JP2016509045A

JP2016509045A - How to treat cancer and prevent drug resistance

Info

Publication number: JP2016509045A
Application number: JP2015558452A
Authority: JP
Inventors: ダバシシュラハ，; ジェフリーセットルマン，; ティモシーアール．ウィルソン，
Original assignee: エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 2013-02-22
Filing date: 2014-02-21
Publication date: 2016-03-24
Also published as: WO2014128235A1; CN104994879A; EP2958592A1; HK1211235A1; BR112015018418A2; MX2015010791A; KR20150118159A; CA2900097A1

Abstract

本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬の治療的に有効な組み合わせを含む医薬製品、並びに、がんの治療のために前記組み合わせを使用する方法である。【選択図】なしProvided herein are pharmaceutical products comprising a therapeutically effective combination of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and a targeted therapeutic agent, as well as the above for the treatment of cancer It is a method of using a combination. [Selection figure] None

Description

本明細書で提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤及び標的治療を使用する、がんなどの病的状態の治療のための治療法である。 Provided herein are therapeutics for the treatment of pathological conditions such as cancer using ALDH inhibitors and targeted therapies.

制がん剤に対する耐性の比較的急速な獲得は、成功するがん治療に対する重要な障害となっている。そのような薬剤耐性についての分子基盤を解明するための多大な労力が、薬剤排出、標的の薬物結合欠損変異株の獲得、代替生存経路との係合、エピジェネティックな変化を含む、種々の機構を明らかにしている。このような機構は、一般に、薬物治療中に選択された腫瘍細胞集団内における、希な、確率的な、耐性付与遺伝子変異の存在を反映すると考えられている。Sharma et al., Cell 141(1):69-80 (2010)。がん治療においてますます観察される現象は、いわゆる「再治療応答」である。例えば、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）による治療に良好に応答し、その後に治療の失敗を経験する一部の非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）患者は、「休薬日」の後、ＥＧＦＲＴＫＩ再治療に対する第２の応答を示す。Kurata et al., Ann. Oncol. 15:173-174 (2004); Yano et al., Oncol. Res. 15:107-111 (2005)。同様の再治療応答は、幾つかの他の抗がん剤において十分に確立されている。Cara and Tannock, Ann. Oncol. 12:23-27 (2001)。このような知見は、制がん剤に対して獲得された耐性は、その機構の基礎が確立されないままである、可逆的「薬剤耐性」状態を伴う可能性があることを示唆している。 The relatively rapid acquisition of resistance to anticancer drugs has become an important obstacle to successful cancer treatment. Numerous efforts to elucidate the molecular basis for such drug resistance include various mechanisms, including drug excretion, acquisition of target drug binding deficient mutants, engagement with alternative survival pathways, and epigenetic changes It is revealed. Such a mechanism is generally thought to reflect the presence of rare, stochastic, resistance-conferring gene mutations within the tumor cell population selected during drug treatment. Sharma et al., Cell 141 (1): 69-80 (2010). An increasingly observed phenomenon in cancer treatment is the so-called “re-treatment response”. For example, some non-small cell lung cancer (NSCLC) patients who respond well to treatment with EGFR (epidermal growth factor receptor) tyrosine kinase inhibitor (TKI) and subsequently experience treatment failure ”Followed by a second response to EGFR TKI retreatment. Kurata et al., Ann. Oncol. 15: 173-174 (2004); Yano et al., Oncol. Res. 15: 107-111 (2005). Similar re-treatment responses are well established in several other anticancer agents. Cara and Tannock, Ann. Oncol. 12: 23-27 (2001). Such findings suggest that the resistance gained against anticancer drugs may be associated with a reversible “drug resistance” state, where the basis of the mechanism remains unestablished.

様々なヒト腫瘍細胞株中における可逆的「薬剤耐性」細胞集団の存在は、ＩＧＦ−１受容体シグナル伝達との係合及びヒストンデメチラーゼＫＤＭ５Ａを必要とするクロマチン状態の改変を介して維持されることが示されている。幾つかの特異的耐性付与変異が、獲得された薬剤耐性を示している多くのがん患者で実際に同定されているが、薬剤耐性への変異機構と非変異機構の相対的な寄与、及び腫瘍細胞の亜集団の役割はいささか不明なままである。新しい治療法が、がん細胞集団内の不均一性及び薬物治療に耐性であるがん細胞の出現に首尾良く対処するために必要とされる。 The presence of a reversible “drug resistant” cell population in various human tumor cell lines is maintained through engagement with IGF-1 receptor signaling and alteration of chromatin state requiring the histone demethylase KDM5A It has been shown. Several specific resistance-conferring mutations have actually been identified in many cancer patients exhibiting acquired drug resistance, but the relative contribution of mutated and non-mutated mechanisms to drug resistance, and The role of the tumor cell subpopulation remains somewhat unknown. New therapies are needed to successfully address the heterogeneity within cancer cell populations and the emergence of cancer cells that are resistant to drug treatment.

本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含む組合せである。本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体においてがんを治療する方法である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含むがん治療の有効性を増加させるために有効である。例えば、幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）無しで（非存在下で）投与することを含む標準的治療と比較して、有効性を増加させるために有効である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）無しで（非存在下で）投与することを含む標準的治療と比較して、応答（例えば、完全寛解）を増加させるために有効である。方法の何れかの幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ジスルフィラム及び／又はその誘導体である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はジスルフィラムである。方法の何れかの幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ゴシポール及び／又はその誘導体である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はゴシポールである。 Provided herein are combinations comprising an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI). Provided herein is a method of treating cancer in an individual comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent. In some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an amount of cancer treatment comprising a targeted therapeutic agent (eg, TKI). Effective to increase effectiveness. For example, in some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). , Effective to increase efficacy compared to standard treatments involving administration (in the absence) without an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof). In some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). It is effective to increase response (eg, complete remission) compared to standard treatments involving administration (in the absence) without an inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof). In some embodiments of any of the methods, the ALDH inhibitor is disulfiram and / or a derivative thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is disulfiram. In some embodiments of any of the methods, the ALDH inhibitor is gossypol and / or a derivative thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is gossypol.

また、本明細書に提供されるのは、標的化治療薬の有効量及びＡＬＤＨ阻害剤の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において標的化治療薬を含むがん治療の有効性を増加させる方法である。 Also provided herein is the effectiveness of a cancer treatment comprising a targeted therapeutic agent in an individual, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of a targeted therapeutic agent and an effective amount of an ALDH inhibitor. It is a method to increase.

本明細書に提供されるのは、がん治療が、標的化治療薬の有効量及びＡＬＤＨ阻害剤の有効量を個体に同時に投与することを含み、がん治療が、標的化治療薬無しで（非存在下で）標的化治療薬の有効量を投与することを含む標準的治療と比較して、有効性を増加させる、個体においてがんを治療する方法である。更に、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において、標的化治療薬に対するがん耐性の発生を遅延及び／又は予防する方法である。 Provided herein, cancer treatment includes simultaneously administering to an individual an effective amount of a targeted therapeutic agent and an effective amount of an ALDH inhibitor, wherein the cancer treatment is performed without a targeted therapeutic agent. A method of treating cancer in an individual that increases efficacy compared to standard treatment comprising administering an effective amount of a targeted therapeutic agent (in the absence). Further provided herein is the development of cancer resistance to a targeted therapeutic agent in an individual comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent. A method to delay and / or prevent.

本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、標的化治療薬に対して耐性を発生する可能性が増加した、がんを有する個体を治療する方法である。加えて、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体における標的化治療薬に対する感受性を増加させる方法である。 Provided herein is an increased likelihood of developing resistance to a targeted therapeutic, including simultaneously administering to an individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of the targeted therapeutic. A method for treating an individual having cancer. In addition, provided herein is susceptibility to a targeted therapeutic agent in an individual having cancer, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent. It is a way to increase.

別の態様において、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体における標的化治療薬感受性の期間を延長する方法である。加えて、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体における標的化治療薬に対する応答の持続時間を延長する方法である。 In another aspect, provided herein is a targeted therapeutic drug sensitivity in an individual having cancer, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent. This is a method of extending the period. In addition, provided herein is a response to a targeted therapeutic agent in an individual having cancer, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent. It is a way to extend the duration.

方法の何れかの幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、小分子ＡＬＤＨ阻害剤である。幾つかの実施態様において、小分子ＡＬＤＨ阻害剤は、ジスルフィラム又はＡＬＤＨ阻害性誘導体又はその代謝産物である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミド又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミドである。方法の何れかの幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ゴシポール及び／又はＡＬＤＨ阻害誘導体又はその代謝産物である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はゴシポールである。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）である。 In some embodiments of any of the methods, the ALDH inhibitor is a small molecule ALDH inhibitor. In some embodiments, the small molecule ALDH inhibitor is disulfiram or an ALDH inhibitory derivative or metabolite thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide. In some embodiments of any of the methods, the ALDH inhibitor is gossypol and / or an ALDH inhibitor derivative or metabolite thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is gossypol. In some embodiments, the ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. . In some embodiments, the ALDH inhibitor is 2,2'-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene).

方法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）である。幾つかの実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、阻害剤は、抗体阻害剤、小分子阻害剤、結合ポリペプチドの阻害剤、及び／又はポリヌクレオチドアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、エルロチニブ）である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、Ｎ−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）−３−クロロフェニル）−６−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）フラン−２−イル）キナゾリン−４−アミン，ジ４−メチルベンゼンスルホン酸又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、ラパチニブ）である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、（Ｓ）−Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−３−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）イソニコチンアミド）又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、ＡＳ７０３０２６）である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩはベムラフェニブである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、３−（（Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−５−（１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミン又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、クリゾチニブ）である。 In some embodiments of any of the methods, the targeted therapeutic agent is a tyrosine kinase inhibitor (TKI). In some embodiments, the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor. In some embodiments, the TKI is a receptor tyrosine kinase inhibitor (RTKI). In some embodiments, the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, and / or ALK inhibitor. In some embodiments, the inhibitor is an antibody inhibitor, a small molecule inhibitor, an inhibitor of a binding polypeptide, and / or a polynucleotide antagonist. In some embodiments, the TKI is N- (3-ethynylphenyl) -6,7-bis (2-methoxyethoxy) quinazolin-4-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, erlotinib) is there. In some embodiments, TKI is N- (4- (3-fluorobenzyloxy) -3-chlorophenyl) -6- (5-((2- (methylsulfonyl) ethylamino) methyl) furan-2- I) Quinazolin-4-amine, di-4-methylbenzenesulfonic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof (for example, lapatinib). In some embodiments, TKI is (S) -N- (2,3-dihydroxypropyl) -3- (2-fluoro-4-iodophenylamino) isonicotinamide) or a pharmaceutically acceptable salt thereof Salt (eg AS703026). In some embodiments, the TKI is vemurafenib. In some embodiments, TKI is 3-((R) -1- (2,6-dichloro-3-fluorophenyl) ethoxy) -5- (1- (piperidin-4-yl) -1H-pyrazole. -4-yl) pyridin-2-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, crizotinib).

方法の何れかの幾つかの実施態様において、がんは、胃がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ））、結腸直腸がん（例えば、結腸がん及び／又は直腸がん）、又は基底細胞癌である。 In some embodiments of any of the methods, the cancer is gastric cancer, lung cancer (eg, non-small cell lung cancer (NSCL)), colorectal cancer (eg, colon cancer and / or rectal cancer), or Basal cell carcinoma.

一実施態様において、がんの治療のための同時又は順次使用のための、ａ）第一成分としてＡＬＤＨ阻害剤の有効量、及びｂ）第二成分として標的性薬剤（標的化治療薬）の有効量を含有する医薬製品が提供される。 In one embodiment, for simultaneous or sequential use for the treatment of cancer, a) an effective amount of an ALDH inhibitor as the first component, and b) a targeted agent (targeted therapeutic agent) as the second component. A pharmaceutical product containing an effective amount is provided.

別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、小分子ＡＬＤＨ阻害剤である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ジスルフィラム又はＡＬＤＨ阻害性誘導体又はその代謝産物である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミド又はその薬学的に許容可能な塩である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミドである、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）又はその薬学的に許容可能な塩である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）である、上記に示される医薬製品が提供される。 In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the ALDH inhibitor is a small molecule ALDH inhibitor. In another embodiment, provided is a pharmaceutical product as indicated above, wherein the ALDH inhibitor is disulfiram or an ALDH inhibitory derivative or metabolite thereof. In another embodiment, provided is a pharmaceutical product as indicated above, wherein the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof. . In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide. In another embodiment, the ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. There is provided a pharmaceutical product as indicated above. In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene). The

別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、標的化治療薬はチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、阻害剤は、抗体阻害剤、小分子阻害剤、結合ポリペプチドの阻害剤、及び／又はポリヌクレオチドアンタゴニストである、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩは、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン又はその薬学的に許容可能な塩、特にエルロチニブである、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩは、Ｎ−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）−３−クロロフェニル）−６−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）フラン−２−イル）キナゾリン−４−アミン，ジ４−メチルベンゼンスルホン酸又はその薬学的に許容可能な塩、特にラパチニブである、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩは、（Ｓ）−Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−３−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）イソニコチンアミド）又はその薬学的に許容可能な塩、特にＡＳ７０３０２６である、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩはベムラフェニブである、上記に示される医薬製品が提供される。別の実施態様において、ＴＫＩは、３−（（Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−５−（１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミン又はその薬学的に許容可能な塩、特にクリゾチニブである、上記に示される医薬製品が提供される。 In another embodiment, the ALDH inhibitor provides a pharmaceutical product as indicated above, wherein the targeted therapeutic is a tyrosine kinase inhibitor (TKI). In another embodiment, provided is a pharmaceutical product as indicated above, wherein the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor Is done. In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the TKI is a receptor tyrosine kinase inhibitor (RTKI). In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, and / or ALK inhibitor. In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the inhibitor is an antibody inhibitor, a small molecule inhibitor, an inhibitor of a binding polypeptide, and / or a polynucleotide antagonist. In another embodiment, TKI is N- (3-ethynylphenyl) -6,7-bis (2-methoxyethoxy) quinazolin-4-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular erlotinib, Is provided. In another embodiment, TKI is N- (4- (3-fluorobenzyloxy) -3-chlorophenyl) -6- (5-((2- (methylsulfonyl) ethylamino) methyl) furan-2-yl. There is provided a pharmaceutical product as indicated above which is quinazoline-4-amine, di-4-methylbenzenesulfonic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular lapatinib. In another embodiment, TKI is (S) -N- (2,3-dihydroxypropyl) -3- (2-fluoro-4-iodophenylamino) isonicotinamide) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. There is provided a pharmaceutical product as indicated above, in particular AS703026. In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the TKI is vemurafenib. In another embodiment, TKI is 3-((R) -1- (2,6-dichloro-3-fluorophenyl) ethoxy) -5- (1- (piperidin-4-yl) -1H-pyrazole- There is provided a pharmaceutical product as indicated above which is 4-yl) pyridin-2-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular crizotinib.

別の実施態様において、がんは、胃がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ）、結腸がん及び／又は直腸がん、又は基底細胞癌である、上記に示される医薬製品が提供される。 In another embodiment, there is provided a pharmaceutical product as indicated above, wherein the cancer is stomach cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer (NSCL), colon cancer and / or rectal cancer, or basal cell cancer.

改善されたがん治療法を提供することに加えて、本明細書に記載される特定の組み合わせの投与は、様々な治療を受けている同一患者により経験される生活の質と比較して、患者の生活の質を改善し得る。例えば、本明細書に記載される個体に対する標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）とＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）との組合せの投与は、もし患者が治療として標的化治療薬のみを受けるならば、同一患者が経験するであろう生活の質と比較して、改善された生活の質を提供し得る。例えば、本明細書に記載の組合せによる併用療法は、必要な標的化治療薬の用量を低下させ、それによって、治療に関連する副作用（例えば、悪心、嘔吐、脱毛、発疹は、食欲減少、体重減少など）を軽減させることができる。組合わせはまた、腫瘍量、及び、痛み、臓器不全、体重減少などの関連する有害事象の減少を引き起こす可能性がある。従って、本発明の一態様は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）によりがんを治療される患者の生活の質を改善するための治療用途のためのＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）を提供する。従って、本発明の別の態様は、標的化治療薬、又はその薬学的に許容可能な塩によりがんを治療される個体の生活の質を改善するための治療用途のためのＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）を提供する。 In addition to providing improved cancer treatments, the administration of certain combinations described herein is compared to the quality of life experienced by the same patient undergoing various treatments, Can improve the patient's quality of life. For example, administration of a combination of a targeted therapeutic agent (eg, TKI) and an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) to an individual described herein may be targeted to the patient as a treatment. Can receive an improved quality of life compared to the quality of life that the same patient would experience. For example, combination therapy with the combinations described herein reduces the dose of the targeted therapeutic agent required, thereby causing side effects associated with the treatment (eg, nausea, vomiting, hair loss, rash, loss of appetite, weight Reduction). The combination can also cause a decrease in tumor burden and associated adverse events such as pain, organ failure, weight loss. Accordingly, one aspect of the present invention is an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or for therapeutic use) to improve the quality of life of patients treated for cancer with targeted therapeutic agents (eg, TKI). Its derivatives). Accordingly, another aspect of the invention is an ALDH inhibitor for therapeutic use to improve the quality of life of an individual being treated for cancer with a targeted therapeutic agent, or a pharmaceutically acceptable salt thereof ( For example, disulfiram and / or its derivatives) are provided.

薬剤耐性胃がん細胞は、高レベルのＡＬＤＨ１Ａ１を発現する。（Ａ）ＡＬＤＨ活性が、Ａｌｄｅｆｌｕｏｒアッセイ（幹細胞技術）を使用して、ＫａｔｏＩＩ親及びクリゾチニブ（１ｕＭ）耐性細胞で測定された。ボディパイ標識基質は、ＡＬＤＨによって対応する酸に酸化されると蛍光を発する。写真は、クリゾチニブ治療後のＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ細胞の濃縮を示している。矢印は、親集団におけるＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ細胞を示している。（Ｂ）１９のＡＬＤＨファミリーメンバーのＲＮＡ発現レベルが、オリゴヌクレオチドベースのマイクロアレイを用いて決定された。ＫａｔｏＩＩ親細胞が、３７℃で３０分間、Ａｌｄｅｆｌｕｏｒ基質とともにインキュベートされ、ＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ及びＡＬＤＨ^ｌｏｗ細胞は、フローサイトメトリーによって選別された。遺伝子発現解析は、ＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ及びＡＬＤＨ^ｌｏｗ細胞から単離されたＲＮＡを用いて行われた。棒グラフは、ＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ細胞における、唯一のＡＬＤＨファミリーメンバー、ＡＬＤＨ１Ａ１の差次的発現を示す。（Ｃ）ＡＬＤＨ^ｌｏｗ細胞及び親細胞のそれぞれと比較して、ＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ細胞並びにクリゾチニブ耐性ＫａｔｏＩＩ及びＧＴＬ−１６細胞におけるＡＬＤＨ１Ａ１タンパク質のより高い発現レベルを示す免疫ブロット。Drug resistant gastric cancer cells express high levels of ALDH1A1. (A) ALDH activity was measured in KatoII parent and crizotinib (1 uM) resistant cells using the Aldeflor assay (stem cell technology). A body pi-labeled substrate fluoresces when oxidized to the corresponding acid by ALDH. The picture shows the enrichment of ALDH ^high cells after crizotinib treatment. Arrows indicate ALDH ^high cells in the parent population. (B) RNA expression levels of 19 ALDH family members were determined using oligonucleotide-based microarrays. Kato II parental cells were incubated with Aldefluor substrate for 30 minutes at 37 ° C., and ALDH ^high and ALDH ^low cells were sorted by flow cytometry. Gene expression analysis was performed using RNA isolated from ALDH ^high and ALDH ^low cells. The bar graph shows the differential expression of the only ALDH family member, ALDH1A1, in ALDH ^high cells. (C) Immunoblot showing higher expression levels of ALDH1A1 protein in ALDH ^high cells and crizotinib resistant KatoII and GTL-16 cells compared to ALDH ^low cells and parental cells, respectively. ＡＬＤＨ阻害剤ジスルフィラムは、薬剤耐性細胞を排除する。親のＫａｔｏＩＩ（Ａ）及びＧＴＬ−１６（Ｂ）細胞は、１ｕＭのクリゾチニブにより２５日間処置され、ジスルフィラム２００ｎＭが、クリゾチニブ処置の間の１日目（ｄ１）及び様々な時間間隔においての何れかで添加された。（Ｃ）親のＰＣ９細胞はエルロチニブで処置され、ジスルフィラム２００ｎＭが、エルロチニブ処置の間の様々な時点で添加された。処置あたり三連のウェルから作成される定量的測定値を表す棒グラフは、Ｓｙｔｏ６０生存率アッセイ（Wilson et al., 2011）によって測定される薬剤耐性細胞において、ジスルフィラムの致死効果を示している。データは無処置対照の分数として表され、エラーバーはＳＥＭ値を反映している。The ALDH inhibitor disulfiram eliminates drug resistant cells. Parental KatoII (A) and GTL-16 (B) cells were treated with 1 uM crizotinib for 25 days, and disulfiram 200 nM was administered either on day 1 (d1) during crizotinib treatment or at various time intervals. Added. (C) Parental PC9 cells were treated with erlotinib and disulfiram 200 nM was added at various times during erlotinib treatment. A bar graph representing quantitative measurements made from triplicate wells per treatment shows the lethal effect of disulfiram in drug resistant cells as measured by the Syto60 viability assay (Wilson et al., 2011). Data are expressed as fractions of untreated controls and error bars reflect SEM values. ジスルフィラムは、様々なタイプのがんの薬剤耐性細胞を死滅させる。（Ａ）さまざまながん遺伝子に依存している様々な組織起源のがん細胞におけるジスルフィラムと標的型がん薬物の組合せの効果を説明する。エルロチニブ（ＨＣＣ８２７及びＨＣＣ４００６）、ラパチニブ（ＨＣＣ１４１９、ＳＫＢＲ３及びＭＤＡ−ＭＢ−１７５ｖ２）、ＭＥＫ阻害剤のＡＳ７０３０２６（Ａ５４９及びＥＢＣ−１）及びＢＲＡＦ阻害剤ベムラフェニブ（Ｃｏｌｏ−２０５）に感受性のがん細胞は、適切な薬剤により、単独で又は２００ｎＭ〜３００ｎＭのジスルフィラムとの組合わせのどちらかで処置された。治療の継続期間は、ほとんど全ての薬剤耐性細胞を死滅させるためにＴＫＩ＋ジスルフィラム治療にかかった時間に応じて、１１日から２５日まで変化させた。（Ｂ）Ｓｙｔｏ６０生存性アッセイによって測定される、標的型がん薬物、ジスルフィラム及びそれらの組合せの効果の定量的測定（処置あたり三連ウェル）を表す棒グラフは、その生存のために、一般に、ＡＬＤＨに対する薬剤耐性細胞の依存性を示している。データは無処置対照の分数として表され、エラーバーはＳＥＭ値を反映している。Disulfiram kills drug-resistant cells of various types of cancer. (A) The effect of a combination of disulfiram and a targeted cancer drug on cancer cells originating from various tissues that depend on various oncogenes will be described. Cancer cells sensitive to erlotinib (HCC827 and HCC4006), lapatinib (HCC1419, SKBR3 and MDA-MB-175 v2), MEK inhibitors AS703026 (A549 and EBC-1) and BRAF inhibitor vemurafenib (Colo-205) are Treated with the appropriate drug, either alone or in combination with 200 nM to 300 nM disulfiram. The duration of treatment was varied from 11 to 25 days, depending on the time taken for TKI + disulfiram treatment to kill almost all drug resistant cells. (B) A bar graph representing the quantitative measurement (triplicate wells per treatment) of the effects of targeted cancer drugs, disulfiram and combinations thereof as measured by the Syto60 viability assay is generally due to its survival due to ALDH. Shows the dependence of drug-resistant cells on Data are expressed as fractions of untreated controls and error bars reflect SEM values. 薬剤耐性細胞におけるミトコンドリア呼吸とＲＯＳレベルの増加。（Ａ）ＲＯＳレベルは、フルオレセインベースのＨ２ＤＣＦＤＡ試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ）を用いて検出され、フローサイトメトリーによって測定された。ＰＣ９由来及びＧＴＬ−１６由来ＤＴＰは、４８時間ＴＫＩの存在下で、ジスルフィラム（２００ｎＭ）とＮＡＣ（５ｍＭ）で処置され、ＴＫＩ、ジスルフィラム及びＮＡＣの効果が測定された。未処置の親細胞と比較した、ＲＯＳレベルの倍数変化を示す棒グラフは、ＲＯＳスカベンジャーとしてのＡＬＤＨの役割を示している。（Ｂ）ＧＴＬ−１６及びＰＣ９由来ＤＴＰのミトコンドリア呼吸と解糖系のそれぞれによるエネルギー生産を測定するため、酸素消費速度（ＯＣＲ）及び細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）が、ＳｅａｈｏｒｓｅＸＦ９６を用いて測定された。棒グラフは、薬剤耐性細胞中のミトコンドリア呼吸の使用の増加を示している。（Ｃ）免疫ブロットは、ＧＴＬ−１６及びＰＣ９薬剤耐性細胞における高ＲＯＳレベルの結果として、二本鎖ＤＮＡ切断の増加とＤＮＡ修復機構の活性化を示している。Increased mitochondrial respiration and ROS levels in drug resistant cells. (A) ROS levels were detected using fluorescein-based H2DCFDA reagent (Molecular probes) and measured by flow cytometry. PC9-derived and GTL-16-derived DTP were treated with disulfiram (200 nM) and NAC (5 mM) in the presence of TKI for 48 hours, and the effects of TKI, disulfiram and NAC were measured. A bar graph showing the fold change in ROS levels compared to untreated parent cells shows the role of ALDH as a ROS scavenger. (B) In order to measure energy production by mitochondrial respiration and glycolysis of GTL-16 and PC9-derived DTP, oxygen consumption rate (OCR) and extracellular acidification rate (ECAR) were measured using Seahorse XF 96. Measured. The bar graph shows increased use of mitochondrial respiration in drug resistant cells. (C) Immunoblot shows increased double-strand DNA breakage and activation of DNA repair mechanisms as a result of high ROS levels in GTL-16 and PC9 drug resistant cells. ＲＯＳスカベンジャーのＮ−アセチルシステインは、ジスルフィラムの効果を逆転させる。（Ａ）ＰＣ９及び（Ｂ）ＧＴＬ−１６親細胞は、エルロチニブ及びクリゾチニブのそれぞれによって、単独で、又はジスルフィラム、ＮＡＣ、及びジスルフィラム＋ＮＡＣとの組み合わせの何れかにより１５日間処置された。細胞生存率に対するこれらの処置の効果を示す棒グラフは、細胞生存率に対するジスルフィラムの致死作用をレスキューするＮＡＣの能力を示している。（Ｃ１−２）ＧＴＬ−１６由来のＤＴＰは、４８時間ジスルフィラム及びＮＡＣによって処置された。ＮＡＣによる、γＨ２Ａ．ｘ、ＢｉｍＥＬ、ＢｉＭＳ、及び切断されたＰＡＲＰレベルに対するジスルフィラムの効果の逆転を実証する免疫ブロットデータ。ジスルフィラムは、ＤＴＰにおいてＲＯＳレベルを増加させアポトーシスを誘導する。The ROS scavenger N-acetylcysteine reverses the effect of disulfiram. (A) PC9 and (B) GTL-16 parental cells were treated with erlotinib and crizotinib, respectively, either alone or in combination with disulfiram, NAC, and disulfiram + NAC for 15 days. A bar graph showing the effect of these treatments on cell viability shows the ability of NAC to rescue the lethal effects of disulfiram on cell viability. (C1-2) DTP from GTL-16 was treated with disulfiram and NAC for 48 hours. According to NAC, γH2A. x, BimEL, BiMS, and immunoblot data demonstrating reversal of disulfiram's effect on cleaved PARP levels. Disulfiram increases ROS levels and induces apoptosis in DTP. ジスルフィラムは腫瘍再発を遅延させる。（Ａ）ＰＣ９親細胞は、エルロチニブ単独により又はジスルフィラムと組合わせて処置された。ＴＫＩ処置の６日後、ＤＴＰは、ジスルフィラムを含むか又は含まないエルロチニブフリー増殖培地中で増殖させた。最初の６日間ジスルフィラムを投与されたＰＣ９由来のＤＴＰの増殖遅延、及び続く４日間ジスルフィラムを投与され続けたものにおけるより一層長い増殖遅延を示す細胞生存率データ。棒グラフは、三連のウェルから測定され、平均＋／−ＳＤとして表されたＰＣ９由来ＤＴＰにおけるＤＳの効果を示す。（Ｂ）エルロチニブ単独と比較して、エルロチニブとジスルフィラムの組合せで処置された異種移植マウスモデルにおけるＰＣ９由来の腫瘍の再発遅延を示すインビボデータ。Disulfiram delays tumor recurrence. (A) PC9 parental cells were treated with erlotinib alone or in combination with disulfiram. Six days after TKI treatment, DTP was grown in erlotinib-free growth medium with or without disulfiram. Cell viability data showing a delayed growth of DTP from PC9 that received disulfiram for the first 6 days and a longer growth delay in those that continued to receive disulfiram for the next 4 days. The bar graph shows the effect of DS on PC9-derived DTP measured from triplicate wells and expressed as mean +/− SD. (B) In vivo data showing delayed recurrence of PC9-derived tumors in a xenograft mouse model treated with a combination of erlotinib and disulfiram compared to erlotinib alone. ジスルフィラムによる前処置は、全てのＤＴＰを死滅させるのに十分ではない。ＰＣ９（Ａ）及びＧＴＬ−１６（Ｂ）親細胞は、３日間又は６日間最初にＤＳで処置され、次いでＤＳの非存在下でＰＣ９細胞についてエルロチニブによって、及びＧＴＬ−１６細胞についてクリゾチニブによって処置された。ＤＳへの短時間の曝露はＤＴＰの数を減少させるが、それらを除去しないことを示すＳｙｔｏ６０細胞生存率染色。（Ｃ）ＡＬＤＨ１Ａ１単独のノックダウンは、ＧＬＴ１６細胞におけるクリゾチニブの薬物感受性に有意な影響を与えない。グラフは、複数のｓｈＲＮＡを使用する、ＧＴＬ１６細胞におけるＡＬＤＨ１Ａ１の相対的発現を示す。表は、ＡＬＤＨ１Ａ１ノックダウン細胞におけるクリゾチニブによる処置の際の、ＧＴＬ１６由来ＤＴＰの相対的割合を示す。Pretreatment with disulfiram is not sufficient to kill all DTP. PC9 (A) and GTL-16 (B) parental cells are first treated with DS for 3 or 6 days, then treated with erlotinib for PC9 cells and crizotinib for GTL-16 cells in the absence of DS It was. Syto60 cell viability staining showing that brief exposure to DS reduces the number of DTPs but does not remove them. (C) ALDH1A1 alone knockdown does not significantly affect the drug sensitivity of crizotinib in GLT16 cells. The graph shows the relative expression of ALDH1A1 in GTL16 cells using multiple shRNAs. The table shows the relative percentage of GTL16-derived DTP upon treatment with crizotinib in ALDH1A1 knockdown cells. 複数のＴＫＩ阻害剤を使用する薬物処置は、複数の細胞株内の複数のＡＬＤＨファミリーメンバーの発現を誘導する。（Ａ）ＧＴＬ１６由来ＤＴＰ（クリゾチニブで処置された親細胞）及びＰＣ９由来ＤＴＰ（エルロチニブで処置された親細胞）におけるＡＬＤＨファミリーメンバーのＲＮＡ発現の相対的変化。（Ｂ）ＧＴＬ１６親細胞及びＧＴＬ１６由来ＤＴＰ（クリゾチニブで処置された親細胞）及びＰＣ９親細胞及びＰＣ９由来ＤＴＰ（エルロチニブで処置された親細胞）におけるＡＬＤＨファミリーメンバーのＲＮＡ発現レベル。（Ｃ）ＡＬＤＨ１Ａ１は、ＧＴＬ−１６親細胞と比較して、ＤＴＰＧＴＬ−１６由来ＤＴＰ（クリゾチニブで処置された親細胞）で上方制御される。逆に、ＡＬＤＨ１Ａ１の発現は、ＰＣ９由来ＤＴＰ（エルロチニブで処置された親細胞）又はＰＣ９親細胞では有意には発現されず、ＰＣ９親細胞と比較して、ＰＣ９由来ＤＴＰ（エルロチニブで処置された親細胞）におけるＡＬＤＨ１Ａ１の発現レベルに有意な変化は無い。Drug treatment using multiple TKI inhibitors induces the expression of multiple ALDH family members within multiple cell lines. (A) Relative changes in RNA expression of ALDH family members in GTL16-derived DTP (parent cells treated with crizotinib) and PC9-derived DTP (parent cells treated with erlotinib). (B) RNA expression levels of ALDH family members in GTL16 parental cells and GTL16-derived DTP (parent cells treated with crizotinib) and PC9 parental cells and PC9-derived DTP (parental cells treated with erlotinib). (C) ALDH1A1 is upregulated by DTP GTL-16-derived DTP (parent cell treated with crizotinib) compared to GTL-16 parental cells. Conversely, ALDH1A1 expression is not significantly expressed in PC9-derived DTP (parent cells treated with erlotinib) or PC9 parental cells and compared to PC9 parental cells, PC9-derived DTP (parent treated with erlotinib) There is no significant change in the expression level of ALDH1A1 in the cells). ＡＬＤＨ阻害剤ゴシポールは薬剤耐性細胞を有意に減少させる。（Ａ）親ＰＣ９細胞は、８日間、２ｕＭのエルロチニブ及び１．５ｕＭのゴシポールにより、単独で、又は組合わせの何れかで処置された。（Ｂ）親ＧＴＬ−１６細胞は、１７日間、１ｕＭのクリゾチニブ及び１．５ｕＭのゴシポールにより、単独で、又は組合わせの何れかで処置された。処置あたり三連のウェルからの、Ｓｙｔｏ６０アッセイによる細胞生存率の定量的測定を示す棒グラフは、薬剤耐性細胞においてＤＳに似ているがゴシポールの弱い作用を示している。The ALDH inhibitor gossypol significantly reduces drug resistant cells. (A) Parental PC9 cells were treated with 2 uM erlotinib and 1.5 uM gossypol either alone or in combination for 8 days. (B) Parent GTL-16 cells were treated with 1 uM crizotinib and 1.5 uM gossypol either alone or in combination for 17 days. A bar graph showing quantitative measurements of cell viability by the Syto60 assay from triplicate wells per treatment is similar to DS but shows the weaker effect of gossypol in drug resistant cells.

詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書で使用する用語「ＡＬＤＨ」又は「アルデヒドデヒドロゲナーゼ」は、アルデヒドを酸化することができる酵素又は酵素のクラスを指す。アルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）（ＥｎｚｙｍｅＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ１．２．１．３）は、細胞内のアルデヒドを酸化することに関与する酵素であり、エタノール、ビタミンＡ、シクロホスファミド及び他のオキサザホスホリンの代謝において役割を果たす。ヒトのＡＬＤＨ酵素の例は、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ２、ＡＬＤＨ１Ａ３、ＡＬＤＨ１Ｂ１、ＡＬＤＨ１Ｌ１、ＡＬＤＨ１Ｌ２、ＡＬＤＨ２、ＡＬＤＨ３Ａ１、ＡＬＤＨ３Ａ２、ＡＬＤＨ３Ｂ１、ＡＬＤＨ３Ｂ２、ＡＬＤＨ４Ａ１、ＡＬＤＨ５Ａ１、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＤＨ８Ａ１、ＡＬＤＨ９Ａ１、ＡＬＤＨ１６Ａ１、ＡＬＤＨ１８Ａ１を含む。用語「野生型ＡＬＤＨ」は、一般に、天然に存在するＡＬＤＨタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 Detailed description Definitions As used herein, the term “ALDH” or “aldehyde dehydrogenase” refers to an enzyme or class of enzymes capable of oxidizing an aldehyde. Aldehyde dehydrogenase (ALDH) (Enzyme Commission 1.2.1.3) is an enzyme involved in the oxidation of intracellular aldehydes, ethanol, vitamin A, cyclophosphamide and other oxazaphosphos. Plays a role in phosphorus metabolism. Examples of human ALDH enzymes include ALDH1A1, ALDH1A2, ALDH1A3, ALDH1B1, ALDH1L1, ALDH1L2, ALDH2, ALDH3A1, ALDH3A2, ALDH3A1, ALDH6A1, ALDH4A1, ALDH4A1, ALDH4A1, ALDH4A. The term “wild type ALDH” generally refers to a polypeptide comprising the amino acid sequence of a naturally occurring ALDH protein.

用語「ＨＥＲ２」、「ＥｒｂＢ２」、「ｃ−Ｅｒｂ−Ｂ２」は同義的に使用される。他に示さない限り、用語「ＥｒｂＢ２」、「ｃ−Ｅｒｂ−Ｂ２」及び「ＨＥＲ２」は、本明細書中で使用される場合、ヒトタンパク質を指し、「ｅｒｂＢ２」、「ｃ−ｅｒｂ−Ｂ２」及び「ＨＥＲ２」はヒトの遺伝子を指す。ヒトｅｒｂＢ２遺伝子及びＥｒｂＢ２タンパク質は、例えば、Semba et al., PNAS (USA) 82:6497-6501 (1985) and Yamamoto et al. Nature 319:230-234 (1986) （Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｘ０３３６３）に記載される。ＥｒｂＢ２のは、４つのドメイン（ドメイン１−４）を含む。用語「野生型ＨＥＲ２」は、一般に、天然に存在するＨＥＲ２タンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 The terms “HER2”, “ErbB2”, “c-Erb-B2” are used interchangeably. Unless otherwise indicated, the terms “ErbB2”, “c-Erb-B2” and “HER2” as used herein refer to human proteins, “erbB2”, “c-erb-B2”. And “HER2” refers to the human gene. Human erbB2 gene and ErbB2 protein are described in, for example, Semba et al., PNAS (USA) 82: 6497-6501 (1985) and Yamamoto et al. Nature 319: 230-234 (1986) (Genbank accession number X03363). The ErbB2 includes four domains (domains 1-4). The term “wild type HER2” generally refers to a polypeptide comprising the amino acid sequence of a naturally occurring HER2 protein.

「ＥＧＦＲ」は、Ullrich et al, Nature(1984) 309:418425に記載される、受容体チロシンキナーゼポリペプチド上皮成長因子受容体を意味し、あるいはＨｅｒ−１及びｃ−ｅｒｂＢ遺伝子産物、並びにＥＧＦＲｖＩＩＩなどのその変異体を指す。ＥＧＦＲの変異体はまた、例えば、Lynch et al. (NEJM 2004, 350:2129), Paez et al. (Science 2004, 304:1497), Pao et al. (PNAS 2004, 101:13306)に記載される欠失、置換及び挿入変異体を含む。用語「野生型ＥＧＦＲ」は、一般に、天然に存在するＥＧＦＲタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 “EGFR” means the receptor tyrosine kinase polypeptide epidermal growth factor receptor, described in Ullrich et al, Nature (1984) 309: 418425, or Her-1 and c-erbB gene products, and EGFRvIII, etc. Refers to its mutants. Variants of EGFR are also described, for example, in Lynch et al. (NEJM 2004, 350: 2129), Paez et al. (Science 2004, 304: 1497), Pao et al. (PNAS 2004, 101: 13306). Deletion, substitution and insertion variants. The term “wild type EGFR” generally refers to a polypeptide comprising the amino acid sequence of a naturally occurring EGFR protein.

本明細書で使用する用語「ｃ−ｍｅｔ」又は「Ｍｅｔ」は、特に断りのない限り、任意の天然型又は変異体（天然又は合成の何れかの）ｃ−Ｍｅｔポリペプチドを指す。用語「野生型ｃ−ｍｅｔ」は、一般に、天然に存在するｃ−ｍｅｔタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 As used herein, the term “c-met” or “Met” refers to any natural or variant (either natural or synthetic) c-Met polypeptide, unless otherwise specified. The term “wild type c-met” generally refers to a polypeptide comprising the amino acid sequence of a naturally occurring c-met protein.

本明細書で使用する用語「ＢＲＡＦ」は、特に断りのない限り、任意の天然型又は変異体（天然又は合成の何れかの）ＢＲＡＦポリペプチドを指す。用語「野生型ＢＲＡＦ」は、一般に、天然に存在するＢＲＡＦタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 The term “BRAF” as used herein refers to any natural or variant (either natural or synthetic) BRAF polypeptide, unless otherwise specified. The term “wild type BRAF” generally refers to a polypeptide comprising the amino acid sequence of a naturally occurring BRAF protein.

用語「ＡＬＫ」は、未分化リンパ腫キナーゼを指す。ＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＢ２０９４７７，ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ９ＵＭ７３）は、受容体チロシンキナーゼである。（ヒトでは１６２０アミノ酸長である）このタンパク質は、中央部分に膜貫通ドメインを有し、カルボキシル末端のチロシンキナーゼ領域及びアミノ末端細胞外ドメインを有する（Oncogene. 1997 Jan. 30; 14 (4): 439-49）。ＡＬＫに関する包括的なレビューは、Pulford et al., J. of Cellular Physiol., 199:330-358, 2004を参照。完全長ＡＬＫ配列は、米国特許第５，７７０，４２１号に開示される。用語「野生型ＡＬＫ」は、一般に、天然に存在するＡＬＫタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。 The term “ALK” refers to anaplastic lymphoma kinase. ALK (undifferentiated lymphoma kinase) (GenBank accession number: AB209477, UniProt accession number Q9UM73) is a receptor tyrosine kinase. This protein (1620 amino acids in human) has a transmembrane domain in the middle, a carboxyl-terminal tyrosine kinase region and an amino-terminal extracellular domain (Oncogene. 1997 Jan. 30; 14 (4): 439-49). For a comprehensive review on ALK, see Pulford et al., J. of Cellular Physiol., 199: 330-358, 2004. The full length ALK sequence is disclosed in US Pat. No. 5,770,421. The term “wild type ALK” generally refers to a polypeptide comprising the amino acid sequence of a naturally occurring ALK protein.

目的のポリペプチドの「アンタゴニスト」（交換可能に呼ばれる「阻害剤」）は、目的のポリペプチドの活性化又は機能を妨げる、例えば、目的のポリペプチドによって媒介される生物学的活性を、部分的又は完全にブロックし、阻害し、又は中和する薬剤である。例えば、ポリペプチドＸのアンタゴニストは、ポリペプチドＸによって媒介される生物学的活性を、部分的又は完全にブロックし、阻害し、又は中和する任意の分子を指す。阻害剤の例には、抗体；リガンド抗体；小分子アンタゴニスト；アンチセンス及び阻害性ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ）分子を含む。好ましくは、阻害剤は、目的のポリペプチドに結合する抗体又は小分子である。特定の実施態様において、阻害剤は、約１０００ｎＭ以下の目的のポリペプチドに対する結合親和性（解離定数）を有する。別の実施態様において、阻害剤は、約１００ｎＭ以下の目的のポリペプチドに対する結合親和性を有する。別の実施態様において、阻害剤は、約５０ｎＭ以下の目的のポリペプチドに対する結合親和性を有する。特定の実施態様において、阻害剤は、目的のポリペプチドに共有結合している。特定の実施態様において、阻害剤は、１０００ｎＭ以下のＩＣ_５０で、目的のポリペプチドのシグナル伝達を阻害する。別の実施態様において、阻害剤は、５００ｎＭ以下のＩＣ_５０で、目的のポリペプチドのシグナル伝達を阻害する。別の実施態様において、阻害剤は、５０ｎＭ以下のＩＣ_５０で、目的のポリペプチドのシグナル伝達を阻害する。ある実施態様では、アンタゴニストは、目的のポリペプチドの発現レベル又は生物学的活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上低減又は阻害する。 An “antagonist” of the polypeptide of interest (an “inhibitor”, referred to interchangeably), interferes with the activation or function of the polypeptide of interest, eg, a biological activity mediated by the polypeptide of interest Or an agent that completely blocks, inhibits or neutralizes. For example, an antagonist of polypeptide X refers to any molecule that partially or fully blocks, inhibits, or neutralizes a biological activity mediated by polypeptide X. Examples of inhibitors include antibodies; ligand antibodies; small molecule antagonists; antisense and inhibitory RNA (eg, shRNA) molecules. Preferably, the inhibitor is an antibody or small molecule that binds to the polypeptide of interest. In certain embodiments, the inhibitor has a binding affinity (dissociation constant) for the polypeptide of interest of about 1000 nM or less. In another embodiment, the inhibitor has a binding affinity for the polypeptide of interest of about 100 nM or less. In another embodiment, the inhibitor has a binding affinity for a polypeptide of interest of about 50 nM or less. In certain embodiments, the inhibitor is covalently linked to the polypeptide of interest. In certain embodiments, the inhibitor inhibits signaling of the polypeptide of interest with an IC ₅₀ of 1000 nM or less. In another embodiment, the inhibitor inhibits signaling of the polypeptide of interest with an IC ₅₀ of 500 nM or less. In another embodiment, the inhibitor inhibits signaling of the polypeptide of interest with an IC ₅₀ of ₅₀ nM or less. In certain embodiments, the antagonist has an expression level or biological activity of the polypeptide of interest of at least 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% or Further reduce or inhibit.

本明細書で使用される用語「標的化治療薬」は、目的のポリペプチド（単数又は複数）に結合し、目的の特定のポリペプチドの活性及び／又は活性化を阻害する治療薬を指す。このような薬剤の例には、目的のポリペプチドに結合する抗体及び小分子を含む。幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩはＲＴＫＩである。 The term “targeted therapeutic agent” as used herein refers to a therapeutic agent that binds to the polypeptide (s) of interest and inhibits the activity and / or activation of a particular polypeptide of interest. Examples of such agents include antibodies and small molecules that bind to the polypeptide of interest. In some embodiments, the targeted therapeutic agent is TKI. In some embodiments, the TKI is RTKI.

「チロシンキナーゼ阻害剤」又は「ＴＫＩ」は、チロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性により媒介される活性化又は機能を妨げる、例えば、チロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性により媒介される生物学的活性を部分的又は完全にブロックし、阻害し、又は中和する薬剤を指す。 A “tyrosine kinase inhibitor” or “TKI” prevents activation or function mediated by the tyrosine kinase activity of a tyrosine kinase, eg, partially or fully a biological activity mediated by the tyrosine kinase activity of a tyrosine kinase. Refers to an agent that blocks, inhibits, or neutralizes.

「受容体チロシンキナーゼ阻害剤」又は「ＲＴＫＩ」は、受容体チロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性により媒介される活性化又は機能を妨げる、例えば、受容体チロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性により媒介される生物学的活性を部分的又は完全にブロックし、阻害し、又は中和する薬剤を指す。 A “receptor tyrosine kinase inhibitor” or “RTKI” prevents activation or function mediated by the tyrosine kinase activity of the receptor tyrosine kinase, eg, biologically mediated by the tyrosine kinase activity of the receptor tyrosine kinase. Refers to an agent that partially or completely blocks, inhibits, or neutralizes activity.

特に断らない限り、本明細書で使用する用語「ポリペプチド」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型ポリペプチドを指す。その用語は、「完全長」、未処理のポリペプチド並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のポリペプチドを含む。その用語はまた、天然に存在するポリペプチドの変異体、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子変異型を包含する。 Unless otherwise noted, the term “polypeptide” as used herein refers to any natural origin from any vertebrate, including mammals such as primates (eg, humans) and rodents (eg, mice, rats). Refers to type polypeptide. The term includes “full length”, untreated polypeptide as well as any form of polypeptide resulting from intracellular processing. The term also encompasses naturally occurring variants of the polypeptide, such as splice variants or allelic variants.

「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、本明細書では同義的に用いられ、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドとは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド又は塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼにより、又は合成反応により、ポリマー中に組み込むことができる任意の基質とすることができる。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの構築の前又は後に分け与えることができる。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチド成分により中断されていてもよい。ポリヌクレオチドは、合成後に、例えば標識とのコンジュゲーションにより更に修飾されても良い。他のタイプの修飾は、例えば、「キャップ」、一以上の天然に存在するヌクレオチドの類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合を有するもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミダート、カルバメートなど）及び荷電結合を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部分を含有するもの、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジンなど）、インターカレーターを有するもの（例えば、アクリジン、ソラレンなど）、キレート剤を有するもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化性金属など）、アルキル化剤を含有するもの、修飾された結合を持つもの（例えば、アルファアノマー核酸など）、並びにポリヌクレオチド（単数又は複数）の未修飾形態を含む。更に、糖中に通常存在するヒドロキシル基の何れかが、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基によって置換され、標準的な保護基で保護され、又は付加的ヌクレオチドへの付加的結合を調製するように活性化されても良く、又は固体又は半固体支持体にコンジュゲートされても良い。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化され、又はアミン若しくは１から２０個の炭素原子を有する有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルはまた、標準的な保護基へと誘導体化され得る。ポリヌクレオチドはまた、一般的に当技術分野で知られる、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−又は２’−アジド−リボース、炭素環式糖類似体、α−アノマー糖、アラビノースなどのエピマー糖、キシロース又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環状類似体及びメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシド類似体を含む、リボース又はデオキシリボース糖の類似形態を含めることができる。一以上のホスホジエステル結合が、代替の連結基で置き換えてもよい。これらの代替の連結基は、限定されないが、リン酸が、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ_２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ_２（「ホルムアセタール」）によって置換され、ここで、各Ｒ又はＲ’は独立してＨ、又は、任意でエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）を含んでなる置換型若しくは非置換型アルキル（１−２０Ｃ）である、実施態様を含む。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。先の記述は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で引用される全てのポリヌクレオチドに適用される。 “Polynucleotide” or “nucleic acid” are used interchangeably herein and refer to a polymer of nucleotides of any length, including DNA and RNA. Nucleotides can be deoxyribonucleotides, ribonucleotides, modified nucleotides or bases, and / or their analogs, or any substrate that can be incorporated into a polymer by DNA or RNA polymerase, or by synthetic reactions. . A polynucleotide can comprise modified nucleotides, such as methylated nucleotides and their analogs. If present, modifications to the nucleotide structure can be imparted before or after assembly of the polymer. The sequence of nucleotides may be interrupted by non-nucleotide components. A polynucleotide may be further modified after synthesis, such as by conjugation with a label. Other types of modifications include, for example, “caps”, substitution with one or more naturally occurring nucleotide analogs, internucleotide modifications, eg, those having uncharged bonds (eg, methylphosphonates, phosphotriesters, Phosphoamidates, carbamates, etc.) and those with charged bonds (eg phosphorothioate, phosphorodithioate, etc.), those containing pendant moieties, eg proteins (eg nucleases, toxins, antibodies, signal peptides, ply-L -Lysine etc.), those having an intercalator (eg, acridine, psoralen, etc.), those having a chelating agent (eg, metal, radioactive metal, boron, oxidizing metal, etc.), those containing an alkylating agent, modified (Eg, alpha anomeric nucleic acid) Etc.), as well as unmodified forms of the polynucleotide (s). In addition, any of the hydroxyl groups normally present in the sugar are replaced by, for example, phosphonate groups, phosphate groups, protected with standard protecting groups, or active to prepare additional linkages to additional nucleotides. Or it may be conjugated to a solid or semi-solid support. The 5 ′ and 3 ′ terminal OH can be phosphorylated or substituted with amines or organic capping group moieties having 1 to 20 carbon atoms. Other hydroxyls can also be derivatized to standard protecting groups. Polynucleotides are also commonly known in the art, eg 2′-O-methyl-, 2′-O-allyl, 2′-fluoro- or 2′-azido-ribose, carbocyclic sugar analogs Similar forms of ribose or deoxyribose sugars, including epimer sugars such as α-anomeric sugars, arabinose, xylose or lyxose, pyranose sugars, furanose sugars, cedoheptulose, acyclic analogues and abasic nucleoside analogues such as methylriboside Can be included. One or more phosphodiester bonds may be replaced by alternative linking groups. These alternative linking groups include, but are not limited to, phosphates such as P (O) S (“thioate”), P (S) S (“dithioate”), (O) NR ₂ (“amidate”), P Substituted by (O) R, P (O) OR ′, CO or CH ₂ (“form acetal”), wherein each R or R ′ is independently H, or optionally ether (—O—) Embodiments which are substituted or unsubstituted alkyl (1-20C) comprising a bond, aryl, alkenyl, cycloalkyl, cycloalkenyl or araldyl are included. Not all bonds in a polynucleotide need be identical. The preceding description applies to all polynucleotides cited herein, including RNA and DNA.

用語「小分子」は、約２０００ダルトン以下、好ましくは約５００ダルトン以下の分子量を有する任意の分子を指す。 The term “small molecule” refers to any molecule having a molecular weight of about 2000 Daltons or less, preferably about 500 Daltons or less.

「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定される場合、９５％以上又は９９％の純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。 An “isolated” antibody is one that has been separated from a component of its natural environment. In some embodiments, the antibody is determined, for example, by electrophoresis (eg, SDS-PAGE, isoelectric focusing (IEF), capillary electrophoresis) or chromatography (eg, ion exchange or reverse phase HPLC). The purity is 95% or more or 99%. For a review of antibody purity assessment methods, see, for example, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87 (2007).

本明細書において用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。 The term “antibody” is used herein in the broadest sense and encompasses a variety of antibody structures including, but not limited to, monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies), and As long as the desired antigen-binding activity is exhibited, antibody fragments are included.

目的の抗ポリペプチド抗体及び目的のポリペプチド「に結合する抗体」なる用語は、抗体が、目的のポリペプチドを標的とすることにおいて、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性で目的のポリペプチドに結合することができる抗体を指す。一実施態様において、目的の抗ポリペプチド抗体の、無関係な、目的の非ポリペプチドタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、
目的のポリペプチドへの抗体の結合の約１０％未満である。所定の実施態様において、ポリペプチドへ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^−８Ｍ未満、例えば、１０^−８Ｍから１０^−１３Ｍ、例えば、１０^−９Ｍから１０^−１３Ｍ）を有する。ある実施態様において、目的の抗ポリペプチド抗体は、異なる種由来の目的のポリペプチド間に保存されている、目的のポリペプチドのエピトープに結合する。 The term anti-polypeptide antibody of interest and “antibody that binds to” a polypeptide of interest is used so that the antibody is useful as a diagnostic and / or therapeutic agent in targeting the polypeptide of interest. An antibody that can bind to a polypeptide of interest with sufficient affinity. In one embodiment, the degree of binding of the anti-polypeptide antibody of interest to an irrelevant, non-polypeptide protein of interest is measured, for example, by radioimmunoassay (RIA):
Less than about 10% of antibody binding to the polypeptide of interest. In certain embodiments, an antibody that binds to a polypeptide has a dissociation constant (Kd) of ≦ 1 μM, ≦ 100 nM, ≦ 10 nM, ≦ 1 nM, ≦ 0.1 nM, ≦ 0.01 nM, or ≦ 0.001 nM ( For example, less than 10 ⁻⁸ M, such as 10 ⁻⁸ M to 10 ⁻¹³ M, eg 10 ⁻⁹ M to 10 ⁻¹³ M). In certain embodiments, the anti-polypeptide antibody of interest binds to an epitope of the polypeptide of interest that is conserved between the polypeptides of interest from different species.

「ブロッキング」抗体又は「アンタゴニスト抗体」は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害又は減少させるものである。好適なブロッキング抗体又はアンタゴニスト抗体は、実質的に又は完全に抗原の生物学的活性を阻害する。 A “blocking” antibody or “antagonist antibody” is one that inhibits or reduces the biological activity of the antigen to which it binds. Suitable blocking or antagonist antibodies substantially or completely inhibit the biological activity of the antigen.

「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当該技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の事例的及び具体的な実施態様を以下に記載する。 “Affinity” refers to the strength of the sum total of non-covalent interactions between a single binding site of a molecule (eg, an antibody) and its binding partner (eg, an antigen). As used herein, unless otherwise indicated, “binding affinity” is an intrinsic binding affinity that reflects a 1: 1 interaction between members of a binding pair (eg, antibody and antigen). Point to. The affinity of molecule X for its partner Y can generally be expressed as a dissociation constant (Kd). Affinity can be measured by common methods known in the art, including those described herein. Specific example and specific embodiments for measuring binding affinity are described below.

「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。 “Antibody fragment” refers to a molecule other than an intact antibody, including a portion of an intact antibody that binds to an antigen to which the intact antibody binds. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, Fv, Fab, Fab ′, Fab′-SH, F (ab ′) ₂ ; diabodies; linear antibodies; single chain antibody molecules (eg scFv); and antibody fragments A multispecific antibody formed from

参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を、５０％又はそれ以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を、５０％又はそれ以上遮断する。 An “antibody that binds to the same epitope” as a reference antibody refers to an antibody that blocks 50% or more of the binding of a reference antibody to its antigen in a competition assay, and conversely, a reference antibody Blocks 50% or more of its binding to the antigen.

用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる起源又は種から由来する抗体を指す。 The term “chimeric” antibody refers to an antibody in which a portion of the heavy and / or light chain is derived from a particular source or species, while the remainder of the heavy and / or light chain is from a different source or species.

用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又はＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。 The terms “full-length antibody”, “intact antibody” and “whole antibody” are used interchangeably herein and have a structure substantially similar to the native antibody structure or include an Fc region. Refers to an antibody having a heavy chain.

本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体の調製物とは異なり、モノクローナル抗体の調製物の各モノクローナル抗体は、抗原の単一の決定基に対するものである。「モノクローナル」なる修飾語句は、抗体の、実質的に均一な抗体の集団から得られたものであるという特性を示し、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないと解釈されるべきものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法を含む様々な技術によって作成される。 The term “monoclonal antibody” as used herein means an antibody obtained from a substantially homogeneous population of antibodies, ie, contains, for example, naturally occurring mutations or occurs during the manufacture of a monoclonal antibody formulation. However, the individual antibodies that make up the population are identical and / or bind to the same epitope, except for potential variant antibodies, such as variants that are generally present in small amounts. Unlike polyclonal antibody preparations that typically include different antibodies directed against different determinants (epitopes), each monoclonal antibody in a monoclonal antibody preparation is directed against a single determinant of the antigen. The modifier “monoclonal” indicates the property of the antibody as being derived from a substantially homogeneous population of antibodies and is to be construed as producing the antibody in some specific way is not. For example, the monoclonal antibody used in accordance with the present invention is not limited, but includes a hybridoma method, a recombinant DNA method, a phage display method, a method using a transgenic animal containing all or part of the immunoglobulin locus, a monoclonal antibody Can be made by a variety of techniques, including such methods and other exemplary methods for making.

「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。 A “human antibody” has an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence of an antibody produced by a human or human cell, or derived from a non-human source utilizing a repertoire of human antibodies or sequences encoding other human antibodies. Is. This definition of a human antibody specifically excludes humanized antibodies that contain non-human antigen binding residues.

「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。 A “humanized” antibody refers to a chimeric antibody comprising amino acid residues derived from non-human HVR and amino acid residues derived from human FRs. In certain embodiments, a humanized antibody comprises substantially all of at least one, typically two variable domains, and all or substantially all of the HVR (eg, CDR) is of a non-human antibody. All or substantially all of the FR corresponds to that of a human antibody. A humanized antibody optionally may comprise at least a portion of an antibody constant region derived from a human antibody. A “humanized” form of an antibody, eg, a non-human antibody, refers to an antibody that has undergone humanization.

「イムノコンジュゲート」は、一以上の異種分子にコンジュゲートした抗体であり、限定されないが、細胞傷害性薬物を含む。 An “immunoconjugate” is an antibody conjugated to one or more heterologous molecules, including but not limited to cytotoxic drugs.

「個々の応答」又は「応答」は、限定されないが、（１）疾患の進行（例えば、がんの進行）の、減速及び完全な停止を含む、ある程度の阻害；（２）腫瘍サイズの縮小；（３）隣接する末梢器官及び／又は組織へのがん細胞浸潤の阻害（すなわち、減少、減速又は完全な停止）；（４）転移の阻害（すなわち減少、減速又は完全な停止）；（５）疾患又は障害（例えば、がん）に関連する一以上の症状の、ある程度までの軽減；（６）無増悪生存期間の長さの延長；及び／又は（９）治療後の特定の時点での死亡率の低下を含む、個体に対する利益を示す任意のエンドポイントを用いて評価することができる。 An “individual response” or “response” includes, but is not limited to: (1) some inhibition of disease progression (eg, cancer progression), including slowing and complete cessation; (2) tumor size reduction (3) inhibition of cancer cell invasion into adjacent peripheral organs and / or tissues (ie, reduction, deceleration or complete cessation); (4) inhibition of metastasis (ie, reduction, deceleration or complete cessation); 5) To some extent alleviation of one or more symptoms associated with a disease or disorder (eg, cancer); (6) Prolongation of progression-free survival; and / or (9) Specific time points after treatment Any endpoint that shows a benefit to the individual can be assessed, including a decrease in mortality.

本明細書で用いる「実質的に同一」なる用語は、当業者が、２つの値の間の差異が、その値（例えばＫｄ値又は発現）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、わずかに又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考慮するであろうほどに、２つの数値の間の十分高度な類似性を意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較値に応じて、例えば約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、及び／又は約１０％以下である。 As used herein, the term “substantially identical” is used by those skilled in the art in the context of a biological property in which the difference between two values is measured by that value (eg, Kd value or expression). Means a sufficiently high degree of similarity between the two numbers, so that little or no biological and / or statistical significance would be considered. The difference between the two values is, for example, about 50% or less, about 40% or less, about 30% or less, about 20% or less, and / or about 10% or less, depending on the reference / comparison value.

本明細書で用いる「実質的に異なる」なる句は、当業者が、２つの値の間の差異が、その値（例えばＫｄ値）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、統計学的有であると考慮するであろうほどに、２つの数値の間の十分高度な差異を意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較分子の値に応じて、例えば約１０％より大きく、約２０％より大きく、約３０％より大きく、約４０％より大きく、及び／又は約５０％より大きい。 As used herein, the phrase “substantially different” is used by those skilled in the art to understand that the difference between two values is statistical in the context of the biological property measured by that value (eg, the Kd value). It means a sufficiently high difference between the two numbers that would be considered to be scientific. The difference between the two values may be, for example, greater than about 10%, greater than about 20%, greater than about 30%, greater than about 40%, and / or about 50%, depending on the value of the reference / comparison molecule. Greater than%.

物質／分子、例えば、薬学的組成物の「有効量」は、例えば、所望の治療的又は予防的結果を達成するために、必要な用量及び期間で有効な量を指す。 An “effective amount” of a substance / molecule, eg, a pharmaceutical composition, refers to an amount that is effective, for example, at the required dosage and duration to achieve the desired therapeutic or prophylactic result.

物質／分子の「治療的有効量」は、病状、年齢、性別、個体の体重、及び個体に所望する反応を引き出す物質／分子の能力等の要因に応じて変わり得る。また、治療的有効量は、物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの任意の毒性又は有害な効果よりも治療的に恩恵のある効果が上回るものである。「予防的有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な用量及び期間において有効な量を指す。一般的には必ずしもそうではないが、予防的用量は、疾患の初期段階で又は前に被験体に使用されるので、予防的有効量は治療的有効量よりも少ないであろう。 The “therapeutically effective amount” of a substance / molecule can vary depending on factors such as the condition, age, sex, individual weight, and the ability of the substance / molecule to elicit the desired response in the individual. Also, a therapeutically effective amount is one that exceeds the therapeutically beneficial effect over any toxic or deleterious effect of the substance / molecule, agonist or antagonist. A “prophylactically effective amount” refers to an amount that is effective at the dosage and duration necessary to achieve the desired prophylactic result. In general, although not necessarily, since a prophylactic dose is used in subjects at an earlier stage of disease or earlier, the prophylactically effective amount will be less than the therapeutically effective amount.

用語「薬学的製剤」は、その中に有効で含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であって、製剤を投与する被験体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。 The term “pharmaceutical formulation” includes other ingredients that are in a form that allows for the biological activity of the active ingredient contained therein and that is unacceptable to the subject to whom the formulation is administered. Refers to a preparation that is not.

「薬学的に許容可能な担体」は、被験体に非毒性であり、有効成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容可能な担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。 “Pharmaceutically acceptable carrier” refers to an ingredient in a pharmaceutical formulation that is non-toxic to a subject and other than the active ingredient. Pharmaceutically acceptable carriers include but are not limited to buffers, excipients, stabilizers, or preservatives.

「薬学的に許容可能な塩」なる語句は、本明細書中で使用される場合、化合物の薬学的に受容可能な有機もしくは無機の塩をいう。 The phrase “pharmaceutically acceptable salt” as used herein refers to a pharmaceutically acceptable organic or inorganic salt of a compound.

本明細書で用いられるように、「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の過程においての何れかで実行できる。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。 As used herein, “treatment” (and grammatical variations such as “treat” or “treating”) will alter the natural course of the individual being treated. Clinical intervention, which can be performed either for prevention or in the course of clinical pathology. Desirable effects of treatment include, but are not limited to, preventing the onset or recurrence of the disease, alleviating symptoms, reducing the direct or indirect pathological consequences of the disease, preventing metastasis, and the rate of progression of the disease Delaying, improving or alleviating disease state, and improving remission or prognosis. In some embodiments, the antibodies of the invention are used to delay disease onset or slow disease progression.

用語「抗がん治療法」は、がんを治療するのに有用な治療法を指す。抗がん治療薬の例には、限定されないが、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法に用いられる薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するための他の薬剤、抗ＣＤ２０抗体、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ^ＴＭ（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、次の標的、ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ受容体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２の一以上に特異的に結合するアンタゴニスト（例えば中和抗体）、及び他の生物活性薬剤及び有機化学薬剤などが含まれる。その組合せもまた本発明に含まれる。 The term “anti-cancer therapy” refers to a therapy that is useful for treating cancer. Examples of anti-cancer therapeutics include, but are not limited to, for example, chemotherapeutic agents, growth inhibitors, cytotoxic agents, agents used for radiation therapy, anti-angiogenic agents, apoptotic agents, anti-tubulin agents, and Other drugs for treating cancer, anti-CD20 antibodies, platelet-derived growth factor inhibitors (eg Gleevec ^™ (imatinib mesylate)), COX-2 inhibitors (eg celecoxib), interferons, cytokines, Targets, PDGFR-beta, BlyS, APRIL, BCMA receptors, antagonists that specifically bind to one or more of TRAIL / Apo2, such as neutralizing antibodies, and other bioactive and organic chemical agents, and the like. Combinations thereof are also included in the present invention.

本明細書で用いられる「細胞傷害性薬物」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞死若しくは破壊を生ずる物質を指す。用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素など、抗生物質、及び小分子毒素などの毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗がん剤を包含することが意図される。他の細胞傷害性薬物は以下に記述される。殺腫瘍剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。 The term “cytotoxic drug” as used herein refers to a substance that inhibits or prevents the function of cells and / or causes cell death or destruction. The term is used for radioisotopes (eg, At ²¹¹ , I ¹³¹ , I ¹²⁵ , Y ⁹⁰ , Re ¹⁸⁶ , Re ¹⁸⁸ , Sm ¹⁵³ , Bi ²¹² , P ³² , Pb ²¹² and Lu): chemotherapeutic agents or Drugs (eg, methotrexate, adriamycin, vinca alkaloids (vincristine, vinblastine, etoposide), doxorubicin, melphalan, mitomycin C, chlorambucil, daunorubicin or other intercalating agents), growth inhibitors, enzymes and fragments thereof such as nucleolytic enzymes , Antibiotics, and toxins such as small molecule toxins, or enzyme-active toxins (including fragments and / or variants thereof) from bacteria, fungi, plants or animals, and various antitumor agents disclosed below Or is intended to include anti-cancer agents. Other cytotoxic drugs are described below. Tumoricides cause destruction of tumor cells.

「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化合物を指す。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；アジリジン類、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；アルトレトアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）及びトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）を含む）、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）及び９−アミノカンプトテシン；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、チョロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばNicolaou et al., Agnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)参照）；ＣＤＰ３２３、経口α−４インテグリン阻害剤；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン類（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標）、リポソームドキソルビシンＴＬＣＤ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標）、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフル（ｔｅｇａｆｕｒ）（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリンアナログ、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン類、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）及びアンサマイトシン類（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ）のようなメイタンシノイド類（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃａｃｉｄ）；トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）（特に、Ｔ−２トキシン、ベラキュリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎＡ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎＡ）及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ^ＴＭ）、及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチン（例えばＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））及びカルボプラチン；ビンカ類でチューブリン重合の微小管形成を阻害するもの、例えばビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標）、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼ阻害薬ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド、例えば、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート、例えばクロドロネート（例えばＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロン酸（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロン酸（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロン酸（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロン酸（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓ、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害薬（例えばＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えばＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えばセレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオゾーム阻害剤（例えばＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ）（Ｒ１１５７７）；オラフィニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；ＢＣＬ−２阻害剤、例えばオブリメルセンナトリウム（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎｓｏｄｉｕｍ）（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン−スレオニンキナーゼ阻害剤、例えばラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばロナファーニブ（ＳＣＨ６６３６，ＳＡＲＡＳＡＲ^ＴＭ）；及び上述したものの何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体：並びに上記のうち２以上の組合せ、例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰ；及び５−ＦＵ及びロイコボリンとオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ^ＴＭ）を組合せた治療法の略称であるＦＯＬＦＯＸが含まれる。 “Chemotherapeutic agent” refers to a compound useful in the treatment of cancer. Examples of chemotherapeutic agents include alkylating agents such as thiotepa and cyclophosphamide (CYTOXAN®); alkyl sulfonates such as busulfan, improsulfan and pipesulfan; aziridines such as benzodopa ), Carbocone, methredopa, and ureodopa; including altretamine, triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide, and trimethyllomelamine. Imines and methylamelamines; acetogenins (especially buratas Delta-9-tetrahydrocanabinol (dronabinol, MARINOL®); β-rapachone; rapacol; colchicine; betulinic acid; camptothecin (synthetic analog topotecan (HYCAMTIN®), CPT-11 (Irinotecan, CAMPTOSAR ( ), Acetylcamptothecin, scopolectin and 9-aminocamptothecin; bryostatin; karistatin; CC-1065 (including its adzelesin, calzeresin and biselecin synthetic analogs); podophylloticin; podophyllinic acid); teniposide; cryptophycin (especially cryptophycin 1 and cryptophycin 8); dolastatin; Eucarmycin (including synthetic analogs, KW-2189 and CB1-TM1); eroiterobin; pancratistatin; sarcodictin; spongistatin; Tin, ifosfamide, mechloretamine, mechloretamine oxide hydrochloride, melphalan, novembicin, phenesterine, prednimustine, trofosfamide (trofosfamide), trofosfamide (Chlorozotocin), Fote Nitrosuras such as fomustine, lomustine, nimustine, ranimustine; antibiotics such as enynein antibiotics (eg calicheamicin, in particular calicheamicin γ1I and calicheamicin ωI1 (eg Nicolaou et al , Agnew Chem Intl. Ed. Engl. 33: 183-186 (1994)); CDP323, oral α-4 integrin inhibitor; dynemycin including dynemicin A; esperamycin; And related chromoprotein enzyin antibiotic chromophores), aclacinomycins, actinomycin, austramycin, azaserine, bleomycin Cactinomycin, carabicin, carminomycin, carzinophilin, chromomycin, dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine, doxorubicin (ADRIAMYCIN®, morpholino-doxorubicin, cyanomorpholino-doxorubicin, 2-pyrrolino-doxorubicin, doxorubicin HCl liposome injection (DOXIL®, liposomal doxorubicin TLCD-99 (MYOCET®), pegylated liposome Doxorubicin (including CAELYX® and deoxyxorubicin), epirubicin, esol Syn, idarubicin, marcellomycin, mitomycin such as mitomycin C, mycophenolic acid, nogalamycin, olivomycins, pepromycin, pitofiromycin, pitofromycin (Quelamycin), rhodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin (Z); antimetabolites such as methotrexate, EM g c Standard)), tegafur (UFTORAL®), capecitabine (XELODA®), epothilone, and 5-fluorouracil (5-FU); folic acid analogs such as denoterin (denopterin) ), Methotrexate, pteropterin, trimetrexate; purine analogs such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiapurine, thioguanine; pyrimidine analogs such as ancitabine, azacitidine ), Carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxyfur Lysine, enocitabine, floxuridine; androgens such as calosterone, drmostanolone propionate, epithiostanol, mepithiostan, test lactone (testolactone); anti-adrenal agents such as aminoglutethimide, mitotan Folic acid replenishers, such as florinic acid; acegraton; aldophosphamide glycoside; aminolevulinic acid; eniluracil; amsacrine; bestlabucil; bisantrenxe; edataxate); Defami Demecolcine; diaziquine; erfornitine; eliptinium acetate; epothilone; etoglucid (etoglucid); gallium nitrate; hydroxyin; maytansinoids such as maytansine and ansamitocins; mitoguazone; mitoxantrone; mopidanmol; nitracrine; penicillin; Losoxanthrone; 2-ethylhydrazide; Procarbazine; PSK® polysaccharide complex (JHS Natural Products, Eugene, OR); Razoxane; Rhizoxin; Rhioxanium; Spirogel; Tenuazonic acid; triaziquine; 2,2 ′, 2 ″ -trichlorotriethylamine; trichothecenes (especially T-2 toxin, veracurrin A and loridine A) Anguidine); urethane; vindesine (registered) Trademark), FILDESIN (registered trademark); Dacarbazine; Mannomustine; Mitobronitol; Mitolactol; Pipobroman; Gacitosine; Arabinoside (“Ara-C” tacitel; TAXOL®), paclitaxel albumin engineered nanoparticle formulation (ABRAXANE ^™ ), and doxetaxel (TAXOTERE®); chlorambucil; 6-thioguanine; mercaptopurine; methotrexate; platinum agents such as cisplatin, oxaliplatin (eg, ELOXATIN (registered trademark)) and carboplatin; microtubule form of tubulin polymerization in vinca Such as vinblastine (VELBAN®, vincristine (ONCOVIN®), vindesine (ELDISINE®, FILDESIN®), and vinorelbine (NAVELBINE®); etoposide ( VP-16); ifosfamide; mitoxantrone; leucobovin; leucovovin; novantrone; edatrexate; daunomycin; aminopterin; ibandronate; topoisomerase inhibitor RFS2000; Retinoids such as bexarotene (TARGRETIN®); bisphosphonates such as clodrone (Eg, BONEFOS® or OSTAC®), etidronic acid (DIDROCAL®), NE-58095, zoledronic acid / zoledronate (ZOMETA®), alendronate (FOSAMAX®) )), Pamidronic acid (AREDIA®), tiludronic acid (SKELID®), or risedronic acid (ACTONEL®); troxacitabine (1,3-dioxolane nucleoside cytosine analog); Antisense oligonucleotides, particularly those that inhibit the expression of genes in signal transduction pathways leading to abnormal cell growth, such as PKC-α, Raf, and H-Ras, and epidermal growth factor receptor (EGF-R); Vaccines such as TOPE® vaccines and gene therapy vaccines, such as ALLOVECTIN® vaccines, LEUVECTIN® vaccines, and VAXID® vaccines; topoisomerase 1 inhibitors (eg LULTOTECAN®); rmRH (e.g. ABARELIX <(R)>); BAY 439006 (Sorafenib; Bayer); SU-11248 (Sunitinib, SUTENT <(R)>, Pfizer); Perifosine, COX-2 inhibitors (e.g. celecoxib or etoricoxib), Inhibitors (eg PS341); Bortezomib (VELCADE®); CCI-779; tipifarnib (R1) Orafenib, ABT510; BCL-2 inhibitors such as oblimersen sodium (GENAENSE®); Pixantrone; EGFR inhibitor (see definition below); tyrosine kinase inhibitor; A serine-threonine kinase inhibitor, such as rapamycin (sirolimus, RAPAMUNE®); a farnesyltransferase inhibitor, such as lonafanib (SCH6636, SARASAR ^™ ); and any of the pharmaceutically acceptable salts, acids or Derivatives: and combinations of two or more of the above, eg, CHOP, which is an abbreviation for combination therapy of cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisolone; and 5 FU and leucovorin and oxaliplatin (ELOXATIN ^TM) is an abbreviation for a combined therapy of FOLFOX is included.

本明細書中で定義された化学療法剤には、がんの増殖を促進しうるホルモンの作用を調節、低減、遮断、又は阻害するように働く「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療剤」が含まれる。それらはそれ自体がホルモンであってもよく、限定するものではないが、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを持つ抗エストロゲン、例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、及びＳＥＲＭ３などの選択的なエストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）；アゴニスト特性を有さない純粋な抗エストロゲン類、例えばフルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（このような薬剤はエストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化をブロックし、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、及び／又はＥＲレベルを抑制しうる）；アロマターゼ阻害剤、例えば、ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド系アロマターゼ阻害剤、及びアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤、及びボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロールアセテート（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール及び４（５）−イミダゾールを含む他のアロマターゼ阻害剤；黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、例えばロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプトレリン；性ステロイド、例えばプロゲスチン、例えばメゲストロールアセテート及びメドロキシプロゲステロンアセテート、エストロゲン、例えばジエチルスチルベストロール及びプレマリン、及びアンドロゲン／レチノイド、例えばフルオキシメステロン、全てのトランスレチオニン酸及びフェンレチニド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御因子（ＥＲＤ）；抗アンドロゲン類、例えばフルタミド、ニルタミド及びビカルタミド；及び上記の何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体；並びに、上記のうちの２以上の組合せを含む。 Chemotherapeutic agents as defined herein include “anti-hormonal agents” or “endocrine therapeutic agents” that act to modulate, reduce, block, or inhibit the action of hormones that can promote cancer growth. included. They may themselves be hormones, including but not limited to antiestrogens with mixed agonist / antagonist profiles such as tamoxifen (NOLVADEX®), 4-hydroxy tamoxifen, toremifene (FARESTON®) )), Selective estrogen receptor modulators (SERM) such as idoxifene, droloxifene, raloxifene (EVISTA®), trioxifen, keoxifene, and SERM3; agonists Pure antiestrogens that have no properties, such as fulvestrant (FASLODEX®), and EM800 (such drugs are estrogen receptors ( R) may block dimerization, inhibit DNA binding, increase ER turnover, and / or suppress ER levels); aromatase inhibitors such as formestane and exemestane (AROMASIN®) Steroidal aromatase inhibitors such as, and non-steroidal aromatase inhibitors such as anastrozole (ARIMIDEX®), letrozole (FEMARA®) and aminoglutethimide, and borozole (RIVISOR®) )), Other aromatase inhibitors including megestrol acetate (MEGASE®), fadrozole and 4 (5) -imidazole; luteinizing hormone releasing hormone agonists such as leuprolide (LUPRON® and ELIGARD ( ), Goserelin, buserelin, and triptorelin; sex steroids such as progestins such as megestrol acetate and medroxyprogesterone acetate, estrogens such as diethylstilbestrol and premarin, and androgen / retinoids such as fluoxymesterone, Onapristone; antiprogesterone; estrogen receptor downregulator (ERD); antiandrogens such as flutamide, nilutamide and bicalutamide; and any pharmaceutically acceptable salt of the above, An acid or derivative; and combinations of two or more of the above.

この出願で用いられる用語「プロドラッグ」なる用語は、親薬剤と比較して腫瘍細胞に対する細胞障害性が低く、酵素的に活性化又はより活性な親形態に変換されうる薬学的に活性な物質の前駆体又は誘導体の形態を指す。例えば、Wilman, “Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986)及びStella et al., “Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985)を参照のこと。この発明のプロドラッグには、限定するものではないが、ホスファート含有プロドラッグ、チオホスファート含有プロドラッグ、スルファート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、又は任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、より活性のある細胞毒のない薬剤に転換可能な５−フルオロシトシン及び他の５−フルオロウリジンプロドラッグを含む。限定はしないが、本発明で使用されるプロドラッグ形態に誘導体化可能な細胞障害性剤の例には、前記の化学療法剤が含まれる。 The term “prodrug” as used in this application is a pharmaceutically active substance that is less cytotoxic to tumor cells compared to the parent drug and can be enzymatically activated or converted to a more active parent form. The precursor or derivative form of For example, Wilman, “Prodrugs in Cancer Chemotherapy” Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) and Stella et al., “Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,” Directed Drug Delivery, See Borchardt et al., (Ed.), Pp. 247-267, Humana Press (1985). Prodrugs of this invention include, but are not limited to, phosphate-containing prodrugs, thiophosphate-containing prodrugs, sulfate-containing prodrugs, peptide-containing prodrugs, D-amino acid modified prodrugs, glycosylated prodrugs, β-lactams -Containing prodrugs, optionally substituted phenoxyacetamide-containing prodrugs, or optionally substituted phenylacetamide-containing prodrugs, 5-fluorocytosine and other 5-fluoros that can be converted to more active and cytotoxic-free drugs Contains uridine prodrugs. Non-limiting examples of cytotoxic agents that can be derivatized to the prodrug form used in the present invention include the chemotherapeutic agents described above.

本明細書で使用する「増殖阻害剤」は、細胞（例えばインビトロ又はインビボの何れかにおいて増殖が目的のポリペプチドの活性に依存している細胞）の増殖を阻害する化合物又は組成物を指す。増殖阻害剤の例は、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）阻害する薬剤、例えばＧ１停止又はＭ期停止を誘発する薬剤を含む。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及び例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。またＧ１停止させるこれらの薬剤は、Ｓ期停止にも波及し、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、及びアラ−Ｃである。更なる情報は、The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn及びIsrael, 編，第１章，表題「Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs」， Murakami等， (WB Saunders: Philadelphia, 1995）、特に１３頁に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗がん剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ローン・プーランローラー）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ブリストル−マイヤースクウィブ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管の集合を促進し、細胞の有糸***を阻害する結果となる脱重合を防ぐことによって微小管を安定化にする。 As used herein, a “growth inhibitor” refers to a compound or composition that inhibits the growth of a cell (eg, a cell whose growth is dependent on the activity of the polypeptide of interest, either in vitro or in vivo). Examples of growth inhibitors include agents that inhibit cell cycle progression (at a place other than S phase), such as agents that induce G1 arrest or M-phase arrest. Classical M-phase blockers include vinca (vincristine and vinblastine), taxanes and topoisomerase II inhibitors such as doxorubicin, epirubicin, daunorubicin, etoposide, and bleomycin. These agents that arrest G1 also affect S-phase arrest, for example, DNA alkylating agents such as tamoxifen, prednisone, dacarbazine, mechloretamine, cisplatin, methotrexate, 5-fluorouracil, and ara-C. Further information can be found in The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, Chapter 1, Chapter “Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs”, Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995), especially on page 13. Can be found. Taxanes (paclitaxel and docetaxel) are both anticancer agents derived from yew. Docetaxel (TAXOTERE®, Lone Pulan Roller) derived from European yew is a semi-synthetic analog of paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Meier Squibb). Paclitaxel and docetaxel promote microtubule assembly from tubulin dimers and stabilize microtubules by preventing depolymerization that results in inhibiting cell mitosis.

「放射線療法」とは、正常に機能する能力を制限するか、又は完全に細胞を破壊するために、細胞に十分な損傷を誘導するために指定されたγ線又はβ線の使用を意味する。治療の用量及び持続時間を決定するための当技術分野で周知の多くの方法が存在することが理解されるであろう。典型的な治療法は一回の投与として与えられ、典型的な投与量は、１日あたり１０から２００単位（グレイ）の範囲である。 “Radiotherapy” means the use of gamma or beta radiation designated to induce sufficient damage to the cells to limit their ability to function normally or to completely destroy the cells . It will be appreciated that there are many methods well known in the art for determining the dose and duration of treatment. A typical treatment regimen is given as a single dose, with typical doses ranging from 10 to 200 units (gray) per day.

「個体」又は「被験体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。ある実施態様において、個体又は被験体はヒトである。 An “individual” or “subject” is a mammal. Mammals include, but are not limited to, livestock animals (eg, cows, sheep, cats, dogs, horses), primates (eg, non-human primates such as humans, monkeys), rabbits, rodents (eg, mice and Rat). In certain embodiments, the individual or subject is a human.

用語「同時に」は、二以上の治療薬の投与を指し、それらの個々の治療作用が時間的に重なるように、十分時間的に近接して与えるために本明細書において使用される。従って、同時投与とは、一以上の薬剤投与が、一以上の他の薬剤の投与を中止した後に、継続する場合の投与レジメンを含む。幾つかの実施態様において、同時投与は、同時に、逐次に、及び／又は同時にとなる。 The term “simultaneously” refers to the administration of two or more therapeutic agents and is used herein to provide close enough temporal proximity so that their individual therapeutic effects overlap in time. Thus, co-administration includes a dosing regimen in which one or more drug administrations continue after the administration of one or more other drugs is discontinued. In some embodiments, simultaneous administration will be simultaneous, sequential, and / or simultaneous.

「低減する又は阻害する」とは、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の全体的減少を引き起こす能力を意味する。低減する又は阻害するとは、治療する疾患の症状、転移の存在又は大きさ、又は原発腫瘍の大きさを指しうる。 “Reduce or inhibit” means an overall reduction of 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or more. Means the ability to cause. Reducing or inhibiting can refer to the symptoms of the disease being treated, the presence or size of metastases, or the size of the primary tumor.

用語「添付文書」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれている説明書を指すために使用される。 The term “package insert” is customarily included in commercial packages of therapeutic products, including information on efficacy, usage, dosage, administration, combination therapy, contraindications, and / or warnings regarding the use of such therapeutic products. Used to refer to the instructions that are being used.

「製造品」は、例えば、疾患又は障害（例えば、がん）の治療のための医薬、又は本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブなど少なくとも一の試薬を含んでなる任意の製品（例えばパッケージ又は容器）又はキットである。ある実施態様において、製品又はキットは、本明細書に記載の方法を実施するためのユニットとして、宣伝され、配布され又は販売される。 “Product” includes at least one reagent such as, for example, a medicament for the treatment of a disease or disorder (eg, cancer) or a probe for specifically detecting a biomarker described herein. Any product (eg, package or container) or kit. In certain embodiments, the product or kit is advertised, distributed or sold as a unit for performing the methods described herein.

当業者によって理解されるように、本明細書中の「およそ」の値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に対する実施態様を含む（記載する）。例えば、「およそＸ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。 As will be appreciated by those skilled in the art, references to “approximately” values or parameters herein include (describe) embodiments for that value or parameter itself. For example, the description “approximately X” includes the description “X”.

本明細書に記載される本発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様「からなる」及び／又は「本質的になる」を含む。本明細書で使用されるように、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に指示がない限り、複数への参照が含まれる。 Aspects and embodiments of the invention described herein include aspects and embodiments “consisting of” and / or “consisting essentially of”. As used herein, the singular forms “a”, “an”, and “the” include plural references unless indicated otherwise.

ＩＩ．方法と使用
本明細書に提供されるのは、がんを治療するために、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を利用する方法である。 II. Methods and Uses Provided herein are methods that utilize an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) to treat cancer. .

特に、本明細書において提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を個体に同時に投与することを含む、個体においてがんを治療する方法である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、がん感受性の期間を増加させるため、及び／又は標的化治療（例えば、ＴＫＩ）に対する細胞抵抗性の発生を遅延させるために有効である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含むがん治療の有効性を増加させるために有効である。例えば、幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）無しで（非存在下で）投与することを含む標準的治療と比較して、有効性を増加させるために有効である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の各量は、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）無しで（非存在下で）投与することを含む標準的治療と比較して、応答（例えば、完全寛解）を増加させるために有効である。幾つかの実施態様において、標的化治療薬はチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）である。幾つかの実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である。 In particular, provided herein is cancer in an individual comprising simultaneously administering an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) to the individual. How to treat. In some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic (eg, TKI) is used to increase the duration of cancer susceptibility and / or to target. Effective to delay the development of cellular resistance to therapy (eg, TKI). In some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an amount of cancer treatment comprising a targeted therapeutic agent (eg, TKI). Effective to increase effectiveness. For example, in some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). , Effective to increase efficacy compared to standard treatments involving administration (in the absence) without an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof). In some embodiments, each amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). It is effective to increase response (eg, complete remission) compared to standard treatments involving administration (in the absence) without an inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof). In some embodiments, the targeted therapeutic agent is a tyrosine kinase inhibitor (TKI). In some embodiments, the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor. In some embodiments, the TKI is a receptor tyrosine kinase inhibitor (RTKI). In some embodiments, the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, and / or ALK inhibitor.

また、本明細書に提供されるのは、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量及びＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含むがん治療の有効性を増加させる方法である。また、本明細書に提供されるのは、がん治療が、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量及びＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）の有効量を個体に同時に投与することを含み、がん治療が、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）無しで（非存在下で）標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を投与することを含む標準的治療と比較して、有効性を増加させる、個体においてがんを治療する方法である。幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩはＲＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である。 Also provided herein includes simultaneously administering to an individual an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI) and an effective amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof). A method of increasing the effectiveness of a cancer treatment comprising a targeted therapeutic agent (eg, TKI) in an individual. Also provided herein is that the cancer treatment provides an individual with an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI) and an effective amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) simultaneously. Cancer treatment comprising administering an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI) without (in the absence of) an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof). A method of treating cancer in an individual that increases efficacy compared to standard treatment. In some embodiments, the targeted therapeutic agent is TKI. In some embodiments, the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor. In some embodiments, the TKI is RTKI. In some embodiments, the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, and / or ALK inhibitor.

加えて、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）の有効量及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）に対するがん耐性の発生を遅延及び／又は予防する方法である。また、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）の有効量及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）に対する感受性を増加させる方法である。幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩはＲＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である。 In addition, provided herein is that an effective amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI) are administered to an individual simultaneously. A method of delaying and / or preventing the development of cancer resistance to a targeted therapeutic agent (eg, TKI) in an individual. Also provided herein includes simultaneously administering to an individual an effective amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). A method of increasing sensitivity to a targeted therapeutic agent (eg, TKI) in an individual. In some embodiments, the targeted therapeutic agent is TKI. In some embodiments, the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor. In some embodiments, the TKI is RTKI. In some embodiments, the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, and / or ALK inhibitor.

更に、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）の有効量及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体において、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）感受性の期間を延長する方法である。また、本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）の有効量及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体において、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）に対する応答の持続時間を延長する方法である。幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩはＲＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である。 Further provided herein includes simultaneously administering to an individual an effective amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). A method of extending the period of sensitivity of a targeted therapeutic (eg, TKI) in an individual with cancer. Also provided herein includes simultaneously administering to an individual an effective amount of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and an effective amount of a targeted therapeutic agent (eg, TKI). A method of prolonging the duration of a response to a targeted therapeutic (eg, TKI) in an individual with cancer. In some embodiments, the targeted therapeutic agent is TKI. In some embodiments, the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor. In some embodiments, the TKI is RTKI. In some embodiments, the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, and / or ALK inhibitor.

何れかの方法の幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）は、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、又はポリヌクレオチド、例えば本明細書において記述されるものである。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ジスルフィラム及び／又はその誘導体である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はジスルフィラムである。方法の何れかの幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ゴシポール及び／又はＡＬＤＨ阻害誘導体又はその代謝産物である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はゴシポールである。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）である。 In some embodiments of any method, the ALDH inhibitor and / or targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an antibody, binding polypeptide, binding small molecule, or polynucleotide, eg, as described herein. Is. In some embodiments, the ALDH inhibitor is disulfiram and / or a derivative thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is disulfiram. In some embodiments of any of the methods, the ALDH inhibitor is gossypol and / or an ALDH inhibitor derivative or metabolite thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is gossypol. In some embodiments, the ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. . In some embodiments, the ALDH inhibitor is 2,2'-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene).

本明細書で使用される治療法に対する耐性を有するがんは、治療に対して、応答性でなく、及び／又は有意な応答（例えば、部分的応答及び／又は完全な応答）を生み出す能力が低下しているがんを含む。耐性は、治療法の過程で生じる獲得耐性であって良い。幾つかの実施態様において、獲得された薬剤耐性は、一過性及び／又は可逆的な薬剤耐性である。治療法に対する一過性及び／又は可逆的な薬剤耐性は、薬剤耐性が、治療法における中断後に、治療に対する感受性を取り戻すことができることを含む。幾つかの実施態様において、獲得耐性は、持続性耐性である。治療法に対する持続性耐性は、薬剤耐性を付与する遺伝子変化を含む。持続性耐性は、一般的な化学療法、シクロホスファミド、白金剤、及び／又はタキソールでの治療の結果として発生する可能性がある。 Cancers that are resistant to the treatments used herein are not responsive to treatment and / or are capable of producing significant responses (eg, partial responses and / or complete responses). Includes cancer that has declined. The resistance may be an acquired resistance that occurs during the course of therapy. In some embodiments, the acquired drug resistance is transient and / or reversible drug resistance. Transient and / or reversible drug resistance to therapy includes that drug resistance can regain sensitivity to therapy after an interruption in therapy. In some embodiments, the acquired resistance is persistent resistance. Persistent resistance to therapy includes genetic changes that confer drug resistance. Persistent tolerance can occur as a result of treatment with general chemotherapy, cyclophosphamide, platinum agents, and / or taxol.

本明細書で使用される治療法に対する感受性を有するがんは、応答性であり、及び／又は有意な応答（例えば、部分的応答及び／又は完全な応答）を生み出すことが可能であるがんを含む。 Cancers that are sensitive to the therapy used herein are responsive and / or capable of producing a significant response (eg, partial response and / or complete response). including.

治療法に対する耐性の獲得及び／又は感受性の維持を評価決定する方法は、当該分野で周知であり、実施例に記載されている。耐性の獲得の変化及び／又は薬剤耐性などの感受性の維持は、実施例及びＳｈａｒｍａらに記載されているように、薬剤耐性存続生物の増殖をアッセイすることによって評価することができる。耐性の獲得の変化及び／又は持続性耐性などの感受性の維持及び／又は抵抗者の増加は、実施例及びＳｈａｒｍａらに記載されているように、薬剤耐性増加存続生物の増殖をアッセイすることによって評価することができる。幾つかの実施態様において、耐性はＩＣ５０、ＥＣ５０の変化、又は薬剤耐性存続生物及び／又は薬剤耐性増加存続生物における腫瘍増殖の減少によって示され得る。幾つかの実施態様において、変化はおよそ５０％、１００％、及び／又は２００％の何れかよりも大きい。加えて、耐性の獲得の変化及び／又は感受性の維持は、例えば、治療に対する応答、応答の持続期間、及び／又は無増悪期間、例えば、部分的応答及び／又は完全な応答を評価することによってインビボで評価され得る。耐性の獲得の変化及び／又は感受性の維持は、個体の集団における、治療に対する応答、応答の持続期間、及び／又は無増悪期間の変化、例えば、部分的応答及び／又は完全な応答の数に基づいても良い。 Methods for assessing the acquisition of resistance and / or maintenance of sensitivity to a therapy are well known in the art and are described in the Examples. Changes in resistance gain and / or maintenance of susceptibility such as drug resistance can be assessed by assaying the growth of drug-resistant survivors, as described in the Examples and Sharma et al. Sustained susceptibility and / or increased resistance, such as altered resistance gains and / or persistent resistance, can be achieved by assaying the growth of survivors of increased drug resistance, as described in the Examples and Sharma et al. Can be evaluated. In some embodiments, resistance can be indicated by a change in IC50, EC50, or decreased tumor growth in a drug resistant survivor and / or an increased drug resistant survivor. In some embodiments, the change is greater than any of approximately 50%, 100%, and / or 200%. In addition, changes in acquired resistance and / or maintenance of sensitivity can be achieved, for example, by assessing response to treatment, duration of response, and / or progression-free period, eg, partial response and / or complete response. It can be evaluated in vivo. Changes in resistance gain and / or maintenance of sensitivity can be attributed to changes in response to treatment, duration of response, and / or progression-free period, eg, partial response and / or complete response, in a population of individuals. May be based.

何れかの方法の幾つかの実施態様において、がんは固形腫瘍がんである。幾つかの実施態様において、がんは胃がんである。幾つかの実施態様において、がんが肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ））である。幾つかの実施態様において、がんは乳がんである。幾つかの実施態様において、がんは結腸直腸がん（例えば、結腸がん及び／又は直腸がん）である。幾つかの実施態様において、がんは基底細胞癌である。何れかの方法の幾つかの実施態様において、がんは腺癌である。本明細書に記載される併用療法の方法の何れかのがんは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含む治療の方法を開始する場合、標的化治療薬単独を含む治療の方法に対して感受性であり得る（感受性の例は、限定されないが、応答性であり、及び／又は有意な応答（例えば、部分的応答及び／又は完全な応答）を生み出すことが可能であることを含む）。本明細書に記載される併用療法の方法の何れかのがんは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含む治療の方法を開始する場合、標的化治療薬単独を含む治療の方法に対して耐性でない場合がある（耐性の例は、限定されないが、応答性でない、及び／又は有意な応答（例えば、部分的応答及び／又は完全な応答）を生み出す能力が低下した、及び／又は不可能であることを含む）。 In some embodiments of any method, the cancer is a solid tumor. In some embodiments, the cancer is gastric cancer. In some embodiments, the cancer is lung cancer (eg, non-small cell lung cancer (NSCL)). In some embodiments, the cancer is breast cancer. In some embodiments, the cancer is colorectal cancer (eg, colon cancer and / or rectal cancer). In some embodiments, the cancer is basal cell carcinoma. In some embodiments of any method, the cancer is an adenocarcinoma. Cancer of any of the combination therapy methods described herein initiates a method of treatment that includes an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI). Can be sensitive to methods of treatment including targeted therapeutic agents alone (examples of sensitivity include, but are not limited to, responsive and / or significant responses (eg, partial response and / or complete response) Response can be generated). Cancer of any of the combination therapy methods described herein initiates a method of treatment that includes an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI). May not be resistant to methods of treatment including targeted therapeutics alone (examples of resistance include, but are not limited to, non-responsive and / or significant responses (eg, partial response and / or complete response) Including a reduced and / or impossible ability to generate

何れかの方法の幾つかの実施態様において、上記実施態様の何れかによる個体は、ヒトであり得る。 In some embodiments of any method, the individual according to any of the above embodiments can be a human.

何れかの方法の幾つかの実施態様において、上記のこうした併用療法は、併用投与（２つ以上の治療薬が、同一又は別々の製剤に含まれている）、及び、本発明のアンタゴニストの投与が、追加の治療薬及び／又はアジュバントの投与の前に、同時に、逐次に、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、及び／又はその後に起きうる分離投与を包含する。幾つかの実施態様において、併用療法は、放射線療法及び／又は付加的な治療剤を更に含む。 In some embodiments of any method, such combination therapies described above comprise a combination administration (two or more therapeutic agents are contained in the same or separate formulations) and administration of an antagonist of the invention. Includes separate administration that may occur prior to, simultaneously, sequentially, and / or after administration of the additional therapeutic agent and / or adjuvant. In some embodiments, the combination therapy further comprises radiation therapy and / or additional therapeutic agents.

本明細書に記載されるＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）は、経口、非経口、肺内、及び鼻腔内、そして局所治療が所望される場合、病巣内投与を含んでなる任意の適切な手段によって投与されることができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一又は複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。 ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and targeted therapeutics (eg, TKI) described herein are desired for oral, parenteral, pulmonary, and intranasal, and topical treatment. Can be administered by any suitable means comprising intralesional administration. Parenteral injection includes intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, or subcutaneous administration. Dosing depends in part on whether the administration is short-term or long-term and can be performed by any suitable route, for example, injection such as intravenous or subcutaneous injection. Various dosing schedules are contemplated herein, including but not limited to single or multiple doses, bolus doses, pulse infusions over various time points.

本明細書に記載されるＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）は、良好な医療行為に一致した形で処方され、投与量が決められ、投与される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の量、疾患又は治療のタイプ、及び上で検討した他の因子に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。 ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and targeted therapeutics (eg, TKI) described herein are formulated and dosed in a manner consistent with good medical practice, Be administered. Factors to consider in this regard include the specific disorder to be treated, the particular mammal to be treated, the clinical condition of the individual patient, the cause of the disorder, the site of drug delivery, the method of administration, the schedule of administration and others known to the health care professional Including the factors. ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and targeted therapeutics (eg, TKI) are optional, but are optional, and are currently used in the prevention or treatment of problematic disorders. Several drugs are prescribed together. Effective amounts of such other agents are discussed in the amount of ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and targeted therapeutic agent (eg, TKI) present in the formulation, the type of disease or treatment, and above Depends on other factors. These are generally at the same dose and route of administration as described herein, or from 1% to 99% of the dose described herein, or empirically / clinically relevant. Used by any dose and any route determined to be.

疾患の予防又は治療のために、本明細書に記載されるＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の適切な用量は（単独で、又は一以上の他の付加的治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療する疾患のタイプ、疾患の重症度及び過程、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）が予防を目的としてか治療を目的として投与されるのかどうか、以前の治療法、患者の病歴、及びＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）への反応、及び主治医の判断により決定されるであろう。ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）は、好適には一回で又は一連の治療で患者に投与される。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎に（例えば、患者が、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）の約２投与量から約２０投与量、又は例えば約６投与量を受けるように）投与してよい。初期の高負荷投与量の後に一以上の低投与量が投与されても良い。典型的な投与計画は、投与することを含む。しかしながら他の投薬計画が有用であるかもしれない。この治療法の進行は従来の手法及びアッセイにより容易にモニタリングされる。 For the prevention or treatment of disease, appropriate doses of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and targeted therapeutic agents (eg, TKI) described herein are (alone or one) When used in combination with these other additional therapeutic agents), the type of disease to be treated, the severity and process of the disease, an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or its derivatives) and a targeted therapeutic agent (eg, Whether TKI) is administered for prophylactic or therapeutic purposes, previous therapies, patient history, and ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or its derivatives) and targeted therapeutics (eg, Response to TKI) and the judgment of the attending physician. The ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or its derivatives) is preferably administered to the patient at one time or in a series of treatments. For repeated administrations over several days or longer, depending on the condition, the treatment will continue until the desired suppression of disease symptoms occurs. Such doses are intermittent, for example, about every week or every 3 weeks (eg about 2 doses of ALDH inhibitor (eg disulfiram and / or derivatives thereof) and targeted therapeutic (eg TKI) by the patient). To about 20 doses, or for example about 6 doses). One or more low doses may be administered after the initial high load dose. A typical dosing regimen includes dosing. However, other dosing schedules may be useful. The progress of this therapy is easily monitored by conventional techniques and assays.

上記の製剤又は治療方法のいずれかが、ＡＬＤＨ阻害剤及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）としてイムノコンジュゲートを用いて行うことができることが理解される。 It is understood that any of the above formulations or treatment methods can be performed using an immunoconjugate as an ALDH inhibitor and / or targeted therapeutic agent (eg, TKI).

ＩＩＩ．治療用組成物
本明細書に提供されるのは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含む組合せである。一態様において、がんの治療のための同時又は順次使用のための、ａ）第一成分としてＡＬＤＨ阻害剤の有効量、及びｂ）第二成分として標的性薬剤（標的化治療薬）の有効量を含有する医薬製品が提供される。ある実施態様において、組み合わせは、単独で投与される標的化治療薬の有効性を増加させる。ある実施態様において、組み合わせは、標的化治療薬に対するがん耐性の発生を遅延及び／又は予防する。ある実施態様において、組み合わせは、がんを有する個体における標的化治療薬感受性の期間を延長する。 III. Therapeutic compositions Provided herein are combinations comprising an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and a targeted therapeutic agent (eg, TKI). In one aspect, for simultaneous or sequential use for the treatment of cancer, a) an effective amount of an ALDH inhibitor as the first component, and b) an effective of the targeted agent (targeted therapeutic agent) as the second component. A pharmaceutical product containing the amount is provided. In certain embodiments, the combination increases the effectiveness of the targeted therapeutic agent administered alone. In certain embodiments, the combination delays and / or prevents the development of cancer resistance to the targeted therapeutic agent. In certain embodiments, the combination extends the duration of targeted therapeutic susceptibility in individuals with cancer.

また本明細書において提供されるのは、本明細書に記載される併用療法において有用なＡＬＤＨ阻害剤及び／又は標的化治療薬である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤及び／又は標的化治療薬は、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、及び／又はポリヌクレオチドである。 Also provided herein are ALDH inhibitors and / or targeted therapeutics that are useful in the combination therapy described herein. In some embodiments, the ALDH inhibitor and / or targeted therapeutic agent is an antibody, binding polypeptide, binding small molecule, and / or polynucleotide.

本明細書に記載される何れかの併用療法の幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＬＤＨ１Ａ２、ＡＬＤＨ１Ａ３、ＡＬＤＨ１Ｂ１、ＡＬＤＨ１Ｌ１、ＡＬＤＨ１Ｌ２、ＡＬＤＨ２、ＡＬＤＨ３Ａ１、ＡＬＤＨ３Ａ２、ＡＬＤＨ３Ｂ１、ＡＬＤＨ３Ｂ２、ＡＬＤＨ４Ａ１、ＡＬＤＨ５Ａ１、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＤＨ８Ａ１、ＡＬＤＨ９Ａ１、ＡＬＤＨ１６Ａ１、及び／又はＡＬＤＨ１８Ａ１の一以上を阻害する。幾つかの実施態様において、本発明に記載されるＡＬＤＨ阻害剤は、ＡＬＤＨの幾つかのアイソザイムのうちの一以上の活性を阻害することができる化合物である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、パンＡＬＤＨ阻害剤である。ＡＬＤＨ阻害剤は、限定されないが、ジスルフィラム、コプリン、シアナミド、１−アミノシクロプロパノール（ＡＣＰ）、ダイジン（すなわち、４’，７−ジヒドロキシイソフラボンの７−グルコシド）、セファロスポリン、抗糖尿病性スルホニル尿素、メトロニダゾール、ジエチルジチオカルバメート、フェネチルイソチオシアネート（ＰＥＩＴＣ）、プルネチン（４’，５−ジヒドロキシ−７−メトキシイソフラボン）、５−ヒドロキシダイジン（ゲニスチン）、及びＡＬＤＨ阻害活性を示すそれらの代謝物又は類似体の何れかを含む。別の実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ジスルフィラム又はそのＡＬＤＨ阻害性代謝産物である。そのような代謝産物は、例えば、Ｓ−メチルＮ，Ｎ−ジエチルジチオカルバメート、Ｓ−メチルＮ，Ｎ−ジエチルジチオカルバメートスルホキシド、及びＳ−メチルＮ，Ｎ−ジエチルチオカーバメートスルホキシドを含む。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はジスルフィラムである。方法の何れかの幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、ゴシポール及び／又はＡＬＤＨ阻害誘導体又はその代謝産物である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤はゴシポールである。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤は２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）である。 In some embodiments of any combination therapy described herein, the ALDH inhibitor is ALDH1A1, ALDH1A2, ALDH1A3, ALDH1B1, ALDH1L1, ALDH1L2, ALDH2, ALDH3A1, ALDH3A2, ALDH3B1, ALDH3B1, ALDH3B1, ALDH3B1, ALDH3B Inhibit one or more of ALDH6A1, ALDH7A1, ALDH8A1, ALDH9A1, ALDH16A1, and / or ALDH18A1. In some embodiments, an ALDH inhibitor described in the present invention is a compound that can inhibit the activity of one or more of several isozymes of ALDH. In some embodiments, the ALDH inhibitor is a pan ALDH inhibitor. ALDH inhibitors include, but are not limited to, disulfiram, copurine, cyanamide, 1-aminocyclopropanol (ACP), daidzin (ie, 7-glucoside of 4 ′, 7-dihydroxyisoflavone), cephalosporins, antidiabetic sulfonylureas , Metronidazole, diethyldithiocarbamate, phenethyl isothiocyanate (PEITC), prunetine (4 ', 5-dihydroxy-7-methoxyisoflavone), 5-hydroxydidine (genistin), and metabolites or analogs thereof showing ALDH inhibitory activity One of these. In another embodiment, the ALDH inhibitor is disulfiram or an ALDH inhibitor metabolite thereof. Such metabolites include, for example, S-methyl N, N-diethyldithiocarbamate, S-methyl N, N-diethyldithiocarbamate sulfoxide, and S-methyl N, N-diethylthiocarbamate sulfoxide. In some embodiments, the ALDH inhibitor is disulfiram. In some embodiments of any of the methods, the ALDH inhibitor is gossypol and / or an ALDH inhibitor derivative or metabolite thereof. In some embodiments, the ALDH inhibitor is gossypol. In some embodiments, the ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. . In some embodiments, the ALDH inhibitor is 2,2'-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene).

ＡＬＤＨ阻害剤はまた、次式の化合物を含む。

式中、
Ｒ_１は、水素、カルボキシ、ハロ、分岐又は非分岐（Ｃ_１−Ｃ_６）ハロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_６）ハロアルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロハロアルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルコキシアルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキルカルボニル、置換型又は非置換型フェニル、フェニル（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルカルボニルからなる群から選択され、前記置換基は、１から４までであり、ハロ、アミノカルボニル、アミノチオカルボニル、カルボキシ、ホルミル、ヒドロキシ、アミノ、カルバモイル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）ハロアルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_３）ハロアルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノ、（Ｃ_１−Ｃ_２）アルコキシ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、ジ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノカルボニル、及びジ（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノカルボニルからなる群から選択され；
Ｒ_２は、水素及びアルコキシからなる群から選択され；
Ｒ_３は、水素Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニル、カルボキシ及び糖からなる群から選択され；
Ｒ_４は、水素及びヒドロキシドからなる群から選択され；
Ｒ_５は、水素、カルボキシ、ヒドロキシ、ハロ、分枝又は非分枝（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）ハロアルキル、（Ｃ_２−Ｃ_６）アルケニル、（Ｃ_３−Ｃ_６）アルカジエニル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_６）ハロアルコキシ、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロハロアルコキシ、（Ｃ_２−Ｃ_６）アルキニルオキシ、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルコキシアルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシ（Ｃ_３−Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルカルボニル、（Ｃ_３−Ｃ６）シクロアルキルカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_４−Ｃ_６）アルコキシカルボニルアルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）ヒドロキシアルキル、置換型又は非置換型フェニル、フェニル（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルカルボニルからなる群から選択され、前記置換は、１から４までであり、ハロ、アミノカルボニル、アミノチオカルボニル、カルボキシ、ホルミル、ヒドロキシ、アミノ、カルバモイル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）ハロアルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_３）ハロアルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノ、ジ（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノ、（Ｃ_１−Ｃ_２）アルコキシ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、ジ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_１−Ｃ_２）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノカルボニル、及びジ（Ｃ_１−Ｃ_３）アルキルアミノカルボニルからなる群から選択され；
Ｒ_６は、水素及びヒドロキシドからなる群から選択され；及び
Ｒ_７は、水素、ハロゲン、及びＣ_１−Ｃ_６アルコキシからなる群から選択される。 ALDH inhibitors also include compounds of the formula

Where
R ₁ is hydrogen, carboxy, halo, branched or unbranched (C ₁ -C ₆ ) haloalkyl, (C ₃ -C ₆ ) cycloalkoxy, (C ₁ -C ₆ ) haloalkoxy, (C ₃ -C ₆ ) cycloalkyl _{haloalkoxy, (C} 3 -C ₆₎ cycloalkoxy _{alkyl, (C} 1 -C ₆₎ alkoxy _(C 3 -C ₆₎ _{cycloalkyl, (C} 3 -C ₆₎ cycloalkyl carbonyl, substituted or unsubstituted Selected from the group consisting of phenyl, phenyl (C ₁ -C ₆ ) alkyl, heterocyclyl, and heterocyclyloxy, heterocyclylcarbonyl, wherein the substituent is from 1 to 4, halo, aminocarbonyl, aminothiocarbonyl, carboxy, formyl, hydroxy, amino, _{carbamoyl, (C} 1 -C ₃₎ _{alkyl, (C} 1 -C ₃₎ Haroa _{Kill, (C} 1 -C ₃₎ _{alkoxy, (C} 1 -C ₃₎ _{haloalkoxy, (C} 1 -C ₃₎ alkylamino, di _(C 1 -C ₃₎ alkyl _{amino, (C} 1 -C ₂₎ alkoxy (C ₁ -C ₂ ) alkyl, (C ₁ -C ₂ ) alkylamino (C ₁ -C ₂ ) alkyl, di (C ₁ -C ₂ ) alkylamino (C ₁ -C ₂ ) alkyl, (C _1- Selected from the group consisting of C ₃ ) alkylcarbonyl, (C ₁ -C ₃ ) alkoxycarbonyl, (C ₁ -C ₃ ) alkylaminocarbonyl, and di (C ₁ -C ₃ ) alkylaminocarbonyl;
R ₂ is selected from the group consisting of hydrogen and alkoxy;
R ₃ is selected from the group consisting of hydrogen C ₁ -C ₆ alkoxycarbonyl, carboxy and sugar;
R ₄ is selected from the group consisting of hydrogen and hydroxide;
R ₅ is hydrogen, carboxy, hydroxy, halo, branched or unbranched (C ₁ -C ₆ ) alkyl, (C ₁ -C ₆ ) haloalkyl, (C ₂ -C ₆ ) alkenyl, (C ₃ -C ₆₎ _{alkadienyl, (C} 1 -C ₆₎ _{alkoxy, (C} 3 -C ₆₎ _{cycloalkoxy, (C} 1 -C ₆₎ _{haloalkoxy, (C} 3 -C ₆₎ cycloalkyl _{haloalkoxy, (C} 2 -C ₆ ) Alkynyloxy, (C ₁ -C ₆ ) alkoxy (C ₁ -C ₆ ) alkyl, (C ₃ -C ₆ ) cycloalkoxyalkyl, (C ₁ -C ₆ ) alkoxy (C ₃ -C ₆ ) cycloalkyl, _(C 1 -C ₆₎ _{alkylcarbonyl, (C 3-C6)} _{cycloalkylcarbonyl, (C} 1 -C ₆₎ _{alkoxycarbonyl, (C} 4 -C ₆₎ alkoxycarbonylalkyl, C ₁ -C ₆₎ hydroxyalkyl, substituted or unsubstituted phenyl, phenyl _(C 1 -C ₆₎ alkyl, heterocyclyl, heterocyclyloxy, is selected from the group consisting of heterocyclylcarbonyl, wherein substitution is with 1 to 4 There, halo, aminocarbonyl, amino thiocarbonyl, carboxy, formyl, hydroxy, amino, _{carbamoyl, (C} 1 -C ₃₎ _{alkyl, (C} 1 -C ₃₎ _{haloalkyl, (C} 1 -C ₃₎ alkoxy, (C ₁ -C ₃₎ _{haloalkoxy, (C} 1 -C ₃₎ alkylamino, di _(C 1 -C ₃₎ alkyl _{amino, (C} 1 -C ₂₎ alkoxy _(C 1 -C ₂₎ alkyl, _{(C 1} - C ₂₎ alkylamino _(C 1 -C ₂₎ alkyl, di _(C 1 -C ₂₎ alkyl amino _(C 1 -C ₂₎ A _Kill, selecting _(C 1 -C ₃₎ alkyl _{carbonyl, (C} 1 -C ₃₎ _{alkoxycarbonyl,} from the group consisting of _(C 1 -C ₃₎ alkyl aminocarbonyl, and di _(C 1 -C ₃₎ alkyl aminocarbonyl Is;
R ₆ is selected from the group consisting of hydrogen and hydroxide; and R ₇ is selected from the group consisting of hydrogen, halogen, and C ₁ -C ₆ alkoxy.

ＡＬＤＨ阻害剤はまた、ＣＡＳ登録番号：１０６９１１７−５７−２、１０６９１１７−５６−１、１０６９１１７−５５−０、１０５５４１７−２３−６、１０５５４１７−２２−５、１０５５４１７−２１−４、１０５５４１７−２０−３、１０５５４１７−１９−０、１０５５４１７−１８−９、１０５５４１７−１７−８、１０５５４１７−１６−７、１０５５４１７−１５−６及び１０５５４１７−１３−４の化合物及びその塩を含む。 ALDH inhibitors are also CAS registration numbers: 1069117-57-2, 1069117-56-1, 1069117-55-0, 1055417-23-6, 1055417-22-5, 1055417-21-4, 1055417-20-. 3, 1055417-19-0, 1055417-18-9, 1055417-17-8, 1055417-16-7, 1055417-15-6 and 1055417-13-4 and salts thereof.

ＡＬＤＨ阻害剤はまた、次式の化合物を含む。

ここで、Ｒ_１、Ｒ_２及びＲ_３は独立して、飽和又は不飽和の直鎖又は分枝鎖のＣ_１−Ｃ_６アルキルラジカル、又はそれらの塩を表す。 ALDH inhibitors also include compounds of the formula

Here, R ₁ , R ₂ and R ₃ independently represent a saturated or unsaturated linear or branched C ₁ -C ₆ alkyl radical, or a salt thereof.

ＡＬＤＨ阻害剤はまた、４−アミノ−４−メチル−２−ペンチンチオ酸（Ｓ）−メチルエステル、及びその塩を含む。 ALDH inhibitors also include 4-amino-4-methyl-2-pentynethioic acid (S) -methyl ester, and salts thereof.

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＴＫＩはＲＴＫＩである。幾つかの実施態様において、ＲＴＫＩは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the targeted therapeutic is TKI. In some embodiments, the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor. In some embodiments, the TKI is RTKI. In some embodiments, the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET / HGF inhibitor, and / or ALK inhibitor.

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＥＧＦＲ阻害剤である。典型的なＥＧＦＲ阻害剤（抗ＥＧＦＲ抗体）は、ニモツズマブ（ＹＭＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）として知られるヒト化モノクローナル抗体、完全ヒトＡＢＸ−ＥＧＦ（パニツムマブ、ＡｂｇｅｎｉｘＩｎｃ．）、並びに、Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３及びＥ７．６．３として知られ、米国特許第６２３５８８３号に記載される完全ヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（ＭｅｄａｒｅｘＩｎｃ）などの抗体を含む。ペルツズマブ（２Ｃ４）は、ＨＥＲ２に直接結合するが、ＨＥＲ２−ＥＧＦＲ二量体化を妨害し、これにより、ＥＧＦＲシグナル伝達を阻害するヒト化抗体である。ＥＧＦＲに結合する抗体の他の例は、ＧＡ２０１（ＲＧ７１６０；ＲｏｃｈｅＧｌｙｃａｒｔＡＧ）、ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣＣＲＬＨＢ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣＣＲＬＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣＣＲＬ８５０８）、ＭＡｂ５２８（ＡＴＣＣＣＲＬ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ等を参照）及びその変異体、例えばキメラ化２２５（Ｃ２２５又はセツキシマブ；ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））及び再形成ヒト２２５（Ｈ２２５）（国際公開第９６／４０２１０号、ＩｍｃｌｏｎｅＳｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．を参照）；ＩＭＣ−１１Ｆ８，完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；タイプＩＩ変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５２１２２９０号）；米国特許第５８９１９９６号に記載されているようなＥＧＦＲに結合するヒト化及びキメラ化抗体；及びＥＧＦＲに結合するヒト抗体、例えばＡＢＸ−ＥＧＦ（国際公開第９８／５０４３３，Ａｂｇｅｎｉｘを参照）；ＥＭＤ５５９００（Stragliotto等 Eur. J. Cancer 32A:636-640 (1996)）；ＥＭＤ７２００（マツズマブ），ＥＧＦＲ結合についてＥＧＦ及びＴＧＦ−α双方と競合するＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体；及びｍＡｂ８０６又はヒト化ｍＡｂ８０６（Johns等, J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004)）を含む。抗ＥＧＦＲ抗体は細胞傷害剤とコンジュゲートされることができ、よってイムノコンジュゲートを生じる（例えば、欧州特許出願公開第６５９４３９Ａ２号、ＭｅｒｃｋＰａｔｅｎｔＧｍｂＨを参照）。幾つかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブである。幾つかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体は、パニツムマブである。幾つかの実施態様において、抗ＥＧＦＲ抗体は、ザルツムマブ、ニモツズマブ、及び／又はマツズマブである。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the targeted therapeutic agent is an EGFR inhibitor. Exemplary EGFR inhibitors (anti-EGFR antibodies) are humanized monoclonal antibodies known as Nimotuzumab (YM Biosciences), fully human ABX-EGF (panitumumab, Abgenix Inc.), and E1.1, E2.4, E2. .5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3, and E7.6.3, fully human antibodies described in US Pat. No. 6,235,883; such as MDX-447 (Medarex Inc) Contains antibodies. Pertuzumab (2C4) is a humanized antibody that binds directly to HER2 but interferes with HER2-EGFR dimerization, thereby inhibiting EGFR signaling. Other examples of antibodies that bind to EGFR are GA201 (RG7160; Roche Glycart AG), MAb579 (ATCC CRL HB 8506), MAb455 (ATCC CRL HB8507), MAb225 (ATCC CRL 8508), MAb528 (ATCC CRL CAT 850) No. 4,943,533, Mendelsohn et al.) And variants thereof, such as chimerized 225 (C225 or cetuximab; ERBITUX®) and reshaped human 225 (H225) (WO 96/40210, Imclone Systems Inc. IMC-11F8, a fully human EGFR targeting antibody (Imclone); an antibody that binds to type II mutant EGFR (US Pat. No. 5,212,290); Humanized and chimerized antibodies that bind to EGFR as described in U.S. Pat. No. 5891996; and human antibodies that bind to EGFR, such as ABX-EGF (see WO 98/50433, Abgenix); EMD55900 (Stragliotto Eur. J. Cancer 32A: 636-640 (1996)); EMD7200 (matuzumab), humanized EGFR antibodies against EGFR that compete with both EGF and TGF-α for EGFR binding; and mAb 806 or humanized mAb 806 (Johns et al., J. Biol. Chem. 279 (29): 30375-30384 (2004)). Anti-EGFR antibodies can be conjugated with cytotoxic agents, thus producing an immunoconjugate (see, eg, European Patent Application Publication No. 659439 A2, Merck Patent GmbH). In some embodiments, the anti-EGFR antibody is cetuximab. In some embodiments, the anti-EGFR antibody is panitumumab. In some embodiments, the anti-EGFR antibody is saltumumab, nimotuzumab, and / or matuzumab.

本方法において有用な抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲに十分な親和性と特異性で結合し、ＥＧＦＲ活性を減少又は阻害することができる任意の抗体が含まれている。選択された抗体は、ＥＧＦＲに対する十分強い結合親和性を通常有し、例えば、抗体はヒトｃ−ｍｅｔにＫｄ値が１００ｎＭ−１ｐＭの間で結合し得る。抗体の親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（例えばＰＣＴ出願公開番号第２００５／０１２３５９号に記載されてビアコアアッセイなど）；酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）；及び競合アッセイ（例えばＲＩＡ）により決定することができる。好ましくは、本発明の抗ＥＧＦＲ抗体はＥＧＦＲ／ＥＧＦＲリガンド活性が関与している疾患又は状態をターゲティング又は干渉する場合の治療薬として使用できる。また、抗体は、例えば治療としての有効性を評価するために、他の生物学的活性アッセイを施してもよい。このようなアッセイは、当技術分野で周知であり、標的抗原に依存し、抗体としての使用を意図している。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲのアームは、細胞防御機構をＥＧＦＲ発現細胞に対して集中させるために、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２又はＣＤ３）などの白血球上のトリガー分子、又はＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧに対するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体はまた、ＥＧＦＲを発現する細胞に細胞傷害性薬物を局在化するために用いることができる。これらの抗体は、ＥＧＦＲ結合アーム及び細胞傷害性薬物（例えばサポリン、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート又は放射性同位体ハプテン）に特異的に結合するアームを保有する。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）として調製することができる。 Anti-EGFR antibodies useful in the present methods include any antibody that binds with sufficient affinity and specificity to EGFR and can reduce or inhibit EGFR activity. The selected antibody usually has a sufficiently strong binding affinity for EGFR, for example, the antibody can bind to human c-met with a Kd value between 100 nM-1 pM. Antibody affinity can be determined, for example, by surface plasmon resonance based assays (such as the Biacore assay described in PCT Application Publication No. 2005/012359); enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs); and competitive assays (eg, RIA ). Preferably, the anti-EGFR antibody of the present invention can be used as a therapeutic agent when targeting or interfering with a disease or condition involving EGFR / EGFR ligand activity. The antibody may also be subjected to other biological activity assays, for example to assess its effectiveness as a treatment. Such assays are well known in the art and depend on the target antigen and are intended for use as antibodies. In some embodiments, the EGFR arm can trigger molecules on leukocytes such as T cell receptor molecules (eg, CD2 or CD3), or FcγRI ( CD64), FcγRII (CD32), and Fc receptors for IgG (FcγR), such as FcγRIII (CD16), can be combined. Bispecific antibodies can also be used to localize cytotoxic drugs to cells expressing EGFR. These antibodies possess an EGFR binding arm and an arm that specifically binds to a cytotoxic drug (eg, saporin, anti-interferon alpha, vinca alkaloid, ricin A chain, methotrexate or radioisotope hapten). Bispecific antibodies can be prepared as full length antibodies or antibody fragments (eg F (ab ′) ₂ bispecific antibodies).

典型的なＥＧＦＲ阻害剤はまた、米国特許第５６１６５８２号、米国特許第５４５７１０５号、米国特許第５４７５００１号、米国特許第５６５４３０７号、米国特許第５６７９６８３号、米国特許第６０８４０９５号、米国特許第６２６５４１０号、米国特許第６４５５５３４号、米国特許第６５２１６２０号、米国特許第６５９６７２６号、米国特許第６７１３４８４号、米国特許第５７７０５９９号、米国特許第６１４０３３２号、米国特許第５８６６５７２号、米国特許第６３９９６０２号、米国特許第６３４４４５９号、米国特許第６６０２８６３号、米国特許第６３９１８７４号、ＷＯ９８１４４５１号、ＷＯ９８５００３８号、国際公開第９９０９０１６号、国際公開第９９２４０３７号、国際公開第９９３５１４６号、国際公開第０１３２６５１号、米国特許第６３４４４５５号、米国特許第５７６００４１号、米国特許第６００２００８号、及び／又は米国特許第５７４７４９８に記載される化合物などの小分子を含む。特定の小分子ＥＧＦＲアンタゴニストは、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ、ＯＳＩＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ１８３８０５（ＣＩ１０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−、ジヒドロクロリド、ＰｆｉｚｅｒＩｎｃ．）；イレッサ（登録商標）（ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチナミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ，ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＺＤ６４７４（Ｚａｃｔｉｍａ，ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＣＵＤＣ−１０１（Ｃｕｒｉｓ）；カネルチニブ（ＣＩ−１０３３）；ＡＥＥ７８８（６−［４−［（４−エチル−１−ピペラジニル）メチル］フェニル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン、国際公開第２００３０１３５４１号、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＰＫＩ１６６４−［４−［［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール、国際公開第９７０２２６６号ノバルティス）を含む。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン及び／又はその医薬上許容可能な塩（例えば、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン−ＨＣｌ）である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、ゲフィチニブ及び／又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、ラパチニブ及び／又はその薬学的に許容可能な塩である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、ゲフィチニブ及び／又はエルロチニブである。 Exemplary EGFR inhibitors are also US Pat. No. 5,616,582, US Pat. No. 5,457,105, US Pat. No. 5,475,001, US Pat. No. 5,654,307, US Pat. No. 5,679,683, US Pat. , U.S. Pat.No. 6,455,534, U.S. Pat.No. 6,521,620, U.S. Pat.No. 6,596,726, U.S. Pat.No. 6,713,484, U.S. Pat. Patent No. 6,344,459, US Pat. No. 6,602,863, US Pat. No. 6,391,874, WO9814451, WO9850038, WO9909016, WO9924037, WO9935146, International Hirakidai 0132651 Patent, including small molecules, such as U.S. Patent No. 6344455, U.S. Patent No. 5760041, U.S. Patent No. 6002008, and / or US the compounds described in Patent No. 5,747,498. Certain small molecule EGFR antagonists include OSI-774 (CP-358774, erlotinib, OSI Pharmaceuticals); PD 183805 (CI 1033, 2-propenamide, N- [4-[(3-chloro-4-fluorophenyl) amino ] -7- [3- (4-morpholinyl) propoxy] -6-quinazolinyl]-, dihydrochloride, Pfizer Inc.); Iressa (ZD1839, gefitinib, AstraZeneca); ZM 105180 ((6-amino- 4- (3-methylphenyl-amino) -quinazoline, Zeneca); BIBX-1382 (N8- (3-chloro-4-fluoro-phenyl) -N2- (1-methyl-piperidin-4-yl) -pyrimido [ 5,4-d] pyrimidine- , 8-diamine, Boehringer Ingelheim); PKI-166 ((R) -4- [4-[(1-phenylethyl) amino] -1H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-6-yl] -phenol ); (R) -6- (4-hydroxyphenyl) -4-[(1-phenylethyl) amino] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidine); CL-387785 (N- [4- [ (3-bromophenyl) amino] -6-quinazolinyl] -2-butynamide); EKB-569 (N- [4-[(3-chloro-4-fluorophenyl) amino] -3-cyano-7-ethoxy- 6-quinolinyl] -4- (dimethylamino) -2-butenamide); lapatinib (Tykerb, GlaxoSmithKline); ZD6474 (Zactima, A CUDC-101 (Curis); caneltinib (CI-1033); AEE788 (6- [4-[(4-ethyl-1-piperazinyl) methyl] phenyl] -N-[(1R) -1-phenylethyl ] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-4-amine, WO2003013541, Novartis) and PKI166 4- [4-[[(1R) -1-phenylethyl] amino] -7H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-6-yl] -phenol, WO 9702266 Novartis). In some embodiments, the EGFR antagonist is N- (3-ethynylphenyl) -6,7-bis (2-methoxyethoxy) -4-quinazolinamine and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, N -(3-ethynylphenyl) -6,7-bis (2-methoxyethoxy) -4-quinazolineamine-HCl). In some embodiments, the EGFR antagonist is gefitinib and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In some embodiments, the EGFR antagonist is lapatinib and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In some embodiments, the EGFR antagonist is gefitinib and / or erlotinib.

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＨＧＦ／ＭＥＴ阻害剤である。例示的なＨＧＦ／ＭＥＴ阻害剤（抗ＨＧＦ及び／又は抗ＭＥＴ抗体）は、国際公開第０５／０１６３８２号に開示される抗ＭＥＴ抗体などの抗体（限定されないが、抗体１３．３．２、９．１．２、８．７０．２、８．９０．３を含む）；ジェノアのＣＢＡでＩＣＬＣ番号ＰＤ０３００１で預けられたハイブリドーマ細胞株により生成される抗ｍｅｔ抗体、又はＨＧＦ受容体のβ鎖の細胞外ドメイン上のエピトープ（該エピトープはモノクローナル抗体により認識されるものと同じである）を認識する抗ｍｅｔ抗体；国際公開第２００７／１２６７９９号に開示される抗ｍｅｔ抗体（限定されないが、０４５３６、０５０８７、０５０８８、０５０９１、０５０９２、０４６８７、０５０９７、０５０９８、０５１００、０５１０１、０４５４１、０５０９３、０５０９４、０４５３７、０５１０２、０５１０５、０４６９６、０４６８２を含む）；国際公開第２００９／００７４２７号に開示される抗ｍｅｔ抗体（限定されないが、ＣＮＣＭ、フランス、パリ、パスツール研究所に、２００７年３月１４日に番号Ｉ−３７３１、２００７年３月１４日に番号Ｉ−３７３２、２００７年７月６日に番号Ｉ−３７８６、２００７年３月１４日に番号Ｉ−３７２４のもとに預けられた抗体）；２０１１０１２９４８１に開示された抗ｍｅｔ抗体；米国特許出願公開第２０１１０１０４１７６号に開示された抗ｍｅｔ抗体；国際公開第２００９／１３４７７６号に開示された抗ｍｅｔ抗体；国際公開第２０１０／０５９６５４号に開示された抗ｍｅｔ抗体；国際公開第２０１１／０２０９２５号に開示された抗ｍｅｔ抗体（限定されないが、ＣＮＣＭ、フランス、パリ、パスツール研究所に、２００８年３月１２日に番号Ｉ−３４８９、２０１０年１月１４日に番号Ｉ−４２７３のもとに預けられた抗体）；及び／又はＭｅｔＭＡｂ（オナルツズマブ）又はそのバイオシミラーバージョン（国際公開第２００６／０１５３７１号；Jin et al, Cancer Res (2008) 68:4360）を含む。幾つかの実施態様において、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤はオナルツズマブである。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the targeted therapeutic is an HGF / MET inhibitor. Exemplary HGF / MET inhibitors (anti-HGF and / or anti-MET antibodies) include antibodies such as, but not limited to, anti-MET antibodies disclosed in WO 05/016382. 1.2, 8.70.2, 8.90.3); an anti-met antibody produced by a hybridoma cell line deposited with Genoa CBA under ICLC number PD03001, or β chain of HGF receptor An anti-met antibody that recognizes an epitope on the extracellular domain (the epitope is the same as that recognized by the monoclonal antibody); an anti-met antibody disclosed in WO 2007/126799 (including but not limited to 04536, 05087, 05088, 05091, 05092, 04687, 05097, 05098, 05100, 05101, 045 1, 05093, 05094, 04537, 05102, 05105, 04696, 04682); anti-met antibodies disclosed in WO2009 / 007427 (including but not limited to the CNCM, France, Paris, Pasteur Institute, The number I-3731, March 14, 2007, the number I-3732 on March 14, 2007, the number I-3786 on July 6, 2007, and the number I-3724 on March 14, 2007 The anti-met antibody disclosed in US Patent Application Publication No. 201110104176; the anti-met antibody disclosed in International Publication No. 2009/134776; Anti-met antibody disclosed in U.S. Patent No. 0/59654; International Publication No. 2011/02092 The anti-met antibody disclosed in No. 5 (but not limited to the CNCM, France, Paris, Pasteur Institute, No. 1-3489 on March 12, 2008, No. I-4273 on Jan. 14, 2010) Originally deposited antibody); and / or MetMAb (Onartuzumab) or a biosimilar version thereof (WO 2006/015371; Jin et al, Cancer Res (2008) 68: 4360). In some embodiments, the MET / HGF inhibitor is onaltuzumab.

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤は、抗肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）抗体、例えば、ヒト化抗ＨＧＦ抗体ＴＡＫ７０１、リロツムマブ、フィクラツズマブ、及び／又は、国際公開第２００７／１４３０９０号に記載されるヒト化抗体２Ｂ８である。幾つかの実施態様において、抗ＨＧＦ抗体は、米国特許第７７１８１７４号（Ｂ２）に記載される抗ＨＧＦ抗体である。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the MET / HGF inhibitor is an anti-hepatocyte growth factor (HGF) antibody, such as the humanized anti-HGF antibody TAK701, rirotumab, ficultuzumab, And / or humanized antibody 2B8 described in WO2007 / 143090. In some embodiments, the anti-HGF antibody is an anti-HGF antibody described in US Pat. No. 7,718,174 (B2).

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、ＭＥＴ／ＨＧＦ阻害剤は、ＧＤＣ−０７１２、ＳＧＸ−５２３、クリゾチニブ（ＰＦ−０２３４１０６６；３−［（１Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ］−５−（１−ピペリジン−４−イルピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミン；ＣＡＳ番号８７７３９９−５２−５）；ＪＮＪ−３８８７７６０５（ＣＡＳ番号９４３５４０−７５−８）、ＢＭＳ−６９８７６９、ＰＨＡ−６６５７５２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＳＵ５４１６、ＩＮＣ−２８０（Ｉｎｃｙｔｅ；ＳＵ１１２７４（Ｓｕｇｅｎ；［（３Ｚ）−Ｎ−（３−クロロフェニル）−３−（｛３，５−ジメチル−４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロール−２−イル｝メチレン）−Ｎ−メチル−２−オキソインドリン−５−スルホンアミド；ＣＡＳ番号６５８０８４−２３−２］）、フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）、ＸＬ８８０（ＣＡＳ番号８４９２１７−６４−７；ＸＬ８８０はＭＥＴ／ＨＧＦ及びＶＥＧＦＲ２及びＫＤＲの阻害剤である）；ＭＧＣＤ−２６５（ＭｅｔｈｙｌＧｅｎｅ；ＭＧＣＤ−２６５はｍｅｔ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、Ｒｏｎ及びＴｉｅ−２受容体を標的化する；ＣＡＳ番号８７５３３７−４４−３）、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７；（−）−（３Ｒ，４Ｒ）−３−（５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，２，１−ｉｊ］キノリン−１−イル）−４−（１Ｈ−インドール−３−イル）ピロリジン−２，５−ジオン；Munchiら、Mol Cancer Ther June 2010 9;1544頁を参照されたい；ＣＡＳ番号９０５８５４−０２−６）、ＬＹ−２８０１６５３（Ｌｉｌｌｙ）、ＬＹ２８７５３５８（Ｌｉｌｌｙ）、ＭＰ−４７０、リロツムマブ（ＡＭＧ１０２、抗ＨＧＦモノクローナル抗体）、抗体２２３Ｃ４又はヒト化抗体２２３Ｃ４（ＷＯ２００９／００７４２７）、ヒト化Ｌ２Ｇ７（ヒト化ＴＡＫ７０１；ヒト化抗ＨＧＦモノクローナル抗体）；ＥＭＤ１２１４０６３（ＭｅｒｃｋＳｏｒｏｎｏ）、ＥＭＤ１２０４８３１（ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ）、ＮＫ４、カボザンチニブ（ＸＬ−１８４、ＣＡＳ番号８４９２１７−６８−１；カボザンチニブはＭＥＴ／ＨＧＦ及びＶＥＧＦＲ２の二重阻害剤である）、ＭＰ−４７０（ＳｕｐｅｒＧｅｎ；ｃ−ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＰＤＧＦＲ、Ｆｌｔ３、及びＡＸＬの新規阻害剤である）、Ｃｏｍｐ−１、フィクラツズマブ（ＡＶ−２９９；抗ＨＧＦモノクローナル抗体）、Ｅ７０５０（Ｃａｓ番号１１９６６８１−４９−８；Ｅ７０５０はＭＥＴ／ＨＧＦ及びＶＥＧＦＲ２の二重阻害剤である（Ｅｓａｉ）；ＭＫ−２４６１（Ｍｅｒｃｋ；Ｎ−（（２Ｒ）−１，４−ジオキサン−２−イルメチル）−Ｎ−メチル−Ｎ’−［３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−５−オキソ−５Ｈ−ベンゾ［４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］ピリジン−７−イル］スルファミド；ＣＡＳ番号９１７８７９−３９−１）；ＭＫ８０６６（Ｍｅｒｃｋ）、ＰＦ４２１７９０３（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＡＭＧ２０８（Ａｍｇｅｎ）、ＳＧＸ−１２６、ＲＰ１０４０、ＬＹ２８０１６５３、ＡＭＧ４５８、ＥＭＤ６３７８３０、ＢＡＹ−８５３４７４、ＤＰ−３５９０のいずれか１つである。特定の実施形態においては、阻害剤は、クリゾチニブ、チバンチニブ、カボザンチニブ、ＭＧＣＤ−２６５、フィクラツズマブ、ヒト化ＴＡＫ−７０１、リロツムマブ、フォレチニブ、ｈ２２４Ｇ１１、ＤＮ−３０、ＧＤＣ−０７１２、ＭＫ−２４６１、Ｅ７０５０、ＭＫ−８０３３、ＰＦ−４２１７９０３、ＡＭＧ２０８、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＥＭＤ１２０４８３１、ＩＮＣ−２８０、ＬＹ−２８０１６５３、ＳＧＸ−１２６、ＲＰ１０４０、ＬＹ２８０１６５３、ＢＡＹ−８５３４７４、及び／又はＬＡ４８０のいずれか１つ又は複数である。特定の実施形態においては、阻害剤は、クリゾチニブ、チバンチニブ、カボザンチニブ、ＭＧＣＤ−２６５、フィクラツズマブ、ヒト化ＴＡＫ−７０１、リロツムマブ、及び／又はフォレチニブのいずれか１つ又は複数である。いくつかの実施形態においては、阻害剤は、クリゾチニブである。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the MET / HGF inhibitor is GDC-0712, SGX-523, crizotinib (PF-02341066; 3-[(1R) -1- (2,6-dichloro-3-fluorophenyl) ethoxy] -5- (1-piperidin-4-ylpyrazol-4-yl) pyridin-2-amine; CAS No. 877399-52-5); JNJ-38877605 ( CAS No. 934540-75-8), BMS-698769, PHA-665752 (Pfizer), SU5416, INC-280 (Incyte; SU11274 (Sugen; [(3Z) -N- (3-chlorophenyl) -3-({3 , 5-Dimethyl-4-[(4-methylpiperazin-1-yl) carbonyl] -1H-pi 2-yl} methylene) -N-methyl-2-oxoindoline-5-sulfonamide; CAS No. 658084-23-2]), forretinib (GSK1363089), XL880 (CAS No. 8429217-64-7; XL880) Is an inhibitor of MET / HGF and VEGFR2 and KDR); MGCD-265 (MethylGene; MGCD-265 targets the met, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, Ron and Tie-2 receptors; CAS number 875337-44 -3), tivantinib (ARQ197; (-)-(3R, 4R) -3- (5,6-dihydro-4H-pyrrolo [3,2,1-ij] quinolin-1-yl) -4- (1H) -Indol-3-yl) pyrrolidine-2,5-dione; Munchi et al., Mol Cancer Ther June 2010 9; see page 1544; CAS number 905854-02-6), LY-2801653 (Lilly), LY2875358 (Lilly), MP-470, Rirotumab (AMG102, anti-HGF monoclonal antibody), antibody 223C4 or Humanized antibody 223C4 (WO2009 / 007427), humanized L2G7 (humanized TAK701; humanized anti-HGF monoclonal antibody); EMD1214063 (Merck Solono), EMD1204831 (Merck Serono), NK4, cabozantinib (XL-184, CAS number 8492217- 68-1; cabozantinib is a dual inhibitor of MET / HGF and VEGFR2, MP-470 (SuperGen; c-KIT, MET, PDGFR, Flt3, and Is a novel inhibitor of AXL), Comp-1, ficratuzumab (AV-299; anti-HGF monoclonal antibody), E7050 (Cas number 1196681-49-8; E7050 is a dual inhibitor of MET / HGF and VEGFR2 ( Esai); MK-2461 (Merck; N-((2R) -1,4-dioxan-2-ylmethyl) -N-methyl-N ′-[3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) -5-oxo-5H-benzo [4,5] cyclohepta [1,2-b] pyridin-7-yl] sulfamide; CAS number 917879-39-1); MK8066 (Merck), PF4217903 (Pfizer), AMG208 ( Amgen), SGX-126, RP1040, LY2801653, AMG458, EM One of D633830, BAY-854744, and DP-3590. In certain embodiments, the inhibitor is crizotinib, tivantinib, cabozantinib, MGCD-265, ficlatuzumab, humanized TAK-701, rirotumab, foretinib, h224G11, DN-30, GDC-0712, MK-2461, E7050, MK -8033, PF-4217903, AMG208, JNJ-38877605, EMD1204831, INC-280, LY-2801653, SGX-126, RP1040, LY2801653, BAY-853474, and / or LA480. In certain embodiments, the inhibitor is any one or more of crizotinib, tivantinib, cabozantinib, MGCD-265, ficultuzumab, humanized TAK-701, rirotumab, and / or foretinib. In some embodiments, the inhibitor is crizotinib.

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＢＲＡＦ阻害剤である。例示的なＢＲＡＦ阻害剤は、当業界で周知であり、例えば、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬＸ−３６０３、ダブラフェニブ（ＧＳＫ２１１８４３６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６、ベムラフェニブ、及び国際公開第２００７／００２３２５号、国際公開第２００７／００２４３３号、国際公開第２００９１１１２７８号、国際公開第２００９１１１２７９号、国際公開第２００９１１１２７７号、国際公開第２００９１１１２８０号及び米国特許第７４９１８２９号に記載されるものが挙げられる。幾つかの実施態様において、ＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦＶ６００の選択的阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＢＲＡＦＶ６００は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ、ＢＲＡＦＶ６００Ｋ、及び／又はＶ６００Ｄである。幾つかの実施態様において、ＢＲＡＦＶ６００は、ＢＲＡＦＶ６００Ｒである。幾つかの実施態様において、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。幾つかの実施態様において、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the targeted therapeutic agent is a BRAF inhibitor. Exemplary BRAF inhibitors are well known in the art and include, for example, sorafenib, PLX4720, PLX-3603, dabrafenib (GSK2118436), GDC-0879, RAF265 (Novartis), XL281, ARQ736, BAY73-4506, vemurafenib, and What is described in International Publication No. 2007/002325, International Publication No. 2007/002433, International Publication No. WO200911278, International Publication No. WO200911279, International Publication No. WO200911277, International Publication No. WO200911280 and US Pat. No. 7,491,829. Is mentioned. In some embodiments, the BRAF inhibitor is a BRAF inhibitor. In some embodiments, the BRAF inhibitor is a selective inhibitor of BRAF V600. In some embodiments, BRAF V600 is BRAF V600E, BRAF V600K, and / or V600D. In some embodiments, BRAF V600 is BRAF V600R. In some embodiments, the BRAF inhibitor is vemurafenib. In some embodiments, the BRAF inhibitor is vemurafenib.

ベムラフェニブ（ＲＧ７２０４、ＰＬＸ−４０３２、ＣＡＳ登録番号１０２９８７２−５５−５）は、種々のがん細胞株、例えばメラノーマ細胞株においてプログラムされた細胞死を引き起こすことが示されている。ベムラフェニブは−ＢＲＡＦが、共通のＶ６００Ｅ変異を有する場合、ＢＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路上のＢＲＡＦ／ＭＥＫのステップを中断する。ＦＤＡにより承認されたように、ベムラフェニブは、患者において、例えばそのがんがＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する（つまり、ＢＲＡＦタンパク質上のアミノ酸位置番号６００で、通常のバリンがグルタミン酸に置換されている）メラノーマ患者において作用する。メラノーマの約６０％がＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を持っている。Ｖ６００Ｅ変異は、リンパ腫、大腸がん、メラノーマ、甲状腺がん及び肺がんを含む他の種々のがんに存在する。ベムラフェニブは下記の構造を有する。

Vemurafenib (RG7204, PLX-4032, CAS Registry Number 1029872-55-5) has been shown to cause programmed cell death in various cancer cell lines, such as melanoma cell lines. Vemurafenib interrupts the BRAF / MEK step on the BRAF / MEK / ERK pathway if -BRAF has a common V600E mutation. As approved by the FDA, Vemurafenib is a melanoma patient in patients whose cancer has, for example, the BRAF V600E mutation (ie, amino acid position number 600 on the BRAF protein and normal valine is replaced with glutamic acid). Acts on. About 60% of melanomas have the BRAF V600E mutation. The V600E mutation is present in various other cancers including lymphoma, colon cancer, melanoma, thyroid cancer and lung cancer. Vemurafenib has the following structure.

ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）は、米国で承認された薬物製品であり、ＦＤＡの承認を受けた試験により検出されるようなＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有する切除不能又は転移性メラノーマを有する患者の治療に適応される。ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を欠くメラノーマ患者（野生型ＢＲＡＦメラノーマ）における使用のためには推奨されない。 ZELBORAF (vemurafenib) (Genentech, Inc.) is a drug product approved in the United States and has an unresectable or metastatic melanoma having a BRAF V600E mutation as detected by FDA approved tests. For the treatment of patients with ZELBORAF (R) (vemurafenib) is not recommended for use in melanoma patients lacking the BRAF V600E mutation (wild type BRAF melanoma).

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＡＬＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＡＬＫ阻害剤はクリゾチニブである。クリゾチニブ（ＰＦ−０２３４１０６６又は１０６６としても知られる）は、Ｐｆｉｚｅｒ社により開発されようとしているアミノピリジンの化学系列のＭｅｔ及びＡＬＫ（未分化リンパ腫キナーゼ）阻害剤である（例えば、Zou et al., Cancer Research 67: 4408-4417, 2007及び捕捉データを参照）。他の例示的なＡＬＫ阻害剤は、例えば、ＴＡＥ−６８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓから； Galkin, et al., Proc. National Acad. Sci. 104(1) 270-275, 2007を参照）、ＡＰ２６１１３（ＡｒｉａｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．），及びＣＥＰ−１４０８３、ＣＥＰ−１４５１３，及びＣＥＰ−１１９８８（Ｃｅｐｈａｌｏｎ；Wan et al., Blood 107: 1617-1623, 2006を参照）；並びにＷＨＩ−Ｐ１３１及びＷＨＩ−Ｐ１５４（ＥＭＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、５−クロロ−Ｎ４−［２−（イソプロピルスルホニル）フェニル］−Ｎ２−｛２−メトキシ−４−［４−（４−−メチルピペラジン−１−イル）ピペリジン−１−イル］フェニル｝ピリミジン−２，４−ジアミン及び２−［（５−ブロモ−２−｛［２−メトキシ−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル］アミノ｝ピリミジ−ｎ−４−イル）アミノ］−Ｎ−メチルベンゼンスルホンアミド（Mosse et al., Clin Cancer Res. 2009 Sep. 15; 15(18):5609-14, 2009; J. of Med. Chem. 49: 1006-1015, 2006; Cancer Research, (US), 2004, 64: 8919-8923, 2004; Proc. Natl. Acad. Sci. 101:13306-13311, 2004; Annual Review of Medicine, (US) 54: 73, 2003; Science 278: 1309-1312, 1997; Oncogene 14 (4): 439-449, 1997; Oncogene 9: 1567-1574, 1994; Am J Pathol 160: 1487-1494, 2002; Am J Pathol 157: 377-384, 2000; Blood90: 2901-2910, 1997; Am J. Pathol. 156 (3): 781-9, 2000; J Comb Chem. 8: 401-409, 2006 並びに米国特許出願公開第２０１００１５２１８２号；第２０１０００９９６５８号；第２０１０００４８５７６号；第２００９０２８６７７８号；第２００９０２２１５５５号；第２００９０１８６８０１号；第２００９０１１８２１６号；第２００９００９９１９３号；第２００８０１７６８８１号；第２００８００９０７７６号；第２００８／０３００２７３号；国際公開第２００５／０９７７６５号；国際公開第２００５／００９３８９号；国際公開第２００５／０１６８９４号；国際公開第２００４／０８０９８０号；及び国際公開第２００４０７９３２６号を参照）を含む。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the targeted therapeutic agent is an ALK inhibitor. In some embodiments, the ALK inhibitor is crizotinib. Crizotinib (also known as PF-02341066 or 1066) is an aminopyridine chemical family Met and ALK (anaplastic lymphoma kinase) inhibitor that is being developed by Pfizer (see, for example, Zou et al., Cancer). Research 67: 4408-4417, 2007 and capture data). Other exemplary ALK inhibitors include, for example, TAE-684 (from Novartis; see Galkin, et al., Proc. National Acad. Sci. 104 (1) 270-275, 2007), AP26113 (Ariad Pharmaceuticals, Inc.), and CEP-14083, CEP-14513, and CEP-11988 (see Cephalon; Wan et al., Blood 107: 1617-1623, 2006); and WHI-P131 and WHI-P154 (EMD Biosciences), 5-chloro-N 4- [2- (isopropylsulfonyl) phenyl] -N2- {2-methoxy-4- [4- (4-methylpiperazin-1-yl) piperidin-1-yl] phenyl} pyrimidine- 2,4-diamine and 2-[(5-bromo-2-{[2-methoxy-4- (4-methylpiperazine-1-y ) Phenyl] amino} pyrimidi-n-4-yl) amino] -N-methylbenzenesulfonamide (Mosse et al., Clin Cancer Res. 2009 Sep. 15; 15 (18): 5609-14, 2009; J. of Med. Chem. 49: 1006-1015, 2006; Cancer Research, (US), 2004, 64: 8919-8923, 2004; Proc. Natl. Acad. Sci. 101: 13306-13311, 2004; Annual Review of Medicine , (US) 54: 73, 2003; Science 278: 1309-1312, 1997; Oncogene 14 (4): 439-449, 1997; Oncogene 9: 1567-1574, 1994; Am J Pathol 160: 1487-1494, 2002 Am J Pathol 157: 377-384, 2000; Blood90: 2901-2910, 1997; Am J. Pathol. 156 (3): 781-9, 2000; J Comb Chem. 8: 401-409, 2006 and US patents Published Application No. 201100152182; No. 20100009658; No. 20000485576; No. 20090286778; No. 20090228555; No. 20090186801; No. 200901118216; No. 2009099193; 20080176881; 20080090776; 2008/0300273; WO2005 / 097765; WO2005 / 009389; WO2005 / 016894; WO2004 / 080980; and WO2004407326 Issue).

本明細書に記載される併用療法の何れかの幾つかの実施態様において、標的化治療薬はＭＥＫ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫ１阻害剤、ＭＥＫ２阻害剤、及び／又はＭＥＫ１／２阻害剤である。例示的なＭＥＫ阻害剤は、限定されないが、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、ＭＥＫ１６２、セルメチニブ（ＡＺＤ６２４４、ＡＲＲＹ−１４２８８６）、ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ（ＭＳＣ１９３６３６９Ｂ、ＡＳ−７０３０２６、ＡＳ７０３０２６）、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、ＰＤ−３２５９０１、ＧＤＣ−０９７３、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３５９０１が挙げられる。幾つかの実施態様において、Ｍｅｋ阻害剤は、セルメチニブ、ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ、ＧＤＣ−０９７３、ＧＤＣ−０６２３、又はトラメチニブである。ある実施態様において、Ｍｅｋ阻害剤はＧＤＣ−０９７３である。 In some embodiments of any of the combination therapies described herein, the targeted therapeutic agent is a MEK inhibitor. In some embodiments, the MEK inhibitor is a MEK1 inhibitor, a MEK2 inhibitor, and / or a MEK1 / 2 inhibitor. Exemplary MEK inhibitors include, but are not limited to, trametinib (GSK 1120212), MEK162, selmetinib (AZD 6244, ARRY-142886), pimasertib (MSC1936369B, AS-703026, AS703026), GDC-06723, GDC-06723, GDC-06723 -325901, GDC-0973, CI-1040, PD035901. In some embodiments, the Mek inhibitor is selmethinib, pimasertiv, GDC-0973, GDC-0623, or trametinib. In certain embodiments, the Mek inhibitor is GDC-0973.

ＧＤＣ−０９７３（ＸＬ５１８）はまた、ヒトの腫瘍でしばしば活性化されるＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の重要なコンポーネントであるマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＡＰＫＫ）としても知られるＭＥＫの選択的阻害剤である。ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の不適切な活性化は、外因性成長因子の非存在下において細胞増殖を促進する。固形腫瘍においてＧＤＣ−０９７３を評価する臨床試験が進行中である。ＧＤＣ−０９７３は、国際特許出願公開番号ＷＯ２００７０４４５１５（Ａ１）に記載されているように調製することができる。Ｃ−０９７３は、（Ｓ）−（３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）フェニル）（３−ヒドロキシ−３−（ピペリジン−２−イル）アゼチジン−１−イル）メタノンなる名称と下記の構造を有する。

GDC-0973 (XL518) also selectively inhibits MEK, also known as mitogen-activated protein kinase kinase (MAPKK), a key component of the RAS / RAF / MEK / ERK pathway that is often activated in human tumors It is an agent. Inappropriate activation of the MEK / ERK pathway promotes cell proliferation in the absence of exogenous growth factors. Clinical trials evaluating GDC-0973 in solid tumors are ongoing. GDC-0973 can be prepared as described in International Patent Application Publication No. WO2007044515 (A1). C-0973 is (S)-(3,4-difluoro-2- (2-fluoro-4-iodophenylamino) phenyl) (3-hydroxy-3- (piperidin-2-yl) azetidin-1-yl ) Methanone and the following structure.

トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２、ＣＡＳ登録番号８７１７００−１７−３）は、Ｎ−（３−｛３−シクロプロピル−５−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−３，４，６，７テトラヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル｝フェニル）アセトアミドなる名称と下記の構造を有する。

Trametinib (GSK 1120212, CAS Registry Number 871700-17-3) is N- (3- {3-cyclopropyl-5-[(2-fluoro-4-iodophenyl) amino] -6,8-dimethyl-2. , 4,7-trioxo-3,4,6,7 tetrahydropyrido [4,3-d] pyrimidin-1 (2H) -yl} phenyl) acetamide and the following structure.

ＴＫＩ及び／又はＲＴＫＩの何れかの幾つかの実施態様において、阻害剤は、目的のポリペプチドに対する特異的阻害剤、例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＭＥＴ／ＨＧＦ、ＡＬＫ、ＢＲＡＦ、ＲＯＳ１、及び／又はＭＥＫに対する特異的な阻害剤であり得る。ＴＫＩ及び／又はＲＴＫＩの何れかの幾つかの実施態様において、阻害剤は、ＴＫＩ及び／又はＲＴＫＩが目的の一以上のポリペプチドを阻害する二重阻害剤又はパン阻害剤、例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＭＥＴ／ＨＧＦ、ＡＬＫ、ＢＲＡＦ、ＲＯＳ１、及び／又はＭＥＫと一以上の標的ポリペプチドに対する特異的な阻害剤であり得る。 In some embodiments of any of TKI and / or RTKI, the inhibitor is a specific inhibitor for the polypeptide of interest, such as EGFR, HER2, MET / HGF, ALK, BRAF, ROS1, and / or MEK. It can be a specific inhibitor for. In some embodiments of any of TKI and / or RTKI, the inhibitor is a dual inhibitor or pan inhibitor where TKI and / or RTKI inhibits one or more polypeptides of interest, eg, EGFR, HER2 , MET / HGF, ALK, BRAF, ROS1, and / or may be specific inhibitors for MEK and one or more target polypeptides.

Ａ．抗体
本明細書中に提供されるのは、本明細書に記載する方法で使用するための、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）など、目的のポリペプチドに結合する単離された抗体である。上記実施態様の何れかにおいて、抗体はヒト化されている。更に、上記実施態様の何れかに記載の抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）_２断片である。別の実施態様において、抗体は、全長抗体、例えば、本明細書において定義される「インタクトなＩｇＧ１」抗体又は他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。 A. Antibodies Provided herein are isolations that bind to a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinases (eg, receptor tyrosine kinases) for use in the methods described herein. Antibody. In any of the above embodiments, the antibody is humanized. Furthermore, the antibody according to any of the above embodiments is a monoclonal antibody, including a chimeric, humanized or human antibody. In one embodiment, the antibody is an antibody fragment, eg, an Fv, Fab, Fab ′, scFv, diabody, or F (ab ′) ₂ fragment. In another embodiment, the antibody is a full-length antibody, eg, an “intact IgG1” antibody or other antibody class or isotype as defined herein.

更なる態様にて、以下のセクションで説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載の抗体は、単独又は組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる： In further aspects, as described in the following sections, the antibodies according to any of the above embodiments may incorporate any feature, alone or in combination:

１．抗体親和性
幾つかの実施態様において、本明細書において提供される抗体は、解離定数（Ｋｄ）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^−８Ｍ以下、例えば、１０^−８Ｍから１０^−１３Ｍ、例えば、１０^−９Ｍから１０^−１３Ｍ）を有する。一実施態様において、Ｋｄは放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施態様において、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、非標識抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（^１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する（例えば、Chen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照）。アッセイの条件を決めるために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（ＣａｐｐｅｌＬａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートして、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［^１２５Ｉ］抗原を、段階希釈した目的のＦａｂと混合する（例えば、Presta等, (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間（例えばおよそ６５時間）かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０^ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ^ＴＭγ計測器（Ｐａｃｋａｒｄ）にて１０分間計測する。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度が、競合的結合アッセイで使用するために選択される。 1. Antibody Affinity In some embodiments, an antibody provided herein has a dissociation constant (Kd) of ≦ 1 μM, ≦ 100 nM, ≦ 10 nM, ≦ 1 nM, ≦ 0.1 nM, ≦ 0.01 nM, or ≦ 0.001 nM (eg, 10 ⁻⁸ M or less, eg, 10 ⁻⁸ M to 10 ⁻¹³ M, eg, 10 ⁻⁹ M to 10 ⁻¹³ M). In one embodiment, Kd is measured by a radiolabeled antigen binding assay (RIA). In one embodiment, RIA is performed using the Fab version of the antibody of interest and its antigen. For example, in the presence of a titration series of unlabeled antigen, Fab solution to antigen by equilibrating Fab with minimal concentration of ( ¹²⁵ I) -labeled antigen and capturing antigen bound to anti-Fab antibody coated plate The binding affinity is measured (see, for example, Chen, et al., J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999)). To determine assay conditions, MICROTITER® multiwell plates (Thermo Scientific) were coated overnight with 50 mM sodium carbonate (pH 9.6) containing 5 μg / ml capture anti-Fab antibody (Cappel Labs). Then, block with PBS containing 2% (w / v) bovine serum albumin at room temperature (approximately 23 ° C.) for 2-5 hours. In a non-adsorbed plate (Nunc # 269620), 100 pM or 26 pM [ ¹²⁵ I] antigen is mixed with serially diluted Fab of interest (eg, Presta et al., (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599 anti-VEGF). Consistent with antibody, Fab-12 evaluation). The target Fab is then incubated overnight; however, the incubation may take a long time (eg, approximately 65 hours) to confirm that equilibrium has been reached. The mixture is then transferred to a capture plate and incubated at room temperature (eg, 1 hour). The solution is then removed and the plate is washed 8 times with PBS containing 0.1% polysorbate 20 (Tween 20®). When the plate is dry, 150 μl / well of luminescent material (MICROSCINT-20 ^™ ; Packard) is added and the plate is measured for 10 minutes with a TOPCOUNT ^™ γ meter (Packard). The concentration of each Fab that gives 20% or less of maximum binding is selected for use in the competitive binding assay.

別の実施態様によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いるアッセイが、〜１０反応単位（ＲＵ）で固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。一実施態様において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡｃｏｒｅＩｎｃ．）を、提供者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化した。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。速度論の測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ２０^ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（ｓｉｍｐｌｅｏｎｅ−ｔｏ−ｏｎｅＬａｎｇｍｕｉｒｂｉｎｄｉｎｇｍｏｄｅｌ）（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出した。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出した。例えば、 Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が１０^６Ｍ−^１ｓ−^１を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計（ｓｔｏｐ−ｆｌｏｗｅｑｕｉｐｐｅｄｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｅｒ）（ＡｖｉｖＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ^ＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中、２５℃の、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。 According to another embodiment, Kd is measured using a BIACORE® surface plasmon resonance assay. For example, an assay using BIACORE®-2000 or BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) is performed at 25 ° C. using an antigen CM5 chip immobilized with 10 reaction units (RU). Will be implemented. In one embodiment, a carboxymethylated dextran biosensor chip (CM5, BIAcore Inc.) is prepared using N-ethyl-N ′-(3-dimethylaminopropyl) -carbodiimide hydrochloride (EDC) and N -Activated with hydroxysuccinimide (NHS). Antigen is diluted to 5 μg / ml (˜0.2 μM) with 10 mM sodium acetate (pH 4.8) and injected at a flow rate of 5 μl / min so that the reaction units (RU) of the bound protein is approximately 10. After the injection of antigen, 1M ethanolamine was injected to block the unreacted group. For kinetic measurements, a two-fold serial dilution of Fab (0.78 nM to 500 nM) was added to a 0.05% polysorbate 20 (TWEEN20 ^™ ) surfactant at a flow rate of approximately 25 μl / min at 25 ° C. PBS in PBS). Using a simple one-to-one Langmuir binding model (BIACORE® Evaluation software version 3.2) by simultaneously fitting the association and dissociation sensorgrams, ) And dissociation rate (koff). The equilibrium dissociation constant (Kd) was calculated as the koff / kon ratio. See, for example, Chen et al., J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999). If the binding rate by the surface plasmon resonance assay is greater than 10 ⁶ M- ¹ s- ¹ , a spectrometer such as a stop-flow equipped spectrophotometer (Aviv Instruments) or a stirred cuvette with a flow stop 20 nM anti-antigen antibody (Fab type) at 25 ° C. in PBS (pH 7.2) in the presence of increasing concentrations of antigen as measured with an 8000 series SLM-AMINCO ^™ spectrophotometer (ThermoSpectronic) equipped with The rate of binding can be measured using a fluorescence quenching technique that measures the increase or decrease in fluorescence emission intensity (excitation = 295 nm; emission = 340 nm, bandpass = 16 nm).

２．抗体断片
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。 2. Antibody Fragments In certain embodiments, the antibodies provided herein are antibody fragments. Antibody fragments include, but are not limited to, Fab, Fab ′, Fab′-SH, F (ab ′) ₂ , Fv, and scFv fragments, and other fragments described below. For a review of certain antibody fragments, see Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003). For a review of scFv fragments, see, for example, Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); See also WO 93/16185; and US Pat. Nos. 5,571,894 and 5,587,458. See US Pat. No. 5,869,046 for a discussion of Fab and F (ab ′) ₂ fragments containing salvage receptor binding epitope residues and having increased in vivo half-life.

ダイアボディは２価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまた Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。 A diabody is an antibody fragment having two antigen binding sites that can be bivalent or bispecific. For example, European Patent No. 404097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003); and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 : See 6444-6448 (1993). Triabodies and tetrabodies are also described in Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003).

単一ドメイン抗体は、抗体の、重鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。所定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６号（Ｂ１）を参照）。 Single domain antibodies are antibody fragments comprising all or part of a heavy chain variable domain, or antibody fragments comprising all or part of a light chain variable domain. In certain embodiments, the single domain antibody is a human single domain antibody (Domantis, Inc., Waltham, MA; see, eg, US Pat. No. 6,248,516 (B1)).

抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。 Antibody fragments can be generated by a variety of techniques, including, but not limited to, intact antibody degradation, as well as production by recombinant host cells (eg, E. coli or phage), as described herein.

３．キメラ及びヒト化抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。 3. Chimeric and humanized antibodies In certain embodiments, the antibodies provided herein are chimeric antibodies. Certain chimeric antibodies are described, for example, in US Pat. No. 4,816,567; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)). In one example, a chimeric antibody comprises a non-human variable region (eg, a variable region derived from a non-human primate such as a mouse, rat, hamster, rabbit, or monkey) and a human constant region. In a further example, a chimeric antibody is a “class switch” antibody in which the class or subclass has been changed from that of the parent antibody. A chimeric antibody comprises an antigen-binding fragment thereof.

ある実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。幾つかの実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、抗体特異性又は親和性を回復もしくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。 In certain embodiments, the chimeric antibody is a humanized antibody. Typically, non-human antibodies are humanized while retaining the specificity and affinity of the parent non-human antibody to reduce immunogenicity to humans. In general, a humanized antibody comprises one or more variable domains in which the HVR, eg, CDR (or portion thereof) is derived from a non-human antibody and FR (or portion thereof) is derived from a human antibody sequence. A humanized antibody optionally also will comprise at least a portion of a human constant region. In some embodiments, some FR residues of the humanized antibody correspond to those derived from a non-human antibody (eg, the antibody from which the HVR residue is derived) to restore or improve antibody specificity or affinity. Substituted with a residue.

ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、 Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号及び第７０８７４０９号；Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記述）；Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) （「リサーフェシング」を記述）； Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) （「ＦＲシャッフリング」を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) （ＦＲのシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。 Humanized antibodies and methods for their production are reviewed, for example, in Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008), and further Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988); Queen USA et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989); U.S. Pat. Nos. 5,821,337, 75277791, 6,982,321 and 7087409; Kashmiri et al., Methods 36:25 -34 (2005) (describing specificity determining region (SDR) grafting); Padlan, Mol. Immunol. 28: 489-498 (1991) (describing "resurfacing"); Dall'Acqua et al., Methods 36 : 43-60 (2005) (describing “FR shuffling”); and Osbourn et al., Methods 36: 61-68 (2005) and Klimka et al., Br. J. Cancer, 83: 252-260 (2000) ) (Describing "guided selection" approach to FR shuffling).

ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)）；軽鎖又は重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992）；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリスクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。 Human framework regions that can be used for humanization include, but are not limited to, framework regions selected using the “best fit” method (eg, Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993)); Framework regions from human antibody consensus sequences of specific subgroups of variable regions of the chain or heavy chain (eg Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992); and Presta et al. J. Immunol., 151: 2623 (1993)); human maturation (somatic mutation) framework region or human germline framework region (eg, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619- 1633 (2008)); and framework regions from FR library screening (eg, Baca et al., J. Biol. Chem. 272: 10678-10684 (1997) and Rosok et al., J. Biol. Chem). 271: 22611-22618 (1996)).

４．ヒト抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で周知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。 4). Human antibodies In certain embodiments, the antibodies provided herein are human antibodies. Human antibodies can be produced using various techniques well known in the art. Human antibodies are generally described in van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) and Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20: 450-459 (2008).

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ^ＴＭ技術を記載している、米国特許第６０７５１８１号及び６１５０５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−ＭＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）を参照。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変される可能性がある。 Human antibodies can be prepared by administering an immunogen to a transgenic animal that has been modified to produce an intact human antibody or an intact antibody having a human variable region in response to an antigen challenge. Such animals typically replace all or one of the human immunoglobulin loci that replace the endogenous immunoglobulin loci or are either extrachromosomal or randomly integrated into the animal's chromosome. Part. In such transgenic mice, the endogenous immunoglobulin locus is generally inactivated. For a review of methods for obtaining human antibodies from transgenic animals, see Lonberg, Nat. Biotech. 23: 1117-1125 (2005). Also described are, for example, US Pat. Nos. 6,075,181 and 6,150,584 describing XENOMOUSE ^™ technology; US Pat. No. 5,770,429, describing HuMab® technology; and K-M MOUSE® technology. U.S. Pat. No. 7,041,870 and U.S. Patent Application Publication No. 2007/0061900 describing the VelociMouse® technology. Intact antibody-derived human variable regions produced in such animals may be further modified, for example, by combining with different human constant regions.

ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Hist. & Histopath., 20(3):927-937 (2005)及びVollmers and Brandlein, Methods Find Exp. Clin. Pharmacol., 27(3):185-91 (2005)に記載される。 Human antibodies can be made by hybridoma-based methods. Human myeloma and mouse-human heterocell lines have been described for the production of human monoclonal antibodies. (Eg, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); and Boerner et al. ., J. Immunol., 147: 86 (1991)). Human antibodies generated via human B cell hybridoma technology are also described in Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103: 3557-3562 (2006). Further methods are described, for example, in US Pat. No. 7,189,826 (which describes production of monoclonal human IgM antibodies from hybridoma cell lines) and Ni, Xiandai Mianyixue, 26 (4): 265-268 (2006) (human- In which human hybridomas are described). Human hybridoma technology (trioma technology) is also described by Vollmers and Brandlein, Hist. & Histopath., 20 (3): 927-937 (2005) and Vollmers and Brandlein, Methods Find Exp. Clin. Pharmacol., 27 (3): 185-91 (2005).

ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に説明する。 Human antibodies can also be generated by isolating selected Fv clone variable domain sequences from human-derived phage display libraries. Such variable domain sequences may then be combined with the desired human constant domain. Techniques for selecting human antibodies from antibody libraries are described below.

５．ライブラリー由来の抗体
抗体は、所望の活性又は活性（複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. Methods Mol. Biol. 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) and further described, e.g., in the McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods Mol. Biol. 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。 5. Antibodies from libraries Antibodies can be isolated by screening combinatorial libraries for antibodies having the desired activity or activities. For example, various methods are known in the art for generating phage display libraries and screening libraries for antibodies with the desired binding properties. Such methods are described, for example, by Hoogenboom et al. Methods Mol. Biol. 178: 1-37 (O'Brien et al., Ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) and further described, eg, in the McCafferty et al., Nature 348: 552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury , Methods Mol. Biol. 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338 (2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340 (5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (34): 12467-12472 (2004); and Lee et al. , J. Immunol. Methods 284 (1-2): 119-132 (2004).

所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、又はＦａｂ断片の何れかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に高親和性抗体を提供する。代わりに、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーが、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の非再配列Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０を含む。 In a given phage display method, repertoires of VH and VL genes are individually cloned by polymerase chain reaction (PCR) and recombined randomly into a phage library, after which Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994) can be screened for antigen-binding phages. Phages usually present antibody fragments as either single chain Fv (scFv) fragments or Fab fragments. Libraries from immunized sources provide high affinity antibodies to the immunogen without the need to construct hybridomas. Instead, as described in Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993), the naïve repertoire is directed against a wide range of non-self and self antigens without any immunization. Can be cloned (eg, from humans) to provide a single source of antibody. Finally, the naïve library also encodes a highly variable CDR3 region as described in Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992) and can be reconstituted in vitro. To achieve, non-rearranged V gene segments derived from stem cells can be cloned and synthesized by using PCR primers containing random sequences. Patent publications describing human antibody phage libraries include, for example, US Pat. No. 5,750,373 and US Patent Application Publication Nos. 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007 / 0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 and 2009/0002360.

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書でヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。 An antibody or antibody fragment isolated from a human antibody library is considered herein a human antibody or a fragment of a human antibody.

６．多重特異性抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施態様において、結合特異性の一つは、例えば、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）のような、目的のポリペプチドであり、他方は任意の他の抗原に対するものである。ある実施態様において、二重特異性抗体は、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）のような目的のポリペプチドを発現する細胞に細胞傷害性薬物を局在化するために使用することができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。 6). Multispecific antibodies In certain embodiments, the antibodies provided herein are multispecific antibodies, eg, bispecific antibodies. Multispecific antibodies are monoclonal antibodies that have binding specificities for at least two different sites. In certain embodiments, one of the binding specificities is a polypeptide of interest, such as, for example, ALDH and / or a tyrosine kinase (eg, a receptor tyrosine kinase) and the other is to any other antigen. is there. In certain embodiments, bispecific antibodies may bind to two different epitopes of a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinase (eg, receptor tyrosine kinase). Bispecific antibodies can also be used to localize cytotoxic drugs to cells that express the polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinases (eg, receptor tyrosine kinases). . Bispecific antibodies can be prepared as full length antibodies or antibody fragments.

多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)）、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブインホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４号（Ａ１））；２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；２重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体フラグメントを作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。 Techniques for making multispecific antibodies include, but are not limited to, recombinant co-expression of two immunoglobulin heavy chain-light chain pairs with different specificities (Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829 and Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)) and “knob-in-hole” engineering (see, eg, US Pat. No. 5,731,168). )including. Multispecific antibodies also manipulate the electrostatic steering effect to create Fc-heterodimeric molecules of antibodies (WO 2009/089004 (A1)); bridge two or more antibodies or fragments (See, eg, US Pat. No. 4,676,980 and Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); using leucine zippers to generate bispecific antibodies (eg, Kostelny et al. , J. Immunol., 148 (5): 1547-1553 (1992)); using “diabody” technology to generate bispecific antibody fragments (see, for example, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)); using single chain Fv (sFv) dimers (see, eg, Gruber et al., J. Immunol., 152: 5368 ( 1994)); and, for example, as described in Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991) It can be made by preparing a specific antibody.

「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号（Ａ１）を参照）。 Also included herein are modified antibodies with more than two functional antigen binding sites, including “Octopus antibodies” (see, eg, US Patent Application Publication No. 2006/0025576 (A1)).

本明細書中の抗体又は断片はまた、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）並びにその他の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（ＤｕａｌＡｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）。 An antibody or fragment herein also includes a “Dual Acting FAb” comprising an antigen binding site that binds ALDH and / or tyrosine kinases (eg, receptor tyrosine kinases) and other different antigens. Includes “DAF” (see, eg, US Patent Application Publication No. 2008/0069820).

７．抗体変異体
ａ）グリコシル化変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、一以上のグリコシル化部位が作成又は削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。 7). Antibody Variants a) Glycosylation Variants In certain embodiments, the antibodies provided herein are modified to increase or decrease the extent to which the antibody is glycosylated. Addition or deletion of glycosylation sites to the antibody can be conveniently accomplished by altering the amino acid sequence such that one or more glycosylation sites are created or deleted.

抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は、一定の改善された特性を有する抗体変異体を作成するために行われ得る。 If the antibody contains an Fc region, the sugar attached to it can be changed. Natural-type antibodies produced by mammalian cells typically contain branched, bi-branched oligosaccharides that are commonly attached by N-linkage to Asn297 in the CH2 domain of the Fc region. See, for example, Wright et al. TIBTECH 15: 26-32 (1997). Oligosaccharides can include various carbohydrates, such as mannose, N-acetylglucosamine (GlcNAc), galactose, sialic acid, and fucose linked to a “trunk” GlcNAc of a biantennary oligosaccharide structure. In some embodiments, modification of the oligosaccharides in the antibodies of the invention can be made to create antibody variants with certain improved properties.

一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指し、しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流又は下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Presta, L.）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；国際公開第２００３／０８４５７０号；国際公開第２００５／０３５５８６号；国際公開第２００５／０３５７７８号；国際公開第２００５／０５３７４２号；国際公開第２００２／０３１１４０号；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。フコース非修飾抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ａ１）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２号（Ａ１）、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。 In one embodiment, antibody variants are provided having a carbohydrate structure lacking fucose attached (directly or indirectly) to the Fc region. For example, the fucose amount of such antibodies can be 1% to 80%, 1% to 65%, 5% to 65%, or 20% to 40%. The amount of fucose is the sum of all sugar structures attached to Asn297 as measured by MALDI-TOF mass spectrometry, eg as described in WO 2008/077546 (eg complex, hybrid And high mannose structure) by calculating the average amount of fucose in the sugar chain of Asn297. Asn297 refers to the asparagine residue located at approximately position 297 in the Fc region (EU numbering of Fc region residues), but Asn297 is also approximately ± 3 amino acids upstream or downstream of position 297, ie, the antibody. Due to minor sequence variations, it can be placed between positions 294 and 300. Such fucosylated mutants may have improved ADCC function. For example, see US Patent Application Publication No. 2003/0157108 (Presta, L.); US Patent Application Publication No. 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.). Examples of publications related to “non-fucose” or “fucose-deficient” antibody variants include US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US Patent Application Publication No. 2003/0115614; US Patent Application Publication No. 2002/0164328; US Patent Application Publication No. 2004/0093621; US Patent Application Publication No. 2004/0132140; US Patent Application Publication No. 2004/0110704; U.S. Patent Application Publication No. 2004/0110282; U.S. Patent Application Publication No. 2004/0109865; International Publication No. 2003/085119; International Publication No. 2003/084570; International Publication No. 2005/035586; International Publication No. 2005/035778. International release 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004) It is. Examples of cell lines capable of producing unfucose-modified antibodies include Lec13 CHO cells deficient in protein fucosylation (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986); US Patents) Application Publication No. 2003/0157108 (A1), Presta, L; and International Publication No. 2004/056312 (A1), Adams et al., In particular Example 11), and knockout cell lines, alpha-1, 6-fucosyltransferase genes , FUT8, knockout CHO cells (eg Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94 (4): 680-688 (2006) And International Publication No. WO2003 / 085107).

抗体変異体は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖を更に備えている。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。 The antibody variant further comprises, for example, a bisected oligosaccharide in which a biantennary oligosaccharide bound to the Fc region of the antibody is bisected by GlcNAc. Such antibody variants may reduce fucosylation and / or improve ADCC function. Examples of such antibody variants are, for example, WO 2003/011878 (Jean-Mairett et al.); US Pat. No. 6,602,684 (Umana et al.); And US Patent Application Publication No. 2005/0123546 (Umana et al.). It is described in. Antibody variants are also provided that have at least one galactose residue within the oligosaccharide attached to the Fc region. Such antibody variants may have improved CDC function. Such antibody variants are, for example, WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); and WO 1999/22764 (Raju, S.). It is described in.

ｂ）Ｆｃ領域変異体
ある実施態様において、１つ又は複数のアミノ酸改変を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、１つ又は複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。 b) Fc region variants In certain embodiments, one or more amino acid modifications can be introduced into the Fc region of an antibody provided herein, thereby generating an Fc region variant. An Fc region variant may comprise a sequence of a human Fc region (eg, a human IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 Fc region) comprising an amino acid modification (eg, substitution) at one or more amino acid positions.

ある実施態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）が不要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；第５８２１３３７号（例えば、Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に説明される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ^ＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は更に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al., PNAS (USA) 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood101:1045-1052 (2003)；及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定はまた、当該分野で周知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。 In certain embodiments, the present invention makes it a desirable candidate for applications where the half-life of the antibody in vivo is important but certain effector functions (such as complement and ADCC) are unnecessary or harmful. Antibody variants with some but not all effector functions are contemplated. In vitro and / or in vivo cytotoxicity assays can be performed to confirm the reduction / depletion of CDC activity and / or ADCC activity. For example, an Fc receptor (FcR) binding assay can be performed to confirm that an antibody lacks FcγR binding (and therefore probably lacks ADCC activity) but retains FcRn binding ability. The primary cells that mediate ADCC, NK cells, express FcγRIII only, whereas monocytes express FcγRI, FcγRII and FcγRIII. FcR expression in hematopoietic cells is summarized in Table 3 on page 464 of Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991). Non-limiting examples of in vitro assays for assessing ADCC activity of molecules of interest include US Pat. No. 5,500,362 (eg, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83: 7059- 7063 (1986)) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985); 5821337 (eg, Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987)). Alternatively, non-radioactive assays can be used (eg, ACTI ^™ non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; and CytoTox 96® non-radioactive cytotoxicity assay ( Promega, Madison, WI) Useful effector cells for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer (NK) cells, or in addition, the ADCC activity of the molecule of interest. , Clynes et al., PNAS (USA) 95: 652-656 (1998), can be assessed in vivo, for example in animal models, C1q binding assays can also be used to bind antibodies to body C1q. Inability to do so, thus lacking CDC activity See, for example, the C1q and C3c binding ELISA of WO 2006/029879 and WO 2005/100402, CDC assay to assess complement activation. (Eg Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996); Cragg, MS et al., Blood 101: 1045-1052 (2003); and Cragg, MS and MJ Glennie, Blood 103: 2738-2743 (2004)) FcRn binding and in vivo clearance / half-life measurements can also be performed using methods well known in the art (eg, Petkova, SB et al. ., Int'l. Immunol. 18 (12): 1759-1769 (2006)).

エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。 Antibodies with reduced effector function include those having one or more substitutions of residues 238, 265, 269, 270, 297, 327, 329 of the Fc region (US Pat. No. 6,737,056). Such Fc variants have substitutions at two or more of amino acid positions 265, 269, 270, 297 and 327, including so-called “DANA” Fc variants with substitutions of residues 265 and 297 to alanine. Fc variants are included (US Pat. No. 7,332,581).

ＦｃＲへの改善又は減少させた結合を持つ特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。所定の実施態様において、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する一又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。幾つかの実施態様において、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされ、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に説明される。 Specific antibody variants with improved or reduced binding to FcR have been described. (See, eg, US Pat. No. 6,737,056; WO 2004/056312 and Shields et al., J. Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001)). In certain embodiments, the antibody variant comprises one or more amino acid substitutions that improve ADCC, eg, substitutions at positions 298, 333, and / or 334 of the Fc region (EU residue numbering). In some embodiments, alterations in the Fc region are made that result in altered (ie improved or reduced) C1q binding and / or complement dependent cytotoxicity (CDC), eg, US Pat. No. 6,194,551, W099 / 51642 and Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ａ１）（Hinton et al.）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一以上の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の一以上の置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７３７１８２６号）。Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。 Antibodies with improved binding to the neonatal Fc receptor (FcRn) with increased half-life and responsible for the transfer of maternal IgG to the fetus (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)) is described in US Patent Application Publication No. 2005/0014934 (A1) (Hinton et al.). These antibodies comprise an Fc region with one or more substitutions that improve binding of the Fc region to FcRn. Such Fc variants include residues in the Fc region: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 or 434 one or more substitutions are included, eg, those having residue 434 substitution in the Fc region (US Pat. No. 7,371,826). See also Duncan & Winter, Nature 322: 738-40 (1988); US Pat. No. 5,648,260; US Pat. No. 5,624,821; and WO 94/29351 for other examples of Fc region variants. .

ｃ）システイン操作抗体変異体
ある実施態様において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ（複数）」を作成することが望まれ得る。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で存在する。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中で更に記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分又はリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。ある実施態様において、一以上の以下の残基がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。 c) Cysteine engineered antibody variants In certain embodiments, it may be desirable to create a cysteine engineered antibody, eg, “thioMAb (s)”, in which one or more residues of the antibody are replaced with cysteine residues. . In certain embodiments, the substituted residue is present at an accessible site of the antibody. By substituting those residues with cysteine, the reactive thiol group is thereby positioned at an accessible site of the antibody to create an immunoconjugate as further described herein. Can be used to conjugate the antibody to other moieties such as, for example, drug moieties or linker-drug moieties. In certain embodiments, one or more of the following residues may be substituted with cysteine: light chain V205 (Kabat numbering); heavy chain A118 (EU numbering); and heavy chain Fc region S400 (EU number). Date). Cysteine engineered antibodies can be generated, for example, as described in US Pat. No. 7,521,541.

Ｂ．イムノコンジュゲート
更に本明細書において提供されるのは、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドに結合する抗体を含むイムノコンジュゲート、又は、化学療法剤又は薬物、増殖阻害薬、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素、又はその断片）などの一以上の細胞傷害性薬物、又は本明細書に記載される方法において使用のための放射性同位体にコンジュゲートし、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドに結合する抗体を含むイムノコンジュゲートである。 B. Immunoconjugate Further provided herein is an immunoconjugate comprising an antibody that binds to a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinase (eg, receptor tyrosine kinase), or a chemotherapeutic agent or One or more cytotoxic drugs, such as drugs, growth inhibitors, toxins (eg, protein toxins, enzymatically active toxins of bacterial, fungal, plant, or animal origin, or fragments thereof), or as described herein An immunoconjugate comprising an antibody that is conjugated to a radioisotope for use in a method and binds to a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinase (eg, receptor tyrosine kinase).

一実施態様において、イムノコンジュゲートは、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、そこでは抗体は、限定されないが、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０４２５２３５（Ｂ１）を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号及び５７８０５８８号及び７４９８２９８号を参照）などのアウリスタチン；ドラスタチン、カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、５７１４５８６号、５７３９１１６号、５７６７２８５号、５７７０７０１号、５７７０７１０号、５７７３００１号、及び５８７７２９６号を参照；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998))；ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及び米国特許第６６３０５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む一つ以上の薬物とコンジュゲートしている。 In one embodiment, the immunoconjugate is an antibody-drug conjugate (ADC), wherein the antibody is not limited to maytansinoids (US Pat. Nos. 5,208,020, 5,416,643 and European Patent EP0 425235). B1)); auristatins such as monomethyl auristatin drug moieties DE and DF (MMAE and MMAF) (see US Pat. Nos. 5,635,483 and 5,780,588 and 7498298); dolastatin, calicheamicin or derivatives thereof (US patent) See 571374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001, and 5877296; Hinman et al., Cancer Res. 53: 3336-3342 (1993); and Lode et al. , Cancer Res. 58: 2925 -2928 (1998)); anthracyclines such as daunomycin or doxorubicin (Kratz et al., Current Med. Chem. 13: 477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16: 358- 362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16: 717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 829-834 (2000); Dubowchik et al. , Bioorg. & Med. Chem. Letters 12: 1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45: 4336-4343 (2002); and US Pat. No. 6,630,579); methotrexate; Conjugated with one or more drugs including vindesine; taxanes such as docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel, and ortataxel; trichothecene; and CC1065.

その他の実施態様において、イムノコンジュゲートは、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートした、本明細書に記載の抗体を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が含まれる。 In other embodiments, immunoconjugates include, but are not limited to, antibodies described herein conjugated to enzymatically active toxins or fragments thereof, diphtheria A chain, non-binding active fragment of diphtheria toxin. , Exotoxin A chain (from Pseudomonas aeruginosa), ricin A chain, abrin A chain, modeccin A chain, alpha-sarcin, Aleurites fordii protein, dianthin protein, phytraca americana (Phytolaca americana) protein (PAPI, PAPII, and PAP-S), momordica charantia inhibitor, crucin, crotin, sapao Rear Officinalis (sapaonaria oficinalis) inhibitor, gelonin (gelonin), mitogellin (mitogellin), restrictocin (restrictocin), phenol mycin (phenomycin), include Enomaishin (enomycin) and trichothecenes (tricothecenes).

その他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートした本明細書に記載されるような抗体を含む。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産のために入手可能である。例としては、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２及びＬｕの放射性同位体を含む。放射性コンジュゲートが検出に使用される場合、それはシンチグラフィー研究用の放射性原子、例えばＴｃ^９９ｍ又はＩ^１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）映像（磁気共鳴映像、ＭＲＩとしても周知）用のスピン標識、例えばヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含有し得る。 In other embodiments, the immunoconjugate comprises an antibody as described herein conjugated to a radioactive atom to form a radioconjugate. A variety of radioisotopes are available for the production of radioconjugates. Examples include the radioisotopes of At ²¹¹ , I ¹³¹ , I ¹²⁵ , Y ⁹⁰ , Re ¹⁸⁶ , Re ¹⁸⁸ , Sm ¹⁵³ , Bi ²¹² , P ³² , Pb ²¹² and Lu. If a radioconjugate is used for detection, it may be a radioactive atom for scintigraphic studies, such as Tc ^99m or I ¹²³ , or a spin label for nuclear magnetic resonance (NMR) imaging (also known as magnetic resonance imaging, MRI), For example, iodine-123, iodine-131, indium-111, fluorine-19, carbon-13, nitrogen-15, oxygen-17, gadolinium, manganese or iron may be contained.

抗体と細胞傷害性薬物のコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などを使って作成され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載されているように調製することができる。カーボン−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞中に細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。 Conjugates of antibodies and cytotoxic drugs are available in various bifunctional protein coupling agents such as N-succinimidyl 3- (2-pyridylthio) propionate (SPDP), succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1 Carboxylates (SMCC), iminothiolanes (IT), bifunctional derivatives of imide esters (eg dimethyl adipimidate HCl), active esters (eg disuccinimidylsbelate), aldehydes (eg glutaraldehyde), bis- Azide compounds (eg bis (p-azidobenzoyl) hexanediamine), bisdiazonium derivatives (eg bis (p-diazoniumbenzoyl) ethylenediamine), diisocyanates (eg toluene 2,6-diisocyanate) and bisactive Fluorine compounds (such as 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene) using, for example, can be created. For example, a ricin immunotoxin can be prepared as described in Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987). Carbon-14-labeled 1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylenetriaminepentaacetic acid (MX-DTPA) is an example of a chelating agent for conjugation of radionucleotide to an antibody. See WO94 / 11026. The linker may be a “cleavable linker” that facilitates release of the cytotoxic drug into the cell. For example, acid labile linkers, peptidase-sensitive linkers, photolabile linkers, dimethyl linkers or disulfide-containing linkers (Chari et al., Cancer Res. 52: 127-131 (1992); US Pat. No. 5,208,020) Can be used.

本明細書において、イムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販の（例えばＰｉｅｒｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａからの）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを明示的に意図する。 As used herein, immunoconjugates or ADCs include, but are not limited to, commercially available (eg, from Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., USA), BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC- SMCC, MBS MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, Sulfo-EMCS, Sulfo-GMBS, Sulfo-KMUS, Sulfo-MBS, Sulfo-SIAB, Sulfo-SMPB, and Sulfo-SMPB, SVSB (Succinimidyl ( Conjugates prepared with a crosslinker reagent comprising 4-vinylsulfone) benzoate) are explicitly contemplated.

Ｃ．結合ポリペプチド
結合ポリペプチドは、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）など、目的のポリペプチドに、好ましくは特異的に結合するポリペプチドであり、本明細書に記載されるように、本明細書に記載される方法における使用のために提供される。幾つかの実施態様において、結合ポリペプチドは、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドのアンタゴニストである。 C. Binding polypeptide A binding polypeptide is a polypeptide that preferably specifically binds to a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinases (eg, receptor tyrosine kinases), as described herein. Are provided for use in the methods described herein. In some embodiments, the binding polypeptide is an antagonist of a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinase (eg, receptor tyrosine kinase).

結合ポリペプチドは既知のオリゴペプチド合成手法を用いて化学的に合成することができるか、又は組換え技術を用いて調製され、精製することができる。結合ポリペプチドは、通常長さが少なくとも５個のアミノ酸であり、あるいは長さが少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００アミノ酸かそれ以上であり、そのポリペプチドは、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドに、好ましくは、特異的に結合することが可能である。 The binding polypeptide can be chemically synthesized using known oligopeptide synthesis techniques, or can be prepared and purified using recombinant techniques. The binding polypeptide is usually at least 5 amino acids in length, or at least about 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 in length. 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 95, 96, 97, 98, 99, or 100 amino acids Or more, the polypeptide, ALDH and / or tyrosine kinases (e.g., receptor tyrosine kinases) to the polypeptide of interest, such as, preferably, capable of specifically binding.

結合ポリペプチドは、周知の技術を用いて過度の実験なしに同定することができる。この点に関して、標的ポリペプチドに結合することができる結合ポリペプチドについてポリペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術が、当技術分野において周知であることが留意される（例えば、米国特許第５５５６７６２号、第５７５０３７３号、第４７０８８７１号、第４８３３０９２号、第５２２３４０９号、第５４０３４８４号、第５５７１６８９号、第５６６３１４３号；ＰＣＴ公開番号国際公開第８４／０３５０６号及び国際公開第８４／０３５６４号；Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985); Geysen et al., in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986); Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987); Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla, S. E. et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378; Lowman, H.B. et al. (1991) Biochemistry, 30:10832; Clackson, T. et al. (1991) Nature, 352: 624; Marks, J. D. et al. (1991), J. Mol. Biol., 222:581; Kang, A.S. et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363, 及びSmith, G. P. (1991) Current Opin. Biotechnol., 2:668を参照）。ペプチドライブラリーを作製し、これらのライブラリーをスクリーニングする方法もまた、米国特許第５７２３２８６号、第５４３２０１８号、第５５８０７１７号、第５４２７９０８号、第５４９８５３０号、第５７７０４３４号、第５７３４０１８号、第５６９８４２６号、第５７６３１９２号、及び第５７２３３２３号に開示されている。 Binding polypeptides can be identified without undue experimentation using well-known techniques. In this regard, it is noted that techniques for screening polypeptide libraries for binding polypeptides that can bind to a target polypeptide are well known in the art (eg, US Pat. No. 5,556,762, No. No. 5750373, No. 4,708,871, No. 4833092, No. 5,223,409, No. 5,403,484, No. 5,571,689, No. 5663143; PCT Publication Nos. WO 84/03506 and WO 84/03564; Geysen et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 3998-4002 (1984); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 178-182 (1985); Geysen et al., In Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986); Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102: 259-274 (1987); Schoofs et al., J. Immunol., 140: 611-616 (1988) ), Cwirla, SE et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sc i. USA, 87: 6378; Lowman, HB et al. (1991) Biochemistry, 30: 10832; Clackson, T. et al. (1991) Nature, 352: 624; Marks, JD et al. (1991), J Mol. Biol., 222: 581; Kang, AS et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 8363, and Smith, GP (1991) Current Opin. Biotechnol., 2: 668. reference). Methods for generating peptide libraries and screening these libraries are also described in U.S. Pat. No. 5,763,192 and No. 5,723,323.

Ｄ．結合小分子
本明細書において提供されるのは、小分子ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、そのジスルフィラム及び／又はその誘導体）として使用のための結合小分子、及び／又は上述された方法において使用のための小分子の標的化治療薬（例えば、小分子ＴＫＩ（例えば、小分子ＲＴＫＩ））である。 D. Binding Small Molecules Provided herein are binding small molecules for use as small molecule ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and / or for use in the methods described above. Small molecule targeted therapeutics (eg, small molecule TKI (eg, small molecule RTKI)).

結合小分子は、好ましくは、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドに、好ましくは特異的に結合する本明細書に定義される結合ポリペプチド又は抗体以外の有機分子である。結合有機小分子が同定され、既知の方法論を用いて化学的に合成することができる（例えば、ＰＣＴ公開番号国際公開第００／００８２３号及び国際公開第００／３９５８５号を参照）。結合有機小分子は、通常約２０００ダルトン未満の大きさであり、あるいは、約１５００、約７５０、約５００、約２５０又は約２００ダルトンより小さい大きさであって、本明細書に記載されるように、好ましくは特異的にポリペプチドに結合することができるそうした有機小分子は、周知の技術を用いて過度の実験なしに同定することができる。この点に関して、目的のポリペプチドに結合することができる分子について、有機小分子ライブラリーをスクリーニングするための技術は、当技術分野において周知であることが特記される（例えば、ＰＣＴ公開番号国際公開第００／００８２３号及び国際公開第００／３９５８５号を参照）。結合有機小分子は、例えば、アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、第一アミン、第二級アミン、第３級アミン、Ｎ−置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバメート、カーボネート、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、ハロゲン化アリール、アリールスルホン酸塩、アルキルハライド、アルキルスルホン酸塩、芳香族化合物、複素環化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアネート、塩化スルホニル、ジアゾ化合物、酸塩化物等であり得る。 The binding small molecule is preferably other than a binding polypeptide or antibody as defined herein that preferably specifically binds to a polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinase (eg, receptor tyrosine kinase). Is an organic molecule. Bound organic small molecules can be identified and chemically synthesized using known methodologies (see, eg, PCT Publication Nos. WO 00/00823 and WO 00/39585). The bound organic small molecule is usually less than about 2000 Daltons, or less than about 1500, about 750, about 500, about 250, or about 200 Daltons, as described herein. In addition, such small organic molecules that are capable of specifically binding to a polypeptide can be identified without undue experimentation using well-known techniques. In this regard, it is noted that techniques for screening small organic molecule libraries for molecules that can bind to a polypeptide of interest are well known in the art (eg, PCT Publication Number International Publication No. No. 00/00823 and WO 00/39585). Bound organic small molecules include, for example, aldehydes, ketones, oximes, hydrazones, semicarbazones, carbazides, primary amines, secondary amines, tertiary amines, N-substituted hydrazines, hydrazides, alcohols, ethers, thiols, thioethers, disulfides. , Carboxylic acid, ester, amide, urea, carbamate, carbonate, ketal, thioketal, acetal, thioacetal, aryl halide, aryl sulfonate, alkyl halide, alkyl sulfonate, aromatic compound, heterocyclic compound, aniline, Alkenes, alkynes, diols, amino alcohols, oxazolidines, oxazolines, thiazolidines, thiazolines, enamines, sulfonamides, epoxides, aziridines, isocyanates, sulfonyl chlorides, diazo compounds, acids It may be a monster, and the like.

Ｅ．アンタゴニストポリヌクレオチド
また、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される方法において使用のためのポリヌクレオチドアンタゴニストである。ポリヌクレオチドは、アンチセンス核酸及び／又はリボザイムであってもよい。アンチセンス核酸は、ＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的の遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部に相補的な配列を含む。しかし、絶対的な相補性は、好ましいものの、要求されない。 E. Antagonist Polynucleotides Also provided herein are polynucleotide antagonists for use in the methods described herein. The polynucleotide may be an antisense nucleic acid and / or a ribozyme. An antisense nucleic acid comprises a sequence that is complementary to at least a portion of an RNA transcript of a gene of interest, such as ALDH and / or a tyrosine kinase (eg, a receptor tyrosine kinase). However, absolute complementarity is preferred but not required.

本明細書で言及される「ＲＮＡの少なくとも一部分に相補的」配列は、ＲＮＡとハイブリダイズし安定な二重鎖を形成することができるために十分な相補性を有する配列を意味し；二本鎖アンチセンス核酸の場合、二重鎖ＤＮＡの一本鎖が試験されることができ、又は三重らせんの形成をアッセイすることができる。ハイブリダイズする能力はアンチセンス核酸の相補性の程度及び長さの両方に依存する。一般的に、ハイブリダイズする核酸が大きいほど、それが含み得るＲＮＡとの塩基のミスマッチが多く、それでも安定な二重鎖（又は場合によっては三重鎖）を形成する。当業者は、ハイブリダイズした複合体の融点を決定するための標準的な手順の使用によって、ミスマッチの許容程度を確認することができる。 As used herein, a sequence “complementary to at least a portion of RNA” means a sequence having sufficient complementarity to be able to hybridize to RNA and form a stable duplex; In the case of a strand antisense nucleic acid, a single strand of double stranded DNA can be tested, or triple helix formation can be assayed. The ability to hybridize depends on both the degree of complementarity and the length of the antisense nucleic acid. In general, the larger the nucleic acid that hybridizes, the more base mismatches it may contain with RNA and still form a stable duplex (or triplex in some cases). One skilled in the art can ascertain the degree of mismatch tolerance by using standard procedures to determine the melting point of the hybridized complex.

メッセージの５’末端、例えばＡＵＧ開始コドンを含むところまでの５’非翻訳配列に相補的であるポリヌクレオチドは、翻訳を阻害するのに最も効率的に働くはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’非翻訳配列に相補的な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害するのに有効であることが示されている。一般に、Wagner, R., 1994. Nature 372:333-335を参照。従って、遺伝子の５’−又は３’−非翻訳、非コード領域の何れかに相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性のｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチにおいて使用することができる。ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なポリヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補体を含むべきである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスポリヌクレオチドは、翻訳の効率の低い阻害剤であるが、本発明に従って使用することができる。ｍＲＮＡの５’、３’又はコード領域にハイブリダイズするように設計されるかどうかに関わらず、アンチセンス核酸は、長さが少なくとも６ヌクレオチドであるべきで、好ましくは、６から約５０ヌクレオチド長の範囲のオリゴヌクレオチドである。特定の態様において、オリゴヌクレオチドは少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５ヌクレオチド又は少なくとも５０ヌクレオチドである。 A polynucleotide that is complementary to the 5 'end of the message, eg, up to the 5' untranslated sequence up to and including the AUG start codon, should work most efficiently to inhibit translation. However, sequences complementary to the 3 'untranslated sequence of mRNA have also been shown to be effective in inhibiting translation of mRNA. See generally Wagner, R., 1994. Nature 372: 333-335. Thus, oligonucleotides complementary to either the 5'- or 3'-untranslated, non-coding region of a gene can be used in antisense approaches that inhibit translation of endogenous mRNA. A polynucleotide complementary to the 5 'untranslated region of the mRNA should include the complement of the AUG start codon. Antisense polynucleotides complementary to the mRNA coding region are inhibitors of low translation efficiency, but can be used according to the present invention. Whether designed to hybridize to the 5 ', 3' or coding region of mRNA, antisense nucleic acids should be at least 6 nucleotides in length, preferably 6 to about 50 nucleotides in length. The range of oligonucleotides. In certain embodiments, the oligonucleotide is at least 10 nucleotides, at least 17 nucleotides, at least 25 nucleotides or at least 50 nucleotides.

Ｆ．抗体及び結合ポリペプチド変異体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体及び／又は結合ポリペプチドのアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体及び／又は結合ポリペプチドの結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体及び／又は結合ポリペプチドのアミノ酸配列変異体は、抗体及び／又は結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体及び／又は結合ポリペプチドのアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるために作成され得る。 F. Antibody and Binding Polypeptide Variants In certain embodiments, amino acid sequence variants of the antibodies and / or binding polypeptides provided herein are contemplated. For example, it may be desirable to improve the binding affinity and / or other biological properties of the antibody and / or binding polypeptide. Amino acid sequence variants of the antibody and / or binding polypeptide can be prepared by introducing appropriate modifications into the nucleotide sequence encoding the antibody and / or binding polypeptide, or by peptide synthesis. Such modifications include, for example, residue deletions and / or insertions and / or substitutions within the amino acid sequence of the antibody and / or binding polypeptide. Any combination of deletions, insertions, and substitutions can be made to arrive at the final construct, provided that the final construct has the desired properties, eg, antigen binding.

ある実施態様において、一以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体及び／又は結合ポリペプチド変異体が提供される。置換型変異誘発の対象となる部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、表１の「好適な置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「典型的な置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体及び／又は結合ポリペプチドに導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。

In certain embodiments, antibody variants and / or binding polypeptide variants having one or more amino acid substitutions are provided. Sites targeted for substitutional mutagenesis include HVR and FR. Conservative substitutions are shown under the heading “Suitable substitutions” in Table 1. More substantial changes are given under the heading “Typical substitutions” in Table 1 and are further described below with reference to the amino acid side chain classes. Amino acid substitutions can be introduced into the antibody and / or binding polypeptide of interest, and the product is for the desired activity, eg, retention / improvement of antigen binding, reduced immunogenicity, or improved ADCC or CDC. To be screened.

アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。 Amino acids can be grouped based on common side chain properties:
(1) Hydrophobicity: norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) Neutral hydrophilicity: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) Acidity: Asp, Glu;
(4) Basic: His, Lys, Arg;
(5) Residues affecting chain orientation: Gly, Pro;
(6) Aromatic: Trp, Tyr, Phe.

非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを伴うこととなる。 Non-conservative substitutions will entail exchanging one member of these classes for another.

Ｇ．抗体及び結合ポリペプチド誘導体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体及び／又は結合ポリペプチドは、当技術分野で知られ、容易に入手される追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体及び／又は結合ポリペプチドの誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体及び／又は結合ポリペプチドに結合するポリマーの数は変動してよく、そして、一以上の重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であってよい。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体及び／又は結合ポリペプチドの特定の特性又は機能、抗体誘導体及び／又は結合ポリペプチド誘導体が限定された条件下で治療に使用されるのか等を含む考慮に基づいて決定することができる。 G. Antibodies and Binding Polypeptide Derivatives In certain embodiments, the antibodies and / or binding polypeptides provided herein are further modified to include additional non-protein moieties known in the art and readily available. can do. The moieties suitable for derivatization of the antibody and / or binding polypeptide include, but are not limited to, water soluble polymers. Non-limiting examples of water soluble polymers include, but are not limited to, polyethylene glycol (PEG), ethylene glycol / propylene glycol copolymers, carboxymethyl cellulose, dextran, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, poly-1,3-dioxolane, Poly-1,3,6-trioxane, ethylene / maleic anhydride copolymer, polyamino acid (either homopolymer or random copolymer) and dextran or poly (n-vinylpyrrolidone) polyethylene glycol, propylene glycol alone Polymers, propylene oxide / ethylene oxide copolymers, polyoxyethylated polyols (eg glycerol), polyvinyl alcohol and mixtures thereof. Polyethylene glycol propionaldehyde may have manufacturing advantages due to its stability in water. The polymer can be of any molecular weight and can be branched or unbranched. The number of polymers attached to the antibody and / or binding polypeptide may vary, and if more than one polymer is attached, they may be the same or different molecules. In general, the number and / or type of polymers used for derivatization is not limited, but is limited to specific properties or functions of the antibody and / or binding polypeptide to be improved, antibody derivatives and / or binding polypeptide derivatives. It can be determined based on considerations including whether it is used for treatment under specified conditions.

別の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び／又は結合ポリペプチドと非タンパク質部分とのコンジュゲートが提供される。一実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005）。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体及び／又は結合ポリペプチド−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。 In another embodiment, a conjugate of an antibody and / or binding polypeptide and a non-protein moiety that can be selectively heated by exposure to radiation is provided. In one embodiment, the non-protein moiety is a carbon nanotube (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005). The radiation can be of any wavelength, but is limited. Although not harmed to normal cells, the wavelength of heating the non-protein portion to the temperature at which the proximal cells of the antibody and / or binding polypeptide-non-protein portion are killed is included.

ＩＶ．ＡＬＤＨ阻害剤及び／又は所望の機能を有する標的化治療薬をスクリーニングし及び／又は同定する方法
本明細書において提供される、抗体、結合ポリペプチド、及び／又は結合小分子を含む、本明細書に記載される方法において使用のためのＡＬＤＨ及び／又はチロシンキナーゼ（例えば、受容体チロシンキナーゼ）などの目的のポリペプチドの更なるアンタゴニストは、当技術分野で周知の様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性及び／又は生物学的活性について、同定され、スクリーニングされ、又は特徴づけることができる。 IV. Methods for screening and / or identifying targeted therapeutics having an ALDH inhibitor and / or a desired function, including antibodies, binding polypeptides, and / or binding small molecules provided herein Additional antagonists of the polypeptide of interest, such as ALDH and / or tyrosine kinases (eg, receptor tyrosine kinases) for use in the methods described in the above, can be obtained by various assays well known in the art by their physical properties. Can be identified, screened, or characterized for chemical / chemical properties and / or biological activity.

様々なヒトＡＬＤＨファミリーメンバー（例えば、「アイソザイム」）のアミノ酸配列は、当該分野で周知であり、公的に入手可能である。例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ．ｓｕｂ．−−０００６８０（ＡＬＤＨ１、メンバーＡ１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿０００６８４（ＡＬＤＨ１、メンバーＡ３）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＨ０２９６７及びＮＰ．ｓｕｂ．−−０００６８１（ＡＬＤＨ２）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ．ｓｕｂ．−−００１０２６９７６（ＡＬＤＨ３、メンバーＡ２、アイソフォーム１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡ１３９４９４（ＡＬＤＨ４、メンバーＡ１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ２０２４８（ＡＬＤＨ５、メンバーＡ１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＥＡＷ８１１６０（ＡＬＤＨ６、メンバーＡ１、アイソフォームＣＲＡ＿ｂ）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＨ０２５１５（ＡＬＤＨ７、メンバーＡ１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ．ｓｕｂ．−−０７２０９０（ＡＬＤＨ８、メンバーＡ１，アイソフォーム１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ．ｓｕｂ．−−０００６８７（ＡＬＤＨ９、メンバーＡ１）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＧ４２４１７（ＡＬＤＨ１２）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＧ４２４１７（ＡＬＤＨ１２）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ．ｓｕｂ．−−６９９１６０（ＡＬＤＨ１６）；及びＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＩ１６７６６（ＡＬＤＨ１８、メンバーＡ１）を参照。 The amino acid sequences of various human ALDH family members (eg, “isozymes”) are well known in the art and are publicly available. For example, GenBank accession number NP. sub. --- 000680 (ALDH 1, member A1); GenBank accession number NP_000684 (ALDH 1, member A3); GenBank accession number AAH02967 and NP. sub. --000681 (ALDH 2); GenBank accession number NP. sub. --001026976 (ALDH 3, member A2, isoform 1); GenBank accession number CA139494 (ALDH 4, member A1); GenBank accession number CAA20248 (ALDH 5, member A1); GenBank accession number EAW81160 (ALDH 6, Member A1, isoform CRA_b); GenBank accession number AAH02515 (ALDH 7, member A1); GenBank accession number NP. sub. --- 072090 (ALDH 8, member A1, isoform 1); GenBank accession number NP. sub. --000687 (ALDH 9, member A1); GenBank accession number AAG42417 (ALDH12); GenBank accession number AAG42417 (ALDH12); GenBank accession number NP. sub. -See 699160 (ALDH 16); and GenBank accession number CAI16766 (ALDH 18, member A1).

野生型ＡＬＤＨ２及びＡＬＤＨ２のＣ３０２Ｓ変異体の結晶構造は、当該技術分野で知られており（米国特許第８１２４３８９号）、本明細書に記載される方法及び組成物における使用のためのＡＬＤＨ阻害剤の設計及び調製に使用することができる。 The crystal structures of wild-type ALDH2 and C302S mutants of ALDH2 are known in the art (US Pat. No. 8,124,389) and of ALDH inhibitors for use in the methods and compositions described herein. Can be used for design and preparation.

ある実施態様において、ＡＬＤＨポリペプチドの原子座標を含むメモリを備えたコンピュータシステムは、ＡＬＤＨポリペプチドのリガンド部位に結合する化合物を合理的に同定するためのモデルとして有用である。このような化合物は、新規に、又は、例えば、既知の化合物の改変によるかの何れかで設計され得る。他の例では、結合化合物は、ＡＬＤＨポリペプチドの分子モデルと「ドッキングする」かどうかを決定するために、既知の化合物を試験することにより同定することができる。このようなドッキング方法は、一般に当技術分野において周知である。 In certain embodiments, a computer system with a memory that includes atomic coordinates of an ALDH polypeptide is useful as a model for rationally identifying compounds that bind to a ligand site of an ALDH polypeptide. Such compounds can be designed either new or, for example, by modification of known compounds. In other examples, a binding compound can be identified by testing a known compound to determine whether it “docks” with a molecular model of an ALDH polypeptide. Such docking methods are generally well known in the art.

ＡＬＤＨの結晶構造データは、結晶構造データの分析により、様々なＡＬＤＨ結合化合物の結合のモデルを開発するために、コンピュータ・モデリング技術と組み合わせて使用することができる。その部位モデルは、部位表面の三次元トポグラフィー、並びに、ファンデルワールス接触、静電相互作用、及び水素結合の機会を含む要因を特徴付けている。次いで、コンピュータシミュレーション技術は、限定されないが、そのモデル部位と相互作用するように設計されている、プロトン、ヒドロキシル基、アミン基、二価のカチオン、芳香族及び脂肪族官能基、アミド基、アルコール基などを含む、官能基に対する相互作用位置をマッピングするために使用される。これらの基は、候補化合物がその部位に特異的に結合するであろう期待される、ファーマコフォア又は候補化合物に設計することができる。一般的には、ファーマコフォアは、非共有結合機構によって部位と相互作用するが、ファーマコフォアの設計は、このように、水素結合、ファンデルワールス、静電、及び共有結合相互作用を含む化学的相互作用の利用可能なタイプの何れか又は全てと相互作用するファーマコフォア内に入る候補化合物の能力を考慮することを含む。 ALDH crystal structure data can be used in combination with computer modeling techniques to develop models of binding of various ALDH binding compounds by analysis of crystal structure data. The site model characterizes factors including 3D topography of the site surface, as well as Van der Waals contacts, electrostatic interactions, and opportunities for hydrogen bonding. Computer simulation techniques are then not limited to protons, hydroxyl groups, amine groups, divalent cations, aromatic and aliphatic functional groups, amide groups, alcohols that are designed to interact with the model site. Used to map interaction positions for functional groups, including groups etc. These groups can be designed into pharmacophores or candidate compounds where the candidate compound is expected to bind specifically to that site. In general, pharmacophores interact with sites by non-covalent mechanisms, but pharmacophore designs thus include hydrogen bonding, van der Waals, electrostatic, and covalent interactions Including considering the ability of candidate compounds to fall within the pharmacophore to interact with any or all of the available types of chemical interactions.

ファーマコフォア又はＡＬＤＨポリペプチドに結合する候補化合物の能力は、実際の合成に加えて、コンピュータモデリング技術を使用して分析することができる。コンピュータモデリングにより標的（例えば、ＡＬＤＨポリペプチド結合部位）に対して十分な結合エネルギー（一例では、１０^−２Ｍの桁又はそれより緊密な標的との解離定数に相当する結合エネルギー）で結合することが示される候補のみが、合成され、ＡＬＤＨポリペプチドに結合し、当業者に周知であり及び／又は本明細書に記載される酵素アッセイを使用して、ＡＬＤＨ酵素機能を阻害するそれらの能力について試験され得る。計算評価のステップは、このように、十分な親和性でＡＬＤＨポリペプチドに結合する可能性は低い化合物の不必要な合成を避けている。 The ability of a candidate compound to bind to a pharmacophore or ALDH polypeptide can be analyzed using computer modeling techniques in addition to the actual synthesis. Binding with sufficient binding energy (in one example, a binding energy corresponding to a dissociation constant of the order of 10 ⁻² M or closer) to a target (eg, ALDH polypeptide binding site) by computer modeling Are only synthesized, bind to ALDH polypeptides, and / or their ability to inhibit ALDH enzyme function using enzyme assays well known to those skilled in the art and / or described herein. Can be tested. The computational evaluation step thus avoids unnecessary synthesis of compounds that are unlikely to bind to ALDH polypeptide with sufficient affinity.

ＡＬＤＨのファーマコフォア又は候補化合物は計算的に評価され、化学物質又は断片がスクリーニングされ、ＡＬＤＨポリペプチド上の個々の結合標的部位と会合する能力に対して選択される一連のステップを用いて設計され得る。当業者であれば、ＡＬＤＨポリペプチドと、より具体的には、ＡＬＤＨポリペプチド上の標的部位と会合する能力について、化学物質又は断片をスクリーニングするための複数の方法の何れかを使用することができる。方法は、例えば、ＡＬＤＨポリペプチド座標、又は当技術分野で知られているその座標のサブセットに基づいた、コンピュータスクリーン上の標的部位の目視探索により開始することができる。 ALDH pharmacophores or candidate compounds are computationally evaluated and designed using a series of steps in which chemicals or fragments are screened and selected for their ability to associate with individual binding target sites on the ALDH polypeptide. Can be done. One skilled in the art can use any of a plurality of methods for screening chemicals or fragments for the ability to associate with an ALDH polypeptide, and more specifically with a target site on an ALDH polypeptide. it can. The method can begin with a visual search of a target site on a computer screen based on, for example, ALDH polypeptide coordinates, or a subset of those coordinates known in the art.

がん細胞死の誘導を増強するＡＬＤＨ阻害剤を選択するため、例えば、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）と組み合わせた、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー又は７ＡＡＤの取り込みにより示される膜の完全性の喪失が、参照に対して評価され得る。ＰＩ取り込みは、補体及び免疫エフェクター細胞の非存在下で行うことができる。腫瘍細胞は、培地のみと、又はＡＬＤＨ及び／又は標的化治療薬（ＴＫＩ）の適切な組み合わせを含む培地と共にインキュベートされる。細胞は、３日間インキューベートされる。各処理後に、細胞凝集塊の除去のために、細胞は洗浄され、３５ｍｍのストレーナキャップ付き１２×７５チューブに等分される（チューブ当たり１ｍｌ、処理群当たり３チューブ）。そして、チューブにＰＩ（１０μｇ／ｍＬ）を加える。試料はＦＡＣＳＣＡＮ（登録商標）フローサイトメーター及びＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（登録商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて解析され得る。ＰＩ取り込みにより決定されるように、培地単独及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）単独と比較して、細胞死の統計的に有意なレベルを誘導する、標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）と組み合わせたそれらのＡＬＤＨ阻害剤が、細胞死誘導抗体、結合ポリペプチド、又は結合小分子として選択され得る。 In order to select an ALDH inhibitor that enhances the induction of cancer cell death, for example, of the membrane shown by incorporation of propidium iodide (PI), trypan blue or 7AAD in combination with a targeted therapeutic (eg, TKI) Loss of integrity can be assessed against a reference. PI uptake can be performed in the absence of complement and immune effector cells. Tumor cells are incubated with media alone or with media containing appropriate combinations of ALDH and / or targeted therapeutics (TKIs). Cells are incubated for 3 days. After each treatment, the cells are washed and aliquoted into 35 mm strainer-capped 12 × 75 tubes (1 ml per tube, 3 tubes per treatment group) for removal of cell clumps. Then add PI (10 μg / mL) to the tube. Samples can be analyzed using a FACSCAN® flow cytometer and FACSCONVERT® CellQuest software (Becton Dickinson). A targeted therapeutic (eg, TKI) that induces a statistically significant level of cell death as compared to media alone and / or targeted therapeutic (eg, TKI) alone, as determined by PI uptake. Those ALDH inhibitors in combination with) can be selected as cell death-inducing antibodies, binding polypeptides, or binding small molecules.

スクリーニング及び／又は同定する任意の方法の幾つかの実施態様において、候補のＡＬＤＨ阻害剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、又はポリヌクレオチドである。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）は小分子である。 In some embodiments of any method of screening and / or identification, the candidate ALDH inhibitor is an antibody, binding polypeptide, binding small molecule, or polynucleotide. In some embodiments, the ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) is a small molecule.

Ｖ．薬学的製剤
本明細書に記載される、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストの薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するその抗体と任意の薬学的に許容可能な一以上の担体（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）とを、凍結乾燥製剤又は水性溶液の形態で混合することによって調製される。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストは、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、及び／又はポリヌクレオチドである。薬学的に許容可能な担体は、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における例示的な薬学的に許容可能な担体には、更に、間質薬剤分散剤、例えば可溶性の中性−活性化ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えばヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、ＢａｘｔｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）が含まれる。所定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの一以上の追加のグルコサミノグリカンと組み合わされる。 V. Pharmaceutical Formulations Pharmaceutical formulations of ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and / or targeted therapeutic agents (eg, TKI) described herein may have a desired degree of purity. Prepared by mixing the antibody with one or more pharmaceutically acceptable carriers (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)) in the form of a lyophilized formulation or an aqueous solution. Is done. In some embodiments, an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or an antagonist of a targeted therapeutic (eg, TKI) is an antibody, binding polypeptide, binding small molecule, and / or poly It is a nucleotide. Pharmaceutically acceptable carriers are not toxic to recipients at the dosages and concentrations used and are not limited to buffers such as phosphates, citrates and other organic acids. Antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (eg octadecyl dimethylthiol ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride, phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or Propylparaben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol); low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptide; protein such as serum albumin, gelatin, or immunoglobulin; hydrophilic polymer; For example, polyvinyl Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; mannosaccharides, disaccharides and other carbohydrates including glucose, mannose or dextrin; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, Nonionic surfactants such as mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (eg Zn-protein complexes); and / or polyethylene glycol (PEG). Exemplary pharmaceutically acceptable carriers herein further include stromal drug dispersants such as soluble neutral-activated hyaluronidase glycoprotein (sHASEGP), such as human soluble PH-20 hyaluronidase glycoprotein, For example, rHuPH20 (HYLENEX (registered trademark), Baxter International, Inc.) is included. Certain exemplary sHASEGPs and uses include rHuPH20 and are described in US Patent Application Publication Nos. 2005/0260186 and 2006/0104968. In one aspect, sHASEGP is combined with one or more additional glucosaminoglycans such as chondroitinase.

典型的な凍結乾燥製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。 A typical lyophilized formulation is described in US Pat. No. 6,267,958. Aqueous antibody formulations include those described in US Pat. No. 6,171,586 and WO 2006/044908, the latter formulation comprising a histidine-acetate buffer.

本明細書の製剤はまた、治療を受けている特定の徴候のために必要な一以上の活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものが含まれる場合がある。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされ適切に存在する。 The formulations herein may also contain one or more active ingredients necessary for the particular indication being treated, preferably those with complementary activities that do not adversely affect each other. Such active ingredients are suitably present in combination in amounts that are effective for the purpose intended.

活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセルにより、コロイド薬物送達系に（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンで調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。 The active ingredient can be incorporated into colloid drug delivery systems (eg liposomes, albumin microspheres), for example by coacervation techniques or interfacial polymerization methods, for example by hydroxymethylcellulose or gelatin-microcapsules and poly (methylmethacrylate) microcapsules, respectively. , Microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or microcapsules prepared with macroemulsions. Such techniques are disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の適切な例は、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストを含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスであって、該マトリックスは、造形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態であるものを含む。 Sustained release formulations may be prepared. Suitable examples of sustained release formulations are semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing antagonists of ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and / or targeted therapeutics (eg, TKI). Thus, the matrix includes shaped articles, such as those in the form of films or microcapsules.

インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。 Formulations used for in vivo administration are generally sterile. Sterility can be achieved, for example, by filtration through a sterile filtration membrane.

ＶＩ．製造品
本発明の別の態様において、上述した障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な物質を含む製造品が提供される。製造品は、容器とラベル又は容器上にある又は容器に付属する添付文書を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される化合物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも一の活性剤は、本明細書に記載されるＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストである。ラベル又は添付文書は、組成物が選択した症状の治療のために使用されることを示している。更に、製造品は、（ａ）組成物がＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）を含有する組成物を中に含む第一の容器；及び（ｂ）組成物が更なる細胞障害性又はその他の治療的薬剤を包含する組成物を中に含む第２の容器を含み得る。 VI. Articles of Manufacture In another aspect of the invention, an article of manufacture containing materials useful for the treatment, prevention, and / or diagnosis of the disorders described above is provided. The article of manufacture includes a container and a label or a package insert on or attached to the container. Suitable containers include, by way of example, bottles, vials, syringes, IV infusion bags and the like. The container may be formed from a variety of materials such as glass or plastic. The container may contain a compound that is effective in treating, preventing, and / or diagnosing a disease, either as such or in combination with other compositions, and may have a sterile access port (eg, the container is subcutaneous It may be an intravenous solution bag or vial with a pierced stopper by a syringe needle). At least one active agent in the composition is an antagonist of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or a targeted therapeutic agent (eg, TKI) as described herein. The label or package insert indicates that the composition is used for the treatment of the selected condition. Further, the article of manufacture comprises a first container in which (a) the composition contains a composition containing an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or a targeted therapeutic agent (eg, TKI). And (b) the composition may comprise a second container containing therein a composition comprising additional cytotoxic or other therapeutic agent.

幾つかの実施態様において、製造品は、容器、該容器上のラベル、及び該容器内に含まれる組成物を含み；ここで組成物は、一以上の試薬（例えば、本明細書に記載される、バイオマーカーの一又は複数に結合する一次抗体又はバイオマーカーの一又は複数に対するプローブ及び／又はプライマー）、組成物が試料中の一又は複数のバイオマーカーの存在を評価するために使用することができることを示す容器上のラベル、及び試料中の一又は複数のバイオマーカーの存在を評価するための試薬の使用説明書を含む。製造品は、試料を調製し、試薬を利用するための使用説明書と物質を更に含みうる。幾つかの実施態様において、製造品は、一次及び二次抗体の両方を含み、ここでは該二次抗体は標識、例えば酵素標識にコンジュゲートしている。幾つかの実施態様において、製造品は、本明細書に記載される、一又は複数のプローブ及び／又は一又は複数のバイオマーカーである。 In some embodiments, an article of manufacture includes a container, a label on the container, and a composition contained within the container; wherein the composition comprises one or more reagents (eg, as described herein). A primary antibody that binds to one or more of the biomarkers or probes and / or primers for one or more of the biomarkers), the composition is used to assess the presence of one or more biomarkers in the sample And a label on the container indicating that the reagent can be used, and instructions for using the reagent to assess the presence of one or more biomarkers in the sample. The article of manufacture can further include instructions and materials for preparing the sample and utilizing the reagents. In some embodiments, the article of manufacture includes both primary and secondary antibodies, wherein the secondary antibody is conjugated to a label, eg, an enzyme label. In some embodiments, the article of manufacture is one or more probes and / or one or more biomarkers as described herein.

何れかの製造品の幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストは、抗体、結合ポリペプチド、結合小分子、及び／又はポリヌクレオチドである。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストは、小分子である。幾つかの実施態様において、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストは、抗体である。幾つかの実施態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。幾つかの実施態様において、抗体はヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。幾つかの実施態様において、抗体は抗体断片であり、その抗体断片は、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）に結合する。 In some embodiments of any article of manufacture, an antagonist of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an antibody, binding polypeptide, binding molecule A molecule and / or a polynucleotide. In some embodiments, an antagonist of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is a small molecule. In some embodiments, the antagonist of an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or a targeted therapeutic agent (eg, TKI) is an antibody. In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody. In some embodiments, the antibody is a human, humanized, or chimeric antibody. In some embodiments, the antibody is an antibody fragment, and the antibody fragment binds to an ALDH inhibitor (eg, disulfiram and / or a derivative thereof) and / or a targeted therapeutic agent (eg, TKI).

本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療することに用いることができることを示す添付文書を更に含んでいてもよい。別法として、又は加えて、製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第二（又は第三）の容器を更に含んでもよい。これは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザーの立場から望まれる他の物質を更に含んでもよい。 The article of manufacture in this embodiment of the invention may further include a package insert indicating that the composition can be used to treat a particular disease. Alternatively or in addition, the article of manufacture comprises a second (or third) comprising a pharmaceutically acceptable buffer, such as bacteriostatic water for injection (BWFI), phosphate buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution. ) Container may be further included. This may further include other materials desired from a commercial and user standpoint, including other buffers, diluents, filters, needles, and syringes.

製造品の他の任意の成分には、一又は複数の緩衝液（例えば、ブロッキング緩衝液、洗浄緩衝液、基質緩衝液等）、他の試薬、例えば酵素標識により化学的に改変される基質（例えば色素原）、エピトープ回収液、対照試料（正及び／又は負の対照）、対照スライド等が含まれる。 Other optional components of the product may include one or more buffers (eg, blocking buffer, wash buffer, substrate buffer, etc.), other reagents, eg, substrates that are chemically modified with an enzyme label (eg, enzyme label). For example, chromogens), epitope recovery solutions, control samples (positive and / or negative controls), control slides and the like.

上記製造品の何れかは、ＡＬＤＨ阻害剤（例えば、ジスルフィラム及び／又はその誘導体）及び／又は標的化治療薬（例えば、ＴＫＩ）のアンタゴニストの代わりに、又は加えて、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートを含んでも良い。 Any of the above articles are described herein in place of or in addition to antagonists of ALDH inhibitors (eg, disulfiram and / or derivatives thereof) and / or targeted therapeutics (eg, TKI). An immunoconjugate may be included.

以下は本発明の方法及び組成物の例である。種々の他の実施態様は、上記に示す一般的な説明を前提として実施することができることが理解される。
実施例１
材料と方法 The following are examples of the methods and compositions of the present invention. It will be understood that various other embodiments may be practiced given the general description given above.
Example 1
Materials and methods

ヒトがん細胞株及び試薬
ヒトがん細胞株は、５％のＣＯ_２の存在下、３７℃で、ピルビン酸ナトリウム、１０％ウシ胎児血清並びに抗生物質ペニシリン及びストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地中で増殖させた。 Human Cancer Cell Lines and Reagents Human cancer cell lines are grown in RPMI medium supplemented with sodium pyruvate, 10% fetal calf serum and antibiotics penicillin and streptomycin in the presence of 5% CO ₂ at 37 ° C. I let you.

ＡＬＤＨ活性アッセイ
ボディパイ標識されたＡＬＤＨ基質（ＡｌｄｅｆｌｕｏｒＫｉｔ，ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が、製造元のプロトコルに従って再構成され、ＡＬＤＨ活性を検出するために使用された。基質は、ＲＰＭＩ培地（５μｌの基質／ｍｌの培地）中で希釈され、接着細胞に添加された。ＣＯ_２インキュベーター中、３７℃で、３０分間のインキュベーション後、細胞はＰＲＭＩ培地で２回洗浄され、画像は、ＩｎｃｕＣｙｔｅＨＤＳｙｓｔｅｍ（ＥｓｓｅｎＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）及び１０倍対物を使用して撮影された。 ALDH Activity Assay Body pie-labeled ALDH substrate (Aldefluor Kit, Stem Cell Technology) was reconstituted according to the manufacturer's protocol and used to detect ALDH activity. Substrate was diluted in RPMI medium (5 μl substrate / ml medium) and added to adherent cells. After a 30 minute incubation at 37 ° C. in a CO ₂ incubator, the cells were washed twice with PRMI medium and images were taken using an IncuCyte HD System (Essen BioScience) and a 10 × objective.

フローサイトメトリー及びＲＮＡ抽出
Ａｌｄｅｆｌｕｏｒアッセイが、ＫａｔｏＩＩ親細胞においてＡＬＤＨ活性を検出するために使用された。最高のＡＬＤＨ活性及び最低のＡＬＤＨ活性を有する、親細胞の〜５％を占めるＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ及びＡＬＤＨ^ｌｏｗ細胞がそれぞれフローサイトメトリーを使用して選別された。冷競合基質であるＤＥＡＢの存在下で、ボディパイ標識基質とインキュベートされたＫａｔｏＩＩ細胞が、陰性対照として使用された。ＲＮＡｅａｓｙカラム（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて抽出された総ＲＮＡは、マイクロアレイに基づいた遺伝子発現解析のために使用された。 Flow cytometry and RNA extraction The Aldefluor assay was used to detect ALDH activity in KatoII parental cells. ALDH ^high and ALDH ^low cells occupying ~ 5% of the parental cells with the highest and lowest ALDH activity were selected using flow cytometry, respectively. Kato II cells incubated with body pie-labeled substrate in the presence of the cold competitive substrate DEAB were used as a negative control. Total RNA extracted using RNAeasy columns (Qiagen) was used for gene expression analysis based on microarrays.

細胞生存率アッセイ
細胞は、アッセイ期間の終わりに４％パラホルムアルデヒドで固定され、その生存率は、水で１：５０００に希釈した核酸染色Ｓｙｔｏ６０（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて測定した。蛍光強度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘＭ５を使用して測定した（励起６３５ｎｍ及び発光６９５ｎｍ；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅ）。生存率は、無処置対照の％として表された。 Cell Viability Assay Cells were fixed with 4% paraformaldehyde at the end of the assay period, and their viability was measured using nucleic acid staining Syto60 (Life Technologies) diluted 1: 5000 with water. The fluorescence intensity was measured using SpectraMax M5 (excitation 635 nm and emission 695 nm; Molecular Device). Survival was expressed as% of untreated control.

薬剤耐性細胞の生成
ＫａｔｏＩＩ及びＧＴＬ−１６ＤＴＰは、親細胞を１ｕＭのクリゾチニブで３０日間処置することにより生成された。ＰＣ９親細胞は、ＤＴＰの生成のために、９日間、２ｕＭのエルロチニブで処置された。全ての場合において、培地は３日ごとに交換された。 Generation of drug resistant cells KatoII and GTL-16 DTP were generated by treating parental cells with 1 uM crizotinib for 30 days. PC9 parental cells were treated with 2 uM erlotinib for 9 days for the production of DTP. In all cases, the medium was changed every 3 days.

免疫ブロッティング
タンパク質は、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を含有するＮＰ−４０溶解緩衝液を用いて細胞ペレットから抽出された。タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（ＢｉｏＲａｄ）を用いて分離され、免疫検出は、標準的なプロトコールを用いて行われた。ＡＬＤＨ１Ａ１に対する抗体は、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから購入し、ＧＡＰＤＨ、切断されたＰＡＲＰ及びホスホＡＴＭ／ＡＴＲ基質抗体はＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入し、ホスホγＨ２Ａ．ｘ抗体はＭｉｌｌｉｐｏｒｅから購入した。 Immunoblotting proteins were extracted from cell pellets using NP-40 lysis buffer containing protease and phosphatase inhibitors. Proteins were separated using SDS-PAGE gel (BioRad) and immunodetection was performed using standard protocols. Antibodies against ALDH1A1 were purchased from R & D Systems, GAPDH, cleaved PARP and phospho ATM / ATR substrate antibodies were purchased from Cell Signaling Technology and phosphoγH2A. x antibody was purchased from Millipore.

ＲＯＳアッセイ
ＲＯＳアッセイは、フルオレセインのカルボキシ誘導体、ＣＭ−Ｈ_２ＤＣＦＤＡ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）を用いて行われた。再構成されたＲＯＳインジケータが、ＤＴＰを含有するプレート中の増殖培地に添加され、３０分間インキュベートされた。ＤＴＰは、トリプシン−ＥＤＴＡを用いてプレートから剥離され、ＲＯＳレベルは、対照として未処置の親細胞を用いたフローサイトメトリーを用いて検出された。 ROS Assay The ROS assay was performed using a carboxy derivative of fluorescein, CM-H ₂ DCFDA (Molecular Probes). Reconstituted ROS indicator was added to the growth medium in the plate containing DTP and incubated for 30 minutes. DTP was stripped from the plate using trypsin-EDTA and ROS levels were detected using flow cytometry using untreated parental cells as a control.

異種移植腫瘍の試験
ＰＣ−９、ＰＣ−９−ＧＦＰ、ＥＢＣ−１、及びＧＴＬ−１６細胞が、８０％のコンフルエンシーまで、増殖培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン）中で培養され、その後、トリプシン処理され、ＰＢＳで１回洗浄され、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）又はＨＢＳＳのマトリゲル［還元された成長因子；カタログ＃３５６２３１（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，ＰＡ）］との１：１混合物の何れかに、５×１０^７細胞／ｍｌの最終濃度まで再懸濁された。各異種移植腫瘍モデルは、免疫不全マウスの後部右脇腹に、皮下接種（ｓ．ｃ．）される５×１０^６細胞（１００μＬ）を用いて確立された。ＧＴＬ−１６細胞は、ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスにおいてマトリゲルを含まないＨＢＳＳに移植された（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）。ＰＣ−９及びＰＣ−９−ＧＦＰ細胞は、ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスにおいてマトリゲルを含むＨＢＳＳに移植された（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）。ＥＢＣ−１細胞は、ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスにおいてマトリゲルを含まないＨＢＳＳに移植された（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）。腫瘍体積が約１００−２００ｍｍ^３に達すると、マウスは、同様のサイズの腫瘍を有する１０〜１５匹の動物の群に分離され、処置は、グループ化の翌日に開始された。マウスは、ＧＤＣ−０７１２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．−ＭＥＴ小分子阻害剤、水で処方される１００ｍｇ／ｋｇ）、エルロチニブ（７．５％のカプチソール中で５０ｍｇ／ｋｇ）及び／又はジスルフィラム（Ｓｉｇｍａ−Ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌｔｈｉｕｒａｍ、カタログ＃８６７２０、ベニバナ油９５％、ベンジルアルコール５％で処方される２００ｍｇ／ｋｇで投薬）又は対応するビヒクルのみにより毎日（ＱＤ）の強制経口投与（ＰＯ）を介して投与された。腫瘍体積は、式（ＬｘＷｘＷ）／２を用いて、デジタルキャリパー（ＦｒｅｄＶ．ＦｏｗｌｅｒＣｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．）を用いて決定された。腫瘍増殖阻害（％ＴＧＩ）は、％ＴＧＩ＝１００ｘ１−（ＡＵＣ処置／日）／（ＡＵＣビヒクル／日）となるように、ビヒクルに関連した一日あたりの各用量群について近似曲線下面積（ＡＵＣ）のパーセンテージとして計算された。カーブフィッティングは、線形混合効果（ＬＭＥ）モデルを用いて、Ｒパッケージｎｌｍｅ、Ｒｖ２．１２．０のバージョン３．１−９７を使用して、Ｌｏｇ２変換された個々の腫瘍体積データに対して適用された。 Xenograft Tumor Testing PC-9, PC-9-GFP, EBC-1, and GTL-16 cells were grown to 80% confluency in growth medium (RPMI 1640, 10% heat inactivated fetal bovine serum, 2 mM. L-glutamine), then trypsinized, washed once with PBS, Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) or HBSS Matrigel [reduced growth factor; catalog # 356231 (BD Biosciences, West Grove) , PA)] to a final concentration of 5 × 10 ⁷ cells / ml. Each xenograft tumor model was established using 5 × 10 ⁶ cells (100 μL) inoculated subcutaneously (sc) in the back right flank of immunodeficient mice. GTL-16 cells were implanted in Matrigel free HBSS in nude (nu / nu) mice (Charles River Laboratories, Hollister, Calif.). PC-9 and PC-9-GFP cells were transplanted into HBSS containing Matrigel in nude (nu / nu) mice (Charles River Laboratories, Hollister, Calif.). EBC-1 cells were transplanted into Matrigel-free HBSS in nude (nu / nu) mice (Charles River Laboratories, Hollister, Calif.). When the tumor volume reached approximately 100-200 mm ³ , the mice were separated into groups of 10-15 animals with similarly sized tumors, and treatment was started the day after grouping. Mice were treated with GDC-0712 (Genentech, Inc.-MET small molecule inhibitor, 100 mg / kg formulated in water), erlotinib (50 mg / kg in 7.5% captisol) and / or disulfiram (Sigma-Tetraethylthuram). , Catalog # 86720, dosed at 200 mg / kg formulated with safflower oil 95%, benzyl alcohol 5%) or the corresponding vehicle only via daily (QD) gavage (PO). Tumor volume was determined using a digital caliper (Fred V. Fowler Company, Inc.) using the formula (LxWxW) / 2. Tumor growth inhibition (% TGI) is% TGI = 100 × 1− (AUC treatment / day) / (AUC vehicle / day), the area under the approximate curve (AUC) for each dose group per day related to vehicle. ) As a percentage. Curve fitting is applied to Log2-transformed individual tumor volume data using R package nlme, version 3.1-97 of R v2.12.0, using a linear mixed effect (LME) model. It was done.

Ｓｅａｈｏｒｓｅアッセイ
約５０００の親細胞及び１５０００のＤＴＰ細胞はＸＦ９６ウェル細胞培養マイクロプレート（ＳｅａｈｏｒｓｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）のウェルあたりに播種され、５％のＣＯ_２インキュベーター中、３７℃で２４時間インキュベートされた。ジスルフィラム及びＮＡＣ処置は、ＴＫＩの存在下で４８時間行われた。酸素消費率（ＯＣＲ）及び細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の測定は、重炭酸塩を含まない、無血清の、３７℃に予め温めた培地中で行われた。分析の終了後、細胞は４％パラホルムアルデヒドで固定され、ヘキストで染色され、そして４象限／ウェルがＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓＨＣＳを使用して画像化され、象限当たりの平均の核数がカウントされた。棒グラフは、６つのウェルからの正規化された（細胞数）ＯＣＲとＥＣＡＲ測定の平均＋／−ＳＥＭを表した。 Seahorse assay Approximately 5000 parental cells and 15000 DTP cells were seeded per well of an XF 96-well cell culture microplate (SeahorseBioscience) and incubated at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator for 24 hours. Disulfiram and NAC treatment was performed for 48 hours in the presence of TKI. Oxygen consumption rate (OCR) and extracellular acidification rate (ECAR) measurements were performed in serum-free, pre-warmed medium at 37 ° C. without bicarbonate. At the end of the analysis, cells were fixed with 4% paraformaldehyde, stained with Hoechst, and 4 quadrants / well were imaged using Molecular Devices ImageXpress HCS and the average number of nuclei per quadrant was counted. Bar graphs represent normalized (cell count) OCR and ECAR averages +/− SEM from 6 wells.

結果
がん幹細胞マーカー遺伝子ＡＬＤＨ１Ａ１は、薬剤耐性細胞において差次的に発現される。
クリゾチニブ耐性ＫａｔｏＩＩ胃癌細胞で差次的に発現する遺伝子を同定するために、マイクロアレイに基づいた遺伝子発現解析が行われた。多くのアップレギュレートされた遺伝子のうち、ＡＬＤＨ１Ａ１、がん幹細胞マーカー遺伝子が、薬剤耐性存続生物（ＤＴＰ）集団において同定された。Ａｌｄｅｆｌｕｏｒアッセイを使用した生存ＫａｔｏＩＩ細胞におけるＡＬＤＨ活性（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が測定され、高ＡＬＤＨ活性が、１ヶ月のクリゾチニブ処置後に、ＫａｔｏＩＩ親細胞の少数（〜５％）集団で（図１Ａ）及びほとんど全てのＫａｔｏＩＩＤＴＰで検出された。ＲＮＡが単離されたＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ細胞で実施されたマイクロアレイに基づいた遺伝子発現解析は、ＡＬＤＨ^ｌｏｗ細胞と比べて〜８倍アップレギュレートされた遺伝子のＡＬＤＨファミリーの唯一のメンバーとして、ＡＬＤＨ１Ａ１を同定した。ＲＮＡレベルと一致して、ＫａｔｏＩＩのＡＬＤＨ１Ａ１タンパク質レベルは、ＡＬＤＨ^ｈｉｇｈ細胞、ＫａｔｏＩＩ細胞及びＧＴＬ−１６細胞（胃癌）からのＤＴＰにおいて検出された（図１ｃ）。任意の薬物誘導性アポトーシスが、切断されたＰＡＲＰタンパク質産物の出現により測定され検出される前に（データ非表示）、クリゾチニブ処置は、２４時間以内にＫａｔｏＩＩ親細胞のＡＬＤＨ１Ａ１タンパク質のレベルを増加させた（図１ｃ）。ＫａｔｏＩＩ細胞及びＧＴＬ−１６細胞におけるＡＬＤＨ１Ａ１発現のノックダウンは、薬物感受性又はＤＴＰ形成において有意な影響を及ぼさなかった。 Results Cancer stem cell marker gene ALDH1A1 is differentially expressed in drug resistant cells.
In order to identify genes that are differentially expressed in crizotinib-resistant KatoII gastric cancer cells, microarray-based gene expression analysis was performed. Of the many upregulated genes, ALDH1A1, a cancer stem cell marker gene, has been identified in the drug resistant survivor (DTP) population. ALDH activity (Stem Cell Technology) was measured in viable KatoII cells using the Aldefluor assay, and high ALDH activity was observed in a small (~ 5%) population of KatoII parental cells (Figure 1A) and mostly after 1 month of crizotinib treatment Detected with all KatoIDTP. Microarray-based gene expression analysis performed on ALDH ^high cells from which RNA was isolated identified ALDH1A1 as the only member of the ALDH family of genes that were up-regulated by ˜8-fold compared to ALDH ^low cells. . Consistent with RNA levels, ALTO1A1 protein levels of KatoII were detected in DTP from ALDH ^high cells, KatoII cells and GTL-16 cells (gastric cancer) (FIG. 1c). Before any drug-induced apoptosis was measured and detected by the appearance of a cleaved PARP protein product (data not shown), crizotinib treatment increased the level of ALDH1A1 protein in KatoII parental cells within 24 hours (FIG. 1c). Knockdown of ALDH1A1 expression in KatoII and GTL-16 cells had no significant effect on drug sensitivity or DTP formation.

ジスルフィラム、ＡＬＤＨ阻害剤は、薬剤耐性細胞を死滅させる
薬剤耐性におけるＡＬＤＨの役割を理解するために、ＫａｔｏＩＩ親細胞及びＧＴＬ−１６親細胞は、ジスルフィラム（ＤＳ）と呼ばれる不可逆的ＡＬＤＨ阻害剤で処置された。ＤＳ及びその代謝物は、複数のＡＬＤＨファミリーメンバーの酵素活性を阻害する（Koppaka et al., 2012）。ジスルフィラム単独では、これらのがん細胞の増殖に有意な影響を与えなかったが、クリゾチニブとの組み合わせで、ＤＳは、薬剤耐性のＫａｔｏＩＩ細胞及びＧＴＬ−１６細胞を除去した（図１Ａ、Ｂ）。ＤＳの同様の効果は、ＡＬＤＨ１Ａ１を発現するが、他のＡＬＤＨファミリーメンバーを発現しない非小細胞肺癌ＰＣ９細胞で観察された（図２Ｃ）。およそ２０％のＰＣ９ＤＴＰが、エルロチニブで１０日間以上維持される場合に、それらの薬剤耐性特性を維持しつつ、親ＰＣ９細胞同様に***を開始する。エルロチニブ耐性のＰＣ９ＤＴＰのこの増加集団は、薬剤耐性増加存続生物又はＤＴＥＰと呼ばれ（Sharmaら、2010）、それらはＤＴＰとは違ってＤＳに対する感受性がずっと低い。図２の棒グラフは、三連のウェルからのデータを表し、上記の３つ全ての細胞株からのＤＴＰの生存率におけるＤＳ及びＴＫＩの併用効果を示している。ＴＫＩ曝露の前に３〜６日間、ＤＳ単独によるＰＣ９及びＧＴＬ−１６細胞の前処置は、ＤＴＰを除去せず、ＡＬＤＨ活性の連続抑制がＤＴＰを死滅させるために重要であることを示している。 Disulfiram, an ALDH inhibitor kills drug-resistant cells To understand the role of ALDH in drug resistance, KatoII and GTL-16 parent cells are treated with an irreversible ALDH inhibitor called disulfiram (DS). It was. DS and its metabolites inhibit the enzymatic activity of multiple ALDH family members (Koppaka et al., 2012). Disulfiram alone did not significantly affect the growth of these cancer cells, but in combination with crizotinib, DS removed drug-resistant KatoII and GTL-16 cells (FIGS. 1A, B). Similar effects of DS were observed in non-small cell lung cancer PC9 cells that express ALDH1A1 but not other ALDH family members (FIG. 2C). When approximately 20% of PC9 DTP is maintained with erlotinib for more than 10 days, it begins to divide like the parent PC9 cells while maintaining their drug resistance properties. This increased population of erlotinib-resistant PC9 DTP is referred to as a drug resistance survivor or DTEP (Sharma et al., 2010), which, unlike DTP, is much less sensitive to DS. The bar graph in FIG. 2 represents data from triplicate wells and shows the combined effect of DS and TKI on DTP viability from all three cell lines described above. Pretreatment of PC9 and GTL-16 cells with DS alone for 3-6 days prior to TKI exposure does not remove DTP, indicating that continuous suppression of ALDH activity is important to kill DTP .

様々なＴＫＩ−ＤＳの組み合わせの有効性が、乳がん、結腸がん及び肺がん由来で、様々ながん遺伝子に依存する８つの他のがん細胞株で試験された。ＤＳ単独では生存率に有意な影響を及ぼさなかったが、全てのＴＫＩ−ＤＳの組み合わせが、対応するＤＴＰの数を除去するか又は有意に減らすかのどちらかで非常に有効であった（図３）。これらの結果は、薬剤耐性細胞の、一般的に、それらの生存率に対するＡＬＤＨ活性への依存性を更に強調し、様々なタイプのがんの再発を除去し／遅延させることにおけるＴＫＩの組合せにおけるＤＳの使用の潜在的に有益な効果を暗示している。 The effectiveness of various TKI-DS combinations has been tested in 8 other cancer cell lines derived from breast, colon and lung cancers and dependent on various oncogenes. Although DS alone had no significant effect on survival, all TKI-DS combinations were very effective in either removing or significantly reducing the number of corresponding DTPs (Figure 3). These results further emphasize the dependence of drug-resistant cells on ALDH activity, generally on their viability, in the combination of TKIs in eliminating / delaying the recurrence of various types of cancer It implies a potentially beneficial effect of the use of DS.

薬剤耐性細胞は、高いＲＯＳレベルを有する
がん細胞は、それらの正常な対応物と比較して、細胞増殖を促進すると考えられているより高いＲＯＳレベルを有する(Szatrowski et al., 1991; Boonstra et al., 2004)。化学療法及び放射線療法への曝露は、膜脂質の過酸化を介して様々なアルデヒド生成物の発生を引き起こすことが可能ながん細胞においてＲＯＳレベルをより高く増加させる。マロンアルデヒド及び４−ヒドロキシノネナール（４−ＨＮＥ）などのこれらのアルデヒド生成物の幾つかは、より長い半減期を有しており、ＤＮＡ損傷及びその後の細胞死を引き起こすことができる(Chiu et al., 2012; Casares et al., 2012, Li et al., 2009)。ＲＯＳレベルの増加に応答した、ＣＤ１３３＋神経膠芽腫幹細胞におけるＤＮＡ修復経路の迅速な活性化は、放射線に対する抵抗性についての基礎を提供した(Bao et al.2006)。ＲＯＳが関与する同様のメカニズムが、薬剤耐性に役割を果たし伴うかどうかを決定するために、生体エネルギー、ＲＯＳレベル、ＤＮＡ損傷の程度及びＤＮＡ修復経路の活性が、ＤＴＰで測定された。ＲＯＳレベルの６倍以上の増加が、ＰＣ９とＧＴＬ−１６由来のＤＴＰの両方で、それらの親細胞と比較して観察された（図４Ａ）。４８時間にわたるＤＳ処理は、ＤＴＰにおけるＲＯＳレベルの増加を更に引き起こし、これは、培地にＮＡＣを添加することによって逆転することができる。ＲＯＳレベルの増加は、酸素消費率（ＯＣＲ）の増加（図４Ｂ）、薬剤耐性細胞中の二本鎖ＤＮＡ切断の増加、そして、ＤＮＡ修復機構の活性化をもたらした。（図４Ｃ）。これらの結果は、ＡＬＤＨファミリーのメンバーがＤＴＰの生存において重要であるＲＯＳスカベンジャーの役割を果たしていることを示唆している。 Drug resistant cells have high ROS levels Cancer cells have higher ROS levels that are thought to promote cell proliferation compared to their normal counterparts (Szatrowski et al., 1991; Boonstra et al., 2004). Exposure to chemotherapy and radiation therapy increases ROS levels higher in cancer cells that can cause the generation of various aldehyde products through peroxidation of membrane lipids. Some of these aldehyde products such as malonaldehyde and 4-hydroxynonenal (4-HNE) have a longer half-life and can cause DNA damage and subsequent cell death (Chiu et al ., 2012; Casares et al., 2012, Li et al., 2009). Rapid activation of the DNA repair pathway in CD133 + glioblastoma stem cells in response to increased ROS levels provided the basis for resistance to radiation (Bao et al. 2006). To determine if similar mechanisms involving ROS play a role in drug resistance, bioenergy, ROS levels, the extent of DNA damage and DNA repair pathway activity were measured with DTP. A 6-fold increase in ROS levels was observed for both PC9 and GTL-16 derived DTP compared to their parental cells (FIG. 4A). DS treatment over 48 hours further causes an increase in ROS levels in DTP, which can be reversed by adding NAC to the medium. Increased ROS levels resulted in increased oxygen consumption (OCR) (FIG. 4B), increased double-stranded DNA breaks in drug-resistant cells, and activation of the DNA repair machinery. (FIG. 4C). These results suggest that ALDH family members play a role in ROS scavengers that are important in DTP survival.

Ｎ−アセチルシステインはＤＴＰへのジスルフィラムの致死効果をレスキューする
次に、ＮＡＣ処置が、ＴＫＩ＋ＤＳ処置によるＤＴＰの死滅を防止するのに十分であるかどうかを問うた。ＰＣ９及びＧＴＬ−１６細胞は、エルロチニブ及びクリゾチニブのそれぞれによって、単独で、又はＤＳとＮＡＣとの組み合わせの何れかによって処置された。予想されたように、ＤＳとＴＫＩの組み合わせは、１４日以内に全てのＰＣ９ＤＴＰを死滅させ、それはＤＳとＴＫＩと共に添加した場合にＮＡＣによってほぼ完全にレスキューされた（図５Ａ）。同様の結果は、ＧＴＬ−１６ＤＴＰを用いて得られ、ここではＴＫＩ＋ＤＳによる処置の間にＮＡＣを含めると、ＤＳ誘導死からＧＴＬ−１６ＤＴＰの〜８０％をレスキューした。 N-acetylcysteine rescues the lethal effect of disulfiram on DTP. Next, we asked whether NAC treatment was sufficient to prevent DTP killing by TKI + DS treatment. PC9 and GTL-16 cells were treated with erlotinib and crizotinib, respectively, either alone or in combination with DS and NAC. As expected, the combination of DS and TKI killed all PC9 DTP within 14 days, which was almost completely rescued by NAC when added with DS and TKI (FIG. 5A). Similar results were obtained with GTL-16 DTP, where inclusion of NAC during treatment with TKI + DS rescued ~ 80% of GTL-16 DTP from DS-induced death.

ＤＳの作用のメカニズムを理解するために、ＧＴＬ−１６由来のＤＴＰは、４８時間、ＤＳ及びＮＡＣによって処置され、抽出されたタンパク質により免疫ブロット実験が行われた。ＤＳ処置は、ＡＬＤＨ１Ａ１及びＮＦκＢのレベルの減少を引き起こし、γＨ２Ａ．ｘにおいて数倍の増加をもたらし、このことはＤＳで処置されたＤＴＰにおける広範なＤＮＡ損傷と、切断ＰＡＲＰレベルの大幅な増加によって明らかにされるように、その後のアポトーシス経路の活性化を示唆した。ＲＯＳスカベンジャー、ＮＡＣの存在は、ＡＬＤＨ１Ａ１及びＮＦκＢレベルを増加させ、γＨ２Ａ．ｘの増加及びＤＴＰのアポトーシスを阻止した。 In order to understand the mechanism of action of DS, GTL-16-derived DTP was treated with DS and NAC for 48 hours and immunoblot experiments were performed with the extracted proteins. DS treatment causes a decrease in the levels of ALDH1A1 and NFκB, and γH2A. led to a several-fold increase in x, suggesting activation of the apoptotic pathway afterwards, as evidenced by extensive DNA damage in DS-treated DTP and a significant increase in cleaved PARP levels . The presence of the ROS scavenger, NAC, increases ALDH1A1 and NFκB levels and increases γH2A. Inhibited x increase and apoptosis of DTP.

ジスルフィラムは、異種移植マウスモデルにおける腫瘍再発を遅延させる
異種移植マウスモデルが、インビボにおける腫瘍再発を排除／遅延させることにおけるＤＳの効果を調査するために使用された。インビボ試験におけるＰＣ９の治療レジメンは、最初にインビトロ実験で試験され、ここではＰＣ９細胞が、６日間、エルロチニブ単独又はＤＳと組み合わせて処置された。エルロチニブ、ＤＳ及びエルロチニブ＋ＤＳ群の一つにおいて、ＰＣ９ＤＴＰは、任意の薬物を含まないで増殖させ、他方、他のエルロチニブ＋ＤＳ群はＤＳを受け続けた。図６Ａに示されるように、ＰＣ９ＤＴＰの増殖の有意な遅延が、エルロチニブ＋ＤＳ群から観察され、そこでは双方の薬物が、エルロチニブ群と比べて休薬された。予想されるように、ＤＳを受け続けたエルロチニブ＋ＤＳサブ群からは、ＰＣ９ＤＴＰは存続しなかった。棒グラフは、ＤＳの効果を例示する、三連のウェルからのデータを表す。 Disulfiram delays tumor recurrence in xenograft mouse models The xenograft mouse model was used to investigate the effects of DS in eliminating / delaying tumor recurrence in vivo. The therapeutic regimen for PC9 in an in vivo test was first tested in an in vitro experiment, where PC9 cells were treated for 6 days with erlotinib alone or in combination with DS. In one of the erlotinib, DS and erlotinib + DS groups, PC9 DTP was grown without any drug, while the other erlotinib + DS groups continued to receive DS. As shown in FIG. 6A, a significant delay in PC9 DTP growth was observed from the erlotinib + DS group, where both drugs were withdrawn compared to the erlotinib group. As expected, PC9 DTP did not survive from the erlotinib + DS subgroup that continued to receive DS. The bar graph represents data from triplicate wells illustrating the effect of DS.

ＰＣ９異種移植研究のために、マウスは、ＰＣ９細胞が接種され、腫瘍は、大きさが１００〜２００ｍｍ^３まで成長させ、次いで、４つの処置群、つまり、ビヒクル対照、ＤＳ対照、ＴＫＩ単独及びＴＫＩ＋ＤＳ群に分けられた。処置は、試験の終了までのＤＳを受け続けたＴＫＩ＋ＤＳ群の動物を除いて、１１日後に停止された。図６Ｂに示すように、ＰＣ９腫瘍のほぼ完全な退縮が、エルロチニブ処置の際に観察された。５ｘＴＴＰとして測定される腫瘍進行の時間（ＴＴＰ）は、１０ＰＲ及び１ＣＲによるエルロチニブ処置群では６０日であって、一方、エルロチニブ＋ＤＳ群では、９ＰＲ及び６ＣＲによる平均腫瘍サイズは、腫瘍の初期体積を下回った（Ｐ＝０．０００７）。細胞株のデータと一致して、異種移植片データは、ＴＫＩとＤＳの組み合わせが有意に腫瘍の再発を遅らせることができることを示していた。 For PC9 xenograft studies, mice are inoculated with PC9 cells and tumors are grown to a size of 100-200 mm ³ , and then 4 treatment groups, vehicle control, DS control, TKI alone and TKI + DS. Divided into groups. Treatment was stopped after 11 days, except for animals in the TKI + DS group who continued to receive DS until the end of the study. As shown in FIG. 6B, almost complete regression of the PC9 tumor was observed during erlotinib treatment. The time of tumor progression (TTP) measured as 5xTTP is 60 days in the erlotinib treatment group with 10 PR and 1CR, whereas in erlotinib + DS group, the mean tumor size with 9PR and 6CR is the initial tumor volume. (P = 0.007). Consistent with cell line data, xenograft data showed that the combination of TKI and DS could significantly delay tumor recurrence.

参考文献
Koppaka, V et al.(2012).Pharmacol Rev 64, 520-539.
Szatrowski, T.P. and Nathan, C. F. (1991) Cancer Research, 51, 794-798.
Boonstra, J. and Post, J. A. (2004) Gene, 337, 1-13.
Chiu, W. H. et al.(2012).Biochemical Pharmacology, 83, 1159-1171.
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Bao, S. et al.(2006) Nature 444:756-760. References
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前述の発明は、理解を明確にする目的のために、例示と実施例によりある程度詳細に記載してきたが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示内容は、参照によりその全体が援用される。 Although the foregoing invention has been described in some detail by way of illustration and example for purposes of clarity of understanding, the description and examples should not be construed as limiting the scope of the invention. The disclosures of all patent and scientific literature cited herein are incorporated by reference in their entirety.

Claims

ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体においてがんを治療する方法。 A method of treating cancer in an individual comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent.

ＡＬＤＨ阻害剤及び標的化治療薬の各量が、がん感受性の期間を増加させるため、及び／又は標的化治療に対する細胞抵抗性の発生を遅延させるために有効である、請求項１に記載の方法。 2. The amount of ALDH inhibitor and targeted therapeutic agent, respectively, effective to increase the period of cancer susceptibility and / or delay the development of cellular resistance to the targeted therapy. Method.

標的化治療薬の有効量及びＡＬＤＨ阻害剤の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において標的化治療薬を含むがん治療の有効性を高める方法。 A method of increasing the effectiveness of a cancer treatment comprising a targeted therapeutic agent in an individual, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of a targeted therapeutic agent and an effective amount of an ALDH inhibitor.

がん治療が、標的化治療薬の有効量及びＡＬＤＨ阻害剤の有効量を個体に同時に投与することを含み、前記がん治療が、標的化治療薬無しで（非存在下で）標的化治療薬の有効量を投与することを含む標準的治療と比較して、有効性が高まっている、個体においてがんを治療する方法。 The cancer treatment comprises simultaneously administering to the individual an effective amount of the targeted therapeutic agent and an effective amount of the ALDH inhibitor, wherein the cancer treatment is targeted therapy in the absence (in the absence) of the targeted therapeutic agent. A method of treating cancer in an individual that has increased effectiveness compared to standard treatment comprising administering an effective amount of the drug.

ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、個体において、標的化治療薬に対するがん耐性の発生を遅延及び／又は予防する方法。 A method of delaying and / or preventing the development of cancer resistance to a targeted therapeutic agent in an individual comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent.

ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、標的化治療薬に対する耐性が発生する可能性が増加した、がんを有する個体を治療する方法。 A method of treating an individual with cancer who has an increased likelihood of developing resistance to a targeted therapeutic, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic.

ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体における標的化治療薬に対する感受性を上昇させる方法。 A method of increasing susceptibility to a targeted therapeutic agent in an individual having cancer, comprising simultaneously administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent.

ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体における標的化治療薬感受性の期間を延長する方法。 A method of extending the duration of sensitivity of a targeted therapeutic in an individual having cancer, comprising administering to the individual simultaneously an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic.

ＡＬＤＨ阻害剤の有効量及び標的化治療薬の有効量を個体に同時に投与することを含む、がんを有する個体における標的化治療薬に対する応答の持続時間を延長する方法。 A method of extending the duration of a response to a targeted therapeutic agent in an individual having cancer, comprising administering to the individual an effective amount of an ALDH inhibitor and an effective amount of a targeted therapeutic agent simultaneously.

ＡＬＤＨ阻害剤が、小分子ＡＬＤＨ阻害剤である、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。 10. The method according to any one of claims 1 to 9, wherein the ALDH inhibitor is a small molecule ALDH inhibitor.

小分子ＡＬＤＨ阻害剤が、ジスルフィラム又はＡＬＤＨ阻害性誘導体又はその代謝産物である、請求項１０に記載の方法。 11. The method of claim 10, wherein the small molecule ALDH inhibitor is disulfiram or an ALDH inhibitor derivative or a metabolite thereof.

ＡＬＤＨ阻害剤が、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミド又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項１０に記載の方法。 11. The method of claim 10, wherein the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

ＡＬＤＨ阻害剤が、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミドである、請求項１０に記載の方法。 11. The method of claim 10, wherein the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide.

ＡＬＤＨ阻害剤が、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項１０に記載の方法。 11. The ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Method.

ＡＬＤＨ阻害剤が、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）である、請求項１０に記載の方法。 11. The method of claim 10, wherein the ALDH inhibitor is 2,2'-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene).

標的化治療薬が、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である、請求項１から１５の何れか一項に記載の方法。 16. The method according to any one of claims 1 to 15, wherein the targeted therapeutic agent is a tyrosine kinase inhibitor (TKI).

ＴＫＩが、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である、請求項１６に記載の方法。 17. The method of claim 16, wherein the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor.

ＴＫＩが、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）である、請求項１６に記載の方法。 17. The method of claim 16, wherein the TKI is a receptor tyrosine kinase inhibitor (RTKI).

ＲＴＫＩが、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である、請求項１８に記載の方法。 19. The method of claim 18, wherein the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, and / or ALK inhibitor.

阻害剤が、抗体阻害剤、小分子阻害剤、結合ポリペプチドの阻害剤、及び／又はポリヌクレオチドアンタゴニストである、請求項１６から１９の何れか一項に記載の方法。 20. The method according to any one of claims 16 to 19, wherein the inhibitor is an antibody inhibitor, a small molecule inhibitor, an inhibitor of a binding polypeptide, and / or a polynucleotide antagonist.

ＴＫＩが、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、エルロチニブ）である、請求項１６に記載の方法。 17. The TKI is N- (3-ethynylphenyl) -6,7-bis (2-methoxyethoxy) quinazolin-4-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, erlotinib). the method of.

ＴＫＩが、Ｎ−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）−３−クロロフェニル）−６−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）フラン−２−イル）キナゾリン−４−アミン、ジ４−メチルベンゼンスルホン酸又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、ラパチニブ）である、請求項１６に記載の方法。 TKI is N- (4- (3-fluorobenzyloxy) -3-chlorophenyl) -6- (5-((2- (methylsulfonyl) ethylamino) methyl) furan-2-yl) quinazolin-4-amine 17. The method of claim 16, wherein the compound is di-4-methylbenzenesulfonic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, lapatinib).

ＴＫＩが、（Ｓ）−Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−３−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）イソニコチンアミド）又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、ＡＳ７０３０２６）である、請求項１６に記載の方法。 TKI is (S) -N- (2,3-dihydroxypropyl) -3- (2-fluoro-4-iodophenylamino) isonicotinamide) or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg AS703026) The method of claim 16, wherein:

ＴＫＩはベムラフェニブである、請求項１６に記載の方法。 The method of claim 16, wherein the TKI is vemurafenib.

ＴＫＩが、３−（（Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−５−（１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミン又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、クリゾチニブ）である、請求項１６に記載の方法。 TKI is 3-((R) -1- (2,6-dichloro-3-fluorophenyl) ethoxy) -5- (1- (piperidin-4-yl) -1H-pyrazol-4-yl) pyridine- 17. The method of claim 16, wherein the amine is 2-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof (eg, crizotinib).

がんが、胃がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ））、結腸直腸がん（例えば、結腸がん及び／又は直腸がん）、又は基底細胞癌である、請求項１から２５の何れか一項に記載の方法。 26. The cancer of claim 1 to 25, wherein the cancer is stomach cancer, lung cancer (eg, non-small cell lung cancer (NSCL)), colorectal cancer (eg, colon cancer and / or rectal cancer), or basal cell cancer. The method according to any one of the above.

がんの治療のための同時又は順次使用のための、ａ）第一成分としてＡＬＤＨ阻害剤の有効量、及びｂ）第二成分として標的性薬剤の有効量を含有する医薬製品。 A pharmaceutical product comprising a) an effective amount of an ALDH inhibitor as a first component and b) an effective amount of a targeted drug as a second component for simultaneous or sequential use for the treatment of cancer.

ＡＬＤＨ阻害剤が、小分子ＡＬＤＨ阻害剤である、請求項２７に記載の医薬製品。 28. The pharmaceutical product according to claim 27, wherein the ALDH inhibitor is a small molecule ALDH inhibitor.

ＡＬＤＨ阻害剤が、ジスルフィラム又はＡＬＤＨ阻害性誘導体又はその代謝産物である、請求項２７又は２８に記載の医薬製品。 The pharmaceutical product according to claim 27 or 28, wherein the ALDH inhibitor is disulfiram or an ALDH-inhibiting derivative or a metabolite thereof.

ＡＬＤＨ阻害剤が、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミド又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項２７又は２８に記載の医薬製品。 29. The pharmaceutical product according to claim 27 or 28, wherein the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

ＡＬＤＨ阻害剤が、Ｎ，Ｎ−ジエチル［（ジエチルカルバモチオイル）ジスルファニル］カルボチオアミドである、請求項２７又は２８に記載の医薬製品。 29. A pharmaceutical product according to claim 27 or 28, wherein the ALDH inhibitor is N, N-diethyl [(diethylcarbamothioyl) disulfanyl] carbothioamide.

ＡＬＤＨ阻害剤が、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項２７又は２８に記載の医薬製品。 29. The ALDH inhibitor is 2,2′-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The pharmaceutical product described.

ＡＬＤＨ阻害剤が、２，２’−ビス（ホルミル−１，６，７−トリヒドロキシ−５−イソプロピル−３−メチルナフタレン）である、請求項２７又は２８に記載の医薬製品。 29. The pharmaceutical product according to claim 27 or 28, wherein the ALDH inhibitor is 2,2'-bis (formyl-1,6,7-trihydroxy-5-isopropyl-3-methylnaphthalene).

標的化治療薬が、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である、請求項２７から３３の何れか一項に記載の医薬製品。 34. A pharmaceutical product according to any one of claims 27 to 33, wherein the targeted therapeutic is a tyrosine kinase inhibitor (TKI).

ＴＫＩが、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、及び／又はＭＥＫ阻害剤である、請求項３４に記載の医薬製品。 35. The pharmaceutical product of claim 34, wherein the TKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, ALK inhibitor, BRAF inhibitor, ROS1 inhibitor, and / or MEK inhibitor.

ＴＫＩが、受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）である、請求項３４に記載の医薬製品。 35. The pharmaceutical product of claim 34, wherein the TKI is a receptor tyrosine kinase inhibitor (RTKI).

ＲＴＫＩが、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、及び／又はＡＬＫ阻害剤である、請求項３６に記載の医薬製品。 37. The pharmaceutical product according to claim 36, wherein the RTKI is an EGFR inhibitor, HER2 inhibitor, MET inhibitor, and / or ALK inhibitor.

阻害剤が、抗体阻害剤、小分子阻害剤、結合ポリペプチドの阻害剤、及び／又はポリヌクレオチドアンタゴニストである、請求項３４に記載の医薬製品。 35. The pharmaceutical product of claim 34, wherein the inhibitor is an antibody inhibitor, a small molecule inhibitor, an inhibitor of a binding polypeptide, and / or a polynucleotide antagonist.

ＴＫＩが、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン又はその薬学的に許容可能な塩、特に、エルロチニブである、請求項３４に記載の医薬製品。 35. TKI is N- (3-ethynylphenyl) -6,7-bis (2-methoxyethoxy) quinazolin-4-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular erlotinib. Pharmaceutical product.

ＴＫＩが、Ｎ−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）−３−クロロフェニル）−６−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）フラン−２−イル）キナゾリン−４−アミン、ジ４−メチルベンゼンスルホン酸又はその薬学的に許容可能な塩、特にラパチニブである、請求項３４に記載の医薬製品。 TKI is N- (4- (3-fluorobenzyloxy) -3-chlorophenyl) -6- (5-((2- (methylsulfonyl) ethylamino) methyl) furan-2-yl) quinazolin-4-amine 35. The pharmaceutical product according to claim 34, which is di4-methylbenzenesulfonic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular lapatinib.

ＴＫＩが、（Ｓ）−Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−３−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）イソニコチンアミド）又はその薬学的に許容可能な塩、特にＡＳ７０３０２６である、請求項３４に記載の医薬製品。 TKI is (S) -N- (2,3-dihydroxypropyl) -3- (2-fluoro-4-iodophenylamino) isonicotinamide) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular AS703026. 35. A pharmaceutical product according to claim 34.

ＴＫＩがベムラフェニブである、請求項３４に記載の医薬製品。 35. The pharmaceutical product of claim 34, wherein the TKI is vemurafenib.

ＴＫＩが、３−（（Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−５−（１−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミン又はその薬学的に許容可能な塩、特にクリゾチニブである、請求項３４に記載の医薬製品。 TKI is 3-((R) -1- (2,6-dichloro-3-fluorophenyl) ethoxy) -5- (1- (piperidin-4-yl) -1H-pyrazol-4-yl) pyridine- The pharmaceutical product according to claim 34, which is 2-amine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in particular crizotinib.

がんが、胃がん、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ）、結腸がん及び／又は直腸がん、又は基底細胞癌である、請求項２７から４３の何れか一項に記載の医薬製品。 44. The pharmaceutical product according to any one of claims 27 to 43, wherein the cancer is stomach cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer (NSCL), colon cancer and / or rectal cancer, or basal cell cancer.