JP2018090576A - 美白剤、美白剤の製造方法及び化粧料 - Google Patents

Abstract

【課題】美白作用及び安全性に優れた美白剤の提供。【解決手段】ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）から抽出したカンゾウ抽出物と、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から抽出し、前記カンゾウ抽出物と協働して美白作用を奏するカンゾウフラボノイドとを含有する美白剤。カンゾウ抽出物は、含有量が全量基準で０．００１２〜０．００４５％であり、カンゾウフラボノイドは、含有量が全量基準で０．０００１２５〜０．０００５％である。【選択図】図６

Description

本発明は美白剤、美白剤の製造方法及び化粧料に関する。詳しくは、美白作用及び安全性に優れた美白剤、美白剤の製造方法及び化粧料に係るものである。

従来、化粧料の原料として、様々な美白剤が添加されている。美白剤による作用としては、皮膚への色素沈着の原因となるメラニンの産生抑制、または、産生したメラニンを淡色漂白等が報告されている。

メラニンの産生は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）の活性化により生じるものであり、色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きにより、アミノ酸の一種であるチロシンから中間体を経て、メラニンが形成されると言われている。

美白作用を有する原料成分として、各種植物抽出物が用いられ、例えば、アスコルビン酸、コウジ酸、エリカ抽出物、桑葉抽出物等が知られている。

また、これ以外にも、カンゾウ属植物（甘草属：Glycyrrhiza）の根からの抽出物にもメラニンの産生に働くチロシナーゼの発現抑制作用が報告され、例えば、特許文献１に記載のチロシナーゼ発現抑制剤が提案されている。特許文献１では、タケノコとカンゾウ根からの抽出物が開示されている。

特開２００４−３５２６９７号公報

しかしながら、特許文献１に開示されたチロシナーゼ発現抑制剤をはじめ、従来の美白剤では、美白作用が見られる濃度での細胞毒性や肌への刺激性に関する言及はほとんどなされておらず、安全性の担保が不充分であると言える。

また、特許文献１のチロシナーゼ発現抑制剤における、タケノコ抽出物とカンゾウ根抽出物の併用のような、全く種類の異なる植物原料由来の抽出物を併用した美白剤は存在するが、同一の属に属する植物、例えば、カンゾウ属植物から種々の方法で抽出した２種類以上の抽出物を併用した美白剤についての報告はほとんどなされていない。この点は、美白作用の向上や、肌への刺激性を改善する上で考慮しうるものである。

本発明者らは、種が異なる２種類のカンゾウ属植物、より詳細には、ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）及びスペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から抽出した抽出物を組み合わせることで、相乗的な美白作用を奏し、かつ、細胞毒性や肌への刺激性を抑えた美白剤を製造しうることを見出した。

本発明は、以上の点に鑑みて創案されたものであり、美白作用及び安全性に優れた美白剤、美白剤の製造方法及び化粧料を提供することを目的とする。

上記の目的を達成するために、本発明の美白剤は、甘草から抽出したカンゾウ抽出物と、該カンゾウ抽出物の抽出由来とは種が異なる甘草から抽出したカンゾウフラボノイドとを含有する。

ここで、甘草から抽出したカンゾウ抽出物によって、カンゾウ抽出物に含まれる成分由来の美白作用を得ることができる。

また、カンゾウ抽出物の抽出由来とは種が異なる甘草から抽出したカンゾウフラボノイドによって、カンゾウ抽出物とは別の種の甘草に由来するカンゾウフラボノイドの美白作用を得ることができる。

また、カンゾウ抽出物が、ウラルカンゾウの根から、水及びエタノールの混液で抽出され、カンゾウフラボノイドが、スペインカンゾウの根及び根茎から無水エタノールで抽出された場合には、ウラルカンゾウの根からは水溶性成分及び油溶性成分が抽出され、スペインカンゾウの根及び根茎からは油溶性成分が抽出されるものとなる。

また、カンゾウ抽出物が０．５ｍｇ／ｍＬ以上のリキリチンを含有する場合には、美白剤に保湿作用を付与することができる。

また、カンゾウ抽出物は、含有量が全量基準で０．００１２〜０．００４５％であり、カンゾウフラボノイドは、含有量が全量基準で０．０００１２５〜０．０００５％である場合には、より一層優れた、相乗的な美白作用を得ることができる。また、より一層、肌への刺激性が低い美白剤とすることができる。

また、上記の目的を達成するために、本発明の美白剤は、ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）から抽出したカンゾウ抽出物と、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から抽出し、前記カンゾウ抽出物と協働して美白作用を奏するカンゾウフラボノイドとを含有する。

ここで、カンゾウ抽出物が、ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）から抽出され、カンゾウフラボノイドが、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から抽出されたことによって、２種類の抽出物が単独で生じる美白作用よりも優れた相乗的な美白作用を得ることができる。また、肌への刺激性が低い美白剤とすることができる。

また、カンゾウ抽出物が、含有量が全量基準で０．００４５％であり、カンゾウフラボノイドは、含有量が全量基準で０．０００５％である場合には、２種類の抽出物から生じる美白作用の相乗効果が充分に得られるものとなる。即ち、単品の抽出物が有する美白作用に比して、２種類の抽出物を混合した混合物が有する美白作用において、その作用を大幅に向上させることができる。また、２種類の抽出物を混合した混合物を、タンパク質量の低減効果が少ない（肌への刺激性が低い）ものとすることができる。

また、上記の目的を達成するために、本発明の美白剤の製造方法は、第１の植物体である甘草からカンゾウ抽出物を、第１の植物体とは種が異なる第２の植物体である甘草からカンゾウフラボノイドを抽出する工程を備える。

ここで、第１の植物体である甘草からカンゾウ抽出物を抽出することによって、カンゾウ抽出物に含まれる美白作用を奏する成分を得ることができる。

また、第１の植物体とは種が異なる第２の植物体である甘草からカンゾウフラボノイドを抽出することによって、カンゾウ抽出物とは別の種の甘草に由来するカンゾウフラボノイドを得ることができる。

また、第１の植物体がウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）である場合には、ウラルカンゾウに含まれる美白作用を奏する成分を得ることができる。

また、第２の植物体がスペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）である場合には、スペインカンゾウに由来するカンゾウフラボノイドを得ることができる。

また、上記の目的を達成するために、本発明の美白剤の製造方法は、ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）からカンゾウ抽出物を、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から前記カンゾウ抽出物と協働して美白作用を奏するカンゾウフラボノイドを抽出する工程を備える。

ここで、ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）からカンゾウ抽出物を抽出し、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）からカンゾウ抽出物と協働して美白作用を奏するカンゾウフラボノイドを抽出することによって、２種類の抽出物が単独で生じる美白作用よりも優れた相乗的な美白作用を有する抽出物の混合物を得ることができる。また、タンパク質量の低減効果が少ない（肌への刺激性が低い）混合物を得ることができる。

また、上記の目的を達成するために、本発明の化粧料は、含有量が全量基準で０．０５％である甘草から抽出したカンゾウ抽出物と、含有量が全量基準で０．００００１％である該カンゾウ抽出物の抽出由来とは種が異なる甘草から抽出したカンゾウフラボノイドと、アルブチンと、トラネキサム酸と、湿潤剤と、キレート剤と、増粘剤と、油剤と、シリコーンと、界面活性剤と、安定化剤と、ｐＨ調整剤と、防腐剤とを含有する。

ここで、甘草から抽出したカンゾウ抽出物によって、カンゾウ抽出物に含まれる成分由来の美白作用を得ることができる。

また、カンゾウ抽出物の抽出由来とは種が異なる甘草から抽出したカンゾウフラボノイドによって、カンゾウ抽出物とは別の種の甘草に由来するカンゾウフラボノイドの美白作用を得ることができる。

また、甘草から抽出したカンゾウ抽出物と、カンゾウ抽出物の抽出由来とは種が異なる甘草から抽出したカンゾウフラボノイドによって、２種類の抽出物が単独で生じる美白作用よりも優れた相乗的な美白作用を得ることができる。また、肌への刺激性が低い美白剤とすることができる。

また、アルブチンによって、化粧料に美白作用を付与することができる。

また、トラネキサム酸によって、化粧料に抗炎症作用を付与することができる。

本発明に係る美白剤及び化粧料は、美白作用及び安全性に優れたものとなっている。
また、本発明に係る美白剤の製造方法は、美白作用及び安全性に優れた美白剤を提供可能な方法となっている。

比較例１〜４及び１０の１ウェルあたりのＢ１６細胞のタンパク質量の結果を示すグラフである。 比較例１及び比較例４〜７及び１１の１ウェルあたりのＢ１６細胞のタンパク質量の結果を示すグラフである。 比較例１〜４のタンパク質量あたりのメラニン量の結果を示すグラフである。 比較例１及び比較例４〜７のタンパク質量あたりのメラニン量の結果を示すグラフである。 実施例１〜３、比較例１及び比較例８の１ウェルあたりのＢ１６細胞のタンパク質量の結果を示すグラフである。 実施例１〜３、比較例１及び比較例８のタンパク質量あたりのメラニン量の結果を示すグラフである。

以下、本発明を適用した美白剤の抽出工程を示すものとする。なお、以下で示した抽出工程はあくまで一例であり、カンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドが抽出可能な範囲で、適宜、設定変更可能なものであることはいうまでもない。

（１）カンゾウ抽出物の抽出
カンゾウ抽出物は、以下の工程により抽出を行った。抽出対象物として、ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）の根を準備し、これを細かく刻んだものを使用した。抽出液として、１級エタノール（純度９９．９％）と水を混合して、７０％エタノールを調製した。この抽出溶媒（７０％エタノール）にカンゾウを投入して、５日〜１０日かけて浸漬抽出を行った。

浸漬抽出後の混合物をろ過フィルター（孔径約２μｍ）でろ過を行い、ろ液量に対して１％の質量濃度の濾過助剤を添加した。これを室温にて、回転数１５０ｒｐｍで３０分撹拌して、更に、ろ過フィルター（孔径約１μｍ）でろ過を行い、ろ液を得た。ろ液は、３日間以上、冷蔵保管してろ液中の不溶物を沈殿させた。

冷蔵保管後のろ液は、メンブレンフィルター（孔径０．２μｍ）でろ過し、更に、限外ろ過を行った。この時点のろ液についてリキリチン含量の分析を行い、約０．５ｍｇ／ｍＬのリキリチンが含まれていることを確認した。ろ液は更に、メンブレンフィルター（孔径０．２μｍ）でろ過し、カンゾウ抽出物とした。

（２）カンゾウフラボノイドの抽出
カンゾウフラボノイドは、以下の工程により抽出を行った。抽出対象物として、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）の根及び根茎の部分を準備し、これを細かく刻んだものを使用した。抽出液として、１級エタノール（純度９９．９％）を秤量し抽出溶媒とした。この抽出溶媒にカンゾウを投入して、室温にて、一昼夜撹拌しながら抽出を行った。撹拌後の抽出物をろ過布にて粗ろ過して、抽出残渣を取り除き、ろ液に対して、ろ過フィルター（孔径約１μｍ）でろ過を行った。ろ過後のろ液を、減圧濃縮を行い、析出した結晶状の不溶物を除くため、一定量濃縮が進んだ所で上澄みを別のナス型フラスコに移した。濃縮後のナス型フラスコの残渣に目的物の結晶状残渣が含まれているため、回収用のエタノールでナス型フラスコを洗いこみ、エタノールで回収した上澄みを、１回目の濃縮後の上澄みと合わせて、再度、減圧濃縮を行った。濃縮残渣は回収用エタノールで洗いこみ、減圧濃縮を行った。濃縮物を乾燥させる為、減圧濃縮物をナス型フラスコに入れたまま乾燥器に入れ、一昼夜乾燥を行った。

乾燥後の濃縮物に酢酸エチルを入れ、一昼夜撹拌しながら酢酸エチルにより抽出を行った。抽出液に対して、ろ過フィルター（孔径約０．５μｍ）でろ過を行い、ろ液を別のナス型フラスコに移し減圧濃縮を行った。減圧濃縮物を乾燥器に入れ、一晩乾燥を行った。乾燥後の濃縮物を乳鉢に移し、乳棒ですり潰して粉末体とした。粉末体をふるいにかけ、均一な粉末体とした。この粉末体をカンゾウフラボノイドとした。

本発明の美白剤の一例は、上述した工程で得られたカンゾウ抽出物と、カンゾウフラボノイドを含むものである。これらの２成分を美白剤として化粧料に添加することで、相乗的な美白作用を得ることができる。また、これらの２成分を含む美白剤は、肌への刺激性が低いものとなっている。

以下、本発明を適用した美白剤を特徴成分として含む化粧料の組成の一例を示す。なお、本発明を適用した美白剤は、化粧料の原料として用いることができる。

ここで示す化粧料は、全量基準で重量比率が、濃グリセリン：５．０％、１，３−ブチレングリコール：３．０％、１，２−ペンタンジオール：２．０％、ジエチレントリアミン五酢酸：０．２％、ジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム液：０．０５％、カルボキシビニルポリマー：適量、トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル：２．５％、メチルポリシロキサン：２．５％、モノミリスチン酸デカグリセリル：０．９％、親油型モノステアリン酸グリセリル：０．８％、サラシミツロウ：０．８％、ベヘニルアルコール：０．８％、天然ビタミンＥ：０．０５％、植物性スクワラン：１．８％、スクワラン：０．４５％、水酸化ナトリウム：適量、ピロ亜硫酸ナトリウム：０．００８％、フェノキシエタノール：０．３％、グリセリンモノ２−エチルヘキシルエーテル：０．０５％、カンゾウ抽出物（ウラルカンゾウ由来）：０．０５％、カンゾウフラボノイド（スペインカンゾウ由来）：０．００００１％、アルブチン：適量、トラネキサム酸：適量、精製水：残量、を含む組成を有している。上記組成では、ジェル状の化粧料が得られるものとなる。

濃グリセリン、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール及びグリセリンモノ２−エチルヘキシルエーテルは湿潤剤・保湿剤である。

ジエチレントリアミン五酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム液はキレート剤である。

カルボキシビニルポリマーは増粘剤であり、化粧料に適度な粘性を付与するものとなる。

トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、サラシミツロウ、ベヘニルアルコール、植物性スクワラン及びスクワランは保湿効果を有し、エモリエント剤として用いられる成分である。

メチルポリシロキサンは、消泡作用を持つシリコーンの１種であり、化粧料の感触改良剤となる。

モノミリスチン酸デカグリセリル、親油型モノステアリン酸グリセリルは界面活性剤である。

天然ビタミンＥ及びピロ亜硫酸ナトリウムは安定化剤であり、酸化防止剤として機能するものである。

水酸化ナトリウムはｐＨ調整剤である。また、フェノキシエタノールは防腐剤である。

アルブチン及びトラネキサム酸は、美白作用を付与する特徴成分の１つである。また、トラネキサム酸は、抗炎症作用も付与するものである。

精製水は、化粧料の基剤であり、上述した各種成分を含めて、化粧料の全量を１００％に調整する。なお、上述した原料以外にも、植物エキスや香料等の添加剤を加え、精製水の配合量で調整することも可能である。

ここで、本化粧料では、各配合原料が上述したものに限定されるものではなく、化粧料に付与したい機能や、化粧料の種類によって各成分を適宜変更することができる。以下にその一例を詳述する。

本化粧料では、アルブチン以外にも美白の特徴成分として、例えば、エラグ酸、カミツレエキス、コウジ酸、トラネキサム酸、ビタミンＣ誘導体、プラセンタエキス、ルシノール、リノール酸、ｔ−シクロアミノ酸、４−メトキシサリチル酸カリウム塩等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、トラネキサム酸以外にも美白の特徴成分または抗炎症作用を付与する成分として、例えば、アラントイン、グリチルリチン酸ジカリウム等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、濃グリセリン、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール及びグリセリンモノ２−エチルヘキシルエーテル以外にも湿潤剤・保湿剤として、例えば、ジグリセリン、ソルビトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール６００、ジプロピレングリコール、イソプレングリコール等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、ジエチレントリアミン五酢酸及びジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム液以外にもキレート剤として、例えば、エチドロン酸、エチレンジアミン四酢酸又はその塩、Ｌ−アスパラギン酸二酢酸、ニトリロ三酢酸又はその塩、Ｌ−グルタミン酸二酢酸等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、カルボキシビニルポリマー以外にも増粘剤として、例えば、（アクリレーツ／アクリル酸アルキル（Ｃ１０−３０））クロスポリマー、（アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリンＮａ）コポリマー、（アクリロイルジメチルタウリンアンモニウム／ＶＰ）コポリマー、アクリレーツコポリマーＮａ、アクリレーツ／メタクリル酸ベヘネス−２５）コポリマー、天然高分子（増粘剤）のカラギーナン、寒天、ローカストビーンガム、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム、ジェランガム、タマリンドガム等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、植物性スクワラン及びスクワラン以外にもエモリエント剤として、例えば、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、イソノナン酸イソノニル、パルミチン酸エチルヘキシル、水添ポリイソブテン、トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル、パルミチン酸セチル等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、サラシミツロウ以外にもエモリエント剤として、例えば、カルナウバワックス、キャンデリラワックス、マイクロクリスタリンワックス、パラフィンワックス、微結晶性ワックス、モンタンワックス、オゾケライト等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、ベヘニルアルコール以外にもエモリエント剤として、例えば、高級アルコールであるステアリルアルコール、セタノール、セトステアリルアルコール、セテアリルアルコール、ミリスチルアルコール等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、メチルポリシロキサン以外にもシリコーンとして、例えば、シクロペンタシロキサン、トリシロキサン、ジメチコノール、フェニルトリメチコン、ジメチコン等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、モノミリスチン酸デカグリセリル及び親油型モノステアリン酸グリセリル以外にも界面活性剤として、例えば、レシチン、レシチン誘導体として、レシチン、水添レシチンを、プロピレングリコール脂肪酸エステルとして、ステアリン酸ＰＧ（ＳＥ）、ステアリン酸ＰＧを、グリセリン脂肪酸エステルとして、ミリスチン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸ソルビタン、オレイン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、イソステアリン酸グリセリルを、ポリグリセリン脂肪酸エステルとして、ステアリン酸ポリグリセリル−２、オレイン酸ポリグリセリル−２、イソステアリン酸ポリグリセリル−２、ステアリン酸ポリグリセリル−４、オレイン酸ポリグリセリル−４、ラウリン酸ポリグリセリル−６、ミリスチン酸ポリグリセリル−６、ミリスチン酸ポリグリセリル−６、ステアリン酸ポリグリセリル−６、オレイン酸ポリグリセリル−６、ラウリン酸ポリグリセリル−１０、ミリスチン酸ポリグリセリル−１０、イソステアリン酸ポリグリセリル−１０、オレイン酸ポリグリセリル−１０、リノール酸ポリグリセリル−１０、ジステアリン酸ポリグリセリル−１０、ジイソステアリン酸ポリグリセリル−１０、トリステアリン酸ポリグリセリル−１０、トリオレイン酸ポリグリセリル−１０を、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステルとして、ステアリン酸ＰＥＧ−５グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ−１５グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ−５グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ−１５グリセリル、鶏イソステアリン酸ＰＥＧ−２０グリセリルを、ソルビタン脂肪酸エステルとして、ヤシ脂肪酸ソルビタン、パルミチン酸ソルビタン、ステアリン酸ソルビタン、セスキステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタン、セスキイソステアリン酸ソルビタン、オレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタンを、ポリオキシエチレンソルビタン酸脂肪酸エステルとして、ＰＥＧ−２０ソルビタンココエート、ポリソルベート４０、ステアリン酸ＰＥＧ−６ソルビタン、ポリソルベート６５、イソステアリン酸ＰＥＧ−２０ソルビタン、ポリソルベート８０、オレイン酸ＰＥＧ−６ソルビタン、ポリソルベート８５を、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステルとして、ラウリン酸ソルベス−６、テトラステアリン酸ソルベス−６０、テトラオレイン酸ソルベス−６、テトラオレイン酸ソルベス−３０、テトラオレイン酸ソルベス−４０、テトラオレイン酸ソルベス−６０、テトライソステアリン酸ソルベス−３０ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油：ＰＥＧ−５水添ヒマシ油、ＰＥＧ−１０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−２０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−３０水添ヒマシ油、ポリオキシエチレンステロール・水素添加ステロール、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸・リン酸塩、ポリエチレングリコール脂肪酸エステルを、それぞれ採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、天然ビタミンＥ及びピロ亜硫酸ナトリウム以外にも安定化剤として、例えば、ｄｌ−α-トコフェロール、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エリソルビン酸ナトリウム、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、システアミンＨＣｌ、システイン等を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、水酸化ナトリウム以外にもｐＨ調整剤として、例えば、無機酸（塩酸、及び硫酸等）、有機酸（乳酸、乳酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、コハク酸、及びコハク酸ナトリウム等、無機塩基（水酸化カリウム、及び水酸化ナトリウム等）、有機塩基（トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、及びトリイソプロパノールアミン等）を採用、または、追加で配合することも可能である。

本化粧料では、フェノキシエタノール以外にも防腐剤として、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、イソプロピルメチルフェノール、デヒドロ酢酸、デヒドロ酢酸ナトリウム等を採用、または、追加で配合することも可能である。

また、本化粧料では、カンゾウ抽出物を０．０５％、カンゾウフラボノイドを０．００００１％配合しているが、カンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドの濃度はこれに限定されるものではなく、化粧料の種類や美白作用の効果に併せて適宜設定することができる。

また、本発明を適用した美白剤を含有する化粧料はジェル状の化粧料に限定されるものではなく、洗顔料、化粧水、美容液、クリーム、乳液、クレンジング、パック等、種類が異なる化粧料に配合することも可能である。

以上のとおり、本発明を適用した美白剤及び化粧料は、美白作用及び安全性に優れたものとなっている。
また、本発明を適用した美白剤の製造方法は、美白作用及び安全性に優れた美白剤を提供可能な方法となっている。

以下、本発明の実施例を説明する。

まず、複数のカンゾウ属植物の中から、組み合わせる２つの種の選定を行った。以下の実験では、７種類のカンゾウ属植物で種の異なるものについて、それぞれより、カンゾウ抽出物とカンゾウフラボノイドを抽出して、その混合物についてチロシナーゼ活性阻害の試験を行い、メラニン合成抑制効果を評価した。

（１）実験で使用したカンゾウ属植物の種類
試料１：ウラルカンゾウ（G. uralensis）
試料２：スペインカンゾウ（G. glabra）
試料３：イヌカンゾウ（G. pallidiflora）
試料４：新疆カンゾウ（G. inflata）
試料５：アメリカカンゾウ（G. lepidota）
試料６：和名なし（G. bucharica）
試料７：和名なし（G. macedonica）

（２）実験で使用したカンゾウ抽出物のサンプル調整
試料１〜７と70w/w%エタノールを混合して浸漬を行い、０．４５μｍフィルターでろ過を行った。更に、浸漬時に蒸発成分が最も少なかったG. bucharicaにあわせて、ろ過後の各試料を70w/w%エタノールで以下の表１に示す希釈倍率で希釈した。各試料の希釈液は、チロシナーゼ活性阻害の試験を行う際に、最終濃度が表４に記載の濃度（０．１％）となるように、70w/w%エタノールを添加して濃度調整を行った。

（３）実験で使用したカンゾウフラボノイドのサンプル調整
試料１〜７と１級エタノール（純度９９．９％）を混合して浸漬を行い、０．４５μｍフィルターでろ過を行った。ろ過後の試料を６０℃で２日間乾燥させた。更に、乾燥後の濃縮物に２０ｍｌの酢酸エチルを入れて溶解させ、０．４５μｍフィルターでろ過を行い、５０℃で２日間乾燥させた。この乾燥物（カンゾウフラボノイド）に、表２に示す割合で、１級エタノール（純度９９．９％）を添加して、全量基準でカンゾウフラボノイド１％溶液となるように溶液を調整した。各試料のカンゾウフラボノイド１％溶液は、チロシナーゼ活性阻害の試験を行う際に、最終濃度が表４に記載の濃度（０．００２５％）となるように、１級エタノール（純度９９．９％）を添加して濃度調整を行った。

（４）チロシナーゼ阻害活性の試験
メラニン合成酵素であるチロシナーゼが、メラニン合成の基質であるL-DOPAからメラニン生合成の中間体であるドーパクロムを産生する反応において、反応系に以下（５）及び表４に示す内容で各試料を組み合わせて添加して、ドーパクロムの産生を阻害する阻害率を測定した。
試験の内容は以下のとおりである。なお、表４は、各試料の組み合わせを示すと共に試験結果である阻害率も併せて示している。

１．上述した（２）及び（３）の内容で、それぞれの種のカンゾウ属植物のカンゾウ抽出液、カンゾウフラボノイドを調整した。また、凍結保存しているチロシナーゼ（試験時に４０Ｕ／ｍＬとなるように希釈）及びL-DOPAは、試験開始直前に調整を行った。チロシナーゼは試験に供する濃度の５０倍の濃度で保存している為、緩衝液で５０倍希釈して室温で保管した。また、L-DOPA（１２．５ｍＭ）は必要量を３７℃で予備加熱した。
２．９６穴のプレートに下記の表３に記載の手順通りに、サンプル（試料）、水（溶媒）、Phosphate(pH6.8)（緩衝液）、チロシナーゼ（酵素）を添加して、Ａ（コントロール）、Ｂ（コントロールブランク）、Ｃ（サンプル）及びＤ（サンプルブランク）を調整した。
３．Ａ〜Ｄとなるように調整後、充分にプレート用ボルテックスで９６穴プレートを撹拌した。なお、ここでいうＣ（サンプル）とは、上記（２）及び（３）で述べた内容で調整した試料１〜７から抽出したカンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドの単一成分又は混合物である。
４．３７℃で１０分間インキュベートした。
５．L-DOPAを５０μＬずつ、Ａ〜Ｄの全てにアプライした。
６．吸光度計にて、Abs475nmで、L-DOPAをアプライして５分後の吸光度を確認する。なお、Abs475nmは、メラニン生合成の中間体であるドーパクロムの吸収極大波長である。
７．以下の式を用いて、Ａ〜Ｄから各試料の阻害率を計算した。
阻害率＝（１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ））×１００
なお、Ａ〜Ｄは、それぞれ、計測開始５分後の吸光度の値から、計測開始直後（０分）の吸光度の値を引いて算出している。例えば、Ａの値であれば、Ａ（Abs５分−Abs０分）の値を採用している。

（５）カンゾウ属植物の組み合わせ
以下に示す内容については、カンゾウ抽出物は最終濃度０．１％、カンゾウフラボノイドは最終濃度０．００２５％となっている。
比較例１００：ウラルカンゾウ抽出物のみ
比較例１０１：スペインカンゾウ抽出物のみ
比較例１０２：イヌカンゾウ抽出物のみ
比較例１０３：新疆カンゾウ抽出物のみ
比較例１０４：アメリカカンゾウ抽出物のみ
比較例１０５：G. bucharicaカンゾウ抽出物のみ
比較例１０６：G. macedonicaカンゾウ抽出物のみ
比較例１１０：ウラルカンゾウフラボノイドのみ
比較例１１１：スペインカンゾウフラボノイドのみ
比較例１１２：イヌカンゾウフラボノイドのみ
比較例１１３：新疆カンゾウフラボノイドのみ
比較例１１４：アメリカカンゾウフラボノイドのみ
比較例１１５：G. bucharicaカンゾウフラボノイドのみ
比較例１１６：G. macedonicaカンゾウフラボノイドのみ
比較例１２０：ウラルカンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
実施例４ ：ウラルカンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１２１：ウラルカンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１２２：ウラルカンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１２３：ウラルカンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１２４：ウラルカンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１２５：ウラルカンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド
比較例１３０：スペインカンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
比較例１３１：スペインカンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１３２：スペインカンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１３３：スペインカンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１３４：スペインカンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１３５：スペインカンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１３６：スペインカンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド
比較例１４０：イヌカンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
比較例１４１：イヌカンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１４２：イヌカンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１４３：イヌカンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１４４：イヌカンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１４５：イヌカンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１４６：イヌカンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド
比較例１５０：新疆カンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
比較例１５１：新疆カンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１５２：新疆カンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１５３：新疆カンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１５４：新疆カンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１５５：新疆カンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１５６：新疆カンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド
比較例１６０：アメリカカンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
比較例１６１：アメリカカンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１６２：アメリカカンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１６３：アメリカカンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１６４：アメリカカンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１６５：アメリカカンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１６６：アメリカカンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド
比較例１７０：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
比較例１７１：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１７２：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１７３：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１７４：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１７５：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１７６：G. bucharicaカンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド
比較例１８０：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋ウラルカンゾウフラボノイド
比較例１８１：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋スペインカンゾウフラボノイド
比較例１８２：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋イヌカンゾウフラボノイド
比較例１８３：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋新疆カンゾウフラボノイド
比較例１８４：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋アメリカカンゾウフラボノイド
比較例１８５：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋G. bucharicaカンゾウフラボノイド
比較例１８６：G. macedonicaカンゾウ抽出物＋G. macedonicaカンゾウフラボノイド

上記（５）及び表４に示す結果から、７種類の種のカンゾウ属植物から抽出したカンゾウ抽出物、カンゾウフラボノイドについて、実施例４に示すウラルカンゾウ抽出物と、スペインカンゾウフラボノイドの抽出物の組み合わせにおける阻害率が最も高く、優れたチロシナーゼ阻害活性を有していることを示した。より詳細には、実施例４の阻害率は、単独のウラルカンゾウ抽出物、及び単独のスペインカンゾウフラボノイドが示す阻害率よりも優れた値を示した。また、実施例４、比較例１２０及び比較例１３１の結果から、同じ種類のカンゾウ属植物から得られたカンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドの混合物よりも、実施例４の阻害率が優れている結果となった。更に、ウラルカンゾウ及びスペインカンゾウ以外のカンゾウ属植物種との比較を行ったが、実施例４と、その他の比較例の結果から、ウラルカンゾウ由来のカンゾウ抽出物とスペインカンゾウ由来のカンゾウフラボノイドの組み合わせが最も優れた組み合わせであることを示す結果となった。
以下、更に、ウラルカンゾウ由来のカンゾウ抽出物と、スペインカンゾウ由来のカンゾウフラボノイドに焦点を当てて、美白作用と刺激性に関する評価を行った。

（６）試料の成分
表５〜表７に示す成分を含む試料を調製した。表５〜表７に記載の数値は、溶液中の質量パーセント濃度（ｗｔ％）である。実施例１〜３及び比較例１〜７、１０及び１１はいずれも１％ＤＭＳＯを溶媒として調製している。実施例及び比較例に含まれるカンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドは、上述の「発明を実施する為の形態」で記載した抽出工程で得られたものを使用している。実施例１〜３はカンゾウ抽出物とカンゾウフラボノイドを溶液中に含む試料である。比較例１は、１％ＤＭＳＯのみの試料である。また、比較例４及び比較例８は、タンパク質量の低減効果が少なく（刺激性が少ない）、細胞のメラニン合成抑制効果（チロシナーゼの活性阻害）を示すポジティブコントロールであり、比較例４がコウジ酸、比較例８がアルブチンである。

（７）カンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドの単一成分の評価
作成した比較例１〜７、１０及び１１に関して、刺激性について以下の評価を行った。また、比較例１〜７に関して、刺激性と美白作用について以下の評価を行った。
２４ウェルプレートにＢ１６細胞（マウスＢ１６メラノーマ細胞。メラニン産生細胞）を播種後、比較例の各試料を含む培地を添加して、その培養２日後にタンパク質量とメラニン量を測定した。培養後の細胞を１０％ＤＭＳＯ含有１Ｎ ＮａＯＨにて溶解して、４９０ｎｍにおける吸光度を測定してメラニン量を求めた。また、細胞溶解液のタンパク質含量をＢｒａｄｆｏｒｄ法にて測定した。測定したメラニン量及びタンパク質量から、タンパク質量あたりのメラニン量を算出した。タンパク質量と、タンパク質量あたりのメラニン量は、比較例１（１％ＤＭＳＯ）をコントロールとして、比較例１の値を１００％とした時の比率で表すものとした。タンパク質量の比率が低いものは、タンパク質の分解等を生じているため、刺激性が強いと判断するものとした。また、タンパク質量あたりのメラニン量の比率が低いものは、メラニンの産生抑制能が高いと判断するものとした。

タンパク質量の結果を図１及び図２に示す。各図の縦軸は１ウェルあたりのＢ１６細胞のタンパク質量（％）（比較例１の値を１００％とした際の比率）である。図１は、比較例１〜４及び１０の結果、図２は、比較例１、４〜７及び１１の結果を示している。

カンゾウ抽出物のみの試料である比較例２、３及びカンゾウフラボノイドのみの試料である比較例５〜７は、タンパク質量が８０％以上であり、刺激性は低いものであった。比較例１０及び比較例１１では、タンパク質量が６０％以下の値となる低い値となった。この結果により、カンゾウ抽出物や、カンゾウフラボノイドは単一成分で濃度が高くなると、刺激性が強くなることが確認された。そのため、刺激性を低く抑える観点から、カンゾウ抽出物は０．００４５％以下、カンゾウフラボノイドは０．０００５％以下に設定されることが好ましいことが確認された。

タンパク質量あたりのメラニン量の結果を図３及び図４に示す。各図の縦軸はタンパク質量あたりのメラニン量（％）（比較例１の値を１００％とした際の比率）である。図３は、比較例１〜４の結果、図４は、比較例１及び比較例４〜７の結果を示している。

カンゾウ抽出物のみの試料である比較例２は７７．３％、比較例３は６５．０％の数値であり、比較例４（ポジティブコントロールであるコウジ酸）の顕著なメラニン産生抑制能（４４．８％）に比して、メラニン産生抑制能は低い結果となった。また、カンゾウフラボノイドのみの試料である比較例５〜７は、いずれも８０％以上の数値を示し、メラニン産生抑制能は比較例２、３よりも更に低い結果となった。

（８）カンゾウ抽出物及びカンゾウフラボノイドの混合成分の評価
作成した実施例１〜３及び比較例１、８に関して、刺激性と美白作用について以下の評価を行った。また、表７〜９及び図には記載しないが、カンゾウ抽出物０．００４５％より高濃度側、カンゾウフラボノイド０．０００５％より高濃度側の試料について、その混合物の美白作用の相乗効果について、評価を行った。
培養シャーレ（または２４穴プレート）にＢ１６細胞を播種後、翌日、実施例１〜３及び比較例１、８の各試料を含む培地を添加して、その培養３日後に細胞をトリプシン処理により回収して、メラニン量とタンパク質量を測定した。培養後の細胞を１０％ＤＭＳＯ含有１Ｎ ＮａＯＨにて溶解して、４９０ｎｍにおける吸光度を測定してメラニン量を求めた。また、細胞溶解液のタンパク質含量をＢｒａｄｆｏｒｄ法にて測定した。測定したメラニン量及びタンパク質量から、タンパク質量あたりのメラニン量を算出した。タンパク質量と、タンパク質量あたりのメラニン量は、比較例１（１％ＤＭＳＯ）をコントロールとして、比較例１の値を１００％とした時の比率で表すものとした。

タンパク質量の結果を図５に示す。図５の縦軸はシャーレあたりのＢ１６細胞のタンパク質量（％）（比較例１の値を１００％とした際の比率）である。

実施例１では９７．８％、実施例２では８９．５％の数値であり、刺激性が低いものであった。また、実施例３は７９．０％の数値であり、実施例１、２よりも数値が低いものの、８０％程度の数値であり刺激性は低い結果となった。

タンパク質量あたりのメラニン量の結果を図６に示す。図６の縦軸はタンパク質量あたりのメラニン量（％）（比較例１の値を１００％とした際の比率）である。

実施例１では５１．８％、実施例２では４６．５％の数値であり、同濃度におけるカンゾウ抽出物またはカンゾウフラボノイドよりも高いメラニン産生抑制能を示した。更に、実施例３は、３７．２％の数値であり、ポジティブコントロールである比較例８（アルブチン）よりも優れたメラニン産生抑制能を示した。実施例３では、単一成分でのメラニン産生抑制能の値と比較した場合、カンゾウ抽出液（０．００４５％：比較例３）の値「６５．０％」、カンゾウフラボノイド（０．０００５％：比較例７）の値「８３．２％」から算出される平均値「７４．１％」との差が「３６．９（７４．１−３７．２）」と大きな値となった。この点から、単一成分が発揮する美白作用よりも、各成分が実施例３の割合を有する混合物が優れた相乗効果を発揮することが明らかとなった。

また、メラニン産生抑制能における相乗効果について、各成分における実施例３の割合よりも高濃度な値に設定した試料について評価を行った。実施例３における値（カンゾウ抽出液：０．００４５％、カンゾウフラボノイド：０．０００５％）よりも各成分が高濃度になった試料においては、単一成分が示す美白作用からの相乗効果と見られるメラニン産生抑制能の伸び方が不充分なものであった。特に、カンゾウ抽出液０．０１８％及びカンゾウフラボノイド０．００１％のサンプル、カンゾウ抽出液０．０１８％及びカンゾウフラボノイド０．００２％のサンプルでは、単一成分が示す美白作用に対して、混合物で顕著な美白作用の向上が確認されなかった。

Claims (5)

1. ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）から抽出したカンゾウ抽出物と、
   スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から抽出し、前記カンゾウ抽出物と協働して美白作用を奏するカンゾウフラボノイドとを含有する
   美白剤。
2. 前記カンゾウ抽出物は、含有量が全量基準で０．００４５％であり、
   前記カンゾウフラボノイドは、含有量が全量基準で０．０００５％である
   請求項１に記載の美白剤。
3. 前記カンゾウ抽出物は０．５ｍｇ／ｍＬ以上のリキリチンを含有する
   請求項１または請求項２に記載の美白剤。
4. ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher）からカンゾウ抽出物を、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra Linne）から前記カンゾウ抽出物と協働して美白作用を奏するカンゾウフラボノイドを抽出する工程を備える
   美白剤の製造方法。
5. 請求項１〜請求項３に記載の美白剤を含有する化粧料。