JP2017529096A - 抗デング熱ワクチン及び抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
−2つのエンベロープまたはsE単量体間での少なくとも1つの、任意に2、3、4、5、6、7、8、9つ、または10もしくはそれ以上のジスルフィド鎖間結合によって共有結合的に安定化され得る、かつ/または、
−2つのsE単量体間での少なくとも1つの、任意に2、3、4、5、6、7、8、9つ、または10もしくはそれ以上のスルフヒドリル反応性架橋剤によって共有結合的に安定化され得る、かつ/または、
−改変糖類を介して2つのエンベロープまたはsE単量体を結合することによって共有結合的に安定化され得る、及び/または、
−二量体界面でまたは各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、少なくとも1つのエンベロープまたはsE単量体のアミノ酸配列中の少なくとも1つのアミノ酸残基を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって、非共有結合的に安定化され得る。
−一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、突然変異したアミノ酸残基が、X官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、
−もう一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、突然変異したアミノ酸残基が、Y官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、
両方の突然変異した残基が、具体的にはクリック化学によって、第1のsE単量体の糖のX官能基をもう一方のsE単量体の糖のY官能基と反応させることによって、改変糖類を介して一緒に結合している。
DENV1:E49、K64、Q77、W101、V122、N134、N153、T155、I161、A162、P169、T200、K202、E203、L308、K310、Q323、W391、F392、
DENV2:Q77、W101、N153、T155、K310である。
B7抗体は、残基N67、T68、T69、T70、E71、S72、R73、L82、V97、D98、R99、W101、G102、N103、G104、I113、G152、N153、D154、T155、G156、K246、K247、Q248、D249でDENV2 EDEに接触すると見なされており、
A11抗体は、残基N67、T68、T69、T70、E71、S72、R73、C74、E84、V97、D98、R99、G102、N103、G104、C105、V114、N153、D154、T155、G156、H158、K246、K247、Q248、D249、V250でDENV2 EDEに接触すると見なされており、
C10抗体は、残基R2、H27、G28、E44、L45、I46、K47、N67、T68、T69、T70、E71、S72、R73、C74、Q77、S81、L82、N83、E84、V97、R99、W101、G102、N103、G104、C105、G106、L113、T115、K246、K247、Q248、Q271、V309、K310、R323、Q325、D362でDENV2 EDEに接触すると見なされており、
C10抗体は、残基R2、H27、G28、G29、E44、L45、T46、N67、T69、T70、A71、T72、R73、C74、Q77、V97、R99、W101、G102、N103、G104、C105、G106、V113、R247、Q248、D249、D271、M278、D309、K310、V324、K323、K325、T361、N362でDENV4 EDEに接触すると見なされており、
C8抗体は、残基N67、T68、T69、T70、E71、S72、R73、C74、Q77、N83、E84、V97、D98、R99、W101、G102、N103、G104、C105、G106、L113、E148、H158、K246、K247、Q248、D249、I308、K310、E311、R323、D362、G374でDENV2 EDEに接触すると見なされている。
A71、C105、C74、D154、D249、D271、D309、D362、D98、E148、E311、E44、E71、E84、G102、G104G106、G152、G156、G28、G29、G374、H158、H27、I113、I308、I46、K246、K247、K310、K323、K325K47、L113、L45、L82、M278、N103、N153、N362、N67、N83、Q248、Q271、Q325、Q77、R2、R247、R323、R73、R99、S72、S81、T115、T155、T361、T46、T68、T69、T70、T72、V113、V114、V250、V309、V324、V97、W101であるか、
またはデング熱ウイルスエンベロープタンパク質の同等残基である。
デング熱ウイルスエンベロープタンパク質のE49、K64、Q77、W101、V122、N134、N153、T155、I161、A162、P169、T200、K202、E203、L308、K310、Q323、W391、F392、A71、C105、C74、D154、D249、D271、D309、D362、D98、E148、E311、E44、E71、E84、G102、G104G106、G152、G156、G28、G29、G374、H158、H27、I113、I308、I46、K246、K247、K323、K325K47、L113、L45、L82、M278、N103、N362、N67、N83、Q248、Q271、Q325、R2、R247、R323、R73、R99、S72、S81、T115、T361、T46、T68、T69、T70、T72、V113、V114、V250、V309V324、V97、またはその同等残基の、一連の残基の両方から選択される1つ以上の残基を示し得るか、またはこれらのうちの少なくとも1つ以上、例えば、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10、またはそのすべてを示し得る。
配列番号1 − T52、E54、D56、S57、A58、K65、G66、T69、E82、N84、S85、Y100、N102、F103、Y104、Y105、Y106、
配列番号2 − G554、N55、N57、K59、Q62、Q65、G66、R94、R98、F99、Y100、Y101、D102、S103、T104、Y106、Y107、P108、D109、S110、D117、V118、
配列番号3 − V2、S28、N31、D54、S56、T57、R58、K65、G66、R94、R98、F99、Y100、Y101、D102、S103、T104、Y106、Y107、P108、D109、S110、D117、V118、
配列番号4 − V2、T28、S31、D54、S56、S57、T58、G66、F68、M69、R94、R98、Y99、Y100、Y101、D102、S103、T104、Y106、Y107、P108、D109、N110、D117、V118、
配列番号37 − S30、T31、F32、Y49、D50、S52、R54、R66、R91、Y92、N93、W94、
配列番号38 − S26、S27、G30、G31、F32、N33、Y34、D52、T54、S55、R56、S62、S95、R96、G97、
配列番号39 − Y51、R56、P57、S58、G59、S96、R97、
配列番号40 − Y51、R56、P57、S58、K97である。
配列番号5もしくは配列番号8もしくは配列番号11もしくは配列番号14
及び/または
配列番号6もしく配列番号9もしく配列番号12もしく配列番号15
及び/または
配列番号7もしくは配列番号10もしくは配列番号13もしくは配列番号16
及び/または
配列番号17もしくは配列番号20もしくは配列番号23もしくは配列番号26
及び/または
配列番号18もしくは配列番号21もしくは配列番号24もしくは配列番号27
及び/または
配列番号19もしくは配列番号22もしくは配列番号25もしくは配列番号28。
重鎖:
配列番号5及び配列番号6及び配列番号7
または
配列番号8及び配列番号9及び配列番号10
または
配列番号11及び配列番号12及び配列番号13
または
配列番号14及び配列番号15及び配列番号16
ならびに/あるいは
軽鎖:
配列番号17及び配列番号18及び配列番号19
または
配列番号20及び配列番号21及び配列番号22
または
配列番号23及び配列番号24及び配列番号25
または
配列番号26及び配列番号27及び配列番号28。
重鎖配列番号5及び配列番号6及び配列番号7と軽鎖配列番号17及び配列番号18及び配列番号19
または
重鎖配列番号8及び配列番号9及び配列番号10と軽鎖配列番号20及び配列番号21及び配列番号22
または
重鎖配列番号11及び配列番号12及び配列番号13と軽鎖配列番号23及び配列番号24及び配列番号25
または
重鎖配列番号14及び配列番号15及び配列番号16と軽鎖配列番号26及び配列番号27及び配列番号28
または
重鎖配列番号11、12、及び13と、任意に軽鎖配列番号25、任意にアミノ酸配列の配列番号23及び24
または
重鎖配列番号14、15、及び16と、任意に軽鎖配列番号28、任意にアミノ酸配列の配列番号26及び27
または
重鎖配列番号3と、任意に軽鎖配列番号25、好ましくは配列番号140の軽鎖可変領域
または
配列番号4の重鎖可変領域と、任意に軽鎖配列番号28、好ましくは配列番号141の軽鎖可変領域。
配列番号6の残基3がTであり、残基5がEであり、残基7がDであり、残基8がSであり、残基9がAであり、残基16がKであり、残基17がGであり、
配列番号7の残基2がYであり、残基4がNであり、残基5がFであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がYであり、
配列番号9の残基5がGであり、残基6がNであり、残基10がKであり、残基13がQであり、残基16がQであり、残基17がDであり、
配列番号10の残基5がDであり、残基6がYであり、残基8がDであり、残基10がWであり、残基11がFであり、残基12がPであり、残基14がLであり、
配列番号11の残基1がNであり、
配列番号12の残基5がDであり、残基7がSであり、残基8がTであり、残基9がRであり、残基16がKであり、残基17がGであり、
配列番号13の残基4がRであり、残基5がFであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がDであり、残基9がSであり、残基10がTであり、残基12がYであり、残基13がYであり、残基14がPであり、残基15がDであり、残基16がSであり、
配列番号14の残基1がSであり、
配列番号15の残基5がDであり、残基7がSであり、残基8がSであり、残基9がTであり、残基17がGまたはHであり、
配列番号16の残基4がRであり、残基5がYであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がDであり、残基9がSであり、残基10がTであり、残基12がYであり、残基13がYであり、残基14がPであり、残基15がDであり、残基16がNであり、
配列番号17の残基7がSであり、残基8がTであり、残基9がFであり、
配列番号18の残基1がDであり、残基3がSであり、残基5がRであり、
配列番号19の残基3がRであり、残基4がYであり、残基5がNであり、
配列番号20の残基4がSであり、残基5がSであり、残基8がGであり、残基9がGであり、残基10がFであり、残基11がNであり、残基12がYであり、
配列番号21の残基1がDであり、残基3がTであり、残基4がSであり、残基5がRであり、
配列番号22の残基5がSであり、残基6がRであり、残基7がGであり、
配列番号24の残基5がRであり、残基6がPであり、残基7がSであり、
配列番号25の残基6がSであり、残基7がRであり、
配列番号27の残基5がRであり、残基6がPであり、残基7がSである。
a)モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の混合物、
b)ポリクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の混合物、または
c)モノクローナル及びポリクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の混合物、例えば、モノクローナル抗体対ポリクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の比率は、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4、1:6、1:8、または1:10である、抗体またはその抗原結合部分の混合物を含む組成物である。
a)ヒト細胞株、任意にCHO細胞、または
b)哺乳動物、任意にヒト、または
c)微生物、または
d)昆虫細胞株、を含む、様々な生物から産生及び単離または精製され得ることも理解されよう。
配列番号1、または配列番号1に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号2、または配列番号2に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号3、または配列番号3に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号4、または配列番号4に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号37、または配列番号37に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号38、または配列番号38に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号39、または配列番号39に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号40、または配列番号40に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がT52、E54、D56、S57、A58、K65、G66、T69、E82、N84、S85、Y100、N102、F103、Y104、Y105、Y106である、配列番号1に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がG554、N55、N57、K59、Q62、Q65、G66、R94、R98、F99、Y100、Y101、D102、S103、T104、Y106、Y107、P108、D109、S110、D117、V118である、配列番号2に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がV2、S28、N31、D54、S56、T57、R58、K65、G66、R94、R98、F99、Y100、Y101、D102、S103、T104、Y106、Y107、P108、D109、S110、D117、V118である、配列番号3に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がV2、T28、S31、D54、S56、S57、T58、G66、F68、M69、R94、R98、Y99、Y100、Y101、D102、S103、T104、Y106、Y107、P108、D109、N110、D117、V118である、配列番号4に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がS30、T31、F32、Y49、D50、S52、R54、R66、R91、Y92、N93、W94である、配列番号37に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がS26、S27、G30、G31、F32、N33、Y34、D52、T54、S55、R56、S62、S95、R96、G97である、配列番号38に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がY51、R56、P57、S58、G59、S96、R97である、配列番号39に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
残基がY51、R56、P57、S58、K97である、配列番号40に対して少なくとも90%の相同性を有する配列、
配列番号5、または配列番号5と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号6、または任意に、残基3がTであり、残基5がEであり、残基7がDであり、残基8がSであり、残基9がAであり、残基16がKであり、残基17がGである、配列番号6と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号7、または任意に、残基2がYであり、残基4がNであり、残基5がFであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がYである、配列番号7と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号8、または配列番号8と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号9、または任意に、残基5がGであり、残基6がNであり、残基10がKであり、残基13がQであり、残基16がQであり、残基17がDである、配列番号9と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号10、または任意に、残基5がDであり、残基6がYであり、残基8がDであり、残基10がWであり、残基11がFであり、残基12がPであり、残基14がLである、配列番号10と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号11、または任意に、残基1がNである、配列番号11と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号12、または任意に、残基5がDであり、残基7がSであり、残基8がTであり、残基9がRであり、残基16がKであり、残基17がGである、配列番号12と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号13、または任意に、残基4がRであり、残基5がFであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がDであり、残基9がSであり、残基10がTであり、残基12がYであり、残基13がYであり、残基14がPであり、残基15がDであり、残基16がSである、配列番号13と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号14、または任意に、残基1がSである、配列番号14と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号15、または任意に、残基5がDであり、残基7がSであり、残基8がSであり、残基9がTであり、残基17がGまたはHである、配列番号15と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号16、または任意に、残基4がRであり、残基5がYであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がDであり、残基9がSであり、残基10がTであり、残基12がYであり、残基13がYであり、残基14がPであり、残基15がDであり、残基16がNである、配列番号16と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号17、または任意に、残基7がSであり、残基8がTであり、残基9がFである、配列番号17と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号18、または任意に、残基1がDであり、残基3がSであり、残基5がRである、配列番号18と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号19、または任意に、残基3がRであり、残基4がYであり、残基5がNである、配列番号19と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号20、または任意に、残基4がSであり、残基5がSであり、残基8がGであり、残基9がGであり、残基10がFであり、残基11がNであり、残基12がYである、配列番号20と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号21、または任意に、残基1がDであり、残基3がTであり、残基4がSであり、残基5がRである、配列番号21と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号22、または任意に、残基5がSであり、残基6がRであり、残基7がGである、配列番号22と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号23、または配列番号23と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号24、または任意に、残基5がRであり、残基6がPであり、残基7がSである、配列番号24と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号25、または任意に、残基6がSであり、残基7がRである、配列番号25と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号26、または配列番号26と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
配列番号27、または任意に、残基5がRであり、残基6がPであり、残基7がSである、配列番号27と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列、
ならびに
配列番号28、または配列番号28と比較して1つまたは2つのアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するポリペプチドをもたらす配列。
−2つのsE単量体間での少なくとも1つのジスルフィド鎖間結合によって共有結合的に安定化される、かつ/または
−2つのsE単量体間での少なくとも1つのスルフヒドリル反応性架橋剤によって共有結合的に安定化される、かつ/または
−改変糖類を介して2つのsE単量体を結合することによって共有結合的に安定化される、かつ/または
−二量体界面でまたは各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、少なくとも1つのsE単量体のアミノ酸配列中の少なくとも1つのアミノ酸残基を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって、非共有結合的に安定化される。
a)単量体が、配列番号132のDENV−1 sE、配列番号133のDENV−2 sE 配列番号134のDENV−3 sE、配列番号135のDENV−4 sE、ならびにH27F、H27W、L107C、F108C、H244F、H244W、S255C、A259C、T/S262C、T/A265C、L278F、L292F、L294N、A313C、及びT315Cの中から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)を有するその突然変異体sEからなる群から選択され、任意に、その当該突然変異体sEがQ227N、E174N、及びD329Nの中から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)、好ましくは3つの突然変異Q227N、E174N、及びD329Nをさらに有する、二量体、
b)二量体が、上に定義される2つの同一の組換えsEのホモ二量体、または上に定義される2つの異なる組換えsEのヘテロ二量体であり得、この二量体が好ましくは、ホモ二量体であり、例えば、上に定義されるDENV−1 sEとDENV−2 sEとのヘテロ二量体であり得る、二量体。それはまた、上に定義されるDENV−1 sEのヘテロ二量体及びDENV−1 sEの突然変異体sEであり得、
c)各sE単量体の67位(Asn67グリカン)及び/または153位(Asn153グリカン)で、好ましくは各単量体の少なくとも67位(Asn67グリカン)でグリコシル化される、二量体、
d)2つのsE単量体間での少なくとも1つ、2つ、または3つのジスルフィド鎖間結合によって共有結合的に安定化される、二量体、
e)上に定義される突然変異A259CまたはS255Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、これらの残基259Cまたは255Cがジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、二量体、
f)上に定義される突然変異A259Cを有する突然変異体sEと、上に定義される突然変異S255Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、残基259C及び255Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、二量体、
g)上に定義される突然変異F108C及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、または上に定義される突然変異L107C及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、残基108C及び315Cまたは残基107C及び313Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、二量体、
h)上に定義される突然変異F108C及びA313Cを有する突然変異体sEと、上に定義される突然変異L107C及びT315Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、残基108C及び313Cが、それぞれ、2つのsE単量体間でのジスルフィド鎖間結合を介して残基315C及び107Cに結合している、二量体、
i)上に定義される、突然変異A259C、F108C、及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、突然変異S255C、F108C、及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、突然変異A259C、L107C、及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、ならびに突然変異A255C、L107C、及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体からなる群から選択され、残基259C、255C、108C、315C、107C、及び313Cが、それぞれ、ジスルフィド鎖間結合を介して残基259C、255C、315C、108C、313C、及び107Cに結合している、二量体、
j)上に定義される突然変異A259C、F108C、及びT315Cを有する突然変異体sEと、上に定義される突然変異S255C、F108C、及びT315Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、残基259C、108C、及び315Cが、それぞれ、ジスルフィド鎖間結合を介して残基255C、315C、及び108Cに結合している、二量体、
k)上に定義される突然変異S255C、L107C、及びA313Cを有する突然変異体sEと、上に定義される突然変異A259C、L107C、及びA313Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、残基255C、107C、及び313Cが、それぞれ、ジスルフィド鎖間結合を介して残基259C、313C、及び107Cに結合している、二量体、
l)sE単量体間での少なくとも1つ、2つ、または3つのスルフヒドリル反応性架橋剤(チオール反応性架橋剤とも呼ばれる)によって共有結合的に安定化される、二量体、
m)上に定義される突然変異T/S262CまたはT/A265Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、残基262Cまたは265Cが、スルフヒドリル反応性架橋剤によって一緒に結合している、二量体、
n)上に定義される突然変異T/S262Cを有する突然変異体sEと、上に定義される突然変異T/A265Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、残基262C及び265Cが、スルフヒドリル反応性架橋剤によって一緒に結合している、二量体、
o)突然変異体sEのホモ二量体またはヘテロ二量体であり、sEのアミノ酸残基1〜9、25〜30、238〜282、96〜111 311〜318のうちの少なくとも1つが、システインに突然変異し(置換され)、sEのアミノ酸残基1〜9、25〜30、238〜282、96〜111 311〜318のうちの少なくとも1つが、システインに突然変異し(置換され)、突然変異したシステイン残基が、スルフヒドリル反応性架橋剤によって一緒に結合している、二量体、
p)改変糖類を介して2つの単量体に結合することによって共有結合的に安定化される、二量体。
q)突然変異体sEのホモ二量体またはヘテロ二量体であり、
−一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、突然変異したアミノ酸残基が、X官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、もう一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、突然変異したアミノ酸残基が、Y官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、両方の突然変異した残基が、具体的にはクリック化学によって、第1のsE単量体の糖のX官能基をもう一方のsE単量体の糖のY官能基と反応させることによって、改変糖類を介して一緒に結合している、二量体。X官能基とは、Y官能基と反応し、クリック化学によって共有結合を形成することができる糖によって担持される化学基を意味し、当該Y官能基は、好ましくはアジド官能基である。Y官能基とは、X官能基と反応し、クリック化学によって共有結合を形成することができる糖によって担持される化学基を意味し、当該X官能基は、好ましくは末端アルキン官能基である。
r)二量体界面で二量体の空洞を充填させることによって、1つまたは2つの単量体、好ましくは2つの単量体のアミノ酸配列において少なくとも1つのアミノ酸を、かさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって非共有結合的に安定化される、二量体、
s)二量体界面でまたは各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、空洞を形成する領域内で、少なくとも1つのsE単量体のアミノ酸配列中の少なくとも1つのアミノ酸残基を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって非共有結合的に安定化される。かかる置換が、2つのsE単量体間での疎水性相互作用を増加させることができる、二量体、
t)上に定義される2つの組換えsEのホモ二量体またはヘテロ二量体、好ましくはホモ二量体であり、組換えsEのうちの1つまたは2つの組換えsEが、H27F、H27W、H244F、H244W、及びL278Fからなる群から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)を有する、二量体、
u)各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、1つまたは2つの、好ましくは2つの単量体のアミノ酸配列中のアミノ酸を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって非共有結合的に安定化される、二量体、
v)上に定義される2つの組換えsEのホモ二量体またはヘテロ二量体、好ましくはホモ二量体であり、組換えsEのうちの1つまたは2つの組換えsEが、L292F及びL294Nからなる群から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)を有する、二量体、のうちの任意の1つ以上であり得る。
a)上に定義される単一または複数のシステイン突然変異体sEを、酸化条件下で接触させるステップ、及び/または
b)2つのsE単量体を、上に定義される少なくとも1つ、2つ、または3つのスルフヒドリル反応性架橋剤と接触させるステップ、及び/または
c)上に定義されるグリコシル化部位を有する2つのsE単量体を、クリック化学によって接触させるステップ、及び/または
d)少なくとも1つのsE単量体のアミノ酸配列において少なくとも1つのアミノ酸残基を、上に定義されるかさ高い側鎖アミノ酸と置換する2つのsE単量体と接触させるステップ、のうちの少なくとも1つを含む。
ii)本発明の宿主細胞の適切な培地における培養、
ii)当該化合物、好ましくは産生された抗体またはその抗原結合部分、または当該EDE化合物の回収、を含み、当該回収は培養培地または当該培養細胞のいずれかからである。
a)哺乳動物を本発明の安定化組換えsE二量体または本発明の免疫原性組成物と接触させるステップと、
b)当該哺乳動物由来の1つ以上の血清試料中の当該sEを対象とする抗体の存在を検出するステップと、
c)哺乳動物から膵臓細胞を採取するステップと、
d)ハイブリドーマ細胞を産生するために、膵臓細胞を骨髄腫細胞と融合させるステップと、
e)抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞を特定するステップと、
f)抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞を培養するステップと、
g)任意に、当該抗体を単離するステップと、を含む。
a.対象への、前述の実施形態のういちのいずれかにおいて定義されるエンベロープ二量体エピトープまたはEDE化合物の投与、
b.対象の血液からの当該抗体またはその抗原結合部分の回収及び単離、を含む。
a)抗FL抗体を作り出さない、または有意に作り出さない場合、及び
b)4種すべての血清型のデング熱ウイルスとかなり有意な程度まで結合する場合、及び
c)ヒト細胞及び昆虫細胞の両方で作られた4種すべての血清型のデング熱ウイルスをかなり有意な程度まで100%中和する場合、最も有用であると見なされる。
a)抗FL抗体を作り出さない、または有意に作り出さない場合、及び
b)4種すべての血清型のデング熱ウイルスとかなり有意な程度まで結合する場合、及び
c)ヒト細胞及び昆虫細胞の両方で作られた4種すべての血清型のデング熱ウイルスをかなり有意な程度まで100%中和する場合、最も有用であると見なされる。
ワクチン組成物で用いるためのEDE/EDE化合物は、抗原性には必要であると見なされる領域を含む、エンベロープタンパク質の二量体、またはエンベロープ 外部ドメイン、またはエンベロープタンパク質の外部ドメインの(約)400アミノ末端残基の特定の残基を含む特定の断片であってもよい。この断片はまた、特定の立体構造を維持するように操作されてもよく、またはタンパク質骨格内に保持されてもく、または操作され、かつタンパク質骨格内に保持されてもよい。
−エンベロープ二量体エピトープ(EDE)を単独に認識する(ELISA試験において組換えEタンパク質単量体への結合を示さない)、
−交差反応性がある、及び
−4種の血清型(DENV1−4)からのデング熱ウイルスを中和する、中和抗体を引き起こすのに特に適している。
a)エンベロープ二量体エピトープまたはEDE化合物、
b)EDEまたはEDE化合物をコードする核酸、
c)核酸を含むベクター、
のうちのいずれか1つ以上を含む組成物はまた、エンベロープ二量体エピトープまたはEDE化合物が前述の実施形態のうちのいずれかに記載の通りである場合に、本発明の一部である。
a)エンベロープ二量体エピトープまたはEDE化合物、
b)EDEまたはEDE化合物をコードする核酸、
c)核酸を含むベクター、
は、1種を超える、任意に2種、任意に3種、任意に4種の血清型のデング熱ウイルスであるか、またはそれらをコードする。
a)エンベロープ二量体エピトープまたはEDE化合物、
b)EDEまたはEDE化合物をコードする核酸、
c)核酸を含むベクター、
は、4種すべての血清型のデング熱ウイルスを中和する、好ましくは4種すべての血清型のデング熱ウイルスを100%中和することができる抗体を作り出すことができる単一エピトープであるか、または単一エピトープの産生をもたらす。
a)前述の実施形態のうちのいずれかに記載の、4種すべての血清型に対して抗体を作り出すことができるエンベロープ二量体エピトープもしくはEDE化合物、または前述の実施形態に従うワクチン組成物、またはワクチン接種で用いるための核酸、またはワクチン接種で用いるためのベクターの単回投与、任意に、続いて、弱毒化したデング熱ウイルスの投与、あるいは
b)前述の実施形態のうちのいずれかに記載の、2種の血清型からの2つのエンベロープ二量体エピトープもしくはEDE化合物の投与、続いて、その他の2種の血清型からのエンベロープ二量体エピトープもしくはEDE化合物の投与、任意に、続いて、弱毒化したデング熱ウイルスの投与、または
c)弱毒化したデング熱ウイルスの投与、続いて、前述の実施形態のうちのいずれかに記載の、4種すべての血清型に対して抗体を作り出すことができるエンベロープ二量体エピトープの投与、あるいは
d)弱毒化したデング熱ウイルスの投与、続いて、前述の実施形態のうちのいずれかに記載の、2種の血清型からの2つのエンベロープ二量体エピトープもしくはEDE化合物の投与、続いて、その他の2種の血清型からのエンベロープ二量体エピトープもしくはEDE化合物の投与、を含む。
− 西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−6−ホスファターゼ、またはベータ−ガラクトシダーゼ等の酵素、
− 緑色蛍光タンパク質(GFP)、スペクトルの紫外線(UV)部分での波長で励起された青色蛍光色素(例えば、AMCA(7−アミノ−4−メチルクマリン−3−酢酸)、Alexa Fluor 350)、青色光によって励起された緑色蛍光色素(例えば、FITC、Cy2、Alexa Fluor 488)、緑色光によって励起された赤色蛍光色素(例えば、ローダミン、Texas Red、Cy3、Alexa Fluor色素546、564、及び594)、または電子検出器(CCDカメラ、光電子増倍管)で視覚化される遠赤外光によって励起された色素(例えば、Cy5)等の蛍光色素分子、
− ユーロピアム、ランタン、またはイットリウム等の重金属キレート、
− [18F]フルオロデオキシグルコース、11C−、125I−、131I−、3H−、14C−、35S、または99Tc−標識化化合物等の放射性同位体、からなる群から選択される。
a)当該対象からの適切な生体試料を、抗体もしくはその断片、または本発明に従う抗体もしくはその断片を含むまたはそれからなる診断薬剤とインビトロで接触させるステップと、
b)生体試料中のデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの存在または不在を判定するステップと、を含み、
デング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの存在は、対象がデング熱ウイルス感染を有することを示す。
a)当該対象からの当該適切な生体試料を、抗体もしくはその断片、または本発明に従う抗体もしくはその断片を含むまたはそれからなる診断薬剤とインビトロで接触させるステップと、
b)当該生体試料中のデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの存在または不在を判定するステップと、を含む。
a)当該対象からの適切な生体試料を、本発明に従う安定化組換えsE二量体とインビトロで接触させるステップと、
b)生体試料中の二量体を対象とする抗体の存在または不在を判定するステップと、を含み、
抗体の存在は、対象がデング熱ウイルス感染を有することを示す。
a)当該対象からの当該適切な生体試料を、本発明に従う安定化組換えsE二量体とインビトロで接触させるステップと、
b)当該生体試料中の当該二量体を対象とする抗体の存在または不在を判定するステップと、を含む。
a)当該対象からの適切な生体試料を、抗体もしくはその断片、本発明に従う抗体もしくはその断片を含むまたはそれからなる診断薬剤とインビトロで接触させるステップと、
b)生体試料中のデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの量を判定するステップと、
c)ステップ(b)において判定された量を、対象において以前に得られたデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの量と比較するステップと、を含み、
デング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの量の有意な増加がデング熱ウイルス感染の進行のマーカーを構成し、デング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの有意な減少がデング熱ウイルス感染の回帰のマーカーを構成する。
a)当該対象からの適切な生体試料を、本発明に従う安定化組換えsE二量体とインビトロで接触させるステップと、
b)生体試料中の二量体を対象とする抗体を中和する量を判定するステップと、
c)ステップ(b)において判定された量を、対象において以前に得られた二量体を対象とする抗体の量と比較するステップと、を含み、
当該二量体を対象とする抗体を中和する量の有意な増加は当該デング熱ウイルス感染の憎悪の良好な予後のマーカーを構成する。
a)当該対象からの適切な生体試料を、本発明に従う安定化組換えsE二量体とインビトロで接触させるステップと、
b)生体試料中の二量体を対象とする抗体を中和する量を判定するステップと、
c)ステップ(b)において判定された量を、対象において以前に得られた二量体を対象とする抗体の量と比較するステップと、を含み、
当該二量体を対象とする抗体を中和する量の有意な増加が当該ワクチン接種プロトコルの成功のマーカーを構成する。
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この実施例及びその他の実施例に関連する方法
実施例2−突然変異分析は、EDE抗体及びWB反応性抗体が異なるエピトープに結合することを示す。
方法
実施例3−WB反応性抗体は、EDE抗体とは異なり、ヒト樹状細胞で作製されたウイルスを完全に中和することができない。
方法
実施例4−抗EDE抗体は、高比率のprMで、またはエンベロープタンパク質が三量体立体構造を採用した場合にウイルスと結合することができない。
方法
実施例5−特定の患者内の抗体は、免疫優勢を示す
実施例6−抗EDE抗体は、低減したレベルの感染の抗体依存性増強をもたらす
方法
実施例7−抗EDE抗体は組換えsE二量体に結合する
実施例8−結晶構造
DENV−2 sE株FGA02、遺伝子型III
実施例9−エンベロープ二量体エピトープ
抗EDE抗体は、sE二量体界面で結合する
保存された残基はエピトープを作り上げる
実施例10−グリカン鎖の抗体認識
実施例11−結合決定基としての融合ループの主鎖立体構造
実施例12−EDE1 C10と複合体形成されたDENV−4 sEの構造
実施例13−成熟ビリオンにおける推定上のさらなるEDE1 C10/E二量体の相互作用
C10のCDR H3の先端がsE二量体(図18d、左パネルにおいて丸く囲まれており、また、図15a及び図12d〜eも参照されたい)の「底部」に達し、無傷ビリオンの文脈において、領域は、下の方のタンパク質Mによって強化されることを示す(図25)。DENV−2の無傷成熟粒子の3.5Å分解能の低温EM構造(参照9)は、Mとの相互作用が、ドメインIIの疎水性コアにおいて埋没される代わりに、二量体界面で曝露されるように(図25c)、Eのklヘアピンの底部に保存された残基F279をもたらす(図15a)ことを示す。DENV−2 sE/C10構造による重ね合わせは、ビリオンの文脈において、曝露されたF279側鎖がH3ループにおいてY100と相互作用し得ることを示す。Y100が、DENV−4と比較して、DENV−2 sEとの異なる相互作用をすると見られ(図25C;ED 図26においてパネルb及びeも比較する)、このことはその正確なパートナーを見出さないことを示唆している。それ故に、成熟ビリオンにおけるE二量体上のEDE1 C10結合部位は、組換えsE二量体によって完全には反復しないと思われる。この観察は、sE二量体へのEDE1 C10の弱い結合の間の明らかな相違(図8)、ならびに4種のデング熱血清型(低いnM範囲におけるNT50、添付の原稿を参照されたい)からのウイルスの強力な結合及び中和反応を恐らく説明している。重要なことは、成熟ビリオンにおけるF279の立体構造が疎水性リガンドに結合するsEで観察されたものと同様であり4、このことは免疫原として組換えsE二量体のこの領域の正確な立体構造を誘導することが可能であることを示唆している。
実施例14
実施例15−さらなる方法
組換えsEタンパク質に産生
Fab及びScFvの産生
免疫複合体の形成及び単離
MALS分析
(DENV sEまたはFab)はまた、同じ濃度で対照として別々に泳動させた。
試料を室温で15分間インキュベートし、流速0.4ml/分でSDX200 10/300 GLゲル濾過カラム泳動から溶出した場合に、MALSによって分析した。この溶出は、続いて、屈折率測定法及びDAWN Heleos−Optilab T−rEX設定(Wyatt Technology)でのMALS検出を行った。
表面プラズモン共鳴
DENV−4グリコシル化変異体を用いた中和アッセイ
結晶化及び3D構造決定
原子モデルの分析及び説明
実施例16:配列情報
配列番号
配列番号1
抗体C8重鎖の完全配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFTFSTYSMHWVRQAPGKGLEYVSAITGEGDSAFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYFEMNSLRPEDTAVYYCVGGYSNFYYYYTMDVWGQGTTVTV
配列番号2
抗体C10重鎖の完全配列
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQDRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAIYYCARDKVDDYGDYWFPTLWYFDYWGQGTLVTV
配列番号3
抗体A11重の完全配列
EVQLVESGGGLVRPGGSLRLSCAASGFSYSNHWMHWVRQAPGKGLVWVSRINSDGSTRNYADFVKGRFTISRDNAENTLYLEMNSLTADDTAVYYCVRDGVRFYYDSTGYYPDSFFKYGMDVWGQGTTVTV配列番号4
抗体B7重鎖の完全配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSSHWMHWVRQAPGKGLVWVSRTNSDGSSTSYADSVKGRFMISRDNSKNTVYLHMNGLRAEDTAVYFCARDGVRYYYDSTGYYPDNFFQYGLDVWGQGTT配列番号5
C8 CDR H1
TYSMH
配列番号6
C8 CDR H2
AITGEGDSAFYADSVKG
配列番号7
C8 CDR H3
GYSNFYYY
配列番号8
C10 CDR H1
SYAMH
配列番号9
C10 CDR H2
WINAGNGNTKYSQKFQD
配列番号10
C10 CDR H3
DKVDDYGDYWFPTLW
配列番号11
A11 CDR H1
NHWMH
配列番号12
A11 CDR H2
RINSDGSTRNYADFVKG
配列番号13
A11 CDR H3
DGVRFYYDSTGYYPDSFFKY
配列番号14
B7 CDR H1
SHWMH
配列番号15
B7 CDR H2
RTNSDGSSTSYADSVKG
配列番号16
B7 CDR H3
DGVRYYYDSTGYYPDNFFQY
配列番号17
C8−CDR L1
RASQSISTFLA
配列番号18
C8 CDR L2
DASTRAT
配列番号19
C8 CDR L3
QQRYNWPPYT
配列番号20
C10 CDR L1
TGTSSDVGGFNYVS
配列番号21
C10 CDR L2
DVTSRPS
配列番号22
SSHTSRGTWVF
配列番号23
A11 CDR L1
TGTSSNADTYNLVS
配列番号24
A11 CDR L2
EGTKRPS
配列番号25
A11 CDR L3
CSYATSRTLVF
配列番号26
B7 CDR L1
TGISSDVETYNLVS
配列番号27
B7 CDR L2
EASKRPS
配列番号28
B7 CDR L3
CSYAGGKSLV
配列番号29
完全長エンベロープタンパク質配列DENV1
>DENV1株Hawaii
MRCVGIGNRDFVEGLSGGTWVDVVLEHGSCVTTMAKDKPTLDIELLKTEVTNPAVLRKLCIEAKISNTTTDSRCPTQGEATLVEEQDANFVCRRTFVDRGWGNGCGLFGKGSLITCAKFKCVTKLEGKIVQYENLKYSVIVTVHTGDQHQVGNETTEHGTIATITPQAPTSEIQLTDYGALTLDCSPRTGLDFNEMVLLTMKEKSWLVHKQWFLDLPLPWTSGASTPQETWNREDLLVTFKTAHAKKQEVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQTSGTTKIFAGHLKCRLKMDKLTLKGMSYVMCTGSFKLEKEVAETQHGTVLVQVKYEGTDAPCKIPFSTQDEKGVTQNGRLITANPIVTDKEKPVNIEAEPPFGESYIVVGAGEKALKLSWFKKGSSIGKMLEATARGARRMAILGDTAWDFGSIGGVFTSVGKLVHQIFGTAYGVLFSGVSWTMKIGIGILLTWLGLNSRSTSLSMTCIAVGMVTLYLGVMVQA
配列番号30
完全長エンベロープヌクレオチド配列DENV1
配列番号31
完全長エンベロープタンパク質配列DENV2
>DENV2株16681
MRCIGMSNRDFVEGVSGGSWVDIVLEHGSCVTTMAKNKPTLDFELIKTEAKQPATLRKYCIEAKLTNTTTESRCPTQGEPSLNEEQDKRFVCKHSMVDRGWGNGCGLFGKGGIVTCAMFRCKKNMEGKVVQPENLEYTIVITPHSGEEHAVGNDTGKHGKEIKITPQSSITEAELTGYGTVTMECSPRTGLDFNEMVLLQMENKAWLVHRQWFLDLPLPWLPGADTQGSNWIQKETLVTFKNPHAKKQDVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQMSSGNLLFTGHLKCRLRMDKLQLKGMSYSMCTGKFKVVKEIAETQHGTIVIRVQYEGDGSPCKIPFEIMDLEKRHVLGRLITVNPIVTEKDSPVNIEAEPPFGDSYIIIGVEPGQLKLNWFKKGSSIGQMFETTMRGAKRMAILGDTAWDFGSLGGVFTSIGKALHQVFGAIYGAAFSGVSWTMKILIGVIITWIGMNSRSTSLSVTLVLVGIVTLYLGVMVQA
配列番号32
完全長エンベロープヌクレオチド配列DENV2
配列番号33
完全長エンベロープタンパク質配列DENV3
>DENV3株H87
MRCVGVGNRDFVEGLSGATWVDVVLEHGGCVTTMAKNKPTLDIELQKTEATQLATLRKLCIEGKITNITTDSRCPTQGEAILPEEQDQNYVCKHTYVDRGWGNGCGLFGKGSLVTCAKFQCLESIEGKVVQHENLKYTVIITVHTGDQHQVGNETQGVTAEITSQASTAEAILPGYGTLGLECSPRTGLDFNEMILLTMKNKAWMVHRQWFFDLPLPWTSGATTETPTWNRRELLVTFKNAHAKKQEVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQTSGGTSIFAGHLKCRLKMDKLELKGMSYAMCLNTFVLKKEVSETQHGTILIKVEYKGEDAPCKIPFSTEDGQGKAHNGRLITANPVVTKKEEPVNIEAEPPFGESNIVIGIGDKALKINWYRKGSSIGKMFEATARGARRMAILGDTAWDFGSVGGVLNSLGKMVHQIFGSAYTALFSGVSWIMKIGIGVLLTWIGLNSKNTSMSFSCIAIGIITLYLGVVVQA
配列番号34
完全長エンベロープヌクレオチド配列DENV3
配列番号35
完全長エンベロープタンパク質配列DENV4
>DENV4株241
MRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELIKTTAKEVALLRTYCIEASISNITTATRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCSGKITGNLVQIENLEYTVVVTVHNGDTHAVGNDIPNHGVTATITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILMKMKKKTWLVHKQWFLDLPLPWAAGADTSEVHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVIVLGSQEGAMHSALTGATEVDSGDGNHMFAGHLKCKVRMEKLRIKGMSYTMCSGKFSIDKEMAETQHGTTVVKVKYEGAGAPCKVPIEIRDVNKEKVVGRIISSTPFAEYTNSVTNIELEPPFGDSYIVIGVGDSALTLHWFRKGSSIGKMLESTYRGVKRMAILGETAWDFGSVGGLFTSLGKAVHQVFGSVYTTMFGGVSWMVRILIGFLVLWIGTNSRNTSMAMTCIAVGGITLFLGFTVHA
配列番号36−完全長エンベロープヌクレオチド配列DENV4
配列番号37
C8軽鎖−以下の表を参照
配列番号38
抗体C10軽鎖の完全配列−以下の表を参照
配列番号39
抗体A11軽鎖の完全配列−以下の表を参照
配列番号40
B7軽鎖 以下の表を参照
配列番号37−−131 以下の表からの抗体軽及び重鎖配列
エンベロープ外部ドメインタンパク質配列DENV1
FHLTTRGGEPHMIVSKQERGKSLLFKTSAGVNMCTLIAMDLGELCEDTMTYKCPRITEAEPDDVDCWCNATDTWVTYGTCSQTGEHRRDKRSVALAPHVGLGLETRTETWMSSEGAWKQIQKVETWALRHPGFTVIALFLAHAIGTSITQKGIIFILLMLVTPSMAMRCVGIGNRDFVEGLSGATWVDVVLEHGSCVTTMAKNKPTLDIELLKTEVTNPAVLRKLCIEAKISNTTTDSRCPTQGEATLVEEQDANFVCRRTVVDRGWGNGCGLFGKGSLLTCAKFKCVTKLEGKIVQYENLKYSVIVTVHTGDQHQVGNETTEHGTIATITPQAPTSEIQLTDYGTLTLDCSPRTGLDFNEVVLLTMKEKSWLVHKQWFLDLPLPWTSGASTSQETWNRQDLLVTFKTAHAKKQEVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQTSGTTTIFAGHLKCRLKMDKLTLKGMSYVMCTGSFKLEKEVAETQHGTVLVQVKYEGTDAPCKIPFSTQDEKGVTQNGRLITANPIVTDKEKPINIETEPPFGESYIIVGAGEKALKLSWFKKG
配列番号133
エンベロープ外部ドメインタンパク質配列DENV2
MRCIGISNRDFVEGVSGGSWVDIVLEHGSCVTTMAKNKPTLDFELIKTEAKQPATLRKYCIEAKLTNTTTESRCPTQGEPSLNEEQDKRFICKHSMVDRGWGNGCGLFGKGGIVTCAKFTCKKNMEGKIVQPENLEYTIVITPHSGEEHAVGNDTGKHGKEIKITPQSSTTEAELTGYGTVTMECSPRTGLDFNEMVLLQMEDKAWLVHRQWFLDLPLPWLPGADTQGSNWIQKETLVTFKNPHAKKQDVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQMSSGNLLFTGHLKCRLRMDKLQLKGMSYSMCTGKFKIVKEIAETQHGTIVIRVQYEGDGSPCKIPFEITDLEKRHVLGRLITVNPIVTEKDSPVNIEAEPPFGDSYIIVGVEPGQLKLNWFKRG
配列番号134
エンベロープ外部ドメインタンパク質配列DENV3
FHLTSRDGEPRMIVGKNERGKSLLFKTASGINMCTLIAMDLGEMCDDTVTYKCPHITEVEPEDIDCWCNLTSTWVTYGTCNQAGEHRRDKRSVALAPHVGMGLDTRTQTWMSAEGAWRQVEKVETWALRHPGFTILALFLAHYIGTSLTQKVVIFILLMLVTPSMTMRCVGVGNRDFVEGLSGATWVDVVLEHGGCVTTMAKNKPTLDIELQKTEATQLATLRKLCIEGKITNITTDSRCPTQGEAILPEEQDQNYVCKHTYVDRGWGNGCGLFGKGSLVTCAKFQCLESIEGKVVQHENLKYTVIITVHTGDQHQVGNETQGVTAEITSQASTAEAILPEYGTLGLECSPRTGLDFNEMILLTMKNKAWMVHRQWFFDLPLPWTSGATTKTPTWNRKELLVTFKNAHAKKQEVVVLGSQEGAMHTALTGATEIQTSGGTSIFAGHLKCRLKMDKLKLKGMSYAMCLNTFVLKKEVSETQHGTILIKVEYKGEDAPCKIPFSTEDGQGKAHNGRLITANPVVTKKEEPVNIEAEPPFGESNIVIGIGDKALKINWYRKG
配列番号135
エンベロープ外部ドメインタンパク質配列DENV4
FSLSTRDGEPLMIVAKHERGRPLLFKTTEGINKCTLIAMDLGEMCEDTVTYKCPLLVNTEPEDIDCWCNLTSTWVMYGTCTQSGERRREKRSVALTPHSGMGLETRAETWMSSEGAWKHAQRVESWILRNPGFALLAGFMAYMIGQTGIQRTVFFVLMMLVAPSYGMRCVGVGNRDFVEGVSGGAWVDLVLEHGGCVTTMAQGKPTLDFELTKTTAKEVALLRTYCIEASISNITTATRCPTQGEPYLKEEQDQQYICRRDVVDRGWGNGCGLFGKGGVVTCAKFSCSGKITGNLVQIENLEYTVVVTVHNGDTHAVGNDTSNHGVTAMITPRSPSVEVKLPDYGELTLDCEPRSGIDFNEMILMKMKKKTWLVHKQWFLDLPLPWTAGADTSEVHWNYKERMVTFKVPHAKRQDVTVLGSQEGAMHSALAGATEVDSGDGNHMFAGHLKCKVRMEKLRIKGMSYTMCSGKFSIDKEMAETQHGTTVVKVKYEGAGAPCKVPIEIRDVNKEKVVGRIISSTPLAENTNSVTNIELEPPFGDSYIVIGVGNSALTLHWFRKG
配列番号136
エンベロープ 外部ドメイン ヌクレオチド配列 DENV1
ttccatttga ccacacgagg gggagagcca cacatgatag ttagtaagca ggaaagagga
aagtcactct tgttcaagac ctctgcaggt gtcaatatgt gcactctcat tgcgatggat
ttgggagagt tatgtgagga cacaatgact tacaaatgcc cccggatcac tgaggcggaa
ccagatgacg ttgactgctg gtgcaatgcc acagacacat gggtgaccta tgggacgtgt
tctcaaaccg gtgaacaccg acgagacaaa cgttccgtgg cactggcccc acacgtggga
cttggtctag aaacaagaac cgaaacatgg atgtcctctg aaggcgcctg gaaacaaata
caaaaagtgg agacttgggc tttgagacac ccaggattca cggtgatagc tcttttttta
gcacatgcca taggaacatc catcactcag aaagggatca ttttcattct gctgatgctg
gtaacaccat caatggccat gcgatgcgtg ggaataggca acagagactt cgttgaagga
ctgtcaggag caacgtgggt ggacgtggta ttggagcatg gaagctgcgt caccaccatg
gcaaaaaata aaccaacatt ggacattgaa ctcttgaaga cggaggtcac gaaccctgcc
gtcttgcgca aattgtgcat tgaagctaaa atatcaaaca ccaccaccga ttcaagatgt
ccaacacaag gagaggctac actggtggaa gaacaagacg cgaactttgt gtgtcgacga
acggttgtgg acagaggctg gggcaatggc tgcggactat ttggaaaagg aagcctactg
acgtgtgcta agttcaagtg tgtgacaaaa ctggaaggaa agatagttca atatgaaaac
ttaaaatatt cagtgatagt cactgtccac acaggggacc agcaccaggt gggaaacgag
actacagaac atggaacaat tgcaaccata acacctcaag ctcctacgtc ggaaatacag
ttgacagact acggaaccct tacactggac tgctcaccca gaacagggct ggactttaat
gaggtggtgc tattgacaat gaaagaaaaa tcatggcttg tccacaaaca atggtttcta
gacttaccac tgccttggac ttcgggggct tcaacatccc aagagacttg gaacagacaa
gatttgctgg tcacattcaa gacagctcat gcaaagaagc aggaagtagt cgtactggga
tcacaggaag gagcaatgca cactgcgttg accggggcga cagaaatcca gacgtcagga
acgacaacaa tctttgcagg acacctgaaa tgcagattaa aaatggataa actgacttta
aaagggatgt catatgtgat gtgcacaggc tcatttaagc tagagaagga agtggctgag
acccagcatg gaactgtcct agtgcaggtt aaatacgaag gaacagatgc gccatgcaag
atcccctttt cgacccaaga tgagaaagga gtgacccaga atgggagatt gataacagcc
aatcccatag ttactgacaa agaaaaacca atcaacattg agacagaacc accttttggt
gagagctaca tcatagtagg ggcaggtgaa aaagctttga aactaagctg gttcaagaaa
gga
配列番号137
エンベロープ外部ドメイン ヌクレオチド配列DENV2
ttccatttaa ccacacgtaa cggagaacca cacatgatcg tcagtagaca agagaaaggg
aaaagtcttc tgtttaaaac agaggatggt gtgaacatgt gtaccctcat ggccatggac
cttggtgaat tgtgtgaaga tacaatcacg tacaagtgtc cttttctcag gcagaatgaa
ccagaagaca tagattgttg gtgcaactct acgtccacat gggtaactta tgggacgtgt
accaccacag gagaacacag aagagaaaaa agatcagtgg cactcgttcc acatgtggga
atgggactgg agacacgaac tgaaacatgg atgtcatcag aaggggcctg gaaacatgcc
cagagaattg aaacttggat cttgagacat ccaggcttta ccataatggc agcaatcctg
gcatacacca taggaacgac acatttccaa agagccctga ttttcatctt actgacagct
gtcgctcctt caatgacaat gcgttgcata ggaatatcaa atagagactt tgtagaaggg
gtttcaggag gaagctgggt tgacatagtc ttagaacatg gaagctgtgt gacgacgatg
gcaaaaaaca aaccaacatt ggattttgaa ctgataaaaa cagaagccaa acaacctgcc
actctaagga agtactgtat agaggcaaag ctgaccaaca caacaacaga ttctcgctgc
ccaacacaag gagaacccag cctaaatgaa gagcaggaca aaaggttcgt ctgcaaacac
tccatggtgg acagaggatg gggaaatgga tgtggattat ttggaaaagg aggcattgtg
acctgtgcta tgttcacatg caaaaagaac atgaaaggaa aagtcgtgca accagaaaac
ttggaataca ccattgtgat aacacctcac tcaggggaag agcatgcagt cggaaatgac
acaggaaaac atggcaagga aatcaaaata acaccacaga gttccatcac agaagcagag
ttgacaggct atggcactgt cacgatggag tgctctccga gaacgggcct cgacttcaat
gagatggtgt tgctgcaaat ggaaaataaa gcttggctgg tgcacaggca atggttccta
gacctgccgt tgccatggct gcccggagcg gacacacaag gatcaaattg gatacagaaa
gagacattgg tgactttcaa aaatccccat gcgaagaaac aggatgttgt tgttttggga
tcccaagaag gggccatgca cacagcactc acaggggcca cagaaatcca gatgtcatca
ggaaacttac tgttcacagg acatctcaag tgcaggctga ggatggacaa actacagctc
aaaggaatgt catactctat gtgcacagga aagtttaaag ttgtgaagga aatagcagaa
acacaacatg gaacaatagt tatcagagta caatatgaag gggacggttc tccatgtaag
atcccttttg agataatgga tttggaaaaa agacatgttt taggtcgcct gattacagtc
aacccaatcg taacagaaaa agatagccca gtcaacatag aagcagaacc tccattcgga
gacagctaca tcatcatagg agtagagccg ggacaattga agctcaactg gtttaagaaa
gga
配列番号138
エンベロープ 外部ドメイン ヌクレオチド配列 DENV3
ttccacttaa cttcacgaga tggagagccg cgcatgattg tggggaagaa tgaaagagga
aaatccctac tttttaagac agcctctgga atcaacatgt gcacactcat agccatggat
ttgggagaga tgtgtgatga cacggtcact tacaaatgcc cccacattac cgaagtggag
cctgaagaca ttgactgttg gtgcaacctt acatcgacat gggtgactta tggaacatgc
aatcaagctg gagagcatag acgcgataag agatcagtgg cgttagctcc ccatgtcggc
atgggactgg acacacgcac tcaaacctgg atgtcggctg aaggagcttg gagacaagtc
gagaaggtag agacatgggc ccttaggcac ccagggttta ccatactagc cctatttctt
gcccattaca taggcacttc cttgacccag aaagtggtta tttttatact attaatgctg
gttaccccat ccatgacaat gagatgtgtg ggagtaggaa acagagattt tgtggaaggc
ctatcgggag ctacgtgggt tgacgtggtg ctcgagcacg gtgggtgtgt gactaccatg
gctaagaaca agcccacgct ggacatagag cttcagaaga ctgaggccac tcagctggcg
accctaagga agctatgcat tgagggaaaa attaccaaca taacaaccga ctcaagatgt
cccacccaag gggaagcgat tttacctgag gagcaggacc agaactacgt gtgtaagcat
acatacgtgg acagaggctg gggaaacggt tgtggtttgt ttggcaaggg aagcttggtg
acatgcgcga aatttcaatg tttagaatca atagagggaa aagtggtgca acatgagaac
ctcaaataca ccgtcatcat cacagtgcac acaggagacc aacaccaggt gggaaatgaa
acgcagggag ttacggctga gataacatcc caggcatcaa ccgctgaagc cattttacct
gaatatggaa ccctcgggct agaatgctca ccacggacag gtttggattt caatgaaatg
attttattga caatgaagaa caaagcatgg atggtacata gacaatggtt ctttgactta
cccctaccat ggacatcagg agctacaaca aaaacaccaa cttggaacag gaaagagctt
cttgtgacat ttaaaaatgc acatgcaaaa aagcaagaag tagttgtcct tggatcacaa
gagggagcaa tgcatacagc actgacagga gctacagaga tccaaacctc aggaggcaca
agtatttttg cggggcactt aaaatgtaga ctcaagatgg acaaattgaa actcaagggg
atgagctatg caatgtgctt gaataccttt gtgttgaaga aagaagtctc cgaaacgcag
catgggacaa tactcattaa ggttgagtac aaaggggaag atgcaccctg caagattcct
ttctccacgg aggatggaca agggaaagct cacaatggca gactgatcac agccaatcca
gtggtgacca agaaggagga gcctgtcaac attgaggctg aacctccttt tggggaaagt
aatatagtaa ttggaattgg agacaaagcc ctgaaaatca actggtacag gaagggaa
配列番号139
エンベロープ外部ドメイン ヌクレオチド配列DENV4
ttttccctca gcacaagaga tggcgaaccc ctcatgatag tggcaaaaca tgaaaggggg
agacctctct tgtttaagac aacagagggg atcaacaaat gcactctcat tgccatggac
ttgggtgaaa tgtgtgagga cactgtcacg tataaatgcc ccctactggt caataccgaa
cctgaagaca ttgattgctg gtgcaacctc acgtctacct gggtcatgta tgggacatgc
acccagagcg gagaacggag acgagagaag cgctcagtag ctttaacacc acattcagga
atgggattgg aaacaagagc tgagacatgg atgtcatcgg aaggggcttg gaagcatgct
cagagagtag agagctggat actcagaaac ccaggattcg cgctcttggc aggatttatg
gcttatatga ttgggcaaac aggaatccag cgaactgtct tctttgtcct aatgatgctg
gtcgccccat cctacggaat gcgatgcgta ggagtaggaa acagagactt tgtggaagga
gtctcaggtg gagcatgggt cgacctggtg ctagaacatg gaggatgcgt cacaaccatg
gcccagggaa aaccaacctt ggattttgaa ctgactaaga caacagccaa ggaagtggct
ctgttaagaa cctattgcat tgaagcctca atatcaaaca taactacggc aacaagatgt
ccaacgcaag gagagcctta tctgaaagag gaacaggacc aacagtacat ttgccggaga
gatgtggtag acagagggtg gggcaatggc tgtggcttgt ttggaaaagg aggagttgtg
acatgtgcga agttttcatg ttcggggaag ataacaggca atttggtcca aattgagaac
cttgaataca cagtggttgt aacagtccac aatggagaca cccatgcagt aggaaatgac
acatccaatc atggagttac agccatgata actcccaggt caccatcggt ggaagtcaaa
ttgccggact atggagaact aacactcgat tgtgaaccca ggtctggaat tgactttaat
gagatgattc tgatgaaaat gaaaaagaaa acatggctcg tgcataagca atggtttttg
gatctgcctc ttccatggac agcaggagca gacacatcag aggttcactg gaattacaaa
gagagaatgg tgacatttaa ggttcctcat gccaagagac aggatgtgac agtgctggga
tctcaggaag gagccatgca ttctgccctc gctggagcca cagaagtgga ctccggtgat
ggaaatcaca tgtttgcagg acatcttaag tgcaaagtcc gtatggagaa attgagaatc
aagggaatgt catacacgat gtgttcagga aagttttcaa ttgacaaaga gatggcagaa
acacagcatg ggacaacagt ggtgaaagtc aagtatgaag gtgctggagc tccgtgtaaa
gtccccatag agataagaga tgtaaacaag gaaaaagtgg ttgggcgtat catctcatcc
acccctttgg ctgagaatac caacagtgta accaacatag aattagaacc cccctttggg
gacagctaca tagtgatagg tgttggaaac agcgcattaa cactccattg gttcaggaaa
ggg
配列番号140
A11 軽鎖
QSVLTQPVSVSGSPGQSITISCTGTSSNADTYNLVSWYQQRPGKAPKLMIYEGTKRPSGVSNRFSASKSATAASLTISGLQPEDEADYYCCSYATSRTLVFGGGTKLTVV
配列番号141
B7軽鎖
RSQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGISSDVETYNLVSWYEQHPGKAPKLIIYEASKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLAISGLQAEDEADYYCCSYAGGKSLVFGGGTRLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
配列番号142
A11のvH鎖
EVQLVESGGGLVRPGGSLRLSCAASGFSYSNHWMHWVRQAPGKGLVWVSRINSDGSTRNYADFVKGRFTISRDNAENTLYLEMNSLTADDTAVYYCVRDGVRFYYDSTGYYPDSFFKYGMDVWGQGTTVTV配列番号143
vH B7
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSSHWMHWVRQAPGKGLVWVSRTNSDGSSTSYADSVKGRFMISRDNSKNTVYLHMNGLRAEDTAVYFCARDGVRYYYDSTGYYPDNFFQYGLDVWGQGTTVTV
配列番号144
vH C8
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFTFSTYSMHWVRQAPGKGLEYVSAITGEGDSAFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYFEMNSLRPEDTAVYYCVGGYSNFYYYYTMDVWGQGTTVTV
配列番号145
vLight C8
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISTFLAWYQHKPGQAPRLLIYDASTRATGVPARFSGSRSGTDFTLTISTLEPEDFAVYYCQQRYNWPPYTFGQGTKVEIK
配列番号146
vH C10
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQDRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAIYYCARDKVDDYGDYWFPTLWYFDYWGQGTLVTV
配列番号147
vL C10
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGFNYVSWFQQHPGKAPKLMLYDVTSRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSHTSRGTWVFGGGTKLTVL 配列番号148
Denv−1の150ループ
QHQVGNETTEHG
配列番号149
Denv 2の150ループ
EHAVGNDTGKHG
配列番号150
Denv 3の150ループ
QHQVGNETQG
配列番号151
Denv 4の150ループ
THAVGNDIPNHG
実施例17
安定したE二量体を得るためのDV2 Eタンパク質の部位特異的な変異誘発
1.突然変異体へのFLE及びEDE mAbの結合。
図37〜40は、L107/A313突然変異体及びWTにおいてFLE及びEDE mAbの結合活性を示す。
2 A259C突然変異体によるマウス予防接種
群1 E WTを用いたプライム及びブースト。E WT(単量体/単量体)
群2、E A259C 突然変異体を用いたプライム及びブースト(二量体/二量体)
群3 prM/Eウイルス様粒子(VLP)を用いたプライム及びブースト(VLP/VLP)
群4 E A259C突然変異体を用いたプライム、続いて、VLPを用いたブースト(二量体/VLP)
群5 VLPを用いたプライム、続いて、E A259C突然変異体を用いたブースト(VLP/二量体)
群6 対照マウス(偽物)
方法
組換え可溶性DENVエンベロープタンパク質(rE)へのヒトモノクローナルAbの結合親和性を決定するために、Nuncイモビライザーアミノプレート(436006、Thermo Scientific)を、50mM 炭酸塩緩衝液pH9.6(C3041、Sigma)中の10ug/mlのうちの50ulのrE DENV2 野生型単量体(WT)、突然変異体二量体(A259CもしくはL107C/A313C)またはウシ血清アルブミン(BSA、陰性対照)で直接コーティングした。4℃で一晩インキュベートした後、プレートを洗浄緩衝液(PBS+0.1% Tween−20)で3回洗浄し、200ulの遮断緩衝液(PBS+3%BSA)で、室温で1時間遮断し、続いて、遮断緩衝液中の1〜10ug/mlのうちの50ulのヒトモノクローナルAbで、37℃で1時間遮断した。その後、プレートを3回再度洗浄し、遮断緩衝液(A9544、Sigma)中の1:10,000希釈の50ulのALP共役抗ヒトIgGで、37℃で1時間さらにインキュベートした。最後に、3回洗浄した後、100ulのPNPP基質(N2770、Sigma)を添加し、室温で1時間放置した。この反応は、405nmで測定した。
マウス
予防接種実験
生ウイルスにおける抗E抗体の測定
中和アッセイ
抗体依存性増強アッセイ
結論
同様に、二重突然変異体L107C及びA313Cは、EDE1抗体(図37)及びEDE2抗体(図38)に結合する安定した二量体を形成する。しかしながら、この二重突然変異体は、両端で固定されており、FLE抗体(図39)によってあまり認識されず、これはFLE反応の生成を促進しなかった免疫原を好み得る場合に理想的である。非FLE認識(図40)があまりないが、これも良好である。
図45は、A259C二量体に対して作り出された抗体が、依然として、ADE(DENV感染の抗体依存性増強)を生じ得ることを示す。A259C二量体はまた、FL−Abにも反応し、それ故に、強力なADEを生じ、EDE Abを取り換えるFL様Abを引き起こし得る。L107C/A313C二量体がADEを誘発するかどうかはまだ知られていない。どの構成成分がADEには重要であるかを試験する1つの可能性としては、DIIIの結合Abからの血清を枯渇させ、再度ADE試験を行うことである。
実施例18
EDE構築物または結合化合物を最適化するためのさらなる戦略
タンパク質折り畳み
prMレベルの低減
scFvの最適化
Claims (155)
- デング熱ウイルスエンベロープ二量体エピトープ(EDE)であって、前記EDEが、
a)デング熱ウイルスエンベロープポリペプチド二量体のポリペプチドに広がる、かつ/または
b)エンベロープタンパク質の二量体上に提示される、かつ/または
c)前記エンベロープポリペプチド二量体の連続的または非連続的な残基から形成され、
前記二量体が、DENV−1、DENV−2、DENV−3、及びDENV−4のうちのいずれか1つまたは2つからの、天然及び/または突然変異エンベロープポリペプチドのホモ二量体またはヘテロ二量体である、デング熱ウイルスエンベロープ二量体エピトープ(EDE)。 - 任意選択で請求項1に記載の、E−二量体エピトープ(EDE)であって、前記EDEが、安定化組換えデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質E外部ドメイン(sE)二量体であり、前記二量体が、
前記2つのsE単量体間での少なくとも1つのジスルフィド鎖間結合によって共有結合的に安定化される、かつ/または
前記2つのsE単量体間での少なくとも1つのスルフヒドリル反応性架橋剤によって共有結合的に安定化される、かつ/または
改変糖類を介して前記2つのsE単量体を結合することによって共有結合的に安定化される、かつ/または
任意にリンカー領域、任意にグリシンセリンリッチなリンカー領域が前記sE配列を分離しながら、単一ポリペプチド鎖として形成されることによって、共有結合的に安定化される、かつ/または
前記二量体界面でまたは各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、少なくとも1つのsE単量体のアミノ酸配列中の少なくとも1つのアミノ酸残基を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって、非共有結合的に安定化される、E−二量体エピトープ(EDE)。 - 前記組換えsE単量体が、配列番号132、配列番号133、配列番号134、配列番号135、ならびにH27F、H27W、L107C、F108C、H244F、H244W、S255C、A259C、T/S262C、T/A265C、L278F、L292F、L294N、A313C、及びT315Cの中から選択される少なくとも1つの突然変異、ならびに任意に、Q227N、E174N、及びD329Nの中から選択される少なくとも1つの突然変異を有する、それらの突然変異体sEからなる群から選択される、請求項1または請求項2に記載のEDE。
- 前記二量体が、各sE単量体の67位、及び任意に153位でグリコシル化される、請求項1〜3のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記2つのsE単量体間での少なくとも1つ、2つ、または3つのジスルフィド鎖間結合によって共有結合的に安定化される、請求項1〜4のいずれか一項に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異A259CまたはS255Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、前記残基259Cまたは255Cがジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、請求項5に記載のEDE。
- 請求項2に記載の前記突然変異A259Cを有する突然変異体sEと、請求項3に記載の前記突然変異S255Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基259C及び255Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、請求項5に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異F108C及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、または請求項2に記載の前記突然変異L107C及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、前記残基108C及び315Cまたは前記残基107C及び313Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、請求項5に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異F108C及びA313Cを有する突然変異体sEと、請求項3に記載の前記突然変異L107C及びT315Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基108C及び313Cが、前記2つのsE単量体間でのジスルフィド鎖間結合を介して前記残基315C及び107Cにそれぞれ結合している、請求項5に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異A259C、F108C、及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、前記突然変異S255C、F108C、及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、前記突然変異A259C、L107C、及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、ならびに前記突然変異A255C、L107C、及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体からなる群から選択され、前記残基259C、255C、108C、315C、107C、及び313Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して前記残基259C、255C、315C、108C、313C、及び107Cにそれぞれ結合している、請求項5に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異A259C、F108C、及びT315Cを有する突然変異体sEと、請求項3に記載の前記突然変異S255C、F108C、及びT315Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基259C、108C、及び315Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して前記残基255C、315C、及び108Cにそれぞれ結合している、請求項5に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異S255C、L107C、及びA313Cを有する突然変異体sEと、請求項3に記載の前記突然変異A259C、L107C、及びA313Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基255C、107C、及び313Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して前記残基259C、313C、及び107Cにそれぞれ結合している、請求項5に記載のEDE。
- 前記sE単量体間での少なくとも1つ、2つ、または3つのスルフヒドリル反応性架橋剤によって共有結合的に安定化される、請求項1〜12のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記スルフヒドリル反応性架橋剤が、マレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン、ハロゲン化アルキル、またはアジリジン化合物、アクリロイル誘導体、アリール化剤、またはチオール−ジスルフィド交換試薬からなる群から選択される、請求項12に記載のEDE。
- 前記マレイミドスルフヒドリル反応性架橋剤が、BMOE、BMB、BMH、TMEA、BM(PEG)2、BM(PEG)3、BMDB、DTME、ならびに好ましくは、BMH、BM(PEG)2、及びBM(PEG)3からなる群から選択される、請求項14に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異T/S262CまたはT/A265Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、前記残基262Cまたは265Cが、スルフヒドリル反応性架橋剤を介して一緒に結合している、請求項13〜15のいずれか一項に記載のEDE。
- 請求項3に記載の前記突然変異T/S262Cを有する突然変異体sEと、請求項3に記載の前記突然変異T/A265Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基262C及び265Cが、スルフヒドリル反応性架橋剤を介して一緒に結合している、請求項13〜15のいずれか一項に記載のEDE。
- sEの前記アミノ酸残基1〜9、25〜30、238〜282、96〜111、及び311〜318からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸残基がシステインに突然変異している、突然変異体sEと、sEの前記アミノ酸残基1〜9、25〜30、238〜282、96〜111、及び311〜318からなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸残基がシステインに突然変異している、突然変異体sEとのホモ二量体またはヘテロ二量体であり、前記突然変異したシステイン残基が、スルフヒドリル反応性架橋剤を介して一緒に結合している、請求項13〜15のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記組換えsEのうちの1つまたは前記2つの組換えsEが、H27F、H27W、H244F、H244W、及びL278Fからなる群から選択される少なくとも1つの突然変異を有する、請求項1〜18のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記組換えsEのうちの1つまたは前記2つの組換えsEが、L292F及びL294Nからなる群から選択される少なくとも1つの突然変異を有する、請求項1〜19のいずれか一項に記載のEDE。
- 突然変異体sEのホモ二量体またはヘテロ二量体であり、
−一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、前記突然変異したアミノ酸残基が、X官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、
−もう一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、前記突然変異したアミノ酸残基が、Y官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、
両方の突然変異した残基が、具体的にはクリック化学によって、第1のsE単量体の前記糖の前記X官能基をもう一方のsE単量体の前記糖の前記Y官能基と反応させることによって、前記改変糖類を介して一緒に結合している、請求項1〜20のいずれか一項に記載のEDE。 - 前記EDEが、安定化組換えデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質E外部ドメイン(sE)二量体、エンベロープタンパク質の二量体、もしくはその抗原部分、または異種骨格タンパク質内に保持された前記エンベロープポリペプチド二量体の連続的もしくは非連続的な残基を含み、任意に、単量体間の共有結合及び/または非共有結合のレベルが増加し、任意に、前記EDEが改善されたEDEである、請求項1〜21のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記EDEが、前記エンベロープタンパク質の二量化を促進するまたは安定化させる条件下で、エンベロープ外部ドメインを含み、任意に、前記エンベロープ外部ドメインが、二量化を促進するために高濃度で維持される、請求項1〜22のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記EDEが、前記DENV−1もしくはDENV−2ポリペプチド配列の位置E49、K64、Q77、W101、V122、N134、N153、T155、I161、A162、P169、T200、K202、E203、L308、K310、Q323、W391、F392のうちの1つ以上、またはデング熱ウイルスエンベロープタンパク質の等価残基、
及び/あるいは
前記DENV−2もしくはDENV−4ポリペプチド配列の位置
A71、C105、C74、D154、D249、D271、D309、D362、D98、E148、E311、E44、E71、E84、G102、G104 G106、G152、G156、G28、G29、G374、H158、H27、I113、I308、I46、K246、K247、K310、K323、K325 K47、L113、L45、L82、M278、N103、N153、N362、N67、N83、Q248、Q271、Q325、Q77、R2、R247、R323、R73、R99、S72、S81、T115、T155、T361、T46、T68、T69、T70、T72、V113、V114、V250、V309 V324、V97、W101のうちの1つ以上、
またはデング熱ウイルスエンベロープタンパク質の等価残基、を含み、
任意に、N153及び/またはN67が、グリコシル化され、
任意に、前記EDEが、位置W101及び少なくとも1つの他の位置を含む、請求項1〜23のいずれか一項に記載のEDE。 - 前記特定残基が、エンベロープタンパク質の天然二量体における前記残基と実質的に同様の空間的配置にある、請求項1〜24のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記EDEが、ドメインII側上のbストランド、及びドメインI側(前記二量体界面の向かいの)上の「150ループ」によって形成されたくぼみの中心に置かれた領域を含み、前記150ループが残基148〜159に広がり、ドメインIのbストランドE0及びF0を接続し、前記N153グリカンを担持し、これは前記二量体における前記パートナーサブユニットの融合ループを覆い、任意に、前記領域が、前記bストランド(前記N67グリカンを担持する残基67〜74)、すぐ上流の前記融合ループ及び残基(残基97〜106)、ならびに参照サブユニットのijループ(残基246〜249)を含み、前記参照サブユニットが前記融合ループに貢献する前記サブユニットであり、
任意に、前記EDEが、前記第2のサブユニットの前記150ループ及び前記N153グリカン鎖をさらに含み、
任意に、一方または両方の領域が、前記天然領域と実質的に同様の空間的配置にある、請求項1〜25のいずれか一項に記載のEDE。 - 前記EDEが、ビリオンまたはサブウイルス粒子またはウイルス様粒子の一部として提示される、請求項1〜26のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記EDEが、一旦、対象、好ましくはヒトに投与されると、抗体を作り出すことができ、前記抗体が、1種を超える血清型のデング熱ウイルスに結合することができ、任意に、4種すべての血清型のデング熱ウイルスに結合することができ、1種を超える血清型のデング熱ウイルスを中和することができ、任意に、4種すべての血清型のデング熱ウイルスを中和することができ、
かつ前記抗体が、任意に、4種すべての血清型のデング熱ウイルスを100%中和することができ、任意に、ヒト細胞及び昆虫細胞の両方で作られるウイルスを中和することができ、好ましくは、ヒト細胞及び昆虫細胞の両方で作られる4種すべての血清型のデング熱ウイルスを100%中和することができる、請求項1〜27のいずれか一項に記載のEDE。 - 前記EDEが安定化されるか、または前記二量体配置において、任意に、前記二量体の内向き面に結合するか、または前記二量体と関連するタグに結合する抗体によってさらに安定化される、請求項1〜28のいずれか一項に記載のEDE。
- 前記EDEが、単一ポリペプチドとして表され、任意に、前記2つのエンベロープ単量体が、リンカーによって分離され、任意に、前記リンカーが、グリシン及び/またはセリンリッチである、請求項1〜29のいずれか一項に記載のEDE。
- 請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDE、またはその免疫原断片をコードする核酸であって、任意に、前記核酸がイントロンを有さず、任意に、前記核酸が、前記EDEの単離または精製に有用なヌクレオチドをさらに含む、核酸。
- 請求項31に記載の核酸を含む、ベクター。
- 請求項31に記載の核酸、または請求項32に記載のベクターを含む宿主細胞であって、任意に、C6/36昆虫細胞、ヒト樹状細胞、CHO細胞、またはピキア・パストリス細胞である、宿主細胞。
- 請求項31に記載の核酸、または請求項32に記載のベクター、または請求項33に記載の宿主細胞によって形質転換される少なくとも1つの細胞を含む、非ヒトトランスジェニック動物。
- 請求項1〜20のいずれか一項に記載のEDEの合成のための方法であって、
a)請求項4〜11のいずれか一項に記載の2つの単一または複数のシステイン突然変異体sEを、酸化条件下で接触させるステップと、及び/または
b)2つのsE単量体を、請求項12〜17のいずれか一項に記載の少なくとも1つ、2つ、または3つのスルフヒドリル反応性架橋剤と接触させるステップと、及び/または
c)請求項20に記載のグリコシル化部位を有する2つのsE単量体を、クリック化学によって接触させるステップと、及び/または
d)少なくとも1つのsE単量体の前記アミノ酸配列において少なくとも1つのアミノ酸残基を、請求項18及び19のいずれか一項に記載のかさ高い側鎖アミノ酸と置換する2つのsE単量体と接触させるステップと、を含む、方法。 - 請求項35に記載のプロセスによって得られる、EDE。
- 請求項1〜30に記載のEDEの産生のためのプロセスであって、以下の段階:
I.請求項33に記載の細胞の適切な培地における培養、
II.前記EDEの回収、を含み、前記回収が、前記培養培地または前記培養細胞のいずれかからである、プロセス。 - 感受性のある哺乳動物対象におけるデング熱ウイルス感染の予防及び/または治療を目的とする免疫原性組成物を調製するための、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEの使用。
- 治療有効量の、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEを含む、デング熱ウイルスの免疫原性組成物。
- 薬剤として、好ましくはデング熱ウイルス感染を予防及び/または治療するための、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDE、または請求項32に記載の免疫原性組成物。
- 動物に免疫性を与えるための、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDE、または請求項32に記載の免疫原性組成物の使用。
- 前記二量体に対する中和抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞の調製のための、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEの使用。
- デング熱ウイルス感染に対するワクチン接種で用いるための、デング熱ウイルスの請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEまたはその免疫原性断片を示す、組成物。
- デング熱ウイルス感染に対するワクチン接種で用いるための、請求項31に記載のEDEをコードする核酸、もしくはその免疫原性断片、または請求項32に記載のベクター、または請求項33に記載の細胞。
- デング熱ウイルス感染に対するワクチン接種で用いるための、
d)請求項1〜30のいずれかに記載のEDEまたはその免疫原性断片、
e)請求項31に記載の核酸、
f)請求項32に記載のベクター、
g)請求項33に記載の細胞
のうちの任意の1つ以上を含む、組成物。 - a)請求項1〜30のいずれかに記載のEDEまたはその免疫原性断片、
b)請求項31に記載の核酸、
c)請求項32に記載のベクター、
d)請求項33に記載の細胞が、
1種を超える、任意に2種、任意に3種、任意に4種の血清型のデング熱ウイルスからのものであるか、またはそれらのEDEをコードする、請求項43及び45のうちのいずれか一項に記載の組成物。 - a)請求項1〜30のいずれかに記載のEDEまたはその免疫原性断片、
b)請求項31に記載の核酸、
c)請求項32に記載のベクター、
d)請求項33に記載の細胞が、
4種すべての血清型のデング熱ウイルスを中和する抗体を作り出すことができる単一EDEであるか、またはそれをコードし、任意に、作り出された前記抗体が、4種すべての血清型のデング熱ウイルスを完全に中和することができ、任意に、昆虫細胞及びヒト細胞で作られる4種すべての血清型のデング熱ウイルスを完全に中和することができる、請求項43及び45のうちのいずれか一項に記載の組成物。 - デング熱ウイルスに対するワクチンのために適当な抗原を選択する方法であって、前記方法が、候補抗原に応答する対象において作製された1つ以上の抗体の特徴付けを含み、任意に、前記候補抗原が、請求項1〜30のいずれかに記載のEDEと結合することが知られている抗体のパネルに結合することがこれまでに見出されている、方法。
- 前記抗体が、前記候補抗原に曝露された対象の分類された単一形質細胞から得られる、請求項48に記載の方法。
- 前記主要抗体(複数を含む)が、任意に、ウエスタンブロットにおいて、デング熱エンベロープタンパク質を含む直線状エピトープを認識する場合、前記候補抗原がワクチン抗原として適していないと見なされる、請求項48及び49のいずれか一項に記載の方法。
- 前記主要抗体(複数を含む)が、請求項1〜30のいずれかに記載のEDEに結合する場合、前記候補抗原がワクチン接種で用いるのに適していると見なされる、請求項48〜50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、2種以上の異なる血清型のデング熱ウイルスの、請求項1〜30のいずれかに記載のエンベロープタンパク質またはEDEに対する交差反応について評価される、請求項48〜51のいずれか一項に記載の方法。
- 前記候補抗原が、デング熱エンベロープタンパク質の安定化二量体である、請求項48〜52のいずれか一項に記載の方法。
- デング熱ウイルスワクチン接種のための患者の必要性を評価するための方法であって、前記方法が、前記対象における抗EDE抗体及び抗融合ループ抗体のレベルの同定を含み、前記EDEが請求項1〜30のうちのいずれかに記載される通りである、方法。
- 前記患者が、抗EDE抗体を有すると判定される場合、ワクチン接種が不要である可能性が高い、請求項54に記載の方法。
- 前記患者が抗EDE抗体を有すると判定される場合、前記患者にブースト投与が供される、請求項54に記載の方法。
- 前記患者が抗EDE抗体を有さない場合、全ワクチン接種が必要とされる、請求項54に記載の方法。
- デング熱ウイルスから保護するためのワクチン接種戦略であって、
a)4種すべての血清型に対して抗体を作り出すことができる請求項1〜30のいずれかに記載のEDE、または請求項43及び45〜47のうちのいずれか一項に記載の組成物、または請求項44に記載の核酸もしくはベクターの単回投与、任意に、続いて、弱毒化したデング熱ウイルスの投与、または
b)請求項1〜30のいずれかに記載の2種の血清型からの2つのEDEの投与、続いて、その他の2種の血清型からのEDEの投与、任意に、続いて、弱毒化したデング熱ウイルスの投与、または
c)弱毒化したデング熱ウイルスの投与、続いて、4種すべての血清型に対して抗体を作り出すことができる請求項1〜30のいずれかに記載のEDEの投与、または
d)4種すべての血清型に対して抗体を作り出すことができる請求項1〜30のいずれかに記載のEDEの投与、続いて、弱毒化したデング熱ウイルスの投与、または
e)弱毒化したデング熱ウイルスの投与、続いて、請求項1〜30のいずれかに記載の2種の血清型からの2つのEDEの投与、続いて、その他の2種の血清型からのEDEの投与、を含む、ワクチン接種戦略。 - 任意に、前記化合物、核酸、ベクター、または組成物が、デング熱ウイルス、任意に、弱毒化したデング熱ウイルス、及び/またはデング熱ウイルス様粒子の投与前または投与後の投与のためのものであり、前記デング熱ウイルスまたはデング熱ウイルス様粒子が1種以上の血清型のデング熱ウイルスの一群であり得る、デング熱ウイルス感染に対するワクチン接種のためのブースト戦略で用いるための、請求項43及び45〜47に記載の組成物、または請求項44に記載の核酸もしくはベクター。
- 請求項1〜20のいずれか一項に記載の安定化組換えsE二量体である前記EDEに対する単離された中和抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその断片が、残基67〜74、残基97〜106、残基307〜314、残基148〜159、及び残基243〜251からなるデング熱ウイルスの糖タンパク質E外部ドメインの5つのポリペプチドセグメントに結合する、抗体またはその抗原結合断片。
- 前記sE残基N67グリカンに結合する、請求項60に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- デング熱ウイルスのビリオン依存性エピトープを単独に認識する、請求項60または61に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- Fab断片である、請求項60〜62のいずれか一項に記載の断片。
- 残基148〜159、好ましくは前記sE残基N153グリカンからなる前記sEポリペプチドセグメントにさらに結合する、請求項60〜63のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号5〜16からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR領域を含む、請求項64に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号5、6、及び7の前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項64に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号10の前記アミノ酸配列、任意に配列番号8及び9の前記アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、請求項66に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号17の前記重鎖可変領域及び配列番号18の前記軽鎖可変領域、または配列番号19の前記重鎖可変領域及び配列番号20の前記軽鎖可変領域を含む、請求項60に記載の抗体またはその断片。
- 前記sE残基K310にさらに結合する、請求項61〜631のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号21〜32からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するCDR領域を含む、請求項69に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号21、22、及び23の前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号24、25、及び26の前記アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項70に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号27、28、及び29の前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号30、31、及び32の前記アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項70に記載の抗体またはその断片。
- 配列番号33の前記重鎖可変領域及び配列番号34の前記軽鎖可変領域、または配列番号35の前記重鎖可変領域及び配列番号36の前記軽鎖可変領域を含む、請求項69に記載の抗体またはその断片。
-
a)哺乳動物を請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEまたは請求項39に記載の免疫原性組成物と接触させるステップと、
b)前記哺乳動物由来の1つ以上の血清試料中の前記EDEを対象とする抗体の存在を検出するステップと、
c)前記哺乳動物から膵臓細胞を採取するステップと、
d)ハイブリドーマ細胞を産生するために、前記膵臓細胞を骨髄腫細胞と融合させるステップと、
e)前記抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞を特定するステップと、
f)前記抗体を産生することができる前記ハイブリドーマ細胞を培養するステップと、
g)任意に、前記抗体を単離するステップと、を含む、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体の産生方法。 - 請求項74に記載のプロセスによって得られる、抗体。
- 請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体を発現することができる、ハイブリドーマ細胞株。
- 1種を超える血清型のデング熱ウイルス、任意に2種の血清型のデング熱ウイルス、任意に3種の血清型のデング熱ウイルス、任意に4種の血清型のデング熱ウイルス、任意にすべての血清型のデング熱ウイルスを中和する、化合物。
- E二量体エピトープ(EDE)に結合する、化合物。
- 前記化合物が、ポリペプチド、任意にその抗体または抗原結合部分であり、任意に前記ポリペプチドが切断ポリペプチドであるか、または前記ポリペプチドがより大きいポリペプチド内である、請求項77または78のいずれかに記載の化合物。
- 前記EDEが、
a)デング熱ウイルスエンベロープポリペプチド二量体のポリペプチドに広がる、かつ/または
b)エンベロープタンパク質の二量体上に提示される、かつ/または
c)前記エンベロープポリペプチド二量体の連続的または非連続的な残基から形成され、
前記二量体が、DENV−1、DENV−2、DENV−3、及びDENV−4のうちのいずれか1つまたは2つからの、天然及び/または突然変異エンベロープポリペプチドのホモ二量体またはヘテロ二量体である、請求項77〜79のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記EDEが、安定化組換えデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質E外部ドメイン(sE)二量体、エンベロープタンパク質の二量体、もしくはその抗原部分、または異種骨格タンパク質内に保持された前記エンベロープポリペプチド二量体の連続的もしくは非連続的な残基を含み、任意に、単量体間の共有結合及び/または非共有結合のレベルが増加し、任意に、前記EDEが改善されたEDEである、請求項77〜80のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEがビリオンの一部ではない、請求項77〜81のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、前記エンベロープタンパク質の二量化を促進するまたは安定化させる条件下で、エンベロープ外部ドメインを含み、任意に、前記エンベロープ外部ドメインが、二量化を促進するために高濃度で維持される、請求項77〜82のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、安定化したEDEを含み、エンベロープタンパク質の前記二量体 前記エンベロープタンパク質が前記二量体配置において安定性を増加するように操作されている、請求項77〜83のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記安定化したEDEが、
r)前記単量体が、配列番号49の前記DENV−1 sE、配列番号51の前記DENV−2 sE 配列番号53の前記DENV−3 sE、配列番号55の前記DENV−4 sE、ならびにH27F、H27W、L107C、F108C、H244F、H244W、S255C、A259C、T/S262C、T/A265C、L278F、L292F、L294N、A313C、及びT315Cの中から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)を有するその突然変異体sEからなる群から選択され、任意に、その前記突然変異体sEがQ227N、E174N、及びD329Nの中から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)、好ましくは前記3つの突然変異Q227N、E174N、及びD329Nをさらに有する、二量体、
s)前記二量体が、上に定義される2つの同一の組換えsEのホモ二量体、または上に定義される2つの異なる組換えsEのヘテロ二量体であり得、前記二量体が好ましくは、ホモ二量体であり、例えば、上に定義されるDENV−1 sEとDENV−2 sEとのヘテロ二量体であり得る、二量体である。それはまた、上に定義されるDENV−1 sEのヘテロ二量体及びDENV−1 sEの突然変異体sEであり得る、二量体、
t)各sE単量体の67位(Asn67グリカン)及び/または153位(Asn153グリカン)で、好ましくは各単量体の少なくとも67位(Asn67グリカン)でグリコシル化される、二量体、
u)前記2つのsE単量体間での少なくとも1つ、2つ、または3つのジスルフィド鎖間結合によって共有結合的に安定化される、二量体、
v)上に定義される前記突然変異A259CまたはS255Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、前記残基259Cまたは255Cがジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、二量体、
w)上に定義される前記突然変異A259Cを有する突然変異体sEと、上に定義される前記突然変異S255Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基259C及び255Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、二量体、
x)上に定義される前記突然変異F108C及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、または上に定義される前記突然変異L107C及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、前記残基108C及び315Cまたは前記残基107C及び313Cが、ジスルフィド鎖間結合を介して一緒に結合している、二量体、
y)上に定義される前記突然変異F108C及びA313Cを有する突然変異体sEと、上に定義される前記突然変異L107C及びT315Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基108C及び313Cが、それぞれ、前記2つのsE単量体間でのジスルフィド鎖間結合を介して前記残基315C及び107Cに結合している、二量体、
z)上に定義される、前記突然変異A259C、F108C、及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、前記突然変異S255C、F108C、及びT315Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、前記突然変異A259C、L107C、及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体、ならびに前記突然変異A255C、L107C、及びA313Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体からなる群から選択され、前記残基259C、255C、108C、315C、107C、及び313Cが、それぞれ、ジスルフィド鎖間結合を介して前記残基259C、255C、315C、108C、313C、及び107Cに結合している、二量体、
aa)上に定義される前記突然変異A259C、F108C、及びT315Cを有する突然変異体sEと、上に定義される前記突然変異S255C、F108C、及びT315Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基259C、108C、及び315Cが、それぞれ、ジスルフィド鎖間結合を介して前記残基255C、315C、及び108Cに結合している、二量体、
bb)上に定義される前記突然変異S255C、L107C、及びA313Cを有する突然変異体sEと、上に定義される前記突然変異A259C、L107C、及びA313Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基255C、107C、及び313Cが、それぞれ、ジスルフィド鎖間結合を介して前記残基259C、313C、及び107Cに結合している、二量体、
cc)前記sE単量体間での少なくとも1つ、2つ、または3つのスルフヒドリル反応性架橋剤(チオール反応性架橋剤とも呼ばれる)によって共有結合的に安定化される、二量体、
dd)上に定義される前記突然変異T/S262CまたはT/A265Cをそれぞれ有する突然変異体sEのホモ二量体であり、前記残基262Cまたは265Cが、スルフヒドリル反応性架橋剤によって一緒に結合している、二量体、
ee)上に定義される前記突然変異T/S262Cを有する突然変異体sEと、上に定義される前記突然変異T/A265Cを有する突然変異体sEとのヘテロ二量体であり、前記残基262C及び265Cが、スルフヒドリル反応性架橋剤によって一緒に結合している、二量体、
ff)突然変異体sEのホモ二量体またはヘテロ二量体であり、sEの前記アミノ酸残基1〜9、25〜30、238〜282、96〜111 311〜318のうちの少なくとも1つが、システインに突然変異し(置換され)、sEの前記アミノ酸残基1〜9、25〜30、238〜282、96〜111 311〜318のうちの少なくとも1つが、システインに突然変異し(置換され)、前記突然変異したシステイン残基が、スルフヒドリル反応性架橋剤によって一緒に結合している、二量体、
gg)改変糖類を介して前記2つの単量体に結合することによって共有結合的に安定化される、二量体。
hh)突然変異体sEのホモ二量体またはヘテロ二量体であり、
−一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、前記突然変異したアミノ酸残基が、X官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、もう一方のsE単量体が、グリコシル化部位を導入する少なくとも1つの突然変異を有し、前記突然変異したアミノ酸残基が、Y官能基を担持する改変糖でグリコシル化され、両方の突然変異した残基が、具体的にはクリック化学によって、第1のsE単量体の前記糖の前記X官能基をもう一方のsE単量体の前記糖の前記Y官能基と反応させることによって、前記改変糖類を介して一緒に結合している、二量体、
r)前記二量体界面で前記二量体の空洞を充填させることによって、1つまたは前記2つの単量体、好ましくは前記2つの単量体の前記アミノ酸配列において少なくとも1つのアミノ酸を、かさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって非共有結合的に安定化される、二量体、
s)前記二量体界面でまたは各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、空洞を形成する領域内で、少なくとも1つのsE単量体の前記アミノ酸配列中の少なくとも1つのアミノ酸残基を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって非共有結合的に安定化される。かかる置換が、前記2つのsE単量体間での疎水性相互作用を増加させることができる、二量体、
t)上に定義される2つの組換えsEのホモ二量体またはヘテロ二量体、好ましくはホモ二量体であり、前記組換えsEのうちの1つまたは前記2つの組換えsEが、H27F、H27W、H244F、H244W、及びL278Fからなる群から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)を有する、二量体、
u)各単量体のドメイン1(D1)/ドメイン3(D3)リンカーにおいて、1つまたは前記2つの、好ましくは前記2つの単量体の前記アミノ酸配列中のアミノ酸を、少なくとも1つのかさ高い側鎖アミノ酸と置換することによって非共有結合的に安定化される、二量体、
v)上に定義される2つの組換えsEのホモ二量体またはヘテロ二量体、好ましくはホモ二量体であり、前記組換えsEのうちの1つまたは前記2つの組換えsEが、L292F及びL294Nからなる群から選択される少なくとも1つの突然変異(置換)を有する、二量体、のうちの任意の1つ以上である、任意の請求項84に記載の化合物。 - 前記EDEが、前記DENV−1またはDENV−2
ポリペプチド配列の位置E49、K64、Q77、W101、V122、N134、N153、T155、I161、A162、P169、T200、K202、E203、L308、K310、Q323、W391、F392のうちの1つ以上、またはデング熱ウイルスエンベロープタンパク質の等価残基、
及び/あるいは
前記DENV−2もしくはDENV−4ポリペプチド配列の位置A71、C105、C74、D154、D249、D271、D309、D362、D98、E148、E311、E44、E71、E84、G102、G104G106、G152、G156、G28、G29、G374、H158、H27、I113、I308、I46、K246、K247、K310、K323、K325 K47、L113、L45、L82、M278、N103、N153、N362、N67、N83、Q248、Q271、Q325、Q77、R2、R247、R323、R73、R99、S72、S81、T115、T155、T361、T46、T68、T69、T70、T72、V113、V114、V250、V309 V324、V97、W101のうちの1つ以上、
またはデング熱ウイルスエンベロープタンパク質の等価残基、を含み、
任意に、N153及び/またはN67が、グリコシル化され、
任意に、前記EDEが、位置W101及び少なくとも1つの他の位置を含む、請求項77〜85のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記特定残基が、エンベロープタンパク質の天然二量体における前記残基と実質的に同様の空間的配置にある、請求項77〜86のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、ドメインII側上のbストランド、及び(前記二量体界面の向かいにある)ドメインI側上の「150ループ」によって形成されたくぼみの中心に置かれた領域を含み、前記150ループが残基148〜159に広がり、ドメインIのbストランドE0及びF0を接続し、前記N153グリカンを担持し、前記二量体において前記パートナーサブユニットの融合ループを覆い、任意に、前記領域が、前記bストランド(前記N67グリカンを担持する残基67〜74)、すぐ上流の前記融合ループ及び残基(残基97〜106)、ならびに前記参照サブユニットの前記ijループ(残基246〜249)を含み、前記参照サブユニットが前記融合ループに貢献する前記サブユニットであり、
任意に、前記EDEが、前記第2のサブユニットの前記150ループ及び前記N153グリカン鎖をさらに含み、
任意に、一方または両方の領域が、前記天然領域と実質的に同様の空間的配置にある、請求項77〜87のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記EDEが、ビリオンまたはサブウイルス粒子またはウイルス様粒子の一部として提示される、請求項77〜88のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、一旦、対象、好ましくはヒトに投与されると、抗体を作り出すことができ、前記抗体が、1種を超える血清型のデング熱ウイルスに結合することができ、任意に、4種すべての血清型のデング熱ウイルスに結合することができ、1種を超える血清型のデング熱ウイルスを中和することができ、任意に、4種すべての血清型のデング熱ウイルスを中和することができ、
かつ前記抗体が、任意に、4種すべての血清型のデング熱ウイルスを100%中和することができ、任意に、ヒト細胞及び昆虫細胞の両方で作られるウイルスを中和することができ、好ましくは、ヒト細胞及び昆虫細胞の両方で作られる4種すべての血清型のデング熱ウイルスを100%中和することができる、請求項77〜89のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記EDEが安定化されるか、または前記二量体配置において、任意に、前記二量体の内向き面に結合するか、または前記二量体と関連するタグに結合する抗体によってさらに安定化される、請求項77〜90のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、単一ポリペプチドとして表され、任意に、前記2つのエンベロープ単量体が、リンカーによって分離され、任意に、前記リンカーが、グリシン及び/またはセリンリッチである、請求項77〜91のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、1種以上の血清型の前記デング熱ウイルスの、前記エンベロープタンパク質の前記二量体界面で四次構造依存性エピトープを含む、請求項77〜92のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、前記エンベロープタンパク質の二量体の前記N67グリカン鎖、または前記Eタンパク質の二量体の前記N153グリカン鎖のいずれか、または前記エンベロープタンパク質の二量体の前記N67グリカン鎖及び前記N153グリカン鎖の両方を接触させる、請求項77〜93のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が抗体である場合、前記CDR H2が前記N67グリカン鎖と相互作用する、請求項77〜94のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、前記ドメインIIIの残基K310を含む、請求項77〜95のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、前記融合ループにのみ結合しない、請求項77〜96のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記EDEが、ビリオンまたはサブウイルス粒子またはウイルス様粒子の一部として提示される、請求項77〜97のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、変性型である場合、前記エンベロープタンパク質に結合しない、請求項77〜98のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、
a)フリン活性を欠いている細胞中で作製される、及び/または
b)低pHで、デング熱ウイルスに結合しない、請求項77〜99のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記化合物が抗体である場合、任意に、前記抗体が、重鎖配列番号1及び軽鎖配列番号37、重鎖配列番号2及び軽鎖配列番号38、重鎖配列番号3及び軽鎖配列番号39、または重鎖配列番号4及び軽鎖配列番号40のうちの任意の1つのタンパク質配列、または重鎖配列番号1及び軽鎖配列番号37、重鎖配列番号2及び軽鎖配列番号38、重鎖配列番号3及び軽鎖配列番号39、または重鎖配列番号4及び軽鎖配列番号40に対して少なくとも90%の相同性を有する配列を含む、請求項77〜100のいずれか一項に記載の化合物。
- 存在する場合、以下の残基が、
配列番号1−52T、54E、56D、57S、58A、65K、66G、69T、82E、84N、85S、100Y、102N、103F、104Y、105Y 106Y、
配列番号2−54G、55N、57N、59K、62Q、65Q、66G、94R、98R、99F、100Y、101Y、102D、103S、10rT、106Y、107Y、108P、109D、110S、117D、118V、
配列番号3−2V、28S、31N、54D、56S、57T、58R、65K、66G、94R、98R、99F、100Y、101Y、102D、103S、104T、106Y、107Y、108P、109D、110S、117D、118V、
配列番号4−2V、28T、31S、54D、56S、57S、58T、66G、68F、69M、94R、98R、99Y、100Y、101Y、102D、103S、104T、106Y、107Y、108P、109D、110N、117D、118V、
配列番号37−30S、31T、32F、49Y、50D、52S、54R、66R、91R、92Y、93N、94W、
配列番号38−26S、27S、30G、31G、32F、33N、34Y、52D、54T、55S、56R、62S、95S、96R、97G、
配列番号39−51Y、56R、57P、58S、59G、96S、97R、
配列番号40−51Y、56R、57P、58S、97Kである、請求項101に記載の化合物。 - 前記化合物が、タンパク質、任意に、抗体またはその抗原結合部分であり、前記抗体またはその抗原結合部分が、以下のアミノ酸配列のうちの1つ以上、または1つもしくは2つのアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失を有する、
配列番号5もしくは配列番号8もしくは配列番号11もしくは配列番号14
及び/または
配列番号6もしく配列番号9もしく配列番号12もしく配列番号15
及び/または
配列番号7もしくは配列番号10もしくは配列番号13もしくは配列番号16
及び/または
配列番号17もしくは配列番号20もしくは配列番号23もしくは配列番号26
及び/または
配列番号18もしくは配列番号21もしくは配列番号24もしくは配列番号27
及び/または
配列番号19もしくは配列番号22もしくは配列番号25もしくは配列番号28、のアミノ酸配列のうちの1つ以上を含む、請求項77〜102のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記化合物が、タンパク質、任意に、抗体またはその抗原結合部分であり、前記重鎖の前記CDR領域が、以下の酸配列、または1つもしくは2つのアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失を有する、
配列番号5及び配列番号6及び配列番号7
または
配列番号8もしくは配列番号9もしくは配列番号10
または
配列番号11もしくは配列番号12もしくは配列番号13
または
配列番号14もしくは配列番号15もしくは配列番号16のアミノ酸配列のうちの1つ以上を含む、請求項77〜103のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記化合物が、タンパク質、任意に、抗体またはその抗原結合部分であり、前記軽鎖の前記CDR領域が、以下の配列、または1つもしくは2つのアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失を有する、
配列番号17及び配列番号18及び配列番号19
または
配列番号20もしくは配列番号21もしくは配列番号22
または
配列番号23もしくは配列番号24もしくは配列番号25
または
配列番号26もしくは配列番号27もしくは配列番号28のアミノ酸配列のうちの1つ以上を含む、請求項77〜103のいずれか一項に記載の化合物。 - 以下の残基が、存在する場合、
配列番号6の残基3がTであり、残基5がEであり、残基7がDであり、残基8がSであり、残基9がAであり、残基16がKであり、残基17がGであり、
配列番号7の残基2がYであり、残基4がNであり、残基5がFであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がYであり、
配列番号9の残基5がGであり、残基6がNであり、残基10がKであり、残基13がQであり、残基16がQであり、残基17がDであり、
配列番号10の残基5がDであり、残基6がYであり、残基8がDであり、残基10がWであり、残基11がFであり、残基12がPであり、残基14がLであり、
配列番号11の残基1がNであり、
配列番号12の残基5がDであり、残基7がSであり、残基8がTであり、残基9がRであり、残基16がKであり、残基17がGであり、
配列番号13の残基4がRであり、残基5がFであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がDであり、残基9がSであり、残基10がTであり、残基12がYであり、残基13がYであり、残基14がPであり、残基15がDであり、残基16がSであり、
配列番号14の残基1がSであり、
配列番号15の残基5がDであり、残基7が及びSであり、残基8がSであり、残基9がTであり、残基17がGであり、
配列番号16の残基4がRであり、残基5がYであり、残基6がYであり、残基7がYであり、残基8がDであり、残基9がSであり、残基10がTであり、残基12がYであり、残基13がYであり、残基14がPであり、残基15がDであり、残基16がNであり、
配列番号17の残基7がSであり、残基8がTであり、残基9がFであり、
配列番号18の残基1がDであり、残基3がSであり、残基5がRであり、
配列番号19の残基3がRであり、残基4がYであり、残基5がNであり、
配列番号20の残基4がSであり、残基5がSであり、残基8がGであり、残基9がGであり、残基10がFであり、残基11がNであり、残基12がYであり、
配列番号21の残基1がDであり、残基3がTであり、残基4がSであり、残基5がRであり、
配列番号22の残基5がSであり、残基6がRであり、残基7がGであり、
配列番号24の残基5がRであり、残基6がPであり、残基7がSであり、
配列番号25の残基6がSであり、残基7がRであり、
配列番号27の残基5がRであり、残基6がPであり、残基7がSである、請求項103〜104のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記化合物が、さらなる治療剤またはレポーター部分に接合される、請求項77〜106のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、1種以上の血清型のデング熱ウイルスを中和する、任意に、1種以上の血清型のデング熱ウイルスを80%または90%または98%または100%中和する、請求項77〜107のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、すべての血清型のデング熱ウイルスを中和する、任意に、1種以上の血清型のデング熱ウイルスを80%または90%または98%または100%中和する、任意に、すべての血清型のデング熱ウイルスを80%または90%または98%または100%中和する、任意に、すべての血清型のデング熱ウイルスを同じ濃度の化合物で100%中和する、請求項77〜108のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、1種以上の血清型のデング熱ウイルスを0.5ug/mlのIC50濃度で中和する、任意に、1種以上の血清型のデング熱ウイルスを0.5ug/mlのIC50で80%または90%または100%中和する、請求項77〜109のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、すべての血清型のデング熱ウイルスを0.5ug/mlのIC50濃度で中和する、任意に、すべての血清型のデング熱ウイルスを80%または90%または98%または100%中和する、請求項77〜110のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物がタンパク質、任意に抗体またはその抗原結合部分である場合、前記抗原結合部分がFv断片、Fab様断片(例えば、Fab断片、Fab’断片、もしくはF(ab)2断片)、またはドメイン抗体である、請求項77〜111のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、C6/36昆虫細胞またはヒト樹状細胞中で作製されたデング熱ウイルスを中和する、請求項77〜112のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、C6/36昆虫細胞及びヒト樹状細胞中で作製されたウイルスを同じレベルまで中和する、任意に、前記抗体またはその抗原結合部分が、C6/36昆虫細胞及びヒト樹状細胞中で作製されたデング熱ウイルスを完全に中和する、請求項77〜113のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物がモノクローナル抗体である、請求項77〜114のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物がポリクローナル抗体またはその抗原結合部分である、請求項77〜114のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、混合物または抗体、任意に、
a)モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の混合物、または
b)ポリクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の混合物、または
c)混合物、またはモノクローナル及びポリクローナル抗体もしくはその抗原結合部分、を含む組成物の一部である、請求項77〜114のいずれか一項に記載の化合物。 - 前記化合物が、組換え抗体である、請求項77〜117のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、さらなる薬剤に接合され、任意に、前記さらなる薬剤が治療剤、任意に抗ウイルス剤であるか、または前記さらなる薬剤が安定化剤、任意に、PEGである、請求項77〜118のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、組成物、任意に薬学的組成物の一部であり、任意に、前記組成物が、1種以上のさらなる治療剤、任意に、Fc受容体結合を防ぐ薬剤をさらに含む、請求項77〜119のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記抗体またはその断片または前記化合物が薬学的組成物の一部である、請求項60〜73のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜120のいずれか一項に記載の化合物。
- 請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜120のいずれか一項に記載の化合物。及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
- 前記化合物が、
a)ヒト細胞株、任意にCHO細胞、または
b)哺乳動物、任意にヒト、または
c)微生物、または
d)昆虫細胞株から単離または精製される、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜120のいずれか一項に記載の化合物。 - 請求項1〜30のいずれかに記載のEDEを含む抗原に応答して対象において作製された抗体またはその断片の特徴付けを含む、デング熱ウイルスの予防または治療で用いるための適当な抗体またはその断片を選択する方法。
- 前記抗体が、1種以上の血清型のデング熱ウイルス、任意に3種血清型、任意に4種血清型の請求項1〜30のいずれかに記載のEDEに結合するかどうかを判定するステップをさらに含む、請求項124に記載の方法。
- 前記抗体が、1種以上の血清型のデング熱ウイルス、任意に2種以上の血清型のデング熱ウイルス、任意に3種血清型、任意に4種血清型からの前記デング熱ウイルスを中和するかどうかを判定するステップをさらに含む、請求項124または125に記載の方法。
- 前記抗体が、昆虫細胞、任意にC6/36細胞中で作製されたデング熱ウイルス、及び初代ヒト細胞、任意にCHO細胞中で作製されたデング熱ウイルスを中和するかどうかを判定するステップをさらに含む、請求項126に記載の方法。
- デング熱ウイルスの予防または治療で用いるための抗体を選択する方法であって、デング熱ウイルスまたは請求項1〜30のいずれかに記載のEDEに曝露される対象からの、その変性型で前記エンベロープタンパク質に結合することができない抗体を特定することを含む、方法。
- 核酸であって、
a)請求項60〜73のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはタンパク質である場合、請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、あるいは
b)請求項124〜127のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体、をコードし、
任意にイントロンを有さない、核酸。 - 請求項129に記載の核酸を含む、ベクター。
- 請求項129に記載の核酸または請求項130に記載のベクターを含み、任意に、C6/36昆虫細胞、ヒト樹状細胞、CHO細胞、またはピキア・パストリス細胞である、宿主細胞。
- 請求項129に記載の核酸、または請求項130に記載のベクター、または請求項131に記載の宿主細胞によって形質転換される少なくとも1つの細胞を含む、非ヒトトランスジェニック動物。
- a)請求項60〜73のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはタンパク質である場合、請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、あるいは
b)請求項124〜127のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体、の産生のためのプロセスであって、
以下の段階:
I.請求項131に記載の細胞の適切な培地中の培養
II.産生された前記抗体または抗原結合部分の回収、を含み、前記回収が前記培養培地または前記培養細胞のいずれかからである、プロセス。 - 請求項60〜73のいずれかに記載の抗体もしくはその断片、またはタンパク質である場合、請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、あるいは請求項124〜127のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体、の産生のためのプロセスであって、以下の段階:
a.請求項1〜30のいずれかに記載のEDEの対象への投与、
b.前記タンパク質または前記対象の血液からの抗体の回収及び単離、を含む、プロセス。 - 薬剤として用いるための、好ましくはデング熱ウイルス感染を予防及び/または治療するための、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項122に記載の薬学的組成物。
- 請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDE、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEを含む、またはそれらからなる、診断薬剤。
- 対象におけるデング熱ウイルス感染を診断または観察するためのキットであって、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDE、または請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、及び適切な診断試薬を含む、キット。
- 対象におけるデング熱ウイルス感染を診断または観察するための、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDE、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項134に記載の診断薬剤の使用。
- 対象におけるデング熱ウイルス感染を診断するためのインビトロ方法であって、
a)前記対象からの適切な生体試料を、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項136に記載の抗体もしくはその断片を含むまたはそれからなる診断薬剤とインビトロで接触させるステップと、
b)前記生体試料中のデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの存在または不在を判定するステップと、を含み、
前記デング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの存在は、前記対象がデング熱ウイルス感染を有することを示す、方法。 - 対象におけるデング熱ウイルス感染を診断するためのインビトロ方法であって、
a)前記対象からの適切な生体試料を、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEとインビトロで接触させるステップと、
b)前記生体試料中の前記二量体を対象とする抗体の存在または不在を判定するステップと、を含み、
前記抗体の存在は、前記対象がデング熱ウイルス感染を有することを示す、方法。 - 対象におけるデング熱ウイルス感染の進行または回帰を観察するためのインビトロ方法であって、
a)前記対象からの適切な生体試料を、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項136に記載の抗体を含むまたはそれからなる診断薬剤とインビトロで接触させるステップと、
b)前記生体試料中のデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの量を判定するステップと、
c)ステップ(b)において判定された量を、前記対象において以前に得られたデング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの量と比較するステップと、を含み、
デング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの量の有意な増加が前記デング熱ウイルス感染の進行のマーカーを構成し、デング熱ウイルスエンベロープ糖タンパク質Eの有意な減少が前記デング熱ウイルス感染の回帰のマーカーを構成する、方法。 - 対象におけるデング熱の時間発展を予測するためのインビトロ方法であって、
a)前記対象からの適切な生体試料を、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEとインビトロで接触させるステップと、
b)前記生体試料中の前記二量体を対象とする抗体を中和する量を判定するステップと、
c)ステップ(b)において判定された量を、前記対象において以前に得られた前記二量体を対象とする抗体を中和する量と比較するステップと、を含み、
前記二量体を対象とする抗体を中和する量の有意な増加が前記疾患の時間発展の好ましい予後のマーカーを構成する、方法。 - デング熱ウイルスの予防注射を受けた対象におけるデング熱ウイルス感染のワクチン接種プロトコルの成功を観察するためのインビトロ方法であって、
a)前記対象からの適切な生体試料を、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEとインビトロで接触させるステップと、
b)前記生体試料中の前記二量体を対象とする抗体を中和する量を判定するステップと、
c)ステップ(b)において判定された量を、前記対象において以前に得られた前記二量体を対象とする抗体の量と比較するステップと、を含み、
前記二量体を対象とする抗体を中和する量の有意な増加が前記ワクチン接種プロトコルの成功のマーカーを構成する、方法。 - 対象におけるデング熱ウイルス感染を治療または予防する方法であって、請求項60〜73のいずれか一項に記載の1つ以上の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の1つ以上の化合物、または請求項124〜128のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクターを、前記対象に投与することを含む、方法。
- デング熱ウイルス感染の予防または治療で用いるための、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項124〜128のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクター。
- 生デング熱ワクチン試験で用いるための、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項124〜127のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクター。
- デング熱ウイルス感染の治療または予防で用いるための、請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項124〜128のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクターを含む、組成物。
- 1つ以上の薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項147に記載の組成物。
- 1つ以上の治療剤、任意に1つ以上のT細胞ワクチン、任意にさらなる抗ウイルス剤をさらに含む、請求項147または148のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項124〜128のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクターを含む組成物、または請求項147〜148に記載の組成物で治療、またはその用量の増加を必要とする可能性があるデング熱ウイルス感染を患っている患者を特定するための方法であって、前記対象における抗EDE抗体及び抗融合ループ抗体のレベルの決定を含み、前記EDEが請求項1〜30のいずれかに記載される通りである、方法。
- 前記対象が主に抗融合ループ抗体を有する場合、前記対象が前記抗体または組成物で治療、任意に高用量でそれを必要とする、請求項150に記載の方法。
- 前記対象が抗EDE抗体がないかまたは特に低レベルの抗EDE抗体を有する場合、前記対象が高用量の前記抗体または組成物を必要としていると見なされる、請求項150または151の任意の一項以上に記載の方法。
- 請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項124〜128のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクターを含む、組成物、または請求項147〜148に記載の組成物、を高用量必要とする患者を特定するための手段を含む部品のキットであって、任意に、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEを含み、任意に、マイクロタイタープレート、任意にELISA試験を実行するための試薬、任意に棒上の比色試験をさらに含む、キット。
- 請求項41に記載の予防接種、または請求項43〜47または58〜59に記載のワクチン接種を必要とする患者を特定するための手段を含む部品のキットであって、任意に、請求項1〜30のいずれか一項に記載のEDEを含み、任意に、マイクロタイタープレート、任意にELISA試験を実行するための試薬、任意に棒上の比色試験を含む、キット。
- 請求項60〜73のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片、または請求項77〜121のいずれか一項に記載の化合物、または請求項124〜128のいずれか一項に記載の方法によって特定される抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項133または134に記載のプロセスによって作製された抗体、または請求項129に記載の核酸もしくは請求項130に記載のベクター、または請求項147〜148に記載の組成物のうちの任意の1つ以上を含み、さらなる治療剤をさらに含む、部品のキット。
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