JP2015530989A - 抗ｊａｇｇｅｄ抗体および使用方法 - Google Patents

抗ｊａｇｇｅｄ抗体および使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体およびそれを使用する方法を提供する。【選択図】 なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．§ １．５３（ｂ）（ｌ）の下で出願された非仮出願であり、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§ １１９（ｅ）の下で、２０１２年８月１３日に出願された米国仮出願第６１／６８２６４０号、および２０１３年３月１４日に出願された米国仮出願第６１／７８４３３２号に対する優先権を主張するものであり、これらの内容は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、配列表を含む。２０１３年８月９日に作成された、該ＡＳＣＩＩの複写は、Ｐ４９５９Ｒ１＿ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔと名付けられ、１２１，７０８バイトのサイズである。
本発明は、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体およびそれを使用する方法に関する。
Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路は、多種多様な細胞機能を調節する（Ｋｏｐａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ１３７，２１６‐２３３（２００９））。細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含む基本的な構造要素を共有する、４つのＮｏｔｃｈ受容体、すなわちＮｏｔｃｈ １〜４が、哺乳動物において特定されてきた。同様に、Ｎｏｔｃｈの標準的リガンドは、ある特定の構造類似性を共有するが、Ｎｏｔｃｈのいくつかの非古典的リガンドもまた特定されてきた（Ｋｏｐａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ１３７，２１６‐２３３（２００９））。哺乳動物における５つの標準的リガンドは、Ｄｅｌｔａ様１、Ｄｅｌｔａ様３、Ｄｅｌｔａ様４、Ｊａｇｇｅｄ１、およびＪａｇｇｅｄ２である。Ｎｏｔｃｈ受容体の細胞外ドメインへのＮｏｔｃｈリガンドの結合は、ＡＤＡＭ（ディスインテグリン・メタロプロテアーゼ）ファミリーのαセクレターゼによる細胞外Ｓ２部位におけるタンパク質分解切断で開始する、シグナル伝達カスケードを発動する。Ｓ２における切断に続いて、細胞内Ｓ３部位におけるγセクレターゼによるタンパク質分解切断が起こり、この切断が、Ｈｅｓ１およびＨｅｙ等のＮｏｔｃｈ依存性転写因子を最終的に活性化する、細胞内ドメインおよび下流の事象の始動をもたらす。
異常なＮｏｔｃｈ発現およびシグナル伝達は、がんを含むいくつかの疾患に関連付けられているので（Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６４，２７４６‐２７６２（２００７））、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の調節物質は、かかる疾患に対する可能性のある治療剤として調査されてきた。例えば、γセクレターゼ阻害剤が、臨床治験において、種々の悪性腫瘍の治療におけるそれらの有効性について試験されてきた（Ｓｈｉｈ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７，１８７９‐１８８２（２００７））。γセクレターゼ阻害剤は、Ｓ３における切断を防止し、それによって、Ｎｏｔｃｈ受容体を通じるシグナル伝達を防止する。しかしながら、γセクレターゼ阻害剤は、個々のＮｏｔｃｈファミリーメンバーを識別せず、したがって、複数の受容体を通じるシグナル伝達を一度に阻害し、同様に、無関係の経路を通じるシグナル伝達も阻害する（Ｂｅｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６５，１３１１‐１３３４（２００８））。結果的に、γセクレターゼ阻害剤の投与は、体重減少および腸杯細胞化生を特徴とする腸管毒性に関連付けられ、腸腺窩前駆細胞の増殖の維持および分泌細胞への分化の運命を阻止することによって細胞運命を決定することにおける、Ｎｏｔｃｈの役割を示している（ｖａｎ Ｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４３５：９５９−９６３（２００５）を参照されたい）。同様に、条件付きＮｏｔｃｈ遺伝子ノックアウト（Ｒｉｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｒｅｐ．９：３７７−３８３（２００８））を介したまたはアンタゴニスト抗体阻害（米国特許出願公開第２０１０／００８０８０８号）を介した、Ｎｏｔｃｈ１シグナル伝達およびＮｏｔｃｈ２シグナル伝達の両方の阻害もまた、腸杯細胞化生を引き起こす。
複数のＮｏｔｃｈ受容体の阻害剤に関連付けられる重大な毒性のために、当該技術分野において、特定の受容体を通じるシグナル伝達の標的化された阻害に対する大きな必要性が存在する。
本発明は、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体およびそれを使用する方法を提供する。
一態様において、本発明は、Ｊａｇｇｅｄ１に結合する単離抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストである。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、Ｊａｇｇｅｄ２に結合する単離抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、Ｊａｇｇｅｄ２媒介性シグナル伝達のアンタゴニストである。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を
含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、Ｊａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２（Ｊａｇｇｅｄ１／２）に結合する単離抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、Ｊａｇｇｅｄ１／２媒介性シグナル伝達のアンタゴニストである。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０
６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
本発明のある特定の実施形態において、上の実施形態のうちのいずれかは、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、上の実施形態のうちのいずれかは、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。ある特定の実施形態において、上の実施形態のうちのいずれかは、抗体断片である。
別の態様において、本発明は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインフレームワークＦＲ１、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４をさらに含む、上述の単離抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインフレームワークＦＲ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインフレームワークＦＲ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列および（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、Ｊａｇｇｅｄ１に結合する単離抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１０のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１９のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１０のＶＨ配列および配列番号１９のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列および（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１１のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号２０のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１１のＶＨ配列および配列番号２０のＶＬ配列を含む。
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨ配列および（ｂ）にあるようなＶＬ配列を含む、Ｊａｇｇｅｄ１に結合する単離抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１５のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号２４のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１５のＶＨ配列および配列番号２４のＶＬ配列を含む。
上の実施形態のうちのいずれかは、完全長ＩｇＧ１抗体であってもよい。
別の態様において、本発明は、Ｊａｇｇｅｄ１への特異的結合に対して上の実施形態のうちのいずれかと競合する単離抗体を提供する。別の態様において、本発明は、Ｊａｇｇｅｄ２への特異的結合に対して上の実施形態のうちのいずれかと競合する単離抗体を提供する。別の態様において、本発明は、上の実施形態の単離抗体をコードする単離核酸を提供する。さらなる態様において、本発明は、本抗体をコードする単離核酸を含む、宿主細胞を提供する。さらなる態様において、本発明は、抗体が産生されるように宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法を提供する。
別の態様において、本発明は、上の実施形態のうちのいずれかの抗体と、細胞傷害性薬剤とを含む、免疫複合体を提供する。
別の態様において、本発明は、上の実施形態のうちのいずれかの抗体と、薬剤的に許容される担体とを含む、医薬製剤を提供する。
別の態様において、上の実施形態のうちのいずれかの抗体は、医薬として使用するために提供される。いくつかの実施形態において、上の実施形態のうちのいずれかの抗体は、がんの治療において使用するために提供される。いくつかの実施形態において、上の実施形態のうちのいずれかの抗体は、がん細胞の増殖の低減において使用するために提供される。
別の態様において、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害する方法が提供される。一実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を体外で阻害する方法が提供される。一実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を体内で阻害する方法が提供される。
別の態様において、個体に、有効量の、上の実施形態のうちのいずれかの抗体を投与することを含む、がんを有する個体を治療する方法。一実施形態において、がんは、乳がん、肺がん、脳がん、子宮頚がん、結腸がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、皮膚がん、Ｂ細胞悪性腫瘍、およびＴ細胞悪性腫瘍からなる群から選択される。
ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１タンパク質の例となるアミノ酸配列を示す。 ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２タンパク質の例となるアミノ酸配列を示す。 （Ａ〜Ｄ）ファージ抗体ライブラリスクリーニングおよび選択に使用されるペプチドのアミノ酸配列を示す。全てのタンパク質は、ＢＥＶＳ細胞中で分泌タンパク質として発現されており、それらの配列が、Ｎ末端からＣ末端の方向で列挙される。（Ａ）発現されたタンパク質のマウスＪａｇｇｅｄ１−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（Ｑ３４−Ｄ３７７）のアミノ酸配列。Ｎ末端における太字のフォントは、短いリンカー配列（ＡＤＬＧＳ）（配列番号３１）を表す。Ｃ末端における太字のフォントは、短いリンカー配列（ＥＦＧ）、トロンビン切断部位（ＬＶＰＲＧＳ）（配列番号１３７）、Ｇスペーサ、および６−Ｈｉｓタグ（配列番号１３８）を表す。（Ｂ）発現されたタンパク質のヒトＪａｇ１−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４のアミノ酸配列。Ｊａｇ１配列のみが示されるが、この抗原はまた、Ｃ末端でＴＥＶプロテアーゼ切断部位および６−Ｈｉｓタグ（配列番号１３８）も含んだ。（Ｃ）発現されたタンパク質のマウスＪａｇ２−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（Ｍ２７−Ｅ３８８）のアミノ酸配列。Ｎ末端における太字のフォントは、短いリンカー配列（ＡＤＬＧＳ）（配列番号３１）を表す。Ｃ末端における太字のフォントは、短いリンカー配列（ＥＦＧ）、トロンビン切断部位（ＬＶＰＲＧＳ）（配列番号１３７）、Ｇスペーサ、および６−Ｈｉｓタグ（配列番号１３８）を表す。（Ｄ）発現されたタンパク質のヒトＪａｇ２−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（Ｒ２−Ｅ３８８）のアミノ酸配列。Ｃ末端における太字のフォントは、短いリンカー配列（ＥＦＧ）、トロンビン切断部位（ＬＶＰＲＧＳ）（配列番号１３７）、Ｇスペーサ、および６−Ｈｉｓタグ（配列番号１３８）を表す。 （Ａ−１〜Ｂ−２）抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の重（図４Ａ−１および図４Ａ−２）および軽（図４Ｂ−１および図４Ｂ−２）鎖可変ドメインについてのアミノ酸配列のアライメントを示す（実施例１〜２）。相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸位置が示される。 （Ａ〜Ｂ）本発明の実施において使用するための、例となるアクセプターヒト可変重（ＶＨ）コンセンサスフレームワーク配列を示す。配列識別子は、次の通りである： −Ｋａｂａｔ ＣＤＲを差し引いたヒトＶＨ下位集団Ｉコンセンサスフレームワーク「Ａ」（配列番号３２、３３、３４、３５）。 −伸長された超可変領域を差し引いたヒトＶＨ下位集団Ｉコンセンサスフレームワーク「Ｂ」、「Ｃ」、および「Ｄ」（配列番号３６、３７、３４、３５；配列番号３６、３７、３８、３５；および配列番号３６、３７、３９、３５）。 −Ｋａｂａｔ ＣＤＲを差し引いたヒトＶＨ下位集団ＩＩコンセンサスフレームワーク「Ａ」（配列番号４０、４１、４２、３５）。 −伸長された超可変領域を差し引いたヒトＶＨ下位集団ＩＩコンセンサスフレームワーク「Ｂ」、「Ｃ」、および「Ｄ」（配列番号４３、４４、４２、３５；配列番号４３、４４、４５、３５；ならびに配列番号４３、４４、４６、および３５）。 −Ｋａｂａｔ ＣＤＲを差し引いたヒトＶＨ下位集団ＩＩＩコンセンサスフレームワーク「Ａ」（配列番号４７、４８、４９、３５）。 −伸長された超可変領域を差し引いたヒトＶＨ下位集団ＩＩＩコンセンサスフレームワーク「Ｂ」、「Ｃ」、および「Ｄ」（配列番号５０、５１、４９、３５；配列番号５０、５１、５２、３５；および配列番号５０、５１、５３、３５）。 −Ｋａｂａｔ ＣＤＲを差し引いたヒトＶＨアクセプターフレームワーク「Ａ」（配列番号５４、４８、５５、３５）。 −伸長された超可変領域を差し引いたヒトＶＨアクセプターフレームワーク「Ｂ」および「Ｃ」（配列番号５０、５１、５５、３５；および配列番号５０、５１、５６、３５）。 −Ｋａｂａｔ ＣＤＲを差し引いたヒトＶＨアクセプター２フレームワーク「Ａ」（配列番号５４、４８、５７、３５）。 −伸長された超可変領域を差し引いたヒトＶＨアクセプター２フレームワーク「Ｂ」、「Ｃ」、および「Ｄ」（配列番号５０、５１、５７、３５；配列番号５０、５１、５８、３５；および配列番号５０、５１、５９、３５）。 本発明の実施において使用するための、例となるアクセプターヒト可変軽（ＶＬ）コンセンサスフレームワーク配列を示す。配列識別子は、次の通りである： −ヒトＶＬカッパ下位集団Ｉコンセンサスフレームワーク（κｖ１）：配列番号６０、６１、６２、６３ −ヒトＶＬカッパ下位集団ＩＩコンセンサスフレームワーク（κｖ２）：配列番号６４、６５、６６、６３ −ヒトＶＬカッパ下位集団ＩＩＩコンセンサスフレームワーク（κｖ３）：配列番号６７、６８、６９、６３ −ヒトＶＬカッパ下位集団ＩＶコンセンサスフレームワーク（κｖ４）：配列番号７０、７１、７２、６３。 （Ａ〜Ｆ）実施例に記載される、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体のＨ１、Ｈ２、およびＨ３重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を示す。アミノ酸位置は、下に記載されるＫａｂａｔ付番系に従って付番される。 （Ａ〜Ｅ）実施例に記載される、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体のＬ１、Ｌ２、およびＬ３軽鎖ＨＶＲ配列を示す。アミノ酸位置は、下に記載されるＫａｂａｔ付番系に従って付番される。 実施例に記載される、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の軽鎖および重鎖フレームワーク配列を示す。上付きの番号は、Ｋａｂａｔに従ったアミノ酸位置を示す。 （Ａ〜Ｂ）第１（図１０Ａ）および第２（図１０Ｂ）回目のスクリーニングから得られた抗体の結合特異性を示す。（Ａ）抗体Ｄ−１（左パネル）およびＣ−１（右パネル）の、ヒトＪａｇｇｅｄ１（ｈＪａｇ−１）、ヒトＪａｇｇｅｄ２（ｈＪａｇ−２）、マウスＪａｇｇｅｄ２（ｍＪａｇ−２）、ヒトＤｅｌｔａ様１（ｈＤＬＬ−１）、マウスＤｅｌｔａ様１（ｍＤＬＬ−１）、またはヒトＤｅｌｔａ様４（ｈＤＬＬ−４）への結合を測定する、ＥＬＩＳＡアッセイの結果。抗体濃度がｘ軸上に、およびＯＤ６５０がｙ軸上に示される。（Ｂ）抗体ＡおよびＢ（両者は、さらなるスクリーニング中に、抗体Ａに対してはヒトＪａｇ１−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（図３Ｂ）および抗体Ｂに対してはマウスおよびヒトＪａｇ２−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（図３ＣおよびＤ）を使用して特定された）の結合特異性を測定する、ＥＬＩＳＡアッセイの結果。黒色の柱＝ヒトＪａｇｇｅｄ１への結合、灰色の柱＝ヒトＪａｇｇｅｄ２への結合。Ｃ−１は、Ｊａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の両方への結合のための対照として働いた。 精製されたヒトＪａｇｇｅｄ１（ヒトＪａｇ１）、ヒトＪａｇｇｅｄ２（ヒトＪａｇ２）、およびマウスＪａｇｇｅｄ２（マウスＪａｇ２）に結合する、抗体Ａ、Ａ−１、Ａ−２、Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、およびＤ−２についての結合定数を示す。 抗Ｊａｇｇｅｄ抗体によるＮｏｔｃｈ１のＪａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達の用量依存的阻害を示す。結果は、実施例４に記載されるように、Ｎｏｔｃｈ１受容体を通じるＪａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達を測定する共培養実験から得た。ｙ軸は、対照遺伝子（ウミシイタケルシフェラーゼの発現を駆動する恒常的活性型のプロモーター）の発現と比べた、Ｎｏｔｃｈ依存性レポーター遺伝子ホタルルシフェラーゼの発現レベルを示す。ｘ軸は、抗体ＤおよびＣの濃度（０．４〜５０μｇ／ｍＬ）を示す。抗体を含まない共培養物（Ｊ１誘導性陽性対照）は、Ｊａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達のための陽性対照として働いた。アイソタイプ対照抗体は、特異的抗体阻害のための対照として働いた。γセクレターゼ阻害剤（化合物Ｅ＋）は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の阻害のための対照として使用された。 （Ａ〜Ｂ）親和性成熟抗Ｊａｇｇｅｄ抗体によるＮｏｔｃｈシグナル伝達の阻害を示す。共培養アッセイを図１２および実施例４に記載されるように行った。（Ａ）ファージ抗体およびそれらの濃度（μｇ／ｍＬ）がｘ軸上に示される（親抗体ＣおよびＤは、対照として働いた）。示される濃度のγ−セクレターゼ阻害剤（ＧＳＩ）化合物Ｅ（ＣｍｐＥ）およびＮ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェンアセチル（Ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎａｃｅｔｙｌ））−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）は、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の阻害のための陽性対照として働き、ＤＭＳＯは、ＧＳＩのためのビヒクル対照として働き、パネルにおいて試験されたアイソタイプと同じアイソタイプを有する無関係の抗体は、アイソタイプ対照として働いた。（Ｂ）示される濃度のファージ抗体がｘ軸上に示される。示される濃度のＤＡＰＴは、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達の阻害のための陽性対照として働き、ＤＭＳＯは、ビヒクル対照として働いた。シグナル伝達は、Ｊａｇｇｅｄ１（濃灰色の柱）によってまたはＪａｇｇｅｄ２（薄灰色の柱）によって誘導された。無処理＝リガンドで刺激されず、かつ抗体で処理されなかった培養物；無刺激または３Ｔ３Ｐ＝リガンドで刺激されなかった培養物；ａｇＤまたはｇＤ＝アイソタイプ対照抗体；刺激／ＡＢなしまたはＡｂなし＝リガンドで刺激されたが、抗体で処理されなかった培養物；γ−セクレターゼ阻害剤ＤＡＰＴまたはＤＭＳＯのＤＡＰＴビヒクル対照。 （Ａ〜Ｂ）Ｊａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の組み合わせた阻害が急速な体重減少を引き起こすことを示す。（Ａ）マウスに、週２回、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体Ｃ−１（抗Ｊ１／２、５〜１０ｍｐｋ）、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２（抗Ｊ１、５〜２０ｍｐｋ）、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体Ｂ−３（抗Ｊ２、５〜２０ｍｐｋ）、抗体Ａ−２およびＢ−３を一緒に（抗Ｊ１＆２、各々５ｍｐｋ）、またはアイソタイプ対照抗体（２０ｍｐｋ）を投与した。必要な場合、アイソタイプ対照抗体を用いて、各投薬の総抗体濃度を最大２０ｍｐｋにした。平均体重変化（ｙ軸）は、経時的な開始時体重のパーセンテージ（ｘ軸）としてグラフ化される。（Ｂ）Ｂａｌｂ／ｃマウス（１群当たり１０匹、個々に収容）に、週２回、３０ｍｐｋの抗ｇＤアイソタイプ対照抗体、または１５ｍｐｋの抗体Ａ−２と１５ｍｐｋの抗体Ｂ−３との組み合わせのいずれかを８日間、腹腔内注射した。摂餌を、各ケージ内で給餌および残餌を毎日計量することによって評価した。エラーバーは、標準誤差を表す（ｎ＝１０）。 （Ａ〜Ｂ）次の抗Ｊａｇｇｅｄ抗体処置の正常な腸組織像を示す。（Ａ）実施例６に記載されるように処置されたマウスの腸試料を単離し、ヘマトキシリンおよびエオシン（図１５Ａ、Ｈ＆Ｅ）で、またはアルシアンブルー（図１５Ａ、アルシアンブルー）で、染色した。（Ｂ）腸試料の切片を、リゾチームまたはＫｉ−６７のいずれかに対する一次抗体で染色した（図１５Ｂ）。 （Ａ−１〜Ｂ−２）体内での抗Ｊａｇｇｅｄ１アンタゴニスト抗体によるヒト肺がん細胞の増殖の阻害を示す。ヒト肺がん異種移植片を有するマウスに、週２回、腹腔内に（ＩＰ）２０ｍｐｋの抗ｇＤアイソタイプ対照抗体（アイソタイプ対照Ａｂ）または抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２（抗Ｊａｇ１）を注射し、この注射は、平均腫瘍体積（カリパスで測定）がおよそ１８０ｍｍ３に到達した後に開始した。腫瘍体積（ｙ軸）をその後、１９日間測定した。図１６Ａ−１および図１６Ａ−２：各群（ｎ＝１０）についての平均腫瘍体積を、経時的に（ｘ軸）、線形混合効果モデルを使用してプロットした（図１６Ａ−１）。各群中の各マウスについての腫瘍体積は、図１６Ａ−２において２つのパネルに図示される。図１６Ｂ−１および図１６Ｂ−２：各マウスの総体重を測定し、各群について（図１６Ｂ−１）または各群中の各マウスについて（図１６Ｂ−２）平均化した変化パーセンテージとしてグラフ化した。 （Ａ〜Ｂ）体内での抗Ｊａｇｇｅｄ１および抗Ｊａｇｇｅｄ２アンタゴニスト抗体によるヒト乳がん細胞の増殖の阻害を示す。ヒト乳がん異種移植片を有するＣ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤ．ｂｇマウスに、０、４、７、１２、１５、１８、２２、２５、２９、３２、３６、４３、５０、および５７日目に、抗ｇＤアイソタイプ対照抗体（抗ｇＤ）、抗ブタクサアイソタイプ対照抗体（抗ブタクサ）、ヒトＩｇＧ１骨格における抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２（抗Ｊａｇ１ Ａ−２（ｈＩｇＧ１））、マウスＩｇＧ２ａ骨格における抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２（抗Ｊａｇ１ Ａ−２（ｍＩｇＧ２ａ））、またはヒトＩｇＧ１骨格における抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体Ｂ−３（抗Ｊａｇ２ Ｂ−３（ｈＩｇＧ１））を注射した。処置群（Ａ）または個々の動物（Ｂ）の腫瘍体積（ｙ軸）を、線形混合効果モデルを使用して経時的に（ｘ軸）プロットした。
Ｉ． 定義
本明細書における目的のために、「アクセプターヒトフレームワーク」は、下に記載される、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、総計の非共有性相互作用の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示説明および例となる実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、抗体を指す。
「抗Ｊａｇｇｅｄ抗体」および「Ｊａｇｇｅｄに結合する抗体」という用語は、抗体がＪａｇｇｅｄを標的とすることにおいて診断剤および／または治療剤として有用であるように、Ｊａｇｇｅｄ１、Ｊａｇｇｅｄ２、またはＪａｇｇｅｄ１および２（Ｊａｇｇｅｄ１／２）に十分な親和性で結合することが可能である抗体を指す。一実施形態において、無関係の非Ｊａｇｇｅｄタンパク質への抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定するとき、Ｊａｇｇｅｄへの抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、異なる種由来のＪａｇｇｅｄ間で保存されるＪａｇｇｅｄのエピトープに結合する。
本明細書における「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物活性を（部分的にであれ完全にであれ）大きく阻害する抗体である。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二重特異性抗体；線状抗体（ｌｉｎｅａｒ抗体）；１本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、その抗原への参照抗体の結合を５０％以上遮断する抗体、および逆に、競合アッセイにおいて、その抗原への抗体の結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。例となる競合アッセイが本明細書に提供される。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖および／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する、抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。免役グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するもしくは阻止する、および／または細胞死もしくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）；化学療法剤もしくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；増殖阻害剤；核酸分解酵素等の酵素およびそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片および／または変異形を含む）等の毒素；ならびに下に記載される種々の抗腫瘍または抗がん薬剤が含まれるが、これらに限定されない。
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な複数回投薬量で一定期間にわたる、所望の治療的または予防的結果を達成するために有効な量を指す。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域および変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ付番方式に従う。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有する、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する、抗体を指すように交換可能に使用される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」という用語は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞および継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でない場合があるが、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態において、ＶＬについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基およびヒトＦＲからのアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体に対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を経た抗体を指す。
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が高度に変化する（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、かつ／または抗原接触残基（「抗原接触面」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。本明細書における例となるＨＶＲには、次のものが含まれる：
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）において生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３）において生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、および９３〜１０１（Ｈ３）において生じる抗原接触面（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、および９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）の組み合わせ。
別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基および他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って付番される。
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むが、これらに限定されない１個以上の異種性分子（複数可）に複合される抗体である。
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定するとき、９５％超または９９％超の純度まで精製される。抗体の純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸には、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色***置とは異なる染色***置に、存在する。
「抗Ｊａｇｇｅｄ抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１個以上の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）が含まれ、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある変異形抗体は例外であり、かかる変異形は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。故に、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明による使用対象のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法および他の例となる方法が、本明細書に記載されている。
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、医薬製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免役グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つが割り当てられ得る。
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、および／またはその使用に関する警告を含有する、治療薬の商用のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、配列同一性最大パーセントを得るのに必要な場合はギャップを導入した後に、配列同一性の部分としていかなる保存的置換も考慮に入れずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードから編集されてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用する場合は編集すべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更はない。
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、次のように算出される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡおよびＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されよう。特に別途定めのない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
「医薬製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない、調製物を指す。
「薬剤的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬剤的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「Ｊａｇｇｅｄ」または「Ｊａｇ」という用語は、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然Ｊａｇｇｅｄを指す。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＪａｇｇｅｄ、ならびに細胞内のプロセシングからもたらされるＪａｇｇｅｄの任意の形態を包含する。この用語はまた、Ｊａｇｇｅｄの自然発生変異形、例えば、スプライス変異形または対立遺伝子変異形を包含する。例となるヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２のアミノ酸配列が、それぞれ図１および２（配列番号：１〜４）に示される。
本明細書で使用されるとき、「治療」（および「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形形態）は、治療されている個体の自然過程を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に行うことができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、病状の回復または一次緩和、および寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延するために、または疾患の進行を緩徐にするために使用される。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。）抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、特定の抗原に結合する抗体を単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することが可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびに導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
ＩＩ． 組成物および方法
一態様において、本発明は、部分的に、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体およびこれらの断片の識別に基づく。ある特定の実施形態において、少なくとも１つのＪａｇｇｅｄに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、がんの診断または治療に有用である。したがって、本発明は、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体に関連する方法、組成物、キット、および製品を提供する。
Ａ． 例となる抗Ｊａｇｇｅｄ抗体
一態様において、本発明は、Ｊａｇｇｅｄに結合する単離抗体を提供する。ある特定の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体である。
一態様において、本発明は、次のものから選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を提供する：
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。
さらなる態様において、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ならびに上記の（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、および（ｆ）から選択される、少なくとも１、２、３、４、または５つのＨＶＲを含む。一実施形態において、本抗体は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、および（ｆ）を含み、（ｂ）（ｃ）、および（ｆ）に関して、次の実施形態のうちのいずれか１つ以上が企図される：ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号８２〜８３から選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号８５〜８６から選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１１２〜１１３から選択されるアミノ酸配列を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
ある特定の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体である。
一態様において、本発明は、次のものから選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を提供する：
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３。
さらなる態様において、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ならびに上記の（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、および（ｆ）から選択される、少なくとも１、２、３、４、または５つのＨＶＲを含む。一実施形態において、本抗体は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、および（ｆ）を含み、（ｃ）および（ｆ）に関して、次の実施形態のうちのいずれか１つ以上が企図される：ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号９０〜９３から選択されるアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１１７〜１２１から選択されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
ある特定の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体である。
一態様において、本発明は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体を提供する。
一実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
一実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、本発明は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体を提供する。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の実施形態において、Ｊａｇｇｅｄ１／２に特異的に結合する抗体が提供され、この抗体は、
（ａ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
（ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
上の実施形態のうちのいずれかにおいて、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。別の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、上の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、配列番号３２、３６、４０、４３、４７、５０、または５４のアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号３３、３７、４１、４４、４８、５１、または１３６のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号３４、３８、３９、４２、４５、４６、４９、５２、５３、５５、５６、５７、５８、５９のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４から選択される、少なくとも１、２、３、または４つのＦＲを含む、ＶＨをさらに含む。別の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、上の実施形態のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み、配列番号６０、６４、６７、または７０のアミノ酸配列を含むＦＲ１、配列番号６１、６５、６８、または７１のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号６２、６６、６９、または７２のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号６３または１３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４から選択される、少なくとも１、２、３、または４つのＦＲを含む、ＶＬをさらに含む。
別の態様において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、配列番号９〜１７、２９〜３０、または７３〜７６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、少なくとも１つのＪａｇｇｅｄに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。ある特定の実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。任意に、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、配列番号１１におけるＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体が提供され、この抗体は、配列番号１８〜２８または７７〜８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、少なくとも１つのＪａｇｇｅｄに結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、総計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２０において置換され、挿入され、および／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、配列番号２０におけるＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含めて、含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体が提供され、この抗体は、この抗体は、上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、および上に提供される実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１０および配列番号１９におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１１および配列番号２０におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。一実施形態において、本抗体は、それぞれ配列番号１５および配列番号２４におけるＶＨおよびＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含めて、含む。
さらなる態様において、本発明は、本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体と同じエピトープに結合する、抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号１０のＶＨ配列および配列番号１９のＶＬ配列を含む抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。別の実施形態において、配列番号１１のＶＨ配列および配列番号２０のＶＬ配列を含む抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。別の実施形態において、配列番号１５のＶＨ配列および配列番号２４のＶＬ配列を含む抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体と同じエピトープに結合する、抗体が提供される。
ある特定の実施形態において、配列番号５のマウスＪａｇ１−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４ペプチド内のエピトープに結合する、抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号６のヒトＪａｇ１−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４ペプチド内のエピトープに結合する、抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号７のマウスＪａｇ２−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４ペプチド内のエピトープに結合する、抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号８のヒトＪａｇ２−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４ペプチド内のエピトープに結合する、抗体が提供される。
さらなる態様において、本発明は、結合に対して、本明細書に提供される抗体のいずれかと競合する、抗体を提供する。
本発明のさらなる態様において、上の実施形態のうちのいずれかによる抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるインタクトなヒトＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
さらなる態様において、上の実施形態のいずれかによる抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、下の第１〜７節に記載される特長のうちのいずれをも、単独でまたは組み合わせて、組み込んでもよい。
１． 抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施形態において、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態において、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原と共に行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。目的のＦａｂを次いで一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。溶液を次いで除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）γ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）により１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラスモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用したアッセイは、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて行われる。一実施形態において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）により、供給業者の指示に従って活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、５μＬ／分の流速で注射して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注射後、１Ｍのエタノールアミンを注射して、未反応の基をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注射する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合することによって、算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。オン速度が、上の表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加
または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
２． 抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ断片、ならびに下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、国際公開第９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加した体内半減期を有する、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価性または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ（Ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）およびテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部分または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照されたい）。
抗体断片は、本明細書に記載される、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、種々の技法によって作製することができる。
３． キメラおよびヒト化抗体
ある特定の実施形態，本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）およびヒト定常領域を含む。さらなる実施例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更された、「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。任意にヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元するまたは改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、また例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載する）にさらに記載される。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、次のものが含まれるが、これらに限定されない：「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
４． ヒト抗体
ある特定の実施形態，本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載される。
ヒト抗体は、免疫原を、抗原投与に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって、調製されてもよい。かかる動物は典型的に、内因性免役グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体中に無作為に組み込まれる、ヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免役グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ ２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）を参照されたい。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載される。
ヒト抗体はまた、Ｆｖクローン可変ドメイン配列をヒト由来ファージディスプレイライブラリから単離することによって、生成されてもよい。かかる可変ドメイン配列は次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、下に記載される。
５． ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かかるライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための、多様な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、またさらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、ＭａｒｋｓおよびＢｒａｄｂｕｒｙのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、およびＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載される。
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それを次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてまたはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫された源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、体外で再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリを記載する特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、および米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、Ｊａｇｇｅｄに対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、Ｊａｇｇｅｄの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、Ｊａｇｇｅｄを発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免役グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、および１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されてもよい。
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国公開特許第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
本明細書における抗体または断片にはまた、Ｊａｇｇｅｄならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、米国公開特許第２００８／００６９８２０号を参照されたい）。
７．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列変異形は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製されてもよい。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／またはそこへ残基の挿入、および／またはその内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせを作製して、最終構築物に到達することができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
ａ） 置換、挿入、および欠失変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例となる置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについて、スクリーニングされてもよい。
［表１］
Figure 2015530989
アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って分類されてもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
置換型変異形の１つの種類は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１個以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、結果として生じる変異形（複数可）は、親抗体と比べて、ある特定の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減された免疫原性）を有することになり、および／または親抗体の、実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有することになる。例となる置換型変異形は、例えば、本明細書に記載されるもの等のファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１個以上のＨＶＲ残基が突然変異させられ、変異形抗体がファージ上で提示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
変化（例えば、置換）をＨＶＲにおいて行って、例えば、抗体親和性を改善してもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、および／または抗原に接触する残基において行われてもよく、結果として生じる変異形ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態において、多様性が、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異生成）のうちのいずれかによって、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。二次ライブラリが次いで作り出される。ライブラリは次いで、所望の親和性を有する任意の抗体変異形を特定するために、スクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）が無作為化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成またはモデリングを使用して、具体的に特定されてもよい。特にＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３が、しばしば標的とされる。
ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる変化が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変化（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。かかる変化は、例えば、ＨＶＲにおける抗原接触残基の外側にあってもよい。上に提供される変異形ＶＨおよびＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲは、変化させられないか、または１つ、２つ、もしくは３つを超えるアミノ酸置換を含有することはないかのいずれかである。
突然変異生成のための標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載される、「アラニンスキャニング変異生成」と呼ばれるものである。この方法において、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ等の荷電残基）のうちのある残基または基が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の場所に導入されてもよい。代替的に、または追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定される。かかる接触残基および隣接する残基は、置換の候補として標的とされるか、または排除されてもよい。変異形をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定してもよい。
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型変異形には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端もしくはＣ末端への融合が含まれる。
ｂ） グリコシル化変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化させられる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、好都合に遂行されてもよい。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物が変化させられてもよい。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、一般にＮ−結合によって、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖類には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。いくつかの実施形態において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体変異体を作り出すために行われてもよい。
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）結合されるフコースを欠いた炭水化物構造を有する、抗体変異形が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定するとき、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計と比べた、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置する。かかるフコシル化変異形は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異形に関連する刊行物の例としては、米国公開特許第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国公開特許第２００３／０１１５６１４号、米国公開特許第２００２／０１６４３２８号、米国公開特許第２００４／００９３６２１号、米国公開特許第２００４／０１３２１４０号、米国公開特許第２００４／０１１０７０４号、米国公開特許第２００４／０１１０２８２号、米国公開特許第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株
の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ ２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ）、および国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号（Ａｄａｍｓら、特に実施例１１で）、およびα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）が挙げられる。
二分されたオリゴ糖類を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分される、抗体変異形がさらに提供される。かかる抗体変異形は、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、および米国公開特許第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有する、抗体変異形もまた提供される。かかる抗体変異形は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、および国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
ｃ） Ｆｃ領域変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域変異形を生成してもよい。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。
ある特定の実施形態において、本発明は、いくつかのエフェクター機能を保有するが、全てのエフェクター機能は保有せず、それにより、体内での抗体の半減期が重要であるが、なおもある特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣ等）が不必要または有害である場合の適用に対する望ましい候補となる、抗体変異形を企図する。体外および／または体内細胞傷害性アッセイを実行して、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、およびＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するための体外アッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的に、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、体内で、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるもの等の動物モデルにおいて、評価されてもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイをまた行って、抗体がＣ１ｑに結合不可能であり、よってＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）、およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合および体内クリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、および３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、アラニンへの残基２６５および２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、および３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる。
ＦｃＲへの改善されたまたは減少した結合を有する、ある特定の抗体変異形が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、国際公開第２００４／０５６３１２号、およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
ある特定の実施形態において、抗体変異形は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、および／または３３４位（残基のＥＵ付番）における置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、変化した（すなわち、改善されたかまたは減少したかのいずれか）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域において行われる。
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、増加した半減期および新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、米国公開特許第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載される。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異形には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
また、Ｆｃ領域変異形の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、および国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
ｄ） システイン操作された抗体変異形
ある特定の実施形態において、抗体の１個以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオＭａｂ」を作り出すことが望ましい場合がある。特に実施形態において、置換残基は、抗体の利用しやすい部位において生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基はそれによって、抗体の利用しやすい部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分に複合して、本明細書にさらに記載される、免疫複合体を作り出してもよい。ある特定の実施形態において、次の残基のうちの任意の１個以上が、システインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成されてもよい。
ｅ） 抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐していても非分岐であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は、様々であってもよく、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、改善対象の抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうか等を含むが、これらに限定されない考慮に基づいて、決定することができる。
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体および非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５（２００５）である。放射線は、任意の波長のものであってもよく、一般の細胞を害さないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
Ｂ． 組換え法および組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組換え法および組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態において、本明細書に記載される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の組換え産生のために、例えば、上述の、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、慣例の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されてもよい。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離されてもよく、またさらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌および酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、およびＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されてきた。
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬ抗体（商標）技術を記載している）を参照されたい。
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で増殖するように適合される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される、２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載される、ＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝がん細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載される、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞がある。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０、およびＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
Ｃ． アッセイ
本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体は、それらの物理／化学特性および／または生物活性について、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
１． 結合アッセイおよび他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、またはウェスタンブロット等の既知の方法によって、試験される。
別の態様において、競合アッセイを使用して、ヒトまたはマウスＪａｇｇｅｄ１への結合に対して抗体Ａ、Ａ−１、Ａ−２、Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、およびＤ−５と競合する抗体を特定してもよい。別の態様において、競合アッセイを使用して、ヒトまたはマウスＪａｇｇｅｄ２への結合に対して抗体Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、およびＤ−５と競合する抗体を特定してもよい。ある特定の実施形態において、かかる競合抗体は、Ａ、Ａ−１、Ａ−２、Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、またはＤ−５によって結合される、同じエピトープ（例えば、直線状または立体配座エピトープ）に結合する。
抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例となる方法は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６におけるＭｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
例となる競合アッセイにおいて、固定化されたＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２は、Ｊａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２に結合する第１の標識抗体（例えば、Ａ、Ａ−１、Ａ−２、Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、またはＤ−５）、およびＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２への結合に対して第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体を含む、溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２が、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない、溶液中でインキュベートされる。Ｊａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の非結合抗体が除去され、固定化されたＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２に関連する標識の量が測定される。固定化されたＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２に関連する標識の量が、対照試料と比べて試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２への結合に対して第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
２． 活性アッセイ
一態様において、生物活性を有するその抗Ｊａｇｇｅｄ抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物活性には、例えば、Ｎｏｔｃｈ１を通じたＪａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達の阻害等の、Ｎｏｔｃｈ受容体を通じたＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２誘導性細胞シグナル伝達の阻害が含まれてもよい。例となるアッセイが実施例に提供される。ある特定の他の実施形態において、本発明の抗体は、Ｊａｇｇｅｄ１誘導性Ｎｏｔｃｈシグナル伝達に応答性であるレポーター遺伝子の発現を阻害するその能力について試験される。例となるアッセイが実施例に提供される。ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、かかる生物活性について試験される。体内および／または体外でかかる生物活性を有する抗体もまた提供される。
Ｄ． 免疫複合体
本発明はまた、本明細書において、化学療法剤もしくは化学療法薬、増殖阻害性薬剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体等の、１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体を含む、免疫複合体も提供する。
一実施形態において、免疫複合体は、抗体が、メイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、および欧州特許第ＥＰ ０ ４２５ ２３５ Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥおよびＤＦ（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号および同第５，７８０，５８８号、ならびに同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、および同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）；ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、および米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン；ドタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、およびオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）等のタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない１つ以上の薬物に複合される、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）である。
別の実施形態において、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、アレウリテス・フォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）を含むが、これらに限定されない、酵素活性毒素またはその断片に複合される、本明細書に記載される抗体を含む。
別の実施形態において、免疫複合体は、放射性原子に複合されて放射性物質複合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成する、本明細書に記載される抗体を含む。放射性物質複合体の産生のために、多様な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性物質複合体が検出に使用されるとき、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍまたはＩ１２３、または、再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄等の、核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピン標識を含んでもよい。
抗体および細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ−コハク酸イミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムンゾイル等）−エチレンジアミン）、ジイソシアン酸塩（トルエン２，６−ジイソシアン酸塩等）、およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）等の多様な二機能性タンパク質結合剤を使用して作製されてもよい。例えば、リシン免疫毒素をＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの複合のための、例となるキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞内での細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用されてもよい。
本明細書における免疫複合体（ｉｍｍｕｎｕｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）またはＡＤＣは、（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）市販されている、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、およびスルホ−ＳＭＰＢ、およびＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されないクロスリンカー試薬により調製される、かかる複合体を明示的に企図するが、これらに限定されない。
Ｅ． 診断および検出のための方法および組成物
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体のいずれも、生体試料中のＪａｇｇｅｄ１の存在を検出するために有用である。ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体のいずれも、生体試料中のＪａｇｇｅｄ２の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される「検出すること」という用語は、定量または定性検出を包含する。ある特定の実施形態において、生体試料は、癌性組織等の、細胞または組織を含む。
一実施形態において、診断または検出方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ抗体が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＪａｇｇｅｄ１の存在を検出する方法が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＪａｇｇｅｄ２の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、生体試料を、本明細書に記載される抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体または抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体と、それぞれＪａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２への抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体または抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、複合体が、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体とＪａｇｇｅｄ１との間で、または抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体とＪａｇｇｅｄ２との間で形成されるかどうかを検出することとを含む。かかる方法は、体外方法であっても、体内方法であってもよい。一実施形態において、例えば、Ｊａｇｇｅｄ１が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を使用して、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体での治療法にふさわしい対象を選択する。一実施形態において、例えば、Ｊａｇｇｅｄ２が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を使用して、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体での治療法にふさわしい対象を選択する。
本発明の抗体を使用して診断され得る例となる障害には、がん、例えば、乳がん、肺がん、脳がん、子宮頚がん、結腸がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、皮膚がん、Ｂ細胞悪性腫瘍、およびＴ細胞悪性腫瘍が含まれる。
ある特定の実施形態において、標識された抗Ｊａｇｇｅｄ抗体が提供される。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、および放射性標識等）、ならびに例えば、酵素反応または分子相互作用を通じて、間接的に検出される酵素またはリガンド等の部分が含まれるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセインおよびその誘導体等のフルオロフォア、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。
Ｆ． 医薬製剤
本明細書に記載される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の医薬製剤抗は、所望の程度の純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意の薬剤的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、調製される。薬剤的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量および濃度で、受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム等；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免役グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート薬剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬剤的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例となるｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上
の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
例となる凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号および国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
本明細書における製剤はまた、治療されている特定の適応症に対する必要に応じて、１つを超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。例えば、細胞傷害性薬剤、例えば、化学療法剤をさらに提供することが望ましい場合がある。かかる活性成分は、意図される目的のために有効である量で組み合わされて、好適に存在する。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）中またはマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、封入されてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
体内投与のために使用されるべき製剤は、一般に滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に遂行され得る。
Ｇ． 治療方法および組成物
本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体のいずれも、治療方法において使用され得る。
一態様において、医薬として使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ抗体が提供される。さらなる態様において、異常なＮｏｔｃｈシグナル伝達に関連する疾患または障害、例えば、がんの治療において使用するための、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体が提供される。ある特定の実施形態において、治療法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、がんを有する個体に有効量の抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を投与することを含む、がんを有する個体を治療する方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を提供する。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。さらなる態様において、がんの治療において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体が提供される。ある特定の実施形態において、治療の方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、がんを有する個体に有効量の抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を投与することを含む、がんを有する個体を治療する方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を提供する。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
さらなる実施形態において、本発明は、肺がんの増殖を阻害することにおいて使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、個体に、肺がんの増殖を低減するために有効である抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を投与することを含む、個体における肺がんの増殖を低減する方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、個体に、肺がんの増殖を低減するために有効である抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を投与することを含む、個体における肺がんの増殖を低減する方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、個体に、乳がんの増殖を低減するために有効である抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を投与することを含む、個体における乳がんの増殖を低減する方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、個体に、乳がんの増殖を低減するために有効である抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を投与することを含む、個体における乳がんの増殖を低減する方法において使用するための抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を提供する。上の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造または調製における、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の使用を提供する。一実施形態において、医薬は、異常なＮｏｔｃｈシグナル伝達に関連する疾患または障害の治療のためのものである。一実施形態において、医薬は、がんの治療のためである。さらなる実施形態において、医薬は、がんを有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、がんを治療する方法において使用するためのものである。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、下に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。上の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様において、本発明は、異常なＮｏｔｃｈシグナル伝達に関連する疾患または障害を治療する方法を提供する。一実施形態において、本方法は、かかる疾患または障害を有する個体に、有効量の抗Ｊａｇｇｅｄ抗体を投与することを含む。一実施形態において、本方法は、がんを有する個体に、有効量の抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。一実施形態において、本方法は、がんを有する個体に、有効量の抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。上の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
さらなる態様において、本発明は、個体においてがん細胞の増殖を阻害するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、個体に、がん細胞の増殖を阻害するための有効量の抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体または抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体を投与することを含む。一実施形態において、「個体」は、ヒトである。
さらなる態様において、本発明は、例えば、上の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体のいずれかを含む、医薬製剤を提供する。一実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体のいずれかと、薬剤的に許容される担体とを含む。別の実施形態において、医薬製剤は、本明細書に提供される抗Ｊａｇｇｅｄ抗体のいずれかと、例えば、下に記載される、少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
本発明の抗体は、治療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。ある特定の実施形態において、追加の治療剤は、細胞傷害性薬剤である。ある特定の実施形態において、追加の治療剤は、抗体である。
上述のかかる併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、および別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤（単数または複数）の投与の前、それと同時、および／またはその後に生じ得る。一実施形態において、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の投与および追加の治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。本発明の抗体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明の抗体（および任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、および鼻腔内、ならびに局所両方のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路による、例えば、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内または皮下注射等の、注射によるものであり得る。単回または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における考慮の要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、および医療従事者に既知の他の要因が含まれる。抗体は、必要ではないが、任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、および上に考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路により、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量で、任意の経路によって、使用される。
疾患の予防または治療のために、本発明の抗体の適切な投薬量（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）は、治療対象の疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度および経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、患者の病歴および抗体への反応、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。抗体は、患者に、１回で、または一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類および重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によってであれ、連続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者への投与のための初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。病態に応じて数日間またはより長い日数にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。抗体の１つの例となる投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。故に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与されてもよい。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、または例えば、約６回用量を受容するように）投与されてもよい。初回のより高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてもよい。例となる投薬レジメンは、約４ｍｇ／ｋｇの抗体の初回の負荷用量、続いて約２ｍｇ／ｋｇの抗体の毎週の維持用量を投与することを含む。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合がある。この治療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって容易に監視される。
上の製剤または治療方法のうちのいずれも、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の代わりにまたはそれに加えて、本発明の免疫複合体を使用して行われ得ることが理解される。
Ｈ． 製品
本発明の別の態様において、上述の障害の治療、予防、および／または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。製品は、容器、および容器上のまたは容器と関連したラベルまたは添付文書を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、組成物を、それ自体で、または病態を治療する、予防する、および／もしくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保有し、また滅菌アクセスポートを有し得る（例えば容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選定した病態を治療するために使用されることを表示する。さらに、製品は、（ａ）組成物がその中に含有された第１の容器（この組成物は本発明の抗体を含む）、および（ｂ）組成物がその中に含有された第２の容器（この組成物はさらなる細胞傷害性薬剤または治療剤を含む）を含んでもよい。本発明のこの実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを表示する、添付文書をさらに含んでもよい。代替的に、または追加的に、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液および、デキストロース溶液等の、薬剤的に許容される緩衝液を含む、第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
上の製品のうちのいずれも、抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の代わりにまたはそれに加えて、本発明の免疫複合体を含んでもよいことが理解される。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法および組成物の実施例である。上に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
実施例１．抗Ｊａｇｇｅｄ抗体の生成。
ａ． 抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体を特定するためのライブラリ選別およびスクリーニング
ヒトＩｇＧレパートリーの天然の多様性を模倣する、選択された相補性決定領域において合成の多様性を有するヒトファージ抗体ライブラリを、Ｍ１３バクテリオファージ粒子の表面上で提示されたＦａｂ断片のパンニングに使用した。ヒトＪａｇ１−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（配列番号６）またはヒトＪａｇ２−ＤＳＬ−ＥＧＦ１−４（配列番号８）をライブラリ選別のための抗原として使用した。Ｎｕｎｃ ９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐイムノプレートを４℃で一晩、標的抗原（１０μｇ／ｍＬ）でコーティングし、それを室温で１時間、ファージブロッキング緩衝液ＰＢＳＴ（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、および１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、および０．０５％（ｖ／ｖ）ｔｗｅｅｎ−２０）によりブロッキングした。抗体ファージライブラリＶＨ（例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２８４：１１９−１３２（２００４）を参照されたい）およびＶＨ／ＶＬ（Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＪＭＢ．３６６：８１５−８２９（２００７）を参照されたい）を抗原プレートに別個に添加し、室温で一晩インキュベートした。翌日、抗原コーティングプレートをＰＢＴ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ）で１０回洗浄し、結合したファージを５０ｍＭ ＨＣｌおよび５００ｍＭ ＮａＣｌで３０分間溶出し、等体積の１Ｍトリス塩基（ｐＨ７．５）で中和した。回収されたファージを大腸菌ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞中で増幅した。後続の選択ラウンドの間、抗原コーティングプレートとの抗体ファージのインキュベーションを２〜３時間まで減少させ、プレート洗浄のストリンジェンシーを徐々に増加させた。
４回のパンニング後、かなりの濃縮が観察された。９６個のクローンを各々ＶＨおよびＶＨ／ＶＬライブラリ選別から選んで、それらがヒトＪａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２に特異的に結合するかどうかを決判定した。これらのクローンの可変領域をＰＣＲで配列決定して、固有の配列クローンを特定した。ファージ抗体の親和性を、スポット競合ＥＬＩＳＡを使用して順位付けした。ファージ抗体ＩＣ５０値を、競合ファージ結合ＥＬＩＳＡを使用してさらに決定した。ヒトＪａｇｇｅｄ１に特異的に結合する（かつＪａｇｇｅｄ２に結合しない）、Ｊａｇｇｅｄ２に特異的に結合する（かつＪａｇｇｅｄ１に結合しない）、またはＪａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の両方に特異的に結合する、固有のファージ抗体を選定し、体外細胞アッセイにおける評価のために完全長ＩｇＧに再配列した。
目的のクローンを、個々のクローンのＶＬおよびＶＨ領域を、それぞれ、ヒトカッパ定常ドメインを含有するｐＲＫ哺乳類細胞発現ベクター（ｐＲＫ．ＬＰＧ３．ヒトカッパ）、および完全長ヒトＩｇＧ１定常ドメインをコードする発現ベクター（ｐＲＫ．ＬＰＧ４．ヒトＨＣ）中にクローニングすることによって、ＩｇＧへと再配列した（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０００；２７６：６５９１−６６０４）。抗体を次いで哺乳類ＣＨＯ細胞中にて一過性で発現させ、プロテインＡカラムで精製した。
ｂ． ＶＨまたはＶＨＶＬライブラリに由来するクローンの親和性改善のためのライブラリの構築物
ファージミドｐＶ０３５０−２ｂに由来する、ファージミドｐＷ０７０３（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ３４０，１０７３−１０９３（２００４）、全てのＣＤＲ−Ｌ３位置に停止コドン（ＴＡＡ）を含有し、Ｍ１３バクテリオファージの表面上で一価型Ｆａｂを提示する）は、親和性成熟のためにＶＨライブラリからの目的のクローンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）をグラフティングするための、ライブラリテンプレートとして働いた。ハードランダム化戦略およびソフトランダム化戦略の両方を、親和性成熟のために使用した。ハードランダム化のために、３つの軽鎖ＣＤＲの選択された位置を有する１つの軽鎖ライブラリを、天然ヒト抗体を模倣するように設計されたアミノ酸を使用してランダム化し、設計されたＤＮＡ縮重は、Ｌｅｅら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ３４０，１０７３−１０９３（２００４））に記載される通りであった。選択された位置でおよそ５０％の突然変異率を導入した、ソフトランダム化条件を達成するために、野生型ヌクレオチドを選好する塩基の７０−１０−１０−１０混合物により突然変異原性ＤＮＡを合成した（Ｇａｌｌｏｐ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７：１２３３−１２５１（１９９４））。ソフトランダム化のために、ＣＤＲ−Ｌ３の９１〜９６位、ＣＤＲ−Ｈ１の３０〜３３、３５位、ＣＤＲ−Ｈ２の５０、５２、５３〜５４、および５６位、ＣＤＲ−Ｈ３の９５〜９８位の残基を標的とし、ＣＤＲループの３つの異なる組み合わせＨ１／Ｌ３、Ｈ２／Ｌ３、およびＨ３／Ｌ３をランダム化のために選択した。
ＶＨＶＬライブラリに由来したクローンのために、各ＣＤＲに４つの停止コドン（ＴＡＡ）を含有し、Ｍ１３バクテリオファージの表面上で一価型Ｆａｂを提示するファージミドを、個々に生成し、それらは、親和性成熟ライブラリの構築のためのクンケル突然変異生成のためのテンプレートとして働いた。ＣＤＲ−Ｌ３の多様性がナイーブライブラリ中に構築されたため、ソフトランダム化戦略のみを、ＶＨＶＬライブラリに由来するクローンのために使用した。ソフトランダム化条件を達成するために、ＣＤＲ−Ｌ１の２８−３１位、ＣＤＲ−Ｌ２の５０、５３〜５５位、ＣＤＲ−Ｌ３の９１〜９６位、ＣＤＲ−Ｈ１の３０〜３５位、ＣＤＲ−Ｈ２の５０〜５６位、ＣＤＲ−Ｈ３の９５−１００位の残基を標的とし、ＣＤＲループの４つの異なる組み合わせＨ１／Ｌ３＊、Ｈ２／Ｌ３＊、ならびにＨ３／Ｌ３＊およびＬ１／Ｌ２／Ｌ３＊（ここで＊は、テンプレート上の停止コドンの位置を表す）をランダム化のために選択した。
ｃ．親和性改善を生じさせるためのファージ選別戦略
親和性改善選択のために、Ｊａｇ１またはＪａｇ２抗原を最初に、限定試薬条件下でビオチン化した。ファージライブラリを１回のプレート選別、およびストリンジェンシーを増加させながら５回の溶液選別に供した。第１回目のプレート選別について、１０ｕｇ／ｍＬ抗原を最初にＭａｘｉｓｏｒｐプレート上にコーティングし、ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中１％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）でプレブロッキングした。ブロッキング緩衝液中、３光学濃度／ｍＬのファージ投入物を、抗原プレートに３時間インキュベートした。ウェルをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で１０回洗浄した。結合したファージを１５０μＬ／ウェルの５０ｍＭ ＨＣｌ、５００ｍＭ ＫＣｌで３０分間溶出し、その後５０μＬ／ウェルの１Ｍトリス（ｐＨ８）で中和し、滴定し、次のラウンドのために繁殖させた。後続のラウンドについて、ファージライブラリのパンニングを溶液相中で行い、ここでファージライブラリを、１％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）および０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する１００μＬの緩衝液中、１００ｎＭビオチン化標的タンパク質（この濃度は、親クローンファージのＩＣ５０値に基づく）と共に、室温で２時間インキュベートした。混合物を１％Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋでさらに１０回希釈し、１００μＬ／ウェルをニュートラアビジンコーティングウェル（１０μｇ／ｍＬ）に室温で３０分間、穏やかに振盪しながら適用した。バックグラウンド結合を決定するために、ファージを含有する対照ウェルを、ニュートラアビジンコーティングプレート上に捕捉した。結合したファージを次いで、第１回目について記載されるように洗浄し、溶出し、繁殖させた。さらに５回の溶液選別を、選択ストリンジェンシーを増加させながら行った。このうちの最初の１、２回は、ビオチン化標的タンパク質濃度を１００ｎＭから０．１ｎＭまで減少させることによる、オン速度選択のためのものであり、このうちの最後の２回は、室温で過剰量の非ビオチン化標的タンパク質（３００〜１０００倍多い）を添加して、より弱い結合剤を打ち負かすことによる、オフ速度選択のためのものである。
ｄ．高処理親和性スクリーニングＥＬＩＳＡ（単一スポット競合）
コロニーを６回目のスクリーニングから選んだ。コロニーを３７℃で一晩、９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）中、５０μｇ／ｍＬのカルベニシリンおよび１×１０１０／ｍＬ個のＭ１３ＫＯ７を含む、１５０μＬ／ウェルの２ＹＴ培地中で増殖させた。同じプレートから、ＸＬ−１感染親ファージのコロニーを対照として選んだ。９６ウェルのＮｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを、ＰＢＳ中１００μＬ／ウェルのＪａｇ１またはＪａｇ２のいずれか（０．５μｇ／ｍＬ）で、４℃で一晩コーティングした。プレートを、ＰＢＳ ２０中１５０μＬの１％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で１時間ブロッキングした。
３５μＬのファージ上清を、５ｎＭ Ｊａｇ１またはＪａｇ２を含むまたは含まない、７５μＬのＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）緩衝液（０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）中で希釈し、Ｆプレート（ＮＵＮＣ）中にて、室温で１時間インキュベートさせた。９５μＬの混合物を抗原コーティングプレートに並べて移した。プレートを１５分間穏やかに振盪し、ＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０で１０回洗浄した。結合を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合化抗Ｍ１３抗体を添加することによって定量し（１：２５００）、室温で３０分間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０で１０回洗浄した。次に、１００μＬ／ウェルのペルオキシダーゼ基質をウェルに添加し、室温で５分間インキュベートした。反応を、１００μＬの０．１Ｍリン酸（Ｈ３ＰＯ４）を各ウェルに添加することによって停止させ、室温で５分間インキュベートさせた。各ウェル中、黄色のＯ．Ｄ．（光学濃度）を、４５０ｎｍで標準ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して決定した。親ファージ（１００％）のウェルのＯＤ４５０ｎｍ低下（％）と比較して、５０％未満のＯＤ４５０ｎｍ低下（％）を有したクローンを配列分析のために選んだ。固有のクローンをファージ調製のために選択して、それぞれの親クローンと比較することによってＪａｇ１またはＪａｇ２のいずれかに対する結合親和性（ファージＩＣ５０）を決定した。次いで最も親和性が改善されたクローンを、抗体産生ならびにさらなるＢＩＡｃｏｒｅ結合動態測定分析および他の体外または体内アッセイのために、ヒトＩｇＧ１へと再配列した。
実施例２．Ｊａｇｇｅｄ１またはＪａｇｇｅｄ２抗原に対して生成された抗体の特異的結合。
抗体Ｄ−１（図１０Ａ、左パネル）およびＣ−１（図１０Ａ、右パネル）を、組換え精製ＮｏｔｃｈリガンドであるヒトＪａｇｇｅｄ１（ｈＪａｇ−１）、ヒトＪａｇｇｅｄ２（ｈＪａｇ−２）、マウスＪａｇｇｅｄ２（ｍＪａｇ−２）、ヒトＤｅｌｔａ様１（ｈＤＬＬ１）、マウスＤｅｌｔａ様１（ｍＤＬＬ１）、およびヒトＤｅｌｔａ様４（ｈＤＬＬ４）への結合について、標準的な酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して試験した。ヒトＪａｇｇｅｄ１、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２、ヒトおよびマウスＤｅｌｔａ様１（ＤＬＬ−１）を含む、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１μｇ／ｍＬのＮｏｔｃｈリガンドタンパク質を、ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐ）上に４０℃で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳ中カゼインブロッカー（Ｐｉｅｒｃｅ）で、室温にて１時間ブロッキングした。ＰＢＳＴ緩衝液（０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むＰＢＴ緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０））中、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２ ＩｇＧの３倍段階希釈液をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを次いでＰＢＳＴで洗浄し、結合した抗体を、ＩｇＧ特異的ペルオキシダーゼ複合化ヤギ抗ヒトＦａｂ（Ｓｉｇｍａ）で検出した。ＴＭＢ基質（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）を使用し、６５０ｎＭでの吸光度を、標準ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して読み取った。吸光度を、ＩｇＧの濃度に対して、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用してプロットした。図１０Ａは、結果を図示し、このうちｙ軸上のＯＤ４５０が結合の程度を表す。実施例１に記載される１回目の抗体スクリーニングにおいて得られた抗体のうちの何一つとして、Ｊａｇｇｅｄ１のみまたはＪａｇｇｅｄ２のみを選択的に認識するものはなかった。Ｄ−１は、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１ならびにヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２を結合する（図１０Ａ、左パネル、データは示されず）。Ｃ−１は、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２、ならびにヒトおよびマウスＤｅｌｔａ様１を結合する（図１０Ａ、右パネル、データは示されず）。いずれの抗体もヒトＤｅｌｔａ様４に結合することはなかった。
さらなるスクリーニングラウンドは、ＥＬＩＳＡによって決定するとき、Ｊａｇｇｅｄファミリーメンバーのうちの１つのみに特異的な抗体を特定した。抗体Ａは、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１を結合したが、Ｊａｇｇｅｄ２は結合しなかった（図１０Ｂ）。逆に、抗体Ｂは、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２を結合したが、Ｊａｇｇｅｄ１は結合しなかった（図１０Ｂ）。Ｃ−１は、Ｊａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の両方への結合のための対照として働いた。
実施例３．抗体結合親和性およびエピトープマッピング。
抗Ｊａｇｇｅｄ１／２ファージ抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００器具を使用して表面プラスモン共鳴（ＳＲＰ）によって測定した。抗Ｊａｇｇｅｄ１／２ファージヒトＩｇＧｓを、ＣＭ５センサチップ上にコーティングしたマウス抗ヒトＩｇＧによって捕捉して、およそ１５０個の応答単位（ＲＵ）を達成した。動態測定のために、ヒトまたはマウスＪａｇ１／２ ＤＳＬ＿ＥＧＦ１−４の２倍段階希釈液（１．９５ｎＭ〜２５０ｎＭ）を、２５℃でＰＢＴ緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）中にて、３０ｍＬ／分の流速で注射した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して算出した。平衡解離定数（ｋｄ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。
図１１は、精製されたヒトＪａｇｇｅｄ１、ヒトＪａｇｇｅｄ２、およびマウスＪａｇｇｅｄ２に結合する、抗体Ａ、Ａ−１、Ａ−２、Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、Ｂ−４、Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、およびＤ−２についての結合定数を要約する。親抗体Ａは、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１に特異的に結合した（図１１、データは示されず）。親和性成熟抗体Ａ−１およびＡ−２は、高い親和性でヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１の両方を結合した（図１１）。抗体Ａ、Ａ−１、およびＡ−２は、ヒトまたはマウスＪａｇｇｅｄ２を結合しなかった（図１１）。逆に、抗体Ｂ、Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、またはＢ−４のうちの何一つとして、ヒトまたはマウスＪａｇｇｅｄ１を結合するものはなかった。親和性成熟抗体Ｂ−１、Ｂ−２、Ｂ−３、またはＢ−４は、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２に特異的に結合した（図１１、データは示されず）。抗体Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、およびＤ−５は、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の両方に結合した。（図１１）。Ｊａｇｇｅｄ１に関して、抗体Ｃ、Ｃ−１、Ｄ、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、およびＤ−５の結合を、ＥＬＩＳＡ交差遮断（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）実験を使用して、Ｊａｇｇｅｄ１のＤＳＬ−ＥＧＦ１−４断片にマッピングした。
実施例４．抗Ｊａｇｇｅｄアンタゴニスト抗体は、体外でＪａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達を阻害する。
抗Ｊａｇｇｅｄ抗体がＪａｇｇｅｄ誘導性Ｎｏｔｃｈシグナル伝達のアンタゴニストとして作用し得るかどうかを決定するために、共培養実験を、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４６４，１０５２−１０５７（１５ Ａｐｒｉｌ ２０１０）によって記載されるように本質的に行った。ＮｏｔｃｈリガンドとしてＪａｇｇｅｄ１を発現するように操作されたＮＩＨ−３Ｔ３細胞を、Ｎｏｔｃｈ１を安定に発現する、ならびにＮｏｔｃｈ応答性ＴＰ−１（１２Ｘ ＣＳＬ）ホタルルシフェラーゼレポーターおよび恒常的に発現されるウミシイタケルシフェラーゼレポーター（ｐＲＬ−ＣＭＶ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を発現するように一過性でトランスフェクトされた、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞と共培養した。強力なＮｏｔｃｈレポーターシグナル（ホタルルシフェラーゼ）が、共培養物中で観察された（図１２、Ｊ１誘導性陽性対照）。γ−セクレターゼ阻害剤を共培養に添加したとき（図１２、化合物Ｅ＋）、レポーター発現は、バックグラウンドレベルまで低減され、これはレポーター構築物のＮｏｔｃｈ依存性発現を実証している。
漸増量（０．４〜５０μｇ／ｍＬ）の抗Ｊａｇｇｅｄ抗体ＣまたはＤの添加は、レポーター発現の用量依存的阻害をもたらした（図１２、ＣおよびＤをＪ１誘導性陽性対照と比較されたい）。対照的に、ＪａｇｇｅｄまたはＮｏｔｃｈを認識しないアイソタイプ対照抗体は、レポーター遺伝子発現を有意に低減しなかった（図１２、Ａｂアイソタイプ対照）。まとめると、これらの結果は、抗体ＣおよびＤがアンタゴニストとして作用する、すなわち、Ｎｏｔｃｈ受容体Ｎｏｔｃｈ１を通じたＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を用量依存的様態で阻害することを実証する。
同様の結果を、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を阻害する抗体の能力について上述の共培養アッセイにおいて試験された、親和性成熟した抗体で得た。それぞれの親抗体ＣおよびＤのように、親和性成熟した抗体Ｃ−１、Ｄ−１、Ｄ−２、Ｄ−３、Ｄ−４、およびＤ−５は、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を用量依存的様態で阻害したが、一方でアイソタイプ対照については何の阻害も観察されなかった（図１３Ａ）。
実施例５．抗Ｊａｇｇｅｄアンタゴニスト抗体は、体外でＪａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達を阻害する。
抗体ＣおよびＤ、ならびにそれらのそれぞれの親和性の成熟した子孫は、ヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ１、ならびにヒトおよびマウスＪａｇｇｅｄ２の両方に結合する（例えば、図１０Ａ）。Ｊａｇｇｅｄ１のみまたはＪａｇｇｅｄ２のみに選択的な抗体が、それぞれＪａｇｇｅｄ１および／または２誘導性Ｎｏｔｃｈシグナル伝達を選択的に阻害し得るかどうかを決定するために、実施例４に記載される共培養実験をＪａｇｇｅｄ１特異的抗体Ａ−２またはＪａｇｇｅｄ２特異的抗体Ｂ−３により反復した。シグナル伝達をＪａｇｇｅｄ１（図１３Ｂ、濃灰色の柱）によってまたはＪａｇｇｅｄ２（図１３Ｂ、薄灰色の柱）によって誘導させ、阻害を、実施例４に記載されるように、０．０１６〜５０μｇ／ｍＬの濃度の抗体を使用して決定した。対照には、リガンドで刺激されず、かつ抗体で処理されなかった培養物（図１Ｂ３、無処理）、リガンドで刺激されなかった培養物（図１３Ｂ、無刺激または３Ｔ３Ｐ）、５〜１０μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照抗体で処理された培養物（図１３Ｂ、ａｇＤまたはｇＤ）、リガンドで刺激されたが、抗体で処理されなかった培養物（刺激／ＡＢなしまたはＡｂなし）、５μＭのγ−セクレターゼ阻害剤ＤＡＰＴまたはＤＭＳＯのＤＡＰＴビヒクル対照で処理された培養物が含まれた。
抗体Ａ−２は、用量依存的様態で、Ｊａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達を阻害したが、Ｊａｇｇｅｄ２誘導性シグナル伝達を阻害しなかった（図１３Ｂ、左上パネル）。Ａ−２についてのＩＣ５０は、Ｊａｇｇｅｄ１阻害に対して２〜１０μｇ／ｍＬであったが、一方でＪａｇｇｅｄ２阻害は、最も高い５０μｇ／ｍＬの濃度であってもほとんどまたは全く観察されなかった。この結果は、抗体Ａ−２がＪａｇｇｅｄ１選択的アンタゴニストである、すなわち、抗体Ａ−２がＪａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達を阻害するが、Ｊａｇｇｅｄ２媒介性シグナル伝達を阻害しないことを実証する。対照的に、抗体Ｂ−３は強力に、試験された最も低い濃度でＪａｇｇｅｄ２誘導性シグナル伝達を阻害したが、試験された最も高い濃度でＪａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達を阻害せず、故に、Ｂ−３はＪａｇｇｅｄ１選択的アンタゴニストとして確立される（左下パネル）。抗体Ｃ−１は、用量依存的様態で、Ｊａｇｇｅｄ１誘導性シグナル伝達およびＪａｇｇｅｄ２誘導性シグナル伝達の両方を阻害した（右上パネル）。まとめると、これらの結果は、Ａ−２およびＢ−３がそれぞれＪａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２選択的阻害剤として機能するが、一方でＣ−１がＪａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の両方の阻害剤として機能することを示す。
実施例６．体重に及ぼす抗Ｊａｇｇｅｄ抗体処置の影響。
上述のように、γ−セクレターゼ阻害剤、および複数のＮｏｔｃｈ受容体の他の阻害剤は、体重減少および腸杯細胞化生を引き起こし、これは臨床投与に望ましくない。本明細書に記載される抗体がどのように体重および腸の健康に影響するかを決定するために、マウスに、週２回、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体Ｃ−１（マウス体重１ｋｇ当たり５〜１０ｍｇの抗体（ｍｐｋ）、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２（５〜２０ｍｐｋ）、抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体Ｂ−３（５〜２０ｍｐｋ）、抗体Ａ−２およびＢ−３を一緒に（各々５ｍｐｋ）、またはアイソタイプ対照抗ｇＤ抗体（２０ｍｐｋ）を投薬した。アイソタイプ対照抗体はまた、各投薬の総抗体濃度を２０ｍｐｋにするためにも使用した。各マウスの総体重を、抗体の最初の投与前に決定し、研究の１２日目まで監視した。平均体重変化が図１４に図示され、開始時体重のパーセンテージとしてグラフ化される。抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体Ｃ−１、またはＪａｇｇｅｄ１特異的抗体Ａ−２およびＪａｇｇｅｄ２特異的抗体Ｂ−３が一緒の組み合わせのいずれかを使用した、Ｊａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の二重阻害は、急速で実質的な体重減少を引き起こした（図１４Ａ）。４日目までに、抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体Ｃ−１を受けた何匹かのマウスは、それらの体重の５％超を損失しており、それは７日目までに体重のほぼ８〜１０％の損失にまで進行した（図１４Ａ）。Ａ−２およびＢ−３の両方を受けたマウスもまた、急速に体重を損失し、いくつかの症例においては、１１日目までに最大１７％まで損失した（図１４Ａ）。対照的に、Ｊａｇｇｅｄ１特異的またはＪａｇｇｅｄ２特異的抗体単独のうちの何一つとして、５ｍｐｋまたは２０ｍｐｋのいずれでも、研究の過程にわたって体重減少を引き起こしたものはなかった（図１４Ａ）。抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体と抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体との組み合わせでの処置は、減少した摂餌をもたらし（図１４Ｂ）、これは観察された体重の減少と相関しており（図１４Ａ）、減少した摂餌が部分的または全体的にこの相関する体重減少を説明し得ることを示唆した。
実施例７．抗Ｊａｇｇｅｄ抗体処置後の腸組織像。
例えば、γ−セクレターゼ阻害剤による、ならびにＮｏｔｃｈ１およびＮｏｔｃｈ２またはＤｌｌ１およびＤｌｌ４の組み合わせた阻害による、汎Ｎｏｔｃｈ阻害（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１０、Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１１を参照されたい）は、マウスにおいて杯細胞化生を引き起こし、この化生は、観察される体重減少に関与すると仮説が立てられてきた。
実施例６において観察された、Ｊａｇｇｅｄ１およびＪａｇｇｅｄ２の組み合わせた阻害後の体重の急速な減少が、杯細胞化生に同様に関連していたかどうかを決定するために、実施例６に記載されるように処置したマウスの腸試料を単離し、検査した。腸を、ヘマトキシリンおよびエオシン（図１５Ａ、Ｈ＆Ｅ）で、または分泌性杯細胞のマーカーである粘液についてはアルシアンブルー（図１５Ａ、アルシアンブルー）で、染色した。いくつかの試料は、Ｐａｎｅｔｈ細胞のマーカーであるリゾチームの発現について、または増殖マーカーＫｉ−６７について、免疫組織化学によって分析した（図１５Ｂ）。対照抗体または抗Ｊａｇｇｅｄ１／２抗体Ｃ−１のいずれかで処置されたマウスの腸切片の組織像またはマーカー発現の間で、明白な差異は何ら観察され得なかった。これらの結果は、Ｊａｇｇｅｄ１および２の両方の阻害後に観察された体重減少が、杯細胞化生に起因し得ないことを示唆する。その上、これらの結果は、Ｎｏｔｃｈ阻害剤での処置後の体重減少に対する新規の機構を明らかにしており、杯細胞化生が汎Ｎｏｔｃｈ阻害剤での処置後の体重減少を説明するには不十分であり得ることを示している。
実施例８．抗Ｊａｇｇｅｄ１アンタゴニスト抗体は、体内でヒト肺がん細胞の増殖を阻害する。
Ｈａｒｌａｎ胸腺欠損ヌードマウスに、ヒト非小細胞肺がん株であるＣａｌｕ−６細胞を皮下接種した。腫瘍体積がおよそ２００平方ｍｍに到達した後、マウスに週２回（０、４、７、１１、１４、および１８日目）、２０ｍｐｋの抗ｇＤアイソタイプ対照抗体（ｎ＝１０）または抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２（ｎ＝１０）のいずれかを腹腔内（ＩＰ）注射した。各マウスにおける腫瘍体積をカリパスでさらに１９日間測定した。各マウスの総体重を研究の過程にわたって監視した。
抗Ｊａｇｇｅｄ１で処置されたマウスにおける腫瘍は、対照群における腫瘍と比べて腫瘍体積の有意な減少を示した（図１６Ａ）。抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体処置の影響は、処置後７日目ほどの早期に検出することができた（図１６Ａ）。１８日目に、抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体を受けたマウスにおける平均腫瘍体積は、およそ５００ｍｍ３に到達した一方で、対照動物における平均腫瘍体積は、１８日目におよそ７５０ｍｍ３に到達した。処置群と対照群との間の体重の有意な変化は、何ら観察することができなかった（図１６Ｂ）。
実施例９．抗Ｊａｇｇｅｄ１および抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体は、体内でヒト乳がん細胞の増殖を阻害する。
Ｃ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤ．ｂｇマウスに、ヒト基底乳がん株であるＭＤＡ−ＭＤ−４６８細胞を***脂肪体から接種した。腫瘍体積がおよそ２００平方ｍｍに到達した後、マウスに、３０ｍｐｋの抗ｇＤアイソタイプ対照抗体（ヒトＩｇＧ１アイソタイプ）、抗ブタクサアイソタイプ対照抗体（マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ）、ヒトＩｇＧ１骨格における抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２、マウスＩｇＧ２ａ骨格における抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体Ａ−２、またはヒトＩｇＧ１骨格における抗Ｊａｇｇｅｄ２抗体Ｂ−３を、０、４、７、１２、１５、１８、２２、２５、２９、３２、３６、４３、５０、および５７日目に腹腔内投薬した。腫瘍体積（ｙ軸）を、最初の注射の６０日後にカリパスで測定した。各群（１群当たりｎ＝９）についての腫瘍体積を、線形混合効果モデルを使用してプロットした（図１７Ａ）。各群中の各マウスについての腫瘍体積が、図１７Ｂに図示される。
３つ全ての抗Ｊａｇｇｅｄ抗体が、腫瘍増殖を有意に阻害した。両方の抗Ｊａｇｇｅｄ１抗体が、腫瘍増殖を同程度に阻害し、これは観察された抗腫瘍増殖特性が一貫しており、抗体骨格とは独立していることを実証している。
上述の発明は、明確な理解のための例示説明および例としてある程度詳細に記載されたが、これらの説明および例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許および科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。

Claims (58)

  1. Ｊａｇｇｅｄ１に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、
    （ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗体。
  2. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１に記載の抗体。
  4. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１に記載の抗体。
  5. Ｊａｇｇｅｄ２に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、
    （ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗体。
  6. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項５に記載の抗体。
  7. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項５に記載の抗体。
  8. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項５に記載の抗体。
  9. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項５に記載の抗体。
  10. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項５に記載の抗体。
  11. Ｊａｇｇｅｄ１／２に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、
    （ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗体。
  12. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１１に記載の抗体。
  13. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１１に記載の抗体。
  14. Ｊａｇｇｅｄ１／２に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、
    （ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む、抗体。
  15. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１４に記載の抗体。
  16. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１４に記載の抗体。
  17. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１４に記載の抗体。
  18. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１４に記載の抗体。
  19. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１４に記載の抗体。
  20. 前記抗体は、
    （ａ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、および
    （ｆ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１４に記載の抗体。
  21. モノクローナル抗体である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
  22. ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
  23. 抗体断片である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
  24. 配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインフレームワークＦＲ１、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４をさらに含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
  25. 配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインフレームワークＦＲ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む、請求項３、４、または９のいずれか一項に記載の抗体。
  26. 配列番号５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインフレームワークＦＲ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＦＲ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＦＲ３、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＦＲ４を含む、請求項１５に記載の抗体。
  27. （ａ）配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列および（ｂ）に記載のＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  28. 配列番号１０のＶＨ配列を含む、請求項２７に記載の抗体。
  29. 配列番号１９のＶＬ配列を含む、請求項２７に記載の抗体。
  30. 配列番号１０のＶＨ配列および配列番号１９のＶＬ配列を含む、抗体。
  31. （ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列および（ｂ）に記載のＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  32. 配列番号１１のＶＨ配列を含む、請求項３１に記載の抗体。
  33. 配列番号２０のＶＬ配列を含む、請求項３１に記載の抗体。
  34. 配列番号１１のＶＨ配列および配列番号２０のＶＬ配列を含む、抗体。
  35. （ａ）配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、または（ｃ）（ａ）に記載のＶＨ配列および（ｂ）に記載のＶＬ配列を含む、請求項５に記載の抗体。
  36. 配列番号１５のＶＨ配列を含む、請求項３５に記載の抗体。
  37. 配列番号２４のＶＬ配列を含む、請求項３５に記載の抗体。
  38. 配列番号１５のＶＨ配列および配列番号２４のＶＬ配列を含む、抗体。
  39. 完全長ＩｇＧ１抗体である、請求項１または５に記載の抗体。
  40. 前記抗体は、Ｊａｇｇｅｄ１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
  41. 前記抗体は、Ｊａｇｇｅｄ２媒介性シグナル伝達のアンタゴニストである、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の抗体。
  42. Ｊａｇｇｅｄ１への特異的結合に対して請求項１に記載の抗体と競合する、単離された抗体。
  43. Ｊａｇｇｅｄ２への特異的結合に対して請求項５に記載の抗体と競合する、単離された抗体。
  44. 請求項１に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  45. 請求項４４に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  46. 請求項５に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  47. 請求項４６に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  48. 抗体を産生する方法であって、前記抗体が産生されるように、請求項４５または４７に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
  49. 請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤とを含む、免疫複合体。
  50. 請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体と、薬剤的に許容される担体とを含む、医薬製剤。
  51. 医薬として使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の抗体。
  52. がんを治療することにおいて使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の抗体。
  53. がん細胞の増殖を低減することにおいて使用するための、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の抗体。
  54. 医薬の製造における、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  55. 前記医薬は、がんを治療するためのものである、請求項５４に記載の使用。
  56. 前記医薬は、がん細胞の増殖を低減するためのものである、請求項５４に記載の使用。
  57. がんを有する個体を治療する方法であって、前記個体に、有効量の、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の抗体を投与することを含む、方法。
  58. 前記がんは、乳がん、肺がん、脳がん、子宮頚がん、結腸がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、皮膚がん、Ｂ細胞悪性腫瘍、およびＴ細胞悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項５７に記載の方法。
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