ２６細胞を移植した日に対して平均腫瘍体積をグラフ化することによって、腫瘍サイズの変化が示されている。（図１ａ。）マウスＣＤ８０ ＥＣＤを用いたＲＩＰＰＳでは、コントロールの生理的食塩水に比べて、腫瘍の成長が有意に低下し（ｐ＜０．０５）、その低下は、１１日目に開始された（図１ａ〜ｂ）。Ｐ値は、調査の各日における腫瘍体積計算値の独立両側ｔ検定解析を用いて計算した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。腫瘍の成長のＣＤ８０ ＥＣＤによる阻害は、コントロールの生理的食塩水と比べて、７８．８％であることが確認され、この値は、１００×（１−（ＣＤ８０における腫瘍体積の平均変化／生理的食塩水における腫瘍体積の平均変化））として計算した。図１ａに示されているように、マウスＣＴＬＡ４−ＥＣＤ Ｆｃを用いたＲＩＰＰＳでは、実際に、コントロールの生理的食塩水と比べて、腫瘍の成長が拡大した。この結果の説明の１つは、ＣＴＬＡ４−ＥＣＤ Ｆｃコンストラクトが、ＣＤ８０に対するリガンドトラップとして作用し、ＣＤ８０が、ＣＤ２８に結合するのを防ぎ、腫瘍細胞に対するＴ細胞の活性を刺激した可能性があることである。
実施例２：抗ＰＤ−１抗体と組み合わせたＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子は、マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６を移植したマウスにおいて、腫瘍の成長を低下させる
雌の７週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、１２日間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６をマウスの右側腹部に、１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の１：１混合物に、１ミリリットル当たり５×１０６細胞で再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて、各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。７日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に治療群に割り当てた。治療群に登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、約１５０ｍｍ３であった。ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）によって、マウスに、マウスＣＤ８０ ＥＣＤと、ヒトＩｇＧ２ａ由来のＦｃまたはＦｃのみ（ネガティブコントロール）をコードするプラスミドＤＮＡを投与した。抗ＰＤ１（クローンＲＭＰ１−１４）またはラットＩｇＧ２ａ（クローン２Ａ３、ネガティブコントロール）においては、タンパク質を投与した。投与群は、１）Ｆｃ ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）及びラットＩｇＧ２ａ、２）ＣＤ８０ ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）及びラットＩｇＧ２ａ、３）Ｆｃ ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）及び抗ＰＤ１、または４）ＣＤ８０ ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）及び抗ＰＤ１であった。腫瘍体積が、マウスの体重の１０％を超えるか、または約２０００ｍｍ３になるまで、腫瘍の測定を少なくとも週に２回続けた。
調査の最後に、すべての群の平均腫瘍重量をグラフ化することによって、腫瘍サイズの変化が示されている。（図２ａ。）マウスＣＤ８０ ＥＣＤを用いたＲＩＰＰＳ（サービスマーク）、または抗ＰＤ１の投与では、コントロールと比べて、腫瘍の成長が低下した。（図２ａ〜ｂ。）ＣＤ８０ ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）と抗ＰＤ１を組み合わせたところ、ＣＤ８０（ｐ＜０．０１、９日目の後に開始）または抗ＰＤ−１（ｐ＜０．０１、１４日目）のいずれか単独と比べて、腫瘍の成長が有意に低下した（ｐ＜０．０５）（治療開始から９日目に開始）。Ｐ値は、各測定日における腫瘍体積計算値の独立両側ｔ検定解析を用いて計算した。
コントロールと比べて、ＣＤ８０ ＥＣＤによる腫瘍の成長の阻害（ＴＧＩ）は２８．７％、抗ＰＤ１によるＴＧＩは、４１．５％であることが確認された。ＣＤ８０ ＥＣＤと抗ＰＤ１を組み合わせた場合のＴＧＩは、８３％であることが確認された。（図２ｂを参照されたい。）ＴＧＩは、１００×（１−（治療群の平均体積差／生理的食塩水の平均体積差）という式を用いて計算した。
実施例３：ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子と、野生型及び変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合ポリペプチド配列との活性の比較
雌の７週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、２週間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６をマウスの右側腹部に、１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の１：１混合物に、１ミリリットル当たり５×１０６細胞で再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて、各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。５日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に治療群に割り当てた。治療群に登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、１７５ｍｍ３であった。ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）によって、マウスに、生理的食塩水またはプラスミドＤＮＡを投与した。ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）によって投与したプラスミドＤＮＡは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインとともに、マウスＣＤ８０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の配列を含んでいた。ＲＩＰＰＳ（サービスマーク）によって２クローンを投与し、その一方は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含み（ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴ）、もう一方は、ＦｃとＦｃγレセプターとの相互作用を変更するために、３つの変異アミノ酸（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）を有する野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含んでいた（ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴ）。腫瘍体積が、マウスの体重の１０％を超えるか、または約２０００ｍｍ３になるまで、腫瘍の測定を少なくとも週に２回続けた。
マウスにＣＴ２６細胞を移植した日に対して平均腫瘍体積をグラフ化することによって、腫瘍サイズの変化が示されている。（図３ａ−ｂ。）ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴを用いたＲＩＰＰＳ（サービスマーク）では、コントロールの生理的食塩水に比べて、腫瘍の成長が有意に低下した（ｐ＜０．０５）（１４日目に開始された）。ＣＤ８０−ＩｇＧ ＭＴでは、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴと比べて、腫瘍の成長が有意に低下した（ｐ＜０．０１）（１４日目に開始された）。Ｐ値は、調査の各日における腫瘍体積計算値の独立両側ｔ検定解析を用いて計算した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴによる腫瘍の成長の阻害（ＴＧＩ）は、コントロールの生理的食塩水と比べて、６９．４％であることが確認され、ＣＤ８０−ＩｇＧ ＭＴのＴＧＩと比べたところ、９８％として算出された。（図３ｂを参照されたい。）ＴＧＩは、１００×（１−（治療群の平均体積差／生理的食塩水の平均体積差）という式を用いて割り出した。
実施例４：野生型及び変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合ポリペプチド配列を有するＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子が、ＣＴ２６腫瘍における浸潤Ｔ細胞に及ぼす作用
別のインビボ調査を行って、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴとＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴが、治療早期に、ＣＴ２６腫瘍における浸潤Ｔ細胞に及ぼす作用を解析した。
雌の７週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、２週間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６をマウスの右側腹部に、１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の１：１混合物に、５×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて、各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。５日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に治療群に割り当てた（ｎ＝１群当たり５匹のマウス）。治療群に登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、７２ｍｍ３であった。マウスに、生理的食塩水、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有する、ＣＤ８０のマウス細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴ）またはＦｃγレセプターとの相互作用を変化させるために、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有する、ＣＤ８０のマウスＥＣＤ（ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴ、変異Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）を投与した。腫瘍は、５日目と１１日目に測定した。
１２日目に、マウスをＣＯ２で安楽死させ、リン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）でかん流した。簡潔に述べると、マウスを迅速に開胸し、２０ゲージのニードルを備えたシリンジを用いて、左室における切り目を介して、４０ｍＬのＰＢＳを大動脈に注入した。右房における開口部から、血液とＰＢＳを出した。腫瘍を取り除き、１０％中性緩衝ホルマリンに４℃で浸漬した。２時間後、組織を３回、ＰＢＳでリンスしてから、ＰＢＳ中の３０％スクロースに一晩移した。翌日、腫瘍をＯＣＴ化合物において凍結し、−８０Ｃで保存した。
クリオスタット切片を厚さ２０μｍで切断した。切片をＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ（登録商標）Ｐｌｕｓ ｓｌｉｄｅで１〜２時間乾燥した。０．３％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００を含むＰＢＳで試験片を透過処理し、ＰＢＳ０．３％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００中の５％正常ヤギ血清（ブロッキング溶液）で１時間、室温でインキュベートして、非特異的な抗体結合をブロックした。Ｔ細胞を検出するために、切片をラット抗ＣＤ４（ＧＫ１．５／ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とウサギ抗ＣＤ３抗体（ＳＰ７／Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（いずれも、ブロッキング溶液で１：５００に希釈したもの）とともに一晩インキュベートした。コントロール試験片は、一次抗体の代わりに、５％正常血清で同じ期間、インキュベートした。０．３％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００を含むＰＢＳでリンス後、試験片を４時間、室温で、Ａｌｅｘａ（登録商標）５９４標識化ヤギ抗ラット及びＡｌｅｘａ（登録商標）４８８標識化ヤギ抗ウサギ二次抗体（ＰＢＳで１：４００に希釈したもの）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とともに、インキュベートした。０．３％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００を含むＰＢＳで、試験片をリンスし、１％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定し、ＰＢＳで再度リンスし、ＤＡＰＩを含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄという非退色標本保存液（Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で封入した。
ＡｘｉｏＣａｍ（登録商標）ＨＲｃというカメラを備えたＺｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｈｏｔ（登録商標）２ ｐｌｕｓという蛍光顕微鏡で、試験片を調べた。腫瘍内のＣＤ３＋細胞とＣＤ４＋細胞の量と分布を示す、各実験群の代表的な画像を集めたが、これは、図４ａ及び４ｂに示されている。
ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴまたはＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴによる処置によって、腫瘍内のＣＤ３＋細胞とＣＤ４＋細胞の数が、生理的食塩水と比べて増加した（図４ａ及び４ｂ）。ＣＤ４＋細胞の量は、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴで処置した腫瘍と、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴで処置した腫瘍との間で同程度であったが、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴによる処置の方が、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴと比べて、腫瘍浸潤ＣＤ３＋Ｔ細胞が増加した（図４ｂ）。ＣＤ３＋細胞のＣＤ４＋細胞に対する比率は、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＭＴにおける方が、ＣＤ８０−ＩｇＧ１ ＷＴと比べて増加した。
実施例５：ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子のサイトカイン放出作用
方法
タンパク質の処理
ＲＰＭＩ１６４０と、１００ＩＵのペニシリン／１００ｕｇ／ｍｌのストレプトマイシンと、２ｍＭのＬ−グルタミンと、１００ｎＭの非必須アミノ酸と、５５ｕＭの２−メルカプトエタノールと、１０％ｕｌｔｒａ ｌｏｗ−ＩｇＧウシ胎仔血清とを含むＴ細胞増殖培地中のプロテインＡ磁気ビーズ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、ヒトＣＤ８０ ＥＣＤ ＩｇＧ１ Ｆｃ融合分子（ＣＤ８０−Ｆｃ）を結合させた。１ウェル当たりの体積が１００ｕｌの９６ウェル平底組織培養プレートにおいて、１ｍｌ当たり３００万個のビーズ濃度で、結合反応を行った。ＣＤ８０−Ｆｃは、１０ｕｇ／ｍｌ、１ｕｇ／ｍｌ、０．１ｕｇ／ｍｌという一連の濃度にわたってビーズに結合させた。３ｎｇ／ｍｌのＯＫＴ３−ｓｃＦｖを加えることによって、追加の結合反応セットも行った。タンパク質を１時間、室温で、ロッキングプラットフォームで結合させてから、各ウェルに、２０ｕｇ／ｍｌ（終濃度１０ｕｇ／ｍｌ）のＩｇＧ１ Ｆｒｅｅ−Ｆｃ（ＦＰＴ）を１００ｕｌ加えて、ビーズ上のいずれかの空いているプロテインＡ結合部位をブロックするために、さらに１時間結合させた。続いて、未結合のタンパク質を除去するために、９６ウェルプレート磁気スタンドを用いて、完全にロードしたビーズとブロックしたビーズを３回、ＰＢＳで洗浄した。続いて、乾燥した洗浄ビーズの入った各ウェルに、ヒトＰａｎ Ｔ細胞１００ｕｌを１×１０６細胞／ｍｌの濃度で加えた。各条件をトリプリケートで試験した。
細胞
Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）の密度勾配遠心分離を用いて、単離の約１８時間前に健常なドナーから採取した血液であって、アフェレーシスで濃縮した血液（バフィーコート）からヒトＰＢＭＣを単離した。続いて、ヒトＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて、Ｐａｎ Ｔ細胞をＰＢＭＣから単離した。Ｔ２２５組織培養フラスコにおいて、８ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２と１ビーズ／細胞のＨｕｍａｎ Ｔ−ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈ）を添加した増殖培地（上記）に、Ｔ細胞を１００万細胞／ｍｌの密度で播種した。播種後、細胞に新鮮なＩＬ−２を供給し、２日おきに新鮮な増殖培地を加えることによって、３０万細胞／ｍｌの濃度を継続して保った。３７℃の水ジャケット付きインキュベーターであって、５％ＣＯ２に保ったインキュベーターに細胞を保持した。増加の６日後、磁気チューブスタンドを用いて、アクチベータービーズを除去し、細胞を１００万細胞／ｍｌの濃度で、ＩＬ−２を含めずに、新鮮な増殖培地に再懸濁した。２４時間後、細胞に対して、プロテインＡビーズ固定化タンパク質によるアッセイを行った。
サイトカインの測定
メーカーの指示に従って、細胞をプロテインＡビーズ固定化タンパク質で処理した２４時間後、ＨＴＲＦ−ＥＬＩＳＡキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を用いて、上清において、可溶性インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）と腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のレベルを測定した。
結果
可溶性サイトカインの産生によって測定したところ、ビーズ固定化ＣＤ８０−Ｆｃ単独では、ヒトＴ細胞の有意な活性化は生じなかった（図５ａ及びｃ）。しかしながら、少量のＯＫＴ３−ｓｃＦｖをＣＤ８０−Ｆｃとともに固定化したところ、ＣＤ８０依存性のＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの活発な放出が観察された（図５ｂ及びｄ）。このアッセイでのＯＫＴ３−ｓｃＦｖの使用量は、それ自体でＴ細胞を刺激するには低すぎたため、共刺激タンパク質としてのＣＤ８０の存在が必要であった。したがって、これらの結果から、このアッセイで用いたＣＤ８０−Ｆｃは実際に生物活性を有していたことが確認される。
このアッセイにおけるＩＦＮ−γとＴＮＦ−αの放出によって、ＣＤ８０−Ｆｃが生物活性を有していたことが示されたが、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αのようなサイトカインの過剰放出は有害なことがある。したがって、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃによる治療の潜在的な安全性に取り組むために、Ｔ細胞「超アゴニスト」であるとともに、過剰かつ有害なレベルのサイトカイン（ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αなど）をヒト対象において放出することが示されたモノクローナル抗ＣＤ２８抗体であるＴＧＮ１４１２によってこれまで公開された結果と、上記の結果を比較した。
サイトカインのヒトＴ細胞からの放出の誘導に関しては、固定化ＴＧＮ１４１２単独の方が、ヒトＣＤ８０単独よりも有意に強力であると見られる。Ｆｉｎｄｌａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３５２：１−１２（２０１０）では、１ｕｇ／ウェルのＴＧＮ１４１２によって、ＴＮＦαが活発に放出された（約２０００ｐｇ／ｍｌ）ことが報告され、Ｖｅｓｓｉｌｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ４２４：４３−５２（２０１５）では、同じ量のＴＧＮ１４１２によって、活発なＩＦＮ−γ（約１００００ｐｇ／ｍｌ）が得られたことが報告された。本発明のアッセイでは、同じ量の固定化ＣＤ８０−Ｆｃでは、いずれのサイトカインも、有意には放出されなかった。これらの結果から、ＣＤ８０−Ｆｃは、サイトカインの放出作用の強さが、ＴＧＮ１４１２と比べて少なくとも１０００分の１であるので、ヒトにおいてサイトカインストームを誘導するリスクがＴＧＮ１４１２よりも有意に低いことが示唆されている。
実施例６：ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子が、シアル酸（ＳＡ）含有量の異なるＦｃドメインとともに、インビボでＣＴ２６腫瘍に及ぼす作用
インビボ調査をＣＴ２６腫瘍において行って、シアル酸（ＳＡ）含有量の異なる野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＣＤ８０ ＥＣＤの３つの異なるロットの作用を解析した。具体的には、ロットＥのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃは、２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含み、ロットＤは、１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含み、ロットＡは、５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む。
雌の７週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、１週間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６をマウスの右側腹部に、１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の１：１混合物に、１ミリリットル当たり５×１０６細胞で再懸濁した。
細胞の移植後、マウスの腫瘍の成長について、週に２回モニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。７日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に７つの治療群に割り当てた（ｎ＝１実験群当たり１０匹のマウス）。登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、９４ｍｍ３であった。第１の群の尾静脈に、２００μｌのＰＢＳ（コントロール）を静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。第２の群には、２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＥ）を０．３ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第３の群には、２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＥ）を０．６ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第４の群には、１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＤ）を０．３ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第５の群には、１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＤ）を０．６ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第６の群には、５モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＡ）を０．３ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第７の群には、５モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＡ）を０．６ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。１０日目、１４日目、１６日目、１８日目、２２日目、２４日目に、腫瘍を測定した。
２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＥ）０．３ｍｇ／ｋｇで処置したところ、腫瘍の成長が、コントロールと比べて、９３％阻害され、０．６ｍｇ／ｋｇで処置したところ、９８％阻害された（Ｐ＜０．００１）。１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ（ロットＤ）０．３ｍｇ／ｋｇで処置したところ、腫瘍の成長が、コントロールと比べて、９３％阻害され、０．６ｍｇ／ｋｇで処置したところ、９５％阻害された（Ｐ＜０．００１）。比較により、ロットＡのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇ（５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む）は、コントロールと比べて、腫瘍の成長を阻害せず、０．６ｍｇ／ｋｇで投与した時のみ、７０％の阻害を誘導した（Ｐ＜０．００１）（図６）。
３７日目に、腫瘍のないマウスの発生率を解析した。２０モル／モルのＳＡのＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ロットＥ）０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．６ｍｇ／ｋｇでの処置によって、８匹／１０匹（８０％）または１０匹／１０匹（１００％）のマウスで、腫瘍が完全に退縮した。１５モル／モルのＳＡのＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（ロットＤ）０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．６ｍｇ／ｋｇでの処置によって、９匹／１０匹（９０％）のマウスで、腫瘍が完全に退縮した。比較によって、ロットＡのＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ０．６ｍｇ／ｋｇによる処置は、下記の表に示されているように、１匹／１０匹（１０％）のマウスで、腫瘍退縮を誘導したに過ぎなかった。
実施例７：マウスＣＤ８０ ＥＣＤ−マウスＦｃ融合分子が、３つの異なる同系腫瘍モデルにおいて、腫瘍の成長に及ぼす作用
野生型マウスＩｇＧ２ａのＦｃドメインに連結した、マウスＣＤ８０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（マウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ）を含むマウスサロゲートを用いて、インビボ調査を行った。ＣＴ２６結腸癌モデル、ＭＣ３８結腸癌モデル及びＢ１６メラノーマモデルという３つの異なる同系腫瘍モデルにおいて、マウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃの作用を抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）の作用と比較した。
ＣＴ２６腫瘍モデル
雌の７週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、１週間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＣＴ２６をマウスの右側腹部に、１．０×１０６細胞／２００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とマトリゲルの１：１混合物に再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。７日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に７つの治療群に割り当てた（ｎ＝１実験群当たり１５匹のマウス）。登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、９６ｍｍ３であった。マウスには、４日目、７日目及び１１日目に３回投与した。第１の群には、マウスＩｇＧ２ｂ（ｍＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した（コントロール）。第２の群には、マウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ（２０モル／モルのＳＡ）を０．３ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第３の群には、抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）を１．５ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。第４の群には、抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。１０日目、１３日目、１７日目、１９日目、２１日目、２４日目に、腫瘍を測定した。
２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇで処置したところ、２１日目（すべてのコントロールはまだ調査中であった）に、腫瘍の成長が、コントロールと比べて、９０％阻害された（Ｐ＜０．００１）。抗ＣＴＬＡ４抗体１０ｍｇ／ｋｇで処置したところ、腫瘍の成長が、コントロールと比べて、７５％阻害された（Ｐ＜０．００１）。比較によって、抗ＣＴＬＡ４抗体１．５ｍｇ／ｋｇでの処置は、腫瘍の成長の５３％の阻害を誘導したに過ぎなかった（Ｐ＜０．００１）（図７）。２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇでの処置が腫瘍の成長に及ぼす影響は、２１日目において、１．５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）または１０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＝０．００９）で投与した抗ＣＴＬＡ４抗体よりも有意に大きかった。
３７日目に、腫瘍のないマウスの発生率を解析した。２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ０．３ｍｇ／ｋｇで処置したところ、７匹／１５匹（４７％）のマウスで、腫瘍が完全に退縮した。抗ＣＴＬＡ４抗体１０ｍｇ／ｋｇで処置したところ、３匹／１５匹（２０％）のマウスで、腫瘍が完全に退縮した。抗ＣＴＬＡ４抗体１．５ｍｇ／ｋｇで処置したマウスには、腫瘍が完全に退縮したマウスはいなかった。
ＭＣ３８腫瘍モデル
雌の７週齢Ｃ５７Ｂｌ／６マウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、１週間馴化してから、調査を開始した。マウス大腸癌細胞株ＭＣ３８をマウスの右側腹部に、０．５×１０６細胞／１００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＲＰＭＩ１６４０とマトリゲルの１：１混合物に再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて、各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。７日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に７つの治療群に割り当てた（ｎ＝１実験群当たり１５匹のマウス）。登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、７８ｍｍ３であった。マウスには、７日目、１０日目及び１４日目に、３回投与した。第１の群には、マウスＩｇＧ２ｂ（ｍＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した（コントロール）。第２の群には、２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃを３ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第３の群には、抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）を１．５ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。第４の群には、抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。１１日目、１４日目、１７日目及び１９日目に、腫瘍を測定した。
２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ３ｍｇ／ｋｇで処置したところ、１９日目（すべてのコントロールはまだ調査中であった）に、腫瘍の成長が、コントロールと比べて、７９％阻害された（Ｐ＜０．００１）。さらに、２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃの方が、抗ＣＴＬＡ４抗体と比べて、腫瘍の成長への影響が大きかった（Ｐ＜０．００１）。抗ＣＴＬＡ４抗体１０ｍｇ／ｋｇで処置したところ、コントロールと比べて、腫瘍の成長が２１％阻害された（Ｐ＝０．０５）が、１．５ｍｇ／ｋｇでは、腫瘍サイズへの有意な作用は見られなかった（図８）。２１日目には、２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ３ｍｇ／ｋｇによる処置が腫瘍の成長に及ぼす影響は、抗ＣＴＬＡ４抗体１．５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）または１０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＝０．００９）よりも有意に大きかった。
これらの実験では、３ｍｇ／ｋｇの用量のＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃを用いたが、０．３ｍｇ／ｋｇの用量のＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃも、ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて、腫瘍細胞の成長を低下させた（データは示されていない）。
Ｂ１６腫瘍モデル
雌の７週齢Ｃ５７Ｂｌ／６マウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州ホリスター）から購入し、１週間馴化してから、調査を開始した。マウスメラノーマ細胞株Ｂ１６−Ｆ１０をマウスの右側腹部に、０．５×１０６細胞／１００μｌ／マウスで皮下移植した。接種の前に、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＤＭＥＭ培地で、細胞を３継代未満で培養した。細胞を３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気で成長させた。８０〜８５％コンフルエントに達したら、細胞を回収し、無血清ＤＭＥＭとマトリゲルの１：１混合物に再懸濁した。
細胞の移植後、マウスを週に２回、腫瘍の成長についてモニタリングした。腫瘍の測定では、ノギスを用いて、各腫瘍の長さと幅を測定し、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２という式に従って、体積を計算した。７日目に、すべての腫瘍を測定し、マウスを無作為に７つの治療群に割り当てた（ｎ＝１実験群当たり１５匹のマウス）。登録されたすべてのマウスの平均腫瘍体積は、７０ｍｍ３であった。マウスには、３日目、６日目及び１０日目に、３回投与した。第１の群には、マウスＩｇＧ２ｂ（ｍＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した（コントロール）。第２の群には、２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃを３ｍｇ／ｋｇでｉ．ｖ．注射した。第３の群には、抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）を１．５ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。第４の群には、抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｄ９（ＩｇＧ２ｂ）を１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．注射した。１０日目、１３日目、１５日目、１６日目、１７日目に、腫瘍を測定した。
２０モル／モルのＳＡのマウスＣＤ８０ ＥＣＤ−Ｆｃ３ｍｇ／ｋｇで処置したところ、１３日目（すべてのコントロールはまだ調査中であった）に、腫瘍の成長が、コントロールと比べて、４１％阻害された（Ｐ＜０．００１）。抗ＣＴＬＡ４抗体１０ｍｇ／ｋｇまたは１．５ｍｇ／ｋｇで処置したところ、コントロールと比べて、腫瘍の成長への有意な作用は見られなかった（図９）。
配列の表
下記の表に、本明細書で参照した特定の配列のリストを示す。

Claims (92)

  1. ヒトＣＤ８０ 細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ポリペプチドと、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含むＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子であって、１０〜６０モルのＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を含むとともに、少なくとも１つのマウス同系または異種移植がんモデルにおいて、少なくとも２週間にわたって、腫瘍細胞の成長を少なくとも８０％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％阻害できる前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子。
  2. 少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項１に記載のＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子。
  3. １５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項１または２に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子。
  4. １５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項１または２に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子。
  5. ２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項１または２に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子。
  6. 前記Ｆｃドメインが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子。
  7. ２または３週間の期間にわたって、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも８０％、例えば少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％低下させることができる、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子。
  8. 前記マウスに、前記ＥＣＤ Ｆｃ融合分子が０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇ、１用量、２用量または３用量で投与されている、請求項７に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子。
  9. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を含むとともに、少なくとも１つの製薬学的に許容可能な担体をさらに含む組成物。
  10. 追加の治療剤をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
  11. 前記追加の治療剤が、少なくとも１つの免疫刺激剤である、請求項１０に記載の組成物。
  12. 前記少なくとも１つの免疫刺激剤が、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）インヒビターを含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが抗体である、請求項１２に記載の組成物。
  14. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが抗ＰＤ−１抗体である、請求項１３に記載の組成物。
  15. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１４に記載の組成物。
  16. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１４に記載の組成物。
  17. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択されている、請求項１４に記載の組成物。
  18. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１２に記載の組成物。
  19. 前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１８に記載の組成物。
  21. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択されている、請求項１８に記載の組成物。
  22. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターがＰＤ−１融合分子である、請求項１２に記載の組成物。
  23. 前記融合分子がＡＭＰ−２２４である、請求項２２に記載の組成物。
  24. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが、ポリペプチド、例えばＡＵＲ−０１２である、請求項１２に記載の組成物。
  25. 対象のがんの治療方法であって、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子または請求項９に記載の組成物を有効量、前記対象に投与することを含む前記方法。
  26. 前記がんが固形腫瘍である、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記がんが、大腸がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、頭頚部扁平上皮癌、卵巣がん、膵臓がん、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱がん及び子宮体がんから選択されている、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記がんが、手術、化学療法、放射線療法またはこれらを組み合わせたものから選択した療法後、再発性または進行性のものである、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子であり、（ａ）前記ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子が、少なくとも２週間の期間にわたって、同じアミノ酸配列であるが、１０モル未満のＳＡ／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を含むＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質よりも、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を大きく低下させ、及び／または（ｂ）前記ＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子が、少なくとも２週間の期間にわたって、抗ＣＴＬＡ４抗体よりも、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を大きく低下させる、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記融合分子が、少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記融合分子が、１５〜４０モル、１５〜３０モル、１５〜２５モルまたは２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項２９に記載の方法。
  32. ＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質が、対象のがんを治療する効力の増強方法であって、向上したレベルのＳＡを含む前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質を前記対象に投与することによって、前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合タンパク質におけるシアル酸（ＳＡ）のレベルを向上させることを含む前記方法。
  33. 前記ＳＡレベルを、５モル、１０モル、２０モル、３０モル、４０モルまたは５０モル／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質向上させる、請求項３２に記載の方法。
  34. ＳＡレベルの向上していない前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与したときと比較した場合の、マウス同系または異種移植モデルにおける全生存率の向上、無病生存率の向上または少なくとも１つの腫瘍の成長の低下度の向上として、効力の増強を測定する、請求項３２または３３に記載の方法。
  35. ＳＡレベルの向上していない前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与したときと比較した場合の、マウス同系もしくは異種移植モデル、例えばＣＴ２６マウスモデルにおける腫瘍の成長の低下度の向上、または動物もしくはヒト対象におけるクリアランス速度の低下として、前記効力の増強を測定する、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. （ａ）ＳＡレベルの向上していない前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与したときと比較した場合の、動物もしくはヒト対象における少なくとも１つの腫瘍の成長のさらなる低下、及び／または（ｂ）ＳＡレベルの向上していない前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与したときと比較した場合の、マウス同系もしくは異種移植モデルにおける腫瘍の成長のさらなる低下として、前記効力の増強を測定し、ＳＡレベルの向上した前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与すると、前記腫瘍の成長が、ＳＡレベルの向上していない前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与したときと比べて、少なくとも１０％、例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％さらに低下する、請求項３２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 対象のがんの治療方法であって、ＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）インヒビターとを組み合わせたものを有効量、前記対象に投与することを含む前記方法。
  38. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターとを組み合わせたものが、マウス同系または異種移植モデルにおいて、前記ＣＤ８０ ＥＣＤもしくはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子、または前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビター単独による治療と比べて、腫瘍の成長を相乗的または相加的に低下させる、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記マウスモデルが、マウス大腸癌ＣＴ２６細胞を含む大腸がんモデルである、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記がんが固形腫瘍である、請求項３７または３８に記載の方法。
  41. 前記がんが、大腸がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、頭頚部扁平上皮癌、卵巣がん、膵臓がん、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱がん及び子宮体がんから選択されている、請求項３７〜４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記がんが、手術、化学療法、放射線療法またはこれらを組み合わせたものから選択した療法後、再発性または進行性のものである、請求項３７〜４１のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記組み合わせたものが、ＩｇＧ Ｆｃドメイン、アルブミン及びＰＥＧから選択した融合パートナーを有するＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を含む、請求項３７〜４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記融合パートナーが、Ｆｃドメイン、例えば、配列番号９〜１６のうちの１つを含むＦｃドメインである、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、配列番号１の３５番目から最後までのアミノ酸、配列番号３、配列番号４及び配列番号５から選択したアミノ酸配列を含むか、または、配列番号２０もしくは配列番号２１の配列を含む、請求項３７〜４４のいずれか１項に記載の方法。
  46. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが抗ＰＤ−１抗体である、請求項３７〜４５のいずれか１項に記載の方法。
  47. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択した抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ニボルマブ、ピジリズマブ及びペムブロリズマブから選択されている、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３７〜４９のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択した抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記抗ＰＤ−１抗体が、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６及びＭＳＢ００１０７１８Ｃから選択されている、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターがＰＤ−１融合分子である、請求項３７〜４５のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記融合分子がＡＭＰ−２２４である、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが、ポリペプチド、例えばＡＵＲ−０１２である、請求項３７〜４５のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と、前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを同時または順次に投与する、請求項３７〜５６のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与する前に、１用量以上の前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを投与する、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記対象が、前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の投与前に、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療クールを完了した者である、請求項５８に記載の方法。
  60. ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療の２クール目の最中に、前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与する、請求項５８に記載の方法。
  61. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子の投与前に、前記対象に、少なくとも１用量、少なくとも２用量、少なくとも３用量または少なくとも４用量の前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターが投与された、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 少なくとも１用量の前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子と同時に投与する、請求項５８〜６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターを投与する前に、１用量以上の前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を投与する、請求項３７〜６２のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターの投与前に、前記対象に、少なくとも２用量、少なくとも３用量、少なくとも３用量または少なくとも４用量の前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が投与された、請求項６３に記載の方法。
  65. 少なくとも１用量の前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターと同時に投与する、請求項６３または６４に記載の方法。
  66. 前記対象が、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療に耐性のある者である、請求項３７〜６５のいずれか１項に記載の方法。
  67. 前記対象が、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１インヒビターによる治療を以前受けた者である、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記対象に、少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、少なくとも１つの化学療法剤、増殖阻害剤、血管新生阻害剤及び／または抗腫瘍組成物を投与する、請求項３７〜６７のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、１０〜６０モルのシアル酸（ＳＡ）／１モルのＣＤ８０ ＥＣＤタンパク質を含むＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子である、請求項３７〜６８のいずれか１項に記載の方法。
  70. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、少なくとも１５モルのＳＡ／１モルのタンパク質、例えば、少なくとも２０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、１５〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項６９に記載の方法。
  72. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、１５〜２５モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項６９に記載の方法。
  73. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、２０〜３０モルのＳＡ／１モルのタンパク質を含む、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、融合パートナーとしてＦｃドメインを含む、請求項６９〜７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 前記融合パートナーが、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、少なくとも１つのマウス同系または異種移植モデルにおいて、２または３週間の期間にわたって、腫瘍細胞の成長を少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％低下させることができる、請求項３７〜７５のいずれか１項に記載の方法。
  77. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、２または３週間の期間にわたって、マウスのＣＴ２６腫瘍細胞の成長を少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％低下させることができる、請求項７６に記載の方法。
  78. マウスに、前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇ、１用量、２用量または３用量投与された、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子が、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ Ｆｃ融合分子である、請求項３７〜７８のいずれか１項に記載の方法。
  80. ヒトＣＤ８０ ＥＣＤポリペプチドと、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓというアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインとを含むＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子。
  81. 配列番号５、配列番号１２及び配列番号２１から選択したアミノ酸配列を含む、請求項８０に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子。
  82. 前記Ｆｃドメインアミノ酸配列が、前記ＣＤ８０ ＥＣＤアミノ酸配列のＣ末端アミノ酸に直接結合している、請求項８０または８１に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子。
  83. 前記Ｆｃドメインアミノ酸配列が、リンカーペプチド、例えばＧＳリンカーを介して、前記ＣＤ８０ ＥＣＤアミノ酸配列のＣ末端アミノ酸に結合している、請求項８０または８１に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子。
  84. 請求項８０〜８３のいずれか１項に記載のＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子を含むとともに、少なくとも１つの製薬学的に許容可能な担体をさらに含む組成物。
  85. 追加の治療剤、例えば、少なくとも１つの免疫刺激剤をさらに含む、請求項８４に記載の組成物。
  86. 前記少なくとも１つの免疫刺激剤が、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）／プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）インヒビター、例えばＰＤ−１融合分子（すなわちＡＭＰ２２４）、例えばポリペプチド（すなわちＡＵＲ−０１２）、あるいは例えば抗体、例えば抗ＰＤ−１抗体（すなわち、ニボルマブ、ピジリズマブもしくはペムブロリズマブ）、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（すなわち、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６もしくはＭＳＢ００１０７１８Ｃ）である、請求項８５に記載の組成物。
  87. 対象のがんの治療方法であって、請求項８０〜８３のいずれか１項に記載のＣＤ８０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子または請求項８４〜８６のいずれか１項に記載の組成物を有効量、前記対象に投与することを含む前記方法。
  88. 前記がんが固形腫瘍である、請求項８７に記載の方法。
  89. 前記がんが、大腸がん、乳がん、胃がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、頭頚部扁平上皮癌、卵巣がん、膵臓がん、腎細胞癌、肝細胞癌、膀胱がん及び子宮体がんから選択されている、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記がんが、手術、化学療法、放射線療法またはこれらを組み合わせたものから選択した療法後、再発性または進行性のものである、請求項８７〜８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. 前記ＣＤ８０ ＥＣＤ融合分子または組成物を少なくとも１つの追加の治療剤、例えば請求項８６に記載の治療剤と組み合わせて投与する、請求項８７〜９０のいずれか１項に記載の方法。
  92. 前記追加の治療剤が、少なくとも１つの化学療法剤、増殖阻害剤、血管新生阻害剤及び／または抗腫瘍組成物を含む、請求項９１に記載の方法。
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WO (1) WO2017079117A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7488337B2 (ja) 2019-11-27 2024-05-21 ジーアイ・セル・インコーポレイテッド Ｉｌ－２タンパク質及びｃｄ８０タンパク質を含む融合タンパク質及びｎｋ細胞を含む抗癌治療用組成物

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016127074A1 (en) 2015-02-06 2016-08-11 Blueprint Medicines Corporation 2-(pyridin-3-yl)-pyrimidine derivatives as ret inhibitors
US11319359B2 (en) 2015-04-17 2022-05-03 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
IL302209B1 (en) 2015-11-02 2024-02-01 Blueprint Medicines Corp RET inhibitors
EP3371208A1 (en) 2015-11-02 2018-09-12 Five Prime Therapeutics, Inc. Cd80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
IL310729A (en) 2016-04-15 2024-04-01 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory proteins that are variants of CD80 and their uses
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
AU2018235835A1 (en) 2017-03-16 2019-09-05 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-L2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
AU2018235838B2 (en) 2017-03-16 2023-12-14 Alpine Immune Sciences, Inc. CD80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
MY200973A (en) 2017-04-11 2024-01-26 Inhibrx Inc Multispecific Polypeptide Constructs Having Constrained Cd3 Binding And Methods Of Using The Same
MX2019012849A (es) 2017-04-28 2019-11-28 Five Prime Therapeutics Inc Metodos de tratamiento con polipeptidos del dominio extracelular del cd80.
CN111094352A (zh) 2017-08-25 2020-05-01 戊瑞治疗有限公司 B7-h4抗体及其使用方法
WO2019073080A1 (en) * 2017-10-13 2019-04-18 Ose Immunotherapeutics ANTI-SIRPA MODIFIED ANTIBODIES AND USES THEREOF
CA3091801A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
SI3773589T1 (sl) 2018-04-03 2024-03-29 Blueprint Medicines Corporation Inhibitor RET za uporabo pri zdravljenju raka, ki ima RET spremembo
MX2021002208A (es) * 2018-08-29 2021-05-14 Five Prime Therapeutics Inc Regimenes de dosificacion de la proteina de fusion de fc y dominio extracelular del cd80.
SG11202005873QA (en) * 2018-09-17 2020-07-29 Gi Innovation Inc Fusion protein comprising il-2 protein and cd80 protein, and use thereof
CN111423512B (zh) * 2019-01-10 2024-01-05 北京比洋生物技术有限公司 阻断血管内皮细胞生长且活化t细胞的多靶向融合蛋白和包含其的药物组合物
SG11202107966TA (en) 2019-02-22 2021-09-29 Five Prime Therapeutics Inc Cd80 extracellular domain-fc fusion proteins for treating pd-l1 negative tumors
WO2020214928A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Five Prime Therapeutics, Inc. Bioassay for t-cell co-stimulatory proteins containing fc domains
US11788072B2 (en) * 2019-04-30 2023-10-17 Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. Activation of APC in immunotherapy
MX2021013272A (es) 2019-05-03 2021-11-17 Five Prime Therapeutics Inc Formulaciones farmaceuticas que contienen proteinas de fusion fc de dominio extracelular de cd80.
CA3157592A1 (en) * 2019-11-20 2021-05-27 Myoung Ho Jang Composition for culturing natural killer cells and method for preparing natural killer cells by using same
MX2022006000A (es) * 2019-11-20 2022-06-17 Gi Cell Inc Composicion de cultivo de linfocitos t reguladores y su uso.
IL292934A (en) * 2019-11-20 2022-07-01 Gi Cell Inc Composition of medium for t-cell culture and method for culture of t-cells using the same composition of medium
CN110732021B (zh) * 2019-11-21 2020-08-25 北京启辰生生物科技有限公司 用于解除肿瘤免疫抑制的组合物及其应用
CN110743006B (zh) * 2019-11-22 2020-08-25 北京启辰生生物科技有限公司 用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物及应用
WO2021173903A1 (en) * 2020-02-26 2021-09-02 Five Prime Therapeutics, Inc. Cd80 extracellular domain fc fusion protein therapy
BR112022023753A2 (pt) 2020-06-03 2022-12-20 Boehringer Ingelheim Int Rhabdovírus recombinante que codifica para uma proteína de fusão fc de domínio extracelular cd80
KR102373965B1 (ko) * 2020-06-05 2022-03-15 (주)지아이이노베이션 Ｉｌ-２ 단백질 및 ｃｄ８０ 단백질을 포함하는 융합단백질을 포함하는 방사선 치료 증진용 약학적 조성물
WO2022226170A1 (en) * 2021-04-22 2022-10-27 Cornell University The immunomodulatory ligand b7-1 mediates synaptic remodeling by p75ntr

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011514150A (ja) * 2008-02-08 2011-05-06 メディミューン，エルエルシー 低下したＦｃリガンド親和性を有する抗ＩＦＮＡＲ１抗体

Family Cites Families (102)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6641809B1 (en) 1990-03-26 2003-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Method of regulating cellular processes mediated by B7 and CD28
US7070776B1 (en) 1990-03-26 2006-07-04 Bristol-Myers Squibb Company Methods for blocking binding of CD28 receptor to B7
US6071716A (en) 1990-10-01 2000-06-06 Dana-Farber Cancer Institute DNA encoding, B7, a new member of the IG superfamily with unique expression on activated and neoplastic B cells
US6887471B1 (en) 1991-06-27 2005-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Method to inhibit T cell interactions with soluble B7
US6824779B1 (en) 1993-07-26 2004-11-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for inhibiting the interaction of B7-2 with its natural ligand
US6130316A (en) 1993-07-26 2000-10-10 Dana Farber Cancer Institute Fusion proteins of novel CTLA4/CD28 ligands and uses therefore
US5858776A (en) 1993-11-03 1999-01-12 Repligen Corporation Tumor cells with increased immunogenicity and uses therefor
US6218510B1 (en) 1994-03-02 2001-04-17 Brigham & Woman's Hospital B7-1 and B7-2 polypeptides
AU709711B2 (en) 1994-03-08 1999-09-02 Dana-Farber Cancer Institute Methods for modulating T cell unresponsiveness
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US20020147326A1 (en) 1996-06-14 2002-10-10 Smithkline Beecham Corporation Hexameric fusion proteins and uses therefor
US6491925B2 (en) 1996-08-15 2002-12-10 Emory University Compositions and methods for cancer prophylaxis and/or treatment
CA2292415A1 (en) 1997-06-20 1998-12-30 Innogenetics N.V. B7-binding molecules for treating immune diseases
AU6366999A (en) 1998-10-30 2000-05-22 Takeda Chemical Industries Ltd. Betacellulin protein-containing preparations
US7011833B1 (en) 1999-05-06 2006-03-14 Genetics Institute, Inc. Enhancing immune responses with B7-1 or B7-2 in the absence of a crosslinking agent
BR0013581A (pt) 1999-08-23 2002-07-02 Dana Faber Cancer Inst Inc Pd-1, um receptor para b7-4, e usos para isto
US6429303B1 (en) 1999-09-03 2002-08-06 Curagen Corporation Nucleic acids encoding members of the human B lymphocyte activation antigen B7 family and methods of using the same
US7064111B1 (en) 1999-10-05 2006-06-20 Georgetown University Use of soluble costimulatory factor for tumor immuno-gene therapy
US7183376B2 (en) 2000-06-23 2007-02-27 Maxygen, Inc. Variant B7 co-stimulatory molecules
AU2002311787A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Zycos Inc. Translational profiling
EP1497426A2 (en) 2001-06-22 2005-01-19 Maxygen, Inc. Co-stimulatory molecules
AU2002346373A1 (en) 2001-11-09 2003-05-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Anti-cd80 antibody having adcc activity for adcc mediated killing of b cell lymphoma cells alone or in combination with other therapies
ATE514713T1 (de) 2002-12-23 2011-07-15 Wyeth Llc Antikörper gegen pd-1 und ihre verwendung
MXPA05007019A (es) 2002-12-30 2005-08-18 Amgen Inc Terapia de combinacion con factores co-estimuladores.
NZ543614A (en) 2003-05-22 2009-09-25 Abbott Lab Indazole, benzisoxazole, and benzisothiazole kinase inhibitors
EP1670499A4 (en) 2003-08-04 2009-07-22 Bristol Myers Squibb Co METHODS OF TREATING A CARDIOVASCULAR DISEASE USING A SOLUBLE CTLA4 MOLECULE
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
EP2366717A3 (en) 2004-10-29 2011-12-14 University of Southern California Combination Cancer Immunotherapy with Co-Stimulatory Molecules
WO2006105021A2 (en) 2005-03-25 2006-10-05 Tolerrx, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
DK2439273T3 (da) 2005-05-09 2019-06-03 Ono Pharmaceutical Co Humane monoklonale antistoffer til programmeret død-1(pd-1) og fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af anti-pd-1- antistoffer alene eller i kombination med andre immunterapeutika
US8034953B2 (en) 2005-05-10 2011-10-11 Incyte Corporation Modulators of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of using the same
US7678890B2 (en) * 2005-07-22 2010-03-16 Five Prime Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating disease with FGFR fusion proteins
ES2540561T3 (es) 2005-12-20 2015-07-10 Incyte Corporation N-hidroxiamidinoheterociclos como moduladores de indolamina 2,3-dioxigenasa
AU2007241023B2 (en) 2006-03-30 2013-11-28 University Of California Methods and compositions for localized secretion of anti-CTLA-4 antibodies
JP5319532B2 (ja) 2006-09-19 2013-10-16 インサイト・コーポレイション インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼのモジュレーターとしてのｎ−ヒドロキシアミジノヘテロサイクル
CL2007002650A1 (es) 2006-09-19 2008-02-08 Incyte Corp Compuestos derivados de heterociclo n-hidroxiamino; composicion farmaceutica, util para tratar cancer, infecciones virales y desordenes neurodegenerativos entre otras.
WO2008037080A1 (en) 2006-09-29 2008-04-03 Universite De Montreal Methods and compositions for immune response modulation and uses thereof
CA2682266A1 (en) 2007-03-28 2008-10-09 Biogen Idec Inc. Treatment of hodgkins lymphoma
CA2682027A1 (en) 2007-03-28 2008-10-02 Biogen Idec Inc. Modulation of tumor microenvironment
ES2663323T3 (es) 2007-03-30 2018-04-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Expresión constitutiva de ligandos coestimuladores en linfocitos T transferidos de manera adoptiva
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
ES2616355T3 (es) 2007-06-18 2017-06-12 Merck Sharp & Dohme B.V. Anticuerpos para el receptor humano de muerte programada PD-1
AU2008275589B2 (en) 2007-07-12 2013-11-21 Gitr, Inc. Combination therapies employing GITR binding molecules
CN101358225B (zh) * 2007-07-30 2012-02-01 厦门大学 高唾液酸含量的免疫球蛋白抗体的制备方法与应用
EP2044949A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Immutep Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response
CN103172750B (zh) * 2007-11-01 2014-12-10 安斯泰来制药有限公司 免疫抑制性多肽与核酸
US10047066B2 (en) 2007-11-30 2018-08-14 Newlink Genetics Corporation IDO inhibitors
WO2009089149A1 (en) 2008-01-03 2009-07-16 The Johns Hopkins University B7-h1 (cd274) antagonists induce apoptosis of tumor cells
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
PL2350129T3 (pl) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc Kompozycje antagonistów PD-1 i sposoby stosowania
EA201170375A1 (ru) 2008-08-25 2012-03-30 Эмплиммьюн, Инк. Антагонисты pd-1 и способы их применения
AU2010289677B2 (en) 2009-09-03 2014-07-31 Merck Sharp & Dohme Llc Anti-GITR antibodies
CA2778115C (en) 2009-10-28 2016-04-05 Newlink Genetics Corporation Imidazole derivatives as ido inhibitors
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
PE20170779A1 (es) 2010-03-04 2017-07-04 Macrogenics Inc Anticuerpos reactivos con b7-h3, fragmentos inmunologicamente activos de los mismos y usos de los mismos
NZ729044A (en) 2010-09-09 2020-07-31 Pfizer 4-1bb binding molecules
HUE041335T2 (hu) 2011-03-29 2019-05-28 Roche Glycart Ag Antitest FC-variánsok
NO2694640T3 (ja) 2011-04-15 2018-03-17
RU2625034C2 (ru) 2011-04-20 2017-07-11 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела и другие молекулы, которые связывают в7-н1 и pd-1
SI2726101T1 (sl) 2011-06-30 2018-12-31 Genzyme Corporation Inhibitorji aktivacije T-celic
AU2012288413B2 (en) 2011-07-24 2016-10-13 Curetech Ltd. Variants of humanized immunomodulatory monoclonal antibodies
KR20190133790A (ko) 2011-08-01 2019-12-03 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 mek 억제제를 사용하는 암 치료 방법
US8956619B2 (en) 2011-10-25 2015-02-17 University Of Maryland, Baltimore County Soluble CD80 as a therapeutic to reverse immune supression in cancer patients
WO2013116686A1 (en) 2012-02-02 2013-08-08 Massachusetts Institute Of Technology Methods and products related to targeted cancer therapy
EP3520809A1 (en) 2012-02-03 2019-08-07 Emory University Immunostimulatory compositions.
SG10201700698WA (en) 2012-05-15 2017-02-27 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
ES2862950T3 (es) * 2012-12-18 2021-10-08 Univ Rockefeller Anticuerpos anti-CD4 modificados con glicanos para la prevención y terapia del VIH
US9308236B2 (en) 2013-03-15 2016-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic inhibitors of the PD-1/PD-L1 and CD80(B7-1)/PD-L1 protein/protein interactions
WO2014144621A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Pyranose Biotherapeutics, Inc. Modified fc fusion proteins
KR102158924B1 (ko) 2013-03-15 2020-09-22 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
CN105143257B (zh) 2013-03-15 2020-10-27 艾伯维生物医疗股份有限公司 Fc变体
TW201605896A (zh) 2013-08-30 2016-02-16 安美基股份有限公司 Gitr抗原結合蛋白
US10259875B2 (en) 2013-10-01 2019-04-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for treating cancer in patients with elevated levels of BIM
US20170044268A1 (en) 2013-12-23 2017-02-16 OncoMed Pharmaceuticals Immunotherapy with Binding Agents
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
CN106604933B (zh) 2014-07-11 2021-08-10 文塔纳医疗***公司 抗pd-l1抗体及其诊断用途
CN106687135A (zh) 2014-09-15 2017-05-17 豪夫迈·罗氏有限公司 使用pd‑1轴结合拮抗剂和il‑17结合拮抗剂治疗癌症的方法
IL254335B2 (en) 2015-03-16 2023-04-01 Yissum Res Dev Co Of Hebrew Univ Jerusalem Ltd Isolated peptides derived from the dimerization regions of b7
US10478494B2 (en) 2015-04-03 2019-11-19 Astex Therapeutics Ltd FGFR/PD-1 combination therapy for the treatment of cancer
US11319359B2 (en) 2015-04-17 2022-05-03 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
CN107690479B (zh) 2015-04-30 2022-02-18 皮斯奥克斯治疗公司 编码b7蛋白质的溶瘤腺病毒
GEP20227438B (en) 2015-07-30 2022-11-10 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
CN106397592A (zh) 2015-07-31 2017-02-15 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对程序性死亡配体(pd-l1)的单域抗体及其衍生蛋白
WO2017042814A1 (en) 2015-09-10 2017-03-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Use of perforin positive immature dendritic cells in disease treatment
CA2997217A1 (en) 2015-09-14 2017-03-23 Alpine Immune Sciences, Inc. Tunable variant immunoglobulin superfamily domains and engineered cell therapy
EP3371208A1 (en) 2015-11-02 2018-09-12 Five Prime Therapeutics, Inc. Cd80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
MX2018007249A (es) 2015-12-17 2019-05-16 Psioxus Therapeutics Ltd Adenovirus del grupo b que codifica un anticuerpo contra el complejo tcr o fragmento de este.
CN108699153B (zh) 2016-02-25 2022-09-23 细胞医学瑞士公司 Pd-l1的结合成员
CN109311945A (zh) 2016-03-02 2019-02-05 Cue生物制药公司 T细胞调节性多聚体多肽及其使用方法
PL3423087T3 (pl) 2016-03-04 2024-05-20 Io Biotech Aps Skojarzona terapia przeciwnowotworowa
IL310729A (en) 2016-04-15 2024-04-01 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory proteins that are variants of CD80 and their uses
BR112018070934A2 (pt) 2016-04-15 2019-02-26 Alpine Immune Sciences, Inc. proteínas imunomoduladoras variantes ligantes de icos e usos das mesmas
KR20190019068A (ko) 2016-05-18 2019-02-26 큐 바이오파마, 인크. T-세포 조절 다량체 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법
CA3024509A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Modernatx, Inc. Mrna combination therapy for the treatment of cancer
EP3519442A4 (en) 2016-09-27 2020-06-17 EpicentRx, Inc. IMMUNOMODULATORY FUSION PROTEINS
EP3529361B1 (en) 2016-10-20 2021-03-24 Alpine Immune Sciences, Inc. Secretable variant immunomodulatory proteins and engineered cell therapy
MX2019012849A (es) 2017-04-28 2019-11-28 Five Prime Therapeutics Inc Metodos de tratamiento con polipeptidos del dominio extracelular del cd80.
MX2021002208A (es) 2018-08-29 2021-05-14 Five Prime Therapeutics Inc Regimenes de dosificacion de la proteina de fusion de fc y dominio extracelular del cd80.
SG11202107966TA (en) 2019-02-22 2021-09-29 Five Prime Therapeutics Inc Cd80 extracellular domain-fc fusion proteins for treating pd-l1 negative tumors
MX2021013272A (es) 2019-05-03 2021-11-17 Five Prime Therapeutics Inc Formulaciones farmaceuticas que contienen proteinas de fusion fc de dominio extracelular de cd80.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011514150A (ja) * 2008-02-08 2011-05-06 メディミューン，エルエルシー 低下したＦｃリガンド親和性を有する抗ＩＦＮＡＲ１抗体

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA. SECTION D, BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY, vol. 64, JPN6020042412, 2008, pages 700 - 704, ISSN: 0004382124 *
CANCER IMMUNOLOGY RESEARCH, vol. 2, no. 7, JPN6020042410, 2014, pages 1 - 6, ISSN: 0004382122 *
CANCER IMMUNOLOGY, IMMUNOTHERAPY, vol. 64, no. 10, JPN6020042411, October 2015 (2015-10-01), pages 1 - 13, ISSN: 0004382123 *
THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 191, no. 5, JPN6020042409, 2013, pages 2829 - 2836, ISSN: 0004382121 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7488337B2 (ja) 2019-11-27 2024-05-21 ジーアイ・セル・インコーポレイテッド Ｉｌ－２タンパク質及びｃｄ８０タンパク質を含む融合タンパク質及びｎｋ細胞を含む抗癌治療用組成物

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