JP2014521751A - 腎髄質外層カリウムチャンネルの阻害薬 - Google Patents

腎髄質外層カリウムチャンネルの阻害薬 Download PDF

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Abstract

本発明は、ＲＯＭＫ（Ｋｉｒ１．１）チャンネルの阻害薬である式Ｉａの化合物およびそれの医薬として許容される塩を提供する。当該化合物は、利尿薬および／またはナトリウム利尿薬として使用することができ、そして高血圧、心不全および過剰の塩および水保持に関連する状態などの循環器病などの医学的状態の療法および予防に使用することができる。
【化１】

Description

腎髄質外層カリウム（ＲＯＭＫ）チャンネル（Ｋｉｒ１．１）（例えば、Ｈｏ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｉｎｗａｒｄｌｙ ｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇ ＡＴＰ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ， Ｎａｔｕｒｅ， １９９３， ３６２（６４１５）：ｐ．３１−８．１，２；およびＳｈｕｃｋ， Ｍ． Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｋｉｄｎｅｙ ＲＯＭ−Ｋ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， １９９４， ２６９（３９）：ｐ．２４２６１−７０を参照されたい）は、腎臓の２つの領域：厚いヘンレ係蹄上行脚（ＴＡＬＨ）および副腎皮質集合管（ＣＣＤ）で発現するカリウムチャンネルの内向き整流性ファミリーの構成要素である（Ｈｅｂｅｒｔ， Ｓ． Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ， Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ， ２００５， ８５（１）：ｐ．３１９−７１３参照）。ＴＡＬＨにおいては、ＲＯＭＫは、管腔膜を介してのカリウムリサイクリングに関与しており、これは、ネフロンのこの部分における塩の再摂取のための速度決定段階である、Ｎａ＋／Ｋ＋／２Ｃｌ−共輸送体の機能に重要である。ＣＣＤにおいては、ＲＯＭＫは、アミロライド感受性ナトリウムチャンネルを通したナトリウム摂取と密接に連結するカリウム分泌のための経路を提供する（Ｒｅｉｎａｌｔｅｒ， Ｓ． Ｃ．， ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｈｙｐｏｋａｌａｅｍｉｃ ｓａｌｔ−ｌｏｓｉｎｇ ｔｕｂｕｌａｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ， Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ， ２００４， １８１（４）：ｐ．５１３−２１；およびＷａｎｇ， Ｗ．， Ｒｅｎａｌ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ：ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ， Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ， ２００４， １３（５）：ｐ． ５４９−５５参照）。ＲＯＭＫチャンネルの選択的阻害剤（本明細書において、ＲＯＭＫまたはＲＯＭＫ阻害剤とも呼ぶ）は、高血圧、および利尿薬を用いた治療が現在用いられている臨床薬と比較して易罹病性（すなわち、低カリウム血症、高カリウム血症、糖尿病の発症、異脂肪血症）が低下する可能性があって有益であると考えられる他の状態の治療のための新規な利尿薬を提供することが期待される（Ｌｉｆｔｏｎ， Ｒ． Ｐ．， Ａ． Ｇ． Ｇｈａｒａｖｉ， ａｎｄ Ｄ． Ｓ． Ｇｅｌｌｅｒ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， Ｃｅｌｌ， ２００１， １０４（４）：ｐ．５４５−５６参照）。人類遺伝学（Ｊｉ， Ｗ．， ｅｔ ａｌ．， Ｒａｒｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｓａｌｔ ｈａｎｄｌｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ， Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ， ２００８， ４０（５）：ｐ．５９２−９；およびＴｏｂｉｎ， Ｍ． Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｍｍｏｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ， Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， ２００８， ５１（６）：ｐ．１６５８−６４）および齧歯類におけるＲＯＭＫの遺伝子除去（Ｌｏｒｅｎｚ， Ｊ． Ｎ．， ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐａｉｒｅｄ ｒｅｎａｌ ＮａＣｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ＲＯＭＫ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ，ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｙｐｅ ＩＩ Ｂａｒｔｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２００２， ２７７（４０）：ｐ． ３７８７１−８０およびＬｕ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｋ＋ ｃｈａｎｎｅｌ（ＳＫ） ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｏｆ ｔｈｉｃｋ ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ｌｉｍｂ ａｎｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｄｕｃｔ ｉｎ ＲＯＭＫ （Ｂａｒｔｔｅｒ′ｓ） ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２００２， ２７７（４０）：ｐ．３７８８１−７参照）は、これらの予想を支持している。本発明者らの知る限りでは、ＶＵ５９０などの第一のＲＯＭＫの小分子選択的阻害剤は、Ｌｅｗｉｓ， Ｌ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｎａｌ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｄｕｌｌａｒｙ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ ａｎｄ Ｋｉｒ７．１， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ２００９，７６（５）：ｐ．１０９４−１１０３に開示されたように、バンダービルト大学で実施された研究から報告された。化合物 ＶＵ５９１は後に、Ｂｈａｖｅ， Ｇ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｋｉｒ１．１， ｔｈｅ Ｒｅｎａｌ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｄｕｌａｒｙ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ２０１１， ７９（１）， ｐ．４２−５０で報告されており、その本文では、「ＲＯＭＫ（Ｋｉｒ１．１）が、低カリウム血症を引き起こすことなく血圧を低下させる新規な種類のループ利尿薬の想定される薬剤標的である。」と述べられている。
Figure 2014521751
Ｈｏ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｉｎｗａｒｄｌｙ ｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇ ＡＴＰ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ， Ｎａｔｕｒｅ， １９９３， ３６２（６４１５）：ｐ．３１−８．１，２． Ｓｈｕｃｋ， Ｍ． Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｋｉｄｎｅｙ ＲＯＭ−Ｋ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， １９９４， ２６９（３９）：ｐ．２４２６１−７０． Ｈｅｂｅｒｔ， Ｓ． Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ， Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ， ２００５， ８５（１）：ｐ．３１９−７１３． Ｒｅｉｎａｌｔｅｒ， Ｓ． Ｃ．， ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｈｙｐｏｋａｌａｅｍｉｃ ｓａｌｔ−ｌｏｓｉｎｇ ｔｕｂｕｌａｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ， Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ， ２００４， １８１（４）：ｐ．５１３−２１． Ｗａｎｇ， Ｗ．， Ｒｅｎａｌ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ：ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ， Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ， ２００４， １３（５）：ｐ． ５４９−５５． Ｌｉｆｔｏｎ， Ｒ． Ｐ．， Ａ． Ｇ． Ｇｈａｒａｖｉ， ａｎｄ Ｄ． Ｓ． Ｇｅｌｌｅｒ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， Ｃｅｌｌ， ２００１， １０４（４）：ｐ．５４５−５６． Ｊｉ， Ｗ．， ｅｔ ａｌ．， Ｒａｒｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｓａｌｔ ｈａｎｄｌｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ， Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ， ２００８， ４０（５）：ｐ．５９２−９． Ｔｏｂｉｎ， Ｍ． Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｍｍｏｎ ｖａｒｉａｎｔｓ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ， Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， ２００８， ５１（６）：ｐ．１６５８−６４． Ｌｏｒｅｎｚ， Ｊ． Ｎ．， ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐａｉｒｅｄ ｒｅｎａｌ ＮａＣｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ＲＯＭＫ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ，ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｙｐｅ ＩＩ Ｂａｒｔｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２００２， ２７７（４０）：ｐ． ３７８７１−８０． Ｌｕ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｋ＋ ｃｈａｎｎｅｌ（ＳＫ） ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｏｆ ｔｈｉｃｋ ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ｌｉｍｂ ａｎｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｄｕｃｔ ｉｎ ＲＯＭＫ （Ｂａｒｔｔｅｒ′ｓ） ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２００２， ２７７（４０）：ｐ．３７８８１−７． Ｌｅｗｉｓ， Ｌ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｎａｌ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｄｕｌｌａｒｙ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ ａｎｄ Ｋｉｒ７．１， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ２００９，７６（５）：ｐ．１０９４−１１０３． Ｂｈａｖｅ， Ｇ． ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｋｉｒ１．１， ｔｈｅ Ｒｅｎａｌ Ｏｕｔｅｒ Ｍｅｄｕｌａｒｙ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ２０１１， ７９（１）， ｐ．４２−５０．
しかしながら、ＲＯＭＫの選択的小分子阻害薬を継続的に開発することが、高血圧および関連障害の新たな治療の開発になおも必要とされている。本発明の式Ｉａの化合物は、ＲＯＭＫチャンネルの選択的阻害薬であり、高血圧、心不全および利尿薬もしくはナトリウム利尿薬による治療が有用と考えられる他の状態の治療に用いることができると考えられる。
本発明は、下記式Ｉａの化合物およびそれの医薬として許容される塩を提供する。
Figure 2014521751
 式Ｉａの化合物は、ＲＯＭＫ（Ｋｉｒ１．１）チャンネルの阻害薬である。その結果、式Ｉａの化合物は、ＲＯＭＫの阻害が有益となり得る１以上の疾患状態の治療、阻害もしくは改善の方法に用いることができると考えられる。本発明の化合物は、利尿薬および／またはナトリウム利尿薬を必要とする患者に対して治療上もしくは予防上有効量の式Ｉａの化合物を投与することを含む治療方法で用いることができると考えられる。従って、式Ｉａの化合物は、高血圧、心不全および過剰な塩および水分保持に関連する状態などの心血管疾患（それに限定されるものではない）などの医学的状態の治療、予防もしくはその両方に貴重な医薬活性化合物であることができると考えられる。本発明の化合物はさらに、高血圧、心不全および過剰の塩および水分保持に関連する状態の治療に有用な他の薬剤（それに限定されるものではない）などの他の治療上有効な薬剤と組み合わせて用いることができると考えられる。本発明はさらに、式Ｉａの化合物および式Ｉａの化合物を含む医薬組成物の製造方法に関する。本明細書における記載から、本発明のこれらおよび他の態様は明らかになろう。
本発明は、構造式Ｉａを有する化合物およびそれの医薬として許容される塩に関するものである。
Figure 2014521751
 式中、
Ｚは、
Figure 2014521751
 であり、
Ｒ１は、
Figure 2014521751
 であり、
＊＊＊はカルボニル炭素への結合を示し、＊＊は式Ｉａにおけるテトラゾリル環への結合を示し；
ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり；
ｍは１または２から選択される整数であり；
ｎは１または２から選択される整数であり；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立にＣ（Ｒ７）またはＮから選択され、ただし、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つがＮでなければならないが、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの多くとも２個がＮであり；
Ｒａは−ＣＮであり；
Ｒｂは−Ｈまたは−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−６アルキルであり；
Ｒ３は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−６アルキルであり；
Ｒ４は−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＣ１−４アルキルまたはＮ−テトラゾリルであり；
またはＲ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
Figure 2014521751
 を形成しており、Ｒは−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
Ｒ５は、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−４アルキルであり；ただし、Ｒ３およびＲ４が一体となっていない場合、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの一つおよび一つのみが−ＣＮであり；
Ｒ６は−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
Ｒ７は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌまたは−Ｃ１−４アルキルである。
本発明の１実施形態には、下記構造式Ｉを有する式Ｉａの化合物およびそれの医薬として許容される塩がある。
Figure 2014521751
 式中、可変要素Ｘ、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７および他の全ての可変要素のそれぞれは式Ｉａで定義の通りである。
実施形態Ａには、
ＸがＯ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ１が
Figure 2014521751
 であり；
＊＊＊がカルボニル炭素への結合を示し、＊＊が式ＩａまたはＩにおけるテトラゾリル環への結合を示し；
ｍが１または２から選択される整数であり；
ｎが１または２から選択される整数であり；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３がそれぞれ独立にＣＨまたはＮから選択され、ただし、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つがＮでなければならないが、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの多くとも２個がＮであり；
式ＩａにおいてＺがチエニルである場合、Ｒａが−ＣＮであり、Ｒｂが−Ｈまたは−Ｃ１−３アルキルであり、より詳細にはＲｂが−ＣＨ３であり；
Ｒ２が−Ｈまたは−Ｆであり；
Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；
Ｒ４が−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；
またはＲ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
Figure 2014521751
 を形成しており、Ｒが−Ｈまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ５が、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、シクロプロピルまたは−ＯＣＨ３であり；ただし、Ｒ３およびＲ４が一体となっていない場合、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの一つおよび一つのみが−ＣＮであり；さらに、Ｒ３およびＲ４が一体となっている場合、Ｒ５が−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ６が−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
Ｒ７が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌまたは−Ｃ１−４アルキルである式ＩａまたはＩの化合物およびそれの医薬として許容される塩がある。
本発明はさらに、構造式ＩＩを有する式ＩａまたはＩの化合物およびそれの医薬として許容される塩に関するものである。
Figure 2014521751
 式中、可変要素Ｘ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５および他の全ての可変要素のそれぞれは式Ｉａに定義の通りである。式ＩＩの範囲内の化合物およびそれの塩には、
ＸがＯまたはＮＨであり；
Ｒ１が
Figure 2014521751
 であり、
＊＊＊がカルボニル炭素への結合を示し、＊＊が式ＩＩにおけるテトラゾリル環への結合を示し；
Ｒ３が−Ｆであり、Ｒ４が−ＣＮであり、Ｒ５が−ＣＨ３であり；または
Ｒ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
Figure 2014521751
 を形成しており、Ｒが−Ｈまたは−ＣＨ３であり、Ｒ５が−Ｈであるものなどがある。
本発明はさらに、下記構造式ＩＩＩを有する式Ｉａ、ＩまたはＩＩの化合物およびそれの医薬として許容される塩に関するものである。
Figure 2014521751
 式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５ならびに他の全ての可変要素は式Ｉａで定義の通りである。
本発明の１実施形態には、ＸがＯである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。別の実施形態において、ＸがＮＨである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。別の実施形態において、ＸがＳである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
１実施形態には、Ｒ１が
Figure 2014521751
 である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
別の実施形態には、Ｒ１が
Figure 2014521751
 である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
別の実施形態には、Ｒ１が
Figure 2014521751
 である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
別の実施形態には、Ｒ１が
Figure 2014521751
 （ｎが１または２である）であり、より詳細には
Figure 2014521751
 である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
別の実施形態には、Ｒ１が
Figure 2014521751
 である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
別の実施形態には、Ｒ１が
Figure 2014521751
 である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
１実施形態には、ｍが１である式Ｉａ、式Ｉまたは実施形態Ａの化合物である。別の実施形態には、ｍが２である式Ｉａ、式Ｉまたは実施形態Ａの化合物がある。
１実施形態には、ｎが１である式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。別の実施形態には、ｎが２である式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。この群には、ｍおよびｎが両方とも１である化合物がある。
別の実施形態には、Ｒ２が−Ｈまたは−Ｆであり；Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；Ｒ４が−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；およびＲ５が−Ｈ、−ＣＩ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、シクロプロピルまたは−ＯＣＨ３であり；ただし、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの一つおよび一つのみが−ＣＮである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａ、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物がある。その群には、Ｒ３またはＲ４のうちの一つが−ＣＮである化合物がある。それの下位群には、Ｒ４が−ＣＮである化合物がある。別の下位群には、Ｒ２が−Ｈであり；Ｒ３が−Ｆであり；Ｒ４が−ＣＮであり；Ｒ５が−ＣＨ３である化合物がある。
１実施形態には、Ｒ３およびＲ４が、それらが結合しているフェニル環における炭素原子と一体となって、
Figure 2014521751
 を形成しており、Ｒが−Ｈまたは−ＣＨ３であり；Ｒ２が−Ｈであり；Ｒ５が−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−４アルキルである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａ、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物がある。この実施形態の１群には、Ｒ３およびＲ４が一体となって、５員環を形成しており、Ｒ５が−Ｈ、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である化合物がある。この実施形態の別の群には、Ｒ３およびＲ４が一体となって６員環を形成しており、Ｒ５が−Ｈまたは−Ｆである化合物がある。
１実施形態には、Ｒ６が−Ｈである式Ｉａ、式Ｉまたは実施形態Ａの化合物がある。別の実施形態にはＲ６がメチル、エチル、−Ｃ３アルキルまたは−Ｃ４アルキルである式Ｉａまたは式Ｉの化合物がある。
１実施形態には、Ｒ７が−Ｈである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。別の実施形態には、Ｒ７が−Ｆ、−Ｃｌ、メチルもしくはエチル、−Ｃ３アルキルまたは−Ｃ４アルキルであり、より詳細には−Ｆ、−Ｃｌ、メチルまたはエチルである式Ｉａ、式Ｉ、実施形態Ａまたは式ＩＩの化合物がある。
１実施形態には、Ｒｂが−ＣＨ３である式Ｉａおよび実施形態Ａの化合物がある。
上記の全ての構造式、実施形態Ａおよび他の実施形態には、そこで定義の化合物の医薬として許容される塩が含まれる。
別段の記述がある場合を除き、本明細書で用いられる場合、「アルキル」は、特定の炭素原子数を有する、分岐および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を意味する。アルキル基について、通常に用いられる略語を明細書を通して用いる。例えば、「Ｃ１−６アルキル」（または「Ｃ１−Ｃ６アルキル」）という用語は、特定の炭素原子数を有し、全ての異性体を含む直鎖または分岐鎖のアルキル基を意味し、全てのヘキシルおよびペンチル異性体、ならびにｎ−、イソ−、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブチル（ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル；Ｂｕ＝ブチル）、ｎ−およびｉ−プロピル（Ｐｒ＝プロピル）、エチル（Ｅｔ）およびメチル（Ｍｅ）を含む。
「シクロアルキル」は指定の炭素原子数を有する環化アルキル環を意味する。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどがある。
明瞭に描かれるか別段の記載がない限り、Ｒ２などの「浮遊」結合を有する構造式中に描かれる可変要素は、その可変要素が結合している環内のいずれか利用可能な炭素原子上で許容されるものである。
本発明は、式Ｉａの化合物の全ての立体異性型を包含する。式Ｉａの化合物に存在する不斉中心は、全て互いに独立に、（Ｒ）または（Ｓ）配置をとり得る。本発明の構造式において、キラル炭素への結合を直線で示す場合、または化合物の名称をキラル炭素についてキラル指定しないで示す場合、キラル炭素の（Ｒ）および（Ｓ）の両方の立体配置、従って、両方のエナンチオマーおよびそれらの混合物が当該式内にまたは名称によって包含されることは明らかである。特定の立体異性体またはそれらの混合物の製造は実施例において確認することができ、実施例においては、このような立体異性体または混合物が得られるが、このことは、いかなる形であっても、本発明の範囲内からの全ての立体異性体およびそれらの混合物が含まれることに制限を加えるものではない。
本発明は、２種以上の立体異性体の可能な全てのエナンチオマーおよびジアステレオマー、例えば、あらゆる比率でのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物を含む。従って、ラセミ体の形態およびあらゆる比での２種のエナンチオマーの混合物の形態において、左旋性および右旋性鏡像体のいずれとしても、鏡像異性的に純粋な形態でのエナンチオマーは、本発明の主題である。シス／トランス異性の場合には本発明は、シス形態およびトランス形態の両者、ならびにあらゆる比でのそれらの形態の混合物を含む。所望であれば、従来の方法による混合物の分離により、例えば、クロマトグラフィーまたは結晶化により、合成のための立体化学的に均一な出発原料の使用により、または立体選択的合成により、個々の立体異性体の製造を実施することができる。適宜に、立体異性体の分離の前に誘導体化を実施することができる。立体異性体混合物の分離は、式Ｉａの化合物の合成の際の中間段階において実施することができ、または最終ラセミ生成物において実施することができる。必要であれば、既知の立体配置の立体中心を含む試薬を用いて、結晶生成物または誘導体化した結晶性中間体のＸ−線結晶測定により絶対立体化学を決定してもよい。本発明の化合物が互変異性し得る化合物である場合、個々の全ての互変異性体、ならびにそれらの混合物は本発明の範囲内に含まれる。本発明は、このような全ての異性体、ならびに、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマーおよび互変異性体、およびそれらの混合物のような塩、溶媒和物（水和物を含む）および溶媒化塩を含む。
本発明の化合物は、例Ａにおいて各キラル中心で星印によって示されているように、式Ｉａの中心の縮合二環式環から少なくとも２個のキラル（すなわち不斉）中心を有する。さらに、式Ｉａ中のカルボニル炭素に対してαの位置にあるＲ１（式Ｉａで定義のもの）の非芳香族環中の炭素がキラル中心であり、本明細書においては簡潔に、「アザ−インダン」キラル中心またはそれの類似の意味の変形形態と称される。アザ−インダンキラル中心の例示的な例を、例Ｂにおいて星印によって示している。
Figure 2014521751
 本明細書で使用される場合のアザ−インダンという用語は、式ＩａにおけるＲ１の定義によって包含される構造であることができ、非芳香族環が５員もしくは６員であり、縮合芳香族環が１個もしくは２個の窒素を含む場合などがある。実施例２Ａおよび２Ｂなどの一部の例では、分離された異性体のそれぞれをアザ−インダンキラル中心でのＳまたはＲと確認する立体化学割り当てを行った。一部の例では、割り当ては行わなかったが、アザ−インダンキラル中心によって生じた異性体を分離しており、それらは化合物におけるこの特定のキラル中心を有するアザ−インダンジアステレオマーまたは同様の用語と称される。分子上の各種置換基の性質に応じて、別のキラル中心が存在し得る。実施例で示されている化学構造の一部において、星印は１以上のキラル中心を識別するために使用される。
本明細書において式Ｉａの化合物に言及することは、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物ならびにそれらの全ての実施形態を包含するものである。具体的な式もしくは実施形態のものとして、例えば式Ｉａ、Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩまたはそれらの実施形態、または本明細書に記載もしくは特許請求されているいずれか他の一般構造式もしくは具体的な化合物として本発明の化合物に言及することは、別段の断りがない限りこのような形態が可能な場合、それらの塩、特に医薬として許容される塩、そのような化合物の溶媒和物、それらの溶媒和された塩の形態を含む、式または実施態様の範囲内の特定の化合物を含むことを意図するものである。
式Ｉａの化合物においては、原子は天然の同位体豊富度を示していてもよく、または１個以上の原子が同じ原子数を有するが、原子質量または質量数は、天然に主に見られる原子数または質量数とは異なっている特定の同位体において人工的に濃縮されていてもよい。本発明は、式Ｉａの化合物の全ての適切な同位体型を含むことを意図する。例えば、水素（Ｈ）の種々の同位体形態は、プロチウム（１Ｈ）および重水素（２Ｈ）を含む。プロチウムは、天然に見られる主な水素の同位体である。重水素の濃縮は特定の治療上の利点、例えば、イン・ビボにおける半減期の増大、必要投与量の減少をもたらし、または生体サンプルの特性決定のための標準として有用な化合物を提供し得る。式Ｉａの同位体濃縮された化合物は、当業者に周知の従来の方法により、または適切な同位体濃縮された試薬および／または中間体を用い、本明細書における図式および実施例に記載された方法に類似する方法により、不要な実験を行わずに製造することができる。
式Ｉａの化合物が１以上の酸性または塩基性基を含む場合、本発明は、相当する医薬として許容される塩をも含む。従って、酸性基を含む式Ｉａの化合物は、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩またはアンモニウム塩として、本発明により用いることができる。このような塩の例には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、またはアンモニウム若しくは有機アミン、例えば、エチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミン若しくはアミノ酸との塩などがあるが、これらに限定されるものではない。１以上の塩基性基、すなわちプロトン化し得る基を含む式Ｉａの化合物には、例えば、塩酸、臭化水素、リン酸、硫酸、硝酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、乳酸、サリチル酸、安息香酸、ギ酸、プロピオン酸、ピバリン酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、スルファミン酸、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、イソニコチン酸、クエン酸、アジピン酸等との塩など（これらに限定されるものではない）の無機または有機酸との酸付加塩の形態で本発明により用いることができる。式Ｉａの化合物が分子内に酸性および塩基性基を同時に含む場合、本発明は、言及された塩形態に加え、分子内塩またはベタイン（両性イオン）をも含む。塩は、当業者に公知の通常の方法により、例えば、溶媒または分散剤中における有機もしくは無機の酸または塩基との組合せにより、または他の塩からのアニオン交換またはカチオン交換により、式Ｉａの化合物から得ることができる。本発明は、生理的適合性が低いために医薬での使用に直接的には適していないが、化学反応の中間体として、または医薬として許容される塩の製造のために用いることができる式Ｉａの化合物の全ての塩をも含む。
さらに、本発明の化合物は、非晶質型および／または１種以上の結晶型で存在することができ、式Ｉａの化合物のこのような全ての非晶質および結晶型、ならびにそれらの混合物は、本発明の範囲に含まれるものである。さらに、本発明の一部の化合物は、水（すなわち、水和物）または通常の有機溶媒との溶媒和物を形成し得る。このような溶媒和物および水和物、特に、本発明の化合物の医薬として許容される溶媒和物および水和物は、溶媒和されていないおよび無水の形態のものと同様に、本発明の範囲に含まれる。
イン・ビボで本発明の範囲内の化合物への変換をもたらす本発明の医薬として許容されるプロドラッグ修飾も、本発明の範囲内にある。例えば、適宜に、利用可能なカルボン酸基のエステル化により、または化合物中の利用可能なヒドロキシ基におけるエステルの形成により、エステルを製造することができる。同様に、不安定なアミドを製造することができる。本発明の化合物の医薬として許容されるエステルまたはアミドは、特にイン・ビボで加水分解して酸（または、変換が行われる体液または組織のｐＨによっては、−ＣＯＯ−）またはヒドロキシ形態に戻ることができるプロドラッグとして作用するように製造することができ、このようなものは本発明の範囲内に含まれる。医薬として許容されるプロドラッグ修飾の例には、−Ｃ１−６アルキルエステルおよびフェニルエステルで置換された−Ｃ１−６アルキルなどがあるが、これらに限定されるものではない。
従って、本明細書に記載され請求項に記載された一般構造式、実施態様および具体的な化合物の範囲内の化合物は、別段の断りがない限り、このような形態が可能である場合には、塩、可能な全ての立体異性体および互変異性体、物理的形態（例えば、非晶質および結晶型）、溶媒和物および水和物形態、およびそれらのいずれかの組合せ、ならびにそれらの塩、それらのプロドラッグ、およびそれらのプロドラッグの塩を含む。
本発明による式Ｉａの化合物はＲＯＭＫの阻害剤であることから、利尿薬および／またはナトリウム利尿薬として有用であると考えられる。ＲＯＭＫ阻害剤は、排尿の増加および尿量の増加、ならびにナトリウムおよび水の***上昇をもたらし、腎臓におけるナトリウム再吸収の予防または減少を助けるのに用いることができる。従って、当該化合物は、身体からの水およびナトリウムの***の増加に利益のある疾患の治療もしくは予防またはその両方に用いることができると考えられる。従って、本発明の化合物は、処置を必要とする患者に、ＲＯＭＫの阻害に有効な量の式Ｉａの化合物を投与することを含む、ＲＯＭＫの阻害方法で用いることができると考えられる。式Ｉａの化合物によるＲＯＭＫの阻害は、例えば、後述するタリウムフラックスアッセイおよび／または電気生理学的アッセイで調べることができる。さらに本発明は、例えば本明細書に記載のタリウムフラックスアッセイおよび／または電気生理学的アッセイ（これらに限定されるものではない）などのイン・ビトロアッセイのバリデーションを行うための、式Ｉａの化合物またはそれの塩の使用に関するものでもある。
本発明の化合物は、処置を必要とする患者に対して治療上有効量で式Ｉａの化合物を投与することを含む、利尿、ナトリウム利尿またはその両方を生じさせる方法で使用可能であると考えられる。従って、本発明の式Ｉａの化合物は、水およびナトリウムの***増加が有効である医学的状態の治療、予防または発症リスク低下方法で用いることができると考えられ、それには高血圧、心不全（急性および慢性の両方、後者は鬱血性心不全とも称される）および／または過剰の塩および水分保持に関連する他の状態のうちの１以上などがあるが、これらに限定されるものではない。さらに、式Ｉａの化合物は、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、循環器病、糖尿病、内皮機能不全、拡張機能障害、安定および不安定狭心症、血栓症、再狭窄、心筋梗塞、脳卒中、心不全、肺性筋緊張亢進、アテローム性動脈硬化症、肝硬変、腹水症、子癇前症、脳水腫、腎障害、ネフローゼ症候群、急性および慢性腎機能不全（慢性腎疾患またはより一般的には腎臓機能障害とも称される）、高カルシウム血症、デント病、メニエール病、浮腫性疾患、および利尿もしくはナトリウム利尿もしくはその両方が治療上もしくは予防上有益であると考えられる他の状態などの１以上の障害の治療、予防または発症リスク低下方法で用いることができると考えられる。本発明の化合物は、利尿もしくはナトリウム利尿もしくはその両方が本明細書に開示されるような治療上もしくは予防上有益であると考えられる１以上の状態を患っているか、そのリスクのある患者に投与することができる。
式Ｉａの化合物は、現在使用されている臨床薬と比較して、易罹病性（例えば、低カリウム血症もしくは高カリウム血症、糖尿病の新規発症、異脂肪血症など）を低下させる可能性がある。さらに、当該化合物は、ループ利尿薬の長期使用に伴う問題となり得る利尿薬耐性のリスクを低下させ得る。
概して、ＲＯＭＫ阻害薬である化合物は、試験を行った時に、以下の少なくとも１種のアッセイ：１）タリウムフラックスアッセイ、２）電気生理学アッセイにおいて、５μＭ以下、好ましくは１μＭ以下、さらに好ましくは０．２５μＭ以下のＩＣ５０を有する化合物として確認することができる。これらのアッセイについては、以下に更に詳しく説明する。
投与すべき化合物の用量は、個々のケースによって決まり、常として、至適な効果を達成するために個々の環境に適合させるべきである。従って、用量は、治療すべき疾患の性質および重度、治療すべきヒトまたは動物の性別、年齢、体重および個々の応答性、用いられる化合物の作用の効力および期間、療法が急性であるか慢性であるかまたは予防的であるか、式Ｉａの化合物に加え他の活性化合物を投与しているか否かによって決まる。状態の進行の予防、対抗または阻止に必要な治療上有効量または予防上有効量を決定するために、これらの要因を考慮することは、通常の技術を有する臨床関係者の範囲内である。数日、数ヶ月、数年または患者の人生の間持続する治療過程を含む、患者に関連する医学的状態を治療または予防するのに適した時間にわたって、１日１回で慢性的に化合物を投与することが予想される。
一般的に、約０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１から３０ｍｇ／ｋｇ、特に０．００１から１０ｍｇ／ｋｇ（各ケースにおいて体重１ｋｇあたりのｍｇ）の１日用量が、所望の結果を得るために約７５ｋｇの体重の成人に投与するのに適している。１日用量は、好ましくは単回投与で投与され、または数回に、例えば２回、３回または４回の個々の用量に分けることができ、例えば、１日１回基準で０．１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１ｍｇ、１．２５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ等であることができるが、これらに限定されるものではない。場合によっては、化合物の能力または個々の応答性に応じて、所定の１日用量から上昇させまたは低下させることが必要である。さらに、化合物は、即時放出または長期放出もしくは徐放のような放出調節するように製剤することができる。
「患者」なる用語には、病状の予防または治療のために本発明の活性薬剤を用いる動物、好ましくは哺乳動物、特にヒトが含まれる。患者への薬剤の投与は、自己投与および他人による患者への投与の両者を含む。患者は、存在する疾患または医学的状態の治療を必要としてもよく、前記疾患、医学的状態、疾患または医学的状態に由来する長期間の合併症の発症のリスクを予防または減少するための予防的治療を所望していてもよい。
治療上有効量という用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床関係者が追求する組織、系、動物またはヒトの生理的または医学的応答を引き起こすで薬剤または医薬の量を意味するものである。予防上有効量は、研究者、獣医、医師または他の臨床関係者がにより組織、系、動物またはヒトにおいて予防されることが求められる生理的または医療事象の発生のリスクを予防または低減し得る医薬品の量を意味するものである。本明細書で使用される「予防する」、「予防」、「予防的」およびこれら用語の派生語は、患者においてまだ存在していない状態の臨床症状の発症前に患者に化合物を投与することを指す。特定の１日用量は例えば高血圧症の治療のために治療上有効量であると同時に、例えば、心筋梗塞のリスクの予防もしくは低減、または高血圧症に関連する合併症のリスクの予防もしくは低減のための予防上有効量であってもよいことは明らかである。
本発明の治療法においては、ＲＯＭＫ阻害剤は、従来の非毒性の医薬として許容される担体、補助剤および賦形剤を含む単位製剤で、経口、非経口または直腸のような任意の適切な投与経路により投与することができる。本明細書で用いられる場合、非経口という用語は、皮下注射、静脈（ＩＶ）、筋肉、胸骨内注射または輸液法を含む。高血圧もしくは慢性心不全などの慢性適応症の治療には経口製剤が好ましく、特には、固形経口単位製剤、例えば、丸薬、錠剤またはカプセル剤が好ましく、より詳細には錠剤である。急性治療に、例えば急性心不全の治療にはＩＶ投与が好ましい。
本発明は、式Ｉａの化合物および１以上の賦形剤もしくは添加剤からなる医薬として許容される担体からなる医薬組成物も提供する。賦形剤または添加剤は、活性医薬成分を製剤するのに用いられる不活性物質である。経口使用の場合、有効成分を含む本発明の医薬組成物は、丸薬、錠剤、トローチ剤、薬用キャンディー、水性もしくは油性懸濁液、分散性粉末または粒剤、乳濁液、硬または軟カプセル剤、またはシロップ剤またはエリキシル剤のような形態であってもよい。経口使用のための組成物は、医薬組成物を製造するために当該技術分野において公知の任意の方法により製造することができる。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の医薬として許容される賦形剤と混合された有効成分を含む。その賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、マンニトール、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム、および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってもよい。
医薬組成物は、他の通常の添加剤、例えば、湿潤剤、安定化剤、乳化剤、分散剤、保存剤、甘味剤、着色料、香味剤、芳香剤、増粘剤、緩衝物質、溶媒、可溶化剤、貯蔵効果を達成するための薬剤、浸透圧を変化させるための塩、コーティング剤または抗酸化剤を含んでもよいが、これらに限定されるものではない。
経口即時放出型および徐放型製剤、ならびに腸溶コーティング経口製剤を使用してもよい。錠剤はコーティングしなくもよく、または味を隠すためまたは他の理由により、美的目的のために公知の方法によりコーティングしてもよい。消化管における崩壊および吸収を遅延させ、その結果長期間にわたる持続的作用を提供するためにコーティングを用いてもよい。例えば、時間遅延物質、例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルを使用してもよい。
経口使用のための製剤は、有効成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセルとして、または有効成分が水または混和性溶媒、例えばプロピレングリコール、ＰＥＧ類およびエタノール、または油系媒体、例えば落花生油、流動パラフィンまたはオリーブ油と混合される軟ゼラチンカプセルとして存在してもよい。
水系懸濁液は、水系懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性物質を含む。油系懸濁液は、有効成分を、植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油、または流動パラフィンのような鉱油中で懸濁することにより製剤することができる。油系懸濁液は、増粘剤、例えばミツロウ、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含んでいてもよい。味のよい経口製剤を得るために甘味剤および香味剤を加えてもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤を加えることにより保存することができる。シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖を用いて製剤することができる。
本発明は、式Ｉａの化合物を医薬として許容される担体と混合することを含む、医薬組成物の製造方法をも含む。式Ｉａの化合物を医薬として許容される担体と混合することにより製造される医薬組成物も含まれる。さらに、治療上有効量の本発明の化合物を、利尿および／またはナトリウム利尿を引き起こすための、および／または本明細書に記載された用量で本明細書に記載される医学的状態のいずれかの治療、予防またはリスクを低減するための、ＲＯＭＫの阻害に有用な薬剤の製造に用いることができる。
医薬組成物中の式Ｉａの活性化合物および／または医薬として許容されるその塩の量は、例えば、これらに限定されないが、遊離の酸／遊離の塩基の重量を基準とし、投与量あたり０．１から２００ｍｇ、特には０．１から１００ｍｇ、より詳細には０．１から５０ｍｇであってもよいが、医薬組成物の種類および有効成分の効力および／または治療される医学的状態によって決まり、低くなったり、高くなったりしてもよい。医薬組成物は、通常、遊離の酸／遊離の塩基の重量を基準とし、０．５から９０重量％の活性化合物を含む。
式Ｉａの化合物はＲＯＭＫを阻害する。この性質のため、人間医学および獣医学における医薬活性化合物としての利用から離れ、ＲＯＭＫにおけるそのような効果が意図される科学的ツールとしてまたは生化学的研究を補助するものとして、および診断目的、例えば細胞試料または組織試料のイン・ビトロでの診断に使用することもできる。式Ｉａの化合物は、他の医薬活性化合物の製造用中間体として使用することもできる。
１以上の別の薬理活性薬剤を式Ｉａの化合物と併用投与することができる。その別の活性薬剤（または薬剤）は、式Ｉａの化合物とは異なり、身体で活性である医薬活性薬剤（または薬剤）、例えば投与後に医薬活性型に変換するプロドラッグである化合物を意味するものであり、そのような製剤が市販されているか他の形で化学的に可能である場合に、前記別の活性薬剤の遊離酸、遊離塩基および医薬として許容される塩をも含むものである。一般的に、抗高血圧薬、別の利尿薬、抗アテローム硬化薬、例えば脂質修飾剤、抗糖尿病薬および／または抗肥満薬（これらに限定されるものではない）などの任意の好適な別の活性物質（または活性物質類）が、単一の製剤（固定用量併用剤）において式Ｉａの化合物と任意に組み合わせて用いられ、または活性物質の同時または逐次的投与（別個の活性物質の同時投与）を可能にする１種以上の別個の製剤で患者に投与することができる。使用することのできる別の活性物質の例には、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（例えば、アラセプリル、ベナゼプリル、カプトプリル、セロナプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラート、ホシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、モベルチプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリル、テモカプリルまたはトランドラプリル）、アンジオテンシン受容体遮断薬またはＡＲＢ類としても知られているアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（例えば、ロサルタン、すなわち、ＣＯＺＡＡＲ（登録商標）、バルサルタン、カンデサルタン、オルメサルタン、テルメサルタン、エプロサルタン、イルベサルタンおよびＨＹＺＡＡＲ（登録商標）のような、ヒドロクロロチアジドと併用して用いられる任意の薬剤）；利尿薬、例えばヒドロクロロチアジド（ＨＣＴＺ）；それぞれＨＣＴＺと組み合わせたまたは組み合わせないアミロリドＨＣｌ、スピロノラクトン、エプレレノン（ｅｐｌｅｒａｎｏｎｅ）、トリアムテレンなどのカリウム保持性利尿薬；中性エンドペプチダーゼ阻害剤（例えば、チオルファンおよびホスホラミドン）；アルドステロン拮抗薬；アルドステロン合成酵素阻害薬；レニン阻害剤（例えば、ジ−およびトリ−ペプチドの尿素誘導体（米国特許第５，１１６，８３５号を参照されたい）、アミノ酸および誘導体（米国特許第５，０９５，１１９号および第５，１０４，８６９号）、非ペプチド結合により連結したアミノ酸鎖（米国特許第５，１１４，９３７号）、ジ−およびトリ−ペプチド誘導体（米国特許第５，１０６，８３５号）、ペプチジルアミノジオール類（米国特許第５，０６３，２０８号および第４，８４５，０７９号）およびペプチジルベータ−アミノアシルアミノジオールカルバマート類（米国特許第５，０８９，４７１号）；また、米国特許第５，０７１，８３７号；第５，０６４，９６５号；第５，０６３，２０７号；第５，０３６，０５４号；第５，０３６，０５３号；第５，０３４，５１２号および第４，８９４，４３７号に開示されている、種々の他のペプチド類似体、および小分子レニン阻害剤（ジオールスルホンアミドおよびスルフィニル（米国特許第５，０９８，９２４号）、Ｎ−モルホリノ誘導体（米国特許第５，０５５，４６６号）、Ｎ−ヘテロシクリルアルコール（米国特許第４，８８５，２９２号）およびピロールイミダゾロン（米国特許第５，０７５，４５１号）；また、ペプスタチン誘導体（米国特許第４，９８０，２８３号）ならびにスタトン（ｓｔａｔｏｎ）含有ペプチドのフルオロ−およびクロロ誘導体（米国特許第５，０６６，６４３号）；エナルクレイン；ＲＯ ４２−５８９２；Ａ ６５３１７；ＣＰ ８０７９４；ＥＳ １００５；ＥＳ ８８９１；ＳＱ ３４０１７；アリスキレン（２（Ｓ），４（Ｓ），５（Ｓ），７（Ｓ）−Ｎ−（２−カルバモイル−２−メチルプロピル）−５−アミノ−４−ヒドロキシ−２，７−ジイソプロピル−８−［４−メトキシ−３−（３−メトキシプロポキシ）−フェニル］−オクタンアミドヘミフマレート）ＳＰＰ６００、ＳＰＰ６３０およびＳＰＰ６３５）；エンドセリン受容体アンタゴニスト、血管拡張薬（例えば、ニトロプルシド）；カルシウムチャンネル遮断薬（例えば、アムロジピン、ニフェジピン、ベラパミル、ジルチアゼム、フェロジピン、ガロパミル、ニルジピン、ニモジピン、ニカルジピン）；カリウムチャンネル活性化剤（例えば、ニコランジル、ピナシジル、クロマカリム、ミノキシジル、アプリルカリム、ロプラゾラム）；交感神経抑制薬；β−アドレナリン遮断薬（例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルベジロール、メトプロロール、酒石酸メトプロロール、ナドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール）；アルファアドレナリン遮断薬（例えば、ドキサゾシン、プラゾシンまたはアルファメチルドーパ）；中枢性アルファアドレナリン作動薬；末梢性血管拡張薬（例えば、ヒドララジン）；脂質低下薬、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えば、シンバスタチンおよびロバスタチン（これらはラクトンプロドラッグ型でＺＯＣＯＲ（登録商標）およびＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）として販売されており、投与後に阻害薬として機能する。）、ならびにアトルバスタチン（特にはＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）で販売されているカルシウム塩）、ロスバスタチン（特にはＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標）で販売されているカルシウム塩）、プラバスタチン（特にはＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）で販売されているナトリウム塩）およびフルバスタチン（特にはＬＥＳＣＯＬ（登録商標）で販売されているナトリウム塩）などのジヒドロキシ開環酸ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬の医薬として許容される塩；コレステロール吸収阻害剤、例えばエゼチミブ（ＺＥＴＩＡ（登録商標））および上記のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬などのいずれか他の脂質低下剤、特にはシンバスタチン（ＶＹＴＯＲＩＮ（登録商標））もしくはアトルバスタチンカルシウムと組み合わせたエゼチミベ；即時放出または徐放型のナイアシン、特にはラロピプラント（ＴＲＥＤＡＰＴＩＶＥ（登録商標））などのＤＰ拮抗薬および／またはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬と組み合わせたナイアシン；即時放出または徐放型のナイアシン、特にはラロピプラント（ＴＲＥＤＡＰＴＩＶＥ（登録商標））などのＤＰ拮抗薬および／またはＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬と組み合わせたナイアシン；ナイアシン受容体作動薬、例えば、アシピモックスおよびアシフラン、ならびにナイアシン受容体部分作動薬；インシュリン増感剤、ならびに糖尿病の治療のための関連化合物、例えばビグアニド類（例えば、メトホルミン）、メグリチニド（例えば、レパグリニド、ナテグリニド）、スルホニル尿素（例えば、クロルプロパミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリド、トラザミド、トルブタミド）、グリタゾンとも呼ばれるチアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール）、ジペプチジルペプチダーゼ阻害剤（例えば、シタグリプチン（ＪＡＮＵＶＩＡ（登録商標））、アログリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、デュトグリプチン（ｄｕｔｏｇｌｉｐｔｉｎ）、ジェミグリプチン）、麦角アルカロイド（例えば、ブロモクリプチン）を含む代謝改変剤、ＪＡＮＵＭＥＴ（登録商標）（メトホルミンを含むシタグリプチン）のような併用薬剤、ならびにエキセナチドおよび酢酸プラムリンチドのような注射可能な糖尿病薬；またはジアゾキシドなど（これに限定されるものではない）の前記疾患の予防または治療に有益な他の薬剤；そして化学的に可能な上記活性薬剤の遊離酸、遊離塩基および医薬として許容される塩型などがあるが、これらに限定されるものではない。
本発明の化合物のいくつかの製造方法について実施例で説明する。原料および中間体は、購入するか、公知の手順から製造するか、別途示したものである。式Ｉａの化合物を得るためのいくつかの頻繁に用いられる経路についても、下記のような図式によって説明する。場合により、反応図式の段階を実施する順序を変えて、反応を促進したり、望ましくない反応生成物を回避することができる。
本発明の化合物は、図式１に示したように、適切に置換されているピペラジン類１と構造２のカルボン酸とのカップリングによるアミド形成によって製造することができる。これは、ＨＯＢｔおよびトリエチルアミンなどの塩基の存在下または非存在下でＥＤＣを用いるか、ＨＡＴＵなどの各種の他のアミドカップリング試薬を用いる等の、化学者には公知の多くの方法で行うことができる。
図式１
Figure 2014521751
 ピペラジン類１は図式２に従って製造することができる。エポキシド類３は、エタノール、ＤＭＳＯまたはトルエンなどの溶媒中で加熱することで適切に保護されたヒドロキシアルキルピペラジン類４とカップリングさせて、ジオール類５を得ることができる（Ｎｏｍｕｒａ， Ｙ． ｅｔ ａｌ． Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ， １９９５， ４３（２）， ２４１−６）。加熱は、従来の加熱浴またはマイクロ波照射によって行うことができる。ジオール類５は、各種方法によって、例えばベンゼンまたはトルエンなどの好適な溶媒中試薬シアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホランとともに加熱することで環化させて、６員もしくは７員の環６を得ることができる。加熱は、従来の加熱浴またはマイクロ波照射によって行うことができる。得られた化合物６は、シスおよびトランス異性体の混合物である。次に、保護基（Ｇｒｅｅｎｅ， Ｔ．； Ｗｕｔｓ， Ｐ． Ｇ． Ｍ． 保護基ｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ １９９１）を外すことができる。例えば、保護基が図式２に示したＢｏｃである場合、脱離をＴＦＡまたはＨＣｌなどの酸で処理することで行って、ピペラジン類１Ａを得ることができる。別法として、化合物６をキラルカラムを用いるシリカクロマトグラフィーまたは分取高速液体クロマトグラフィーによって分離して、分離されたシス６（シス）およびトランス６（トランス）異性体を得ることができる。純粋なシスおよびトランス異性体の保護基を、Ｂｏｃ基の場合にはＴＦＡまたはＨＣｌなどの酸による処理によって外して、純粋なシスおよびトランス異性体１Ａ（シス）および１Ａ（トランス）としてのピペラジン類１Ａを得ることができる。ヒドロキシアルキルピペラジン類４の単一のエナンチオマーを用いる場合、単一のエナンチオマーシスおよびトランス異性体１Ａ（シス）および１Ａ（トランス）を得ることができる。
図式２
Figure 2014521751
 保護されたピペラジン類６は、図式３に従って、最初にヒドロキシアルキルピペラジン類４をブロモメチルケトン類（またはクロロメチルケトン類）７とカップリングさせてヘミケタール類８を得ることで製造することもできる。これは代表的には、トリエチルアミンまたはジエチルイソプロピルアミンなどの塩基の存在下に行う。得られたヘミケタール類８は、例えばトリフルオロ酢酸などの酸触媒の存在下にトリエチルシランを用いる還元によってピペラジン類１Ａに直接変換することができる。シスおよびトランス異性体の分離が望まれる場合、例えばＢｏｃＯを用いてＢｏｃなどの保護基を導入することで中間体６を得ることができ、それを図式２に示した方法に従ってシスおよびトランス異性体に分離することができる。別法として、メシルクロライドおよびトリエチルアミンなどの塩基を用いるメシレートの形成が関与する３段階手順と、それに続く塩基の存在下での脱離によってヘミケタール類８を還元して、エノールエーテル類９を得ることができる。次に、エノールエーテル類９をパラジウム／炭素などの触媒存在下での水素化によって還元して保護ピペラジン類６を得ることがでっき、それを図式２に記載の方法に従ってシスおよびトランス異性体に分離することができる。次に、これらを、図式２に記載の方法に従ってピペラジン中間体１Ａ（シス）および１Ａ（トランス）に変換することができる。
図式３
Figure 2014521751
 あるいは、中間体１の下位群であるピペラジン類１Ｂは、図式４に記載の方法に従って製造することができる。最初にＴＦＡまたはＨＣｌなどの酸で処理し、次にトリエチルアミンなどの塩基存在下にクロルギ酸ベンジルとカップリングさせることで、中間体５（図式２に記載の方法に従って製造）のＢｏｃ保護基を、ベンジルカーバメート（Ｃｂｚ）基に切り換える。得られたＣｂｚ−ピペラジンジオール類５Ａを、塩化チオニルとともに加熱することで相当するジクロロ中間体に変換し、次に得られたジクロライドをヨウ化ナトリウムの存在下にアリルアミンとともに加熱して、アリル置換された縮合ピペラジン類１０を得る。アリル基は、いくつかの方法で、例えばパラジウムテトラキストリフェニルホスフィンなどの触媒の存在下に１，３−ジメチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオンとともに加熱することで脱離させることができる。次に、トリエチルアミンなどのアミンの存在下にＢｏｃ２Ｏで処理することで、露出したアミンをｔｅｒｔ−ブトキシカーバメート基で再保護して、中間体６Ｂ、通常はシスおよびトランス異性体の混合物として中間体６Ｂを得る。得られたシスおよびトランス異性体は、シリカクロマトグラフィーまたはキラル分取ＨＰＬＣによって図式２に記載の方法に従って分離することができる。中間体５が４の単一のエナンチオマーとして製造される場合（図式２に記載の方法に従って）、得られた中間体６Ｂ（シス）および６Ｂ（トランス）も単一の異性体である。別法として、シスおよびトランス異性体の分離は、中間体１０のシス／トランス異性体の分離によって比較的早い段階で行うことができる。中間体６Ｂ（シス）および６Ｂ（トランス）のＣｂｚ保護基を、例えばパラジウム／炭素などの触媒の存在下での水素化分解によって外して、中間体１Ｂ（シス）および１Ｂ（トランス）を得ることができる。
図式４
Figure 2014521751
 あるいは、中間体１の下位群（１Ｃ）を、図式５に従って製造することができる。最初に、メタンスルホニルクロライド、トリエチルアミンなどの塩基、および４−ジメチルアミノピリジンなどの触媒で処理することで、ジオール類５をそれの相当するモノメシレートに変換する。次に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの溶媒中でチオ酢酸カリウムと反応させることで、中間体１１を得る。次に、例えば塩化チオニルで処理し、次にピリジンんなどの塩基を加えることで、１１の残りのヒドロキシル基を、相当するクロロ中間体に変換する。次に、得られたクロロ中間体をナトリウムメトキシドで処理して、環化スルフィド類６Ｃを得る。使用される原料のジオール類５が単一の異性体である場合（エナンチオマー的に純粋なエポキシド類３およびエナンチオマー的に純粋なヒドロキシアルキルピペラジン類４を原料として（図式２））、得られた中間体６Ｃは、単一の異性体として得ることができる。あるいは、ラセミ体のエポキシド類３および単一のエナンチオマーであるヒドロキシアルキルピペラジン類４を用いる場合、得られる中間体６Ｃは、２種類の異性体（シスおよびトランス）の混合物として得られ、それを次に、シリカクロマトグラフィーまたはキラル分取ＨＰＬＣによって単一の異性体６Ｃ（シス）および６Ｃ（トランス）に分離することができる。次に、ＴＦＡまたはＨＣｌなどの酸で処理することでｔｅｒｔ−ブチルカーバメート保護基を外して、ピペラジン類１Ｃ（シス）および１Ｃ（トランス）を得ることができる。
図式５
Figure 2014521751
 中間体２（図式１中）は、２の構造に応じて各種方法で製造され、いくつかの方法を下記の実験の部で示してある。
エポキシド類３は各種方法によって製造することができる。一つの手法を図式６に記載している。アリールまたは複素環ハライド（ブロマイド１２を示している）を、多くの方法で、例えばヘック反応により、または適切なホスフィン配位子（Ｍｏｌａｎｄｅｒ， Ｇ．； Ｂｒｏｗｎ， Ａ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００６， ７１（２６）， ９６８１−９６８６）を用いてパラジウム触媒カップリング条件下にテトラフルオロホウ酸ビニルとの反応によってカップリングして、アルケン生成物１３を形成することができる（Ｍｏｌａｎｄｅｒ， Ｇ．； Ｌｕｃｉａｎａ， Ａ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００５， ７０（１０）， ３９５０−３９５６）。次に、アルケン類１３を、いくつかの方法、例えばメタ−クロロ過安息香酸による処理（Ｆｒｉｎｇｕｅｌｌｉ、Ｆ． ｅｔ ａｌ． Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， １９８９， ２１（６）， ７５７−７６１）によって相当するエポキシド類３に変換することができる。
図式６
Figure 2014521751
 ブロモメチルケトン類７は各種方法で製造することができ、一つの経路を図式７に描いてある。図式によれば、アリールまたは複素環ハライド（ブロマイド１２を示している）を、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２などの金属触媒の存在下にトリブチル（１−エトキシビニル）スズと反応させて、中間体のエチルエノールエーテルを得ることができる。次にこれを、同じ反応容器中、テトラヒドロフランおよび水を加えてＮ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）で処理して、ブロモメチルケトン類７を得る。同様に、Ｎ−ブロモコハク酸イミドに代えてＮ−クロロコハク酸イミドを用いることで、クロロメチルケトン類を製造することができる。
図式７
Figure 2014521751
 ジアステレオマーおよびエナンチオマーの独立の合成またはそれらのクロマトグラフィー分離は、本明細書に開示の方法に適切な変更を加えることで、当業界で公知の方法に従って行うことができる。それらの絶対立体化学は、必要に応じて既知の絶対立体化学の不斉中心を有する試薬で誘導体化された結晶性生成物または結晶性中間体のＸ線結晶学によって決定することができる。
主題の化合物は、適宜に実施例に開示されている手順に変更を加えることで製造することができる。原料は市販されているか、公知の手順によってまたは説明の方法に従って製造される。下記の実施例は、さらなる説明のみを目的として提供されるものであり、開示の発明に対する限定となるものではない。
水分または空気に対して感受性の反応は、無水の溶媒および試薬を用い、窒素もしくはアルゴン下に行った。反応の進行は、通常はＥ． ＭｅｒｃｋのプレコートＴＬＣプレート、シリカゲル６０Ｆ−２５４、層厚０．２５ｍｍを用いて行う分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）または液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって確認した。
代表的には、使用した分析ＬＣ−ＭＳシステムは、オートサンプラーを搭載したＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣを用いる陽イオン検出モードでの電気スプレーイオン化を行うＷａｔｅｒｓ ＺＱプラットホームからなるものであった。そのカラムは通常、Ｗａｔｅｒ Ｘｔｅｒｒａ ＭＳ Ｃ１８、３．０×５０ｍｍ、５μｍであった。流量は１ｍＬ／分であり、注入容量は１０μＬであった。ＵＶ検出は２１０から４００ｎｍの範囲であった。移動相は、溶媒Ａ（水＋０．０６％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（アセトニトリル＋０．０５％ＴＦＡ）からなるものとし、０．７分間１００％溶媒Ａとし、３．７５分かけて１００％溶媒Ｂまで変え、１．１分間維持し、次に０．２分間かけて１００％溶媒Ａに戻す勾配を用いた。
分取ＨＰＬＣ精製は通常、質量分析系システムを用いて行った。通常、それは電気スプレーイオン化を行うＷａｔｅｒｓ ＺＱ単一四重極ＭＳシステム、Ｗａｔｅｒｓ ２５２５勾配ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ ２７６７インジェクター／コレクター、Ｗａｔｅｒｓ ９９６ＰＤＡ検出器、１５０から７５０ａｍｕ、陽性電気スプレー、ＭＳ誘発コレクション、およびＷａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ−１８ ５ミクロン、３０ｍｍ（内径）×１００ｍｍカラムのＭＳ条件からなるＬＣ−ＭＳシステムで構成されたＷａｔｅｒｓ クロマトグラフィーワークステーションで行った。移動相は、０．１％ＴＦＡ含有水中のアセトニトリル（１０％から１００％）の混合物からなるものであった。流量は５０ｍＬ／分に維持し、注入容量は１８００μＬであり、ＵＶ検出範囲は２１０から４００ｎｍであった。移動相勾配は、個々の化合物について至適化した。
マイクロ波照射を用いて行われる反応は通常、Ｐｅｒｓｏｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ製造によるＥｍｒｙｓ ＯｐｔｉｍｉｚｅｒまたはＢｉｏｔａｇｅ製造によるＩｎｉｔｉａｔｏｒを用いて実施した。溶液の濃縮は、減圧下にロータリーエバポレータで行った。フラッシュクロマトグラフィーは通常、記載の大きさのプレパックカートリッジ中のシリカゲル（３２から６３ｍＭ、６０Å孔径）でのＢｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー装置（Ｄｙａｘ Ｃｏｒｐ．）を用いて行った。１Ｈ ＮＭＲスペクトラムは、別段の断りがない限り、ＣＤＣｌ３溶液中での５００ＭＨｚスペクトル計で得た。化学シフトは、百万分率（ｐｐｍ）で報告した。ＣＤ３Ｃｌ溶液中ではテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部基準として用い、ＣＤ３ＯＤ溶液中の内部基準としては残留ＣＨ３ＯＨピークまたはＴＭＳを用いた。カップリング定数（Ｊ）をヘルツ（Ｈｚ）で報告した。
キラル分析クロマトグラフィーは、定組成溶媒系としてのエタノール／ヘキサン（％Ｅｔ／Ｈｅｘ）またはイソプロパノール／ヘプタン（％ＩＰＡ／Ｈｅｐ）の記載のパーセントを用いるＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＩＡ、またはＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪカラムのうちのいずれか（２５０×４．６ｍｍ）（Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｌｔｄ．）で行った。場合により、キラル分取クロマトグラフィーは、キラル分析クロマトグラフィーで確認される所望の定組成溶媒系を用いるＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＩＡ、またはＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪカラムのいずれか（２０×２５０ｍｍ）（Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｌｔｄ．）で行った。あるいは、キラル分取クロマトグラフィーは、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ、またはＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ−Ｈカラムのいずれか（２５０×２１．２ｍｍ）（Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｌｔｄ．）を用いる超臨界液（ＳＦＣ）によって行った。当業者には公知のように、保持時間は変動し、ピーク溶出のタイミングおよび／または順序は使用されるカラム、カラム条件ならびに使用される溶媒系および装置などのクロマトグラフィー条件に応じて変えることができることから、保持時間が実施例および表中で提供される場合、それらは特定の化合物の決定的な特性であることを意図するものではない。
フラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル（２３０から４００メッシュ）で行った。ＮＭＲスペクトラムは、別段の断りがない限り、ＣＤＣｌ３溶液中で得た。カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）単位である。本明細書で使用される略称：酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、原料（ＳＭ）、ジエチルエーテル（エーテル）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、ヒューニッヒ塩基、ＤＩＰＥＡ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）、カルボジイミド（ＥＤＣ、ＥＤＡＣ、またはＥＤＣＩ）、２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ）、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、シクロペンチルメチルエーテル（ＣＰＭＥ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（ＤＰＰＰ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２′，４′，６′−トリイソプロピルビフェニル（Ｘ−Ｐｈｏｓ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）、Ｎ−ヨードコハク酸イミド（ＮＩＳ）、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢｏｃまたはＢＯＣ）、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（ＢＯＣ２Ｏ、Ｂｏｃ２Ｏ）、酢酸（ＡｃＯＨ；ＨＯＡｃ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ｍＣＰＢＡ（３−クロロ過安息香酸）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＮＡＤＰ）、石油エーテル（ＰＥ）、水素化リチウムアルミニウム（ＬＡＨ）、ジ−イソプロピルアミン（ＤＩＰＡ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）、ｐ−トルエン−ＳＯ２−（トシルまたはＴｓ）、メタンスルホニルクロライドまたはメシルクロライド（Ｍｓ−Ｃｌ）、メタンスルホン酸（ＭｓＯＨ）、ＣＨ３ＳＯ２−（メシルまたはＭｓ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２またはＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）：ＣＨ２Ｃｌ２と錯形成していても良い１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）、酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ）、丸底フラスコ（ＲＢまたはＲＢＦ）、飽和水溶液（ｓａｔ′ｄ）、中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ）、カラム体積（ＣＶ）、室温（ｒｔ、ｒ．ｔ．またはＲＴ）、時間（ｈまたはｈｒ）、分（ｍｉｎ）。セライトは珪藻土の商標名であり、ソルカ・フロク（Ｓｏｌｋａ Ｆｌｏｃ）は粉末セルロースの商標名である。Ｘまたは×は、作業を繰り返す回数を表すのに（例えば、２×２００ｍＬ１Ｎ ＨＣｌで洗浄）、または寸法を伝えるのに（例えば、カラム寸法は３０×２５０ｍｍである。）用いることができる。
下記は、以降の実施例に記載の最終生成物を製造するのに用いられる中間体の代表的な製造手順である。これらの実施例は、さらなる説明のみを目的として提供されるものであり、開示の発明に対する限定となるものではない。
中間体１Ａおよび１Ｂ
Figure 2014521751
 １Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；１Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：５−エテニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモフタリド（５０ｇ、２３５ｍｍｏｌ）、トリフルオロホウ酸カリウムビニル（６２．９ｇ、４６９ｍｍｏｌ）、およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（９．５８ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）をエタノール（５００ｍＬ）に加え、次にＴＥＡ（６５．４ｍＬ、４６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を脱気し、次に８時間還流加熱した。酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄することで反応の後処理を行った。有機層を脱水し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を、２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３Ｌ）と次に３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２Ｌ）を用いるＭＰＬＣ（シリカ、６００ｇカラム）によって精製して標題化合物を得た。
段階Ｂ：５−（オキシラン−２−イル）−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−エテニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（２８．４ｇ、１７７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４００ｍＬ）に溶かし、次にｍＣＰＢＡ（４７．７ｇ、２１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。一部の原料オレフィンが残った。別のｍＣＰＢＡ ２５ｇを加え、混合物を終夜撹拌した。混合物を氷冷Ｎａ２ＳＯ３溶液（飽和）に投入した。層を分離し、有機層を５％ＮａＯＨ溶液、ブラインで洗浄し、脱水した（ＭｇＳＯ４）。粗生成物をＭＰＬＣ（３３０ｇカラム、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２リットル、次に４５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２リットルで溶離）によって精製して、５−（オキシラン−２−イル）−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１７７。
段階Ｃ：（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）−４−［２−ヒドロキシ−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）エチル］ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：５−（オキシラン−２−イル）−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（１．５ｇ、８．５ｍｍｏｌ）および市販の（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジン（２．３９４ｇ、１１．０７ｍｍｏｌ）を、マイクロ波管においてエタノール（１０ｍＬ）中で合わせた。混合物を脱気し、次に、１５０℃で６０分間加熱した。ＬＣ−ＭＳで、生成物ピークが示された。酢酸エチルを加え、ブラインで１回洗浄することで反応の後処理を行った。有機層を分離し、脱水し、濃縮乾固させた。粗生成物を、８０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムを用いてＭＰＬＣによって精製し、５０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離して標題化合物を得た。
段階Ｄ：（９ａＳ）−３−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（ＴＨ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）−４−［２−ヒドロキシ−２−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）エチル］ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．３ｇ、８．４ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（３．６５ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）をベンゼン３０ｍＬに溶かし、溶液を脱気し、次に加熱して１００℃として３時間経過させた。ＬＣ−ＭＳで、生成物ピーク（Ｍ＋１＝３８９）が示された。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、３３０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣによって精製し、１５％アセトン／８５％ヘキサン混合物で溶離することで、標題化合物のシス−トランス混合物を得る。
段階Ｅ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ］［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：前の段階からのシス−トランス異性体混合物を、４５％ＩＰＡ／５５％ヘプタン溶媒系で溶離を行うＣｈｉｒａｌＣＥＬ ＯＤ ４．６×２５０ｍｍ １０μカラムを用いて分離した。トランス−異性体１Ａは最初に１１．４６分で溶出し、第２にシス−異性体１Ｂは１７．４３分であった。１Ａ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．９１５（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．３３（ｓ、２Ｈ）、４．８１（ｄｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０３−４．０７（ｍ、２Ｈ）、４．００（ｄｄ、Ｊ＝３、１１．２５Ｈｚ、１Ｈ）、３．５１（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０４（ｂ、１Ｈ）、２．９６（ｄｄ、Ｊ＝２、１１．７５Ｈｚ、１Ｈ）、２．７６（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５７（ｂ、１Ｈ）、２．２１−２．３２（ｍ、３Ｈ）、１．５（ｓ、９Ｈ）。１Ｂ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．９５（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７０（ｓ、１Ｈ）、５．３７（ｓ、２Ｈ）、４．９１（ｔ、Ｊ＝３．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．６５−４．０７（ｂ、２Ｈ）、３．６４（ｄｄ、Ｊ＝３、１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｔ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２９（ｄｄ、Ｊ＝３．５、１２Ｈｚ、１Ｈ）、３．０２（ｂ、１Ｈ）、２．８２（ｄｄ、Ｊ＝３．５、１２Ｈｚ、２Ｈ）、２．６６−２．６７（ｂ、１Ｈ）、２．５０（ｔ、Ｊ＝１１Ｈｚ、２Ｈ）、１．５（ｓ、９Ｈ）。
中間体２
Figure 2014521751
 ５−ブロモ−４−メチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン
段階Ａ：（３−ブロモ−２−メチルフェニル）メタノール：３−ブロモ−２−メチル安息香酸（３５．０ｇ、１６３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液に、ボランＴＨＦ錯体（１．０Ｍ、２１２ｍＬ、２１２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２４時間撹拌した。ＴＬＣで、１個の単一の生成物スポットが示された。水で反応停止した。溶媒のＴＨＦを減圧下に除去した。得られた固体を酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶かし、１Ｎ ＨＣｌ、炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮して、（３−ブロモ−２−メチルフェニル）メタノールをえた。
段階Ｂ：５−ブロモ−４−メチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：（３−ブロモ−２−メチルフェニル）メタノール（６．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）を入れたフラスコに、トリフルオロ酢酸タリウム塩（１６．２ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）の１Ｍ ＴＦＡ中溶液を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。ＴＬＣによる分析で原料が残っていないことが示された。溶媒を減圧下に除去し、残留物を高真空ポンプで３０分間処理して、ＴＦＡを完全に除去した。次に、残留物に塩化パラジウム（ＩＩ）（５２９ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２．５３ｇ、５９．７ｍｍｏｌ）、酸化マグネシウム（２．４１ｇ、５９．７ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）を加えた。反応液にＣＯを２回流し、室温でＣＯ下に維持した。ＬＣによる分析によって、２時間以内に大きい生成物スポットが示された。この溶液に酢酸エチルを加えて塩を沈殿させた。溶液をセライト層で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、シリカに吸着させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．２５（ｓ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、３Ｈ）。
中間体３
Figure 2014521751
 ４−メチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン
段階Ａ：５−エテニル−４−メチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：２０ｍＬマイクロ波管において、５−ブロモ−４−メチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（５９８ｍｇ、４．４７ｍｍｏｌ）、トリフルオロホウ酸カリウムビニル（５０７ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（１８２ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．６２２ｍＬ、４．４７ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに加えた。管を密閉し、脱気し、加熱して１４０℃として２０分経過させた。ＬＣ−ＭＳによる分析によって生成物ピークが示された。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、脱水し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を、１２０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムおよび０％から８０％ＥＴＯＡＣ／ヘキサン溶媒系を用いるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、５−エテニル−４−メチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１７５。
段階Ｂ：４−メチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−エテニル−４−メチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（１．４６ｇ、８．３８ｍｍｏｌ）を０℃でＤＣＭ（２５ｍＬ）に加え、ｍＣＰＢＡ（２．８９ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液、ＮａＨＣＯ３およびブラインでそれぞれ１回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗取得物を、０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離を行う１２０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣによって精製して、標的の４−メチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．７７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｓ、２Ｈ）、４．１２（ｓ、１Ｈ）、３．２７（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、１Ｈ）、２．７３５（ｄｄ、Ｊ＝２．２、５．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１９１。
中間体３Ａおよび３Ｂ（方法１）
Figure 2014521751
 ３Ａ：４−メチル−５−［（２Ｓ）−オキシラン−２−イル］−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンおよび３Ｂ：４−メチル−５−［（２Ｒ）−オキシラン−２−イル］−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：ラセミ体４−メチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを、Ｂｅｒｇｅｒ ＭＧＩＩＩ分取ＳＦＣ装置での超臨界液体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）条件下のＣｈｉｒａｌＰａｋ（登録商標）ＡＤ−Ｈカラム（５×２５ｃｍ）で分割した。ラセミ体を１：１ＤＣＭ：ＭｅＯＨで５０ｍｇ／ｍＬに希釈した。１０％ＥｔＯＨ／ＣＯ２、流量２００ｍＬ／分、１００バール、２５℃を用いて分離を行った。２．１２分間隔で、５００μＬ注入を行った。先に溶出するエポキシド３Ｂは５．２分で溶出し、遅く溶出するエポキシド３Ａは５．６分で溶出した。
あるいは、１００ｍＬ／分の流量での８％ＭｅＯＨ／９８％ＣＯ２の移動相を用いて、分割を行うこともできた。その場合、サンプルをメタノールに溶かして２０ｍｇ／ｍＬとすることで調製し、容量１ｍＬ／注入を用いた。分離後、分画を浴温４０℃でロータリーエバポレータによって脱水した。
各エナンチオマー３Ａおよび３Ｂの絶対立体化学を、３Ｂを用いて行った最終化合物のＸ線結晶構造決定に基づいて、モッシャーエステルおよびトロストエステルにより推定した。原料として３Ｂを原料として製造したエステルのＨ ＮＭＲ分析（４−［（２Ｒ−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）エチル｝ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを使用）。
中間体３Ｂ（方法２）
段階Ａ：３−ヒドロキシメチル−２−メチルフェノール：オーバーヘッド撹拌機を取り付けた５リットル三頸ＲＢに、ＮａＢＨ４（８７．０ｇ、２．３０ｍｏｌ）およびＴＨＦ（３．０Ｌ）を入れ、得られたスラリーを冷却して１０℃とした。そのスラリーに、３−ヒドロキシ−２−メチル安息香酸（１７５ｇ、１．１５ｍｏｌ）を２０分間かけて少量ずつ加えた（Ｔｍａｘ１７℃）。撹拌可能なスラリーが生成し、それを１０から１５℃でさらに４５分間熟成させ、その後にＢＦ３・ＯＥｔ２（３２１ｍＬ、２．５３ｍｏｌ）を１．５時間かけてゆっくり加えた。スラリーを１０℃から１５℃で２時間熟成させ、反応完結についてのアッセイを行った（変換率９８．５％）。スラリーを冷却して＜１０℃とし、ＭｅＯＨ ９３１ｍＬで１．５時間かけてゆっくり反応停止した（ガス発生）。得られたスラリーを終夜室温で熟成させた。バッチを冷却して＜１０℃とし、１Ｎ ＨＣｌ（１．５リットル）で反応停止して均一溶液（ｐＨ溶液約１）を得て、それを３０分間熟成させ、次に有機溶媒をロータリーエバポレータによって除去して合計反応容量を約１．８リットルとした（浴温は５０℃に設定した。ロータリーエバポレータ処理後の濃縮物の内部温度は約４０℃であった）。スラリーを４５℃に３０分間保持してから、ゆっくり冷却して１５℃とした。固体を濾過し、冷（１５℃）水で洗浄して（３００ｍＬで２回）、３−ヒドロキシメチル−２−メチルフェノールを得た。
段階Ｂ：４−ブロモ−３−ヒドロキシメチル−２−メチルフェノール：三頸５リットルフラスコ中窒素下に、アセトニトリル（８５０ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（７５０．０ｍＬ、９，７３５ｍｍｏｌ）の混合物に３−ヒドロキシメチル−２−メチルフェノール（１１３．９ｇ、８２４．０ｍｍｏｌ）を溶かした。反応混合物を冷却して−３３℃とした。Ｎ−ブロモコハク酸イミド（１４１ｇ、７９１ｍｍｏｌ）を１５分かけて加え、添加中の温度は−３５から−３３℃の範囲とした。反応混合物をさらに１５分間撹拌し、その間に温度を低下させて−４０℃とした。冷却浴を外し、水で希釈して総量１．０リットルとした炭酸カリウム（７４１．０ｇ、５，３５８ｍｍｏｌ）を加えた。ガス発生が認められ、温度は２５℃に上昇した。ＭＴＢＥ（１．５Ｌ）を加え、反応混合物を分液漏斗に移した。層を分離した。水層を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（１リットル）＋ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）、次にＭＴＢＥ（５００ｍＬ）＋ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（２４０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。硫酸ナトリウムを濾過によって除去し、追加のＭＴＢＥで洗浄し、減圧下に濃縮した。ＭＴＢＥ（６８４ｍＬ、２倍体積）を加え、懸濁液を加熱して４０℃として均一溶液を得た。溶液を放冷して室温とした。６倍体積のヘプタンを加え、懸濁液を終夜撹拌した。懸濁液を濾過し、固体を４：１ヘプタン：ＭＴＢＥ（５００ｍＬ）、次にヘプタン（５００ｍＬ）で洗浄した。固体を減圧下に脱水して、４−ブロモ−３−ヒドロキシメチル−２−メチルフェノールを得た。
段階Ｃ：５−ヒドロキシ−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン：オーバーヘッド撹拌機、Ｎ２導入管および冷却管を取り付けた２リットル三頸フラスコに、４−ブロモ−３−ヒドロキシメチル−２−メチルフェノール（１００ｇ、４６１ｍｍｏｌ）、ＣｕＣＮ（８３．０ｇ、９２１ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５００ｍＬ）を入れた。溶液にＮ２を１５分間吹き込み加熱して１４５℃として均一溶液を得た。溶液を１４５℃で２時間熟成させ、反応混合物を冷却して９５℃とした。水４１．５ｍＬを加え（Ｎ２を吹き込む）、反応液を２０時間熟成させた。反応液を冷却して室温とし、固体をソルカ・フロクで濾過し、ケーキをＤＭＦ ５０ｍＬで洗浄した。ＥｔＯＡｃ １リットルの入った３リットルフラスコに、ＤＭＦ濾液を加えた。フラスコ底部に沈殿コーティングが生じた。ＤＭＦ／ＥｔＯＡｃ懸濁液をソルカ・フロクで濾過し、ケーキをＥｔＯＡｃ ２５０ｍＬで洗浄した。得られた濾液を５％ブライン溶液で洗浄した（５００ｍＬで３回）。水層をＥｔＯＡｃ ５００ｍＬで抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去した。固体を室温でＭＴＢＥ ２５０ｍＬ中にてスラリーとし、濾過し、ＭＴＢＥ １００ｍＬで洗浄した。固体を室温で真空乾燥して、５−ヒドロキシ−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オンを得た。
段階Ｄ：トリフルオロメタンスルホン酸４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−５−イルエステル:オーバーヘッド撹拌機を取り付けた２リットル丸底フラスコ中、窒素下で、５−ヒドロキシ−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（４６．８ｇ、２８５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（９３５ｍＬ）に懸濁させた。トリエチルアミン（５９．５ｍＬ、４２７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を氷浴で冷却して３．８℃とした。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（６７．４ｍＬ、３９９ｍｍｏｌ）を、温度を＜１０℃に維持しながら滴下漏斗によって５０分間かけて加えた。反応混合物をさらに１５分間撹拌後、反応混合物を水（２００ｍＬ）で反応停止し、ＤＡＲＣＯ（登録商標）ＫＢ（活性炭、２５ｇ）とともに１５分間撹拌した。得られた二相混合物をソルカ・フロクで濾過し、追加のジクロロメタンで洗浄し、分液漏斗に移し入れ、その時点でそれを追加の水（３００ｍＬ）で希釈した。層を分離し、有機層を水（５００ｍＬ）および１０％ブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。ジクロロメタン溶液を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、溶媒留去した。固体をシリカゲル（２７．５ｇ）に吸着させ、２５％酢酸エチル／ヘキサンを用いてシリカゲル層（２７１ｇ）で溶離した。得られた溶液を減圧下に濃縮し、濃縮中に生成物が沈殿した。懸濁液を濾過し、固体をヘプタンで洗浄し、減圧下および窒素下に乾燥させて、標題化合物を得た。
段階Ｅ：５−（１−ブトキシ−ビニル）−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン：１リットル三頸容器に、トリフルオロメタンスルホン酸４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−５−イルエステル（６３．０ｇ、２１３ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（３１５ｍＬ）、ブチルビニルエーテル（１３８ｍＬ、１０６３ｍｍｏｌ）と次にＥｔ３Ｎ（３５．６ｍＬ、２５５ｍｍｏｌ）を入れた。溶液にＮ２を２０分間吹き込んだ。その溶液に、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．１９ｇ、５．３２ｍｍｏｌ）およびＤＰＰＰ（２．４１ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）を加え、さらに１０分間吹き込みを行い、加熱して８０℃とした。１時間の熟成後、溶液を冷却して＜１０℃とし、ＥｔＯＡｃ ６３０ｍＬで反応停止し、５％ＮＨ４Ｃｌ（３１５ｍＬで２回）、１０％ブライン（３１５ｍＬで２回）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、ロータリーエバポレータによって濃縮し、ＥｔＯＡｃで流して（１００ｍＬで３回）、過剰のブチルビニルエーテルを除去して、粗５−（１−ブトキシ−ビニル）−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オンを得た。
段階Ｆ：５−（２−ブロモ−アセチル）−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン：オーバーヘッド撹拌機を取り付けた１リットル三頸フラスコに、粗５−（１−ブトキシ−ビニル）−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（５５．８ｇ）およびＴＨＦ（３１５ｍＬ）を加えた。溶液を冷却して＜５℃とし、次に水（７９ｍＬ）を加え、溶液を＜５℃に維持した。次に、Ｔｍａｘ＝１９℃に維持しながらＮＢＳ（４１．６ｇ）を少量ずつ加えた。次に、溶液を昇温させて室温として３０分間経過させた。ＨＢｒ（４８％、０．２４１ｍＬ）を加え、反応液を室温で約１時間熟成させて、その後に水２３６ｍＬをバッチに加えた。水浴を用いて、温度を２０℃に維持する。追加の水３１５ｍＬを加え（溶媒組成１：２ＴＨＦ：水）、スラリーを冷却して１５℃とした。得られた固体を濾過し、冷１：２ＴＨＦ：水（１５℃）：１５０ｍＬ置換洗浄と次に１００ｍＬスラリー洗浄で洗浄した。固体を室温で真空乾燥して、５−（２−ブロモ−アセチル）−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オンを得た。
段階Ｇ：４−メチル−５−［（２Ｒ）−オキシラン−２−イル］−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−（２−ブロモ−アセチル）−４−メチル−３Ｈ−イソベンゾフラン−１−オン（４８．８ｇ、１８１ｍｍｏｌ）をオーバーヘッド撹拌機、熱電対、およびマントルヒーターを取り付けた５リットル三頸ＲＢフラスコに入れた。２−プロパノール（１．２２Ｌ）を加え、次にｐＨ ７０の１Ｍリン酸カリウム緩衝液６１０ｍＬを加えた。緩衝液（６１０ｍＬ）を１．０リットル三角フラスコに入れ、ＮＡＤＰ ２．４４ｇを三角フラスコに加え、振り混ぜて溶解させた。還元酵素ＫＲＥＤ ＭＩＦ−２０（２．４４ｇ）（Ｃｏｄｅｘｉｓ， Ｉｎｃ．， ２００ Ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ Ｄｒｉｖｅ， Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ， ＣＡ９４０６３、ｗｗｗ．ｃｏｄｅｘｉｓ．ｃｏｍ、電話１−６５０−４２１−８１００から入手可能）を三角フラスコに加え、混合物を振り混ぜて固体を溶解させた。得られた溶液を５リットル丸底容器に加え、それを次に加熱して２８℃とし、６時間熟成させ、その時点で反応液を冷却して室温とし、トリエチルアミン（５０．２ｍＬ、３６０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を４０℃で１時間熟成させた。軽いスラリー溶液を冷却して室温とし、その後にＮａＣｌ １２２ｇを加えた。溶液を室温で熟成させ、酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ）１．２２リットルで抽出した。水層をＩＰＡｃ ４００ｍＬで再抽出し、合わせた有機層を２０％ブライン溶液４００ｍＬで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、ロータリーエバポレータによって濃縮した。得られた固体ををＩＰＡｃ １００ｍＬに取った（粘稠スラリー）。ヘキサン（４００ｍＬ）を加え、懸濁液を室温で熟成させ、濾過し、５：１ヘキサン：ＩＰＡｃ溶液（１５０ｍＬ）で洗浄した。固体を室温で真空乾燥して、４−メチル−５−［（２Ｒ）−オキシラン−２−イル］−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．７５（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８（ｓ、２Ｈ）、４．１０（ｄｄ、Ｊ＝４．０、２．８、１Ｈ）、３．２６（ｄｄ、Ｊ＝５．６、４．０、１Ｈ）、２．７２（ｄｄ、Ｊ＝５．６、２．８、１Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）。
中間体４Ａおよび４Ｂ
Figure 2014521751
 ４Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび
４Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル−４−［２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）エチル｝ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２０ｍＬマイクロ波管中、４−メチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（３．００ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジン（５．１２ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）に懸濁させた。反応混合物を脱気し、マイクロ波装置において１５０℃で３０分間加熱した。反応混合物を留去して乾固させ、３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによりクロマトグラフィー精製し、１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃの溶媒系で溶離を行って、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝４０７。
段階Ｂ：（９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：密閉した脱気管中、（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）−４−［２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）エチル］ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（２当量）をベンゼン４５ｍＬに溶かした。混合物を加熱して１００℃として３時間経過させた。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーによって精製し、３０％アセトン／７０％ヘキサン混合物で溶離して、標題化合物をシス−トランス混合物として得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８９。
段階Ｃ：中間体４Ａおよび４Ｂ：段階Ｂの生成物のシス／トランス混合物を、３０％ＩＰＡ／７０％ヘプタン溶媒系によるＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ４．６×２５０ｍｍ １０μカラムを用いて分離した。トランス異性体４Ａが最初に１５．７分で溶出し、シス異性体４Ｂが２番目に２４．９分で溶出した。４Ａ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．８２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）７．７３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８（ｓ、２Ｈ）、４．９７ｐｐｍ（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０２（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．８７−４．１８ｐｐｍ（ｂ、２Ｈ）３．５３ｐｐｍ（ｔ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．０４（ｂ、１Ｈ）、２．８８ｐｐｍ（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、１Ｈ）、２．７６（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５４−２．５９（ｂ、１Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．２２−２．３４（ｍ、３Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）：ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８９。
４Ｂ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．１２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２９（ｓ、２Ｈ）、５．０１（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、１Ｈ）、３．６９−４．０３（ｂ、２Ｈ）、３．６２（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．３８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２３（ｄｄ、Ｊ＝４、１２Ｈｚ、１Ｈ）、３．０９−３．２０ｐｐｍ（ｂ、１Ｈ）、２．８１（ｄｄ、Ｊ＝４、１２Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９−２．９０ｐｐｍ（ｂ、２Ｈ）、２．５５−２．５８（ｂ、２Ｈ）、２．３８ｐｐｍ（ｓ、３Ｈ）、１．５０ｐｐｍ（ｓ、９Ｈ）：ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８９。
中間体４Ｃおよび４Ｄ
Figure 2014521751
 ４Ｃ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
４Ｄ：（３Ｒ，９ａＲ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジンに代えて（Ｒ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジンを用いた以外は、４Ａおよび４Ｂについて前述の方法と同様にして、中間体４Ｃおよび４Ｄを製造した。シス−トランス異性体４Ｃおよび４Ｄを、２０％ＩＰＡ／８０％ヘプタン溶媒系によるＣｈｉｒａｌＣＥＬ ＯＤ ４．６×２５０ｍｍ １０μカラムを用いて分離した。トランス異性体４Ｃが最初に２２．８分で溶出し、シス異性体４Ｄが３７．８分で溶出した。４Ｃ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．８２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）７．７３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８（ｓ、２Ｈ）、４．９７（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０２（ｄｄ、Ｊ＝３、１１Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５−４．２０（ｂ、２Ｈ）３．５３（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｂ、１Ｈ）、２．８８（ｄｄ、Ｊ＝２、１１．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５５（ｂ、１Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．２２−２．３６（ｍ、３Ｈ）、１．５１（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８９。４Ｄ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．１２（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ＝１．８、２Ｈ）、５．０２（ｔ、Ｊ＝３．８５Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０−４．０５（ｂ、２Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝３、１１．６５Ｈｚ、１Ｈ）、３．３７（ｔ、Ｊ＝９Ｈｚ、１Ｈ）、３．２３（ｄｄ、Ｊ＝４、１２Ｈｚ、１Ｈ）、３．１０（ｂ、１Ｈ）、２．８０−２．８６（ｍ、３Ｈ）、２．５７（ｂ、２Ｈ）、２．３８ｐｐｍ（ｓ、３Ｈ）、１．５０ｐｐｍ（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８９。
中間体５
Figure 2014521751
 ６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン
方法Ａ：セプタム、窒素導入針および熱電対を取り付けた２５０ｍＬの三頸丸底フラスコに、ジイソプロピルアミン（３．１０ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ ３０ｍＬを入れた。反応混合物を冷却して−２０℃としその間に内部温度を０℃以下に維持しながら注射器によってｎ−ＢｕＬｉ（２．５Ｍ、１２．２ｍＬ、３０．６ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた反応混合物を０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を冷却して−４０℃とし、そ際にＴＨＦ １０ｍＬ中の４−ブロモ−２−メチルベンゾニトリル（４．００ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）を注射器によって１時間かけて滴下した。約−４０℃の内部温度を添加中は維持した。得られた反応混合物を−４０℃で３０分間撹拌し、ＤＭＦ（２．９８ｇ、４０．８ｍｍｏｌ、水分約５０ｐｐｍ）を１回で加えた。反応混合物を−４０℃で１５分間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨ（５倍体積、２０ｍＬ）で反応停止し、ＮａＢＨ４（０．７７０ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）を１回で入れ、昇温させて室温とした。中間体アルデヒドの還元が完了した後（ＨＰＬＣ分析によって判断）、反応混合物を５Ｍ ＨＣｌで注意深く反応停止して（冷却しながら）、ｐＨを２から３に調節した。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、溶媒をＥｔＯＨ（４０ｍＬ）に切り換えた。Ｈ２ＳＯ４（９８％、２０．０ｇ、２０４ｍｍｏｌ）を１回で加え、得られた反応混合物を還流下に２４時間撹拌した。環化完了後（ＨＰＬＣ分析によってモニタリング）、反応混合物を冷却して室温とし、溶媒をＥｔＯＡｃに切り換えた。得られた有機層を水、ブラインで洗浄し、溶媒をＭＴＢＥに切り換えた．１：１ＭＴＢＥ：ヘプタンからの沈殿によって、６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンを得た。
方法Ｂ：ＤＩＰＡ（４Ｍ、２７０ｍＬ、１０８０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（９００ｍＬ）中溶液を冷却して−６５℃とし、内部温度を＜−５５℃に維持しながらヘキシルリチウム（２．１Ｍ、５０５ｍＬ、１０６０ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下した。添加完了したら、反応混合物を昇温させて−４０℃とし、それを３０分間撹拌した。得られたＬＤＡの溶液に、４−ブロモ−２−メチル安息香酸（９０ｇ、４１９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４００ｍＬ）中溶液としてゆっくり加えた（１５分間かけて）。反応混合物を−４０℃で３０分間撹拌し、昇温させて１５℃とし、その時点で、内部温度（氷水浴）を＜１８℃に維持しながら、パラホルムアルデヒド（５０．３０ｇ、１６７４ｍｍｏｌ）を固体として３回に分けて加えた。次に、撹拌を室温で１時間続けた。さらに１時間撹拌した後、容器を氷水浴に浸漬し、内部温度が３０℃より低くなるように維持する速度で３Ｎ ＨＣｌ（６５０ｍＬ）を加えた。次に、反応容器の内容物を分液漏斗に移し、それをＥｔＯＡｃ ４００ｍＬで３回抽出し、合わせた有機相を濃縮して総容量を約８００ｍＬとした。これに、Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ１５樹脂（１２ｇ）を加え、得られた混合物を４８℃で終夜撹拌した（約１４時間）。翌朝のＨＰＬＣ分析で、所望の６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンへの環化がほぼ完了したことが示された。樹脂を濾過によって除去し、溶液を濃縮して総容量約２００ｍＬとしたところ、その時点で所望の生成物が沈殿し始め、次に固体を濾過によって回収した。次に、ケーキをＭＴＢＥで洗浄して（８０ｍＬで２回）、最初の生成物塊を得た。回収した上清を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液２００ｍＬで２回と、次に１Ｍ Ｈ３ＰＯ４ ２００ｍＬで洗浄することで、追加取得物を取った。濃縮して約１００ｍＬとした後、沈殿物を濾過によって回収し、ＭＴＢＥで洗浄し、６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンの最初の取得塊と合わせ、乾燥させた。
中間体６Ａおよび６Ｂ
Figure 2014521751
 ６Ａ：６−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン
段階Ａ：６−（ブロモアセチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン（６．９０ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）、トリブチル（１−エトキシエテニル）スタンナン（１０．８ｍＬ、３１．９ｍｍｏｌ、１．０５当量）、およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１．０７ｇ、１．５２ｍｍｏｌ、０．０５当量）を２５０ｍＬ丸底フラスコに秤取した。これに、ジオキサン（７０ｍＬ）を加え、得られた混合物を８０℃で４時間撹拌した。ＨＰＬＣにより反応は完結していなかったため、追加のスズ試薬０．１当量を加えた。さらに３０分間後、６−ブロモ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンが完全に消費されていることがＨＰＬＣによって示された。反応混合物を冷却して０℃とし、ＴＨＦ ３５ｍＬ次にＨ２Ｏ １４ｍＬを加えた。これに、固体Ｎ−ブロモコハク酸イミド（５．６８ｇ、３１．９ｍｍｏｌ、１．０５当量）を５分間かけて少量ずつ加えて導入した。３０分間撹拌後、エノールエーテルが残留している証拠がまだあったことから、それの消費がＨＰＬＣによって示されるまで、ＮＢＳを少量ずつ加えた（約３００ｍｇを追加）。次に、水を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。水層をＥｔＯＡｃでさらに２回抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。これを、ＥｔＯＡｃを用いて１００ｍＬ丸底フラスコに移し入れ、得られた溶液を総容量が約２５ｍＬとなるまで濃縮し、その時点でヘキサン（５０ｍＬ）を滴下した。滴下完了したら、得られた不均一混合物を３０分間撹拌し、冷却して０℃とし、１０分間撹拌し、濾過し、ヘキサンで２回洗浄した。窒素風船下に所望の生成物を乾燥させ、フラッシュクロマトグラフィー（１２％から１００％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）によって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｂ：（９ａＳ）−３−ヒドロキシ−３−（１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：６−（ブロモアセチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン（約１．５４ｇ、約５．７２ｍｍｏｌ、α−クロロケトンの存在が認められた。約１０％）および市販の（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジン（１．２４ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）を丸底フラスコに加え、ＴＨＦ（５０ｍＬ）で希釈した。次に、ジイソプロピルエチルアミン（１．３０ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ）を導入し、混合物を室温で１４時間撹拌し、その間にかなりの量の固体が生成していた（恐らく、ＤＩＰＥＡのＨＢｒ塩）。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液と次にＨ２Ｏで洗浄した。順次、両方の水層を追加量のＥｔＯＡｃで１回抽出し、有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。回収した粗生成物について、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、５０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製を行って、標題化合物を得た。
段階Ｃ：６−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（９ａＳ）−３−ヒドロキシ−３−（１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．８４ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１８ｍＬ、２３４ｍｍｏｌ）で希釈し、冷却して０℃とした。少量のガス発生が認められ、数分後、均一溶液が生成していた。ＴＦＡ添加から約５分で、Ｅｔ３ＳｉＨ（５．０９ｍＬ、３１．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をゆっくり昇温させて室温とし（氷浴で自然に昇温）、それを１８時間撹拌した。トランス：シスのジアステレオマー比は、約９５：５であるように思われた。反応容器をロータリーエバポレータに移し、減圧下に濃縮して２相液とした。この粗取得物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、次に水で洗浄した。次に、別個の維持した水層を同量のＣＨ２Ｃｌ２で１回抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。粗残留物を家庭真空下に乾燥させ、混合物をさらに、フラッシュクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ２％Ｅｔ３Ｎ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、標題化合物を得た。
６Ｂ：６−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：６−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンを製造するための上記の同じ手順を用いて、６−（ブロモアセチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンおよび市販の（Ｒ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジンを原料として標題化合物を製造した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２８９．１［Ｍ＋１］＋。
中間体７および異性体７Ａおよび７Ｂ
Figure 2014521751
 ６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンならびに個々の異性体（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンおよび（３Ｓ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：−７８℃のジイソプロピルアミン（１３．３ｍＬ、９３．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５５ｍＬ）中溶液を、シリンジポンプを用いて１５分かけてｎ−ＢｕＬｉ（１．６Ｍヘキサン中溶液；５８ｍＬ、９３ｍｍｏｌ）で処理した。別のフラスコ中、２−メチル−４−ブロモ安息香酸（１０．０ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）およびＨＭＰＡ（８．３３ｍＬ、４６．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５５ｍＬ）中溶液を冷却して−７８℃とした。メチルリチウム（２９．１ｍＬ、４６．５ｍｍｏｌ）を、冷却した溶液に注射器によってゆっくり加えた。得られた溶液を１０分間撹拌し、カニューレを介して−７８℃でＬＤＡ溶液に移し入れた。得られた溶液を−７８℃でさらに１時間撹拌してから、脱水アセトアルデヒド（７．８８ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）で反応停止し、次に反応液をドライアイス・アセトン浴から取り出し、さらに１時間撹拌した。反応混合物の入ったフラスコをドライアイス・アセトン浴に再度入れ、その後、それを４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（５０ｍＬ）と次にＭｅＯＨ ２５ｍＬで反応停止した。反応液を室温でさらに１時間撹拌した。粗反応混合物を、酢酸エチル２００ｍＬと水２００ｍＬとの間で分配した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ＭＰＬＣ（３０％から７０％ＤＣＭ／ヘキサン）による精製によって、７をラセミ混合物として得て、それを例えばＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳカラムを用いるキラルＳＦＣ ＨＰＬＣによって分離して、７Ａおよび７Ｂを得ることができた。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ７．９８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６（ｄｄ、Ｊ＝１．５、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５（ｓ、１Ｈ）、４．７１（ｍ、１Ｈ）、２．９４（ｍ、２Ｈ）、１．５５（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２４１［Ｍ＋１］＋。
中間体７Ａ（方法２）
（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン
段階Ａ：４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−メチルベンズアミド：４−ブロモ−２−メチル安息香酸（２５．０ｇ、１１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４００ｍＬ）中溶液をオキサリルクロライド（１１．７ｍＬ、１３４ｍｍｏｌ）および触媒量の脱水ＤＭＦ（０．１ｍＬ）で処理した。反応液を窒素下に室温で２時間撹拌した。過剰の溶媒の除去によって粗酸塩化物を得て、それをＤＣＭ（４００ｍＬ）に再溶解した。次に、混合物を冷却して０℃とし、トリエチルアミン（４０．５ｍＬ、２９１ｍｍｏｌ）を加え、次にジエチルアミン（２４．３ｍＬ、２３３ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。次に、反応液を昇温させて室温として終夜経過させた。次に粗混合物を水４００ｍＬで希釈し、ＤＣＭで抽出した（５００ｍＬで３回）。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物を、ＭＰＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を介して精製して、４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−メチルベンズアミドを得た。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋２７０。
段階Ｂ：４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−（２−オキソプロピルベンズアミド：冷却して−７８℃とした２Ｍ ＬＤＡ（３５．２ｍＬ、７０．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７６ｍＬ）中溶液に、脱水ＴＨＦ（１７６ｍＬ）中の４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−メチルベンズアミド（１９ｇ、７０．３ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応液を−７８℃で１時間撹拌してから、それをＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド（２２．４３ｍＬ、２１１ｍｍｏｌ）で反応停止し、ゆっくり昇温させて室温とした。反応液を終夜撹拌し、１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）との間で分配した。水層をさらに、ＥｔＯＡｃで抽出した（１５０ｍＬで２回）。合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物は油状物であり、それから生成物が沈殿した。その油状物を傾斜法で分離し、固体をヘキサンで洗浄し、ブフナー漏斗を用いて乾燥させて、４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−（２−オキソプロピル）ベンズアミドを得た。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋３１２。
段階Ｃ：４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］ベンズアミド：オーバーヘッド撹拌機を取り付けたフラスコに、ｐＨ＝８のリン酸緩衝液（１５６ｍＬ、３１．２ｍｍｏｌ）と次にＤ−グルコース（１．２９８ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）を入れ、昇温させて３０℃とした。次に、グルコース／緩衝液に１回でグルコースデヒドロゲナーゼ１３５ｍｇおよびＮＡＤＰ＋ジナトリウム２７０ｍｇを加え、１分間の撹拌後に、均一溶液を得た。次に、ケトレダクターゼ酵素ＫＲＥＤＰ１Ｂ２（Ｃｏｄｅｘｉｓ， Ｉｎｃ．， ２００ Ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ Ｄｒｉｖｅ， Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ， ＣＡ９４０６３、ｗｗｗ．ｃｏｄｅｘｉｓ．ｃｏｍ、電話１−６５０−４２１−８１００から入手可能）５７７ｍｇを反応容器に加え、酵素が湿るまで３０℃にて５００ｒｐｍで撹拌した（約４０分）。最後に、ＤＭＳＯ（１４．５６ｍＬ）に溶かした４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−（２−オキソプロピル）ベンズアミド（１．５ｇ、４．８０ｍｍｏｌ）の溶液（撹拌プレート上で３０℃に予熱したもの）を反応液に約３分かけて加え、３０℃（４００ｒｐｍ）で終夜撹拌した。
４８時間後、反応液を冷却して室温とし、炭酸カリウム７５ｇを反応液に少量ずつ加え、撹拌が停止した時に酵素が凝集するまで１５分間にわたり撹拌した。次に、アセトニトリル（５０ｍＬ）を反応フラスコに投入し、層を十分に混合した。撹拌を１５から２０分後に停止し、層を分離し、上層を傾斜法によって除去した。これを追加のアセトニトリル５０ｍＬを用いてさらに２回繰り返した。合わせた有機層を中空孔率漏斗によって濾過し、濃縮し、濃縮物にＭＴＢＥ ５０ｍＬを加え、５分間撹拌し、分液漏斗に移し、層を分離した。水層をさらに、追加のＭＴＢＥ５０ｍＬで抽出した。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ＭＰＬＣ（３０−７０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］ベンズアミドを得た。
段階Ｄ：（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン（２００ｍＬ）に溶かした４−ブロモ−Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］ベンズアミド（１２．２ｇ、３８．８ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。３日後、反応液をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）との間で分配した。水相をさらに、ＥｔＯＡｃで抽出した（２５０ｍＬで２回）。合わせた有機層を水（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物を、ＭＰＬＣ（１５−３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を介して精製して、（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンを得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：７．９８（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６（ｄｄ、Ｊ＝１．５、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．４５（ｓ、１Ｈ）、４．７１（ｍ、１Ｈ）、２．９４（ｍ、２Ｈ）、１．５５（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋２４１。
中間体７Ｂ（方法２）
Figure 2014521751
 （３Ｓ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（３Ｓ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンを、段階Ｃでケトレダクターゼ酵素ＫＲＥＤＰ１Ｈ９（Ｃｏｄｅｘｉｓ， Ｉｎｃ．， ２００ Ｐｅｎｏｂｓｃｏｔ Ｄｒｉｖｅ， Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ， ＣＡ９４０６３、ｗｗｗ．ｃｏｄｅｘｉｓ．ｃｏｍ、電話１−６５０−４２１−８１００から入手可能）を用いた以外は、（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンと同様にして製造して、得られたアルコールの反対のエナンチオマーを得た。
中間体８Ａおよび８Ｂ
Figure 2014521751
 ８Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
８Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｒ）−６−エテニル−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２０．４０６ｇ、０．４９８ｍｍｏｌ）およびビニルトリフルオロホウ酸カリウム（２．０００ｇ、１４．９３ｍｍｏｌ）の入ったマイクロ波バイアルに、（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン（２．４ｇ、９．９６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．７８ｍＬ、１９．９１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３９．８ｍＬ）中溶液を加えた。バイアルの内容物を加熱して１００℃として１時間経過させ、その後、混合物を冷却し、クロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、塩化アンモニウム水溶液（２５ｍＬ）で洗浄した。次に、有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、溶媒を減圧下に留去した。ＭＰＬＣ精製（１５％から６０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）によって標題化合物を得た。
段階Ｂ：（３Ｒ）−３−メチル−６−（オキシラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：６−エテニル−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン（１．６９ｇ、８．９８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液をｍＣＰＢＡ（３．１００ｇ、１７．９６ｍｍｏｌ）で室温で終夜処理した。次に、反応液を水（５０ｍＬ）およびＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈した。有機層をさらに、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）の順で洗浄した。次に、有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、を介して精製しＭＰＬＣ（１５％から４０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）、標題化合物を得た。
段階Ｃ：（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）−４−｛２−ヒドロキシ−２−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］エチル｝ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：マイクロ波装置で、ＥｔＯＨ（７ｍＬ）に溶かした（３Ｒ）−３−メチル−６−（オキシラン−２−イル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン（３２５ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）および（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３４５ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）中溶液を封管中にて加熱して１５５℃として３時間経過させた。反応液を冷却し、濃縮して粗生成物を得て、それを、ＭＰＬＣ（（４０％から１００％）ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を介して精製して、標題化合物をジアステレオマーの混合物として得た。
段階Ｄ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：無水ベンゼン（８ｍＬ）に溶かしたジアステレオマーの混合物としての（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）−４−｛２−ヒドロキシ−２−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］エチル｝ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５３０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリブチルホスホラン（３０４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）の入った封管を、窒素で２回脱気し、マイクロ波を用いて加熱して１３５℃として２．５時間経過させた。反応液を放冷し、粗混合物を濃縮し、ＭＰＬＣ（２０％から６５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製して、ジアステレオマーの混合物ならびに回収原料を得た。シス／トランス混合物を、ＡＳカラムを用いてキラルＨＰＬＣ（１０％ＥｔＯＨ／ヘプタン）を介して精製して、先に溶出するピークとしてのトランス異性体および遅く溶出するピークとしてのシス異性体を得た。あるいは、混合物を、ＩＣカラムを用いるキラルＳＦＣ−ＨＰＬＣ（４０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）によって分離することができる。
８Ａ：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．０８（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、４．７０（ｍ、２Ｈ）、４．００（ｂｓ、２Ｈ）、３．９６（ｄｄ、Ｊ＝３．０、１１．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．９５（ｍ、４Ｈ）、２．７４（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２（ｍ、３Ｈ）、１．５３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４０３；８Ｂ：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．１０（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ）、４．８１（ｂｔ、１Ｈ）、４．７１（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝２．８、１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、３．２５（ｄｄ、Ｊ＝３．７、１２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．９５（ｍ、４Ｈ）、２．７６（ｍ、３Ｈ）、２．５０（ｍ、２Ｈ）、２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．５４（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４０３。
中間体８Ｃおよび８Ｄ
Figure 2014521751
 ８Ｃ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；
８Ｄ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−［（３Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンを原料として用いた以外は、中間体８Ａおよび８Ｂと同様にして８Ｃおよび８Ｄを製造した。シス／トランス混合物を、ＡＤカラムでのキラルＨＰＬＣ（３０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）を介して精製した。先に溶出するジアステレオマーがトランス異性体であった。８Ｃ：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．０７（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、４．７２（ｄｄ、Ｊ＝１．８、１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｍ、１Ｈ）、４．１−３．８（ｂｓ、２Ｈ）、３．９６（ｄｄ、Ｊ＝３．０、１１．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．９５（ｍ、４Ｈ）、２．７４（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２（ｍ、３Ｈ）、１．５４（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４０３。８Ｄ：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．１０（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、４．８１（ｂｔ、１Ｈ）、４．７１（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝２．８、１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４１（ｍ、１Ｈ）、３．２５（ｄｄ、Ｊ＝３．７、１２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．９５（ｍ、４Ｈ）、２．７６（ｍ、３Ｈ）、２．５０（ｍ、２Ｈ）、２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．５４（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４８（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４０３。
中間体８Ｅおよび８Ｆ
Figure 2014521751
 ８Ｅ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−［（３Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
８Ｆ：（３Ｒ，９ａＲ）−３−［（３Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンおよび（３Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを原料として用いた以外は、中間体８Ａおよび８Ｂと同様にして中間体８Ｅおよび８Ｆを製造した。シス／トランス混合物を、ＭＰＬＣ（２０％から６５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）を介して精製した。先に溶出したジアステレオマーはトランス異性体であった。８Ｅ：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．０７（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｓ、１Ｈ）、４．７１（ｄｄ、Ｊ＝２．０、１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｍ、１Ｈ）、４．０（ｂｓ、２Ｈ）、３．９７（ｄｄ、Ｊ＝３．１、１１．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．９９（ｍ、４Ｈ）、２．７４（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２（ｍ、３Ｈ）、１．５３（ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）。（Ｍ＋１）＋４０３。８Ｆ：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．０９（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、４．８１（ｔ、Ｊ＝３．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｄｄ、Ｊ＝３．０、１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．２４（ｄｄ、Ｊ＝３．６、１２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．９７（ｍ、４Ｈ）、２．７６（ｍ、３Ｈ）、２．５０（ｍ、２Ｈ）、２．２８（ｍ、１Ｈ）、１．５４（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．４７（ｓ、９Ｈ）。（Ｍ＋１）＋４０３。
中間体８Ｇおよび８Ｈ
Figure 2014521751
 ８Ｇ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
８Ｈ；（３Ｒ，９ａＲ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ）−６−ブロモ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンおよび（３Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを原料として用いた以外は、８Ａおよび８Ｂと同様にして８Ｇおよび８Ｈを製造した。シス／トランス混合物を、ＯＪカラムでのキラルＨＰＬＣ（２０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）を介して精製した。遅く溶出するジアステレオマーがトランス異性体であった。８Ｇ：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４０３；８Ｈ：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４０３。
中間体９
Figure 2014521751
 （３Ｓ）−３−メチル−６−（９ａ−メチルオクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オン
段階Ａ：４−（２−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソイソクロマン−６−イル）エチル−３−（ヒドロキシメチル−３−メチルピペラジン−１−カルボン酸ベンジル：ラセミ体の３−（ヒドロキシメチル）−３−メチルピペラジン−１−カルボン酸ベンジル（１．０ｇ、３．８ｍｍｏｌ）（米国特許出願公開番号ＵＳ２００７／００８８０３９Ａ１、実施例１０に記載の方法に従って製造）のＥｔＯＨ（１３ｍＬ）中溶液に、（３Ｓ）−３−メチル−６−（オキシラン−２−イル）イソクロマン−１−オン（７７３ｍｇ、３．８０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を８０℃で１６時間加熱し、反応混合物を濃縮乾固させ、シリカゲルで精製して標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｅ４６９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
段階Ｂ：９ａ−メチル−３−（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソイソクロマン−６−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ベンジル：マイクロ波リアクター中にて、４−（２−ヒドロキシ−２−（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソイソクロマン−６−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチルピペラジン−１−カルボン酸ベンジル（７６２ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリブチルホスホラン（４７１ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）の脱水ベンゼン中混合物を脱気し、加熱して１３５℃として３．５時間経過させた。その後、反応混合物を冷却して室温とし、濃縮して乾固させ、シリカゲルで精製して標題化合物を得た（シスまたはトランス）：ＭＳ：ｍ／ｅ４５１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
段階Ｃ：（３Ｓ）−３−メチル−６−（９ａ−メチルオクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オン：９ａ−メチル−３−（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソイソクロマン−６−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ベンジル（２１５ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ−Ｃ（５６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中混合物を水素風船下に１６時間撹拌した。その後、溶液をセライトで濾過し、得られた濾液を濃縮して標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｅ３１７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体１０
Figure 2014521751
 ６−ブロモ−５−フルオロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン
段階Ａ：４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミド：ジイソプロピルアミン（６．２ｍＬ、４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液を０℃にてｎ−ブチルリチウム（１７．４ｍＬ、４４．０ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を３０分間撹拌してから、冷却して−７８℃とした。次に、４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロベンズアミド（４．８ｇ、１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液を加えた。次に、溶液を昇温させて−４０℃とし、その温度に１時間維持した。次に、エチレンオキサイド（１０ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）を加え、溶液を昇温させて０℃とした。１時間後、氷浴を外し、溶液を昇温させて室温とした。ＬＣ／ＭＳで、所望の生成物が存在することが示された。溶液をＭｅＯＨで反応停止し、ブライン（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を除去し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、３４０ｇ Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰ（０％から６０％ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）カートリッジを用いて精製して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ３１９．９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
段階Ｂ：６−ブロモ−５−フルオロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロ−２−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミド（１．８ｇ、５．７ｍｍｏｌ）およびＴｓＯＨ（１．３ｇ、６．９ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）／ＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を加熱還流した。１時間後、ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳ分析によって、変換が完了していることが示された。溶液を濃縮乾固させ、次にＥｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）で希釈した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ２４６．９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体１１Ａ（トランス）
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）３−（５−フルオロ−１−オキソイソクロマン−６−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：上記の（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルについて記載のものと類似の手順を用い、標題化合物を６−ブロモ−５−フルオロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンから製造した。主成分のトランス異性体を、ＭＰＬＣ（３０−１００％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）によって、先に溶出する異性体として単離した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１．３９（ｓ、９Ｈ）、２．０３−２．２１（ｍ、３Ｈ）、２．６２−３．０７（ｍ、６Ｈ）、３．７１−３．８８（ｍ、２Ｈ）、３．９５（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３５（ｍ、１Ｈ）、４．５３（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．８８（ｄ、Ｊ＝１０．０、１Ｈ）、７．５０（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｅ３１７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体１２Ａ
Figure 2014521751
 ３−（Ｒ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン
段階Ａ：４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロベンズアミド：４−ブロモ−３−フルオロ安息香酸（１９ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中懸濁液に、オキサリルクロライド（９．１０ｍＬ、１０４ｍｍｏｌ）、次にＤＭＦ １滴を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。懸濁液が透明になった時点で、溶液を濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（２００ｍＬ）に再度溶かし、冷却して０℃とした。次に、溶液をＴＥＡ（３０．２ｍＬ、２１７ｍｍｏｌ）、次にｔｅｒｔ−ブチルアミン（１２．０ｍＬ、１１３ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を１２時間撹拌した。反応液を１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）で希釈した。有機層を除去し、１Ｎ ＮａＯＨで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得た。
段階Ｂ：４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロ−２−［（２ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］ベンズアミド：ジイソプロピルアミン（１１．７ｍＬ、８２．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液を、０℃にてｎ−ブチルリチウム（３３ｍＬ、８２ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を３０分間撹拌してから、冷却して−７８℃とした。次に、４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロベンズアミド（９．０ｇ、３３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液を加えた。次に、溶液を昇温させて−４０℃とし、その温度に１時間維持した。次に、（Ｒ）−（＋）−プロピレンオキサイド（６．９ｍＬ、９８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を昇温させて０℃とした。１時間後、氷浴を外し、溶液を昇温させて室温とした。ＬＣ／ＭＳで所望の生成物が存在することが示された。溶液をＭｅＯＨで反応停止し、ブライン（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を除去し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物を、３４０ｇ Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＮＡＰ（０％から６０％ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）カートリッジを用いて精製して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ３３２．０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
段階Ｃ：３−（Ｒ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：４−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フルオロ−２−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］ベンズアミド（４．６０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）およびＴｓＯＨ（２．６０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）中溶液を加熱還流した。１時間後、ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳ分析で、変換が完結していることが示された。溶液を濃縮乾固させ、次にＥｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）で希釈した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、（ＣＤ３）２ＣＯ）δｐｐｍ７．７６（ｍ、２Ｈ）、４．８０（ｍ、１Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．９１（ｍ、１Ｈ）、１．５２（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ２５７．９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体１２Ｂ
Figure 2014521751
 ３−（Ｓ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：段階Ｂで（Ｓ）−（＋）−プロピレンオキサイドを用いた以外は、３−（Ｒ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンについて記載の手順に従って、標題化合物を製造した。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、（ＣＤ３）２ＣＯ）δｐｐｍ７．７６（ｍ、２Ｈ）、４．８０（ｍ、１Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．９１（ｍ、１Ｈ）、１．５２（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、３Ｈ）；ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ２５７．９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体１３Ａ（トランス）
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ］［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（上記）について記載の手順と同様の手順を用い、３−（Ｒ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンから標題化合物を製造した。シス／トランス混合物を、ＡＤカラムでのキラルＨＰＬＣ（３０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）を介して精製した。遅く溶出するジアステレオマーはトランス異性体であった。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｂ（シス）
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのキラルＨＰＬＣ精製時に、先に溶出するピークとして標題化合物を単離した。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｃ（トランス）
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−（３Ｓ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（上記）について記載のものと同様の手順を用い、３−（Ｓ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンから標題化合物を製造した。シス／トランス混合物を、ＯＪカラムでのキラルＳＦＣ−ＨＰＬＣ（３０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）を介して精製した。先に溶出するジアステレオマーがトランス異性体であった。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｄ（シス）
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＳ）−３−［（３Ｓ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３５）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのキラルＳＦＣ−ＨＰＬＣ精製時に、遅く溶出するピークとして、標題化合物を単離した。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｅ（トランス）
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＲ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル；段階Ｃでのアミノアルコールとして（３Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを代わりに用い、（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（上記）について記載のものと同様の手順を用いて、３−（Ｒ）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンから標題化合物を製造した。シス／トランス混合物を、ＡＤカラムでのキラルＨＰＬＣ（４０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）を介して精製した。先に溶出するジアステレオマーがトランス異性体であった。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｆ（シス）
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＲ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ，９ａＲ）−３−［（３Ｒ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルのキラルＳＦＣ−ＨＰＬＣ精製時に遅く溶出するピークとして標題化合物を単離した。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｇ（トランス）
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＲ）−３［（３Ｓ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：段階Ｃにおけるアミノアルコールとして（３Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを代わりに用い、（３Ｒ，９ａＳ）−３−［（３Ｒ）−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（上記）について記載のものと同様の手順を用いて、３−（５）−６−ブロモ−５−フルオロ−３−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンから標題化合物を製造した。得られたシス／トランス混合物を、ＯＪカラムでのキラルＳＦＣ−ＨＰＬＣ（３０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２）を介して精製した。先に溶出するジアステレオマーがトランス異性体であった。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１３Ｈ（シス）
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＲ）−３−［（３Ｓ）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ，９ａＲ）−３−［（３５）−５−フルオロ−３−メチル−１−オキソ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−６−イル］ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（上記）のＳＦＣ−ＨＰＬＣ精製時に遅く溶出するピークとして標題化合物を単離した。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋４２１。
中間体１４Ｂ（シス）
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：エタノール（１２ｍＬ）中の（Ｓ）−４−メチル−５−（オキシラン−２−イル）イソベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（０．７５ｇ、３．９５ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０２ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）をマイクロ波装置において１５０℃で１．５時間加熱した。反応溶液を濃縮し、残留物を４０％から１００％酢酸エチル／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅシステムでのＭＰＬＣによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：４０７．１５。
段階Ｂ：（Ｓ）−４−（（１Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ベンジル：（Ｓ）−４−（（５）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．５７ｇ、６．３２ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（３ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ、１３０ｍｍｏｌ）を室温で加えて１時間経過させた。揮発分を減圧下に除去した後、残留物をメチレンクロライド（１００ｍＬ）に溶かした。上記の溶液に、トリエチルアミン（４．４０ｍＬ、３１．６ｍｍｏｌ）およびクロルギ酸ベンジル（０．９５ｍＬ、６．６４ｍｍｏｌ）を０℃で０．５時間加えた。水によって反応停止し、次に飽和炭酸ナトリウムを加えた。混合物をメチレンクロライドで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、残留物を４０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅシステムでのＭＰＬＣによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋１）＋：４４１．１１。
段階Ｃ：（９ａＲ）−８−アリル−７−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジル：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ベンジル（１．４ｇ、３．２ｍｍｏｌ）の塩化チオニル（２０ｍＬ、２７４ｍｍｏｌ）中溶液を１時間加熱還流した。揮発分を除去後、残留物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶かし、０℃にてアリルアミン（１．３１ｍＬ、１７．４８ｍｍｏｌ）で処理した。得られた溶液をヨウ化ナトリウム（０．０８８ｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）で処理し、９０℃で１時間加熱した。溶液を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム３回で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、残留物を４０％から１００％酢酸エチル／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅシステムでのＭＰＬＣによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：４６２．１２。
段階Ｄ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−Ｌ３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２，８（９Ｈ，９ａＨ）−ジカルボン酸８−ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル：（９ａＲ）−８−アリル−７−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジル（０．９８ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン（０．９９５ｇ、６．３７ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１２３ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（１０ｍＬ）中混合物を３５℃で４時間加熱した。冷却して室温とした後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（５５６ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１１９４μＬ、８．４９ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で終夜撹拌した。濃縮後、残留物を精製し、２０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅシステムでのＭＰＬＣによって分割して、標題化合物（極性が低い方）、ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：５２２．１２；および標題化合物の相当する（３Ｒ，９ａＳ）異性体（極性が高い方）を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：５２２．１２。
段階Ｅ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：段階Ｄの標題化合物（（０．４６ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）中溶液に、パラジウム／炭素（１０％、０．０９４ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物について室温で終夜にわたり水素化を行った。濾過後、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：３８８．１０。
中間体１５
Figure 2014521751
 ７−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）オクタヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび４種類の分離された異性体
段階Ａ：３−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．２８ｇ、２８．２ｍｍｏｌ）を０℃でＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶かし、ＬＡＨ（２１．１４ｍＬ、２１．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応をＴＬＣによってモニタリングした。３０分後、最初に水０．８ｍＬで反応停止し、次に、２Ｎ ＮａＯＨ １．６ｍＬと次に水４ｍＬを加えた。上記のスラリーを酢酸エチルで希釈し、ＭｇＳＯ４を加えた。混合物を室温で１／２時間撹拌し、濾過し、濃縮して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２３１［Ｍ＋１］＋。
段階Ｂ：３−（２−ヒドロキシエチル）−４−（２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）−２−オキソエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：３−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．９１ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）および５−（２−ブロモアセチル）−４−メチルイソベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（６．７３ｇ、２５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶かし、次にヒューニッヒ塩基（８．７３ｍＬ、５０．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。反応液をブラインに投入し、ＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物について、ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−Ｓｅｐ３３０ｇカラムによるクロマトグラフィーを行い、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶媒系で溶離して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：４１９［Ｍ＋１］＋。
段階Ｃ：４−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：３−（２−ヒドロキシエチル）−４−（２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）−２−オキソエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．１６ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）を０℃でメタノール（１００ｍＬ）溶かし、ＮａＢＨ４（１．６７ｇ、４４．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を昇温させて室温とした。１０分後、ＴＬＣで原料が残っていないことが明らかになった。メタノールを留去し、残留物をブラインに取り、酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物について、ＩＳＣＯ３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーを行い、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離を行って、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：４２１［Ｍ＋１］＋。
段階Ｄ：７−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２−ベンゾフラン−５−イル）オクタヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２ｄ］［１，４］オキサゼピン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：４−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．２２ｇ、５．３０ｍｍｏｌ）をベンゼン（３０ｍＬ）溶かし、シアノメチレントリブチルホスホラン（２．３１ｇ、９．５５ｍｍｏｌ）を加え、次に加熱して１００℃として終夜経過させた。ベンゼンをロータリーエバポレータによって除去し、残留物についてＩＳＣＯ ｒｅｄｉ−ｓｅｐ ３３０ｇカラムによるクロマトグラフィーを行い、１５％アセトン：８５％ＤＣＭで溶離した。これによって、標題化合物のシス−ジアステレオマーをトランス−ジアステレオマーから分離された。そのシス−ジアステレオマーを、次の条件：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤカラム：３０×２５０ｍｍ、３０％（２：１ＭｅＯＨ：ＣＨ３ＣＮ）／ＣＯ２、７０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＯＨ／ＭｅＣＮ／ＤＣＭ中４１ｍｇ／ｍＬ、３５℃、２５４ｎｍを用いてＳ，ＳおよびＲ，Ｒジアステレオマーに分離した。シス−ジアステレオマーＡ（保持時間３．２分）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．８３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、４．９７（ｄｄ、Ｊ＝４．７５、２．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝３．４５Ｈｚ、０．５Ｈ）、４．１０（ｔ、Ｊ＝３．４５Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．９１（ｔ、Ｊ＝１２Ｈｚ、１Ｈ）、３．８２（ｂ、２Ｈ）、３．１７（ｄ、Ｊ＝５．３Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．１３（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．９３（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．９０（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．８８（ｂ、１Ｈ）、２．６９（ｂ、４Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ），１．８９−１．９２（ｍ、２Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）：シス−ジアステレオマーＢ（保持時間４．２１分）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．８３（ｄ、Ｊ＝８ＨＺ、１Ｈ）、７．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、４．９７（ｄｄ、Ｊ＝４．７５、２．７５Ｈｚ、１Ｈ）、４．１３（ｔ、Ｊ＝３．４５Ｈｚ、０．５Ｈ）、４．１０（ｔ、Ｊ＝３．４５Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．９１（ｔ、Ｊ＝１０．１２Ｈｚ、１Ｈ）、３．８２（ｂ、２Ｈ）、３．１７（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．１４（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．９３（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．９０（ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．８８（ｂ、１Ｈ）、２．６９（ｂ、４Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ），１．８９−１．９２（ｍ、２Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）。トランス−ジアステレオマーをさらに、次の条件：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤカラム：３０×２５０ｍｍ、２０％（２：１ＭｅＯＨ：ＣＨ３ＣＮ）／ＣＯ２、７０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＯＨ／ＭｅＣＮ／ＤＣＭ中３３ｍｇ／ｍＬ、３５℃、２５４ｎｍを用いてＳ，ＲおよびＲ，Ｓジアステレオマーに分離した。トランス−ジアステレオマーＡおよびトランス−ジアステレオマーＢの保持時間は分析カラムＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ：４．６×２５０ｍｍ、１５％（２：１ＭｅＯＨ：ＣＨ３ＣＮ）／ＣＯ２、２．１ｍＬ／分、１００バール、３５℃、２５４ｎｍで６．６８分および８．０８分である。トランス−ジアステレオマーＡ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、５．１３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．９９−４．１２（ｍ、２Ｈ）、３．７８−３．９５（ｂ、２Ｈ）、３．０２（ｂ、１Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．８４（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．７７（ｂ、２Ｈ）、２．６５（ｄ、Ｊ＝１４．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．４０−２．４４（ｍ、２Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．０２−２．０８（ｍ、１Ｈ）、１．９２−１．９８（ｍ、１Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）：トランス−ジアステレオマーＢ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、５．１３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．００−４．１２（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｂ、２Ｈ）、３．０１（ｂ、１Ｈ）、２．８６（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．８３（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．７６（ｂ、２Ｈ）、２．６５（ｄ、Ｊ＝１３Ｈｚ、１Ｈ）、２．４０−２．４４（ｍ、２Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．０３−２．０８（ｍ、１Ｈ）、１．９４−１．９７（ｍ、１Ｈ），１．５０（ｓ、９Ｈ）。
中間体１６（異性体混合物）、１６Ａおよび１６Ｂ
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：２−フルオロ−５−（１−ヒドロキシエチルベンゾニトリル：３−シアノ−４−フルオロベンズアルデヒド（２．１７ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶かし、冷却して−７０℃とした。この混合物に、メチルマグネシウムブロマイド（５．３４ｍＬ、１６．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間撹拌し、ブラインで反応停止し、エーテルで抽出した。エーテル層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶離液を用いる１２０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、２−フルオロ−５−（１−ヒドロキシエチル）ベンゾニトリルを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１６６。
段階Ｂ：５−アセチル−２−フルオロベンゾニトリル：２−フルオロ−５−（１−ヒドロキシエチル）ベンゾニトリル（０．８０ｇ、４．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かした。この混合物に、ジクロム酸ピリジニウム（２．７３ｇ、７．２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。フロリジル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）（２６ｇ）を反応混合物に加え、次にそれをエーテル５０ｍＬで希釈し、セライト層で濾過した。濾液を留去して乾固させ、残留物を０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行う１２０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのＭＰＬＣによって精製して、５−アセチル−２−フルオロベンゾニトリルを得た。
段階Ｃ：５−（ブロモアセチル）−２−フルオロベンゾニトリル：５−アセチル−２−フルオロベンゾニトリル（４００ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶かし、臭化銅（ＩＩ）（１．１０ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。反応混合物をエーテル２０ｍＬで希釈し、水と次にブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過した。濾液を留去して乾固させ、０％から５０％酢酸エチル／ヘキサン溶離液を用いる８０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、５−（ブロモアセチル）−２−フルオロベンゾニトリルを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２４４。
段階Ｄ：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：５−（ブロモアセチル）−２−フルオロベンゾニトリル（５９０ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）および（５）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチル−ピペラジン（５２７ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を０℃でＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶かし、ＴＥＡ（２４７ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水に投入し、酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いる８０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣによって精製して標題化合物を得た。
段階Ｅ：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８００ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）をエタノール（５０ｍＬ）に溶かし、水素化ホウ素ナトリウム（３２１ｍｇ、８．４８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ分析により、生成物が存在することが示された。エタノールを除去し、残留物をＥｔＯＡｃに再溶解し、１Ｎ ＨＣｌとともに５分間撹拌した。次に、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させて標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２８０。
段階Ｆ：（９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３５８ｍｇ、０．９４４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２５ｍＬ）に溶かし、冷却して０℃とした。この混合物に、ＴＥＡ（０．１９７ｍＬ、１．４２ｍｍｏｌ）と次にメタンスルホニルクロライド（０．０９６ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を昇温させて室温とし、終夜撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、脱水し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ ０％から１００％で溶離を行う４０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーによって精製して、中間体クロライドを得た（４７０ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）。次に、このクロライドをＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶かし、０℃でテトラブチル塩化アンモニウム（４３６ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）を加え、次にＮａＨ（４７．２ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）を加え、次に混合物を還流下に終夜撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗残留物を０％から１００％酢酸エチルで溶離を行う４０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を２種類の異性体の混合物として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．８６（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、０．５Ｈ）、７．７５−７．８１（ｍ、０．５Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８−７．６１（ｍ、０．５Ｈ）、７．１９−７．２４（ｑ、１Ｈ）、４．７９（ｓ、０．５Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．９６（ｄｄ、Ｊ＝３、１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．５５−４．０（ｂ、２Ｈ）、３．５４（ｄｄ、Ｊ＝２．５、１１．５Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．４６（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．２４（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．１８（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、０．５Ｈ）３．（ｂ、２Ｈ）、２．８９（ｄｄ、Ｊ＝２．１、１１．５Ｈｚ、０．５Ｈ）、２．７−２．８（ｍ、２Ｈ）、２．５（ｂ、１Ｈ）、２．３８−２．４５（ｍ、１Ｈ）、２．２５（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．１７（ｔ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、１．４８（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３６２。
段階Ｇ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：前段階で得られた異性体の混合物の分取ＨＰＬＣ分離によって、標題化合物を得た。
中間体１６Ｃおよび１６Ｄ
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：３−ブロモ−４−フルオロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド：３−ブロモ−４−フルオロ安息香酸（１００ｇ、０．４５６ｍｏｌ）およびＣＤＩ（７７．２ｇ、０．５４７ｍｏｌ）の脱水ＤＣＭ（１リットル）中溶液を室温で３０分間撹拌し、次にＯ，Ｎ−ジメチル−ヒドロキシルアミン（５３．４ｇ、０．５４７ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を終夜撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を、カラムクロマトグラフィーを介して精製して、３−ブロモ−４−フルオロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミドを得た。
段階Ｂ：１−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）エタノン：３−ブロモ−４−フルオロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルベンズアミド（５０ｇ、０．１９ｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）中溶液を氷浴で冷却して０℃とし、次に混合物にＭｅＭｇＣｌ（２７．３ｇ、０．２１ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物をＮ２下に１時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌで反応停止し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、１−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）エタノンを得た。
段階Ｃ：５−アセチル−２−フルオロベンゾニトリル：１−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）エタノン（８１．３ｇ、０．３４４ｍｏｌ）のＤＭＦ（３００ｍＬ）中溶液に、ＣｕＣＮ（６７．４ｇ、０．７４９ｍｏｌ）を加え、混合物をＮ２下に１０時間加熱還流および撹拌した。反応混合物を水で反応停止し、エーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物５−アセチル−２−フルオロベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：５−（ブロモアセチル）−２−フルオロベンゾニトリル：５−アセチル−２−フルオロベンゾニトリル（２０．０ｇ、０．１２３ｍｏｌ）のＤＣＭ（５００ｍＬ）中溶液を２時間加熱還流し、臭素のＤＣＭ（３００ｍＬ）中溶液を沸騰混合物に滴下した。反応混合物を加熱還流し、Ｎ２保護下に終夜撹拌した。反応混合物を水で洗浄し、ＤＣＭで抽出し。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。残留物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを介して精製して、５−（ブロモアセチル）−２−フルオロベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：（３Ｒ）−４−２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチルピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：５−（ブロモアセチル）−２−フルオロベンゾニトリル（１３．１ｇ、０．０５４ｍｏｌ）のＤＭＦ（１６０ｍＬ）中溶液に（３Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３．１ｇ、０．０６５ｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１１．７７ｇ、０．０７５ｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を水で洗浄し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して標題化合物を得て、それをさらなる精製を行わずに次の段階に用いた。
段階Ｅ：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２０ｇ、０．０５３ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４００ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ４（１５．６ｇ、０．４２４ｍｏｌ）を少量ずつ加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物に水を加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、標題化合物を得た。
段階Ｆ：（９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液を０℃で１０分間撹拌し、ＮａＨ（６０％）（１．３２ｇ、３３．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。得られた白色懸濁液を０℃で５分間、次に室温で１時間高撹拌した。次に、反応懸濁液を再冷却して０℃とし、Ｎ−トリシイミダゾールを加え、得られた溶液を０℃でさらに１０分間撹拌してから、再度昇温させて室温とし、１時間撹拌した。次に、反応溶液を再度冷却して０℃とし、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液をゆっくり加えることで過剰の水素化ナトリウムを注意深く失活させた。得られた二相溶液を飽和ＮＨ４ＣｌとＥｔＯＡｃとの間で分配した。有機層を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７６−７．７９（ｍ、１Ｈ）、７．４９−７．５８（ｍ、１Ｈ）、７．１１−７．１５（ｍ、１Ｈ）、７．１６−７．１２（ｍ、１Ｈ）、３．８６−４．０６（ｍ、２Ｈ）、３．３３−３．４８（ｍ、１Ｈ）、３．０８−３．１７（ｍ、１Ｈ）、２．８０−２．９４（ｍ、２Ｈ）、２．６４−２．７４（ｍ、２Ｈ）、２．２９−２．４６（ｍ、２Ｈ）、２．０９−２．２０（ｍ、１Ｈ）、１．４０（ｄ、Ｊ＝３．０Ｈｚ、９Ｈ）。
段階Ｇ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニルヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：前段階で得られた異性体の混合物の分取ＨＰＬＣ分離によって、単独の異性体を得た。
中間体１７Ａおよび１７Ｂ（方法１）
Figure 2014521751
 １７Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
１７Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリル（方法Ａ）：市販の２−フルオロ−６−メチルベンゾニトリル（Ａｐｏｌｌｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１５．０ｇ、１１１ｍｍｏｌ）を０℃でトリフ酸（７５ｍＬ）に溶かし、次にＮＢＳ（２０．７ｇ、１１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、氷水に投入し、ＤＣＭで２回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、次に濾過し、溶媒留去して乾固させて、３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリルを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２１４、２１６。
別途段階Ａ（方法Ｂ）：オーバーヘッド撹拌機を取り付けた３リットル三頸ＲＢに、２−フルオロ−６−メチル−ベンゾニトリル（１９１．８ｇ、１４１９ｍｍｏｌ）およびＭｓＯＨ（５６３ｍＬ、８５１６ｍｍｏｌ）を入れた。この溶液を撹拌しながら、それにＮＢＳ（２６５ｇ、１４９０ｍｍｏｌ）を３０分間かけて少量ずつ加え、混合物を５０℃で３３時間撹拌した。この時点までに、ＨＰＬＣで反応がほとんど完了していることが示されていることから、反応液を氷１リットルに投入し（発熱が認められた）、３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン７００ｍＬで希釈し、撹拌した。水層を除去し、有機層を１Ｎ ＮａＯＨで２回および水で洗浄した。水相部分は不純物がかなり豊富であることが認められた。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮し、−１０℃の冷凍庫で終夜保存した。その時間をかけて沈殿が生成し、濾過し、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄した。第２の沈殿塊を、第１の生成物塊と合わせて、３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリルを得た。
段階Ｂ：３−エテニル−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリル：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリル（２３．６ｇ、１１０ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（２９．５ｇ、２２１ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（４．０３ｇ、５．５１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（３０．７ｍＬ、２２１ｍｍｏｌ）を、エタノール２５０ｍＬに加えた。反応混合物を脱気し、還流下に４時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって生成物の存在が確認された。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、脱水し、溶媒留去して乾固させた。次に、粗取得物を、３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製し、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離を行って、３−エテニル−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリルを得た。
段階Ｃ：６−フルオロ−２−メチル−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル：３−エテニル−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリル（１４．９ｇ、９２．０ｍｍｏｌ）を０℃でＤＣＭ（４００ｍＬ）に加え、ｍＣＰＢＡ（４７．８５ｇ、２７７．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で７２時間撹拌した。反応混合物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液、次に１Ｎ ＮａＯＨおよびブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を、０％から１００％ヘキサン／ＤＣＭ溶媒系で溶離を行う３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、６−フルオロ−２−メチル−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１７８。
段階Ｄ：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチルピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：６−フルオロ−２−メチル−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（１２．０ｇ、６７．７ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジン（２２．０ｇ、１０２ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）に懸濁させ、次にマイクロ波装置において１５０℃で３０分間加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、５％ＭｅＯＨ／９５％ＥｔＯＡｃ溶媒系で溶離を行う３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９４。
段階Ｅ：（９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１８．５ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（２０．４ｇ、８５．０ｍｍｏｌ）をベンゼン１８０ｍＬに溶かした。反応混合物を脱気し、加熱して１００℃として１６時間経過させた。ＬＣ−ＭＳ分析によって生成物ピーク（Ｍ＋１＝３７６）が示された。反応液を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、２０％アセトン／８０％ヘキサン混合物で溶離を行う３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物のシス−トランス混合物を得た。
段階Ｆ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：段階Ｅの生成物のシス−トランス異性体を、２０％ＩＰＡ／８０％ヘプタン溶媒系を用いるＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ４．６×２５０ｍｍ １０μカラムを用いて分離した。１７Ａ（トランス−異性体が最初に溶出）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．７４（ｄｄ、Ｊ＝６、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９５（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．８３８（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９８（ｄｄ、Ｊ＝３、１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４−４．２１（ｂ、２Ｈ）、３．５０（ｔ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、２．９８−３．１８（ｂ、１Ｈ）、２．８５（ｄｄ、Ｊ＝２、１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、２．６ｐｐｍ（ｓ、３Ｈ）、２．４５−２．６８（ｂ、１Ｈ）、２．２４−２．３１（ｍ、２Ｈ）、２．１６（ｔ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、１．５０ｐｐｍ（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３７６；１７Ｂ（シス−異性体が第２に溶出）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．２０（ｔ、Ｊ＝６．９５Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．９１（ｔ、Ｊ＝３．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０−４．０７（ｂ、２Ｈ）、３．５５（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．２６（ｔ、Ｊ＝９Ｈｚ、１Ｈ）、３．１５（ｄｄ、Ｊ＝３、１２Ｈｚ、１Ｈ）、２．９８−３．１１（ｂ、１Ｈ）、２．８２（ｄｄ、Ｊ＝４、１２Ｈｚ、２Ｈ）、２．６３（ｓ、３Ｈ）、２．５９−２．７（ｂ、１Ｈ）、２．４４−２．４９（ｍ、２Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３７６。
中間体１７Ｂ（方法２）
段階Ａ：２−フルオロ−６−メチル−ベンゾニトリル：アダプター、熱電対および撹拌バーを取り付けた１０リットル丸底フラスコに、ＤＭＡ（６Ｌ）を入れ、減圧下に脱気し、Ｎ２で３回パージした。その混合物に、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（８７．５ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を減圧下に脱気し、Ｎ２で３回パージした。反応液を加熱して８０℃として３０分経過させた。３−フルオロ−２−ヨードトルエン（５７５ｇ、２．４ｍｏｌ）およびシアン化亜鉛（１７１．７ｇ、１．４６ｍｏｌ）を加え、混合物を減圧下に脱気し、Ｎ２で３回パージした。反応混合物を加熱して８０℃として１６時間経過させ、次に放冷して室温とした。その溶液を１Ｎ ＮＨ４ＯＨ水溶液２．０リットルに加え、ＥｔＯＡｃ １．５リットルで３回抽出した。抽出液をブライン２リットルで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を冷ＤＣＭ中にてｍＣＰＢＡで処理し、次にクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１０：１）によって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｂ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル：オーバーヘッド撹拌機を取り付けた３リットル三頸丸底フラスコに、２−フルオロ−６−メチル−ベンゾニトリル（１９１．８ｇ、１４１９ｍｍｏｌ）およびＭｓＯＨ（５６３ｍＬ、８５１６ｍｍｏｌ）を入れた。この溶液を撹拌しながら、それにＮＢＳ（２６５ｇ、１４９０ｍｍｏｌ）を３０分かけて少量ずつ加え、混合物を５０℃で３３時間撹拌した。この時点までに、ＨＰＬＣで反応がほぼ完了していることが示されたことから、反応液を氷１リットルに投入し（発熱が認められた）、３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン７００ｍＬで希釈し、撹拌した。水層を除去し、有機層を１Ｎ ＮａＯＨで２回および水で洗浄した。水層は不純物がかなり豊富であることが認められた。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮し、次に−１０℃冷凍庫で終夜保存した。時間が経過すると沈殿が生成し、それを濾過し、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄して、第１の生成物塊を得た。第２の沈殿塊によって追加の３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリルが得られた。
段階Ｃ：３−（２−ブロモ−アセチル）−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル（１１５ｇ、５３７ｍｍｏｌ）およびシス−ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１８．９ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）の脱気ジオキサン（１１４９ｍＬ）中混合物を室温で撹拌しながら、それに脱気トリブチル（１−エトキシビニル）スズ（２００ｍＬ、５９１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃で２２時間撹拌した。この時点までに、ＨＰＬＣで原料の変換が完了していることが示され（少なくとも１２時間が必要）、反応の完了はフラスコの側面表面へのパラジウム金属のメッキによって認めることができる。この時点で、反応液を冷却して０℃とし、ＴＨＦ（５７５ｍＬ）および水（２３０ｍＬ）を加え、次にＮＢＳ（１１０ｇ、６１８ｍｍｏｌ）を加えた（内部温度を＜５℃に維持しながら、１５分かけて少量ずつ加えた）。３０分後、ＨＰＬＣで、中間体エノールエーテルの完全な消費が示された。その溶液をＭＴＢＥ（１０００ｍＬ）で希釈し、０．５％ＨＢｒ水溶液で洗浄し（５００ｍＬで３回）、次に水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。沈殿が生じ、固体を濾過し、ヘキサンで数回洗浄した。それを窒素吹き込みによって脱水して、３−（２−ブロモ−アセチル）−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−３−ヒドロキシ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：７２重量％３−（２−ブロモ−アセチル）−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル（６９ｇ、１９４ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−Ｎ−Ｂｏｃ−２−ヒドロキシメチル−ピペラジン（４２．０ｇ、１９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０００ｍＬ）中混合物を室温で撹拌しながら、それにジイソプロピルエチルアミン（４４．０ｍＬ、２５２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応液をＥｔＯＡｃ １リットルで希釈し、１０重量％ＮａＨＣＯ３水溶液５００ｍＬで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（４０％から８０％）ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、直線勾配）によって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｅ：（Ｓ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−６，７，９，９ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：（３Ｒ，９Ｓ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−３−ヒドロキシ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６６．６ｇ、１７０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７１．１ｍＬ、５１０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０００ｍＬ）中混合物を内部温度＜５℃で撹拌しながら、それにメシル−Ｃｌ（１７．２ｍＬ、２２１ｍｍｏｌ）を滴下し（発熱が発生するので、滴下速度を下げる必要がある）、反応液を昇温させて室温として３０分経過させ、その時点までに反応は完了した。溶液を１０重量％ＮａＨＣＯ３水溶液５００ｍＬで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。全ての固体が溶解するまで若干の加熱を行いながら（溶液：＜５０℃に維持）、取得物を最小量のＥｔＯＡｃ（１２５ｍＬ）に取った。溶液を撹拌しながら冷却し、ヘキサン３５０ｍＬを終夜で滴下した。翌朝、溶液は透明となっており、かなりの量の粉末があった。固体を濾過によって回収し、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄して、生成物を得た。沈殿が認められるまで母液を濃縮し、それを濾過して、追加の（Ｓ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−６，７，９，９ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
段階Ｆ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：１リットル三頸ＲＢに、５％Ｐｄ／ＣａＣＯ３（１０．０ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（４０５ｍＬ）および（Ｓ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−６，７，９，９ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１５．０ｇ、４０．２ｍｍｏｌ）を入れた。溶液にＮ２を吹き込み、風船圧の水素雰囲気下に置き、撹拌しながら昇温させて４０℃とした。３８時間後、ＨＰＬＣでオレフィンの変換が完了しており、ジアステレオマーのシス：トランス比が５：１であることが示されている。懸濁液を冷却して室温とし、セライト層で濾過し、濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（６０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、直線勾配）を介して精製して、標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．１８（ｍ、１Ｈ）、７．０３（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．８７（ｓ、１Ｈ）、４．１０−３．６０（ｍ、２Ｈ）、３．５６（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５−２．８８（ｍ、３Ｈ）、２．８０−２．３５（ｍ、８Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）。
中間体１７Ａ（方法２）
窒素導入アダプター、熱電対およびセプタムを取り付けた三頸丸底フラスコに（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−３−ヒドロキシ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３０ｇ、８４０ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（１．６５Ｌ、２１ｍｏｌ）およびＤＣＭ３３００ｍＬを入れた。Ｅｔ３ＳｉＨ（２９２ｇ、２．５２ｍｏｌ、３当量）を１回で加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、トルエン（１００ｍＬ）と共沸させてＴＦＡを除去した。取得物をＤＣＭ（１．７リットル）に溶かし、２．５Ｍ Ｎａ２ＣＯ３を注意深く加えた（ｐＨは塩基性でなければならない）。Ｂｏｃ２Ｏ（２１８ｇ、１．２当量）を１回で加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。有機層を分離し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（０％から３０％アセトン−ヘキサン）によって精製して、生成物シス／トランス異性体の混合物を得た。キラルＳＦＣ精製（Ｂｅｒｇｅｒ ＭｕｌｔｉＧｒａｍ（商標名）ＳＦＣ、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ Ｃｏ．， Ｌｔｄ、ＡＤ ２５０ｍｍ×５０ｍｍ、５μｍカラム、Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：メタノール、Ａ：Ｂ＝８５：１５、１５０ｍＬ／分）によって、主生成物のトランスジアステレオマー１７Ａならびにシスジアステレオマー１７Ｂを得た。
中間体１７Ｃおよび１７Ｄ（方法１）
Figure 2014521751
 １７Ｃ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
１７Ｄ：（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシルエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：６−フルオロ−２−メチル−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（Ｉ−１７ＡおよびＩ−１７Ｂ、方法１、段階ＡからＣについて上記の方法に従って製造）（４．８０ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチル−ピペラジン（例えばＡｃｅｓｙｓ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ、カタログ番号Ａ１６１２Ｒから市販；およびＪ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ， ２００７， ７２（２２）， ｐ．８５９１−８５９２にも記載）（８．７９ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（３０ｍＬ）に懸濁させ、マイクロ波装置において１５０℃で１時間加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、酢酸エチルから５％ＭｅＯＨ／酢酸エチル勾配で溶離を行う３３０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９４。
段階Ｂ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２、１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシルエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．１４ｇ、１８．２ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリブチルホスホラン（７．８８ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）をベンゼン（６０．０ｍＬ）に溶かし、１００℃で終夜加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、１０％アセトン／ＤＣＭから２０％アセトン／ＤＣＭの勾配で溶離を行う３３０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製して。トランス−シス混合物を得た。異性体を、キラルＨＰＬＣ（１００バールおよび３５℃での３０×２５０ｍｍ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣカラム（Ｄｉａｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， ＬＴＤ．）における７０ｍＬ／分の１５％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ：ＣＯ２、２３０ｎＭ）によって分割した。異性体１７Ｃ（先に溶出するもの）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．７３（ｄｄ、Ｊ＝９．０、６．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．８３（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｂ、２Ｈ）、３．９８（ｄｄ、Ｊ＝１１．２５、２．７、１Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３１（ｂ、１Ｈ）、２．８４（ｄ、Ｊ＝１１、６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７４（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５９（ｓ、３Ｈ）、２．５４（ｂ、１Ｈ）、２．２２−２．３０（ｍ、２Ｈ）、２．１４６（ｔ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．５（ｓ、９Ｈ）：異性体１７Ｄ（遅く溶出するもの）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．１９（ｂ、１Ｈ）、７．０５（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．９０（ｓ、１Ｈ）、３．９８（ｂ、３Ｈ）、３．５４（ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２４（ｂ、１Ｈ）、３．１４（ｄｄ、Ｊ＝１２、２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｂ、１Ｈ）、２．８０（ｄｄ、Ｊ＝１１．２５、２．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．６８（ｂ、１Ｈ）、２．６３（ｓ、３Ｈ）、２．４６（ｂ、１Ｈ）、１．５（ｓ、９Ｈ）。
中間体１７Ｃおよび１７Ｄ（方法２）
段階Ａ：２−フルオロ−６−メチル−ベンゾニトリル：アダプター、熱電対および撹拌バーを取り付けた１０リットル丸底フラスコに、ＤＭＡ（６リットル）を入れ、減圧下に脱気し、Ｎ２で３回パージした。その混合物に、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（８７．５ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を減圧下に脱気、Ｎ２で３回パージした。反応液を加熱して８０℃として３０分経過させた。３−フルオロ−２−ヨードトルエン（５７５ｇ、２．４ｍｏｌ）およびシアン化亜鉛（１７１．７ｇ、１．４６ｍｏｌ）を加え、混合物を減圧下に脱気し、Ｎ２で３回パージした。反応混合物を加熱して８０℃として１６時間経過させ、放冷して室温とした。溶液を１Ｎ ＮＨ４ＯＨ水溶液２．０リットルに加え、それをＥｔＯＡｃ １．５リットルで３回抽出し、ブライン２リットルで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、冷却したＤＣＭ中でｍＣＰＢＡ（約０．２当量）で処理して、トリフェニルホスフィンを酸化し、精製を容易にし、次にクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１０：１）によって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｂ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル：オーバーヘッド撹拌機を取り付けた３リットル三頸丸底フラスコに、２−フルオロ−６−メチル−ベンゾニトリル（１９１．８ｇ、１４１９ｍｍｏｌ）およびＭｓＯＨ（５６３ｍＬ、８５１６ｍｍｏｌ）を入れた。この撹拌溶液にＮＢＳ（２６５ｇ、１４９０ｍｍｏｌ）を３０分かけて少量ずつ加え、混合物を５０℃で３３時間撹拌した。反応液を氷１リットルに投入し、３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン７００ｍＬで希釈し、撹拌した。水層を取り、有機層を１Ｎ ＮａＯＨで２回洗浄し、次に水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮し、次に−１０℃冷凍庫に終夜保存した。この期間にわたって沈殿が生成し、濾過し、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄して、第１の生成物塊を得た。第２の沈殿塊によって、追加の３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリルを得た。
段階Ｃ：３−（２−ブロモ−アセチル−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル（１１５ｇ、５３７ｍｍｏｌ）およびシス−ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１８．９ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）の脱気ジオキサン（１１４９ｍＬ）中混合物を室温で撹拌しながら、それに脱気トリブチル（１−エトキシビニル）スズ（２００ｍＬ、５９１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃で２２時間撹拌した。フラスコ側面へのパラジウム金属のメッキ形成によって、この反応の完結を認めることができた。反応液を冷却して０℃とし、ＴＨＦ（５７５ｍＬ）および水（２３０ｍＬ）を加え、次にＮＢＳ（１１０ｇ、６１８ｍｍｏｌ）を加えた（内部温度＜５℃を維持しながら１５分間かけて少量ずつ加えた）。３０分後、ＨＰＬＣによって、中間体エノールエーテルが完全に消費されていることが示された。溶液をＭＴＢＥ（１０００ｍＬ）で希釈し、０．５％ＨＢｒ水溶液で洗浄し（５００ｍＬで３回）、次に水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。沈殿が生成し、固体を濾過し、ヘキサンで数回洗浄した。それを窒素吹き込みで乾燥させて、３−（２−ブロモ−アセチル）−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチル−フェニル）−３−ヒドロキシ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル：３−（２−ブロモ−アセチル）−６−フルオロ−２−メチル−ベンゾニトリル（１７６ｇ、６８８ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−４−Ｎ−Ｂｏｃ−２−ヒドロキシメチル−ピペラジン（１４９ｇ、６８８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３５００ｍＬ）中混合物を室温で撹拌しながら、それにジイソプロピルエチルアミン（１５６ｍＬ、８９４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応液をＥｔＯＡｃ ３リットルで希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液１５００ｍＬで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（４０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、直線勾配）によって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｅ：１７Ｃおよび１７Ｄ：窒素導入アダプター、熱電対およびセプタムを取り付けた５０００ｍＬ三頸丸底フラスコに、段階Ｄの生成物（２７３ｇ、６９６．２ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（１３４０ｍＬ、１７．４５ｍｏｌ、２５当量）およびＤＣＭ １３００ｍＬを入れた。Ｅｔ３ＳｉＨ（３３３ｍＬ、２．１ｍｏｌ、３当量）を１回で加え、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濃縮してＴＦＡを除去した。取得物をＤＣＭ（６００ｍＬ）に溶かし、注意深く２．５Ｍ Ｎａ２ＣＯ３（１４００ｍＬ、３．５ｍｏｌ、５当量）を入れた（ｐＨは塩基性でなければならない）。Ｂｏｃ２Ｏ（２４３ｍＬ、１．０５ｍｏｌ、１．５当量）を１回で加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。有機層を分離し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（０％から３０％アセトン−ヘキサン）を介して精製して、生成物（約２：１トランス：シス）を得て、それをキラルＳＦＣによって分離して両方の単独異性体を得た（キラルＳＦＣ ＨＰＬＣ分離条件：装置：Ｂｅｒｇｅｒ ＭｕｌｔｉＧｒａｍ ＳＦＣ、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ Ｃｏ，， Ｌｔｄ．；カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤカラム（Ｄｉａｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， ＬＴＤ．）２５０ｍｍ×５０ｍｍ、５μｍ；移動相：Ａ：超臨界ＣＯ２、Ｂ：ＭｅＯＨ、１５０ｍＬ／分でＡ：Ｂ＝８５：１５；カラム温度：３８℃；ノズル圧：１０ＭＰａ（１００バール）；ノズル温度：６０℃；エバポレータ温度：２０℃；トリマー温度：２５℃；波長：２３５ｎｍ）。１７Ｃトランス異性体：１Ｈ ＮＭＲ４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３δ：７．７２０−７．６８３（ｄｄ、Ｊ＝９，６Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５６（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．８１１−４．７８７（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、１Ｈ）、３．９６２−３．９２８（ｄｄ、Ｊ＝９，６Ｈｚ、３Ｈ）、３．４６５（ｔ、Ｊ＝１０Ｈｚ１Ｈ），３．００２（ｓ、１Ｈ）、２．８２６−２．７９７（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７１９（ｓ、１Ｈ）、２．６３８−２．５５９（ｍ、４Ｈ）、２．０９１−２．２５３（ｍ、３Ｈ）、１．４６９（ｓ、９Ｈ）；１７Ｄシス異性体：１Ｈ ＮＭＲ４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３δ：８．１８２−８．１４６（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ、１Ｈ）、７．０１９（ｔ、Ｊ＝９Ｈｚ、１Ｈ）、４．８７３（ｓ、１Ｈ）、３．９５２−３．７１１（ｍ、２Ｈ）、３．５３０−３．５０３（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ），３．２１５−３．０２０（ｍ、３Ｈ）、２．８０１−２．７６１（ｄ、Ｊ＝１６Ｈｚ、１Ｈ）、２．５９３（ｓ、４Ｈ）、２．４５２−２．４３０（ｍ、３Ｈ）、１．４６３（ｓ、９Ｈ）。
中間体１８Ａ
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｓ）−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：６−フルオロ−２−メチル−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（７８５ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３４０ｍｇ、６．２ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍＬ）中混合物を、マイクロ波装置において１５０℃で３時間にわたり加熱した。揮発分を留去し、残留物を４０％から１００％酢酸エチル／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅで精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：３９４．１９。
段階Ｂ：（３Ｓ）−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ベンジル：（３Ｓ）−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．８７ｇ、７．３２ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（２０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）を室温で加え、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。揮発性溶媒を除去した後、残留物をメチレンクロライド（５０ｍＬ）に溶かした。上記の溶液に、トリエチルアミン（６．１２ｍＬ、４３．９ｍｍｏｌ）およびクロルギ酸ベンジル（１．１ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応溶液を０℃で１時間撹拌してから、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２００ｍＬ）で反応停止した。次に、混合物をメチレンクロライドで抽出した（１００ｍＬで３回）。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：４２８．１８。
段階Ｃ：（７Ｒ，９ａＲ）−８−アリル−７−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジルおよび（７Ｓ，９ａＲ）−８−アリル−７−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジル：（３Ｓ）−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ベンジル（１．６８ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）のスルホニルクロライド（１４．０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）中溶液を９０℃で１時間加熱した。揮発分を除去した後、残留物をＤＭＦ（１６ｍＬ）に溶かし、封管中にて０℃でアリルアミン（１．７２６ｍＬ、２３．５８ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（０．０５９ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を９０℃で１時間加熱した。混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し（２００ｍＬで３回）、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、残留物を４０％から８０％酢酸エチル／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅで精製して、標題化合物を得た（ＴＬＣで極性が高い方）。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：４４９．２４。
段階Ｄ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２、８（９Ｈ，９ａＨ）−ジカルボン酸８−ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル：（７Ｒ，９ａＲ）−８−アリル−７−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジル（１２６０ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン（１３１６ｍｇ、８．４３０ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１６２ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（１０ｍＬ）中混合物を３５℃で４時間加熱した。冷却して室温とした後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７３６ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５７９μＬ、１１．２４ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で終夜撹拌した。濃縮後、残留物を、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅで精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：５０９．３２。
段階Ｅ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２，８（９Ｈ，９ａＨ）−ジカルボン酸８−ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル（６００ｍｇ、１．１８０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に、パラジウム／炭素（１０％，１２６ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物について、室温で終夜水素化を行った。反応混合物をセライトで濾過し、メタノールおよびメチレンクロライドの混合物（１：１）で洗浄し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：３７５．２８。
中間体１８Ｂ
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２，８（９Ｈ，９Ａｈ）−ジカルボン酸８−ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル：（７Ｓ，９ａＲ）−８−アリル−７−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジル（５１８ｍｇ、１．１５５ｍｍｏｌ）、１，３−ジメチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン（５１８ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６６．７ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（１０ｍＬ）中混合物を３５℃で４時間加熱した。冷却して室温とした後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３０２ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６４９μＬ、４．６２ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で終夜撹拌した。濃縮後、残留物を、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いるＢｉｏｔａｇｅで精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：５０９．２６。
段階Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）テトラヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２，８（９Ｈ，９Ａｈ）−ジカルボン酸８−ベンジル２−ｔｅｒｔ−ブチル（０．７８ｇ、１．５３４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に、パラジウム／炭素（１０％、０．１６３ｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物について、室温で終夜水素化した。反応混合物をセライトで濾過し、メタノールおよびメチレンクロライドの混合物（１：１）で洗浄し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：３７５．２８。
中間体１８Ｃ
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：６−フルオロ−２−メチル−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルおよび（Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを原料として（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成について記載の方法と類似の方法で、標題化合物を製造した。ＬＣ／ＭＳ：３７５．１６（Ｍ＋１）＋。
中間体１８Ｄ
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（７Ｒ，９ａＳ）−８−アリル−７−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ベンジル（（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成から得たもの）を原料として（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成について記載の方法と類似の方法で、標題化合物を製造した。ＬＣ／ＭＳ：３７５．１４（Ｍ＋１）＋。
中間体１９Ａおよび１９Ｂ
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｓ）−３−（アセチルチオメチル−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（上記の合成、０．０９０ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２．３ｍＬ）に溶かし、冷却して０℃とした。トリエチルアミン（０．０３８ｍＬ、０．２７４ｍｍｏｌ）を加え、次にＭｓ−Ｃｌ（０．０２０ｍＬ、０．２５２ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（２．７９ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を外し、撹拌を２時間続けた。次に、反応混合物を減圧下に濃縮した。取得物をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に再溶解し、チオ酢酸カリウム（０．０３５ｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で窒素下に終夜撹拌し、４５℃で２時間加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水（３回）およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（１００％ヘキサンから８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、所望の生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ：Ｍ＋１＝４５２．３。
段階Ｂ：（３Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（２−クロロ−２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）エチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）−２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３０．８ｍｇ、０．０６８０ｍｍｏｌ）のトルエン（０．６２ｍＬ）中溶液に、塩化チオニル（１４．９μＬ、０．２０５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を氷浴で冷却し、次にピリジン（２２．１μＬ、０．２７３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で２０分間撹拌し、次に１時間かけて昇温させて室温とし、最後に７０℃で３０分間加熱した。反応混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルで希釈し、最小量の飽和重炭酸ナトリウム水溶液、次にブラインで洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウム層で濾過し、濃縮した。それを直接次の段階で用いた。
段階Ｃ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：ＴＨＦ（３４ｍＬ）中の（３Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（２−クロロ−２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）エチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３２０ｍｇ、０．６８１ｍｍｏｌ）をナトリウムメトキシド（４４１ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温でＮ２下に３時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳによって、１対のジアステレオマーとしての所望の生成物の生成が示された。反応混合物を濃縮し、酢酸エチルと水との間で分配した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、脱水し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を、カラムクロマトグラフィー（１００％ヘキサンで２ＣＶ、１００％ヘキサンから３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで４ＣＶ、３５％に維持して４ＣＶ、次に４ＣＶまで８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンまで増加させる）（ＣＶ＝カラム体積）によって精製して、標題化合物を得た。１９Ｂの１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δｐｐｍ８．７６（ｑ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．１３（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｂｓ、１Ｈ）、３．９０−４．００（ｑ、２Ｈ）、３．３５（ｑ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１３．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０６（ｍ、１Ｈ）、２．９５（ｍ、１Ｈ）、２．６４−２．７７（ｍ、２Ｈ）、２．５４（ｓ、３Ｈ）、２．４３（ｍ、１Ｈ）、２．３１（ｍ、２Ｈ）、２．２０（ｍ、１Ｈ）、１．４７（ｓ、９Ｈ）。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９２．４；１９Ａの１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δｐｐｍ７．７２（ｑ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、９．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｔ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９（広い二重線、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｍ、２Ｈ）、３．４６（ｍ、１Ｈ）、３．１４−３．２３（ｍ、３Ｈ）、２．８３−２．９８（ｍ、５Ｈ）、２．６６（ｓ、３Ｈ）、１．４８（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９２．４。
中間体２０Ａおよび２０Ｂ
Figure 2014521751
 ２０Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２０Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：２，６−ジフルオロ−３−ヒドロキシベンゾニトリル：２，６−ジフルオロ−３−メトキシベンゾニトリル（４．４２ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に０℃で溶かし、次に１Ｍ ＢＢｒ３（５２．２ｍＬ、５２．２ｍｍｏｌ）を加えた。次に、反応混合物を昇温させて室温とし、終夜撹拌した。反応混合物を氷水に投入し、追加のＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させて、２，６−ジフルオロ−３−ヒドロキシベンゾニトリルを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１５６。
段階Ｂ：トリフルオロメタンスルホン酸３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル：２，６−ジフルオロ−３−ヒドロキシベンゾニトリル（３．５０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かし、冷却して０℃とし、ＴＥＡを加え（７．８７ｍＬ、５６．４ｍｍｏｌ）、次に無水トリフ酸（７．６３ｍＬ、４５．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間撹拌し、次に氷水に投入し、追加のＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、次にブラインで洗浄し、次にＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗取得物を、０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離を行う３３０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、トリフルオロメタンスルホン酸３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニルを得た。
段階Ｃ：３−エテニル−２，６−ジフルオロベンゾニトリル：トリフルオロメタンスルホン酸３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル（５．２０ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（４．８５ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（０．６６２ｇ、０．９０５ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（５．０５ｍＬ、３６．２ｍｍｏｌ）をエタノール７５ｍＬに加えた。反応混合物を脱気し、４時間加熱還流した。ＬＣ−ＭＳ分析によって生成物ピークを確認した。反応混合物を、酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、脱水し、溶媒留去して乾固させた。次に、粗取得物を、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離を行う３３０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムによるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、３−エテニル−２，６−ジフルオロベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：２，６−ジフルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル：３−エテニル−２，６−ジフルオロベンゾニトリル（１．７０ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に０℃で加えた。次に、ｍＣＰＢＡ（５．３３ｇ、３０．９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。反応混合物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で洗浄し、次に１Ｎ ＮａＯＨおよびブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離を行う１２０ｇＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製した。２，６−ジフルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルを単離した。
段階Ｅ：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２，６−ジフルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（１．５０ｇ、８．２８ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジン（２．４０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に懸濁させ、マイクロ波装置において１５０℃で３０分間加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、５％ＭｅＯＨ／９５％ＥｔＯＡｃで溶離を行う１２０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９８。
段階Ｆ：（９ａＳ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（１．３１ｇ、５．４４ｍｍｏｌ）をベンゼン５ｍＬに溶かした。反応混合物を脱気し、加熱して１００℃として１６時間経過させた。ＬＣ−ＭＳ分析で、生成物ピークが２．０７分（Ｍ＋１＝３８０）に示された。反応液を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、４０％ＥｔＯＡｃ／６０％ヘキサン混合物で溶離を行う８０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物のシス−トランス混合物を得た。
段階Ｇ：異性体２０Ａおよび２０Ｂ：段階Ｆの生成物の異性体を、Ｃｈｉｒａｐａｋ ＡＤ４．６×２５０ｍｍ １０μカラムを用いるキラルＨＰＬＣによって分離し、２５％ＩＰＡ／７５％ヘプタンで溶離を行った。（３Ｒ，９ａＳ）トランス異性体２０Ａが最初に溶出し、（３Ｓ，９ａＳ）シス異性体２０Ｂが２番目に溶出した。３１Ａ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．７９−７．８４（ｑ、１Ｈ）、７．０８（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．９４（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０（ｂ、２Ｈ）、３．９６（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０２（ｂ、１Ｈ）、２．９７（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５３（ｂ、１Ｈ）、２．２５−２．２９（ｑ、２Ｈ）、２．１３（ｔ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、１．５１（ｓ、９Ｈ）：ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８０。３１Ｂ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．２９（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．０８（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．０（ｓ、１Ｈ）、３．７０−４．１０ｐｐｍ（ｂ、２Ｈ）、３．６１（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．３４（ｂ、１Ｈ）、３．１２（ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｂ、１Ｈ）、２．８４（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、１Ｈ）、２．７９（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）２．６８（ｂ、１Ｈ）、２．４４−２．５（ｍ、２Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）：ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３８０。
中間体２０Ｃおよび２０Ｄ
Figure 2014521751
 ２０Ｃ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび２０Ｄ：（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｒ）−４−（２−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２，６−ジフルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（３．７０ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．６３ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）をエタノール（３６．０ｍＬ）に溶かし、３本の２０ｍＬ封管に入れ、１４０℃で１時間マイクロ波処理した。溶媒を留去し、合わせた残留物を、５０％から１００％酢酸エチル／ヘキサン溶媒系を用いる１２０ｇＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）３９８［Ｍ＋１］＋。
段階Ｂ：（９ａＲ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ）−４−（２−（３−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（７．３０ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）をベンゼン（９０ｍＬ）に溶かし、シアノメチレントリブチルホスホラン（７．９８ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５本の個別の２０ｍＬマイクロ波管に入れ、脱気し、１００℃で終夜加熱した。ＬＣ−ＭＳによって生成物ピークが示された。合わせた全ての反応混合物を濃縮した。粗生成物を、１０％アセトン／ヘキサン溶媒系による３３０ｇＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−Ｓｅｐカラムを用いるクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得た。ジアステレオマーを、次の条件：Ｃｈｉｒａｌ ＯＪ ２１×２５０ｍｍカラムでの（０．２％ＤＥＡ含有１５％ＭｅＯＨ）／ＣＯ２、５０ｍＬ／分、熱ＭｅＯＨ／ＭｅＣＮ中１９１ｍｇ／ｍＬ、３５℃、２２０ｎｍを用いる分取ＳＦＣによって分割した。２０Ｃ：１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７８８（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、０．５Ｈ）、７．７７７（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、０．５Ｈ）、７．０６６（ｔ、Ｊ＝８．３５Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．９４３（ｄｄ、Ｊ＝９．２５、３．１５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０９７−３．８０（ｂ、２Ｈ）、３．４６９（ｔ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．０１（ｂ、１Ｈ）、）、２．９４（ｄｄ、Ｊ＝１０、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．７３３（ｄ、Ｊ＝９．９Ｈｚ、１Ｈ）、２．５１−２．５２（ｂ、１Ｈ）、２．２０２−２．２６４（ｍ、２Ｈ）、）、２．１１５（ｔ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．４７６（ｓ、９Ｈ）。２０Ｄ：１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．２５９（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４５（ｔ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．０３１（ｓ、１Ｈ）、３．６４−４．０４（ｂ、２Ｈ）、３．５８９（ｄｄ、Ｊ＝１１．４、２．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．３０（ｂ、１Ｈ）、３．０８５（ｄｄ、Ｊ＝１２、３．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．００１（ｂ、１Ｈ）、）、２．８０２（ｄｄ、Ｊ＝１２、４．１５Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５７（ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．６３８（ｂ、１Ｈ）、２．４０１−２．４６（ｍ、２Ｈ）、１．４７６（ｓ、９Ｈ）。
中間体２１Ａおよび２１Ｂ
Figure 2014521751
 ２１Ａ：２，４−ジフルオロ−５−［（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリルおよび２１Ｂ：２，４−ジフルオロ−５−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル
段階Ａ：５−シアノ−２，４−ジフルオロ安息香酸：５−ブロモ−２，４−ジフルオロベンゾニトリル（６．００ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）中溶液に、ＴＥＡ（３．００ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．８ｇ）を加えた。反応液を２ＭＰａのＣＯで加熱して１００℃として１８時間経過させた。冷却して室温とした後、反応液を水５００ｍＬに投入した。褐色固体が沈殿し、それを濾過した。濾過ケーキを水で洗浄し、シリカゲルカラムによって精製して、５−シアノ−２，４−ジフルオロ安息香酸を得た。
段階Ｂ：５−（ブロモアセチル）−２，４−ジフルオロベンゾニトリル：ＤＭＦ ０．５ｍＬ含有の５−シアノ−２，４−ジフルオロ安息香酸（２．００ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中懸濁液に、オキサリルクロライド（５ｍＬ）を０℃で滴下した。混合物を２５℃で４５分間撹拌し、透明溶液を減圧下に濃縮乾固させた。この酸塩化物をＴＨＦ ７０ｍＬに取り、氷／水で冷却して０℃とした。ＣＨ２Ｎ２溶液（エーテル約１５０ｍＬ中７０ｍｍｏｌ）を滴下し、０℃で２時間撹拌してから、濃（４７％）ＨＢｒ１５ｍＬを加えた。混合物を０℃で２０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ ６００ｍＬで希釈した。次に、混合物を水（３０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、５−（ブロモアセチル）−２，４−ジフルオロベンゾニトリルを得た。
段階Ｃ：（３Ｓ）−４−［２−（５−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチルピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：５−（ブロモアセチル）−２，４−ジフルオロベンゾニトリル（２．５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．１ｇ、９．６ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．９０ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中懸濁液を２０℃で１０時間撹拌した。反応混合物を氷水に投入し、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬで３回）。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、脱水し、濃縮した。残留物を５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離を行うカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｄ：２１Ｂ：２，４−ジフルオロ−５−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリルおよび２１Ａ：２，４−ジフルオロ−５−［（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル：（３Ｓ）−４−［２−（５−シアノ−２，４−ジフルオロフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．１ｇ、７．８ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（５０ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ３ＳｉＨ（１０．４ｇ、８９．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で９０分間撹拌し、減圧下に濃縮乾固させた。残留物をエーテルで洗浄し、得られた油状物を精製し、異性体をＳＦＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−Ｈ １００×４．６ｍｍ（内径）、５μｍ；移動相：メタノール（０．０５％ＤＥＡ）／ＣＯ２ ５％から４０％；流量：４．５ｍＬ／分；波長：２２０ｎｍ；温度：４０．勾配：０分間５％、０．５分間５％、２．２５分間４０％、３．６５分間４０％、４．０分間５％、５．０分間５％）によって分離して、標題化合物を得た。異性体Ａ：１Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ、４００ＭＨｚ）δ８．２４−８．２８（ｍ、１Ｈ）、７．２７−７．３２（ｍ、１Ｈ）、５．０３（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．６６−３．６８（ｍ、１Ｈ）、３．４８−３．５０（ｍ、３Ｈ）、３．３４−３．３７（ｍ、１Ｈ）、３．１４−３．１７（ｍ、３Ｈ）、２．８４−２．８８（ｍ、３Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ２８０（Ｍ＋１）＋；異性体Ｂ：１Ｈ−ＮＭＲ（ＭｅＯＤ、４００ＭＨｚ）δ７．８７−７．９１（ｍ、１Ｈ）、７．２６−７．３１（ｍ、１Ｈ）、４．９１（ｓ、１Ｈ）、４．０２−４．０４（ｍ、１Ｈ）、３．４９−３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．３７−３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．１４−３．２８（ｍ、５Ｈ）、３．００−３．０７（ｍ、２Ｈ）、２．７８−２．８２（ｍ、１Ｈ）、２．６１−２．６７（ｍ、１Ｈ）、２．４９−２．５６（ｍ、１Ｈ）、２．２４−２．５１（ｍ、１Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ２８０（Ｍ＋１）＋。
中間体２２
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＲ）−３−（５−シアノ−２−フルオロ−４−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゼン：２−ブロモ−５−フルオロフェノール（５０ｇ、０．２６ｍｏｌ）のＤＭＦ（３００ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（７２．８ｇ、０．５２０ｍｏｌ）を１回で加え、ＭｅＩ（４４．６ｇ、０．３１０ｍｏｌ）を０℃で滴下した。混合物を室温で３時間撹拌した後、反応液を水１リットルに投入し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３００ｍＬで３回）。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、脱水し、濃縮して、１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゼンを得た。
段階Ｂ：４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル：１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゼン（２５ｇ、０．１２ｍｏｌ）のＤＭＦ ２５０ｍＬ中溶液に、Ｚｎ（ＣＮ）２（２８．６ｇ、０．２４０ｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（７．０５ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）を１回で加え、反応液にＡｒを入れ、加熱して１００℃として１０時間経過させた。次に、反応液を、ＥｔＯＡｃ １リットルに投入し、珪藻土層で濾過した。濾液を水、ブラインで洗浄し、脱水し、濃縮して固体を得て、それをシリカゲルカラムによって精製して、４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリルを得た。
段階Ｃ：５−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル：４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（３５ｇ、０．２３ｍｏｌ）の濃Ｈ２ＳＯ４（３００ｍＬ）中溶液に、ＮＢＳ（４２ｇ、０．２３ｍｏｌ）を−１０℃で少量ずつ加え。反応液を室温で２時間撹拌した。次に、反応液を氷２リットルに少量ずつ投入すると、固体が沈殿し、それを濾過した。フィルターケーキを水で洗浄し、次に固体を真空乾燥して、５−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：５−（ブロモアセチル）−４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル：５００ｍＬフラスコに、５−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（４．００ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロライド（０．６１ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、トリブチル（１−エトキシ−ビニル）スズ（９．４２ｍＬ、２６．１ｍｍｏｌ）を加え、次に１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を９５℃で３時間撹拌した。フラスコを油浴から取り出し、冷却して室温とし、次にＴＨＦ／Ｈ２Ｏ混合物（５０／２５ｍＬ）で処理し、氷浴に入れた。フラスコに、ＮＢＳ（６．１９ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。０℃で０．５時間撹拌した後、ＬＣで所望の生成物の生成が示された。反応混合物を氷浴から取り出し、ゆっくり昇温させて室温とした。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し（１００ｍＬで３回）、ブラインおよび水で洗浄し、それを脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮乾固させ、次にヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１／０．５）の溶媒系を用いるシリカゲルで分離して、所望の生成物を得た。ＬＣＭＳ：［（Ｍ＋２）］＋＝２７４。
段階Ｅ：（３Ｒ）−４−５−シアノ−２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２５０ｍＬフラスコに、５−（ブロモアセチル）−４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（２．００ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−Ｎ−Ｂｏｃ−２−ヒドロキシメチル−ピペラジン（３．１８ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２．５７ｍＬ、１４．７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（５０ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物のＬＣ分析によって、反応完結が示された。溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で処理し、ブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮乾固させた。残留物を、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの溶媒系を用いるシリカゲルで精製して、所望の生成物を得た。ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４０８。
段階Ｆ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（５−シアノ−２−フルオロ−４−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：５００ｍＬフラスコに、（３Ｒ）−４−［５−シアノ−２−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．２０ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（４．３１ｍＬ、２７．０ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ／ＴＦＡ混合物（５０／２０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物のＬＣ分析によって、還元の完了が示された。反応混合物を濃縮乾固させ、得られた残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３およびＢＯＣ２Ｏ水溶液（１．２ｇ、５．４ｍｍｏｌ）に溶かし、室温で２時間撹拌した。ＬＣによる反応混合物の分析によって、反応完結が示された。反応混合物をさらにＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、混合物を分液漏斗に移し入れ、層を分離した。有機層をブライン、水で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの溶媒系を用いるシリカゲルで精製して、標題化合物を得た。注：専らトランス異性体が生成した。ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３９２；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７５（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．６７（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．８８（ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、３．５１−３．４５（ｍ、２Ｈ）、２．９４−２．９１（ｍ、２Ｈ）、２．７８−２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．２８−２．１３（ｍ、４Ｈ）、２．１７−２．１３（ｍ、２Ｈ）、１．５（ｓ、９Ｈ）。
中間体２３Ａおよび２３Ｂ
Figure 2014521751
 ２３Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メトキシフェニルヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび２３Ｂ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（方法１）：２−フルオロ−６−メトキシベンゾニトリル（８．３０ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）を０℃でトリフ酸（７５ｍＬ）に溶かし、ＮＢＳ（１０．３ｇ、５７．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳで原料ピークがないことが示された。反応混合物を氷に投入し、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。残留物を３３０ｇ Ｒｅｄｉ−Ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーによって精製し、１０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離して、標題化合物を得た。
段階Ｂ：３−エテニル−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル：２００ｍＬフラスコにおいて、エタノール８０ｍＬに３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（４．４０ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（５．１２ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（０．７ｇ、１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（５．３３ｍＬ、３８．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を脱気し、４時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、ほとんどのＥｔＯＨを除去した。残留物を酢酸エチルで希釈した。混合物をブラインで２回洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。残留物を３３０ｇ ＲｅｄｉＳｅｐカラムで精製し、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離して標題化合物を得た。
段階Ｃ：６−フルオロ−２−メトキシ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル：３−エテニル−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（１．６７ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）を０℃でＤＣＭ（５０ｍＬ）に加え、次にｍＣＰＢＡ（４．８８ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液と次に１Ｎ ＮａＯＨ、次にブラインで洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。粗生成物を１２０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製し、０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系で溶離を行った。６−フルオロ−２−メトキシ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルを単離した。
段階Ｄ：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：６−フルオロ−２−メトキシ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（１．４ｇ、７．３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジン（３．１３ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に懸濁させ、マイクロ波装置において１５０℃で６０分間加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、４０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製し、５％ＭｅＯＨ／９５％ＥｔＯＡｃで溶離を行って、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝４１０。
段階Ｅ：（９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−４−［２−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（２．１２２ｇ、８．７９ｍｍｏｌ）をベンゼン１５ｍＬに溶かした。反応混合物を脱気し、加熱して１００℃として１６時間経過させた。ＬＣ−ＭＳにより、生成物ピークが２．０７（Ｍ＋１＝３８０）に示された。反応液を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物について、８０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーを行い、４０％ＥｔＯＡｃ／６０％ヘキサン混合物で溶離を行って、標題化合物のシス−トランス混合物を得た。
段階Ｆ：トランス異性体（３Ｒ，９ａＳ）２３Ａおよびシス異性体（３５，９ａＳ）２３Ｂ：異性体を、８５％ＳＦＣ ＣＯ２および１５％ＥｔＯＨを用いるＣｈｉｒａｐａｋ ＡＤ−Ｈ ２５０ｍｍ×３０ｍｍ（内径）によって分離した。トランス異性体が最初に溶出し、次にシス異性体が溶出した。２３Ａ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．７２ｐｐｍ（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．９２（ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７（ｓ、３Ｈ）、４．０３（ｂ、２Ｈ）、３．９６（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、１Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｂ、１Ｈ）、２．９５（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．７４（ｓ、１Ｈ）、２．５４（ｂ、１Ｈ）、２．２４（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．０７（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９２；２３Ｂ：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．２８（ｂ、１Ｈ）、６．９６（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．０６（ｓ、１Ｈ）、４．１６（ｓ、３Ｈ）、３．８０−４．０５ｐｐｍ（ｂ、２Ｈ）、３．８０（ｓ、１Ｈ）、３．７４（ｓ、１Ｈ）、３．４２３（ｂ、１Ｈ）、３．０４（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．８１（ｂ、３Ｈ）、２．５６（ｂ、２Ｈ）２．６８、１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９２。
３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル製造の方法２
段階Ａ：１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゼン：２−ブロモ−５−フルオロフェノール（１５ｇ、７９ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（１２５ｍＬ）中溶液に、冷却下にＫ２ＣＯ３（１７．０ｇ、１３８ｍｍｏｌ）およびＭｅＩ（１４．０ｇ、１０２ｍｍｏｌ）を加え、次に反応液を室温で３時間撹拌した。混合物を水に投入し、ジエチルエーテルで抽出し、水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゼンを得た。
段階Ｂ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシ安息香酸：窒素下に脱水ジイソプロピルアミン（１０ｇ、９９ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ中溶液を−７８℃浴で冷却し、ｎ−ブチルリチウム（２．５０Ｍヘキサン中溶液、４０ｍＬ、９９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を−７８℃で２０分間撹拌した。１−ブロモ−４−フルオロ−２−メトキシベンゼン（１７．０ｇ、８２．５ｍｍｏｌ）を加えた。−７８℃で２時間撹拌後、溶液にＣＯ２を吹き込み、昇温させて０℃とした。次に、ｐＨ＝３から４まで１Ｎ ＨＣｌを加え、混合物をＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮して、３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシ安息香酸を得た。
段階Ｃ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンズアミド：オキサリルクロライド（１５ｍＬ）を、０℃で３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシ安息香酸（１５ｇ、６０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ ０．５ｍＬ含有ＤＣＭ（１００ｍＬ）中懸濁液に滴下した。混合物を２５℃で２時間撹拌し、透明溶液を減圧下に濃縮乾固させた。脱水アセトニトリル６０ｍＬに溶かした残留物を０℃でＮＨ３・Ｈ２Ｏ水溶液６００ｍＬに加え、２時間撹拌し、濾過して、３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンズアミドを得た。
段階Ｄ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンズアミド（１４ｇ、６１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中溶液に、２，４，６−トリクロロ−［１，３，５］トリアジン（１２．３ｇ、６７．０ｍｍｏｌ）を０℃で少量ずつ加え、２時間撹拌してから、氷／水に投入した。白色固体を濾過によって回収し、水で洗浄し、ＤＣＭに溶かし、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリルを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７１−７．７４（ｍ、１Ｈ）、６．８４−６．８８（ｍ、１Ｈ）、４．０９（ｓ、３Ｈ）。
中間体２４Ａおよび２４Ｂ
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：パートＡ：市販の３−ブロモ−２−メチル安息香酸を原料として、３−ブロモ−６−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリルの製造についての方法２段階ＣおよびＤに記載の手順と類似の手順を用いて、３−ブロモ−２−メチルベンゾニトリルを製造した。パートＢ：３−ブロモ−６−フルオロ−２−メチルベンゾニトリルに代えて３−ブロモ−２−メチルベンゾニトリルを原料として、中間体１７Ａおよび１７Ｂ（方法１）の製造について記載の方法と類似の方法で、標題化合物の製造を行った。ＡＤ−Ｈカラム、３０×２５０ｍｍ、２５％ＩＰＡ（０．２％ＤＥＡ）／ＣＯ２、７０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＯＨ中５０、３５Ｃ、２２０ｎｍによって、トランスおよびシスを分離した。Ｓ−トランス異性体（第１に溶出）−１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．７４（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．５７（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３４−７．３２（ｍ、１Ｈ）、４．８７（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０７−４．０２（ｍ、２Ｈ）、３．９８−３．９６（ｍ、２Ｈ）、３．５２−３．４８（ｍ、１Ｈ）、２．８６（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５−２．７３（ｍ、１Ｈ）、２．５９（ｓ、３Ｈ）、２．２９−２．２４（ｍ、２Ｈ）、２．１９−２．１５（ｍ、２Ｈ）、１．４９−１．４８（ｍ、９Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３５８：Ｓ−シス異性体（２番目に溶出）−１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．１４（ｄ、＝７Ｈｚ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２−７．３１（ｍ、１Ｈ）、４．９３（ｓ、１Ｈ）、４．０８−４．０３（ｍ、２Ｈ）、３．５９−３．５６（ｍ、２Ｈ）、３．３１（ｓ、１Ｈ）、３．１８−３．１５（ｍ、２Ｈ）、２．８２−２．８７（ｍ、２Ｈ）、２．６５（ｓ、３Ｈ）、２．５３−２．４９（ｍ、２Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝３５８。
中間体２４Ｃおよび２４Ｄ
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
段階Ａ：３−（２−クロロアセチル−２−メチルベンゾニトリル
３−ヨード−２−メチルベンゾニトリル（７．７１ｇ、３１．７ｍｍｏｌ）および２−クロロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアセトアミド（６．５５ｇ、４７．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液に−７８℃で、ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍヘキサン中溶液、１４．０ｍＬ、３４．９ｍｍｏｌ）を滴下した。添加完了後、混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、１Ｎ ＨＣｌを滴下することで反応停止した。混合物をＥｔＯＡｃ／水の間で分配し、層を分離した。水相をＥｔＯＡｃで抽出し（２回）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（硫酸マグネシウム）、濾過し、濃縮した。得られた残留物のヘキサンからの再結晶によって、３−（２−クロロアセチル）−２−メチルベンゾニトリルを得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）、δ７．７６（ｍ、２Ｈ）、７．４１（ｍ、１Ｈ）、４．５５（ｓ、２Ｈ）、２．６８（ｓ、３Ｈ）。
段階Ｂ：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−２−メチルフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチルピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：３−（クロロアセチル）−２−メチルベンゾニトリル（１．７ｇ、８．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７．６ｍＬ）中溶液に、（Ｒ）−４−Ｎ−ｂｏｃ−２−ヒドロキシメチル−ピペラジン（２．２７９ｇ、１０．５４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３．０７ｍＬ、１７．５６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で週末にかけて撹拌した。濃縮後、残留物をＥｔＯＡｃとＮａＨＣＯ３水溶液（飽和）との間で分配した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した。濃縮し、次に分取ＴＬＣ（シリカゲル；１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製を行って、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝３７４．１４。
段階Ｃ：２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリルおよび２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル：（３Ｒ）−４−［２−（３−シアノ−２−メチルフェニル）−２−オキソエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．３８ｇ、６．３７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２１．２４ｍＬ）およびトリエチルシラン（５．０９ｍＬ、３１．９ｍｍｏｌ）中溶液に、ＴＦＡ（１０．６２ｍＬ）を室温で滴下した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。濃縮後、残留物をＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液との間で分配した。水層をＤＣＭで抽出した（２回）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した。濃縮後、残留物をＤＣＭ ２０ｍＬに再溶解させ、ＢＯＣ２Ｏ（３．７０ｍＬ、１５．９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。濃縮後、残留物をＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液との間で分配した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した。濃縮後、混合物を分取ＴＬＣ（シリカゲル；１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、シスおよびトランス生成物の混合物を得た。混合物を、ＯＤ−Ｈカラムで３５℃にて１５％ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮを用いる分取ＳＦＣによって分割して、２種類の単独のジアステレオマーを得た。
中間体２５Ａおよび２５Ｂ
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−（５−シアノ−４−メチルチオフェン−３−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（５−シアノ−４−メチルチオフェン−３−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：２，４−ジブロモ−３−メチルチオフェン：２，３，５−トリブロモ−４−メチルチオフェン（４６．２ｇ、１３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）中溶液に、−７０℃でｎ−ＢｕＬｉ（５５．２ｍＬ、１３８．０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７０℃で１５分間撹拌し、水５０ｍＬをゆっくり加えた。得られた混合物を昇温させて室温とし、１０分間撹拌し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、粗２，４−ジブロモ−３−メチルチオフェンを得た。
段階Ｂ：４−ブロモ−３−メチルチオフェン−２−カルボニトリル：２，４−ジブロモ−３−メチルチオフェン（２０．０ｇ、７８．１ｍｍｏｌ）およびＣｕＣＮ（６．３０ｇ、７０．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中混合物を還流下に４時間撹拌してから、冷却した。反応混合物を、エーテル１リットルに撹拌しながら投入し、沈殿を濾過によって除去した。濾液を水（で３回１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物をシリカカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、４−ブロモ−３−メチルチオフェン−２−カルボニトリルを得た。
段階Ｃ：４−エテニル−３−メチルチオフェン−２−カルボニトリル：４−ブロモ−３−メチルチオフェン−２−カルボニトリル（３．００ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（２．４０ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．５ｇ）のＥｔＯＨ（３０ｍＬ）およびＴＥＡ（３０ｍＬ）中混合物を、Ａｒ下に４時間還流した。反応混合物を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝５０：１）によって精製して、４−エテニル−３−メチルチオフェン−２−カルボニトリルを得た。
段階Ｄ：３−メチル−４−（オキシラン−２−イル）チオフェン−２−カルボニトリル：４−エテニル−３−メチルチオフェン−２−カルボニトリル（１．７０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）のｔ−Ｂｕ−ＯＨ（３０ｍＬ）および水（６０ｍＬ）中懸濁液に、ＮＢＳ（２．４０ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。混合物を９０℃で１時間撹拌し、冷却して１０℃とした。次に、ＮａＯＨ溶液（水１０ｍＬ中０．７ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで２回抽出し、濃縮した。残留物をシリカカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝２０：１）によって精製して、３−メチル−４−（オキシラン−２−イル）チオフェン−２−カルボニトリルを得た。
段階Ｅ：（３Ｓ）−４−［２−（５−シアノ−４−メチルチオフェン−３−イル−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチルピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：３−メチル−４−（オキシラン−２−イル）チオフェン−２−カルボニトリル（１．３ｇ、７．９ｍｍｏｌ）および（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．０ｇ、９．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）中混合物をマイクロ波装置において１４０℃で９０分間加熱し、冷却した。反応混合物を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｆ：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（５−シアノ−４−メチルチオフェン−３−イルヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（５−シアノ−４−メチルチオフェン−３−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：マイクロ波管中で（３Ｓ）−４−［２−（５−シアノ−４−メチルチオフェン−３−イル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４０ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリブチルホスホラン（１．５９ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）をベンゼン（１５ｍＬ）に溶かし、密閉し、脱気し、加熱して１００℃として終夜経過させた。反応混合物を冷却し、ベンゼンを留去した。次に、残留物をアセトン：ＤＣＭ（５：９５）で溶離を行う８０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。シス−異性体ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｓ，９ａＳ）が最初に溶出し、トランス−異性体（３Ｒ，９ａＳ）が２番目に溶出した。異性体１：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．０６（ｓ、１Ｈ）、４．７６（ｓ、１Ｈ）、４．００（ｂ、１Ｈ）、３．７９（ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．７０（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．４２（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．１５（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．１０（ｓ、０．５Ｈ）、３．０８（ｓ、０．５Ｈ）、２．９９（ｂ、１Ｈ）、２．７５（ｔ、Ｊ＝１３．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．４６（ｂ、１Ｈ）、２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．２４−２．４０（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２６４；異性体２：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ７．５０（ｓ、１Ｈ）、４．６６（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、３．８０−４．１５（ｍ、３Ｈ）、３．４５（ｔ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０２（ｂ，１Ｈ）、２．８９（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．７５（ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５３（ｂ、１Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）、２．２７（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２６４。
中間体２６Ａ
Figure 2014521751
 （３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（Ｓ）−４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（Ｓ）−４−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成について上記の方法と同様の方法で、４−メチル−５−［（２Ｒ）−オキシラン−２−イル］−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを原料として、（Ｓ）−４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを製造した。
段階Ｂ：（Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（Ｓ）−４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８１７ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、窒素雰囲気下に０℃で、脱水トリエチルアミン（０．５６０ｍＬ、４．０２ｍｍｏｌ）を加え、次にメタンスルホニルクロライド（０．２３４ｍＬ、３．０１ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（２４．６ｍｇ、０．２０１ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を外し、反応混合物を２時間撹拌した。次に、得られた混合物を減圧下に濃縮した。得られた油状物を、脱水ＤＭＳＯ（１３ｍＬ）に再溶解させ、チオ酢酸カリウム（１２３５ｍｇ、１０．８１ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で窒素下に２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水（３回）、ブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物を、Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＰ１（４０＋Ｍ平衡化）で精製し、２０％から８０％酢酸エチル／ヘキサン、２０ＣＶで溶離を行った。ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４６５．２。
段階Ｃ：（３Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（２−クロロ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５７３ｍｇ、１．２３３ｍｍｏｌ）の脱水トルエン（１２．３ｍＬ）中溶液を氷浴で冷却しながら、それに塩化チオニル（０．２６８ｍＬ、３．７０ｍｍｏｌ）を加えた。次に、脱水ピリジン（０．３９９ｍＬ、４．９３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で２０分維持し、次に昇温させて室温とし、３時間撹拌した。ＴＬＣで、原料の消費が示された。反応液を減圧下に濃縮し、高真空下に終夜乾燥させた。次の段階で直接用いた。
段階Ｄ：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｓ）−３−（アセチルチオメチル）−４−（２−クロロ−２−（４−メチル−１−オキソ−１，３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５９６ｍｇ、１．２３４ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、ナトリウムメトキシド、２５％メタノール中溶液（０．８４６ｍＬ、３．７０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を窒素下に室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳで、所望の生成物の生成が示された。溶媒を減圧下に除去した。残留物を、ジクロロメタンに再溶解させ、ブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を２０％から８０％酢酸エチル／ヘキサン、１６ＣＶで溶離を行うＢｉｏｔａｇｅ ＳＰ１で精製した。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．６４（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．７７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．２９（ｓ、２Ｈ）、３．８１−４．２０（ｍ、３Ｈ）、３．３８（ｄｄ、Ｊ＝２．３、１２．６Ｈｚ）、３．００−３．２２（ｍ、２Ｈ）、２．５７−２．８２（ｍ、２Ｈ）、２．２４−２．５６（ｍ、７Ｈ）、１．５１（ｓ、９Ｈ）。
中間体２７Ａおよび２７Ｂ
Figure 2014521751
 ２７Ａ：ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｓ，９ａＲ）−３−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび２７Ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ，９ａＲ）−３−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：３−ブロモ−２−クロロ−６−フルオロベンゾニトリル：２−クロロ−６−フルオロベンゾニトリル（１５．６ｇ、１００ｍｍｏｌ）をトリフ酸（７５ｍＬ）に０℃で溶かし、次にＮＢＳ（１７．８ｇ、１００ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、終夜撹拌した。反応混合物を氷に投入し、ＤＣＭで抽出した（２回）。ＤＣＭ層をＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。ＤＣＭをＮａ２ＳＯ４で脱水し、次に濾過し、濃縮した。生成物を、１０％から２０％酢酸エチル／ヘキサン溶媒系を用いる３３０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−Ｓｅｐカラムによるクロマトグラフィーによって精製して、３−ブロモ−２−クロロ−６−フルオロベンゾニトリルを得た。
段階Ｂ：２−クロロ−６−フルオロ−３−ビニルベンゾニトリル：３−ブロモ−２−クロロ−６−フルオロベンゾニトリル（１５．４ｇ、６５．６ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（１７．６ｇ、１３１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１８．３ｍＬ、１３１ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（２．６８ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）をエタノール（７５ｍＬ）に加え、脱気し、３時間加熱還流した。反応液を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、脱水し、溶媒留去して乾固させた。生成物を、１０％酢酸エチル／ヘキサン溶媒系を用いる３３０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−Ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製して、２−クロロ−６−フルオロ−３−ビニルベンゾニトリルを得た。
段階Ｃ：２−クロロ−６−フルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル：２−クロロ−６−フルオロ−３−ビニルベンゾニトリルをＣＨＣｌ３（３００ｍＬ）に溶かし、次にｍＣＰＢＡ（２９．４ｇ、１７１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。ＴＬＣによって原料が消費されたことが示された時点で、混合物をＮａ２Ｓ２Ｏ３（１回）、１Ｎ ＮａＯＨ（１回）、ブライン（２回）で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、濃縮し、次に３３０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムを用いるＭＰＬＣクロマトグラフィーによって精製し、２０％酢酸エチル／ヘキサン溶媒系で溶離して、２−クロロ−６−フルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルを得た。
段階Ｄ：（３Ｒ）−４−（２−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２−クロロ−６−フルオロ−３−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（９．１ｇ、４６ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４．９ｇ、６９．１ｍｍｏｌ）をエタノール（１０５ｍＬ）に溶かし、９個の封管に分け入れ、１４０℃で１時間マイクロ波処理した。合わせた反応混合物を濃縮し、によって精製して、５０％から１００％酢酸エチル／ヘキサン溶媒系を用いる３３０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムによって精製して、標題化合物を得た。
段階Ｅ：（９ａＲ）−３−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ）−４−（２−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５．６ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（１６．４ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）をベンゼン（９０ｍＬ）に溶かし、脱気し、１００℃で１６時間加熱した。反応混合物を濃縮し、３３０ｇ ＩＳＣＯＲｅｄｉ−ｓｅｐカラムでクロマトグラフィー精製し、３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶離して、標題化合物（シス−トランスジアステレオマー混合物）を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：３９６［Ｍ＋１］＋；シス−トランスジアステレオマーを、下記の条件：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ２１×２５０ｍｍ、２０％ＩＰＡ、５０ｍＬ／分、１：１ＭｅＯＨ／ＭｅＣＮ中約８５ｍｇ／ｍＬ、１００バール、２２０ｎｍ、３５℃を用いるＳＦＣ−ＨＰＬＣによって分離した。２７Ａ：１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．８２６（ｄｄ、Ｊ＝８．７、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．１８４（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．９７５（ｄｄ、Ｊ＝９．６、１．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．９８９（ｂ、２Ｈ）、３．９５３（ｄｄ、Ｊ＝５．７、３．２Ｈｚ、１Ｈ）３．４８４（ｔ、Ｊ＝１０．８５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０１５（ｄｄ、Ｊ＝１１．４、２．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．７３３（ｄ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．５２（ｂ、１Ｈ）、２．１８−２．２６（ｍ、２Ｈ）、１．９８１（ｔ、Ｊ＝１０．８５Ｈｚ、１Ｈ）、１．４７４（ｓ、９Ｈ）。２７Ｂ：１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ８．３３１（ｓ、１Ｈ）、７．１６３（ｔ、Ｊ＝８．３５Ｈｚ、１Ｈ）、５．０３８（ｔ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．７３８−３．９４７（ｂ、２Ｈ）、３．６４９（ｄ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ、１Ｈ）３．３７１（ｓ、１Ｈ）、３．０２（ｄｄ、Ｊ＝１２、４．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．８４３（ｄｄ、Ｊ＝１２、３．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．７８４（ｄ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．５５６（ｂ、２Ｈ）、１．４７１（ｓ、９Ｈ）。
中間体２７Ｃおよび２７Ｄ
Figure 2014521751
 （３Ｒ，９ａＳ）−３−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｓ，９ａＳ）−３−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）ヘキサヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：段階Ｄにおいて（Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを用い、最後の段階で下記のように若干の変更を加えた以外は、２７Ａおよび２７Ｂについて記載の方法と同様の方法で標題化合物を製造した。
（３Ｓ）−４−［２−（２−クロロ−３−シアノ−４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（４．００ｇ、９．６６ｍｍｏｌ）およびシアノメチレントリ−ｎ−ブチルホスホラン（４．２０ｇ、５１７ｍｍｏｌ）をベンゼン６０ｍＬに溶かした。反応混合物を脱気し、加熱して１００℃として３時間経過させた。反応液を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を、３３％ＥｔＯＡｃ／６７％ヘキサンで溶離を行う３３０ｇ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。２７Ｃ−トランス（最初に溶出）：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ．７．８６（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．０１（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４（ｂ、２Ｈ）、３．９９（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、２Ｈ）３．５２（ｔ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．７７（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５７（ｂ、１Ｈ）、２．２１−２．２９（ｍ、２Ｈ）、２．０２（ｔ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．５１（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９６：２７Ｄ−シス：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δｐｐｍ８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．１９ｐｐｍ（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７ｐｐｍ（ｓ、１Ｈ）、３．９１（ｂ、２Ｈ）、３．６８（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４０（ｓ、１Ｈ）、３．０６（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、２Ｈ）、２．８７（ｓ、１Ｈ）、２．８６（ｓ、１Ｈ）、２．８１５（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）２．６０（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、２Ｈ）；１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝３９６。
中間体２８
Figure 2014521751
 ２−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル
段階Ａ：トリフルオロメタンスルホン酸４−ホルミル−２−メトキシフェニル：バニリン（２０ｇ、１３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）中溶液に室温で、炭酸カリウム（３６．３０ｇ、２６３ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸４−ニトロフェニル（５３．５ｇ、１９７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８時間撹拌した。反応混合物にＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）を加え、有機層を水で３回洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮した。次に、粗化合物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン１：９から３：７）によって精製して、スルホン酸エステルを得た。
段階Ｂ：４−ホルミル−２−メトキシベンゾニトリル：スルホン酸エステル（３７．０ｇ、１３０ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（６１．１ｇ、５２１ｍｍｏｌ）およびテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（２２．５７ｇ、１９．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３００ｍＬ）中混合物を１１０℃で８時間撹拌した。反応混合物にＥｔＯＡｃを加え、有機層を水で２回洗浄し、脱水し、濾過し、濃縮した。次に、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン３：７）によって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［Ｍ＋１］＋＝１６２．３４。
段階Ｃ：２−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル：ＮａＨ（０．１６ｇ、３．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を冷却しながら、それにヨウ化トリメチルスルホニウム（０．９１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中溶液を滴下した。得られた混合物を０℃でＮ２下に２０分間撹拌した。４−ホルミル−２−メトキシベンゾニトリル（０．６０ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液を加えた。得られた反応混合物を０℃でＮ２下に１時間撹拌し、次にそれを徐々に昇温させて室温とし、その温度で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（２５％酢酸エチル／ヘキサン）によって原料が消費されたことが示された。反応混合物を冷却して０℃とし、水を滴下することで反応停止した。混合物を酢酸エチルで抽出した（７０ｍＬで２回）。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、次に脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を減圧下に濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％から３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）を介して精製して、２−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルを得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ７．５７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．９９（ｄｄ、Ｊ＝１．１Ｈｚ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｓ、１Ｈ）、３．９７（ｓ、３Ｈ）、３．９４−３．９２（ｍ、１Ｈ）、３．２２（ｄｄ、Ｊ＝５．２、Ｈｚ、Ｊ＝４．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．７７（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［Ｍ＋１］＋＝１７６．３３。
中間体２９Ａおよび２９Ｂ
Figure 2014521751
 ２９Ａ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび２９Ｂ：（３Ｒ，９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｒ）−４−［２−（４−シアノ−３−メトキシフェニル−２−ヒドロキシエチル］−３（ヒドロキシメチル）ピペラジン１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：パイレックス（登録商標）容器に磁気撹拌バー、２−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（２．０ｇ、１１．４２ｍｍｏｌ）、（３Ｒ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．７０ｇ、１７．１２ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＨ ６ｍＬを入れた。次に、それをマイクロ波リアクターに入れ、１５０℃で３時間照射した。混合物を冷却して室温とし、溶媒を留去し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１％から２０％ジクロロメタン／ＭｅＯＨ）によって精製して、生成物を２種類のジアステレオマーの混合物（１：１）として得た。ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３３６．４１。
段階Ｂ：（９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：ベンゼン中の前段階の異性体混合物（３．４８ｇ、８．８９ｍｍｏｌ、１：１）を（トリブチル−λ５−ホスファニリデン）アセトニトリル（３．２２ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物をＢｉｏｔａｇｅ装置において１３５℃で３時間マイクロ波処理した。次に、混合物を冷却して室温とし、溶媒除去によって粗生成物を得た。粗生成物につて、クロマトグラフィーを行って（シリカゲル、溶離液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ９：１から３：７）、二環式標題化合物の異性体混合物を得た。
段階Ｃ：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび（３Ｒ，９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：２１×２５０ｍｍＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＪ−Ｈ、カラム、１５％ＭｅＯＨ／ＣＯ２で溶離、流量５０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＯＨ中５９ｍｇ／ｍＬ、３５Ｃ、２２０ｎｍ、Ｔｈｒ＝２００を用いて、前記異性体混合物をさらに、それのエナンチオマーに分離した。トランス−１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、（トランス）異性体、５００ＭＨｚ）δ７．５４（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｓ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．７２（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．１２−４．０（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｓ、３Ｈ）、３．４９（ｔ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｂｓ、１Ｈ）、２．９４（ｄ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．７６（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、１Ｈ）、２．５６（ｂｓ、１Ｈ）、２．２９−２．１９２（ｍ、３Ｈ）、１．６９（ｂｓ、１Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３１８．４０；シス−１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、（シス）異性体、５００ＭＨｚ）δ７．５８（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２１（ｓ、１Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．８２（ｂｓ、１Ｈ）、４．０６−３．９９（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｓ、３Ｈ）、３．６４（ｂｓ、１Ｈ）、３．４３（ｂｓ、１Ｈ）、３．２３（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５（ｂｓ、１Ｈ）、２．８１（ｂｓ、２Ｈ）、２．７２−２．４２（ｍ、３Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３１８．３５。
中間体３０および３１
Figure 2014521751
 ３０：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよび３１：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
段階Ａ：（３Ｓ）−４−［２−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）−２−ヒドロキシエチル］−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：パイレックス（登録商標）容器に磁気撹拌バー、２−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル（０．３５０ｇ、２．００ｍｍｏｌ）、（３Ｓ）−３−（ヒドロキシメチル）ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．４５７ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）、およびＥｔＯＨ ６ｍＬを入れた。次に、それをマイクロ波リアクターに入れ、１５０℃で３時間照射した。次に、混合物を冷却して室温とし、溶媒を留去し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１％から２０％ジクロロメタン／ＭｅＯＨ）によって精製して、標題化合物を２種類のジアステレオマーの混合物（１：１）として得た。ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３３６．１。
段階Ｂ：（９ａＳ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニルヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：ベンゼン中の前段階の異性体混合物（０．５５ｇ、１．４０ｍｍｏｌ、１：１）を（トリブチル−λ５−ホスファニリデン）アセトニトリル（０．６７８ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を、Ｂｉｏｔａｇｅ装置において１３５℃で３時間マイクロ波処理した。次に、混合物を冷却して室温とし、溶媒除去によって粗生成物を得た。粗生成物についてクロマトグラフィーを行って（シリカゲル、溶離液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ９：１から３：７）、二環式標題化合物の異性体混合物を得た。ＬＣＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３１８．０６。
段階Ｃ：２９Ｃ：および２９Ｄ：（９ａＳ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルをさらに、２１×２５０ｍｍ ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＪ−Ｈ、カラム、１５％ＭｅＯＨ／ＣＯ２で溶離、流量５０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＯＨ中５９ｍｇ／ｍＬ、３５Ｃ、２２０ｎｍ、Ｔｈｒ＝２００を用いて、それのエナンチオマーに分離した。トランス−１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、（トランス）異性体、５００ＭＨｚ）δ７．５５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０６（ｓ、１Ｈ）、６．９７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．７１（ｄ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．１２−４．０（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｓ、３Ｈ）、３．４８（ｔ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．０３（ｂｓ、１Ｈ）、２．９４（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．７６（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．５４（ｂｓ、１Ｈ）、２．２９−２．１９２（ｍ、３Ｈ）、１．５１（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３１８．１７；シス−１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、（シス）異性体、５００ＭＨｚ）δ７．５８（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．８２（ｂｓ、１Ｈ）、４．０６−３．９９（ｍ、２Ｈ）、３．９８（ｓ、３Ｈ）、３．６４（ｂｓ、１Ｈ）、３．４３（ｂｓ、１Ｈ）、３．２３（ｄｄ、Ｊ＝３．６Ｈｚ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．０１（ｂｓ、１Ｈ）、２．８０（ｂｓ、２Ｈ）、２．７２−２．４２（ｍ、３Ｈ）、１．５０（ｓ、９Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］＋＝３１８．３５。
中間体３２
Figure 2014521751
 ２−フルオロ−３−メチル−４−（オキシラン−２−イルベンゾニトリル
段階Ａ：４−エテニル−２−フルオロ−３−メチルベンゾニトリル：４−ブロモ−２−フルオロ−３−メチルベンゾニトリル（７．００ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（５．３ｇ、３９ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（７０ｍＬ）およびＴＥＡ（３０ｍＬ）中混合物を、Ａｒ下に４時間還流した。濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、４−エテニル−２−フルオロ−３−メチルベンゾニトリルを得た。
段階Ｂ：２−フルオロ−３−メチル−４−（オキシラン−２−イルベンゾニトリル：４−エテニル−２−フルオロ−３−メチルベンゾニトリル（４．６０ｇ、２８．５ｍｍｏｌ）およびｍＣＰＢＡ（８５％、１２．３ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３００ｍＬ）中混合物を室温で１２０時間撹拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、次に飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＳＯ３（５０ｍＬ）、５％ＮａＯＨ（５０ｍＬで２回）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝２０：１）によって精製して標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．３６−７．３９（ｍ、１Ｈ）、７．０４−７．０６（ｍ、１Ｈ）、３．９２−３．９４（ｍ、１Ｈ）、３．１５−３．１７（ｍ、１Ｈ）、２．５７−２．５９（ｍ、１Ｈ）、２．３０（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、３Ｈ）。
中間体３３
Figure 2014521751
 ２−フルオロ−３−メトキシ−４−（オキシラン−２−イルベンゾニトリル
段階Ａ：２−フルオロ−６−ニトロフェノール：２−フルオロフェノール（６４．６ｇ、０．５８ｍｏｌ）のＤＣＭ（１リットル）中溶液に、濃ＨＮＯ３（９５％、４４ｇ、０．６２ｍｏｌ）を０から５℃で滴下した。混合物を０℃で１時間撹拌してから、濾過した。濾液を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＰＥ＝１：２）によって精製して、２−フルオロ−６−ニトロフェノールを得た。
段階Ｂ：１−フルオロ−２−メトキシ−３−ニトロベンゼン：２−フルオロ−６−ニトロフェノール（２５．０ｇ、１５９ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４４．０ｇ、３１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）中懸濁液に、ＭｅＩ（２７．１ｇ、１９１ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を２５℃で終夜撹拌し、次に昇温させて６０℃とし、３時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ １リットルで希釈し、水（１００ｍＬで３回）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して標題化合物を得た。
段階Ｃ：３−フルオロ−２−メトキシアニリン：１−フルオロ−２−メトキシ−３−ニトロベンゼン（２５．０ｇ、１４６ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％，７．５ｇ）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中混合物を室温で約０．３８ＭＰａ（５５ｐｓｉ）のＨ２下に４時間撹拌してから、濾過した。濾液を濃縮して、標題化合物を得た。
段階Ｄ：１−ブロモ−３−フルオロ−２−メトキシベンゼン：−５から０℃で３−フルオロ−２−メトキシアニリン（２０．０ｇ、１５８ｍｍｏｌ）の臭化水素酸（４７％）（２００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）中混合物にＮａＮＯ２（１２．０ｇ、１７３ｍｍｏｌ、水４０ｍＬ中）溶液を滴下し、１時間撹拌した。この溶液を、ＣｕＢｒ（４５．２ｇ、３１５ｍｍｏｌ）の臭化水素酸（４７％）（５０ｍＬ）懸濁液に０℃でゆっくり加えた。得られた混合物を０℃で１時間撹拌し、次に昇温させて５０℃とし、１時間撹拌した。反応混合物を氷水に投入し、エーテルで抽出した（５００ｍＬで２回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、１−ブロモ−３−フルオロ−２−メトキシベンゼンを得た。
段階Ｅ：４−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸：ＮＨ（ｉ−Ｐｒ）２（４．５０ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７０ｍＬ）中溶液に−７０℃でｎ−ＢｕＬｉ（１７．０ｍＬ、４２．５ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を０℃で１５分間撹拌し、再度冷却して−７０℃とした。１−ブロモ−３−フルオロ−２−メトキシベンゼンの溶液（８．３０ｇ、４０．５ｍｍｏｌ、ＴＨＦ ３０ｍＬ中溶液）を滴下した。得られた混合物を−７０℃で１時間撹拌し、新鮮なドライアイスに投入し、終夜撹拌した。混合物をエーテル１リットルで希釈し、水で２回洗浄した。合わせた水層をエーテルで洗浄し、次に塩酸でｐＨ＝２の酸性とし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、４−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸を得た。
段階Ｆ：４−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシベンゾニトリル：４−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸（８．３０ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ ０．５ｍＬ含有ＤＣＭ（１００ｍＬ）中懸濁液に、オキサリルクロライド（２０ｍＬ）を０℃で滴下した。混合物を２５℃で２時間撹拌し、得られた透明溶液を減圧下に濃縮乾固させた。脱水アセトニトリル６０ｍＬに溶かした残留物を０℃でＮＨ３・Ｈ２Ｏ水溶液６００ｍＬに加え、２時間撹拌し、次にＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ層を水およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物（６．９ｇ）をＤＭＦ ６０ｍＬに溶かし、氷／水浴で冷却して０℃とした。シアヌルクロライド（７．７０ｇ、４１．７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌してから、氷／水に投入した。固体を濾過によって回収し、水で洗浄し、ＤＣＭに溶かし、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、４−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシベンゾニトリルを得た。
段階Ｇ：２−フルオロ−３−メトキシ−４−ビニルベンゾニトリル：４−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシベンゾニトリル（６．０ｇ、２６ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（４．２０ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．８ｇ）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）およびＴＥＡ（６０ｍＬ）中混合物を、Ａｒ下に４時間還流した。得られた混合物を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１）によって精製して、２−フルオロ−３−メトキシ−４−ビニルベンゾニトリルを得た。
段階Ｈ：２−フルオロ−３−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリル：２−フルオロ−３−メトキシ−４−ビニルベンゾニトリル（３．４ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１６０ｍＬ）中溶液に０℃でｍＣＰＢＡ（８５％、９．９ｇ、４８．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６０時間撹拌してから、ＤＣＭ ３００ｍＬで希釈し、冷却して０℃とした。次に、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、Ｎａ２ＳＯ３水溶液（５０ｍＬで２回）、５％ＮａＯＨ（５０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。有機層を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）によって精製して、２−フルオロ−３−メトキシ−４−（オキシラン−２−イル）ベンゾニトリルを得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２４（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４−４．１８（ｍ、１Ｈ）、４．０３（ｓ、３Ｈ）、３．１７−３．１９（ｍ、１Ｈ）、２．６３−２．６６（ｍ、１Ｈ）；ＭＳｍ／ｚ１９４（Ｍ＋１）＋。
中間体３４
Figure 2014521751
 ４−シクロプロピル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン
段階Ａ：５−ブロモ−４−ヨード−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモ−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（５０ｇ、０．２３５ｍｏｌ）のトリフルオロメタンスルホン酸（４００ｍＬ）中溶液を冷却し（０℃）、それにＮ−ヨードコハク酸イミド（５５．５ｇ、０．２４７ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌し、次に氷水（２リットル）にゆっくり投入し、濾過し、濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、脱水し、濃縮して、５−ブロモ−４−ヨード−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。
段階Ｂ：５−ブロモ−４−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモ−４−ヨード−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（１ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（４７４ｍｇ、３．５４ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２００ｍｇ）のＴＥＡ（２０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中混合物を、Ｎ２下に２時間加熱還流した。ほとんどの溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶かした。溶液を０．１Ｎ ＨＣｌ、重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得た。
段階Ｃ：５−ブロモ−４−シクロプロピル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモ−４−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（２．２ｇ、９．２１ｍｏｌ）およびＰｄ（ＯＡｃ）２（１００ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中混合物を冷却し（０℃）、それにＣＨ２Ｎ２のエーテル中溶液（１００ｍＬ）をゆっくり加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸で反応停止し、濾過し、濾液を水およびブラインで洗浄し、脱水し、濃縮して標題化合物を得た。
段階Ｄ：４−シクロプロピル−５−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモ−４−シクロプロピル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（７６０ｍｇ、３．０Ｏ４ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（８０５ｍｇ、６．００８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１００ｍｇ）のＴＥＡ（２０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中混合物をＮ２下に８時間加熱還流した。ＴＬＣで反応完結が示された時点で、ほとんどの溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶かした。溶液を０．１Ｎ ＨＣｌ、重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。得られた油状物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−シクロプロピル−５−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。
段階Ｅ：４−シクロプロピル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：４−シクロプロピル−５−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（４４０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、ＤＣＭ ５０ｍＬ中のｍＣＰＢＡ（１．１４ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり加えた。昇温させて室温とした後、混合物を１２時間撹拌した。ヨウ化カリウム（ＫＩ）指示紙が変色しなくなるまで、混合物をＮａ２ＳＯ３水溶液で洗浄した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、濃縮した。残留物を、分取ＴＬＣを介して精製して、標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７７（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．３９（ｓ、２Ｈ）、４．４３−４．４５（ｍ、１Ｈ）、３．２６−３．２８（ｍ、１Ｈ）、２．６８−２．７０（ｍ、１Ｈ）、１．９４−２．０１（ｍ、１Ｈ）、１．０８−１．１２（ｍ、２Ｈ）、０．６５−０．７５（ｍ、２Ｈ）。
中間体３５
Figure 2014521751
 ４−エチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン
段階Ａ：５−ブロモ−４−エチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモ−４−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（２．０ｇ、８．３７ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（４００ｍｇ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中混合物を室温でＨ２（１気圧）下に終夜撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。取得物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、５−ブロモ−４−エチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。
段階Ｂ：４−エチル−５−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：５−ブロモ−４−エチル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（１．８１ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）、ビニルトリフルオロホウ酸カリウム（１．２１ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２００ｍｇ）のＴＥＡ（２０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中混合物をＮ２下に終夜加熱還流し、濃縮した。取得物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−エチル−５−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オンを得た。
段階Ｃ：４−エチル−５−オキシラン−２−イル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン：４−エチル−５−ビニル−２−ベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（１．１ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、ＤＣＭ ５０ｍＬ中のｍＣＰＢＡ（３．６０ｇ、純度８５％、１７．６ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり加えた。昇温させて室温とし、混合物を３日間撹拌した。ＫＩ紙が変色しなくなるまで、混合物をＮａ２ＳＯ３水溶液で洗浄した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．７５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｓ、２Ｈ）、４．１１−４．１３（ｍ、１Ｈ）、３．２３−３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．７５−２．８２（ｍ、２Ｈ）、２．７０−２．７２（ｍ、１Ｈ）、１．２７（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）。
（３Ｓ，９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルについて記載の方法と同様にして、指定のエポキシド（上記に記載の方法に従って製造）および（Ｓ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジンまたは（Ｒ）−４−Ｎ−ＢＯＣ−２−ヒドロキシメチルピペラジンから、下記の表１に記載のＢｏｃ−ピペラジン中間体を製造した。
表１
Figure 2014521751
 ＯＤカラムでの１０％ＩＰＡ／ＣＯ ２ を用いる分取ＳＦＣ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［（Ｍ＋１）−ｔ−Ｂｕ］ ＋ ＝３２０．０４。
Figure 2014521751
 トランスおよびシス異性体をＯＤカラムでの１５％（２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ）／ＣＯ２を用いる分取ＳＦＣによって分離した。トランス異性体が最初に溶出；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２９−７．１６（ｍ、２Ｈ）、４．８３（ｄｄ、Ｊ＝１０．１、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２−３．８２（ｍ、６Ｈ）、３．３３（ｔ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．９０−２．８０（ｍ、２Ｈ）、２．６０（ｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．４０（ｂｒｓ、１Ｈ）、２．１６−２．０４（ｍ、２Ｈ）、１．９０（ｔ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ、１Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）。
Figure 2014521751
 トランスおよびシスを、ＯＪカラム、２１×２５０ｍｍ、１５％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２、６０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ中４０ｍｇ／ｍＬ、３５Ｃ、２２０ｎｍによってキラル分割した。ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４１５。
Figure 2014521751
 トランスおよびシスをＡＤカラム、２１×２５０ｍｍ、および３０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２、５０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ中８０ｍｇ／ｍＬ、３５Ｃ、２２０ｎｍによって分割した。ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝４０３。
中間体４０Ａ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル２，２，２−トリフルオロ酢酸塩：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．８８ｇ、５．０１ｍｍｏｌ）を室温で１時間にわたりＴＦＡ １０ｍＬで処理した。次に、ＴＦＡを減圧下に除去して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２７６：１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δｐｐｍ７．９５４（ｄｄ、Ｊ＝８．７、６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１２（ｔ、Ｊ＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）、４．９３９（ｄｄ、Ｊ＝８．４、２．７５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８４８（ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．７６２（ｂ、１Ｈ）、３．１８９−３．５３６（ｍ、８Ｈ）、３．０７２（ｄ、Ｊ＝１２Ｈｚ、１Ｈ）、２．４８５（ｓ、３Ｈ）。
中間体４０Ｂ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル２，２，２−トリフルオロ酢酸塩：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．７３ｇ、４．６１ｍｍｏｌ）を、室温で１時間にわたりＴＦＡ １０ｍＬで処理した。次に、トリフルオロ酢酸を減圧下に除去して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２７６：１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δｐｐｍ７．７２４（ｄｄ、Ｊ＝９．０、６．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５３（ｔ、Ｊ＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）、４．７３８（ｄ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２４（ｄ、Ｊ＝１１．１０Ｈｚ、１Ｈ）、３．３８６（ｔ、Ｊ＝１１．６５Ｈｚ、１Ｈ）、３．２８５（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２０（ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．０１（ｂ、１Ｈ）、２．９３４（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．８８４（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、２．６４２（ｂ、１Ｈ）、２．４７６（ｓ、３Ｈ）、２．４７（ｂ、１Ｈ）、２．３２９−２．３６７（ｍ、１Ｈ）、２．０５４−２．０８９（ｍ、１Ｈ）。
中間体４０Ｃ−１（方法１）
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ｉ−１７Ｃ）（３．００ｇ、７．９９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１０ｍＬ）に溶かし、１時間撹拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下に除去し、ジクロロエタンと共沸させ（３回）、高真空乾燥して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２７６［Ｍ＋１］＋；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δｐｐｍ７．７５５（ｄｄ、Ｊ＝８．７５、６．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８（ｔ、Ｊ＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）、４．８０（ｄ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．９８（ｄｄ、Ｊ＝１１．２５、２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．４５６（ｔ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．３５４（ｄ、Ｊ＝１２．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７３（ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．９８４−３．０８９（ｍ、３Ｈ）、２．７１５（ｔ、Ｊ＝１１．３７Ｈｚ、１Ｈ）、２．６３９（ｔ、Ｊ＝１０Ｈｚ、１Ｈ）、２．５０（ｓ、３Ｈ）、２．４６（ｂ、１Ｈ）、２．３３７（ｔ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ、１Ｈ）。
中間体４０Ｃ−２（方法２）
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル塩酸塩：（３Ｓ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（Ｉ−１７Ｃ）（１５８．８ｇ、４２３．０ｍｍｏｌ）を２−プロパノール３１８ｍＬで懸濁させた。得られたスラリーをＨＣｌ溶液／２−プロパノール（５．５Ｍ、１０００ｍＬ、５４９９ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を加熱して５０℃として２時間経過させた。混合物を濃縮して、２−プロパノール約４００ｍＬを除去し、冷却して室温とし、終夜撹拌した。混合物を濾過して固体生成物を回収し、湿ったケーキを２−プロパノール５０ｍＬで洗浄した。フィルターケーキを窒素流下に４０℃で２日間真空乾燥して、標題化合物を得た。
中間体４０Ｄ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−（３Ｒ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル２，２，２−トリフルオロ酢酸塩：（３Ｒ，９ａＲ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０９ｇ、２．９０ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）中で１時間撹拌し、濃縮し、ジクロロエタンと共沸させて（３回）、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２７６［Ｍ＋１］＋；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δｐｐｍ７．９８９（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１６（ｔ、Ｊ＝８．８５Ｈｚ、１Ｈ）、４．９５９（ｄｄ、Ｊ＝７．７５、２．３５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５５（ｄ、Ｊ＝１１．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．７５５（ｂ、１Ｈ）、３．２３６−３．５４（ｍ、８Ｈ）、３．０６６（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．５０（ｓ、３Ｈ）。
中間体４１Ｂ
Figure 2014521751
 ２−メトキシ−４−［（３Ｒ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル塩酸塩：（３Ｒ，９ａＲ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチ（１２０ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）を４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン１０ｍＬに溶かし、室温で８時間撹拌した。混合物を濃縮して最初の体積の１／４とし、ジエチルエーテル１０ｍＬで希釈した。沈殿を濾過し、高真空下に乾燥させて、標題化合物を得た。ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、Ｚ（シス）異性体、５００ＭＨｚ）δ７．７７（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２（ｓ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９５（ｂｓ、１Ｈ）、４．０８（ｂｓ、２Ｈ）、３．９６（ｓ、３Ｈ）、３．８５−３．６０（ｂｓ、３Ｈ）、３．５８−３．３４（ｍ、６Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［Ｍ＋１］＋＝２７４。
中間体４１Ｄ
Figure 2014521751
 ２−メトキシ−４−［（３Ｓ、９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル塩酸塩：（３Ｓ，９ａＳ）−３−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）ヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−８（１Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３８．０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）を４ＭＨＣｌ／ジオキサン１０ｍＬに溶かし、室温で８時間撹拌した。混合物を濃縮して最初の体積の１／４とし、ジエチルエーテル５ｍＬで希釈した。沈殿を濾過し、高真空下に乾燥させて、標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、Ｚ（シス）異性体、５００ＭＨｚ）δ７．７７（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２（ｓ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．９５（ｂｓ、１Ｈ）、４．０８（ｂｓ、２Ｈ）、３．９６（ｓ、３Ｈ）、３．８５−３．６０（ｂｓ、３Ｈ）、３．５８−３．３４（ｍ、６Ｈ）；ＬＣＭＳ：（ＩＥ、ｍ／ｚ）［Ｍ＋１］＋＝２７４。
中間体４０Ａ：６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル２，２，２−トリフルオロ酢酸塩、および４１Ｄ：相当するＢｏｃ−ピペラジン前駆体に存在するＢｏｃ保護基を外すのにＨＣｌまたはＴＦＡを用い、２−メトキシ−４−［（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル塩酸塩の合成について記載の方法と同様の方法で、下記の表２に示した中間体を製造した（反応で使用される酸および質量分析データは、表２中の各構造の下に提供されている）。得られた中間体がＴＦＡまたはＨＣｌ塩である可能性があり、または有機溶媒および飽和重炭酸ナトリウム溶液などの塩基性水溶液とで生成物の通常の分配を行い、得られた有機溶液を濃縮することで、それらが遊離塩基アミンとして得られる場合があることは明らかである。
表２
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Ｉ−５０Ｄ：１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ：７．８４−７．８６（ｍ、１Ｈ）、７．７７−７．８１（ｍ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、５．０２−５．０７（ｍ、１Ｈ）、４．２０−４．２３（ｍ、１Ｈ）、３．８９−３．９３（ｍ、１Ｈ）、３．５５−３．６３（ｍ、６Ｈ）、３．３３−３．３４（ｍ、１Ｈ）、３．１９−３．２４（ｍ、１Ｈ）、３．０１−３．１２（ｍ、１Ｈ）。
中間体６１
Figure 2014521751
 ６−メトキシ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル：マイクロ波バイアルに６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリルトリフルオロ酢酸塩（１１０ｍｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３０ｍｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）およびメタノール（２ｍＬ）を入れた。マイクロ波装置において混合物を加熱して１５０℃として２時間経過させ、冷却して環境温度とし、濾過し、濃縮して標題化合物を得て、それをそれ以上精製せずに用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２８８［Ｍ＋１］＋。
中間体６２
Figure 2014521751
 ２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸
段階Ａ：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−オール：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン（５．０ｇ、４２ｍｍｏｌ）およびＭｇＳＯ４（１０ｇ、８４ｍｍｏｌ）のアセトン（２５０ｍＬ）中溶液に６０℃でＫＭｎＯ４（１３ｇ、８４ｍｍｏｌ）の水溶液（水５００ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で３０分間撹拌した。ＩＰＡをゆっくり加えて、過剰のＫＭｎＯ４を失活させた。反応液をセライト層で濾過した。濾液を減圧下に濃縮し、高真空ポンプで引いて、水を完全に除去した。残留物をエタノール（２００ｍＬ）に溶かし、氷浴で冷却した。この溶液にＮａＢＨ４（３．２ｇ、８４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。ＴＬＣで還元が完了していることが示された時点で、水を加えて過剰のＮａＢＨ４を失活させた。エタノールをロータリーエバポレータで除去した。粗取得物をＥｔＯＡｃに溶かし、ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、ＭＰＬＣ（ＭｅＯＨ−ＤＣＭ：０％から７％）によって精製した。標題化合物を回収した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）１３６［Ｍ＋１］＋。
段階Ｂ：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［６］ピリジン−５−オール（２．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３（３０ｍＬ）中溶液に、塩化チオニル（４．４ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり滴下した。滴下を行った時点で、混合物を０℃でさらに３時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をさらに１５分間高真空ポンプ処理した。粗取得物をＣＨＣｌ３（３００ｍＬ）に溶かし、ｐＨ＝７緩衝液（２００ｍＬ）で洗浄した。緩衝液をＩＰＡ−ＣＨＣｌ３（１：３、１００ｍＬ）で１回抽出した。有機抽出液を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。そのフラスコにテトラブチルアンモニウムシアニド（６．４ｇ、２４ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（４０ｍＬ）を加えた。混合物を加熱して５０℃として１６時間経過ささせた。ロータリーエバポレータでアセトニトリルを除去した後、残留物を水に溶かし、ＩＰＡ−ＣＨＣｌ３で３回抽出した（１：３、各１００ｍＬ）。その抽出液を合わせ、ＭＰＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ）によって精製した。溶媒除去後に標題化合物を回収した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：１５４［Ｍ＋１］＋。
段階Ｃ：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル１−オキサイド：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル（２．６ｇ、１８ｍｍｏｌ）および撹拌バーを入れたフラスコに、濃ＨＣｌ１（５ｍＬ）を加えた。混合物を加熱して７０℃として１５分経過させた。揮発分を減圧下に除去し、残留物を１５分間高真空下にポンプ引きした。フラスコに、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびトルエン（４０ｍＬ）を加えた。溶液を冷却して氷浴で０℃とし、次にＴＭＳ−ジアゾメタン（３６ｍＬ、７２ｍｍｏｌ）を加えた。ＬＣで反応完結が示された時、過剰なＴＭＳ−ジアゾメタンをＨＯＡｃで分解し、粗生成物をＭＰＬＣによって精製した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：１７９［Ｍ＋１］＋。得られた付加物をＣＨＣｌ３（５０ｍＬ）に溶かし、冷却して０℃とした。その溶液に、ｍＣＰＢＡ（３．１ｇ、１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３時間撹拌した。チオ硫酸ナトリウム溶液を加えて過剰のｍＣＰＢＡを消費し、粗生成物をＩＰＡ−ＣＨＣｌ３（１：３、１００ｍＬ）で３回抽出した。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、シリカゲルに吸着させ、ＭＰＬＣ（１０％ＮＨ４ＯＨ水溶液含有ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）によって精製した。溶媒除去後に、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル１−オキサイドを回収した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）１９４［Ｍ＋１］＋。
段階Ｄ：２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル：６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル１−オキサイド（７００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）のＣＦ３−トルエン（２０ｍＬ）およびＣＨＣｌ３（２０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（３．８ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を氷浴で冷却して０℃とした。その溶液に、ＬＣ−ＭＳにより全ての原料が消費されるまでｐ−トルエンスルホン酸無水物（３．５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。揮発分を減圧下に除去し、残留物をＴＦＡ（２０ｍＬ）に再度溶かした。溶液を加熱して７０℃として２時間経過させた。その時点で反応を停止した。ロータリーエバポレータでＴＦＡを除去し、残留物を飽和炭酸ナトリウムに取り、ＩＰＡ−ＣＨＣｌ３（１：３、それぞれ５０ｍＬ）で３回抽出した。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、シリカゲルに吸着させ、ＭＰＬＣ（１０％ＮＨ４ＯＨ水溶液含有ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）によって精製した。溶媒除去後、標題化合物を回収した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：１９３［Ｍ＋１］＋。
段階Ｅ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル：２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（５００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）および撹拌バーを入れたフラスコに、アジ化ナトリウム（３４０ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）、オルトギ酸トリエチル（２．２ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｃ（１０ｍＬ）を加えた。混合物を加熱して１００℃として２時間経過させた。溶媒をロータリーエバポレータで除去し、残留物を炭酸ナトリウム水溶液に取り、ＥｔＯＡｃで抽出し（５０ｍＬで３回）、硫酸ナトリウムで脱水し、ＭＰＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ）によって精製した。溶媒除去後、標題化合物を回収した。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２４８［Ｍ＋１］＋。
段階Ｆ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸メチル（４６０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）中溶液に水酸化リチウム（１．０Ｎ水溶液３．８ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した。反応液を水（１０ｍＬ）で希釈した。１Ｎ ＨＣｌでｐＨを注意深く約５に調節した。次に、溶液をＥｔＯＡｃで抽出した（３０ｍＬで３回）。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮して標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＩＥ、ｍ／ｚ）：２３１［Ｍ＋１］＋；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δｐｐｍ９．８７（ｓ、１Ｈ）、８．０９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２０（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．１５（ｍ、１Ｈ）、３．０８（ｍ、１Ｈ）、２．５１（ｍ、２Ｈ）。
中間体６３
Figure 2014521751
 ２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸
段階Ａ：３−オキソシクロペンタンカルボン酸メチル：３−オキソシクロペンタンカルボン酸（３４２ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）および触媒Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ−１５（３０ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）を封管中で合わせ、加熱して１００℃として終夜経過させた。反応液を濾過し、メタノールで十分に洗浄した。濾液を減圧下に濃縮して、標題化合物を得た。
段階Ｂ：２−［（ジメチルアミノ）メチリデン］−３−オキソシクロペンタンカルボン酸メチルおよび３−［（ジメチルアミノメチリデン］−４−オキソシクロペンタンカルボン酸メチル：３−オキソシクロペンタンカルボン酸メチル（３６４ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）および１−ｔｅｒｔ−ブトキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルメタンジアミン（４４７ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を合わせ、１１０℃で１．５時間加熱した。反応液をＩｓｃｏ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（１２ｇシリカゲル、３０ｍＬ／分、２５４ｎＭ、０％から１００％（１０％メタノール／ジクロロメタン）／ジクロロメタンによって精製した。標題化合物は２種類の位置異性体の混合物として５３％（１０％メタノール／ジクロロメタン）／ジクロロメタンで溶出した。混合物をＩＡカラム（３０×２５０ｍｍ）、７０ｍＬ／分、３５℃、２２０ｎＭ、メタノール中１４０ｍｇ／ｍＬでの４０％メタノール／二酸化炭素を用いる分取ＳＦＣによって分離して、標題化合物を得た。
段階Ｃ：２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸メチル：３−［（ジメチルアミノ）メチリデン］−４−オキソシクロペンタンカルボン酸メチル（７１．７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の脱水メタノール（２．５ｍＬ）中溶液にグアニジン塩酸塩（１２４．７ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）と次にナトリウムメトキシド／メタノール（０．２４ｍＬ、１．２７ｍｍｏｌ）を加えた。封管中、混合物を加熱して９０℃として終夜経過させた。粗反応液を２Ｎ ＨＣｌで反応停止し、減圧下に濃縮した。得られた水系残留物をＨＰＬＣ（３０×１００ｍｍ Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅカラム；５ミクロン；３５ｍＬ／分；２１０ｎＭ；１５分かけて０％から４０％ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ／水＋０．０５％ＴＦＡによって精製した。化合物は１０％ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ／水＋０．０５％ＴＦＡで溶出して、凍結乾燥後に標題化合物を得た。
段階Ｄ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸メチル：２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸メチル（６５．２ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５ｍＬ）中混合物に、トリメチルシリルトリフルオロ酢酸塩（０．１０７ｍＬ、０．６１９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で撹拌し、次にオルトギ酸トリエチル（０．１０３ｍＬ、０．６１９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をさらに５分間撹拌し、次にアジドトリメチルシラン（０．０８１ｍＬ、０．６１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮し、残留物をジクロロメタンで２回磨砕した。得られた固体を遠心によって回収し、真空乾燥して標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝２３３。
段階Ｅ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸の合成の段階Ｆに記載の方法と同様の方法で、２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−６−カルボン酸メチルから標題化合物を製造した。
中間体６４
Figure 2014521751
 ２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸
段階Ａ：５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル：キノリン−５−カルボン酸メチル（３．６７ｇ、１９．６１ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（６０ｍＬ）に溶かし、酸化白金（０．４９ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜水素化した。触媒を濾過し、濾液を留去して乾固させた。残留物について、１２０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーを行い、５％（１０％ＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ）／ＤＣＭで溶離して、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチルを得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝１９２。
段階Ｂ：５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル−１−オキサイド：５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボキシレート（２．０５ｇ、１０．７２ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１００ｍＬ）に溶かし、ｍ−クロロ過安息香酸（２．７７ｇ、１６．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１．５時間撹拌した。反応液をＮａＨＣＯ３で２回、ブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。残留物について、１２０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでクロマトグラフィー精製し、１００％酢酸エチルから１０％ＭｅＯＨ／９０％ＥｔＯＡｃの勾配溶媒系で溶離して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２０８。
段階Ｃ：２−アミノ−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル：５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル−１−オキサイド（２．０５ｇ、９．８９ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルアミン（５．２２ｍＬ、４９．５ｍｍｏｌ）をベンゾトリフルオリド（５０ｍＬ）に溶かし、氷浴で冷却した。反応液の内部温度を５℃以下に維持しながら、ｐ−トルエンスルホン酸無水物（６．４６ｇ、１９．７９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応をモニタリングし、１０分後、ＬＣ−ＭＳで１．２０にＭ＋１＝２６３および２０７（Ｍ−５６）が示され、中間体２−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチルの生成が示された。次に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を反応混合物に加え、７０℃で５時間加熱した。反応液を冷却し、溶媒留去して乾固させた。残留物を水に取り、５Ｎ ＮａＯＨでｐＨを約８に調節した。反応液をＤＣＭで２回抽出した。合わせたＤＣＭ層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。残留物について、８０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーを行い、５％（１０％ＮＨ４ＯＨ／ＭｅＯＨ）／ＤＣＭの溶媒系で溶離して、標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：Ｍ＋１＝２０７。
段階Ｄ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル：２−アミノ−５、６、７、８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル（８５０ｍｇ、４．１２ｍｍｏｌ）を酢酸（１５ｍＬ）中で撹拌し、オルトギ酸トリエチル（１．３７３ｍＬ、８．２４ｍｍｏｌ）と次にアジ化ナトリウム（４８２ｍｇ、７．４２ｍｍｏｌ）を加え、次に加熱して８０℃として３時間経過させた。反応液を冷却し、溶媒留去して乾固させた。混合物をＤＣＭに取り、飽和ＮａＨＣＯ３溶液と次にブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させた。残留物について、４０ｇ ＩＳＣＯ Ｒｅｄｉ−ｓｅｐカラムでのクロマトグラフィーを行い、酢酸エチル：ヘキサン（２：３）で溶離して、２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチルを得た。
段階Ｅ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−カルボン酸メチル（１．０４ｇ、４．０１ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム（０．２０２ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）／水（１０．００ｍＬ）混合液中で７５分間撹拌した。ＴＬＣで、ほぼ２０％の原料が示されたことから、追加のＬｉＯＨ（５０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を加え、さらに１時間撹拌した。反応液を２Ｎ ＨＣｌ（３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）でｐＨ４から５に調節し、次に酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒留去して乾固させて標題化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）−２８＝２１８。
中間体６５
Figure 2014521751
 ３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸
段階Ａ：Ｎ−（５−ブロモ−４−メチルピリジン−２−イル）−２，２−ジメチルプロパンアミド：５−ブロモ−４−メチルピリジン−２−アミン（２０．６ｇ、１１０ｍｍｏｌ）のピリジン（８０ｍＬ）中溶液に、トリメチルアセチルクロライド（１９．９ｇ、１６５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した（３回）。有機層を水（２回）およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、次にクロマトグラフィーによって精製した。２％から２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いた溶離で、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝２７０．９。
段階Ｂ：Ｎ−［５−ブロモ−４−（２−ヒドロキシエチル）ピリジン−２−イル］−２，２−ジメチルプロパンアミド：Ｎ−（５−ブロモ−４−メチルピリジン−２−イル）−２，２−ジメチルプロパンアミド（３０．０ｇ、１１１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液を氷浴で冷却し、リチウムジイソプロピルアミンのヘプタン／ＴＨＦ／エチルベンゼン中溶液（２．０Ｍ、１３８ｍＬ）を滴下した。１時間撹拌後、溶液をパラホルムアルデヒド（２４．９ｇ、２７７ｍｍｏｌ）で処理し、徐々に昇温させて室温としながら１２時間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。ＭＰＬＣ（溶離液６％から５０％酢酸エチル／ヘキサン）による精製によって、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝３００．８７。
段階Ｃ：｛６−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ］−４−（２−ヒドロキシエチル）ピリジン−３−イル｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル：２５０ｍＬ丸底フラスコにＮ−［５−ブロモ−４−（２−ヒドロキシエチル）ピリジン−２−イル］−２，２−ジメチルプロパンアミド（１．９ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１７３ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）および２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−２′，４′，６′−トリイソプロピルビフェニル（０．１８０ｇ、０．３７９）を入れ、混合物に窒素を３０分間吹き込んだ。テトラヒドロフランを加え、次に２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル亜鉛クロライドのジエチルエーテル中溶液（０．５Ｍ、４７．９ｍＬ）を加え、混合物を４５℃に維持された油浴に入れた。１２時間後、反応液にトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．１７３ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ）および２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−２′，４′，６′−トリイソプロピルビフェニル（０．１８０ｇ、０．３７９）を再投入し、追加量の２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル亜鉛クロライド／ジエチルエーテル（０．５Ｍ、１２．６ｍＬ）を加えた。４５℃浴でさらに２時間撹拌後、反応混合物を酢酸エチルおよび１０％水酸化アンモニウム溶液で希釈し、濾過して固体を除去し、層を分離した。有機層を水およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。ＭＰＬＣ（溶離液９％から９０％酢酸エチル／ヘキサン）による精製によって｛６−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ］−４−（２−ヒドロキシエチル）ピリジン−３−イル｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝３３７．０。
段階Ｄ：｛４−（２−ブロモエチル）−６−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ］ピリジン−３−イル｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル：｛６−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ］−４−（２−ヒドロキシエチル）ピリジン−３−イル｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．３０ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）とイミダゾール（０．５５８ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）中混合物をトリフェニルホスフィン（１．７９ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（２．７２ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、水で希釈し、層を分離した。有機層を５％塩酸、飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインの順で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物を短いシリカ層で濾過して（２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサン溶離液）、標題化合物を得て、それを次の段階で直接用いた。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝３９８．９。
段階Ｅ：３−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：ドライアイス−アセトン浴で冷却した｛４−（２−ブロモエチル）−６−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ］ピリジン−３−イル｝酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．５ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中溶液に、リチウムジイソプロピルアミドのテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中溶液（ジイソプロピルアミン（３．７９ｇ、３４．７ｍｍｏｌ）およびｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、１３．７ｍＬ）から調製）を、１時間かけて滴下漏斗を用いて滴下した。滴下完了後、反応液をさらに１時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で反応停止し、昇温させて室温とした。得られた混合物を酢酸エチルおよび水で希釈し、分液漏斗に移し入れた。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した（２回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。得られた残留物の精製（２％から２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶離液）によって標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝３１９．０。
段階Ｆ：３−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸：３−［（２，２−ジメチルプロパノイル）アミノ］−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボキシレート（０．６２４ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）の６Ｎ塩酸（２５ｍＬ）中溶液を２４時間加熱還流した。溶液を冷却し、濃縮して標題化合物を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝１７９．０。
段階Ｇ：３−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸メチル：段階Ｆからの３−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸のメタノール（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でトリメチルシリルジアゾメタンのジエチルエーテル中溶液（２．０Ｍ、１．９６ｍＬ）を滴下した、添加完了後、反応液を昇温させて室温とし、３０分間撹拌し、濃縮した。得られた残留物を高真空下に乾燥させて、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝１９３．０。
段階Ｈ：３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸メチル：３−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸メチル（３６５ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）、オルトギ酸トリエチル（４５１ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（１８５ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ）の酢酸（８ｍＬ）中混合物を、８０℃で加熱した油浴に３時間維持した。冷却して室温とした後、混合物を水および酢酸エチルで希釈し、層を分離した。水相を酢酸エチルで抽出し（２回）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。得られた残留物の精製（８％から８０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶離液）によって、標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋１）＋＝１９３．０。
段階Ｉ：３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸：３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボキシレート（２３５ｍｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）および水（１．５ｍＬ）中溶液を室温で、水酸化リチウム溶液（１Ｍ、１．４４ｍＬ）で処理した。３０分後、溶液を濃縮してテトラヒドロフランを除去し、残った水溶液を１Ｎ塩酸溶液で酸性とし（ｐＨ約４とした）、酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）、δ９．８９（ｓ、１Ｈ）、８．５８（ｓ、１Ｈ）、８．０１（ｓ、１Ｈ）、４．２５（ｄｄ、Ｊ＝５．０、５．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．２７−３．０５（ｍ、２Ｈ）、２．４７−２．５７（ｍ、２Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋１）＋＝２３２．２。
中間体６６
Figure 2014521751
 ３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸リチウム
段階Ａ：メタンスルホン酸ブト−３−イン−１−イル：ブト−３−イン−１−オール（４５．０ｇ、０．６４ｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロライド（８１．０ｇ、０．７１ｍｏｌ）のＤＣＭ（６００ｍＬ）中溶液に、ＴＥＡ（７８．０ｇ、０．７７ｍｏｌ）を０℃で滴下した。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮して乾固させた。残留物をＥｔＯＡｃ １リットルに溶かし、１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬで２回）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、メタンスルホン酸ブト−３−イン−１−イルを得た。
段階Ｂ：４−ヨードブト−１−イン：メタンスルホン酸ブト−３−イン−１−イル（９０．０ｇ、０．６０８ｍｏｌ）およびＮａＩ（１３７ｇ、０．９１２ｍｏｌ）のアセトン（４５０ｍＬ）中懸濁液をＮ２下に４時間還流し、冷却した。この反応混合物に、エーテル４５０ｍＬを加え、濾過した。固体を追加のエーテル３００ｍＬで洗浄し、濾液を蒸留した。７０℃／２０ｍｍＨｇの留分を回収した。
段階Ｃ：ｔｅｒｔ−ブチルエチルブト−３−イン−１−イルプロパンジオエート：ＮａＨ（６０％、８．５０ｇ、２１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）中懸濁液に、２５℃でマロン酸ｔｅｒｔ−ブチルエチル（３６．３ｇ、１９３ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を１時間撹拌し、４−ヨードブト−１−イン（３８．２ｇ、２１２．２ｇ）を滴下した。得られた懸濁液を終夜撹拌し、エーテル１リットルで希釈し、水（２００ｍＬで３回）、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルエチルブト−３−イン−１−イルプロパンジオエートを得て、それを、次の段階で直接用いた。
段階Ｄ：ｔｅｒｔ−ブチルエチルブト−３−イン−１−イル（５−ニトロピリミジン−２−イル）プロパンジオエート：ＮａＨ（６０％、２．５ｇ、６２．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチルエチルブト−３−イン−１−イルプロパンジオエート（１５ｇ、６２．４ｍｍｏｌ）を２５℃で滴下した。混合物を４０℃で３０分間撹拌し、ＤＭＦ ５０ｍＬ中の２−クロロ−５−ニトロピリミジン（１０．０ｇ、６２．４ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた懸濁液を５０℃で２時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ ５００ｍＬで希釈した。混合物を水（１００ｍＬで３回）、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して、標題化合物を得た。ＭＳｍ／ｚ３６４（Ｍ＋１）＋。
段階Ｅ：３−ニトロ−５，６−ジヒドロ−７Ｈ−シクロペンタ６１ピリジン−７，７−ジカルボン酸７−ｔｅｒｔ−ブチル７−エチル：ｔｅｒｔ−ブチルエチルブト−３−イン−１−イル（５−ニトロピリミジン−２−イル）プロパンジオエート（１０．２ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）のニトロベンゼン（１００ｍＬ）中溶液を加熱して１５０℃として４時間経過させた。ニトロベンゼンを減圧下に除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）によって精製して標題化合物を得た。ＭＳｍ／ｚ３３７（Ｍ＋１）＋。
段階Ｆ：３−ニトロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸エチル：３−ニトロ−５，６−ジヒドロ−７Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７，７−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチル７−エチル（６．２ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（３０ｍＬ）およびＤＣＭ（３０ｍＬ）中混合物を３５℃で３時間撹拌し、濃縮して乾固させた。残留物をＥｔＯＡｃ２００ｍＬに溶かし、飽和ＮａＨＣＯ３（２５ｍＬで２回）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して標題化合物を得た。
段階Ｇ：３−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸エチル：３−ニトロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸エチル（４．２ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（０．５ｇ、１０％）のエタノール（８０ｍＬ）中混合物を室温で約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ）の水素下に２時間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮して標題化合物を得た。
段階Ｈ：３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸エチル：３−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸エチル（３．０ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）およびオルトギ酸トリエチル（６．５ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）の酢酸（５０ｍＬ）中溶液にアジ化ナトリウム（１．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を加熱して１００℃として３時間経過させた。ＴＬＣによって反応は完結した。反応混合物を冷却して室温とした。溶媒を減圧下に除去した。残留物をＥｔＯＡｃに溶かし、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得た。
段階Ｉ：３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸リチウム：３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−カルボン酸エチル（１．５ｇ、５．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（２：２：１）（５０ｍＬ）中混合物に、ＬｉＯＨ−Ｈ２Ｏ（２４２．８ｍｇ、５．８ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。得られた混合物を３０分間撹拌し、水２００ｍＬで希釈し、エーテルで洗浄した（３０ｍＬで３回）。水層を凍結乾燥させて、標題化合物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δｐｐｍ８．６８（ｓ、１Ｈ）、８．０７（ｓ、１Ｈ）、３．９７（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．００−３．１４（ｍ、２Ｈ）、２．５３−２．５９（ｍ、１Ｈ）、２．１７−２．３２（ｍ、１Ｈ）。
中間体６７
Figure 2014521751
 ２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸
段階Ａ：ブタン−１，２，４−トリカルボン酸トリメチル：硫酸（０．６２０ｍＬ、１１．６ｍｍｏｌ）を１，２，４−ブタントリカルボン酸（３０．０ｇ、１５８ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）／１，２−ジクロロエタン（１４０ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を加熱還流して６．５時間経過させ、次に室温で終夜放置した。溶媒を留去した。次に、ベンゼン２００ｍＬを残留物に加え、次に高撹拌しながら、冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液をゆっくり加えた。相を分離した。水相をベンゼンで抽出した（１００ｍＬで１回）。有機抽出液を合わせ、ブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を留去して標題化合物を得た。
段階Ｂ：２−オキソシクロペンタン−１，３−ジカルボン酸ジメチルおよび３−オキソシクロペンタン−１，２−ジカルボン酸ジメチル：水素化ナトリウム（６．１９ｇ、１５５ｍｍｏｌ）をトルエン（９４ｍＬ）に加え、冷却して５℃（反応温度）とした。ブタン−１，２，４−トリカルボン酸トリメチル（２９．９ｇ、１２９ｍｍｏｌ）のトルエン（２６ｍＬ）／メタノール（０．２２ｍＬ）中溶液を１時間４５分かけて滴下し、その間温度を５から１０℃に維持した。得られた混合物を５から１０℃で２時間撹拌した。次に、水４０ｍＬを加えた。層を分離した。有機相を水で抽出した。水系抽出液を合わせ、１．７Ｍクエン酸に加えることで酸性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ、１００ｍＬで２回）。合わせたＥｔＯＡｃ抽出液をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を留去して生成物を得た。粗生成物を、Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（３３０ｇシリカゲル、１００ｍＬ／分、２５４ｎＭ、１２カラム体積分にわたって０％から１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンによって精製した。所望の生成物を５０％ＥｔＯＡｃで溶離して（位置異性体は６５％ＥｔＯＡｃで溶離）、標題化合物を得る。
段階Ｃ：２−アミノ−４−ヒドロキシ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸メチル：密閉可能管に３−オキソシクロペンタン−１，２−ジカルボン酸ジメチル（６．０４ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）を入れる。ジオキサン（８６ｍＬ）を加え、次にグアニジン塩酸塩（３．８３ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を加えた。管を密閉し、１３０℃で１８時間加熱した。溶媒を留去した。メタノール（８６ｍＬ）を残留物に加え、次に塩化チオニル（２．２ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を留去した。残留物を、４分間かけての０％から２０％のＤＣＭ：メタノール勾配で溶離を行うシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得た。この取得物を、それ以上精製せずに次の段階で用いた。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋＝２１０。
段階Ｄ：２−アミノ−４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸メチル
オキシ塩化リン（１６．０ｍＬ、１７２ｍｍｏｌ）を、２−アミノ−４−ヒドロキシ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸メチル（５．８４ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）に加えた。得られた混合物を、マイクロ波装置において封管中１００℃で３時間加熱した。溶媒を留去した。残留物をアセトニトリル６ｍＬに溶かし、氷／水６ｍＬを加えた。得られた混合物を室温で１５分間撹拌し、１０分間かけての０％から１００％アセトニトリルの勾配を用いるＳｕｎＦｉｒｅカラムでの逆相分取ＨＰＬＣ（１１回注入）によって精製して標題化合物を得た。追加の生成物を、混合分画の再精製によって得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＝２２８、２３０。
段階Ｅ：２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸メチル：トリエチルアミン（３．２０ｍＬ、２３．０ｍｍｏｌ）を２−アミノ−４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸メチル（２．１１ｇ、９．２７ｍｍｏｌ）のジオキサン（４２ｍＬ）中溶液に加え、次にギ酸（０．８９ｍＬ、２２．２８ｍｍｏｌ）および［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）（６６０ｍｇ、０．９０２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を封管中１００℃で終夜加熱した。溶媒を留去した。残留物を、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ９５：５を用いるシリカ（２２０ｇ＋１２５ｇカートリッジ）でのクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
段階Ｆ：２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸：水酸化ナトリウム（１３．０ｍＬ、１３．０ｍｍｏｌ）を、２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸メチル（１．１０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）のメタノール（２１ｍＬ）中溶液に加えた。得られた混合物を室温で１．５時間撹拌した。塩酸（１３ｍＬ、１３．００ｍｍｏｌ）を加えた。溶媒を留去した。残留物を、シリカ（２４ｇカートリッジ）で溶離を行うＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ９５：５（１５０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ９０：１０：１でのクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を得た。
段階Ｇ：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸：トリメチルシリルトリフルオロ酢酸塩（１．５ｍＬ、８．７ｍｍｏｌ）を、２−アミノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸（８４５ｍｇ、４．７２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１０ｍＬ）中懸濁液に加えた。溶液が得られたが、５分以内に沈殿が生成した。反応混合物を室温で５分間撹拌し、オルトギ酸トリエチル（１．４ｍＬ、８．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、アジドトリメチルシラン（１．１ｍＬ、８．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を室温で終夜撹拌した。溶媒を留去した。残留物を、ＣＨ２Ｃｌ２（Ａ）およびＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ９０：１０：１（Ｂ）を勾配溶離（１６カラム体積にわたり１００％Ａから１００％Ｂ）で用いるシリカゲル（８０ｇカートリッジ）でのクロマトグラフィーによって精製して粗生成物を得て、それをさらに分取ＨＰＬＣによって精製して、標題化合物を得た。ＮＭＲ ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）１０．００（ｓ、１Ｈ）；８．８８（ｓ、１Ｈ）；４．３２（ｔ、１Ｈ）；３．１１−３．１５（ｍ、２Ｈ）；２．４７−２．６３（ｍ、２Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋２５５、（Ｍ＋１）＋２３３、（Ｍ＋１−Ｎ２）＋２０５。上記の中間体は、「Ｉ−」を前に付けてその番号で呼ばれる場合がある。例えば、中間体４４ＡはＩ−４４Ａと短縮型で表される。アザ−インダンキラル中心での絶対立体化学は、実施例２Ａおよび２Ｂのみについて決定した。
実施例１ＡＢ異性体混合物、１Ａおよび１Ｂ
Figure 2014521751
 （３Ｒ）−３−メチル−６−［（３Ｒ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−カルボン酸［Ｉ−６２］（２００ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を、室温でＨＡＴＵ（３６２ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）で処理した。５分後、（Ｒ）−３−メチル−６−（（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オンジヒドロクロライド［Ｉ−４４Ａ］（３２５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．２３ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加え、反応を室温で終夜撹拌した。水１０ｍＬで反応停止し、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を濃縮した。粗取得物を、ＭＰＬＣ［１０％から６０％（ＥｔＯＡｃ：アセトニトリル−ＩＰＡ：ＭｅＯＨ）／ヘキサンの８０：１０：８：２混合物］を介して精製して、標題化合物をジアステレオマーの混合物得た。ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。２種類のアザ−インダンジアステレオマーのキラル分割を、ＯＤカラムでの４５％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮを用いるキラル分取ＳＦＣによって行った。先に溶出する異性体が、より強力なＲＯＭＫ阻害剤であった。１Ａ：先に溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６：１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：１０．１２（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、１Ｈ）、７．９６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．９１−７．８４（ｍ、２Ｈ）、７．４４（ｍ、１Ｈ）、７．３９（ｍ、１Ｈ）、４．９８（ｍ、１Ｈ）、４．６９（ｍ、２Ｈ）、４．６５（ｍ、１Ｈ）、４．５４（ｍ、１Ｈ）、４．３８、（ｍ、１Ｈ）、４．２５（ｍ、１Ｈ）、３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．４８（ｍ、１Ｈ）、３．０８（ｍ、４Ｈ）、２．９２（ｍ、２Ｈ）、２．５５（ｍ、２Ｈ）、２．２２（ｍ、１Ｈ）、２．１４（ｍ、１Ｈ）、１．４１（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、３Ｈ）。１Ｂ：遅く溶出するアザ−インダンジアステレオマー（タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイで１μＭより大きいＩＣ５０）：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。
実施例１ＣＤ異性体混合物、１Ｃおよび１Ｄ
Figure 2014521751
 （３Ｒ）−３−メチル−６−［（３Ｓ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（Ｒ）−３−メチル−６−（（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オンジヒドロクロライド［Ｉ−４４Ｂ］を原料とした以外は、実施例１Ａおよび１Ｂでの異性体の混合物の合成について上記の方法と同様の方法で、標題化合物（２種類の異性体の混合物として）を製造した。標題化合物の２種類のアザ−インダンジアステレオマーのキラル分割を、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤカラムでの４０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮを用いるキラル分取ＳＦＣによって行った。先に溶出する異性体がより強力なＲＯＭＫ阻害剤であった。１Ｃ：先に溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６：ＩＤ：遅く溶出するアザ−インダンジアステレオマー（タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイで１μＭより大きいＩＣ５０）：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。
実施例１ＥＦ異性体混合物、１Ｅおよび１Ｆ
Figure 2014521751
 （３Ｒ）−３−メチル−６−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ）［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（Ｒ）−３−メチル−６−（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オンジヒドロクロライド［Ｉ−４４Ｇ］を原料とした以外は、実施例１Ａおよび１Ｂでの異性体の混合物の合成について上記の方法と同様の方法で、標題化合物（２種類の異性体の混合物として）を製造した。標題化合物の２種類のアザ−インダンジアステレオマーのキラル分割を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳカラムでの５０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮを用いるキラル分取ＳＦＣによって行った。ＩＥ：先に溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。ＩＦ：遅く溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。
実施例１ＧＨ異性体混合物、１Ｇおよび１Ｈ
Figure 2014521751
 （３Ｓ）−３−メチル−６−［（３Ｒ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イルカルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（Ｓ）−３−メチル−６−（（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オンジヒドロクロライド［Ｉ−４４Ｃ］を原料とした以外は、実施例１Ａおよび１Ｂでの異性体の混合物の合成について上記の方法と同様の方法で、標題化合物（２種類の異性体の混合物として）を製造した。標題化合物の２種類のアザ−インダンジアステレオマーのキラル分割を、ＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤカラムでの７０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮを用いるキラル分取ＳＦＣによって行った。先に溶出する異性体がより強力なＲＯＭ阻害剤であった。１Ｇ：先に溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：９．５４（ｓ、１Ｈ）、８．１０（ｍ、１Ｈ）、７．９４（ｍ、１Ｈ）、７．７８（ｍ、１Ｈ）、７．３７（ｍ、１Ｈ）、７．３１（ｍ、１Ｈ）、４．７６−４．６８（ｍ、２Ｈ）、４．５７（ｄ、Ｊ＝１３．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．４３−４．３７（ｍ、１Ｈ）、４．０８−４．０３（ｍ、２Ｈ）、３．６０−３．５２（ｍ、２Ｈ）、３．２９−３．２３−（ｍ、１Ｈ）、３．１７−３．１１（ｍ、２Ｈ）、３．０５−２．９１（ｍ、４Ｈ）、２．６４−２．５４（ｍ、１Ｈ）、２．５−２．３（ｍ、４Ｈ）、１．５５（ｄ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、３Ｈ。１Ｈ：遅く溶出するアザ−インダンジアステレオマー（タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイで１μＭより大きいＩＣ５０）：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。
実施例１ＩＪ異性体混合物、１Ｉおよび１Ｊ
Figure 2014521751
 （３Ｓ）−３−メチル−６−［（３Ｒ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニルオクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（Ｓ）−３−メチル−６−（（３Ｒ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オンジヒドロクロライド［Ｉ−４４Ｆ］を原料とした以外は、実施例１Ａおよび１Ｂでの異性体の混合物の合成について上記の方法と同様の方法で標題化合物（２種類の異性体の混合物として）を製造した。標題化合物の２種類のアザ−インダンジアステレオマーのキラル分割を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈカラムでの５０％ＭｅＯＨ（０．２％ＤＥＡ）を用いるキラル分取ＳＦＣによって行った。１Ｉ：先に溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。１Ｊ：遅く溶出するアザ−インダンジアステレオマー：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。
実施例１ＫＬ異性体混合物、１Ｋおよび１Ｌ
Figure 2014521751
 （３Ｓ）−３−メチル−６−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニルＩオクタヒドロピラジノ［２、１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン：（Ｓ）−３−メチル−６−（（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）イソクロマン−１−オンジヒドロクロライド［Ｉ−４４Ｅ］を原料とした以外は、実施例１Ａおよび１Ｂでの異性体の混合物の合成について上記の方法と同様の方法で、標題化合物（２種類の異性体の混合物として）を製造した。標題化合物の２種類のアザ−インダンジアステレオマーのキラル分割を、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈカラムでの４０％ＭｅＯＨ（０．２％ＤＥＡ）を用いるキラル分取ＳＦＣによって行った。先に溶出する異性体がより強力なＲＯＭＫ阻害剤であった。１Ｋ：先に溶出するアザ−インダンジアステレオマー：１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ９．５２３（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０６（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９−７．７４（ｍ、２Ｈ）、７．３７−７．２８（ｍ、１Ｈ）、４．７５−４．６５（ｍ、２Ｈ）、４．５４（ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．４３−４．３７（ｍ、１Ｈ）、４．０７−４．０２（ｍ、２Ｈ）、３．９１（ｄ、Ｊ＝１２．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０−３．４９（ｍ、２Ｈ）、３．２５−３．２０（ｍ、１Ｈ）、３．１６−３．０９（ｍ、２Ｈ）、３．００−２．９５（ｍ、５Ｈ）、２．９１（ｄ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．６１−２．２．５９（ｍ、１Ｈ）、２．５１−２．２７（ｍ、３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋＝５１６。１Ｌ：遅く溶出するアザ−インダンジアステレオマー（タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイで１μＭより大きいＩＣ５０）：ＬＣ−ＭＳ：（Ｍ＋１）＋５１６。
実施例２ＡＢ異性体混合物、２Ａおよび２Ｂ（方法１）
Figure 2014521751
 ２Ａ：６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［（５Ｓ）−２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリルおよび２Ｂ：６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［（５Ｒ）−２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル
２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸［Ｉ−６７］（２．５１ｇ、９．７３ｍｍｏｌ）および６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル［Ｉ−４０Ｃ−１］（２．８１ｇ、１０．２１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）中懸濁液に、ＥＤＣ（２．２４ｇ、１１．６８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。ほとんどの溶媒を留去した。残留物をＥｔＯＡｃに溶かし、水、ＮａＨＣＯ３溶液およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒留去して、２種類のジアステレオマーの粗混合物を得た。粗生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２（溶媒Ａ）から５０％ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ９０：１０（溶媒Ｂ）の勾配溶離を用いてシリカ（２２０ｇカートリッジ）で精製して、標題ジアステレオマーの混合物を得て、それをキラル分取ＳＦＣ ＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣカラム、Ｄｉａｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， ＬＴＤ．、３０×２５０ｍｍ、６０％２：１ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２、７０ｍＬ／分、１００バール、ＤＣＭ／ＭｅＣＮ中のサンプル、３５Ｃ、２５４ｎｍでのＳＦＣ）によって分離して、分離されたアザ−インダンジアステレオマーを得た。異性体２Ａが先に溶出し、異性体２Ｂが遅く溶出する。アザ−インダンキラル中心での立体化学割り当てを、遅く溶出する異性体のＸ線結晶分析によって行った。異性体Ａをアセトニトリル１ｍＬに溶かし、１当量の１Ｍ ＨＣｌ／エーテルを加え、固体を濾過して塩酸塩を得た。異性体２ＡＨＣｌ塩：ＮＭＲ ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ＋Ｄ２Ｏ）（混合物アミド回転異性体）１０．０４（ｓ、１Ｈ）；８．７２（ｓ、０．４Ｈ）；８．６８（ｓ、０．６Ｈ）；７．８１−７．８８（ｍ、１Ｈ）；７．２５−７．３１（ｍ、１Ｈ）；５．１２（ｔ、１Ｈ）；４．６３−４．７５（ｍ、１．５Ｈ）；４．４０−４．４６（ｍ、１Ｈ）；４．３３−４．３８（ｄｄ、０．５Ｈ）；４．２３−４．２８（ｄｄ、０．５Ｈ）；３．７２−３．９０（ｍ、２Ｈ）；３．４２−３．５２（ｍ、３Ｈ）；３．１４−３．２８（ｍ、３Ｈ）；２．８４−３．１（ｍ、２Ｈ）；２．８６−２．９７（ｍ、１Ｈ）；２．７３−２．８２（ｍ、１Ｈ）；２．６０（ｓ、３Ｈ）；２．５０−２．３５（ｍ、１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ５１２（Ｍ＋Ｎａ）、４９０（Ｍ＋Ｈ）、４６２（Ｍ＋Ｈ−Ｎ２）。異性体２ＢのＨＣｌ塩を同様にして製造した。異性体２ＢＨＣｌ塩：ＮＭＲ ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ＋Ｄ２Ｏ）（混合物アミド回転異性体）１０．０（ｓ、１Ｈ）；８．７（ｓ、１Ｈ）；７．８２−７．８６（ｄｄ、１Ｈ）；７．２９（ｔ、１Ｈ）；５．２６（ｄ、１Ｈ）；４．６６−４．７６（ｍ、１Ｈ）；４．４９−４．５４（ｍ、１Ｈ）；４．４５−４．５９（ｍ、１Ｈ）；４．３５（ｄ、０．５Ｈ）；３．９０−４．０３（ｍ、１Ｈ）；３．７６−３．８８（ｍ、０．５Ｈ）；３．１１−３．４３（ｍ、５．５Ｈ）；２．８８−３．００（ｍ、０．５Ｈ）；２．７０−２．８２（ｍ、１Ｈ）；２．６３（ｓ、３Ｈ）；２．２１−２．４０（ｍ、１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ５１２（Ｍ＋Ｎａ）、４９０（Ｍ＋Ｈ）、４２（Ｍ＋Ｈ−Ｎ２）。
実施例２Ａ（方法２）
５リットル三頸丸底フラスコに、オーバーヘッド撹拌機、Ｎ２導入管および熱電対を取り付けた。そのフラスコに、６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル［Ｉ−４０Ｃ−２］（１４７．１５ｇ、４２３ｍｍｏｌ、２塩酸塩基準）、２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸［１−６７］（純度９５．７％、１１０ｇ、４５２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ−ＨＣｌ（１２２ｇ、６３４ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（６．４７ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）を入れ、次に前混合したテトラヒドロフラン（１４７２ｍＬ）および水（７３．６ｍＬ）を加えた。ＴＨＦ：水を添加すると、２３℃から３１℃への温度上昇があった。４当量のＤＩＰＥＡ（３００ｍＬ）を滴下漏斗を用いて加え、その間温度を＜３５℃に維持した。反応混合物を環境温度で終夜撹拌した。水５００ｍＬ中の塩化アンモニウム（９０ｇ、１６９０ｍｍｏｌ）で反応停止した。ＥｔＯＡｃ ５００ｍＬと次にＥｔＯＡｃ ２００ｍＬで水相から生成物を抽出し、有機層を合わせた。水相のｐＨが６から７となるまで、合わせた有機層を塩化アンモニウム溶液で洗浄した。固体が沈殿しているのが認められ、それを水相および有機相界面から濾過した。有機相を濃縮してＴＨＦおよびＥｔＯＡｃを除去した。アセトニトリル約２００ｍＬを加え、混合物についてロータリーエバポレータ処理を行って水を除去した。さらに固体が沈殿した。その固体を濾過し、濾液をＳＦＣキラルＨＰＬＣ分離投入流用に希釈して１５００ｍＬとした。次の方法：Ｃｈｉｒａｃｅｌ ＡＤ−Ｈカラム（Ｄｉａｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， ＬＴＤ．、２５０×５０ｍｍ、５μｍ）、流量２５０ｍＬ／分、３５℃、２２０ｎｍ、１００バール、５０％ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ（２：１）／ＣＯ２、２６０秒サイクル時間、ＭｅＣＮ １５００ｍＬ中１３０ｇ、８７ｍｇ／ｍＬ、１５ｍＬ／注入によって分離を行った。ピーク１（先に溶出する）分画を濃縮し、ＡＣＮ ７５０ｍＬに溶かし、活性炭（Ｎｏｒｉｔ ＳＡ３、１００メッシュ）で処理し、約１５分間撹拌し、ソルカ・フロクで濾過し、濃縮した。泡状残留物を４０から５０℃で加熱しながらＤＭＥ ３５０ｍＬに溶かした。約３５から３７℃で約２から３分後に沈殿が認められ、混合物を放冷して環境条件とした。温度が約２５℃に達した時点で、シクロヘキサン２５０ｍＬを約１５分かけて加え、バッチを約１時間撹拌した。固体生成物を濾過し、リアクターおよびケーキをシクロヘキサン１００ｍＬで洗浄し、固体をＮ２下に吸引してほぼ乾燥状態とした。湿ったケーキを６０℃で約１８時間真空乾燥して、６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［（５５）−２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリルを得た。
実施例２ＣＤ異性体混合物、２Ｃおよび２Ｄ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル（異性体混合物）：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸［１−６７］（２００ｍｇ、０．８６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中懸濁液に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１７３ｍｇ、１．２８０ｍｍｏｌ）を加え、次にＥＤＣ（３３１ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）、６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＲ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル［Ｉ−４０Ｄ］（５５１ｍｇ、１．０９５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７０ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒留去して、標題化合物を２種類のジアステレオマーの混合物として得た。粗生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２（Ａ）およびＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ９０：１０（Ｂ）を１２ＣＶにわたり１００％Ａから１００％Ｂの勾配溶離で用いるシリカ（２４ｇカートリッジ）でのＭＰＬＣによって精製して、標題化合物を２種類のジアステレオマーの混合物として得た。ＬＣ／ＭＳ４９０（Ｍ＋Ｈ）。ジアステレオマーの混合物を、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＳカラム、１００バール、４０％ＭｅＯＨ（０．２％ＤＥＡ）／ＣＯ２、３５℃での分取キラルＨＰＬＣ（ＳＦＣ）によって精製して、標題化合物の２種類の分離したアザ−インダンジアステレオマー：異性体２Ｃ（先に溶出）および異性体２Ｄ（遅く溶出）を得た。各異性体を別個にジクロロメタン１ｍＬに溶かし、１当量の１Ｍ ＨＣｌ／エーテルを加えた。溶媒を留去して、各異性体の塩酸塩を得た。異性体２Ｃ・ＨＣｌ塩：ＮＭＲ ６００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）（混合物アミド回転異性体）９．９８８（ｓ、０．６Ｈ）；９．９７５（ｓ、０．４Ｈ）；８．７３（ｓ、０．６Ｈ）；８．６７（ｓ、０．４Ｈ）；７．９４（ｄｄ、１Ｈ）；７．３１（見かけのｔ、１Ｈ）；５．１５（ｄ、１Ｈ）；４．８０（ｔ、０．５Ｈ）；４．７５（ｄ、０．５Ｈ）；４．６５−４．７０（ｍ、１Ｈ）；４．４７（ｄ、０．５Ｈ）；４．３２−４．３８（ｍ、１Ｈ）；４．１９−４．２９（ｍ、２Ｈ）；３．８４−３．９８（ｍ、２Ｈ）、３．５７−３．７２（ｍ、２Ｈ）；３．４４−３．５４（ｍ、２Ｈ）；３．３１−３．３８（ｍ、０．５Ｈ）；３．２３（ｔ、２Ｈ）；２．６９−２．８６（ｍ、１Ｈ）；２．６２（ｓ、３Ｈ）；２．３３−２．４２（ｍ、０．５Ｈ）；２．２０−２．２８（ｍ、０．５Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ５３１（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）。異性体２Ｄ・ＨＣｌ塩：ＮＭＲ ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）（混合物アミド回転異性体）９．９８（ｓ、１Ｈ）；８．７２（ｓ、０．６Ｈ））；８．６９（ｓ、０．４Ｈ）；７．９１−７．９６（ｍ、１Ｈ）；７．３０（ｑ、１Ｈ）；５．１４−５．１８（ｍ、１Ｈ）；４．７２−４．７８（ｍ、１．５Ｈ）；４．６５（ｄ、０．５Ｈ）；４．４９（ｄ、０．５Ｈ）；４．３５（ｄ、１Ｈ）；４．２１−４．３０（ｍ、２Ｈ）；３．３２−３．９５（ｍ、６．５Ｈ）；３．１８−３．２７（ｍ、２Ｈ）；２．７１−２．７９（ｍ、１Ｈ）；２．６２（ｓ、３Ｈ）；２．３５−２．４２（ｍ、０．５Ｈ）；２．１８−２．２６（ｍ、０．５Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ５３１（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）。
実施例２ＥＦ異性体混合物、２Ｅおよび２Ｆ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル（異性体混合物）：６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル．［Ｉ−４０Ｂ］を原料とした以外は、実施例２Ｃおよび２Ｄでの異性体の混合物の合成について上記の方法と同様の方法で、標題化合物（２種類の異性体の混合物として）を製造した。ジアステレオマーを、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＡＳ−Ｈカラム、１００バール、３０％ＭｅＯＨ（０．２％イソブチルアミン）／ＣＯ２、３５℃でのキラル分取ＳＦＣＨＰＬＣと、次にシリカゲル（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ９５：５で溶離）での分取ＴＬＣによるさらなる精製によって分離して、標題化合物の分離されたアザ−インダンジアステレオマー、異性体２Ｅ（先に溶出）および異性体２Ｆ（遅く溶出）を得た。各異性体を別個にジクロロメタン１ｍＬに溶かし、１当量の１Ｍ ＨＣｌ／エーテルを加えた。溶媒を留去して、分離されたジアステレオマーの塩酸塩を得た。異性体２Ｅ・ＨＣｌ塩：ＮＭＲ ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）（混合物アミド回転異性体）１０．０２（ｓ、１Ｈ）；８．７１（ｓ、０．５Ｈ）；８．６７（ｓ、０．５Ｈ）；７．８４（ｄｄ、１Ｈ）；７．２７（ｔ、１Ｈ）；５．０８（ｄ、１Ｈ）；４．６２−４．７６（ｍ、１．５Ｈ）；４．３０−４．４５（ｍ、１．５Ｈ）；４．１９−４．２６（ｍ、０．５Ｈ）；３．８（ｑ、１Ｈ）；３．６５−３．７３（ｍ、０．５Ｈ）；３．３３−３．４５（ｍ、２．５Ｈ）；３．２０−３．２８（ｍ、２Ｈ）；３．１１−３．２０（ｍ、１．５Ｈ）；３．００−３．０８（ｍ、０．５Ｈ）；２．７３−２．９３（ｍ、３．５Ｈ）；２．６１（ｓ、３Ｈ）；２．１９−２．３７（ｍ、１Ｈ）：ＬＣ／ＭＳ５３１（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）、４６２（Ｍ＋Ｈ−Ｎ２）：異性体２Ｆ・ＨＣｌ塩：ＮＭＲ ５００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）（混合物アミド回転異性体）１０．０２（ｓ、１Ｈ）；８．７２（ｓ、０．４Ｈ）；８．６８（ｓ、０．５Ｈ）；７．８４（ｑ、１Ｈ）；７．２５−７．３０（ｍ、１Ｈ）；５．１１（ｔ、１Ｈ）；４．６３−４．７４（ｍ、２Ｈ）；４．３８−４．４３（ｍ、１Ｈ）；４．３４（ｄ、０．５Ｈ）；３．７０−３．８７（ｍ、１．５Ｈ）；３．３７−３．４９（ｍ、３．５Ｈ）；３．２４（ｑ、１．５Ｈ）；３．１０−３．２０（ｍ、１Ｈ）；２．７３−３．０４（ｍ、３．５Ｈ）；２．６０（ｓ、３Ｈ）；２．１６−２．３５（ｍ、１Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ５３１（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）、４６２（Ｍ＋Ｈ−Ｎ２）。
実施例２ＧＨ異性体混合物、２Ｇおよび２Ｈ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル（異性体混合物）：２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−カルボン酸［１−６７］（１４８ｍｇ、０．６３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（２６６ｍｇ、０．７００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５分間撹拌し、６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＳ）−オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル［Ｉ−４０Ａ］（４１１ｍｇ、０．８１７ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（０．７０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液を加えた。フラスコをジクロロメタン（０．３ｍＬ）で２回洗った。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次にＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒留去して、粗標題化合物を２種類のジアステレオマーの混合物として得た。この粗取得物を、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ９５：５（Ｂ）を用いるシリカ（２０００μｍ、２回溶離）での分取ＴＬＣによって精製して、標題化合物２ＧＨをジアステレオマーの混合物として得た。ＬＣ／ＭＳ ５１２（Ｍ＋Ｎａ）、４９０（Ｍ＋Ｈ）。ジアステレオマーを、キラル分取ＳＦＣＨＰＬＣ（ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＩＣ、２１×２５０ｍｍ、６０％ＭｅＯＨ：ＭｅＣＮ／ＣＯ２、５０ｍＬ／分、１００バール、ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ中１１４ｍｇ／ｍＬ、３５℃、２２０ｎｍ）によって分離して、分離されたアザ−インダンジアステレオマー異性体２Ｇ（先に溶出）および異性体２Ｈ（遅く溶出）を得た。各異性体を別個にジクロロメタン１ｍＬに溶かし、１当量の１Ｍ ＨＣｌ／エーテルを加えた。溶媒を留去して、各ジアステレオマーのＨＣｌ塩を得た。異性体２Ｇ・ＨＣｌ塩：ＮＭＲ ６００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）（混合物アミド回転異性体）１０．０１２（ｓ、０．５Ｈ）；１０．００７（ｓ、０．５Ｈ）；８．７２（ｓ、０．５Ｈ）；８．６８（ｓ、０．５Ｈ）；８．００（広い見かけのｔ、１Ｈ）；７．３１（ｄｔ、１Ｈ）；５．１１（ｔ、１Ｈ）；４．６０−４．７２（ｍ、２Ｈ）；４．４１（ｄ、０．５Ｈ）；４．０９−４．３１（ｍ、３Ｈ）；３．９１（ｔ、０．５Ｈ）；３．８８（ｄｄ、１．５Ｈ）；３．３１−３．６２（ｍ、４Ｈ）；３．２０−３．２８（ｍ、２．５Ｈ）；２．７２−２．８６（ｍ、１Ｈ）；２．６１（ｓ、３Ｈ）；２．３０−２．３７（ｍ、０．５Ｈ）；２．２１−２．２７（ｍ、０．５Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ５３１（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）。異性体２Ｈ・ＨＣｌ塩：ＮＭＲ ６００ＭＨｚ（ＣＤ３ＯＤ）（混合物アミド回転異性体）１０．０２（ｓ、１Ｈ）；８．７２（ｓ、０．６Ｈ）；８．６９（ｓ、０．４Ｈ）；８．０２（見かけのｔ、０．４Ｈ）；７．９８（見かけのｔ、０．６Ｈ）；７．２８−７．３３（ｍ、１Ｈ）；５．０９（ｄ、１Ｈ）；４．７２−４．７７（ｍ、１Ｈ）；４．６４（ｄ、０．５Ｈ）；４．５７（ｄ、３Ｈ）；４．３４（ｄ、０．５Ｈ）；４．２８（ｄ、０．５Ｈ）；４．０５−４．２０（ｍ、２．５Ｈ）；３．８６（ｔ、１Ｈ）；３．７５（ｑ、１Ｈ）；３．４８−３．６３（ｍ、２Ｈ）；３．２６（ｔ、１Ｈ）；３．２３（ｔ、１Ｈ）；２．７４−２．８１（ｍ、１Ｈ）；２．６１（ｓ、３Ｈ）；２．３０−２．３６（ｍ、０．５Ｈ）；２．２０−２．２７（ｍ、０．５Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ５３１（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）。
アミドカップリング剤ＥＤＣまたはＨＡＴＵのうちのいずれかを用いて適切なアミンおよびカルボン酸中間体（上記の方法に従って製造）から、実施例１ＡＢから１Ｌおよび２ＡＢから２Ｈの合成について記載の方法と同様の方法で、表３中の下記の実施例を製造した。アミドカップリングによって、２種類のジアステレオマー生成物が得られ、それらはアミドカルボニルに対してαのキラル中心（すなわち、アザ−インダンキラル中心）でのエピマーである。その２種類のジアステレオマー生成物は代表的には、上記実施例に記載の方法と同様にして分離される。各実施例について使用されるキラルＨＰＬＣカラムを、表３に示してあり、そして認められた溶出順序も示してある。表３中の実施例のいくつかについては、２種類のジアステレオマーが分離されておらず、２種類の得られたジアステレオマーの混合物が含まれる。
表３および４において、「先に溶出する」および「遅く溶出する」とは、個々のアザ−インダンジアステレオマーの、それのアザ−インダン異性体混合物からの分離時に認められる溶出順序を指す。各化合物における他の立体中心の絶対立体化学は、それらの相当する中間体合成に基づいて知られており、描かれている。
表３
Figure 2014521751
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実施例９６ＡＢ異性体混合物、９６Ａおよび９６Ｂ
Figure 2014521751
 ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＲ）−８−｛［３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−イル］カルボニル｝オクタヒドロ−２Ｈ−ピラジン−３−イル］ベンゾニトリル
段階Ａ：（３Ｒ，９ａＳ）−８−（３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン、７−カルボニル）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：（３Ｒ，９ａＳ）−３−（３−シアノ−４−フルオロ−２−メチルフェニル）ヘキサヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−２（６Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル［Ｉ−１８Ａ］（２５０ｍｇ、０．６６８ｍｍｏｌ）および３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−カルボン酸［Ｉ−６５］（２０１ｍｇ、０．８６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液にＨＡＴＵ（３８１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を加え、次にジイソプロピルエチルアミン（３５０μＬ、２．００ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、混合物を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し（１００ｍＬで３回）、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、残留物を、１０％メタノール／メチレンクロライドで溶離を行う分取ＴＬＣによって精製して、標題化合物を得た。ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：５８８．２。
段階Ｂ：６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＲ）−８−｛［３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−イル］カルボニル｝オクタヒドロ−２Ｈ−ピラジン−３−イル］ベンゾニトリル：段階Ａの化合物（３９３ｍｇ、０．６６８ｍｍｏｌ）およびチオアニソール（３１６μＬ、２．６７ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（３ｍＬ）中溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を加え、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。揮発分を除去した後、残留物をメチレンクロライドと１Ｎ水酸化ナトリウムとの間で分配し、アルカリ相をメチレンクロライドで抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、残留物を、１０％メタノール／メチレンクロライドで溶離を行う分取ＴＬＣによって精製して、標題化合物を２種類のジアステレオマーの混合物として得た。その二つの異性体を、５０％メタノール（０．２％ジエチルアミン）／ＣＯ２を用いるＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＳ−Ｈカラムで分離した。先に溶出する異性体（９６Ａ）がより強力なＲＯＭＫ阻害剤であった。９６Ａ先に溶出する異性体：ＬＣ／ＭＳ：（Ｍ＋１）＋：４８８．１７。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．５２２（ｓ、１Ｈ）、８．３５４−８．５２９（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．９９５（ｓ、１Ｈ）、７．９１２−７．８６８（ｍ、１Ｈ）、７．０９１−７．０５４（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．６５０−４．５６０（ｍ、１Ｈ）、４．４４９−４．４１８（ｍ、１Ｈ）、４．２４９−４．２１７（ｍ、１Ｈ）、４．０９６−３．９４７（ｍ、１Ｈ）、３．５０９（広い、１Ｈ）、３．２９４−３．２６１（（ｍ、１Ｈ）、３．１７２−３．１２６（ｍ、２Ｈ）、２．９７６−２．９２９（ｍ、１Ｈ）、２．８５７−２．７８９（ｍ、２Ｈ）、２．６４６（ｓ、３Ｈ）、２．６０９−２．５３９（ｍ、２Ｈ）、２．４６７−２．４１４（ｍ、２Ｈ）、２．３００−２．２５０（ｍ、２Ｈ）、２．１６０−２．１２０（ｍ、１Ｈ）。遅く溶出する異性体（９６Ｂ）は、タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイで１μＭより大きいＩＣ５０を有していた。
適切なアミンおよびカルボン酸中間体（上記の方法に従って製造）から、実施例９６の合成について記載の方法と同様の方法で、表４中の下記実施例を製造した。提供されるデータには、キラルＨＰＬＣ条件（該当するものがある場合）およびＭＳおよび／またはＨ ＮＭＲ特性決定が含まれている。
表４
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Figure 2014521751
実施例における最終生成物化合物のそれぞれについて、下記のタリウムフラックスアッセイおよび／または電気生理学アッセイを行った。
タリウムフラックスアッセイ
細胞培養条件
ｈＲＯＭＫ（ｈＫｉｒ１．１）を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞を、非必須アミノ酸、ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、Ｇ４１８およびＦＢＳを補った、完全増殖培地：ダルベッコ改変イーグル培地内で、１０％ＣＯ２で湿らせたインキュベーター中、３７℃で増殖させた。＞８０％未満の密集度で、フラスコから培地を吸引し、カルシウム／マグネシウムを含まないＰＢＳ １０ｍＬで洗浄する。１×トリプシン（Ｃａ／Ｍｇを含まないＰＢＳ中で調製）５ｍＬをＴ−２２５フラスコに加え、フラスコを、３７℃／ＣＯ２インキュベータに２から３分間戻す。細胞を除去するため、手でフラスコの側面を緩やかにたたきつける。細胞を完全に粉砕し、次いで、細胞を２５ｍＬの完全培地に移す。１，５００ｒｐｍで６分間遠心分離し、次いで、完全培地に再懸濁し、細胞濃度を測定する。通常の再播種について、４Ｅ６細胞／Ｔ−２２５フラスコは、４日で８０％未満の密集度に達するであろう。理想的な増殖条件および適切な組織培養の実践により、この細胞系は４０から４５代の継代培養で安定である。
ＦｌｕｘＯＲキット成分（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｆ１００１７）
・ＦｌｕｘＯＲ（登録商標）試薬（成分Ａ）
・ＦｌｕｘＯＲ（登録商標）アッセイ緩衝液（成分Ｂ）−１０倍濃縮物
・ＰｏｗｅｒＬｏａｄ（登録商標）濃縮物（成分Ｃ）−１００倍濃縮物
・プロベネシド（成分Ｄ）−凍結乾燥試料を−２０℃で維持する。水溶性、水１ｍＬ中で可溶化後、１００倍。４℃で保存する。
・ＦｌｕｘＯＲ（登録商標）塩素を含まない緩衝液（成分Ｅ）−５倍濃縮物
・硫酸カリウム（Ｋ２ＳＯ４）濃縮物（成分Ｆ）−水中、１２５ｍＭ。４℃で保存する。
・硫酸タリウム（Ｔｌ２ＳＯ４）濃縮物（成分Ｇ）−水中、５０ｍＭ。４℃で保存する。
・ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド、成分Ｈ）−１ｍＬ（１００％）。
試薬の製造：ＦｌｕｘＯＲ作業溶液
・１０００倍のＦｌｕｘＯＲ（登録商標）試薬：ＤＭＳＯ １００μＬ中の成分Ａのバイアルを再構築し；十分に混合し；１０μＬの一定量を−２０℃で保存する。
・１倍ＦｌｕｘＯＲ（登録商標）アッセイ緩衝液：成分Ｂを水で１０倍希釈し；Ｈｅｐｅｓ／ＮａＯＨでｐＨ７．４に調製し；ろ過し、４℃で保存する。
・プロベネシド／アッセイ緩衝液：１倍のＦｌｕｘＯＲ（登録商標）アッセイ緩衝液１００ｍＬ；再構築した成分Ｄ １ｍＬ；４℃で保存する。
・装填緩衝液（マイクロプレートあたり）：１０００倍のＦｌｕｘＯＲ（登録商標）試薬 １０μＬ；成分Ｃ １００μＬ；プロベネシド／アッセイ緩衝液 １０ｍＬ
・化合物緩衝液（マイクロプレートあたり）：プロベネシド／アッセイ緩衝液 ２０ｍＬ；０．３ｍＭ ウアバイン（水中、１０ｍＭのウアバインを、室温で、褐色瓶／アルミホイル中に保存することができる）；試験化合物
・１倍の塩素を含まないＦｌｕｘＯＲ（登録商標）緩衝液；水中、１倍の作業溶液を調製する。室温で保存することができる。
・刺激緩衝液（１倍の塩素を含まないＦｌｕｘＯＲ（登録商標）緩衝液中、５倍の最終濃度で調製）：７．５ｍＭ硫酸タリウムおよび０．７５ｍＭ硫酸カリウム（３ｍＭタリウム／０．３ｍＭカリウムの最終アッセイ濃度を与える）。使用しない時は４℃で保存する。無菌に保存する場合、この溶液は数ヶ月間、良好である。
アッセイプロトコール
ＲＯＭＫチャンネル機能性タリウムフラックスアッセイを、ＦＬＩＰＲ−Ｔｅｔｒａ装置を用い、３８４ウェル中で実施する。ＨＥＫ−ｈＫｉｒ１．１細胞を、ポリ−Ｄ−リジンマイクロプレートに播種し、３７℃−１０％ＣＯ２インキュベーター内で一晩維持する。実験当日、培地をＦｌｕｘＯＲ（登録商標）試薬装填緩衝液と置換し、室温（２３から２５℃）で９０分間、光から保護し、インキュベートする。装填緩衝液を、アッセイ緩衝液±試験化合物と置換し、次いで、室温で３０分間インキュベートし、タリウム／カリウムの刺激剤をマイクロプレートに加える。
工程プロトコール
１．ＨＥＫ−ｈＫｉｒ１．１細胞（２０，０００細胞／ウェルで５０μＬ）を３８４ウェルのＰＤＬをコートしたマイクロプレートに播種する。
２．加湿した３７℃／１０％ＣＯ２インキュベーター中、細胞を一晩接着させる。
３．マイクロプレートから細胞を完全に除去し、装填緩衝液２５μＬで置換する。
４．マイクロプレートを、光から保護しながら、室温で９０分間インキュベートする。
５．装填緩衝液を除去し、１倍のアッセイ緩衝液２５μＬ±試験化合物と置換する。
６．マイクロプレートを室温で、光から保護し、３０分間インキュベートする。
７．ＦＬＩＰＲ−Ｔｅｔｒａ ３８４において：刺激剤（タリウム／カリウム）溶液をマイクロプレートに加え、蛍光を観察する。励起＝４００ｎｍ、発光＝４６０および５８０ｎｍ。約１０分間、データを集める。
データの計算
本発明の標準的な対照ＲＯＭＫ阻害剤を３μＭ含むウェルの蛍光強度を、タリウムフラックスのＲＯＭＫ感受性成分を定義するために用いる。試験化合物の存在下の蛍光は、蛍光変化の％を提供するための値を制御するために正規化される。ＩＣ５０値は、ＲＯＭＫタリウムフラックスシグナルの５０％を阻害する化合物濃度を表す。
アッセイ標準
通常、対照は、試験化合物について、結果を得るために必要ではないが、対照化合物は、アッセイが以前の測定と比較して一致した結果を与えることをサポートするために含まれている。対照は、本発明の式Ｉａのいずれの化合物でもよく、好ましくは、本アッセイにおいて１μＭ未満のＩＣ５０効力を有するものである。また、対照は、本アッセイにおいて１μＭ未満のＩＣ５０効力を有する他の化合物（式Ｉａの範囲外）であってもよい。
電気生理学アッセイ
Ｋｉｒ１．１（ＲＯＭＫ１）電流の遮断は、ＩｏｎＷｏｒｋｓ Ｑｕａｔｔｒｏ自動化電気生理学プラットフォーム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いる細胞全膜電位固定により調べた（Ｈａｍｉｌｌ ｅｔ．ａｌ．Ｐｆｌｕｅｇｅｒｓ Ａｒｃｈｉｖｅｓ ３９１：８５−１００（１９８１））。Ｋｉｒ１．１チャンネルを安定して発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、３７℃で、湿らせた１０％ＣＯ２インキュベータ内の細胞培地中、Ｔ−７５フラスコ中で維持する。実験の前に、Ｋｉｒ１．１の発現を、１ｍＭ 酪酸ナトリウムと一晩インキュベーションすることにより誘導した。実験当日、細胞２．５ｍＬのＶｅｒｓｅｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １５０４０−０６６）を用いて、３７℃で約６分間、細胞を解離し、１５０ ＮａＣｌ、１０ ＫＣｌ、２．７ ＣａＣｌ２、０．５ ＭｇＣｌ２、５ ＨＥＰＥＳ（それぞれｍＭ）を含む浴溶液（ｐＨ７．４）１０ｍＬに懸濁した。遠心分離後、細胞ペレットを約４．０ｍＬの浴溶液に再懸濁し、ＩｏｎＷｏｒｋｓ装置に置いた。細胞内溶液は：ｐＨ７．４、８０ グルコン酸Ｋ、４０ ＫＣｌ、２０ ＫＦ、３．２ ＭｇＣｌ２、３ ＥＧＴＡ、５ Ｈｅｐｅｓ（それぞれｍＭ）からなる。細胞質への電気的アクセスは、０．１３ｍｇ／ｍＬのアンフォテリシンＢの４分間の貫通により達成された。アンフォテリシンＢ（Ｓｉｇｍａ Ａ−４８８８）は、ＤＭＳＯ中、４０ｍｇ／ｍＬ溶液として調製した。電圧プロトコールおよび電流記録は、ＩｏｎＷｏｒｋｓ ＨＴソフトウェア／ハードウェアシステムを用いて実施した。電流は１ｋＨｚでサンプリングした。液間電位についての補正はしなかった。１００ｍｓ幅の−７０ｍＶから０ｍＶの保持電位、それに続く−７０ｍＶから＋７０ｍＶの１００ｍｓのランプ電位は、化合物のインキュベーション期間の６分前および後に適用された。試験化合物は、ＤＭＳＯ貯蔵溶液を浴溶液で３倍に希釈することによって最終濃度に調製し、９６ウェルのポリプロピレンプレートにある機器に配置した。電流振幅は、ＩｏｎＷｏｒｋｓソフトウェアを用いて測定した。化合物の効力を評価するために、０ｍＶまでの電圧ステップの間のわずかな遮断は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆ Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＣＡ）により測定し、用量反応曲線は、Ｉｇｏｒ Ｐｒｏ ４．０（ＷａｖｅＭｅｔｒｉｃｓ，Ｌａｋｅ Ｏｓｗｅｇｏ，ＯＲ）と一致した。通常、対照は試験化合物についての結果を得るために必須ではないが、アッセイが以前の測定と比較して一貫した結果を与えていることを裏付けるために対照化合物が含まれている。対照は、本発明の式Ｉａの任意の化合物であってよく、好ましくは、本アッセイにおいて、１μＭ未満のＩＣ５０効力を有するものである。また、本アッセイにおいて１μＭ未満のＩＣ５０を有する他の化合物（式Ｉａの範囲外）であってもよい。
タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイを用いて本発明の実施例における化合物について収集したデータを、下記の表５に示している。実施例セクションで別段の記載がない限り、実施例中の全ての最終生成物化合物（ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマー）が、タリウムフラックスアッセイおよび電気生理学アッセイの一方または両方において、１μＭ以下のＩＣ５０効力を有していた。
表５
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Figure 2014521751
Figure 2014521751
自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）アッセイ
自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）は、血圧を上昇させるための外因性要因の投与を必要とせず、血圧を上昇させるために高い塩濃度の飼料を必要としない、年齢依存高血圧症を示す。従って、それはヒトの本態性高血圧症と似ており、血圧を低下させる能力についての新規薬剤の用量依存性を評価する機会を提供する。
自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ）における本発明の化合物の血圧低下効果を評価するための実験プロトコール：自然発生高血圧ラット（ＳＨＲ、雄、６ヶ月、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）に、イソフルランまたはケタミン／メトミジン麻酔下、ＤＳＩ ＴＡ１１ＰＡ−Ｃ４０遠隔測定装置（Ｄａｔａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）を移植した。大腿動脈を通して下行大動脈に遠隔測定装置カテーテルを挿入し、遠隔測定装置を左側の脇腹の皮下に移植した。動物を手術から回復させてから１４日後に試験開始した。血圧、心拍数および意識からの活動信号、自由に行動しているラットを１０分毎に３０秒間、連続的に記録した。ＨＣＴＺ（２５ｍｇ／ｋｇ／日、経口投与）は、ＳＨＲにおいてほぼ最大の効果を与える用量で利尿の対照として含まれていた。賦形剤対照と比較した本発明の化合物の血圧低下効果を、通常３から１４日間の１日１回の強制経口投与に続いて評価した。データを１時間の平均として収集し、血圧の変化を、１時間毎の賦形剤対照基準値を引くことにより計算した。実施例１Ａ、１Ｇ、２Ａ、２Ｈ、１７Ａ、２１、３４、３５、４０、９６Ａ、９７を、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの１日１回経口投与で評価したところ、１日（２４時間）で典型的な減少をもたらし、これは、試験の最後の日までに７ｍｍＨｇから２１ｍｍＨｇの範囲での最大血圧を意味する。
上記記載の自然発生高血圧ラットアッセイは公知であり、ヒト高血圧のシミュレーションを行う実験モデルとして当業界で使用されることが多い（例えば、Ｌｅｒｍａｎ， Ｌ． Ｏ ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｌａｂ Ｃｌｉｎ Ｍｅｄ， ２００５；１４６：１６０−１７３を参照）。特定の実施態様を参照して本発明を説明したが、他の多数の実施態様は、本明細書に記載された教示から当業者に明らかであろう。特許請求の範囲は、実施例で説明した好ましい実施形態によって限定されるべきものではなく、全体として本記述と内容が一致する最も広い解釈が与えられるべきものである。特定の立体配置の指定のない、または全ての不斉中心がないため、そのような指示を有する請求項（すなわち、種）における特定の化合物の記載または表現は、そのような形式が１個以上の不斉中心の存在により可能なところで、その化合物のラセミ化合物、ラセミ混合物、個々のエナンチオマー、個々のジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーを包含するものである。本明細書で引用された全ての特許、特許出願および刊行物は、参照によって、それらの全体が本明細書に組み込まれるものとする。

Claims (16)

  1. 下記構造式Ｉａを有する化合物および該化合物の医薬として許容される塩。
    Figure 2014521751
     ［式中、
    Ｚは、
    Figure 2014521751
     であり、
    Ｒ１は、
    Figure 2014521751
     であり、
    ＊＊＊はカルボニル炭素への結合を示し、＊＊は式Ｉａにおけるテトラゾリル環への結合を示し；
    ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり；
    ｍは１または２から選択される整数であり；
    ｎは１または２から選択される整数であり；
    Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立にＣ（Ｒ７）またはＮから選択され、ただし、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つがＮでなければならないが、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの多くとも２個がＮであり；
    Ｒａは−ＣＮであり；
    Ｒｂは−Ｈまたは−Ｃ１−６アルキルであり；
    Ｒ２は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−６アルキルであり；
    Ｒ３は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−６アルキルであり；
    Ｒ４は−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＣ１−４アルキルまたはＮ−テトラゾリルであり；
    またはＲ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
    Figure 2014521751
     を形成しており、Ｒは−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
    Ｒ５は、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−４アルキルであり；ただし、Ｒ３およびＲ４が一体となっていない場合、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの一つおよび一つのみが−ＣＮであり；
    Ｒ６は−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
    Ｒ７は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌまたは−Ｃ１−４アルキルである。］
  2. 下記構造式Ｉを有する請求項１に記載の化合物および該化合物の医薬として許容される塩。
    Figure 2014521751
     ［式中、
    ＸはＯ、ＮＨまたはＳであり；
    Ｒ１は
    Figure 2014521751
     であり；
    ＊＊＊はカルボニル炭素への結合を示し、＊＊は式Ｉにおけるテトラゾリル環への結合を示し；
    ｍは１または２から選択される整数であり；
    ｎは１または２から選択される整数であり；
    Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立にＣ（Ｒ７）またはＮから選択され、ただし、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つがＮでなければならないが、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの多くとも２個がＮであり；
    Ｒ２は−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−６アルキルであり；
    Ｒ３は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−６アルキルであり；
    Ｒ４は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキル、−ＯＣ１−４アルキルまたはＮ−テトラゾリルであり；
    またはＲ３とＲ４が、それらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
    Figure 2014521751
     を形成しており、Ｒは−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
    Ｒ５は−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ３−６シクロアルキルまたは−ＯＣ１−４アルキルであり；
    ただし、Ｒ３とＲ４が一体となっていない場合は、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの１個および１個のみが−ＣＮであり；
    Ｒ６は、−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
    Ｒ７は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌまたは−Ｃ１−４アルキルである。］
  3. ＸがＯである請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  4. ｍが１であり、Ｒ６が−Ｈである請求項３に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  5. Ｒ１が、
    Figure 2014521751
     である請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  6. Ｒ２が−Ｈまたは−Ｆであり；Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；Ｒ４が−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；Ｒ５が、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、シクロプロピルまたは−ＯＣＨ３であり；ただし、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの一つおよび一つのみが−ＣＮである請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  7. Ｒ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
    Figure 2014521751
     を形成しており、Ｒが−Ｈまたは−ＣＨ３である請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  8. ＸがＯ、ＮＨまたはＳであり；
    Ｒ１が
    Figure 2014521751
     であり；
    ＊＊＊がカルボニル炭素への結合を示し、＊＊が式Ｉａにおけるテトラゾリル環への結合を示し；
    ｍが１または２から選択される整数であり；
    ｎが１または２から選択される整数であり；
    Ｘ１、Ｘ２およびＸ３がそれぞれ独立にＣＨまたはＮから選択され、ただし、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つがＮでなければならないが、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの多くとも２個がＮであり；
    Ｒａが−ＣＮであり；
    Ｒｂが−Ｈまたは−Ｃ１−３アルキルであり；
    Ｒ２が−Ｈまたは−Ｆであり；
    Ｒ３が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；
    Ｒ４が−Ｆ、−ＣＮまたは−ＯＣＨ３であり；
    またはＲ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
    Figure 2014521751
     を形成しており、Ｒが−Ｈまたは−ＣＨ３であり；
    Ｒ５が、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、シクロプロピルまたは−ＯＣＨ３であり；ただし、Ｒ３およびＲ４が一体となっていない場合、Ｒ３、Ｒ４またはＲ５のうちの一つおよび一つのみが−ＣＮであり；さらに、Ｒ３およびＲ４が一体となっている場合、Ｒ５が−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３であり；
    Ｒ６が−Ｈまたは−Ｃ１−４アルキルであり；
    Ｒ７が−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌまたは−Ｃ１−４アルキルである請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  9. 下記構造式ＩＩを有する請求項１に記載の化合物および該化合物の医薬として許容される塩。
    Figure 2014521751
     ［式中、
    ＸはＯまたはＮＨであり；
    Ｒ１は
    Figure 2014521751
     であり；
    Ｒ３は−Ｆであり、Ｒ４は−ＣＮであり、Ｒ５は−ＣＨ３であり；または
    Ｒ３およびＲ４がそれらが結合しているフェニル環中の炭素原子と一体となって、
    Figure 2014521751
     を形成しており、Ｒは−Ｈまたは−ＣＨ３であり、Ｒ５は−Ｈである。］
  10. 下記構造式ＩＩＩを有する請求項１に記載の化合物および該化合物の医薬として許容される塩。
    Figure 2014521751
  11. ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＳ）−８−｛［３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−［（３Ｒ、９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン；
    （３Ｒ）−３−メチル−６−［（３Ｒ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン；
    （３Ｓ）−３−メチル−６−［（３Ｒ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［（５Ｓ）−２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｒ，９ａＲ）−８−｛［３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−イル］カルボニル｝オクタヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［３−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｃ］ピリジン−７−イル］カルボニル｝オクタヒドロ−２Ｈ−ピラジノ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−２−メチル−３−［（３Ｓ，９ａＳ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］ベンゾニトリル；
    （３Ｓ）−３−メチル−６−［（３Ｒ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オン；または
    （３Ｓ）−３−メチル−６−［（３Ｓ，９ａＲ）−８−｛［２−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−５−イル］カルボニル｝オクタヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソクロメン−１−オンである請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩。
  12. 請求項１に記載の化合物および医薬として許容される担体からなる医薬組成物。
  13. ロサルタン、バルサルタン、カンデサルタン、オルメサルタン、テルメサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、アムロジピン、アラセプリル、ベナゼプリル、カプトプリル、セロナプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラート、ホシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、モベルチプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、スピラプリル、テモカプリル、またはトランドラプリル、アミロリド、スピロノラクトン、エプレラノン（ｅｐｌｅｒａｎｏｎｅ）もしくはトリアムテレンから選択される別の活性薬剤、またはこれらの医薬として許容される塩をさらに含む請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 処置を必要とする患者に対して、ＲＯＭＫ阻害上有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、ＲＯＭＫの阻害方法。
  15. 処置を必要とする患者に対して、治療上有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、利尿、ナトリウム利尿またはその両方を生じさせる方法。
  16. 処置を必要とする患者に対して、適宜に治療上もしくは予防上有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、高血圧、急性心不全、慢性心不全、肺動脈高血圧症、循環器病、糖尿病、内皮機能不全、拡張機能障害、安定および不安定狭心症、血栓症、再狭窄、心筋梗塞、脳卒中、心不全、肺性筋緊張亢進、アテローム性動脈硬化症、肝硬変、腹水症、子癇前症、脳水腫、腎障害、ネフローゼ症候群、急性腎機能不全、慢性腎疾患、高カルシウム血症、デント病、メニエール病、または浮腫状態から選択される１以上の障害の治療または予防方法。
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