JP2014509197A - 標的性治療人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルス及びその応用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 Ad-TD-hIL12は標的性人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルスで中国典型培養物保存センターで保存され保存番号はCCTCC NO:V201031である。ウイルス担体はサブクラスCの5型アデノウイルスで、E1A-CR2、E1B19KとE3gp-19Kの三つの遺伝子を削除し、E3gp-19Kプロモーター遺伝子を利用し、人IL12を表現するp35とp40サブユニット遺伝子配列を制御する。ウイルスは腫瘍細胞の感染を通じて腫瘍細胞で複製し腫瘍細胞を溶解すると同時に、腫瘍組織でハイレベルの多種抗腫瘍作用があるhIL12を生成できる。hIL12は抗腫瘍血管形成作用を有し人体免疫力を調節し人体に抗腫瘍特異免疫能力を形成させ、遠端転移腫瘍細胞を殺し、腫瘍の再発を防止できる。
【選択図】図1
Description
Claims (8)
- 中国典型培養物保存センターで保存され、その保存番号がCCTCC NO:V201031であることを特徴とする一種の標的性治療人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルス(oncolytic adenovirus)Ad-TD-hIL12。
- 当該ウイルス担体がサブクラスCの5型アデノウイルスAd5で、E1A-CR2、E1B19KとE3gp-19Kの三つの遺伝子を削除し、それにE3gp-19Kプロモーター遺伝子で人IL12を表現するp35とp40サブユニット遺伝子配列を制御することを特徴とする請求項1に記載の標的性治療人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルスAd-TD-hIL12。
- 前記の2p35とp40サブユニット遺伝子に対応するアミノ酸配列がそれぞれSEQ NO:1とSEQ NO:2で、相応なヌクレオチド配列がそれぞれSEQ NO:3とSEQ NO:4であることを特徴とする請求項2に記載の腫瘍溶解性アデノウイルスAd-TD-hIL12。
- 前記の2p35とp40サブユニット配列が人IL12 DNA配列の増加、削除又は点突然変異で得られる配列及び5’及び/又は3’端欠陥による配列だけでなく、配列SEQ NO:5を含むが、これに限らないことを特徴とする請求項2に記載の腫瘍溶解性アデノウイルスAd-TD-hIL12。
- 前記の2p35とp40サブユニット配列が前記の人IL12 DNA配列と異なり、抗腫瘍効果を表し、又は腫瘍の減退を引き起こす相同配列又は番号のポリペプチドだけでなく、SEQ NO:6を含むが、これに限らないことを特徴とする請求項2に記載の腫瘍溶解性アデノウイルスAd-TD-hIL12。
- 前記の人腫瘍が各種の実体腫瘍を含むことを特徴とする請求項1又は2に記載の標的性人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルスAd-TD-hIL12。
- 請求項1又は請求項2に記載の標的性人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルスAd-TD-hIL12の腫瘍治療薬物製作での応用。
- (1)健康人の末梢血を取り、リンパ球を分離し、植物性凝集素の刺激の下で培養し、RNAを抽出し、cDNAになるよう逆転写反応を行い、制限酵素切断部位を含むプライマーで人インターロイキンhIL12のp35とp40サブユニット遺伝子をクローンし、p35とp40サブユニット遺伝子区切りをhIL12の完全な遺伝子区切りに接続して、クローン担体T担体に接続し、pORF-hIL-12に命名し、これからNco IとNhe Iダブル制限酵素切断pORF-hIL-12プラスミドを使用してから、T4 DNAポリメラーゼで切断されたhIL12遺伝子の区切りを平らにして、使用に備えること、
(2)平ら端末切断酵素で単一にアデノウイルス担体pAd-TDのE3gp-19K欠陥区を切断し、前記のhIL12遺伝子をゲノム一致性順序によってウイルス担体pAd-TDの制限酵素切断部位に挿入し、PCR方法で***方向の正しい再構成担体を鑑定・選別すること、及び、
(3)前記の再構成担体を293細胞にトランスフェクションを行い、前記の担体Ad-TD-hIL12を構築すること、
上記手順を含む標的性人腫瘍治療の腫瘍溶解性アデノウイルスの担体Ad-TD-hIL12の構築方法。
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