JP2015023804A - 延寿命制御活性を有する物質をスクリーニングする方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1) Mex-3Bタンパク質関連因子を用いて、候補物質の中から延寿命制御活性を有する物質をスクリーニングする方法であって、少なくとも次の工程:
(i)候補物質又は対照に、前記Mex-3Bタンパク質関連因子を接触させる工程;
(ii)指標となる値を測定する工程;
(iii)候補物質の作用を、上記(i)及び(ii)に基づく結果と、対照の結果とを比較して検出する工程;並びに
(iv)前記指標となる値が変化した候補物質を選択する工程;
を含む、方法。
(2) Mex-3Bタンパク質関連因子が、Mex-3Bタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、Mex-3Bタンパク質及びMex-3Bタンパク質関連因子がMex-3Bタンパク質をコードする塩基配列の一部若しくは全てを破壊又は変異させた非ヒトノックアウト動物からなる群から選択される少なくとも1つである、(1)記載の方法。
(3) (1)又は(2)記載のMex-3Bタンパク質関連因子を含む、延寿命物質スクリーニング試薬。
(4) (3)記載の試薬を含む、延寿命物質スクリーニングキット。
本発明はMex-3Bタンパク質関連因子を用いて、候補物質の中から延寿命活性を有する物質をスクリーニングする方法に関する。以下、本発明の概要について説明する。
a)Mex-3Bノックアウトマウスオスでは野生型に比して有意に寿命が延長している(図6);
b)Mex-3Bノックアウトマウスでは脂肪組織が小さい(図7);及び
c)Mex-3Bノックアウトマウスは体重が野生型に比して有意に低下し(図5)、さらに、オスではインシュリン感受性が亢進している(図8及び9);
を得た。
本発明のスクリーニング方法は、上記Mex-3Bタンパク質の関連因子を用いて、候補物質の中から延寿命制御活性を有する物質を探索することを目的とする。具体的には、(i)候補物質又は対照に、前記Mex-3Bタンパク質関連因子を接触させる工程;(ii)指標となる値を測定する工程;(iii)候補物質の作用を、上記(i)および(ii)に基づく結果と、対照の結果とを比較して検出する工程;並びに(iv)指標となる値が変化した候補物質を選択する工程;を含む、方法である。
Mex-3Bタンパク質関連因子とは、候補物質に接触させて延寿命制御活性を有する物質を探索することができる物質であればいかなる物質をも含む。例えば、Mex-3Bタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、Mex-3Bタンパク質及びその抗体、Mex-3Bタンパク質に関連するノックアウト動物などがあげられる。Mex-3Bタンパク質のシークエンスデータは、例えばGenBank(NIH genetic sequence database)や、DDBJ(DNA Data Bank of Japan)等のデータベースに登録されているデータを使用することができる。ここで、ヒト由来Mex-3Bタンパク質のcDNAは3534塩基でありGenBankにNM_032246(配列番号1)と、アミノ酸配列は569アミノ酸残基のNP_115622(配列番号2)と登録されている。Mex-3Bタンパク質の抗体とは、例えば、Mex-3Bタンパク質に特異的な抗体である抗Mex-3Bタンパク質抗体を用いて、Mex-3Bタンパク質の発現をウェスタンブロッティングやELISA法で測定する方法などがあげられる。当該抗体は公知の方法を用いて作製できる。Mex-3Bタンパク質に関連するノックアウト動物としては、例えば、Mex-3Bタンパク質関連因子がMex-3Bタンパク質をコードする塩基配列の一部若しくは全てを破壊又は変異させた延寿命非ヒトノックアウト動物があげられる。
上記のように、Mex-3Bタンパク質の機能を抑制する物質は延寿命メカニズムに関与する有力な物質であるといえる。従って、Mex-3Bタンパク質の発現を抑制する物質は、延寿命メカニズムを促進するため、延寿命活性薬剤等の候補として好ましい。本発明における形質的な延寿命の指標としては、当該物質を投与された個体において、脂肪の蓄積が阻害される;体重が低下する;及びインスリン感受性が亢進することなどがあげられる。これらの形質を促進する物質は寿命を延長させる物質として好ましい。このような物質としては、上記の性質を有する物質であれば、いかなる物質も含まれるが、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。これらの物質は塩を形成していてもよく、生理学的に許容される酸(例、無機酸など)や塩基(例、有機酸など)などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸(例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など)との塩、あるいは有機酸(例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など)との塩などが用いられる。
本発明のスクリーニング方法としては、Mex-3Bタンパク質を作動可能に結合させた発現ベクターを作製し、これを細胞内に導入してタンパク質等を発現させる方法等があげられる。例えば、標識物質にMex-3Bタンパク質を作動可能に結合させた発現ベクターを作製し、これを細胞内に導入して発現させる方法を例示して、以下説明する。
(3)延寿命物質スクリーニング試薬
本発明のMex-3Bタンパク質関連因子を用いたスクリーニングを行う場合は、上記のMex-3Bタンパク質関連因子を他の溶媒や溶質と組み合わせて組成物とすることができる。たとえば、蒸留水、pH緩衝試薬、塩、タンパク質、界面活性剤などを組み合わせることができる。
(4) 延寿命物質スクリーニングキット
本発明のMex-3Bタンパク質関連因子を用いたスクリーニングを行う場合、特別の条件、操作などは必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作に準じて行なわれ、必要であれば若干の修飾を加えて好適な測定系を構築できる。
本実施例はMex-3Bノックアウトマウスを作製することを目的とする。
mD8フォワードプライマー 5’-GTCACTCAGGCCATCCGCATTTTTTCCTGA-3’
(配列番号4)
mD8リバースプライマー 5’-GTGTTCTAGAACGAGCGCTGTAGGAACCCA-3’
(配列番号5)
Neoプライマー 5’-GTTGGTTTTTGTGTGCGGCGCGCCGTTTAA-3’(配列番号6)
相同組換えクローンは、BACクローンおよびターゲティングベクターをtemplate DNAとしてランダムなプライマーで作製したプローブを用いたFISH法により確認した(図2)。得られたクローンをC57BL6マウスの胚盤胞にインジェクトしてキメラマウスを作製した。
本実施例は、Mex-3Bノックアウトマウスの寿命を測定し、野生型マウスと比較することを目的とする。
本実施例は、Mex-3Bノックアウトマウスの脂肪組織の重量を測定し、野生型マウスと比較することを目的とする。
本実施例は、Mex-3Bノックアウトマウスのインシュリン感受性試験を行い、野生型マウスと比較することを目的とする。
配列番号5:プライマー
配列番号6:プライマー
Claims (4)
- Mex-3Bタンパク質関連因子を用いて、候補物質の中から延寿命制御活性を有する物質をスクリーニングする方法であって、少なくとも次の工程:
(i)候補物質又は対照に、前記Mex-3Bタンパク質関連因子を接触させる工程;
(ii)指標となる値を測定する工程;
(iii)候補物質の作用を、上記(i)及び(ii)に基づく結果と、対照の結果とを比較して検出する工程;並びに
(iv)前記指標となる値が変化した候補物質を選択する工程;
を含む、方法。 - Mex-3Bタンパク質関連因子が、Mex-3Bタンパク質をコードする塩基配列を含む核酸、Mex-3Bタンパク質及びMex-3Bタンパク質関連因子がMex-3Bタンパク質をコードする塩基配列の一部若しくは全てを破壊又は変異させた非ヒトノックアウト動物からなる群から選択される少なくとも1つである、請求項1記載の方法。
- 請求項1又は2記載のMex-3Bタンパク質関連因子を含む、延寿命物質スクリーニング試薬。
- 請求項3記載の試薬を含む、延寿命物質スクリーニングキット。
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Cited By (1)
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN109526229A (zh) * | 2016-07-08 | 2019-03-26 | Tak循环株式会社 | 筛选由白细胞介素6、白细胞介素13、tnf、g-csf、cxcl1、cxcl2、或cxcl5所引起的疾病的预防或治疗剂的方法、及由白细胞介素6、白细胞介素13、tnf、g-csf、cxcl1、cxcl2、或cxcl5所引起的疾病的预防或治疗剂 |
CN109526229B (zh) * | 2016-07-08 | 2022-06-03 | Tak循环株式会社 | 筛选疾病的预防或治疗剂的方法、及用于制造该制剂的应用 |
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