JP2016540993A - タンパク質生体マーカー及びその使用 - Google Patents
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Abstract
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法に関し、当該方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程を含むまた、本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法にも関し、当該方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を控える工程を含む。また、本発明は、ELISAを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供される、方法にも関する。【選択図】図3
Description
本発明は、分子生物学、癌化学、臨床診断、臨床治療の分野に属し、酵素連結免疫吸着アッセイ(ELISA)を実施する方法にも関する。
ほとんどの制癌剤は、ある患者には効果があるが、他の患者にはない。これは、腫瘍間の遺伝的バリエーションに起因し、同じ患者内の腫瘍間でさえ観察されうる。患者の可変的な応答は、標的化療法剤に関して特に顕著である。それ故に、どの患者がどの薬物から恩恵を受けるか決定するための適切な検査なしに、標的化療法の完全な潜在力を実現することができない。米国国立衛生研究所(NIH:National Institute of Health)に従って、用語「生体マーカー」は、「正常な生物学的過程または病原過程、あるいは治療介入に対する薬理学的応答の指標として客観的に測定されかつ評価される特性」と定義される。(Biomarkers Definitions Working Group, 2001, Clin. Pharmacol. Ther. 69:89−95)
生体マーカーの発見に基づく改善された診断法の開発は、所定の薬物に対して臨床応答を示す可能性が最も高い患者を前もって特定することによって、新しい薬物の開発を加速する可能性を持つ。これは、臨床試験の規模、期間およびコストを著しく低減することになろう。ゲノミクス、プロテオミクスおよび分子イメージングのような技術は、現在、特異的な遺伝子変異、特定遺伝子の発現レベル、および他の分子生体マーカーの迅速、高感度で信頼性の高い検出を可能にする。腫瘍の分子キャラクタリゼーションのための様々な技術が利用可能であるにも関わらず、癌生体マーカーがほとんど発見されていないので、癌生体マーカーの臨床的使用は、概ね実現されないままである。例えば、最近の総説では、以下のことを述べている。「 癌の診断および処置を改善するために、生体マーカーの開発促進とそれらの使用に対する重大なニーズが存在する。(Cho, 2007, Molecular Cancer 6:25)」癌生体マーカーに関する別の最近の総説は、次のコメントを含んでいる。「課題は、癌生体マーカーを発見することである。分子的に標的化された薬剤を用いて、いくつかの腫瘍タイプ−例えば、慢性骨髄性白血病、消化管間質腫瘍、肺癌および多形神経膠芽腫−の分子的に定義されたサブセットを標的にすることに臨床的に成功したことがあったとはいえ、より広い状況においてかかる成功を適用する能力は、患者における標的化薬剤を評価するための効率的な戦略がないので大幅に制限される。問題は、主に、これらの興味深い新薬を評価するための臨床試験用に、分子的に定義された癌を持つ患者を選択することができないことにある。解決法は、特定の薬剤から恩恵を受ける可能性が最も高い患者を信頼性良く同定する生体マーカーを必要とする。(Sawyers, 2008, Nature 452:548−552, at 548)」前述のようなコメントは、臨床的に有用な生体マーカーの発見、およびかかる生体マーカーに基づく診断法の必要性に関する認識を示す。
癌生体マーカーには、(1)予後生体マーカー、(2)予測生体マーカー、および(3)薬力学生体マーカーの3つの異なったタイプがある。予後生体マーカーは、癌(例えば、固形腫瘍)を侵襲性、すなわち、成長および/または転移の速度、ならびに処置に対する不応性に従って、分類するために用いられる。これは、「結果が良好な」腫瘍を「結果が劣る」腫瘍から識別すると呼ばれることがある。予測生体マーカーは、特定の患者が特定の薬物を用いた処置から恩恵を受ける確率を評価するために用いられる。例えば、ERBB2(HER2またはNEU)遺伝子が増幅される乳癌を患う患者は、トラスツズマブ(HERCEPTIN(登録商標))を用いた処置から恩恵を受ける可能性が高いが、一方でERBB2遺伝子増幅がない患者は、トラスツズマブを用いた処置から恩恵を受ける可能性が低い。薬力学生体マーカーは、患者が薬物を服用している間のその分子標的に対する薬物の効果(単数または複数)の指標である。従って、薬力学生体マーカーは、新薬の臨床開発の早期段階の間に、しばしば投薬レベルおよび投与回数を指導するために用いられる。癌生体マーカーの議論については、例えば、Sawyers, 2008, Nature 452:548−552を参照のこと。
EGFRもしくはHER2によって駆動される腫瘍はしばしば、EGFRもしくはHER2の阻害剤による治療に応答するが、これら腫瘍は、これら阻害剤に対する耐性を常に発生させる。抗EGFRもしくは抗HER2処置に対する獲得耐性に関する少なくとも1つの機構は、HER3(ERBB3としても公知)シグナル伝達の活性化である。例えばEngelman et al., 2006, Clin. Cancer Res. 12:4372;Ritter et al., 2007, Clin. Cancer Res. 13:4909;Sergina et al., 2007, Nature 445:437を参照のこと。HER3は、薬物耐性の発生において重要な役割を果たし、そしてEGFRおよびHER2とのそのヘテロダイマー化を介して、腫瘍の始まりおよび維持に関与する。結論として、HER3は、キナーゼ活性を欠いているので、HER3阻害剤(特に、抗HER3抗体)の開発が重要である。
他の種類の標的化治療と同様に、いくらかの(しかし全てではない)腫瘍は、抗HER3治療に応答する。従って、HER3阻害剤(例えば、抗HER3抗体)での処置に応答する可能性が高い(もしくはその可能性が低い)腫瘍を有する患者を同定するために使用され得る推定生体マーカーに基づいた診断法が、必要である。
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法に関し、当該方法は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程を含む。
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程、及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程を含む。
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価することを注文する工程、及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程を含む。
本発明の特定の態様において、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される。
幾つかの態様において、前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される。幾つかの態様において、前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される。
幾つかの態様において、前記対象が野生型EGFRを担持する。好ましい態様において、前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している。より好ましい態様において、HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療(全身療法)の前に対象から除去されたものである。
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される。
幾つかの態様において、前記生体試料が全血又は血清試料を含む。
幾つかの態様において、前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される。
幾つかの態様において、前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
例えば、幾つかの態様において、前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される。
幾つかの態様において、前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される。しかしながら、他の化学治療剤が適用されても良い。
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法にも関し、当該方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を控える工程;を含む。
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価することを注文する工程、及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を控える工程を含む。
幾つかの態様において、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される。
幾つかの態様において、前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される。幾つかの態様において、前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される。
幾つかの態様において、前記対象が野生型EGFRを担持する。好ましい態様において、前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している。より好ましい態様において、HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療(全身療法)の前に対象から除去されたものである。
幾つかの態様において、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される。
幾つかの態様において、前記生体試料が全血又は血清試料を含む。
幾つかの態様において、前記控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
幾つかの態様は、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む。
幾つかの態様は、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む。
幾つかの態様は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高い又は低いと評価されたヒト対象をクリゾチニブで治療する工程を含む。幾つかの態様において、当該クリゾチニブで治療される対象は、ALK遺伝子の再編成又は融合を有している。
本発明は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を行うためのキットにも関する。
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法にも関し、当該方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程;当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び任意で当該決定された値を記録する工程;を含む。
幾つかの態様は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程;当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び任意で当該決定された値を記録する工程を含む。
幾つかの態様は、更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む。幾つかの態様において、前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される。
幾つかの態様は、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む。
幾つかの態様は、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む。
幾つかの態様は、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む。
幾つかの態様において、前記試料が、全血又は血清試料を含む。
幾つかの態様において、前記対象が、上皮成長因子受容体(EGFR)増感変異を担持していない。好ましい態様において、前記対象が野生型EGFRを担持する。より好ましい態様において、前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している。より好ましい態様において、HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療(全身療法)の前に対象から除去されたものである。
幾つかの態様において、前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む。
本発明は、無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される方法にも関する。
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法にも関する。幾つかの態様において、当該方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程;及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;を含む。
本発明は、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を選択する方法にも関する。幾つかの態様において、当該方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を受ける、又は実施する工程;及びタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程;を含む。
本発明は、ELISAを実施する方法にも関し、当該方法は、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが:
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。
幾つかの態様は、更に固相表面に停止溶液を添加することを含む。
幾つかの態様は、更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む。
幾つかの態様において、前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する。
幾つかの態様において、前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含有する。
好ましい態様において、前記洗浄緩衝剤のpHが7.2〜7.4である。
幾つかの態様において、前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む。
幾つかの態様において、前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に20回以上循環させられる。
幾つかの態様において、前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する。
幾つかの態様において、前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く。
幾つかの態様において、前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される。
幾つかの態様において、前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン(HRG)を特異的に認識する。
幾つかの態様において、前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する。
幾つかの態様において、前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトHRG抗体である。
幾つかの態様において、前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトHRG抗体である。
幾つかの態様において、前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである。
幾つかの態様において、前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである。
幾つかの態様において、前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で8時間以上接触させられる。
幾つかの態様において、前記ブロッキング剤を含有する溶液が、pH7.2〜7.4のリン酸緩衝生理食塩水中の1%ウシ血清アルブミンを含む。
幾つかの態様において、前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で1時間以上接触させられる。
幾つかの態様において、前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる。
幾つかの態様において、前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる。
幾つかの態様において、前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる。
幾つかの態様において、前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる。
幾つかの態様において、前記固相表面が1つ以上のウェルを有するマイクロプレートである。
幾つかの態様において、循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に2回実施される。
幾つかの態様において、前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである。
本発明は以下の(1)〜(97)を含むが、それらに限定されない。
1.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程;
を含む、方法。
2.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目1に記載の方法。
3.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目2に記載の方法。
4.前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目2に記載の方法。
5.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目1に記載の方法。
6.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目5に記載の方法。
7.前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目1に記載の方法。
8.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目2に記載の方法。
9.前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、項目1に記載の方法。
10.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目1に記載の方法。
11.前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される、項目10に記載の方法。
12.前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、項目10に記載の方法。
13.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を控える工程;
を含む、方法。
14.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される、項目13に記載の方法。
15.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目14に記載の方法。
16.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目14に記載の方法。
17.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目13に記載の方法。
18.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目17に記載の方法。
19.前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目13に記載の方法。
20.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目14に記載の方法。
21.前記控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目13に記載の方法。
22.トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、項目13に記載の方法。
23.シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、項目13に記載の方法。
24.タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を行うためのキット。
25.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。
26.更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、項目25に記載の方法。
27.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目26に記載の方法。
28.更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、項目26に記載の方法。
29.更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、項目26に記載の方法。
30.更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、項目25に記載の方法。
31.前記試料が、全血又は血清試料を含む、項目25に記載の方法。
32.前記対象が、EGFR増感変異を担持していない、項目25に記載の方法。
33.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目25に記載の方法。
34.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目33に記載の方法。
35.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目25に記載の方法。
36.ELISAを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが:
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる、方法。
37.更に固相表面に停止溶液を添加することを含む、項目36に記載の方法。
38.更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む、項目37に記載の方法。
39.前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する、項目36に記載の方法。
40.前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含有する、項目39に記載の方法。
41.前記洗浄緩衝剤のpHが7.2〜7.4である、項目40に記載の方法。
42.前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む、項目36に記載の方法。
43.前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に20回以上循環させられる、項目42に記載の方法。
44.前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する、項目36に記載の方法。
45.前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く、項目36に記載の方法。
46.前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される、項目42に記載の方法。
47.前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン(HRG)を特異的に認識する、項目36に記載の方法。
48.前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する、項目36に記載の方法。
49.前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトHRG抗体である、項目47に記載の方法。
50.前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトHRG抗体である、項目49に記載の方法。
51.前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである、項目50に記載の方法。
52.前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである、項目51に記載の方法。
53.前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で8時間以上接触させられる、項目49に記載の方法。
54.前記ブロッキング剤を含有する溶液が、pH7.2〜7.4のリン酸緩衝生理食塩水中の1%ウシ血清アルブミンを含む、項目36に記載の方法。
55.前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で1時間以上接触させられる、項目54に記載の方法。
56.前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる、項目48に記載の方法。
57.前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる、項目50に記載の方法。
58.前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる、項目51に記載の方法。
59.前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる、項目52に記載の方法。
60.前記固相表面が1つ以上のウェルを有するマイクロプレートである、項目36に記載の方法。
61.循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に2回実施される、項目43に記載の方法。
62.前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである、項目40に記載の方法。
63.無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目1〜35のいずれか1項に記載の方法。
64.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。
65.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を選択する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を受ける工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程;
を含む方法。
66.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
任意で当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。
67.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程;
を含む、方法。
68.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。
69.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程
を含む、方法。
70.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目69に記載の方法。
71.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目70に記載の方法。
72.前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目70に記載の方法。
73.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目69に記載の方法。
74.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目73に記載の方法。
75.更に、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目69に記載の方法。
76.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目70に記載の方法。
77.前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、項目69に記載の方法。
78.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目69に記載の方法。
79.前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される、項目78に記載の方法。
80.前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、項目78に記載の方法。
81.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCを担持すると診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。
82.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下である場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される、項目81に記載の方法。
83.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目82に記載の方法。
84.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目82に記載の方法。
85.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目81に記載の方法。
86.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目85に記載の方法。
87.更に、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目81に記載の方法。
88.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目82に記載の方法。
89.前記差し控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目81に記載の方法。
90.更に、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤で治療する工程を含む、項目81に記載の方法。
91.更に、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トシスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤で治療する工程を含む、項目81に記載の方法。
92.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、患者への抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から採取された生体試料を取得する工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
任意で当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。
93.更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、項目92に記載の方法。
94.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目93に記載の方法。
95.更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、項目93に記載の方法。
96.更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、項目93に記載の方法。
97.更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、項目92に記載の方法。
98.前記試料が、全血又は血清試料を含む、項目92に記載の方法。
99.前記対象が、EGFR増感変異を担持していない、項目92に記載の方法。
100.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目92に記載の方法。
101.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目100に記載の方法。
102.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目92に記載の方法。
103.無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目69〜102のいずれか1項に記載の方法。
104.HRG遺伝子発現が、規制当局に認可された試験を使用して評価される、項目1〜103のいずれか1項に記載の方法。
105.前記規制当局に認可された試験が、FDA (Food and Drug Administration, the United States)、EMA (European Medicines agency, European Union)、又はPMDA (Pharmaceuticals and Medical Devices Agency, Japan)に認可された試験である、項目104に記載の方法。
106.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、項目14に記載の方法。
107.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、項目26に記載の方法。
108.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、項目2に記載の方法。
109.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目6に記載の方法。
110.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目18に記載の方法。
111.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目34に記載の方法。
112.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目74に記載の方法。
113.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目86に記載の方法。
114.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目101に記載の方法。
本発明は以下の(1)〜(97)を含むが、それらに限定されない。
1.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程;
を含む、方法。
2.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目1に記載の方法。
3.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目2に記載の方法。
4.前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目2に記載の方法。
5.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目1に記載の方法。
6.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目5に記載の方法。
7.前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目1に記載の方法。
8.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目2に記載の方法。
9.前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、項目1に記載の方法。
10.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目1に記載の方法。
11.前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される、項目10に記載の方法。
12.前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、項目10に記載の方法。
13.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を控える工程;
を含む、方法。
14.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される、項目13に記載の方法。
15.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目14に記載の方法。
16.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目14に記載の方法。
17.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目13に記載の方法。
18.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目17に記載の方法。
19.前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目13に記載の方法。
20.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目14に記載の方法。
21.前記控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目13に記載の方法。
22.トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、項目13に記載の方法。
23.シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、項目13に記載の方法。
24.タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を行うためのキット。
25.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。
26.更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、項目25に記載の方法。
27.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目26に記載の方法。
28.更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、項目26に記載の方法。
29.更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、項目26に記載の方法。
30.更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、項目25に記載の方法。
31.前記試料が、全血又は血清試料を含む、項目25に記載の方法。
32.前記対象が、EGFR増感変異を担持していない、項目25に記載の方法。
33.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目25に記載の方法。
34.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目33に記載の方法。
35.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目25に記載の方法。
36.ELISAを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが:
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる、方法。
37.更に固相表面に停止溶液を添加することを含む、項目36に記載の方法。
38.更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む、項目37に記載の方法。
39.前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する、項目36に記載の方法。
40.前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含有する、項目39に記載の方法。
41.前記洗浄緩衝剤のpHが7.2〜7.4である、項目40に記載の方法。
42.前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む、項目36に記載の方法。
43.前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に20回以上循環させられる、項目42に記載の方法。
44.前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する、項目36に記載の方法。
45.前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く、項目36に記載の方法。
46.前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される、項目42に記載の方法。
47.前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン(HRG)を特異的に認識する、項目36に記載の方法。
48.前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する、項目36に記載の方法。
49.前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトHRG抗体である、項目47に記載の方法。
50.前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトHRG抗体である、項目49に記載の方法。
51.前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである、項目50に記載の方法。
52.前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである、項目51に記載の方法。
53.前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で8時間以上接触させられる、項目49に記載の方法。
54.前記ブロッキング剤を含有する溶液が、pH7.2〜7.4のリン酸緩衝生理食塩水中の1%ウシ血清アルブミンを含む、項目36に記載の方法。
55.前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で1時間以上接触させられる、項目54に記載の方法。
56.前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる、項目48に記載の方法。
57.前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる、項目50に記載の方法。
58.前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる、項目51に記載の方法。
59.前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる、項目52に記載の方法。
60.前記固相表面が1つ以上のウェルを有するマイクロプレートである、項目36に記載の方法。
61.循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に2回実施される、項目43に記載の方法。
62.前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである、項目40に記載の方法。
63.無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目1〜35のいずれか1項に記載の方法。
64.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。
65.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を選択する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を受ける工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程;
を含む方法。
66.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
任意で当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。
67.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程;
を含む、方法。
68.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。
69.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程
を含む、方法。
70.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目69に記載の方法。
71.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目70に記載の方法。
72.前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目70に記載の方法。
73.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目69に記載の方法。
74.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目73に記載の方法。
75.更に、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目69に記載の方法。
76.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目70に記載の方法。
77.前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、項目69に記載の方法。
78.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目69に記載の方法。
79.前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される、項目78に記載の方法。
80.前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、項目78に記載の方法。
81.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCを担持すると診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。
82.局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下である場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される、項目81に記載の方法。
83.前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、項目82に記載の方法。
84.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目82に記載の方法。
85.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目81に記載の方法。
86.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目85に記載の方法。
87.更に、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、項目81に記載の方法。
88.前記生体試料が全血又は血清試料を含む、項目82に記載の方法。
89.前記差し控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目81に記載の方法。
90.更に、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤で治療する工程を含む、項目81に記載の方法。
91.更に、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トシスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤で治療する工程を含む、項目81に記載の方法。
92.局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、患者への抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から採取された生体試料を取得する工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
任意で当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。
93.更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、項目92に記載の方法。
94.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、項目93に記載の方法。
95.更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、項目93に記載の方法。
96.更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、項目93に記載の方法。
97.更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、項目92に記載の方法。
98.前記試料が、全血又は血清試料を含む、項目92に記載の方法。
99.前記対象が、EGFR増感変異を担持していない、項目92に記載の方法。
100.前記対象が野生型EGFRを担持する、項目92に記載の方法。
101.前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、項目100に記載の方法。
102.前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、項目92に記載の方法。
103.無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される、項目69〜102のいずれか1項に記載の方法。
104.HRG遺伝子発現が、規制当局に認可された試験を使用して評価される、項目1〜103のいずれか1項に記載の方法。
105.前記規制当局に認可された試験が、FDA (Food and Drug Administration, the United States)、EMA (European Medicines agency, European Union)、又はPMDA (Pharmaceuticals and Medical Devices Agency, Japan)に認可された試験である、項目104に記載の方法。
106.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、項目14に記載の方法。
107.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、項目26に記載の方法。
108.前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、項目2に記載の方法。
109.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目6に記載の方法。
110.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目18に記載の方法。
111.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目34に記載の方法。
112.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目74に記載の方法。
113.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目86に記載の方法。
114.HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、項目101に記載の方法。
定義
本願において、他に言及の無い限り、数値について言及するとき、「約」は、示された数値の±10%を意味する。
本願において、他に言及の無い限り、数値について言及するとき、「約」は、示された数値の±10%を意味する。
本願において、「抗体」は、全形(intact)抗体、モノクローナル又はポリクローナル抗体を意味する。抗体は、組換えDNA技術を使用して作製されてもよい。抗体は、マウス、ラット、ブタ又は他の任意の哺乳類を起源としてもよい。抗体は、例えばヒトIg遺伝子を発現出来るトランスジェニック非ヒト哺乳類から取得され得るヒト抗体であってもよい。抗体は、例えば1つ以上の非ヒト起源の相補性決定領域を含み得るヒト化抗体であってもよい。また、抗体は、ヒト抗体の表面残基及び/又はヒト抗体のフレームワーク領域を含んでいても良い。また、抗体は、例えば、非ヒト抗体の可変ドメインとヒト抗体の定常ドメインを含み得るキメラ抗体であってもよい。
本願において、「癌」と「腫瘍」は、相互置換可能に用いられる。
本願において、「治療」は、対象又は患者に対する医学的ケア、又は一定の用量の医薬の投与を意味する。幾つかの態様において、「治療」は、抗HER3抗体等のHER阻害剤を含有し得る「医薬組成物」、「医薬」又は「薬剤」であり得る。幾つかの態様において、「治療」は、「化学治療」、「免疫治療」、又は「放射線治療」であってもよい。
本願において、「EGFR変異」は、EGFR遺伝子における任意の変異を意味する。「EGFR変異」は、例えば、EGFRエキソン19欠失及び/又はエキソン21(L858R)置換変異である。しかしながら、「EGFR変異」は、それらに限定されない。
本願において、「HER」は、HER1(EGFR)、HER2、HER3及びHER4からなる群から選択される。
本願において、「HER3」は、Entrez Gene ID No. 2065で同定された遺伝子にコードされたヒトタンパク質、及びそのアレル変異体を意味する。
本願において、「HER阻害剤」は、HERの少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去する分子(低分子又は巨大分子、例えば抗体又はその抗原結合断片)を意味する。好ましくは、HER阻害剤はHERに結合する。しかしながら、「HER阻害剤」は、HERの少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去するものである限り、HERに直接結合しないものであってもよい。HER1阻害剤(EGFR阻害剤)の例は、ラパチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、パニツムマブ、及びKD−019を含む。HER2阻害剤の例は、トラツズマブ、ペルツズマブ、及びトラツズマブエムタンシン(T−DM1)を含む。
本願において、「HER3阻害剤」は、HER3の少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去する分子(低分子又は巨大分子、例えば抗体又はその抗原結合断片)を意味する。好ましくは、HER3阻害剤はHER3に結合する。しかしながら、「HER3阻害剤」は、HERの少なくとも一部の生物活性を阻害する、中和する、妨げる、又は除去するものである限り、HER3に直接結合しないものであってもよい。「生物活性」に対する効果は、直接又は間接的で有り得、例えば下流シグナル伝達及び他のHERファミリー分子、例えばEGFR、HER2及びHER4とのヘテロダイマー化である。例えば、HER3阻害剤は、EGFR/HER3、HER2/HER3、HER4/HER3ヘテロダイマー化の阻害剤、又はこれらのヘテロダイマー化のいずれかに由来するシグナル伝達の阻害剤であり得る。ここで、「HER3阻害剤」は、例えばペルツズマブ、ニモツズマブ、MM−111及びセツキシマブを含む。更に、理論に拘束されず、HER3はMET(c−MET)等の非HER受容体とヘテロダイマーを形成する。従って、幾つかの態様において、「HER3阻害剤」は、例えばオナルツズマブ及び/又はチバンチニブを含む。
本願において、「HRG」(ニューレグリン−1、NRG1、ヘレグリン、及びHRG1としても知られる)は、Entrez Gene ID No. 3084により同定された遺伝子にコードされたヒトタンパク質、及びそのアリル変異体を意味する。
本願において、「非小細胞肺癌」及び「非小細胞肺癌腫」は置換可能に使用される。
本願において、「所定の閾値(値)」は、分類者が偽陰性及び偽陽性の間(のコスト)の望ましいバランスをもたらす閾値の数値を意味する。
好ましくは、「所定の閾値(値)」は、全集団を2つ(以上)のサブ集団に区分して、閾値以上の(HRG)遺伝子発現を示す患者(本願において「高HRG」サブ集団)に対して、閾値を下回る(HRG)遺伝子発現を示す患者(本願において「低HRG」サブ集団)と比較して、臨床的利益をもたらし得る、潜在的な閾値を意味する。
閾値がdCtである場合、好ましくは、「所定の閾値(値)」は、全集団を2つ(以上)のサブ集団に区分して、閾値以上の数値を示す患者(本願において「高HRG」サブ集団)に対して、閾値を下回る数値を示す患者(本願において「低HRG」サブ集団)と比較して、臨床的利益をもたらし得る、潜在的な閾値を意味する。
幾つかの態様において、「所定の閾値」は、臨床的研究及びその結果の解析(「臨床データ」と総称する)に基づき、統計的(及び臨床的)に決定され、調えられ、調整され、及び/又は確認され、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化する。
幾つかの態様において、「所定の閾値」は、臨床的データ(及び任意で非臨床的データ)に基づき、更により好ましくは無作為化された臨床的データ(及び任意で非臨床的データ)に基づき、統計的(及び臨床的)に決定され、調えられ、調整され、及び/又は確認され、治療から利益を受けた全ての患者は高HRGサブ集団に含まれることが確認される。
より好ましくは、「所定の閾値」は、薬理的特性(即ち作用機序)、前臨床又は非臨床研究データ、臨床研究データ、及び外部企業等から購入した商業的試料のデータに基づき、決定され、調えられ、調整され、及び/又は確認され、「低HRG」サブ集団と比較して、「高HRG」サブ集団からの臨床的利益を最大化する。Adaptive Biomarker Threshold Design (即ち最大尤度アプローチ), Jiang W, Freidlin B, Simon R. Biomarker−Adaptive Threshold Design: A Procedure for Evaluating Treatment With Possible Biomarker−Defmed Subset Effect, J Natl Cancer Inst. 2007;99(13): 1036−43等の幾つかの統計的方法が、全ての利用可能な前/非臨床研究、臨床研究、商業試料等を使用した閾値を決定し、調え、調整し、及び/又は確認するのに使用される(治療から利益を受けた全ての患者は高HRGサブ集団に含まれることを確認するため)。幾つかの態様において、「所定の閾値」は、高HRGサブ集団が、より大きく、又は治療空の利益を駆動する全ての患者を含み得るように決定される。
本願において、「対象」、「ヒト対象」及び「患者」は、置換可能に用いられる。
本願において、「癌に罹患した対象」及び「癌を担持した対象」は、置換可能に用いられる。
幾つかの好ましい態様において、癌に罹患した患者の群が、更なる医薬を用いて、又は用いずに、HER3阻害剤又は偽薬を投与して治療され、当該群が、所定の閾値を用いて「高HRG」サブ集団及び「低HRG」サブ集団に分けられる場合、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも良好な臨床的(有意な)利益を示し、一方、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「低HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも僅かに良好な、又はより良好ではない、臨床的(有意な)利益を示す。より好ましい態様において、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好な臨床的(有意な)利益を示し、一方、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「低HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好ではない、臨床的(有意な)利益を示す。
他の好ましい態様において、癌に罹患した患者の群が、所定の閾値を用いて「高HRG」サブ集団及び「低HRG」サブ集団に分けられ、そして各群が更なる医薬を用いて、又は用いずに、HER3阻害剤又は偽薬を投与して治療される場合、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも良好な臨床的(有意な)利益を示し、一方、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「低HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも僅かに良好な、又はより良好ではない、臨床的(有意な)利益を示す。より好ましい態様において、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好な臨床的(有意な)利益を示し、一方、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「低HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好ではない、臨床的(有意な)利益を示す。
他の態様において、「所定の閾値」は、例えばHRGレベルが測定可能な又は検出可能な癌に罹患した患者の群における、前/非臨床研究、臨床研究及び/又は商業試料において測定されるHRGのレベルの中央値であり得る。他の好ましい態様において、癌、例えば非小細胞肺癌(NSCLC)等に罹患した患者の群が他の医薬を用いて又は用いず、HER3阻害剤又は偽薬が投与されて治療され、当該群が、所定の閾値として患者のHRGレベルの中央値を用いて「高HRG」サブ集団及び「低HRG」サブ集団に分けられる場合、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも良好な臨床的(有意な)利益を示し、一方、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「低HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも僅かに良好な、又はより良好ではない、臨床的(有意な)利益を示す。より好ましい態様において、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好な臨床的(有意な)利益を示し、一方、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「低HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好ではない、臨床的(有意な)利益を示す。幾つかの態様において、前記所定の閾値は、癌に罹患した患者の群のHRGレベルの中央値であり、当該閾値は、(治療から利益を受ける全患者が高HRGサブ集団に含まれるように)調えられ、又は調整され得る。
他の好ましい態様において、癌に罹患した患者の群が所定の閾値を用いて「高HRG」サブ集団及び「低HRG」サブ集団に分けられ、「高HRG」サブ集団が、他の更なる医薬を用いて又は用いず、HER3阻害剤又は偽薬が投与されて治療される場合、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも良好な臨床的(有意な)利益を示す。より好ましい態様において、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、「高HRG」サブ集団において、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好な臨床的(有意な)利益を示す。
他の好ましい態様において、癌に罹患した「高HRG」の患者が所定の閾値を使用して同定され、当該患者が、他の更なる医薬を用いて又は用いず、HER3阻害剤又は偽薬が投与されて治療される場合、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、対象(例えば偽薬)よりも良好な臨床的(有意な)利益を示す。より好ましい態様において、投与されるHER3阻害剤の平均の抗癌効率は、対象(例えば偽薬)よりも統計的に有意に良好な臨床的(有意な)利益を示す。
本願において、「更なる医薬」は、HER3阻害剤以外の他の任意の治療分子又は予防分子であって、HER3阻害剤と組み合わせて使用され得るものを意味する。幾つかの態様において、「更なる医薬」は、1つ以上のHER阻害剤、化学治療、又は放射線治療である。
幾つかの態様において、「抗癌効率」の指標は、無増悪生存率(PFS)又は全生存率(OS)であり得るが、それらに限定されない。当該指標は、HER3阻害剤の抗癌効率の任意の代理マーカー(surrogate marker)であってもよい。
本願において、「高HRG」は、所定の閾値以上のレベルのHRG遺伝子発現を示す数値である。本願において、「高HRG」、「高HRG(サブ)集団」及び「高HRG患者(又は対象)」は、(所定の)閾値以上のレベルのHRG遺伝子発現、(所定の)閾値以上のレベルのHRG遺伝子発現を示す(サブ)集団、及び(所定の)閾値以上のレベルのHRG遺伝子発現を示す患者(又は対象)をそれぞれ意味する。HRG分類は、例えばRNAレベルでのHRG遺伝子発現に基づいても良い。
本願において、「低HRG」は、所定の閾値以下のレベルのHRG遺伝子発現を示す数値である。本願において、「低HRG」、「低HRG(サブ)集団」及び「低HRG患者(又は対象)」は、(所定の)閾値以下のレベルのHRG遺伝子発現、(所定の)閾値以下のレベルのHRG遺伝子発現を示す(サブ)集団、及び(所定の)閾値以下のレベルのHRG遺伝子発現を示す患者(又は対象)をそれぞれ意味する。HRG分類は、例えばRNAレベルでのHRG遺伝子発現に基づいても良い。
本願において、治療に対する「応答」は、治療される腫瘍に関して、当該腫瘍が、(a)増殖の遅延、(b)増殖の停止又は(c)退縮を示すことを意味する。
本願方法は、腫瘍又は癌細胞を担持する、又はそう診断された対象、例えばヒト対象を同定するのに使用され得る。幾つかの態様において、当該対象は、HER3経路によって駆動され得る、又はHER3経路に仲介される他の治療に耐性を有し得る、固形又は液性腫瘍を担持する。幾つかの態様において、当該対象は、肺癌、直腸結腸癌、頭部及び頸部癌、乳癌、胃腸癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、内皮癌、唾液腺癌、膵臓癌、結腸癌、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌、グリオーマ、メラノーマ、転移性乳癌、上皮癌、食道癌、子宮頸癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌又は非小細胞肺癌を担持する。幾つかの態様において、本願方法は、局所進行性又は転移性腫瘍、例えば局所進行性又は転移性NSCLC(腫瘍)又は局所進行性又は転移性頭部頸部癌を担持する対象を同定するのに使用され得る。幾つかの態様において、本願方法は、局所進行性又は転移性NSCLC(腫瘍)を担持し、抗HER3抗体又は低分子量のHER3阻害剤を含む治療により利益を受けられる者を同定するのに使用され得る。幾つかの態様において、前記対象は、ステージIII、例えばステージIIIb、又はステージIVの腫瘍を担持している。対象を同定する方法は、例えば、腫瘍又は癌と診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価することを含む。
幾つかの態様において、本願方法は、所進行性又は転移性NSCLC(腫瘍)を担持し、抗HER3抗体又は低分子量のHER3阻害剤を含む治療(投与)により利益を受けられる者を同定するのに使用され得、但し、ALK遺伝子の融合又は再編成を有する対象は、本方法を適用する者から除外される。
幾つかの態様において、本願方法は、腫瘍又は癌細胞を担持すると同定された対象を治療するのに使用され得る。幾つかの態様において、局所進行性又は転移性NSCLC(腫瘍)を担持するヒト対象を同定又は治療する方法は、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価することを含む。幾つかの態様において、前記対象は、上皮細胞成長因子(EGFR)増感変異を有しない。幾つかの態様において、前記対象は、野生型EGFRを有する。幾つかの態様において、前記対象は、ALK遺伝子の融合又は性変性を有しない。幾つかの態様において、前記疾患又は腫瘍は、つ以上の過去の全身療法、例えば化学治療に対して進行している。幾つかの態様は、mRNAでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に抗HER3抗体を投与することを含む。幾つかの態様において、治療は、抗HER3抗体の投与と、HER3以外のHERファミリー受容体を阻害する1つ以上の薬剤との組み合わせを含む。幾つかの態様において、治療は、抗HER3抗体の投与と、非HERファミリーチロシンキナーゼ受容体を阻害する1つ以上の薬剤との組み合わせを含む。幾つかの態様において、抗HER3抗体は、他の非特異的化学治療と組み合わせて投与される。
幾つかの好ましい態様において、本願方法が適用され得る患者は、高ヘレグリン、野生型EGFRの対象で、局所進行性又は転移性非小細胞肺癌を有し、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している者である。幾つかの態様において、当該患者は、HER阻害剤感受性である。好ましい態様において、HER遺伝子発現が評価される腫瘍組織その断片は、全身療法の前に対象又は患者から採取されたものである。
幾つかの好ましい態様において、本願方法が適用される患者は、セツキシマブ、シスプラチン、パニツムマブ、5−フルオルウラシル、放射線治療及び放射線療法(局所進行性のみ)の1つ以上による治療が併用され得る、第一線(first−line)の転移性又は局所進行性の頭部頸部癌を有する患者を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、ドカタキセルによる治療が併用され得る、第二線(second−line)の転移性又は局所進行性のNSCLC又は他の癌を有する患者を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、免疫療法が併用され得る、NSCLC又は他の癌を有する患者を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、PI3K経路阻害剤による治療が併用され得る、第三線(third −line)のHER2陽性の(転移性)乳癌を有する患者を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用され得る患者は、ホルモン療法又はPI3K経路阻害剤による治療が併用され得る、第三線(third −line)のHER2陰性の(転移性)乳癌を有する患者を含む。
本願発明において、PI3K経路阻害剤は、PI3K阻害剤、mTOR阻害剤及びAKT阻害剤を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、エルロチニブ、ゲフィチニブ及びアフィチニブの1つ以上による治療が併用され得る、第一線(first−line)の転移性EGFR増感変異陽性NSCLCを有する対象を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、プラチナベースの化学治療が併用され得る、第一線(first−line)の転移性E NSCLC又は他の癌を有する対象を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、セツキシマブ、パニツムマブ及び化学治療の1つ以上の治療が併用され得る、RAS野生型直腸結腸癌を有する対象を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、トラスズマブ、パクリタキセル、ドカタキセル、T−DM1及びペルツズマブの1つ以上の治療が併用され得る、HER2陽性第一線転移性乳癌又は他の癌を有する対象を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、ラパチニブ、カペシタビン、トラスズマブ及びパクリタキセルの1つ以上の治療が併用され得る、HER2陽性第二線以降(second or later line)転移性乳癌又は他の癌を有する対象を含む。
幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、より早期の線の治療に失敗していない。幾つかの態様において、本願方法が適用される患者は、より早期の線の治療に失敗しておらず、当該患者は、「高HRG」と分類されている。
幾つかの態様において、本願方法は、高HRG、野生型EGFRで、局所進行性又は転移性NESLCを担持し、HER阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び/又は治療するのに使用される。
幾つかの態様において、本願方法は、高HRG、野生型EGFRで、局所進行性又は転移性NESLCを担持し、化学療法と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び/又は治療するのに使用される。
幾つかの態様において、本願方法は、高HRG、EGFR変異を有する対象、例えば局所進行性又は転移性NESLCを担持し、HER阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び/又は治療するのに使用される。
幾つかの態様において、本願方法は、高HRG、EGFR変異を有し、局所進行性又は転移性NESLCを担持し、化学療法と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる対象を同定及び/又は治療するのに使用される。
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高HRG」患者であって、免疫療法と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び/又は治療するのに使用される。そのような癌は、NSCLCを含む。
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高HRG」患者であって、ホルモン療法又はPI3K(ホスホイノシチド3−キナーゼ)経路阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び/又は治療するのに使用される。そのような癌は、乳癌、好ましくはHER2陰性乳癌を含む。そのようなPI3K経路阻害剤は、PI3K阻害剤、AKT阻害剤及びmTOR(哺乳類のラパマイシン標的)阻害剤を含む。
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高HRG」患者であって、PI3K阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び/又は治療するのに使用される。そのような癌は、乳癌、好ましくはHER2陰性乳癌を含む。
幾つかの態様において、本願方法は、癌に罹患した「高HRG」患者であって、ALK阻害剤と組み合わせたパトリツマブの治療で利益を得られる者を同定及び/又は治療するのに使用される。そのような癌は、NSCLCを含む。そのようなALK(未分化リンパ腫キナーゼ)阻害剤は、クリゾチニブ(Xalkori)を含む。
幾つかの態様において、本願方法は、急性呼吸困難症候群、肺線維症、統合失調症、心疾患、アテローム性動脈硬化及びデュシェーヌ筋ジストロフィーを同定及び/又は治療するのに使用される。
HER3抗体
治療に適した抗体は特に限定されず、HER3に結合できる任意のタンパク質又はリガンドであり得る。幾つかの態様において、当該抗体は、HER3に結合し得る結合タンパク質又はその断片であり得る。幾つかの好ましい態様において、前記抗体は、HER3の少なくとも一部の生物活性を、阻害する、中和する、妨げる、又は除去することが出来る。
治療に適した抗体は特に限定されず、HER3に結合できる任意のタンパク質又はリガンドであり得る。幾つかの態様において、当該抗体は、HER3に結合し得る結合タンパク質又はその断片であり得る。幾つかの好ましい態様において、前記抗体は、HER3の少なくとも一部の生物活性を、阻害する、中和する、妨げる、又は除去することが出来る。
HER3抗体は、例えば、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116(糖改変された抗HER3モノクローナル抗体)、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はHER3に結合できるこれらのいずれかの誘導体又は断片の1つ以上であり得る。
抗体断片は、例えばFab断片、Fab’断片、F(ab’)2断片、Fv断片、ジアボディー(Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444− 6448)、単鎖抗体分子(Pluckthun in: The Pharmacology of Monoclonal Antibodies 113, Rosenburg and Moore, eds., Springer Verlag, N.Y. (1994), 269−315)、scFv断片、及びHER3を阻害し得る他の断片を含む。
抗体の誘導体又は抗体断片は、例えば、二特異性抗体、多特異性抗体、biscFv断片、ジアボディー、ナノボディー、抗体薬物コンジュゲート、免疫毒素及び/又は免疫サイトカインを含み得るが、それらに限定されない。
更なる適切な抗体の例は、例えば、U.S. Patent No. 7,705,130に見いだされ、当該文献は、その全体が参照により援用される。
本発明において、HER3に結合できる単離された結合タンパク質は、HER3の細胞外部分の1つ以上のエピトープと相互作用する。当該エピトープは、好ましくは、アミノ末端のL1ドメイン、2つのシステインリッチドメインのS1及びS2、又は2つのシステインリッチドメインに挟まれたL2ドメイン中に位置する。当該エピトープは、限定されないが、L1及びS1の部分に含まれるエピトープ等の、ドメインの組み合わせの中に位置してもよい。
生体試料
対象、例えば局所進行性又は転移性NSCLCと診断された対象から採取した生体試料が、タンパク質又は免疫組織化学(IHC)用の薄片の供給源として使用され、当該試料中のHRG遺伝子発現のレベルが決定され得る。当該生体試料は、例えば、血液、例えば全血又は血液由来物、例えばエキソソーム、血清、血漿、組織、細胞及び又は循環系組織細胞を含み得る。幾つかの態様において、当該生体試料は、腫瘍から取り出されても良い。
対象、例えば局所進行性又は転移性NSCLCと診断された対象から採取した生体試料が、タンパク質又は免疫組織化学(IHC)用の薄片の供給源として使用され、当該試料中のHRG遺伝子発現のレベルが決定され得る。当該生体試料は、例えば、血液、例えば全血又は血液由来物、例えばエキソソーム、血清、血漿、組織、細胞及び又は循環系組織細胞を含み得る。幾つかの態様において、当該生体試料は、腫瘍から取り出されても良い。
生体試料は、静脈穿刺等の公知の手段により、又は公知の腫瘍生検装置や手順を用いて、取得されてもよい。内視鏡生検、切除生検、切開生検、微細針生検、パンチ生検、切削生検及び皮膚生検が、腫瘍試料を取得するために当業者が使用し得る認識される医学的手順の例である。生体試料は、HRG遺伝子発現を測定するための十分なタンパク質、又は薄片を提供するのに十分に大きいべきである。
幾つかの態様において、本願方法は、自家組織試料を提供する、又は自家組織試料を採取することに同意して、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象ヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含む。
前記生体試料は、HRG発現又は量の測定を可能とする任意の形態であってもよい。即ち、当該試料は、タンパク質抽出又は薄片調製に充分でなければならない。従って、当該試料は、新鮮で、適切な低温技術を用いて保存され、又は非低温技術を用いて保存され得る。例えば、臨床生検試料を操作する標準的なプロセスは、組織試料をホルマリン中で固定し、それをパラフィン中に包埋する。この形態の試料は、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)組織として通常知られている。その後の解析のための組織調製の適切な技術は、当業者に周知である。
HRG遺伝子発現
本願において、生体試料中のHRG遺伝子発現レベルの決定又は測定は、適切な方法を用いて実施される。幾つかのそのような方法は、当該技術分野で周知である。例えば、HRG遺伝子発現の決定は、試料中のタンパク質のレベル又は量を測定することによってなされる。
本願において、生体試料中のHRG遺伝子発現レベルの決定又は測定は、適切な方法を用いて実施される。幾つかのそのような方法は、当該技術分野で周知である。例えば、HRG遺伝子発現の決定は、試料中のタンパク質のレベル又は量を測定することによってなされる。
HRGは、HRG遺伝子の発現に際して多くのアイソフォームの形態で生産される。理論に拘束されず、HRGのEGF様ドメインは、HER3への結合にとって必須と考えられている。従って、本願においてHRG遺伝子発現のレベルを決定する場合、HRGアッセイは、例えば、好ましくは、全てではないまでも、殆どの存在するHRGアイソフォームを検出するために、少なくともHRGのEGF様ドメインを検出するように設計される。抗HRG抗体がHRGタンパク質を検出するのに使用される場合、当該抗体は、EGF様ドメインを認識し得る。幾つかの態様において、しかしながら、HRGタンパク質を検出するのに使用される抗体は、EGF様ドメインを認識しない。
HRG遺伝子発現は、任意の公知の方法によって検出され得る。タンパク質レベルでHRG遺伝子発現のレベルを測定する適切な検出方法の非限定的な例として、酵素連結免疫吸着アッセイ(ELISA)及びIHC解析が挙げられる。
ELISA
HRGについてELISAを実施するには、例えば検出抗体等の一つ以上のHRGに対する抗体が必要である。解析すべき試料からのHRGタンパク質は、ポリスチレンマイクロタイタープレート等の固相支持体上で不動化され得る。この不動化は、表面への吸着塔の非特異的な結合によるものであってもよい。あるいは、「サンドイッチ」ELISAにおいて、不動化は、捕捉抗体による試料中のHRGの結合による、特異的な結合であってもよい。HRGが不動化された後、検出抗体が添加され、検出抗体は、結合したHRGと複合体を形成し得る。当該検出抗体は、直接又は間接的に、例えば検出抗体を特異的に認識する二次抗体を介して、酵素と連結させられ得る。各工程の間に、HRGが結合したプレートは、穏和な洗剤溶液で洗浄される。典型的なELISAプロトコールは、1つ以上のブロッキング工程を含み得て、当該工程は、プレートに対するタンパク質試薬の望ましくない非特異的結合をブロックするために、ウシ血清アルブミン等の非特異的結合タンパク質を使用することを含む。最後の洗浄工程の後、当該プレートは、試料中のHRGの量の指標となる可視的なシグナルを生じる適切な酵素基質を添加することにより、現像される。斯かる基質は、例えば、色素基質又は蛍光基質等であってもよい。ELISAの手法、試薬及び設備は、当業者に周知であり、市販されている。
HRGについてELISAを実施するには、例えば検出抗体等の一つ以上のHRGに対する抗体が必要である。解析すべき試料からのHRGタンパク質は、ポリスチレンマイクロタイタープレート等の固相支持体上で不動化され得る。この不動化は、表面への吸着塔の非特異的な結合によるものであってもよい。あるいは、「サンドイッチ」ELISAにおいて、不動化は、捕捉抗体による試料中のHRGの結合による、特異的な結合であってもよい。HRGが不動化された後、検出抗体が添加され、検出抗体は、結合したHRGと複合体を形成し得る。当該検出抗体は、直接又は間接的に、例えば検出抗体を特異的に認識する二次抗体を介して、酵素と連結させられ得る。各工程の間に、HRGが結合したプレートは、穏和な洗剤溶液で洗浄される。典型的なELISAプロトコールは、1つ以上のブロッキング工程を含み得て、当該工程は、プレートに対するタンパク質試薬の望ましくない非特異的結合をブロックするために、ウシ血清アルブミン等の非特異的結合タンパク質を使用することを含む。最後の洗浄工程の後、当該プレートは、試料中のHRGの量の指標となる可視的なシグナルを生じる適切な酵素基質を添加することにより、現像される。斯かる基質は、例えば、色素基質又は蛍光基質等であってもよい。ELISAの手法、試薬及び設備は、当業者に周知であり、市販されている。
ELISAを実施する幾つかの態様を下記に示す。記載されている方法は、多くの異なるタンパク質を含有する生体試料(例えば血漿や血清)を含む、様々な種類の試料に対してELISAを実施する場合に、正しい結果を提供する。一つの側面において、開示されるELISA法は、天然及び/又は組換えヒトヘレグリン(HRG)を検出するために実施されてもよい。
本願ELISA法は、ELISAを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが:
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。
前記洗浄緩衝剤の循環工程は、「ピストン」動作を用いて、迅速かつ反復的に、固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む。当該「ピストン」動作は、関連するピペットチップの中及び外に洗浄緩衝剤を移動させるように、ピペット(例えば排気ピペット、容積式ピペット、又はマルチチャンネルピペット)のプランジャーエンドを反復的にポンプすることによって実施されてもよい。あるいは、トランスファーピペット又はパスツールピペットの球状末端を繰り返し圧迫及び開放して、ピストン動作を実施する。他の洗浄緩衝剤を供給及び除去する同様の方法が採用されてもよい。
理論に拘束されず、そのようなピストン動作は、非特異的に吸着したタンパク質を洗浄緩衝剤に効率的に暴露し、タンパク質を効果的に除去すると考えられる。洗浄緩衝剤は、固相表面が充分に洗浄されたことを示す泡が観察されるまで、固相表面上及び外に循環される。幾つかの態様において、洗浄緩衝剤は固相表面上及び外に10〜30回循環される。幾つかの態様において、洗浄緩衝剤は固相表面上及び外に20回循環される。幾つかの態様において、洗浄緩衝剤は固相表面上及び外に10回以上、20回以上又は30回以上循環される。
幾つかの態様において、前記循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に1又は2、3又は4回実施される。好ましい態様において、前記循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に2回実施される。幾つかの態様において、前記循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に2回以上実施される。
濯ぎ工程は、固相表面への、又はからの洗浄緩衝剤の適用又は除去を含む。濯ぎ工程は、標準的な「充填及び吸引」方法を含んでも良く、従って、固相表面は、洗浄緩衝剤と1回接触し、その後それは即座に吸引によって除去される。あるいは、洗浄緩衝剤は、デカントによって除去されてもよい。洗浄工程は、固相表面上に泡が残らないことを保証するように実施される。従って、幾つかの態様において、濯ぎ工程は、複数の循環又はピストン動作の実施を含まない。固相表面がウェル又は***した縁を有する場合、洗浄緩衝剤を除去した後、当該表面を反転させて、乾燥した平らな吸収表面上にブロットされて、洗浄緩衝剤を完全に除去する。
ELISA固相表面
幾つかの態様において、本願ELISA法は、1つ以上のウェルを有する細胞培養プレートである固相表面上で実施される。本願ELISA法で使用される固相表面の例として、マイクロタイタープレート(マイクロプレート又はマイクロウェルプレートともいう)が挙げられる。適切なプレートは、ポリスチレン、ポリカーボネート又はポリプロピレン製であり得る。特定の態様において、ELISAは、96ウェルマイクロプレートを用いて実施される。
幾つかの態様において、本願ELISA法は、1つ以上のウェルを有する細胞培養プレートである固相表面上で実施される。本願ELISA法で使用される固相表面の例として、マイクロタイタープレート(マイクロプレート又はマイクロウェルプレートともいう)が挙げられる。適切なプレートは、ポリスチレン、ポリカーボネート又はポリプロピレン製であり得る。特定の態様において、ELISAは、96ウェルマイクロプレートを用いて実施される。
捕捉抗体を含有するELISA溶液
本願ELISA法は、固相表面に捕捉抗体を含有する溶液を接触させることを含む。捕捉抗体は、ELISAにおいて検出すべき解析物である所望の光源を認識するモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。幾つかの態様において、捕捉抗体は、特定のヒトタンパク質又はペプチドに対するマウス抗体である。特定の態様において、捕捉抗体は、マウス抗ヒトHRG抗体である。
本願ELISA法は、固相表面に捕捉抗体を含有する溶液を接触させることを含む。捕捉抗体は、ELISAにおいて検出すべき解析物である所望の光源を認識するモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。幾つかの態様において、捕捉抗体は、特定のヒトタンパク質又はペプチドに対するマウス抗体である。特定の態様において、捕捉抗体は、マウス抗ヒトHRG抗体である。
捕捉抗体を含有する溶液は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で再構築された抗体を含有してもよい。幾つかの態様において、当該溶液は、約1.5〜約5.0μg/mlの抗体を含有し得る。特定の態様において、当該溶液は、PBS中に、約4.0μg/mlの抗体を含有し得る。
幾つかの態様において、固相表面は、捕捉抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で4時間以上接触させられる。幾つかの態様において、固相表面は、捕捉抗体を含有する溶液と、約70°Fの温度で約8時間接触させられる。特定の態様において、固相表面は、捕捉抗体溶液と接触させられる間、被覆及び/又は密封される。
ブロッキング剤を含有するELISA溶液
固相表面は、ブロッキング剤を含有する溶液を添加してブロックされる。幾つかの態様において、ブロッキング剤溶液は、pH約7.2〜約7.4のPBS中の1%ウシ血清アルブミン(BSA)を含有する。幾つかの態様において、ブロッキング剤溶液は、約0.5%未満のプロテアーゼを含有する。
固相表面は、ブロッキング剤を含有する溶液を添加してブロックされる。幾つかの態様において、ブロッキング剤溶液は、pH約7.2〜約7.4のPBS中の1%ウシ血清アルブミン(BSA)を含有する。幾つかの態様において、ブロッキング剤溶液は、約0.5%未満のプロテアーゼを含有する。
固相表面は、1時間以上ブロッキング剤とインキュベーションされ得る。幾つかの態様において、固相表面は、約70°Fでブロッキング剤とインキュベーションされ得る。
解析物を含有すると思われる試料を含有する溶液は、無希釈の生体試料からなるか、又はPBS等の溶液で希釈された生体試料を含有してもよい。特定の態様において、当該試料溶液は、無希釈の血清又は血漿を含有し、当該血清又は血漿は、固相表面に直接接触させられる。
解析物は、例えば、タンパク質やペプチド等の抗原を含有してもよい。特定の態様において、当該解析物は、HRGや、特に可溶性HRG等の増殖因子である。
固相表面は、約70°Fで、約2時間以上、試料溶液とインキュベーションされてもよい。特定の態様において、固相表面は、試料溶液とインキュベーションされている間、被覆及び/又は密封される。
検出抗体を含有するELISA溶液
検出抗体は、ELISAにおいて検出される解析物である所望の抗原を認識する抗体である。前記捕捉抗体及び検出抗体はいずれも同一の抗体を認識する。しかしながら、これらの2つの抗体は、抗原の同一の領域又はエピトープを認識しなくてもよい。検出抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。幾つかの態様において、検出抗体は、特定のタンパク質又はペプチドに対するヤギ抗体である。特定の態様において、捕捉抗体は、ヤギ抗ヒトHRG抗体である。
検出抗体は、ELISAにおいて検出される解析物である所望の抗原を認識する抗体である。前記捕捉抗体及び検出抗体はいずれも同一の抗体を認識する。しかしながら、これらの2つの抗体は、抗原の同一の領域又はエピトープを認識しなくてもよい。検出抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。幾つかの態様において、検出抗体は、特定のタンパク質又はペプチドに対するヤギ抗体である。特定の態様において、捕捉抗体は、ヤギ抗ヒトHRG抗体である。
検出抗体を含有する溶液は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)又はBSA溶液で再構築された抗体を含有してもよい。幾つかの態様において、当該溶液は、pH7.2〜7.4のPBS中の1%BSA溶液中に、約100〜200ng/mlの抗体を含有してもよい。特定の態様において、当該溶液は、pH7.2〜7.4のPBS中の1%BSA溶液中に、約150ng/mlの抗体を含有してもよい。幾つかの態様において、検出抗体溶液は、正常ヤギ血清を含有しない。
検出抗体は、ビオチン等の検出剤とコンジュゲートしている。そのような検出剤は、検出抗体と、アビジン又はストレプトアビジン連結酵素のような酵素/基質検出システムとの結合を可能とする。特定の態様において、検出抗体は、ビオチン化抗ヒトHRG抗体である。
幾つかの態様において、固相表面は、約70°Fの温度で1.5、2又は3時間以上、検出抗体溶液とインキュベーションされる。幾つかの態様において、固相表面は、検出抗体溶液とインキュベーションされている間、被覆及び/又は密封される。
酵素コンジュゲートを含有するELISA溶液
本願ELISA法は、固相表面に、アルカリホスファターゼ(AP)やホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)等のレポーター酵素と結合した結合剤を含有する酵素コンジュゲートを接触させる工程を含む。結合剤は、検出抗体とコンジュゲートした検出剤と結合する。ストレプトアビジンは、ビオチン化抗体と結合する例示的結合剤である。レポーター酵素は、無色の基質を検出可能な有色の産物に変換する。例示的な酵素はホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)で、過酸化水素/テトラメチルベンジジン基質混合物を検出可能な色素に変換する。幾つかの態様において、ELISAに採用される酵素コンジュゲートは、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)である。
本願ELISA法は、固相表面に、アルカリホスファターゼ(AP)やホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)等のレポーター酵素と結合した結合剤を含有する酵素コンジュゲートを接触させる工程を含む。結合剤は、検出抗体とコンジュゲートした検出剤と結合する。ストレプトアビジンは、ビオチン化抗体と結合する例示的結合剤である。レポーター酵素は、無色の基質を検出可能な有色の産物に変換する。例示的な酵素はホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)で、過酸化水素/テトラメチルベンジジン基質混合物を検出可能な色素に変換する。幾つかの態様において、ELISAに採用される酵素コンジュゲートは、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)である。
幾つかの態様において、酵素コンジュゲート溶液は、pH7.2〜7.4のPBS中の1%BSAの溶液中に希釈された酵素コンジュゲートを含有する。幾つかの態様において、固相表面は、約70°Fで、直接光を遮り、約20分間酵素コンジュゲートとインキュベーションされてもよい。固相表面は、インキュベーションされている間、被覆及び/又は密封されてもよい。
酵素基質を含有するELISA溶液
酵素コンジュゲート連続行程に続く洗浄プロセスの終了後、固相表面は、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。適切な基質として、酵素コンジュゲートの結合剤と連結した酵素に暴露されると有色産物に変換される無色産物を含む。無色産物から有色産物に変換されると、固相表面上の酵素基質溶液の光学密度が、標的の波長においてELISAプレートリーダー上で測定され得る。
酵素コンジュゲート連続行程に続く洗浄プロセスの終了後、固相表面は、酵素基質を含有する溶液と接触させられる。適切な基質として、酵素コンジュゲートの結合剤と連結した酵素に暴露されると有色産物に変換される無色産物を含む。無色産物から有色産物に変換されると、固相表面上の酵素基質溶液の光学密度が、標的の波長においてELISAプレートリーダー上で測定され得る。
例えば、適切な酵素基質として、ニトロブルーテトラゾリウム(NBT)と5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリルホスフェート(BCIP)(アルカリホスファターゼ基質)、ファストレッドTR/ナフトールAS−MXと4−クロロ−2−メチルベンゼンジアゾニウム/3−ヒドロキシ−2−ナフト酸2,4−ジメチルアニリドホスフェート(アルカリホスファターゼ基質)及び1:1の過酸化水素及びテトラメチルベンジジン混合物(HRP基質混合物)が挙げられる。
幾つかの態様において、酵素基質溶液は、約70°で、直接光を遮り、約20分間固相基質とインキュベーションされてもよい。
ELISA洗浄緩衝剤
固相表面は、捕捉抗体、ブロッキング剤、試料、検出抗体及び酵素コンジュゲート溶液のそれぞれと接触させられた後に洗浄される。洗浄緩衝剤は、ポリソルベート界面活性剤等の界面活性剤を含有する。特に適切な界面活性剤は、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート(例えばTWEEN(登録商標) 20, Sigma Aldrich, Missouri, USA)である。界面活性剤は、例えば、Ph7.2〜7.4のPBS、又はpH8.0のTris緩衝生理食塩水中に存在してもよい。特定の態様において、洗浄緩衝剤は、pH7.2〜7.4のPBS中に、0.05%のポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートを含有する。
固相表面は、捕捉抗体、ブロッキング剤、試料、検出抗体及び酵素コンジュゲート溶液のそれぞれと接触させられた後に洗浄される。洗浄緩衝剤は、ポリソルベート界面活性剤等の界面活性剤を含有する。特に適切な界面活性剤は、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート(例えばTWEEN(登録商標) 20, Sigma Aldrich, Missouri, USA)である。界面活性剤は、例えば、Ph7.2〜7.4のPBS、又はpH8.0のTris緩衝生理食塩水中に存在してもよい。特定の態様において、洗浄緩衝剤は、pH7.2〜7.4のPBS中に、0.05%のポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートを含有する。
ELISAの固相表面は、酵素基質溶液とのインキュベーションが終了した後、停止溶液と接触させられてもよい。幾つかの態様において、停止溶液は、2−NH2SO4を含有してもよい。停止溶液は、添加後に、プレート上に存在する溶液と激しく混合され得る。
ELISA固相表面の光学密度は、停止溶液と固相表面との接触後、分光光度計読み取りによって決定され得る。幾つかの態様において、光学密度は、停止溶液の添加直後に決定される。
本願ELISA法の一つの態様において、当該方法は、DuoELlSA Developmentキット又はdetecting human NRGl−bl/HRGl−bl (R&D Systems, Inc., Minneapolis, USA; catalog number DY377)を用いて実施される。
免疫組織化学
試料中のHRGの存在及びレベルは、免疫組織化学(IHC)又は免疫蛍光(IF)によって決定されてもよい。IHC又はIFによるHRGの定量には、1つ以上の抗HRG抗体を必要とする。IHC及びIFに適した抗HRG抗体は、市販されている。例えば、適切な抗体は、R&D Systems (Minneapolis, MN), abeam (Cambridge, MA), Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA), 又はNovus Biologicals (Littleton, CO)から購入できる。標準的な技術を用いて、抗HRG抗体は、薄片、例えばFFPE切片及び凍結腫瘍切片を含む腫瘍から得られた5ミクロン切片等中のHRGタンパク質の存在を検出するのに使用できる。典型的には、腫瘍切片は、最初に、腫瘍材料を収集及び保存する最初のプロセスにおいて固定されたタンパク質の抗原的構造を検索するように最初に処理される。そしてスライドは、抗HRG検出抗体による非特異的結合を防ぐように、ブロッキングされる。HRGタンパク質の存在は、抗HRG抗体(一次抗体)の、HRGタンパク質への結合によって検出される。一次抗体を認識し、結合する、検出抗体(二次抗体)は、フルホロフォア又は検出可能な酵素に連結している。典型的には、各工程の間に、腫瘍切片は洗浄され、ウシ血清アルブミン等の非特異的タンパク質でブロッキングされる。検出抗体が検出可能な酵素と連結している場合、スライドは、可視的シグナルを生じるように、適切な酵素基質を使用して現像される。検出抗体がフルオロフォアと連結している場合、スライドは、蛍光顕微鏡を用いて観察される。試料は、ヘマトキシリン等によって対比染色される。
試料中のHRGの存在及びレベルは、免疫組織化学(IHC)又は免疫蛍光(IF)によって決定されてもよい。IHC又はIFによるHRGの定量には、1つ以上の抗HRG抗体を必要とする。IHC及びIFに適した抗HRG抗体は、市販されている。例えば、適切な抗体は、R&D Systems (Minneapolis, MN), abeam (Cambridge, MA), Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA), 又はNovus Biologicals (Littleton, CO)から購入できる。標準的な技術を用いて、抗HRG抗体は、薄片、例えばFFPE切片及び凍結腫瘍切片を含む腫瘍から得られた5ミクロン切片等中のHRGタンパク質の存在を検出するのに使用できる。典型的には、腫瘍切片は、最初に、腫瘍材料を収集及び保存する最初のプロセスにおいて固定されたタンパク質の抗原的構造を検索するように最初に処理される。そしてスライドは、抗HRG検出抗体による非特異的結合を防ぐように、ブロッキングされる。HRGタンパク質の存在は、抗HRG抗体(一次抗体)の、HRGタンパク質への結合によって検出される。一次抗体を認識し、結合する、検出抗体(二次抗体)は、フルホロフォア又は検出可能な酵素に連結している。典型的には、各工程の間に、腫瘍切片は洗浄され、ウシ血清アルブミン等の非特異的タンパク質でブロッキングされる。検出抗体が検出可能な酵素と連結している場合、スライドは、可視的シグナルを生じるように、適切な酵素基質を使用して現像される。検出抗体がフルオロフォアと連結している場合、スライドは、蛍光顕微鏡を用いて観察される。試料は、ヘマトキシリン等によって対比染色される。
HRG遺伝子発現の評価
HRG遺伝子発現は、ヒト患者から取得した、取り出した、又は受け取った生体試料等のヒト患者由来の生体試料において評価され得る。そのような態様は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する、又は受け取る工程を含む。幾つかの態様は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の数値を決定する工程、及び任意で決定された数値を記録する工程を含む。
HRG遺伝子発現は、ヒト患者から取得した、取り出した、又は受け取った生体試料等のヒト患者由来の生体試料において評価され得る。そのような態様は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する、又は受け取る工程を含む。幾つかの態様は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の数値を決定する工程、及び任意で決定された数値を記録する工程を含む。
幾つかの態様において、タンパク質レベルでのHRG発現は、規制当局に認可された試験を使用して評価される。幾つかの態様において、前記規制当局に認可された試験が、FDA、EMA又はJPMAに認可された試験である。
HRG遺伝子発現レベルは、所定の閾値に関連して解釈され得る。閾値スコアと等しい又はより高いHRG遺伝子発現レベルは、対象が、抗HER3抗体等のHER3阻害剤による治療に応答し得る可能性が予想できると解釈される。幾つかの態様において、HER遺伝子発現レベルが閾値スコアを下回る場合、腫瘍がHER3阻害剤による治療に耐性(非応答性)であると予想できると解釈される。
幾つかの態様において、生体試料中のHRG遺伝子発現のレベルを表す数値に基づいて、HRG遺伝子発現は、「高HRG」又は「低HRG」と評価され得る。対象は、例えば、タンパク質レベルでのHRG発現に基づいて、高HRG又は低HRGと評価され得る。
例えば、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現は、生体試料からのタンパク質濃度値が所定の閾値と同等以上である場合に、「高HRG」と評価され得る。幾つかの態様において、前記所定の閾値は、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択され、例えば、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL又は約100000 pg/mLであってもよい。幾つかの態様において、生体試料中のタンパク質濃度値が約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL又は約100000 pg/mL以上である場合に、「高HRG」と評価され得る。幾つかの態様において、生体試料中のタンパク質濃度値が約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL又は約100000 pg/mL以上である場合に、「高HRG」と評価され得る。幾つかの態様において、生体試料中のタンパク質濃度値が約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL又は約100000 pg/mL未満である場合に、「低HRG」と評価され得る。
幾つかの態様において、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現は、1つ以上の供給源を起源とし得る可溶性HRGに基づいて評価され得る。例えば、幾つかの態様において、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現は、正常及び腫瘍細胞の両方を起源とし得る。
幾つかの態様において、より高いHRG遺伝子発現は、より良好な危険率及びp−値に相関する。
治療
幾つかの態様において、前記対象は、癌又は他の疾患に罹患しており、HRG遺伝子発現が高いと評価され、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与して治療され得る。幾つかの態様において、前記対象は、癌又は他の疾患に罹患しており、HRG遺伝子発現が低いと評価され、抗HER3抗体を含有する治療剤を控えることにより治療され得る。
幾つかの態様において、前記対象は、癌又は他の疾患に罹患しており、HRG遺伝子発現が高いと評価され、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与して治療され得る。幾つかの態様において、前記対象は、癌又は他の疾患に罹患しており、HRG遺伝子発現が低いと評価され、抗HER3抗体を含有する治療剤を控えることにより治療され得る。
幾つかの態様において、前記対象は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合、抗HER抗体の投与が行われることにより、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合、抗HER抗体の投与が控えられることにより、治療され得る。
幾つかの態様において、前記対象は、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合、抗HER抗体による治療を差し控える選択をすることにより、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合、抗HER抗体の投与を選択することにより、治療され得る。
抗HER3抗体は、HER3に結合するタンパク質又はリガンド、例えば上記で議論したものであってもよい。幾つかの態様において、前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8の一つ以上である。
抗HER3抗体は、任意の適切な用量で投与され得る。例えば、当該抗体は、約9mg/kg以上、約12mg/kg以上、約15mg/kg以上、約18mg/kg以上で投与され得る。幾つかの態様において、当該抗体は、約9mg/kg以下、約12mg/kg以下、約15mg/kg以下、約18mg/kg以下で投与され得る。
抗HER3抗体は、任意の適切な方法によって投与され得る。例えば、幾つかの態様において、前記抗体は静脈内投与される。しかしながら、投与経路は静脈内に限らず、他の適切な経路であってもよい。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、毎週1回以上、又はより高頻度で、又は2週間ごと、又は3週間ごと、又はより低頻度で投与される。
幾つかの態様において、前記治療は、チロシンキナーゼ阻害剤又はHER阻害剤、例えば上皮成長因子受容体阻害剤と組み合わせての、抗HER3抗体の投与であってもよい。当該治療は、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブの1つ以上と組み合わせての、抗HER3抗体の投与であってもよい。
幾つかの態様において、前記治療は、化学治療剤と組み合わせての、抗HER3抗体の投与であってもよい。当該治療は、シスプラチン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、カペシタビン、及び他の化学治療剤の1つ以上と組み合わせての、抗HER3抗体の投与であってもよい。
幾つかの態様において、前記治療は、チロシンキナーゼ阻害剤又はHER阻害剤と化学治療の両方と組み合わせての、抗HER3抗体の投与を含む。当該治療は、例えば、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブの1つ以上、並びにの1つ以上、シスプラチン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、カペシタビン、及び他の化学治療と組み合わせての、抗HER3抗体の投与であってもよい。
幾つかの態様において、前記治療は、放射線治療と組み合わせての、抗HER3抗体の投与を含む。幾つかの態様において、前記治療は、放射線治療、並びにチロシンキナーゼ阻害剤、HER阻害剤及び化学治療の1つ以上と組み合わせての、抗HER3抗体の投与を含む。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、放射線治療及び放射線療法セツキシマブ、シスプラチン、及び/又は5−フルオルウラシル等の、第一線(first−line)の転移性又は局所進行性の頭部頸部癌の治療と組み合わせて投与される。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、転移性又は局所進行性の頭部頸部癌における第一線の治療、例えばセツキシマブ、シスプラチン及び/又は5−フルオルウラシルと組み合わせて投与され得る。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、エルロチニブ又はプラチナベースの化学療法等の、第一線のNSCLCの治療と組み合わせて投与される。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、ドセタキセル等の、第二線のNSCLCの治療と組み合わせて投与される。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ及び/又は化学治療等の、RAS野生型癌、直腸結腸癌、及び他の癌の治療と組み合わせて投与される。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、放射線、セツキシマブ、シスプラチン、5−フルオルウラシル、及び/又は他のHER阻害剤又は化学治療と組み合わせて投与される。
幾つかの態様において、抗HER3抗体は、トラスズマブ、パクリタキセル、ラパマイシン、カペシタビン及び/又は他のHER阻害剤又は化学治療の1つ以上と組み合わせて投与される。
試験キット
幾つかの態様において、試験キットは、IHCによりHRG含有を決定するための材料を備える。例えば、HRGに対する一次抗体、及びホースラディッシュペルオキシダーゼ等のレポーター酵素とコンジュゲートした二次抗体を備え得る。幾つかの態様において、二次抗体は、一次抗体を特異的に認識するコンジュゲートされたポリマーで置き換えられても良い。
幾つかの態様において、試験キットは、IHCによりHRG含有を決定するための材料を備える。例えば、HRGに対する一次抗体、及びホースラディッシュペルオキシダーゼ等のレポーター酵素とコンジュゲートした二次抗体を備え得る。幾つかの態様において、二次抗体は、一次抗体を特異的に認識するコンジュゲートされたポリマーで置き換えられても良い。
本発明は、下記実施例によって更に例示される。実施例は例示のみを目的として提供され、いかなる場合も本発明のの範囲又は内容を限定することを意図しない。
略語
AE有害事象(adverse event);
CI信頼区間(confidence interval);
CR完全寛解(complete response);
DLT用量制限毒性(dose limiting toxicity);
FAS 全解析セット(full analysis set);
FFPE ホルマリン固定パラフィン包埋(formalin−fixed, paraffin− embedded);
HR 危険率(hazard ratio);
IN 静脈内(intravenous);
ITT 包括解析(intent to treat);
MTD最大耐量(maximum tolerated dose);
OS 全生存率(overall survival);
PD 進行性疾患progressive disease);
PFS 無増悪生存率(progression− free survival);
PH 比例ハザード(proportional hazards);
PO 経口(oral);
PR 部分反応(partial response);
SD 安定型疾患(stable disease).
AE有害事象(adverse event);
CI信頼区間(confidence interval);
CR完全寛解(complete response);
DLT用量制限毒性(dose limiting toxicity);
FAS 全解析セット(full analysis set);
FFPE ホルマリン固定パラフィン包埋(formalin−fixed, paraffin− embedded);
HR 危険率(hazard ratio);
IN 静脈内(intravenous);
ITT 包括解析(intent to treat);
MTD最大耐量(maximum tolerated dose);
OS 全生存率(overall survival);
PD 進行性疾患progressive disease);
PFS 無増悪生存率(progression− free survival);
PH 比例ハザード(proportional hazards);
PO 経口(oral);
PR 部分反応(partial response);
SD 安定型疾患(stable disease).
実施例1−第1b/2相臨床試験
この及び他の実施例は、無作為化された、偽薬コントロールされた、二重盲検第1b/2相試験を提供して、ステージIIIb/IVのNSCLCを有し、1つ以上の過去の化学治療計画の後にそれが進行している、EGFR阻害剤治療に感受性の対象における、エルロチニブと組み合わせたパトリツマブの安全性及び効率を評価する。
この及び他の実施例は、無作為化された、偽薬コントロールされた、二重盲検第1b/2相試験を提供して、ステージIIIb/IVのNSCLCを有し、1つ以上の過去の化学治療計画の後にそれが進行している、EGFR阻害剤治療に感受性の対象における、エルロチニブと組み合わせたパトリツマブの安全性及び効率を評価する。
本試験は、エルロチニブとパトリツマブの組み合わせの安全性及び耐容性を評価するための、及び第2相部分における用量を決定するための、第1b相非盲検、シングルアーム部分を含み、続いて、当該組み合わせ治療のエルロチニブ及び偽薬と比較しての効率及び安全性を評価するための、無作為化及び偽薬コントロールされた第2相部分を含む。最大耐量に達しなかった第1相の試験結果に基づいて、予備的ヒト薬物動態プロフィールは、実験動物モデルにおける最高の効率及び薬物動態を示したレベルを超える循環レベルに達するように、3週間に1回9mg/kg以上の静脈内パトリツマブ投与を支持した。より高い18mg/kgのレベルの維持用量も、動物モデルに対する臨床的設定における腫瘍組織穿孔の効果の可能性を受け入れるために含まれた。単一治療第1相研究における用量制限毒性の欠如のため、第1b相は、dose−de−escalation試験として設計され、エルロチニブ150mgの1日1回の経口投与及び3週間毎のパトリツマブ18mg/kgのIV投与が行われ、但し、MTDを越えた場合、この最大量からのdose de−escalationが備えられる。この第1b相コホートにおいてDLTは見られなかったので、このレベル以下での用量は、第2相部分に許容される。
上記試験の両方の部分において、対象は、1日1回150mgのエルロチニブの経口投与を受けた。3週間の治療サイクルの毎回の開始時、対象は、パトリツマブ又は偽薬のIV吸入を受けた(第2相部分)。3つの治療計画:150mgエルロチニブの毎日投与と18mg/kgパトリツマブの3週間毎投与との組み合わせ(高用量);150mgエルロチニブの毎日投与と9mg/kgパトリツマブ維持をロードした18mg/kgパトリツマブの3週間毎投与との組み合わせ(低用量);及び150mgエルロチニブの毎日投与と偽薬の3週間毎投与との組み合わせ(偽薬);が評価された。腫瘍は、最初の24週間は6週間毎(±3日)に、以降は12週間毎(±7日)に、試験サイクルから独立して評価された。
「高HRG」対象は、観察された可溶性HRG濃度が980pg/mL、試料セットのQuatile3である対象として定義された。
この試験において、無作為化された215名の対象から202個の血清試料が回収され
た。これらの試料中の可溶性HRGの濃度は、5バッチの複製において測定され、各対象において、可溶性HRG濃度の平均値が取得された。測定の過程で、アッセイの再現性は、濃度4000pg/mLのウシ胎児血清中の組換えヘレグリンである対照試料の反復測定によって確認された。70名の対照において、0pg/mlを超えるHRGデータが取得された。Quartile3は、202個の全ての試料を使用して決定された。
た。これらの試料中の可溶性HRGの濃度は、5バッチの複製において測定され、各対象において、可溶性HRG濃度の平均値が取得された。測定の過程で、アッセイの再現性は、濃度4000pg/mLのウシ胎児血清中の組換えヘレグリンである対照試料の反復測定によって確認された。70名の対照において、0pg/mlを超えるHRGデータが取得された。Quartile3は、202個の全ての試料を使用して決定された。
第2相部分における試料サイズは、片側アルファ=0.1の有意性レベルでの対象と比較されたいずれかのパトリツマブアームの間の中間PFS3.3対2.2における、50%改善(即ちHR0.667)を検出する80%のパワーを有する片側ログランク試験に基づいて計算された。
この試験の一次解析は、162個のPFS事象(そしてパトリツマブ18mg/kg+エルロチニブ及びコントロールアーム、並びに9mg/kg+エルロチニブ及びコントロールアームの比較あたり110個のPFS事象)が観察された時に行われた。一次解析の点において、全ての対象における治療割当(treatment assignment)は、データが調整及び整理された後の解析のための指定された研究要員に対し非盲検であり、整理されたデータベースのスナップショットが作成された。潜在的なバイアスを最小化するため、個々の治療割当は、試験が終了するまで、対象又は調査者に打ち明けられなかった。
全ての有効性解析は全解析セットに対して実施され、それは、1つ以上の用量の無作為化された試験医薬を受け取った無作為化された解析セットにおける全ての対象を含む。一次有効性終点は、PFSであった。PFSは、無作為化の日付からX線写真での疾患進行の最初の客観的記載の日、又は何らかの原因での死亡の日の早い方までの時間として定義される。カットオフ日までに(X線写真での)疾患進行の客観的記載無しに生存した対象は、最後の評価できる腫瘍評価の日に打ち切るべきであった。鍵第二有効性終点、全生存率、は、無作為化の日付から何らかの原因での死亡までの時間として定義され、一次有効性終点PFSと同様に解析された。
PFSにおける一次解析は、用量応答関係における層別ログランク線形傾向、続いて各パトリツマブアーム及び対象のペアワイズ比較を、層別ログランク検定を使用して、ランダム化での層別要素:組織学(腺癌対比腺癌)及び従来の治療に対する最良の応答(CR/PR対SD対PD)を考慮して、使用した。Kaplan−Meier曲線がPFSのために作成され、各治療群における中間及び95%CIを計算するのに使用された。各パトリツマブアーム及び対象の間のHRの推定は、95%CIと共に、層別化Cox比例ハザードモデルを使用して計算された。
FAS上での高HRG群におけるFPSにおける一次解析は、各パトリツマブアーム及び対象の層別ログランク検定、並びに組み合わせられたパトリツマブアーム及び対象の比較を使用した。層別化因子は、組織学(腺癌対非腺癌)及び従来の治療に対する最良の応答(CR/PR/SD対PD)を含んでいた。各パトリツマブアーム及び対照の間の、並びに組み合わせられたパトリツマブアーム及び対照の間の、HRの推定は、95%CIと共に、層別化ログランク検定に使用された層別化因子を用いて層別化Cox比例ハザードモデルを使用して計算された。
他に言及の無い限り、PFS及びOSにおけるログランクp値及びHRは、上記のランダム化における層別化で調整された一次解析に基づくものであった。
前記試験の第1b相部分には7人の対象(男性4名、年齢の中間値[範囲]68歳[48〜78])が参加し、全員が、150mgエルロチニブの毎日投与と、3週間毎の18mg/kgパトリツマブ投与の組み合わせを受けた。2名でAEグレードが3を上回り:1つのグレード3ケースは、疼痛、疲労、頭痛、脱水、下痢、及び血中クレアチン増大を示し;いずれもパトリツマブと関連しなかった。3名の対象は4つの深刻なAEを有し:1人の対象において、グレード3の疼痛(試験治療と無関係)、グレード3の脱水(エルロチニブ関連)、及びグレード1の食欲減退(エルロチニブ及びパトリツマブ関連)、及びグレード1の発熱(無関係)が見られた。最も報告的なAEは、グレード1又は2で、エルロチニブ関連と見做された。2を超える対象において報告された唯一のパトリツマブ関連のAEは、食欲減退であった(2名の対象)。
反応は記録されず、4名の対象において、安定な疾患が示された(83、87、90及び117日)。7名の対象全員が、疾患進行により試験治療から非継続となり;6名の対象は死亡するまで追跡され、1名の対象は、フォローアップの同意を取り下げた。
第1b相の試験の間に、DLTは報告されなかった。従って、第2相の用量計画は、パトリツマブ18mg/kgロード用量、続いて9mg/kgパトリツマブ又は18mg/kgパトリツマブ維持用量の投与のいずれかとした。対象には、第2相試験の間に、150mg/日のエルロチニブも投与された。
第2相部分において、3名の対象が無作為化されたが、治療されず、従って、FAS及び安全性解析セットにおいて、212名の対象が存在した。下記解析結果は、ロックされたデータベース(カットオフ日が2012年10月30日のデータ)からの有効性データ(OS以外)の一次解析に基づく。OSデータは、一次解析の時点ではまだ成熟しておらず、カットオフ日が2013年4月19日のデータに基づく更新されたOS解析からの予備的結果を、下記に示す。
前記試験の無作為化された第2相部分に参加した215人の対象の傾向を、表1にまとめた。全解析セットにおける統計学的情報を、表2にまとめた。統計学的な特性に関して、治療群間で意義のある相違は存在しなかった。
表1:第2相対象の傾向
注:パーセンテージは、参加した/無作為化された解析セットにおける対象の数に基づく。[a]:試験中の死亡=Y死亡日が、最初の薬物投与日以後かつAE回収期間内(パトリツマブの最後の投与後53日以内、又はエルロチニブの最後の投与後30日超、のいずれか遅い方)である場合。
表2:統計学的及びベースライン特性(全解析セット)
注:パーセンテージの分母は、FASの対象の数である。[a]:年齢は、インフォームドコンセント日及び誕生日を使用して計算される。
表1:第2相対象の傾向
表2:統計学的及びベースライン特性(全解析セット)
NSCLC歴及び事前の治療に関する対象のベースラインの特徴を表3に示す。対象は、治療群間で良好なバランスを有するように見える。
表3:ベースライン予後及び疾患特性(全解析セット)
注:パーセンテージは、全解析セット(FAS)の対象の割合を反映する。ベースライン=試験治療の最初の実施前の最後の非欠測値、[a]:対象が2つのラインの事前の化学治療計画を有する場合、最近の化学治療計画に対する最良の応答(「該当無し」を除く)が使用された。
表3:ベースライン予後及び疾患特性(全解析セット)
実施例2−全解析セットにおける無増悪生存率及び全生存率
FASにおけるPFSの一次解析を、表8に示す。FASにおける無増悪生存率のKaplan−Meier推定を図1に示す(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)。無選択のFASにおける全生存率(OS)結果を、表9及び図2に示す(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)。全解析セットにおいて、パトリツマブとエルロチニブとの組み合わせにおいて、エルロチニブと偽薬と比較して、PFS又はOSの顕著な改善は無く、この試験は、無選択ITT集団において否定的と見做された。
FASにおけるPFSの一次解析を、表8に示す。FASにおける無増悪生存率のKaplan−Meier推定を図1に示す(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)。無選択のFASにおける全生存率(OS)結果を、表9及び図2に示す(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)。全解析セットにおいて、パトリツマブとエルロチニブとの組み合わせにおいて、エルロチニブと偽薬と比較して、PFS又はOSの顕著な改善は無く、この試験は、無選択ITT集団において否定的と見做された。
低及び高用量パトリツマブ治療におけるCR/PRである応答を有する対象の数は、それぞれ9名(12.9%)及び5名(7.1%)であるのに対し、偽薬では4名(5.6%)であった。
表4:全解析セットにおける無増悪生存率の解析
注:PFSは、無作為化の日付から患進行の最初の客観的記載の日、又は何らかの原因での死亡の日の早い方までの時間として定義され、[a]:Kaplan−Meier推定。中間値のCIは、Brookmeyer−Crowley法を使用して算出された、[b]:層別化ログランク及び層別化Cox PHは、事前の治療に対する最良の応答及び組織学サブタイプ(腺癌対非腺癌)によって層別化された。
表5:全解析セットにおける全生存率の解析
注:OSは、無作為化の日から死亡日までの時間として定義される。[a]:Kaplan−Meier推定。中間値のCIは、Brookmeyer−Crowley法を使用して算出された、[b]:層別化ログランク及び層別化Cox PHは、事前の治療に対する最良の応答及び組織学サブタイプ(腺癌対非腺癌)によって層別化された。
表4:全解析セットにおける無増悪生存率の解析
表5:全解析セットにおける全生存率の解析
実施例3−HRGを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象における無増悪生存率
タンパク質濃度>980pg/mLと定義される、タンパク質レベルでの高HRG発現腫瘍を担持する対象における無増悪生存率のKaplan−Meier推定を、図3(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)及び図4(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。
タンパク質濃度>980pg/mLと定義される、タンパク質レベルでの高HRG発現腫瘍を担持する対象における無増悪生存率のKaplan−Meier推定を、図3(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)及び図4(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。
実施例4−可溶性HRGを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象における全生存率
タンパク質濃度>980pg/mLで定義されるタンパク質レベルでHRGを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象の見込みサブセットにおける予備的OS結果を、図5(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)及び図6(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。
タンパク質濃度>980pg/mLで定義されるタンパク質レベルでHRGを高レベルで発現する腫瘍を担持する対象の見込みサブセットにおける予備的OS結果を、図5(高及び低用量パトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)及び図6(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。
実施例5−可溶性HRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象における有効性
HRGの発現レベルの高い腫瘍を担持する対象と対照的に、HRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象は、PFR及びOSにおいて明確な治療差を示さなかった。タンパク質濃度<980pg/mLで定義されるHRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象におけるPFSのKaplan−Meier推定を、図7(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。タンパク質濃度<980pg/mLで定義されるHRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象におけるOSのKaplan−Meier推定を、図8(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。
HRGの発現レベルの高い腫瘍を担持する対象と対照的に、HRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象は、PFR及びOSにおいて明確な治療差を示さなかった。タンパク質濃度<980pg/mLで定義されるHRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象におけるPFSのKaplan−Meier推定を、図7(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。タンパク質濃度<980pg/mLで定義されるHRGを低レベルで発現する腫瘍を担持する対象におけるOSのKaplan−Meier推定を、図8(プールされたパトリツマブ+エルロチニブ対偽薬+エルロチニブを示す)に示す。
実施例6−可溶性HRGタンパク質濃度対臨床的利益における可能なカットオフ値
データは、HRGタンパク質濃度における幾つかの可能なカットオフ値に基づくプールされた用量のパトリツマブと偽薬との間のハザード比を計算するのに使用された。これらのハザード比は、表6に示されている。より高いHRG発現は、PFSに関してより良好な臨床的利益と一般に相関しているように見える。カットオフを980pg/mLから3000pg/mLに上げると、ハザード比によって判定されるような平均の利益の更なる改善をもたらす。
表6:カットオフに応じた高可溶性HRG群中のPFSにおけるハザード比及びp値
データは、HRGタンパク質濃度における幾つかの可能なカットオフ値に基づくプールされた用量のパトリツマブと偽薬との間のハザード比を計算するのに使用された。これらのハザード比は、表6に示されている。より高いHRG発現は、PFSに関してより良好な臨床的利益と一般に相関しているように見える。カットオフを980pg/mLから3000pg/mLに上げると、ハザード比によって判定されるような平均の利益の更なる改善をもたらす。
表6:カットオフに応じた高可溶性HRG群中のPFSにおけるハザード比及びp値
ELISAは、ヒトNRGl−bl/HRGl−bl DuoSet ELISA Development kit (R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN; catalog #DY377)を使用して、血清試料中の可溶性HRGを検出するために実施された。このアッセイを実施するために、PBS中に4.0μg/mlマウス抗ヒトNRG1−b1を含有する捕捉抗体溶液100μlを、96ウェルプレートの各ウェルに添加した。捕捉抗体溶液は、PBSで180倍に希釈して調製された(例えば、8ウェル分調製するために、895μlのPBSに、キット中のオリジナル溶液5μlが添加された)。このプレートを被覆し、室温で一昼夜置いた。
捕捉抗体溶液を吸引し、以下のいずれかによりウェルを洗浄した。(i)「調整洗浄(control wash)」法、噴出ボトルを使用して400μlの洗浄緩衝剤をウェルに充填し、この洗浄緩衝剤を除去し、このプロセスをもう2回、全部で3回繰り返す。又は(ii)「改善洗浄(improved wash)」法、マルチチャンネルピペッターを使用して180μlの洗浄緩衝剤を各ウェルに添加し、洗浄緩衝剤が泡立つまで20回ピストン動作を繰り返して、この洗浄緩衝剤を循環させる。そして洗浄緩衝剤を吸引し、新しく180μlの洗浄緩衝剤を添加して、この洗浄緩衝剤が泡立つまで20回ピストン動作を繰り返して、前記循環を反復する。この洗浄緩衝剤を吸引し、濯ぎ工程を実施する。各ウェルに200μlの洗浄緩衝剤を添加し、すぐに吸引して、全ての泡を除去する。従って、この改善洗浄は、ピストン動作及び1つの濯ぎ工程を使用する、2つの洗浄工程を含む。洗浄緩衝剤は、0.05%TWEEN(登録商標)20を含有するpH7.2〜7.4のPBSで、提供された溶液を蒸留水で25倍に希釈して調製された(即ち4mlオリジナル溶液+96ml蒸留水)。
1%BSAを含有する0.2μmメッシュで濾過したpH7.2〜7.4のPBSである試薬希釈剤300μLを各ウェルに添加し、プレートを被覆し、室温で1時間置いた。この間に、ヘレグリン標準を調製した(下記参照)。1時間のインキュベーション後、試薬希釈剤を吸引し、ウェルを、上記調整洗浄法又は改善洗浄法のいずれかを使用して洗浄した。
100μlの無希釈血清又は血漿(又はヘレグリン標準)を各ウェルに添加し、然る後プレートを被覆して室温で2時間置いた。試料(又は標準)を吸引し、ウェルを、上記上記調整洗浄法又は改善洗浄法のいずれかを使用して洗浄した。
試薬希釈剤中に150ng/mlのビオチン化ヤギ抗ヒトNRG1−b1抗体を含有する検出抗体溶液100μlを各ウェルに添加し、プレートを被覆し、2時間室温で置いた。検出抗体溶液は、オリジナル溶液を試薬希釈剤で180倍に希釈して調製した(例えば、8ウェル分調製するために、895μlの試薬希釈剤に、オリジナル溶液5μlが添加された)。キットの説明書には2%熱不活性化ヤギ血清(NGS)の添加が要求されているが、これらの実験において、NGSは検出抗体溶液中に含有されなかった。
検出抗体溶液を吸引し、ウェルを、調整洗浄法又は改善調整法のいずれかを使用して洗浄した。ストレプトアビジン−HRG溶液のワーキング溶液100μlを各ウェルに添加し、遮光条件下、室温で20分間インキュベーションした。前記キット中のストレプトアビジン−HRP溶液のバイアルには、HRPコンジュゲートストレプトアビジン1.0mlが含まれており、このバイアルの内容物を、バイアルのラベルの指示通りに試薬希釈剤で希釈することによって、ワーキング濃度が調製された。20分間のインキュベーション後、ストレプトアビジン−HRP溶液を吸引し、ウェルを、調整洗浄法又は改善調整法のいずれかを使用して洗浄した。
過酸化水素(カラー試薬A)及びテトラメチルベンジジン(カラー試薬B)の1:1混合物を含有する基質100μlを各ウェルに添加し、遮光条件下、室温で20分間インキュベーションし、その後各ウェルに50μlの停止溶液を添加した。停止溶液は、2−NH2SO4を含有している。そして、各ウェルの光学密度をOD450で測定した(OD570で補正)。
ヘレグリン標準は、下記のように調製された。
表7:ヘレグリン標準の調製
表7:ヘレグリン標準の調製
公表されているキットの指示を用いた可溶性HRGを検出する試行(調整洗浄法)は、一貫して失敗した。しかしながら、様々範囲の血清中の可溶性HRGが、改善洗浄法を用いたプロセスを使用して高い再現性で測定することが出来た。
実施例8−生体マーカーの同定
HRG生体マーカーは、インビボでの様々なヒト癌異種移植物に対する抗HER3抗体C3−1287の抗腫瘍活性を解析することにより、及びインビトロでのこれらの細胞株のHRGの発現の解析によって同定された。様々な症候のヒト腫瘍細胞株をマウス中で異種移植物として増殖させ、数週間に渡り抗HER3抗体C3−1287で治療した。腫瘍増殖の阻害は、対照マウスとU3−1287で治療したマウスとの間で腫瘍体積を比較することにより解析した。ヒト腫瘍細胞株はインビトロで増殖し、HRGのタンパク質発現は、ウエスタンブロットによって解析された。この解析の結果を、表8に示す。ウエスタンブロットにより測定したHER3の基底活性は、U3−1287のインビボ有効性と相関しておらず、FISH陽性乳癌モデルにおいて裕生であった。対照的に、解析された17モデル中15モデルにおいて、HRGの発現は、U3−1287のインビボ有効性と、非常に良く相関していた。
表8:インビボ異種移植物に使用された細胞株の遡及的インビトロ解析
HRG生体マーカーは、インビボでの様々なヒト癌異種移植物に対する抗HER3抗体C3−1287の抗腫瘍活性を解析することにより、及びインビトロでのこれらの細胞株のHRGの発現の解析によって同定された。様々な症候のヒト腫瘍細胞株をマウス中で異種移植物として増殖させ、数週間に渡り抗HER3抗体C3−1287で治療した。腫瘍増殖の阻害は、対照マウスとU3−1287で治療したマウスとの間で腫瘍体積を比較することにより解析した。ヒト腫瘍細胞株はインビトロで増殖し、HRGのタンパク質発現は、ウエスタンブロットによって解析された。この解析の結果を、表8に示す。ウエスタンブロットにより測定したHER3の基底活性は、U3−1287のインビボ有効性と相関しておらず、FISH陽性乳癌モデルにおいて裕生であった。対照的に、解析された17モデル中15モデルにおいて、HRGの発現は、U3−1287のインビボ有効性と、非常に良く相関していた。
表8:インビボ異種移植物に使用された細胞株の遡及的インビトロ解析
U3−1287の有効性は、ホスホ−HER3及びホスホ−AKTレベルの減少を測定することによりインビトロで決定された。基底HER3リン酸化は、内在的にヘレグリン(A549)を発現する細胞株、及び基底HER3活性化を有しない細胞においてブロックされたが、外来的ヘレグリン(CaOV3)によって刺激された。U3−1287の有効性の結果を図9に示す。
予想外なことに、規定HER3リン酸化を有するがヘレグリンを発現しない細胞はU3−1287治療に対し有効性を示さず(BT474basal)、なおもより驚くべきことに、これは、図10に示すように、外来的に加えられたヘレグリン(BT474+HRG)により克服することができた。
参照による援用
本願で引用している各特許文献及び学術文献は、あらゆる目的で参照により援用される。
本願で引用している各特許文献及び学術文献は、あらゆる目的で参照により援用される。
Claims (114)
- 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される、請求項1に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記対象が野生型EGFRを担持する、請求項1に記載の方法。
- 前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項5に記載の方法。
- 前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項1に記載の方法。
- 前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項1に記載の方法。 - 前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される、請求項10に記載の方法。
- 前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、請求項10に記載の方法。
- 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を控える工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度が計測され、これが所定の閾値と同等以下の場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される、請求項13に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項14に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、請求項14に記載の方法。
- 前記対象が野生型EGFRを担持する、請求項13に記載の方法。
- 前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項17に記載の方法。
- 前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項13に記載の方法。
- 前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項13に記載の方法。 - トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、請求項13に記載の方法。
- シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤を用いてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象を治療する工程を更に含む、請求項13に記載の方法。
- タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を行うためのキット。
- 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を取得する工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。 - 更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、請求項25に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。
- 更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、請求項26に記載の方法。
- 更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、請求項26に記載の方法。
- 更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、請求項25に記載の方法。
- 前記試料が、全血又は血清試料を含む、請求項25に記載の方法。
- 前記対象が、EGFR増感変異を担持していない、請求項25に記載の方法。
- 前記対象が野生型EGFRを担持する、請求項25に記載の方法。
- 前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項33に記載の方法。
- 前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項25に記載の方法。 - ELISAを実施する方法であって、固相表面と、それぞれ捕捉抗体、ブロッキング剤、解析物を含有すると思われる試料、検出抗体と酵素のコンジュゲートを含有する複数の溶液とを接触させる連続的工程を含み、当該固相表面が、各連続的工程の後に洗浄プロセスに供され、当該プロセスが:
(a)循環された洗浄緩衝剤が除去されるポイントで泡が観察されるまで高速で固相表面上及び外で洗浄緩衝剤を循環させる工程;
(b)新鮮な洗浄緩衝剤を用いて任意で工程(a)を繰りかえす工程;及び
(c)新鮮な洗浄緩衝剤で固相を濯ぐ工程;
を含み、但し、酵素コンジュゲート連続行程に続いての当該洗浄プロセスの終了後、当該固相が、酵素基質を含有する溶液と接触させられる、方法。 - 更に固相表面に停止溶液を添加することを含む、請求項36に記載の方法。
- 更に、存在する場合、試料中に存在する解析物の量の尺度を取得するために、分光読み取り値を取得する工程を含む、請求項37に記載の方法。
- 前記洗浄緩衝剤が界面活性剤を含有する、請求項36に記載の方法。
- 前記洗浄緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含有する、請求項39に記載の方法。
- 前記洗浄緩衝剤のpHが7.2〜7.4である、請求項40に記載の方法。
- 前記循環工程が、「ピストン」動作を用いて固相表面上及び外に洗浄緩衝剤を適用及び吸引する工程を含む、請求項36に記載の方法。
- 前記洗浄緩衝剤が、固相表面上及び外に20回以上循環させられる、請求項42に記載の方法。
- 前記洗浄プロセスの濯ぎ工程が、固相表面上の全ての泡を実質的に除去する、請求項36に記載の方法。
- 前記検出抗体を含有する溶液が、正常ヤギ血清を除く、請求項36に記載の方法。
- 前記「ピストン」動作が、ピペットを使用して実施される、請求項42に記載の方法。
- 前記捕捉抗体及び検出抗体が、ヒトヘレグリン(HRG)を特異的に認識する、請求項36に記載の方法。
- 前記試料を含有する溶液が、無希釈血清又は無希釈血漿を含有する、請求項36に記載の方法。
- 前記捕捉抗体が、マウス抗ヒトHRG抗体である、請求項47に記載の方法。
- 前記検出抗体が、ビオチン化ヤギ抗ヒトHRG抗体である、請求項49に記載の方法。
- 前記酵素コンジュゲートが、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼである、請求項50に記載の方法。
- 前記酵素基質が、過酸化水素及びテトラメチルベンジジンである、請求項51に記載の方法。
- 前記固相表面が、捕捉抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で8時間以上接触させられる、請求項49に記載の方法。
- 前記ブロッキング剤を含有する溶液が、pH7.2〜7.4のリン酸緩衝生理食塩水中の1%ウシ血清アルブミンを含む、請求項36に記載の方法。
- 前記固相表面が、ブロッキング剤を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で1時間以上接触させられる、請求項54に記載の方法。
- 前記固相表面が、試料を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる、請求項48に記載の方法。
- 前記固相表面が、検出抗体を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約2時間接触させられる、請求項50に記載の方法。
- 前記固相表面が、酵素コンジュゲートを含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる、請求項51に記載の方法。
- 前記固相表面が、酵素基質を含有する溶液と、約65°F〜80°Fの温度で約20分間接触させられる、請求項52に記載の方法。
- 前記固相表面が1つ以上のウェルを有するマイクロプレートである、請求項36に記載の方法。
- 循環工程(a)が、濯ぎ工程(c)を実施する前に2回実施される、請求項43に記載の方法。
- 前記界面活性剤がモノラウリン酸ソルビタンポリエチレングリコールである、請求項40に記載の方法。
- 無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される、請求項1〜35のいずれか1項に記載の方法。
- 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を受ける、又は実施する、又は差し控える方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価するための、自己組織を提供する、又はそれを採取することに同意する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、若しくは実施する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍の治療を選択する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を受ける工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控えることを選択する、又はタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された場合に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を受ける、又は実施することを選択する工程;
を含む方法。 - 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から生体試料を受け取る工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
任意で当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象においてタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の評価を注文する工程;及び
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤を投与する工程
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値を上回る場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと評価される、請求項69に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項70に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、約0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、請求項70に記載の方法。
- 前記対象が野生型EGFRを担持する、請求項69に記載の方法。
- 前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項73に記載の方法。
- 更に、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項69に記載の方法。
- 前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項70に記載の方法。
- 前記抗HER3抗体が、パトリツマブ、ドゥリゴツマブ(MEHD−7945A)、セリバンツマブ(MM−121), MM−111 , LJM716, RG−7116、三重特異性抗EGFR/ERBB3 zybody, huHER3−8、又はこれらのいずれかの誘導体又は断片からなる群から選択される、請求項69に記載の方法。
- 前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項69に記載の方法。 - 前記HER阻害剤が、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択される、請求項78に記載の方法。
- 前記化学治療剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される、請求項78に記載の方法。
- 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持するヒト対象を治療する方法であって:
タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価された局所進行性又は転移性NSCLCを担持すると診断されたヒト対象に、抗HER3抗体を含有する治療剤の投与を差し控える工程;
を含む、方法。 - 局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象から採取した生体試料からタンパク質濃度値が計測され、これが所定の閾値と同等以下である場合に、前記タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと評価される、請求項81に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、偽陽性及び偽陰性の望ましくない効果を最小化するように統計的に選択される、請求項82に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、請求項82に記載の方法。
- 前記対象が野生型EGFRを担持する、請求項81に記載の方法。
- 前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項85に記載の方法。
- 更に、局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト対象におけるタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現を評価する工程を含み、当該タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が、ELISA又は免疫組織化学技術を使用して評価される、請求項81に記載の方法。
- 前記生体試料が全血又は血清試料を含む、請求項82に記載の方法。
- 前記差し控えられる治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項81に記載の方法。 - 更に、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トラスズマブ、T−DM1、ラパチニブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、KD−019及びエルロチニブからなる群から選択されるHER阻害剤で治療する工程を含む、請求項81に記載の方法。
- 更に、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと診断されたヒト対象を、トシスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、イリノテカン、5−フルオルウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、及びカペシタビンからなる群から選択される化学治療剤で治療する工程を含む、請求項81に記載の方法。
- 局所進行性又は転移性非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍を担持すると診断された患者であって、患者への抗HER3抗体の投与を含む治療によって利益を受けられる者を同定する方法であって:
局所進行性又は転移性NSCLCと診断されたヒト患者から採取された生体試料を取得する工程;
当該試料を使用して、当該ヒト患者中のタンパク質レベルでのHRG遺伝子発現の値を決定する工程;及び
任意で当該決定された値を記録する工程;
を含む、方法。 - 更に、前記決定された値が、所定の閾値を下回るか、同等か、又は上回るかを評価する工程を含む、請求項92に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、及び約5000 pg/mLからなる群から選択される、請求項93に記載の方法。
- 更に、前記決定された値が所定の閾値を上回る場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が高いと特定する工程を含む、請求項93に記載の方法。
- 更に、前記決定された値が所定の閾値と同等以下である場合、タンパク質レベルでのHRG遺伝子発現が低いと特定する工程を含む、請求項93に記載の方法。
- 更に、前記決定された値を、担当医又は他の医療従事者に報告する工程を含む、請求項92に記載の方法。
- 前記試料が、全血又は血清試料を含む、請求項92に記載の方法。
- 前記対象が、EGFR増感変異を担持していない、請求項92に記載の方法。
- 前記対象が野生型EGFRを担持する、請求項92に記載の方法。
- 前記腫瘍が、1つ以上の過去の全身療法に対して進行している、請求項100に記載の方法。
- 前記治療が、抗HER3抗体の投与と、
(i)HER阻害剤、
(ii)化学治療剤、
(iii)放射線照射、及び
(iv)他の標的化された治療剤、
との組み合わせを含む、請求項92に記載の方法。 - 無作為化された臨床データに基づいてHRG遺伝子発現が高いと評価される、請求項69〜102のいずれか1項に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が、規制当局に認可された試験を使用して評価される、請求項1〜103のいずれか1項に記載の方法。
- 前記規制当局に認可された試験が、FDA、EMA又はPMDAに認可された試験である、請求項104に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、請求項14に記載の方法。
- 前記所定の閾値が、0 pg/mL、約980 pg/mL、約1000 pg/mL、約1622 pg/mL、約2000 pg/mL、約3000 pg/mL、約4000 pg/mL、約5000 pg/mL、約6000 pg/mL、約7000 pg/mL、約8000 pg/mL、約9000 pg/mL、約10000 pg/mL、約11000 pg/mL、約12000 pg/mL、約13000 pg/mL、約14000 pg/mL、約15000 pg/mL、約16000 pg/mL、約17000 pg/mL、約18000 pg/mL、約19000 pg/mL、約20000 pg/mL、約22000 pg/mL、約24000 pg/mL、約26000 pg/mL、約28000 pg/mL、約30000 pg/mL、約35000 pg/mL、約40000 pg/mL、約50000 pg/mL、約60000 pg/mL、約70000 pg/mL、約80000 pg/mL、約90000 pg/mL及び約100000 pg/mLからなる群から選択される、請求項26に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項6に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項18に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項34に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項74に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項86に記載の方法。
- HRG遺伝子発現が評価される腫瘍組織又はその断片が、治療の前に対象から除去されたものである、請求項101に記載の方法。
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