JP2014506132A

JP2014506132A - 抗ｉｌ−１２／ｉｌ−２３抗体およびその使用

Info

Publication number: JP2014506132A
Application number: JP2013548585A
Authority: JP
Inventors: ボルハニ，デイビツド・ダブリユ; サデユカーン，ラムクリシユナ; レイシー，スーザン・イー; スツター，ホリー・エイチ
Original assignee: アッヴィ・インコーポレイテッド
Priority date: 2011-01-07
Filing date: 2012-01-06
Publication date: 2014-03-13
Also published as: RU2013136908A; MX2013007904A; TW201242976A; AU2012204237A1; BR112013017417A2; CN103596978A; EP2661448A2; WO2012094623A3; US20120288494A1; WO2012094623A2; EP2661448A4; KR20140038369A; NZ611840A; CA2821926A1; SG191874A1

Abstract

本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの残基１−１９７由来の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むエピトープに結合する抗体およびその抗原結合部分を提供する。本発明はさらに、この抗体をコードする核酸、この抗体を含む組成物、ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらを製造および使用する方法を提供する。

Description

ヒトインターロイキン１２（ＩＬ−１２）は、独自の構造および多面的効果を有するサイトカインとして特徴付けられている（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら（１９８９）Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１７０：８２７−８４５頁；Ｓｅｄｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０１８８−１０１９２頁；Ｌｉｎｇら（１９９５）Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１５４：１１６−１２７頁；Ｐｏｄｌａｓｋｉら（１９９２）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２９４：２３０−２３７頁）。ＩＬ−１２は、免疫応答および炎症応答が関与するいくつかの疾患に伴う病理において重要な役割を果たす。ＩＬ−１２、その生物学的活性および疾患におけるその役割の総説は、Ｇａｔｅｌｙら（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１頁中に見出すことができる。

構造的には、ＩＬ−１２は、３５ｋＤａのサブユニット（ｐ３５）および４０ｋＤａのサブユニット（ｐ４０）を含むヘテロダイマータンパク質であり、これらのサブユニットは共に、ジスルフィド架橋によって一緒に連結されている（「ｐ７０サブユニット」という。）。このヘテロダイマータンパク質は、抗原提示細胞（例えば、単球、マクロファージおよび樹状細胞）によって主に産生される。これらの細胞型はまた、ｐ７０サブユニットと比較して過剰のｐ４０サブユニットを分泌する。ｐ４０サブユニットおよびｐ３５サブユニットは、遺伝的には無関係であり、いずれも生物学的活性を有さないと報告されているが、ｐ４０ホモダイマーはＩＬ−１２アンタゴニストとして機能し得る。

機能的には、ＩＬ−１２は、抗原特異的Ｔヘルパー型（Ｔｈ１）と２型（Ｔｈ２）リンパ球との間のバランスを調節する際に、中心的な役割を果たす。Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞は、自己免疫障害の開始および進行を支配しており、ＩＬ−１２は、Ｔｈ１リンパ球の分化および成熟の調節において重要である。Ｔｈ１細胞によって放出されるサイトカインは炎症性であり、これにはインターフェロンγ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−２およびリンホトキシン（ＬＴ）が含まれる。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を分泌して、体液性免疫、アレルギー反応および免疫抑制を促進する。自己免疫疾患におけるＴｈ１応答の優勢、およびＩＦＮγの炎症促進活性と一致して、ＩＬ−１２は、多くの自己免疫疾患および炎症疾患（例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）およびクローン病）に伴う病理において、主要な役割を果たし得る。

ＭＳを有するヒト患者は、急性ＭＳプラークにおけるｐ４０ｍＲＮＡレベルによって実証されるように、ＩＬ−１２発現の増加を示している（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１９８５−１９９６頁）。さらに、ＭＳ患者由来のＣＤ４０Ｌ発現Ｔ細胞による抗原提示細胞のエキソビボ刺激は、対照Ｔ細胞と比較してＩＬ−１２産生を増加させ、これは、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用がＩＬ−１２の強力なインデューサーであるという所見と一致する。

健康な対照と比較して上昇したレベルのＩＬ−１２ｐ７０が、ＲＡ患者の滑膜中で検出されている（Ｍｏｒｉｔａら（１９９８）ＡｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄＲｈｅｕｍａｔｉｓｍ．４１：３０６−３１４頁）。ＲＡ滑液におけるサイトカインメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）発現プロフィールは、Ｔｈ１サイトカインを優勢に特定した（Ｂｕｃｈｔら（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：３４７−３６７頁）。ＩＬ−１２は、クローン病（ＣＤ）に伴う病理においても重要な役割を果たすようである。ＩＦＮγおよびＩＬ−１２の発現増加が、この疾患を有する患者の腸管粘膜で観察されている（Ｆａｉｓら（１９９４）Ｊ．ＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓ．１４：２３５−２３８頁；Ｐａｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２頁；Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら（１９９７）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１１２：１１６９−１１７８頁およびＢｅｒｒｅｂｉら（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ１５２：６６７−６７２頁）。ＣＤ患者の粘膜固有層由来のＴ細胞のサイトカイン分泌プロフィールは、大きく上昇したＩＦＮγレベルを含め、優勢なＴｈ１応答の特徴である（Ｆｕｓｓら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１２６１−１２７０頁）。さらに、ＣＤ患者由来の結腸組織切片は、多量のＩＬ−１２発現マクロファージおよびＩＦＮγ発現Ｔ細胞を示す（Ｐａｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２頁）。

種々のヒト障害におけるヒトＩＬ−１２の役割に起因して、治療戦略は、ＩＬ−１２活性を阻害または相殺するように設計されてきた。特に、ＩＬ−１２に結合してそれを中和する抗体が、ＩＬ−１２活性を阻害する手段として探索されてきた。抗原（Ａｇ）の高度に特異的な認識は、抗体（Ａｂ）が外来の侵入者に対する体液性免疫応答を開始し、自己と非自己との間を識別することを可能にする。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、自己免疫疾患を含む種々の状態の治療において、タンパク質治療剤として使用するために開発されている（Ｂｒｅｋｋｅ，Ｏ．Ｈ．およびＩ．Ｓａｎｄｌｉｅ（２００３）．「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｏｒｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｓａｔｔｈｅｄａｗｎｏｆｔｈｅｔｗｅｎｔｙ−ｆｉｒｓｔｃｅｎｔｕｒｙ．」ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ２（１）：５２−６２頁）。抗体は、疾患関連の標的分子を中和することまたは特定の細胞を破壊のために標的化することによって、治療剤として作用し得る。

インターロイキン２３（ＩＬ−２３）は、２つのサブユニットｐ１９（ＩＬ−２３αサブユニット）およびｐ４０（ＩＬ−１２のβサブユニット（即ち、ＩＬ−１２Ｂ））からなる、ヒトヘテロダイマーサイトカインタンパク質である。ＩＬ−２３は、マクロファージおよび樹状細胞を含む多数の異なる細胞によって分泌される。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２と同様に、自己免疫疾患の発症において重要であるようである。例えば、ＩＬ−２３は、多発性硬化症のマウスモデルにおいて重要な役割を果たす（Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ．、Ｊ．Ｓｈｅｒｌｏｃｋら（２００３）．「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２３ｒａｔｈｅｒｔｈａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２ｉｓｔｈｅｃｒｉｔｉｃａｌｃｙｔｏｋｉｎｅｆｏｒａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｒａｉｎ．」Ｎａｔｕｒｅ４２１（６９２４）：７４４−８頁）。

最初期の抗体のあるものは、ＩＬ−１２で免疫したマウスのリンパ球から調製したハイブリドーマによって分泌されるマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であった（例えば、Ｓｔｒｏｂｅｒらによる国際特許出願公開第ＷＯ９７／１５３２７号；Ｎｅｕｒａｔｈら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１２８１−１２９０頁；Ｄｕｃｈｍａｎｎら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：９３４−９３８頁を参照。）。これらのマウスＩＬ−１２抗体は、マウス抗体のヒトへの投与に伴う問題（例えば、短い血清半減期、特定のヒトエフェクター機能を誘発できないこと、およびヒトにおけるマウス抗体に対する望ましくない免疫応答の惹起（「ヒト抗マウス抗体」（ＨＡＭＡ反応）））に起因して、インビボでの使用が制限されている。

一般に、ヒトにおける完全マウス抗体の使用に伴う問題を克服するための試みは、より「ヒト様」になるように抗体を遺伝子操作することを含んできた。例えば、抗体鎖の可変領域がマウス由来であり抗体鎖の定常領域がヒト由来であるキメラ抗体が調製されている（Ｊｕｎｇｈａｎｓら（１９９０）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５０：１４９５−１５０２頁；Ｂｒｏｗｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：２６６３−２６６７頁；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−７８３頁）。しかし、これらのキメラ抗体およびヒト化抗体は、いくらかのマウス配列をなおも保持するので、特に長期にわたって投与される場合には、望ましくない免疫反応（ヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）反応）をなおも惹起し得る。マウス抗体またはその誘導体（例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体）に対する好ましいＩＬ−１２阻害剤は、ヒト抗ＩＬ−１２抗体全体である。かかる薬剤は、長期にわたって使用した場合であってもＨＡＭＡ反応を惹起しないからである。

１７種のｍＡｂが、治療的使用のために承認されている。例としては、マウスｍＡｂ（例えば、急性同種移植片拒絶に対するＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥＯＫＴ（登録商標）３（抗ＣＤ３）（ＯｒｔｈｏＭｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ（１９８５）．「ＡｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｏｆＯＫＴ３ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒａｃｕｔｅｒｅｊｅｃｔｉｏｎｏｆｃａｄａｖｅｒｉｃｒｅｎａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ．ＯｒｔｈｏＭｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ．」ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ３１３（６）：３３７−４２頁））、マウス可変ドメインがヒト定常ドメインに移植されているマウス−ヒトキメラｍＡｂ（例えば、関節リウマチおよびクローン病に対するＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（抗ＴＮＦα）（Ｂｏｎｄｅｓｏｎ，Ｊ．およびＲ．Ｎ．Ｍａｉｎｉ（２００１）．「Ｔｕｍｏｕｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｏｔｈｅｒｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ：ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）．」ＩｎｔＪＣｌｉｎＰｒａｃｔ５５（３）：２１１−６頁）ならびに非ホジキンリンパ腫に対するＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（抗ＣＤ２０）（Ｗｈｉｔｅ，Ｃ．Ａ．、Ｒ．Ｌ．Ｗｅａｖｅｒら（２００１）．「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．」ＡｎｎｕＲｅｖＭｅｄ５２：１２５−４５頁））、マウスの相補性決定領域（ＣＤＲ）が他のヒト免疫グロブリン中に組み込まれているヒト化ｍＡｂ（例えば、乳癌に対するＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（抗Ｈｅｒ２）（Ｓｈａｋ，Ｓ．（１９９９）．「Ｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｔｈｅｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）ａｎｔｉ−ＨＥＲ２ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｇｒａｍｉｎＨＥＲ２−ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｅｔａｓｔａｔｉｃｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ．ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＭｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ．」ＳｅｍｉｎＯｎｃｏｌ２６（４補遺１２）：７１−７頁））、ならびについ最近では、超可変残基およびフレームワーク残基の両方が天然に存在するヒト免疫グロブリン配列からきている組換えヒトｍＡｂ（例えば、関節リウマチに対するＨｕｍｉｒａ（登録商標）（抗ＴＮＦα）（Ｗｅｉｎｂｌａｔｔ，Ｍ．Ｅ．、Ｅ．Ｃ．Ｋｅｙｓｔｏｎｅら（２００３）．「Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ，ａｆｕｌｌｙｈｕｍａｎａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ，ｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｔａｋｉｎｇｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ：ｔｈｅＡＲＭＡＤＡｔｒｉａｌ．」ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ４８（１）：３５−４５頁））が含まれる。

国際公開第９７／１５３２７号

Ｋｏｂａｙａｓｈｉら（１９８９）Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１７０：８２７−８４５頁Ｓｅｄｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０１８８−１０１９２頁Ｌｉｎｇら（１９９５）Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１５４：１１６−１２７頁Ｐｏｄｌａｓｋｉら（１９９２）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２９４：２３０−２３７頁Ｇａｔｅｌｙら（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１頁Ｗｉｎｄｈａｇｅｎら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１９８５−１９９６頁Ｍｏｒｉｔａら（１９９８）ＡｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄＲｈｅｕｍａｔｉｓｍ．４１：３０６−３１４頁Ｂｕｃｈｔら（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：３４７−３６７頁Ｆａｉｓら（１９９４）Ｊ．ＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓ．１４：２３５−２３８頁Ｐａｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２頁Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら（１９９７）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１１２：１１６９−１１７８頁Ｂｅｒｒｅｂｉら（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ１５２：６６７−６７２頁Ｆｕｓｓら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１２６１−１２７０頁Ｂｒｅｋｋｅ，Ｏ．Ｈ．およびＩ．Ｓａｎｄｌｉｅ（２００３）．「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｏｒｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｓａｔｔｈｅｄａｗｎｏｆｔｈｅｔｗｅｎｔｙ−ｆｉｒｓｔｃｅｎｔｕｒｙ．」ＮａｔＲｅｖＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ２（１）：５２−６２頁Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ．、Ｊ．Ｓｈｅｒｌｏｃｋら（２００３）．「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２３ｒａｔｈｅｒｔｈａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２ｉｓｔｈｅｃｒｉｔｉｃａｌｃｙｔｏｋｉｎｅｆｏｒａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｒａｉｎ．」Ｎａｔｕｒｅ４２１（６９２４）：７４４−８頁Ｎｅｕｒａｔｈら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１２８１−１２９０頁Ｄｕｃｈｍａｎｎら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：９３４−９３８頁Ｊｕｎｇｈａｎｓら（１９９０）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５０：１４９５−１５０２頁Ｂｒｏｗｎら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：２６６３−２６６７頁Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９１）ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３−７８３頁ＯｒｔｈｏＭｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ（１９８５）．「ＡｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｏｆＯＫＴ３ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒａｃｕｔｅｒｅｊｅｃｔｉｏｎｏｆｃａｄａｖｅｒｉｃｒｅｎａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ．ＯｒｔｈｏＭｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ．」ＮＥｎｇｌＪＭｅｄ３１３（６）：３３７−４２頁Ｂｏｎｄｅｓｏｎ，Ｊ．およびＲ．Ｎ．Ｍａｉｎｉ（２００１）．「Ｔｕｍｏｕｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｏｔｈｅｒｃｈｒｏｎｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ：ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｗｉｔｈｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）．」ＩｎｔＪＣｌｉｎＰｒａｃｔ５５（３）：２１１−６頁Ｗｈｉｔｅ，Ｃ．Ａ．、Ｒ．Ｌ．Ｗｅａｖｅｒら（２００１）．「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．」ＡｎｎｕＲｅｖＭｅｄ５２：１２５−４５頁Ｓｈａｋ，Ｓ．（１９９９）．「Ｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｔｈｅｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）ａｎｔｉ−ＨＥＲ２ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｇｒａｍｉｎＨＥＲ２−ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｅｔａｓｔａｔｉｃｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ．ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＭｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ．」ＳｅｍｉｎＯｎｃｏｌ２６（４補遺１２）：７１−７頁Ｗｅｉｎｂｌａｔｔ，Ｍ．Ｅ．、Ｅ．Ｃ．Ｋｅｙｓｔｏｎｅら（２００３）．「Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ，ａｆｕｌｌｙｈｕｍａｎａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ，ｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｔａｋｉｎｇｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ：ｔｈｅＡＲＭＡＤＡｔｒｉａｌ．」ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ４８（１）：３５−４５頁

治療的ｍＡｂの３次元構造は、科学者および臨床医の両方にとってかなり興味深いものである。ｍＡｂの結合親和性および特異性、ならびにＡｇの結合および放出の動態学は全て、臨床における成功または失敗にとって重要な機能的特徴である。これらの特徴のより完全な理解は、ｍＡｂおよびｍＡｂ−Ａｇ複合体の構造の知識から得られる。これらの特性についての構造的基礎の理解は、治療用途のための抗原結合分子の合理的最適化の力もまたもたらす。したがって、抗原（例えば、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）に対する結合について最適化された治療剤（例えば、抗体およびそれに由来する抗原結合タンパク質）が、現在必要とされている。これらの抗体は、異常なＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３活性の影響を改善するのに有効である。

（発明の要旨）
本発明は、少なくとも一部は、単独またはインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）ｐ７０（本明細書中で以下ＩＬ−１２ｐ７０、または単にＩＬ−１２）と複合体化した、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体Ｊ６９５の抗原結合断片（Ｆａｂ）を含むポリペプチドのｘ線結晶研究に基づいている。この研究の結果得られた原子座標は、ｐ４０含有サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３）に結合する改善された抗体および他の抗体様結合分子（例えば、抗体断片またはドメイン抗体）を同定および設計するのに有用である。これらの改善された抗体は、ｐ４０含有サイトカインの生物学的活性によって調節されるまたはｐ４０含有サイトカインの生物学的活性に依存する状態（例えば、免疫系の不適切または望ましくない刺激に依存する状態（多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、クローン病、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、慢性炎症性疾患および移植手術後の移植片拒絶）または癌が含まれる。）を有する患者を治療する方法において使用される。

したがって、一態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｉｎｇ）断片を提供し、この抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１９７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６または１９７残基）またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、この抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１０７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、この抗体は、ｐ４０サブユニットのループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合し、この少なくとも１つのアミノ酸残基は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７からなる群から選択される。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、この抗体は、ｐ４０サブユニットのループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合し、この少なくとも１つのアミノ酸残基は、配列番号３のアミノ酸配列の残基Ａｓｐ１４、Ｔｒｐ１５、Ｔｙｒ１６、Ｐｒｏ１７、Ａｓｐ１８、Ａｌａ１９、Ｐｒｏ２０、Ｇｌｙ２１、Ｇｌｕ２２、Ｍｅｔ２３、Ｌｙｓ５８、Ｇｌｕ５９、Ｐｈｅ６０、Ｌｙｓ８４、Ｌｙｓ８５、Ｇｌｕ８６、Ａｓｐ８７、Ｇｌｙ８８、Ｉｌｅ８９、Ｔｒｐ９０、Ｓｅｒ９１、Ｔｈｒ９２、Ａｓｐ９３、Ｉｌｅ９４、Ｌｅｕ９５、Ｌｙｓ９６、Ａｓｐ９７、Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９、Ｇｌｕ１００、Ｐｒｏ１０１、Ｌｙｓ１０２、Ａｓｎ１０３、Ｌｙｓ１０４、Ｔｈｒ１０５、Ｐｈｅ１０６、Ｌｅｕ１０７、Ｔｈｒ１２４、Ｔｈｒ１２５、Ｉｌｅ１２６、Ｓｅｒ１２７、Ｔｈｒ１２８、Ａｓｐ１２９、Ａｒｇ１５７、Ｖａｌ１５８、Ａｒｇ１５９、Ｇｌｙ１６０、Ａｓｐ１６１、Ａｓｎ１６２、Ｌｙｓ１６３、Ｇｌｕ１６４、Ｈｉｓ１９４、Ｌｙｓ１９５、Ｌｅｕ１９６およびＬｙｓ１９７、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内からなる群から選択される。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−１８からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８５−９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８６−８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８６、８７、８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ループ３のアミノ酸残基８７または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１０２−１０４からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１２４−１２９からなる群から選択されるループ５の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５７−１６４からなる群から選択されるループ６の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１９４−１９７からなる群から選択されるループ７の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３、５８−６０、８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−１８、８５−９３および１０２−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−１７、８６−８９、９３および１０３−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５−１７、８６−８７、８９、９３および１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５、１７−２１、２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３および８４−９４からなる群から選択されるループ１および３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３および９５−１０７からなる群から選択されるループ１および４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ３および４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

別の実施形態において、本発明は、任意の上記抗体またはその抗原結合部分との結合について競合する、単離された抗体を提供する。

なお別の実施形態において、この単離された抗体またはその抗原結合部分は、抗体Ｙ６１でも抗体Ｊ６９５でもない。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１のアミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１以外の可変領域残基のいずれか１つは、異なるアミノ酸で独立して置換されている。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２の３５、５１および９０−１０１のうち１つまたは複数は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つまたは複数は、芳香族残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは複数は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは複数は、芳香族アミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の可変領域アミノ酸残基５１のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

一実施形態において、単離された抗体は、以下の置換のうち１つまたは複数を有する：（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である；（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；または（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１つまたは複数は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｌｙｓで置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＩｌｅまたはＴｒｐで置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＳｅｒまたはＴｈｒで置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。

一実施形態において、この単離された抗体またはその抗原結合部分は、抗体Ｊ６９５でも抗体Ｙ６１でもない。

別の態様において、本発明は、任意の上記抗体またはその抗原結合部分との結合について競合する、単離された抗体を提供する。

なお別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する方法を提供し、前記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この方法は、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１のうち１つまたは複数を、異なるアミノ酸残基で独立して置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つまたは複数は、芳香族残基で独立して置換される。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは複数は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは複数は、芳香族アミノ酸残基で独立して置換される。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換される。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換される。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換され、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、以下の置換のうち１つまたは複数を有する：（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である；（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；または（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。

一実施形態において、本発明の単離された抗体またはその抗原結合部分は、その全内容を本明細書中で参照により本明細書に組み込むＵＳ２００９／０２０２５４９中に記載されるエピトープのうち１つまたは複数にさらに結合する。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する方法を提供し、前記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この方法は、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１つまたは複数を、異なるアミノ酸残基で独立して置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｌｙｓで置換される。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＩｌｅまたはＴｒｐで置換される。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＳｅｒまたはＴｈｒで置換される。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。

一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。一実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。

別の実施形態において、本発明は、本発明の方法に従って生成された、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸残基１６、８７および９３からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープに対し１０Å以内に結合する。一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸残基１６に結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに、１×１０^−３Ｍ^−１以下のＫ_ｏｆｆまたは１×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄで結合する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの生物学的活性を中和する。

別の態様において、本発明は、本発明の単離された抗体またはその抗原結合部分および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。一実施形態において、この医薬組成物は、少なくとも１つのさらなる生物学的に活性な薬剤をさらに含む。

別の態様において、本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸を提供する。

別の態様において、本発明は、少なくとも１つの転写調節核酸配列に作動可能に連結された本発明の核酸を含む、単離された核酸ベクターを提供する。

なお別の態様において、本発明は、本発明の核酸ベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態において、宿主細胞は、真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞である。

なお別の態様において、本発明は、対象における少なくとも１つのＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３関連状態を診断する方法を提供する。この方法は、対象由来の生物学的試料を、本発明の単離された抗体またはその抗原結合部分と接触させること、ならびに試料中に存在するＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの量を測定することを含み、試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのレベルの、正常または対照と比較した上昇または低下の検出は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３関連状態の存在または非存在を示し、それにより、対象における少なくとも１つのＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３関連状態を診断する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、検出可能な標識を含んでいるか、または検出可能な標識を有する第２の分子によって検出可能である。

別の態様において、本発明は、生物学的試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つを調節する薬剤を同定する方法を提供する。この方法は、試料を、本発明の単離された抗体またはその抗原結合部分と接触させること、ならびに試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性を検出することを含み、未処理の試料と比較した、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つにおける増加または減少は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つを調節可能な薬剤を示し、それにより、試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つを調節する薬剤を同定する。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、検出可能な標識を含む、または検出可能な標識を有する第２の分子によって検出可能である。

一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１９７から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６または１９７個のアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。一実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１９７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１０７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６もしくは１０７個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、ｐ４０サブユニットのループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４もしくは５５個のアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合し、この少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４もしくは５５個のアミノ酸残基は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７からなる群から選択される。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列の少なくとも残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列の残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１の残基１４−２３を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

一実施形態において、単離された抗体は、残基１４−１８からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基、または少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つもしくは少なくとも５つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１の残基１４−１８を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体は、残基１４−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１の残基１４−１７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

なお別の実施形態において、単離された抗体は、残基１５−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２つ、または少なくとも３つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１の残基１５−１７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体は、残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２つのアミノ酸残基、または少なくとも３つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ２の残基５８−６０を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ３の残基８４−９４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８５−９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８もしくは９個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ３の残基８５−９３を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８６−８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２、３、４もしくは５個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ３の残基８６−８９および９３を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体は、残基８６、８７、８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２つ、３つまたは４つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ３の残基８６、８７、８９および９３を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

なお別の実施形態において、単離された抗体は、ループ３のアミノ酸残基８７または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２もしくは１３個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ４の残基９５−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１０２−１０４からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つ、２つまたは３つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ４の残基１０２−１０４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１２４−１２９からなる群から選択されるループ５の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５もしくは６個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ５の残基１２４−１２９を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５７−１６４からなる群から選択されるループ６の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７もしくは８個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ６の残基１５７−１６４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１９４−１９７からなる群から選択されるループ７の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３もしくは４つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ７の残基１９４−１９７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３、５８−６０、８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６もしくは３７個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１−４の残基１４−２３、５８−６０、８４−９４および９５−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、本発明は、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、この単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−１８、８５−９３および１０２−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６もしくは１７個のアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１−４の残基１４−１８、８５−９３および１０２−１０４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−１７、８６−８９、９３および１０３−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１−４の残基１４−１７、８６−８９、９３および１０３−１０４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５−１７、８６−８７、８９、９３および１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２、３、４、５、６、７もしくは８個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１−４の残基１５−１７、８６−８７、８９、９３および１０４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２もしくは１３個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１−２の残基１４−２３および５８−６０を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１５、１７−２１、２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１−２の残基１５、１７−２１、２３および５８−６０を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸残基および残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２つもしくは３つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１の残基１４−２３およびループ２の残基５８−６０を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３および８４−９４からなる群から選択されるループ１および３の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０もしくは２１個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１および３の残基１４−２３および８４−９４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸残基、および残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１の残基１４−２３およびループ３の残基８４−９４を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３および９５−１０７からなる群から選択されるループ１および４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２もしくは２３個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ１および４の残基１４−２３および９５−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸残基、および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２もしくは１３個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ２の残基１４−２３およびループ４の残基９５−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ３および４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３もしくは２４個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ３および４の残基８４−９４および９５−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１個のアミノ酸残基、および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２もしくは１３個のアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、ループ３の残基８４−９４およびループ４の残基９５−１０７を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する。

別の実施形態において、本発明は、本明細書中に開示された任意の抗体またはその抗原結合部分との結合について競合する、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。

一実施形態において、この単離された抗体またはその抗原結合部分は、抗体Ｙ６１でも抗体Ｊ６９５でもない。

一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１のアミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００および１０１以外の可変領域残基のいずれか１つは、異なるアミノ酸で独立して置換されている。一実施形態において、配列番号１のアミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００および１０１以外の可変領域残基の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０またはそれ以上は、異なるアミノ酸で独立して置換されている。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２の３５、５１および９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００および１０１のうち１つまたは複数は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２の３５、５１および９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００および１０１のうち少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１個は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２の３５、５１および９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００および１０１は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つ、２つまたは３つは、芳香族残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２は、芳香族残基で独立して置換されている。

別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７および配列番号２の３５および９２のうち１つ、２つまたは３つは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７および配列番号２の３５および９２は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは２つは、芳香族アミノ酸残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７は、芳香族アミノ酸残基で独立して置換されている。

別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１のうち１つまたは２つは、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている。なお別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。

別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、以下の置換のうち１つまたは複数を有する：（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である；（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；または（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１は全て、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち１つまたは２つは、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１、２、３、４または５つは、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。

別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｌｙｓで置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＩｌｅまたはＴｒｐで置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＳｅｒまたはＴｈｒで置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。

一実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、抗体Ｊ６９５でも抗体Ｙ６１でもない。

一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する方法を提供し、前記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この方法は、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１のうち少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１個を、異なるアミノ酸残基で独立して置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１が、異なるアミノ酸残基で置換され、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つ、２つまたは３つが、芳香族残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２が、芳香族残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは２つが、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは２つが、芳香族アミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７が、芳香族アミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１ならびに配列番号２の５１のうち１つまたは２つが、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１が、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。

別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１が、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５が、異なる芳香族アミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換され、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換され、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、以下の置換のうち１つまたは複数を有する：（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である；（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；または（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち少なくとも１つまたは２つが、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３が、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する方法を提供し、前記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この方法は、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち少なくとも１、２、３、４または５個を、異なるアミノ酸残基で独立して置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３が、異なるアミノ酸残基で置換され、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。

一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｌｙｓで置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０が、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７が、ＩｌｅまたはＴｒｐで置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７が、ＳｅｒまたはＴｈｒで置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９が、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３が、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。

一実施形態において、本発明は、本明細書中に記載の方法に従って生成された、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分またはその抗原結合部分を提供し、前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸残基１６、８７および９３からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基または少なくとも２つもしくは３つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含む立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸残基１６に結合する。一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸残基１６、８７および９３に結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに、１×１０^−３Ｍ^−１以下のＫ_ｏｆｆまたは１×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄで結合する。

別の実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの生物学的活性を中和する。

一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分には、本発明以前に当技術分野で公知であった、本明細書中で論じるエピトープに結合するいずれの抗体も含まれない。例えば、一実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、米国特許公開第２００９／０２０２５４９号（この全内容は、本明細書中で参照により本明細書に明示的に組み込む。）に記載された抗体ではない。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、米国特許第６，９０２，７３４号または米国特許第７，１６６，２８５号（これらそれぞれの全内容は、本明細書中で参照により本明細書に明示的に組み込む。）に記載された抗体ではない。別の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、米国特許第６，９０２，７６４号または米国特許第７，１６６，２８５号（これらの全内容は、本明細書中で本明細書に明示的に組み込む。）に記載された抗体Ｃ３４０ではない。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害に罹患している対象においてＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性を阻害する方法を提供し、この方法は、対象においてＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が阻害されるように、本発明の抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを含む。一実施形態において、有効量の抗体が対象に投与される。

関連の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害に罹患している対象を治療する方法を提供し、この方法は、本発明の抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを含み、それにより対象を治療する。一実施形態において、有効量の抗体が対象に投与される。

別の態様において、本発明は、療法における本発明の抗体またはその抗原結合部分の使用を提供する。別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害を治療するための、本発明の抗体またはその抗原結合部分の使用を提供する。別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害の治療のための医薬の製造における、本発明の抗体またはその抗原結合部分の使用を提供する。別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害に罹患した対象においてＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性を阻害するための、本発明の抗体またはその抗原結合部分の使用を提供する。別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害に罹患した対象においてＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性を阻害するための医薬の製造における、本発明の抗体またはその抗原結合部分の使用を提供する。

一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、乾癬、関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症および乾癬性関節炎（ｐｓｏｒｉａｓｔｉｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ）からなる群から選択される障害である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、乾癬である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、関節リウマチである。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、クローン病である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、多発性硬化症である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、乾癬性関節炎である。

一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、サルコイドーシス、掌蹠膿疱性乾癬（ｐａｌｍｏ−ｐｌａｎｔａｒｐｕｓｔｕｌａｒｐｓｏｒｉａｓｉｓ）および掌蹠膿疱症、重症手掌足底乾癬（ｓｅｖｅｒｅｐａｌｍａｒｐｌａｎｔａｒｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、活動性強直性脊椎炎（ａｃｔｉｖｅａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）および原発性胆汁性肝硬変からなる群から選択される障害である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、サルコイドーシスである。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、掌蹠膿疱性乾癬である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、掌蹠膿疱症である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、重症手掌足底乾癬である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、脊椎炎である。一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、原発性胆汁性肝硬変である。

一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、自己免疫疾患である。一実施形態において、自己免疫疾患は炎症を伴い、リウマチ性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎が含まれるがこれらに限定されない。

一実施形態において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害は、以下からなる群から選択される障害である：関節リウマチ、変形性関節症（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、若年性関節リウマチ、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎強皮症、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植片拒絶、臓器移植に伴う急性または慢性の免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（Ｈｅｎｏｃｈ−Ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｐｕｒｐｕｒｅａ）、腎臓の微視的血管炎（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性（ｓｐｏｒａｄｉｃ）多腺性機能不全（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）Ｉ型および多腺性機能不全ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節症（ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅａｒｔｈｏｐａｔｈｙ）、関節症、ライター症候群、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｉｔｉｃａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）、腸炎性滑膜炎（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｉｃｓｙｎｏｖｉｔｉｓ）、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節症、脊椎関節症（ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｏｐａｔｈｙ）、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎（ｍｙａｌｇｉｃｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／ロイヤルフリー病（ＲｏｙａｌＦｒｅｅＤｉｓｅａｓｅ）、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎（ｐｒｉｍａｒｙｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、原因不明自己免疫性肝炎、後天性免疫不全病症候群（ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＤｉｓｅａｓｅＳｙｎｄｒｏｍｅ）、後天性免疫不全関連疾患、Ｃ型肝炎、分類不能型（ｃｏｍｍｏｎｖａｒｉｅｄ）免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化性胞隔炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連間質性肺疾患、全身性強皮症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病（Ｓｊｏｄｇｒｅｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性胆管炎性びまん性（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃｄｉｆｆｕｓｅ）肺疾患、ヘモジデリン沈着症（ｈａｅｍｏｓｉｄｅｒｏｓｉｓ）関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫介在性低血糖、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｏｓｉｓ）、原発性硬化性胆管炎、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）、腎臓の微視的血管炎（ｖａｓｕｌｉｔｉｓ）、ライム病、円板状エリテマトーデス、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、***自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、インスリン依存性糖尿病、交感性眼炎、結合組織病に二次的な肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性強皮症、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫性昏睡、水晶体起因性ブドウ膜炎（ｐｈａｃｏｇｅｎｉｃｕｖｅｉｔｉｓ）、原発性血管炎および白斑。

本特許または出願ファイルは、少なくとも１つのカラーの図面を含む。カラー図面（複数可）を伴う本特許または特許出願公開公報のコピーは、請求および必要な手数料の納付に応じて、庁により提供される。

ヒトＩＬ−１２ｐ４０に結合するヒト抗体Ｊ６９５の重鎖および軽鎖の可変領域アミノ酸配列を示す図である。Ｋａｂａｔ番号を使用してアミノ酸位置を特定している。Ｊ６９５および選択された前駆体抗体のＣＤＲ配列および機能的特徴を示す図である。結合部位の中心におけるリン酸イオンの配位を可能にするＪ６９５ＣＤＲＬ３の独自のヘアピン立体配座を示す図である。ｃｉｓＨｉｓ−Ｌ９５Ａ−Ｐｒｏ０Ｌ９５Ｂペプチド結合を含み、他の残基を選択するＪ６９５のＣＤＲＬ３（Ｆａｂ結晶形Ｉ）が、密に結合した水分子（赤色の球）およびリン酸イオン（オレンジ色／赤色）と共に示されている。水素結合は灰色の線で示される。非カノニカル立体配座を採用するＪ６９５ＣＤＲＬ３を示す図である。カノニカルクラス１の代表的構造を形成するもの（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ、Ｌｅｓｋら、１９９７）（４−４−２０Ｆａｂ、ｐｄｂエントリ１ｆｌｒ（Ｗｈｉｔｌｏｗ、Ｈｏｗａｒｄら、１９９５））とＪ６９５ＣＤＲＬ３（Ｆａｂ結晶形Ｉ）との重ね合わせ。ＣＤＲＬ３は、Ｊ６９５ではより伸長されており、Ｐｒｏ−Ｌ９５Ｂを中心としたバルジを有している。これらは共に、保存されたプロリン残基の位置を変更させる。Ｊ６９５およびＩＬ−１２ｐ４０が相補的に荷電した表面を有することを示す、特に、Ｊ６９５結合部位の、高度に電気的陽性の結合間隙を示す、Ｊ６９５抗原結合部位（Ｆａｂ結晶形ＩＩ）の表面描写を示す図である。溶媒露出表面は、静電表面ポテンシャルに従って彩色している（青色、白色、赤色：＋１５、０、−１５ｋＴ／ｅ）。左側の図は、抗原結合部位の側からの図であり、右側の図は、真上からの図である。差込図：Ｆａｂ結晶形Ｉ。高度に電気的陰性の表面パッチを示す、ＩＬ−１２ｐ７０の表面描写を示す図である。静電尺度および彩色は以下のとおりである：青色、白色、赤色：それぞれ＋１５、０、−１５ｋＴ／ｅ、ｐ３５サブユニットは薄緑色に着色している。ＩＬ−１２ｐ４０のＮ末端は左側、Ｃ末端は右側である。明細書中で論じた抗体結合部位を強調している。ＩＬ−１２ｐ７０のｐ４０サブユニットに結合しているＪ６９５を示す図である。この図において、Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づき、Ｊ６９５Ｆａｂ軽鎖を薄青色に彩色し、重鎖を紺青色に彩色している。各ＣＤＲは別個の色である。ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットは黄褐色、ｐ３５サブユニットは薄緑色である。Ｊ６９５と相互作用するｐ４０上の主要なループ（殆どがドメインＤ１中）は、それぞれ別個の色である。複数の部位においてＩＬ−１２ｐ４０に結合しているＪ６９５を示す図である。この図において、Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づき、Ｊ６９５Ｆａｂを薄青色（軽鎖）および紺青色（重鎖）に彩色しており、各ＣＤＲは別個の色である。ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットは黄褐色である。Ｊ６９５およびＩＬ−１２ｐ４０上の種々の重要な接触残基に表示を付しており、ＩＬ−１２ｐ４０ループ１、３および４が示される。Ｊ６９５結合部位の表面描写を示す図である。この図において、Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づき、各ＣＤＲを別個に彩色している。これは、結合したＩＬ−１２ｐ４０の位置からの表示である。ＩＬ−１２ｐ４０の残基Ａｓｐ８７（側鎖原子が球として示される。）が、ＣＤＲＬ１、Ｌ２、Ｌ３およびＨ３によって形成されたポケット中に深く挿入されている。大きいギャップが、結合部位においてＪ６９５とＩＬ−１２ｐ４０との間に存在することを示す結晶構造である。（上）側面（図９から約９０°回転させた。）から見たＪ６９５表面。深い間隙に留意のこと。（下）ｐ４０の結合は、ＣＤＲＨ２およびＬ３とｐ４０ループ３および４との間に満たされないギャップ（矢印）を残す。キメラマッピングによりＩＬ−１２ｐ４０上に規定された６つの抗体結合部位を示す図である。二次構造要素および溶媒露出度（後（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、２０００「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）；白色、シアンおよび青色のバー：接近不能、部分的に接近可能および完全に接近可能）が、ｐ４０サブユニットのこの部分的配列アラインメント中に示される。同一の残基は緑色の四角で囲んでおり、相同残基および非保存残基は、茶色および赤色である。カニクイザルＩＬ−１２ｐ４０（示さず）は、Ｃ末端に２５残基の伸長の付加を伴って、アカゲザルｐ４０と同一である。キメラマッピングによりＩＬ−１２ｐ４０上に規定された６つの抗体結合部位の位置を示す図である。Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づく略画描写は、ＩＬ−１２ｐ４０の部位７−１２の３次元位置を示している。ｐ４０サブユニットおよびｐ３５サブユニットは、黄褐色および薄青色であり、ｐ４０のＮ末端は右側、Ｃ末端は左側である。Ｊ６９５Ｆ_Ｖは青色の影で示される。キメラマッピングによりＩＬ−１２ｐ４０上に規定された６つの抗体結合部位の位置を示す結晶構造である。Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づく表面描写は、ＩＬ−１２ｐ４０の部位７−１２（図１１）の３次元位置を示している。ｐ４０サブユニットおよびｐ３５サブユニットは、黄褐色および薄青色であり、ｐ４０のＮ末端は右側、Ｃ末端は左側である。Ｊ６９５Ｆ_Ｖ（略画）は青色の影で示される。差込図：背面図；部位７ａ、７ｂ、８、９および１１を見ることができる。キメラマッピングにより規定された６つのさらなるＩｌ−１２ｐ４０エピトープの位置を示す結晶構造である。図１３と同様、Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づく表面描写は、エピトープ２−５のおおよその位置を示している。左：エピトープ３．１、３．２および５。右：エピトープ２、４ａ、４ｂおよび４ｃ。図１５は、キメラマッピングによりＩＬ−１２ｐ４０上に規定された抗体結合部位に隣接した、さらなる抗体結合部位の位置を示す結晶構造である。Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づく表面描写。図１３と同様、部位７−１２と共に、ＩＬ−１２ｐ４０の部位１３−１８の３次元位置が示されている。差込図：背面図；部位１３、１４、１５、１６および１７を見ることができる。

本発明は、少なくとも一部は、単独またはＩＬ−１２ｐ７０と複合体化した抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体Ｊ６９５の抗原結合断片（Ｆａｂ）を含むポリペプチドのｘ線結晶研究に基づいている。この研究の結果得られた原子座標は、ｐ４０含有サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３）に結合する改善された抗体および他の抗体様結合分子（例えば、抗体断片、ドメイン抗体、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ユニボディ（ｕｎｉｂｏｄｙ）、アプタマーまたはアフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ））を同定および設計する際に使用される。上記のように、ＩＬ−２３は、ジスルフィド結合したｐ４０（ＩＬ−１２で見出されるものと同じｐ４０）およびｐ１９サブユニットから構成されるヘテロダイマーサイトカインである。

本明細書中で提供される改善された抗体は、ｐ４０含有サイトカインの生物学的活性によって調節されるまたはｐ４０含有サイトカインの生物学的活性に依存する状態（例えば、免疫系の不適切または望ましくない刺激に依存する状態（多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、クローン病、エリテマトーデス、慢性炎症性疾患および移植手術後の移植片拒絶）または癌が含まれる。）を有する患者を治療する方法において使用される。

本発明をより容易に理解できるように、特定の用語を最初に定義する。

Ｉ．定義
以下の略称および頭字語を、本特許出願において使用する。「Ａｂ」は抗体をいう。「ｍＡｂ」はモノクローナル抗体をいい、「Ｉｇ」は免疫グロブリンをいう。「Ｆａｂ」は、抗体の抗原結合断片をいう。「野生型」は、変更されていないタンパク質の天然のアミノ酸配列をいう。

用語「インターロイキン１２」または「ヒトインターロイキン１２」（本明細書中でＩＬ−１２またはｈＩＬ−１２と略称する。）には、本明細書中で使用する場合、マクロファージおよび樹状細胞によって主に分泌されるヒトサイトカインが含まれる。この用語には、３５ｋＤのサブユニット（ｐ３５）および４０ｋＤのサブユニット（ｐ４０）を含むヘテロダイマータンパク質が含まれ、これらのサブユニットは共に、ジスルフィド架橋によって一緒に連結されている。このヘテロダイマータンパク質は、「ｐ７０サブユニット」と呼ばれる。ヒトＩＬ−１２の構造は、例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら（１９８９）Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１７０：８２７−８４５頁；Ｓｅｄｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０１８８−１０１９２頁；Ｌｉｎｇら（１９９５）Ｊ．ＥｘｐＭｅｄ．１５４：１１６−１２７頁；Ｐｏｄｌａｓｋｉら（１９９２）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２９４：２３０−２３７頁中にさらに記載されている。用語ヒトＩＬ−１２は、標準的な組換え発現方法によって調製され得る組換えヒトＩＬ−１２（ｒｈＩＬ−１２）を含む意図である。

インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、細胞内病原体に対する細胞媒介性免疫を刺激するＡｇ提示細胞によって分泌される、初期の炎症促進性サイトカインである（Ｗｏｌｆ，Ｓ．Ｆ．、Ｐ．Ａ．Ｔｅｍｐｌｅら（１９９１）．「ＣｌｏｎｉｎｇｏｆｃＤＮＡｆｏｒｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ，ａｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｂｉｏｌｏｇｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｎＴａｎｄｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ．」ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４６（９）：３０７４−８１頁；Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ａ．、Ｍ．Ｒｅｎｇａｒａｊｕら（１９９２）．「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１２）ｂｙｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ．」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１３８７−１３９８頁；Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｇ．（１９９８）．「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２：ａｃｙｔｏｋｉｎｅａｔｔｈｅｉｎｔｅｒｆａｃｅｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｉｔｙ．」ＡｄｖａｎｃｅｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ７０：８３−２４３頁）。種々の自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ、クローン病および多発性硬化症）におけるサイトカインの関与は、充分に立証されている（Ｆｌａｖｅｌｌ，Ｒ．Ａ．（２００２）．「Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｏｆａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ：ｒｏｌｅｏｆＴＮＦｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒｓ．」ＣｕｒｒＴｏｐＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌ２６６：１−９頁；Ｏ’Ｓｈｅａ，Ｊ．Ｊ．、Ａ．Ｍａら（２００２）．「Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓａｎｄａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．」ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ２（１）：３７−４５頁）。特に、調節されないＩＬ−１２分泌は、不適切な自己免疫応答、例えばクローン病を生じる（Ｔｓｕｋａｄａ，Ｙ．、Ｔ．Ｎａｋａｍｕｒａら（２００２）．「Ｃｙｔｏｋｉｎｅｐｒｏｆｉｌｅｉｎｃｏｌｏｎｉｃｍｕｃｏｓａｏｆｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｉｔｉｓｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｇｒａｎｕｌｏｃｙｔａｐｈｅｒｅｓｉｓ．」ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ９７（１１）：２８２０−２８２８頁）。

用語「インターロイキン２３」または「ヒトインターロイキン２３」（本明細書中でＩＬ−２３またはｈＩＬ−２３と略称する。）には、本明細書中で使用する場合、２つのサブユニットｐ１９（ＩＬ−２３αサブユニット）およびｐ４０（ＩＬ−１２のβサブユニット（即ち、ＩＬ−１２Ｂ））からなる、ヒトヘテロダイマーサイトカインタンパク質が含まれる。ＩＬ−２３は、マクロファージおよび樹状細胞を含む多数の異なる細胞によって分泌される。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２と同様に、自己免疫疾患の発症において重要であるようであり、例えば、ＩＬ−２３は、多発性硬化症のマウスモデルにおいて重要な役割を果たす（Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ．、Ｊ．Ｓｈｅｒｌｏｃｋら（２００３）．「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２３ｒａｔｈｅｒｔｈａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２ｉｓｔｈｅｃｒｉｔｉｃａｌｃｙｔｏｋｉｎｅｆｏｒａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｒａｉｎ．」Ｎａｔｕｒｅ４２１（６９２４）：７４４−８頁）。ＩＬ２３のレセプターは、ＩＬ１２のβ１サブユニット（ＩＬ１２ＲＢ１）およびＩＬ２３特異的サブユニットＩＬ２３Ｒによって形成される。ＩＬ２３およびＩＬ１２は共に、転写アクチベーターＳＴＡＴ４を活性化でき、インターフェロンγ（ＩＦＮＧ）の産生を刺激できる。ナイーブＣＤ４（＋）Ｔ細胞に対して主に作用するＩＬ１２とは対照的に、ＩＬ２３は、メモリーＣＤ４（＋）Ｔ細胞に対して優先的に作用する。ＩＬ−２３は、感染に対する炎症応答の重要な部分である。ＩＬ２３は、マトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ９の上方制御を促進し、血管形成を増加させ、ＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤を低下させる。最近、ＩＬ−２３は、癌性腫瘍の発達に関係付けられた。ＩＬ−６およびＴＧＦ−β１と共に、ＩＬ−２３は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激して、Ｔｈ１７細胞（これは、古典的なＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞とは別である。）と呼ばれる細胞の新規サブセットへと分化させる。ｐ４０もしくはｐ１９のいずれか、またはＩＬ−２３レセプターのいずれかのサブユニット（ＩＬ−２３ＲおよびＩＬ１２Ｒ−β１）が欠損したノックアウトマウスは、多発性硬化症および炎症性腸疾患のあまり重篤でない症状を発症し、これは、炎症経路におけるＩＬ−２３の重要性を強調している。

「エピトープ」は、抗体とその抗原（複数可）との間の相互作用の部位（単数または複数）を示す、当技術分野の用語である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｊｒ．、Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓら（２００１）．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．ＰａｒｔＩＩ，Ｓｅｃｔｉｏｎ３−８．ＮｅｗＹｏｒｋ、ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ）に記載されているように、「抗体は、大きい分子（例えば、タンパク質）の表面上の小さい領域のみを一般に認識し…［特定のエピトープ］は、タンパク質フォールディングによって一緒にされた［抗原］ポリペプチド鎖の異なる部分由来のアミノ酸から構成される可能性が高い。この種の抗原決定基は、認識される構造が、抗原のアミノ酸配列中では不連続であるが３次元構造では一緒になっているタンパク質のセグメントから構成されるので、立体配座エピトープまたは不連続エピトープとして知られている。対照的に、ポリペプチド鎖の単一セグメントから構成されるエピトープは、連続エピトープまたは線状エピトープと称される。」（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｊｒ．、Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓら（２００１）．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．ＰａｒｔＩＩ、Ｓｅｃｔｉｏｎ３−８．ＮｅｗＹｏｒｋ、ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ）。

本明細書中で使用する場合、用語「立体配座エピトープ」または「非線状エピトープ」または「不連続エピトープ」は、相互交換可能に使用され、単一のタンパク質鎖中の連続アミノ酸ではない少なくとも２つのアミノ酸から構成されるエピトープをいう。例えば、立体配座エピトープは、介在するアミノ酸のストレッチによって分離されているが、本発明の抗体によって単一のエピトープとして認識されるのに充分に近接している、２つ以上のアミノ酸から構成され得る。さらなる例として、単一のタンパク質鎖上の介在するアミノ酸によって分離されたアミノ酸、または別々のタンパク質鎖上に存在するアミノ酸は、タンパク質構造または複合体の立体配座形状に起因して近位になって、本発明の抗体によって結合され得る立体配座エピトープになり得る。特定の不連続エピトープおよび立体配座エピトープは、本明細書中に記載される。

当業者によって理解されるように、一般に、本発明の抗体によって結合される線状エピトープは、抗原（例えば、ＩＬ−１２またはＩＬ−２３）の二次構造、三次構造または四次構造に依存してもしなくてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、一群のアミノ酸が天然の３次元のタンパク質構造に折り畳まれているか否かに関わらず、それら一群のアミノ酸に結合し得る。他の実施形態において、本発明の抗体は、エピトープを構成する個々のアミノ酸残基を認識しなくてもよく、エピトープを認識しそれに結合するために特定の立体配座（ベンド、ツイスト、ターンまたはフォールド）を必要とし得る。

本明細書中で使用する場合、用語「ループ」は、タンパク質の二次構造中のターンをいうために使用され、ループでは、２つのＣα原子が、互いに密接に近接しており（例えば、約７Å以内）、通常の二次構造要素（例えば、αヘリックスまたはβシート）に関与していない。ループは、充分に形成されたまたは固定された内部水素結合なしに、伸長および／または無秩序化することができる。ループには、２つのＣα原子が２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上の残基によって分離されたターンが含まれ得る。

用語「原子座標」（または「構造座標（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）」もしくは「原子モデル」）は、結晶物質の原子（ｘ線散乱中心）によるｘ線の回折で得られるパターンに関連する数学的方程式から誘導された物質中の原子の数学的３次元座標をいう、当技術分野の用語である。回折データは、結晶の単位格子の電子密度図を計算するために使用される。これらの電子密度図は、結晶の単位格子内の個々の原子の位置を確立するために使用される。原子座標は、当業者に公知のように、原子の相対的位置に影響を与えることなしに、異なる座標系に変形できる。かかる変形された原子座標は、元の座標と等価であるとみなすべきである。

特に示さない限り、用語「抗体」は、抗体全体および任意の抗原結合断片（即ち、「抗原結合部分」）またはその単一の鎖、および抗体バリアント（二重特異的形態、異種特異的形態およびヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）形態が含まれる。）を含む抗体をいうために、集合的に使用される。本発明の抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化またはヒトであり得る。免疫グロブリン分子の少なくとも一部分（例えば、重鎖もしくは軽鎖またはそのリガンド結合部分の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖もしくは軽鎖の可変領域、重鎖もしくは軽鎖の定常領域、フレームワーク領域、またはそれらの任意の一部分であるが、これらに限定されない。）を含む分子を含む任意のタンパク質またはペプチドもまた含まれる。用語「抗体」はまた、抗体様結合分子または「抗体模倣物」、例えば、抗体またはその断片もしくは一部分の構造および／または機能を模倣するが、ネイティブの抗体構造に限定されない分子をいうために、本明細書中で使用される。かかる抗体様分子には、例えば、ドメイン抗体、アドネクチン、ナノボディ、ヴァーサボディ（ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）、ユニボディ、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、ＤＡＲＰｉｎ、ペプチド性分子およびアプタマーが含まれる。

一実施形態において、「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質またはその抗原結合部分をいう。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶ_Ｈと略称される。）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶ_Ｌと略称される。）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインＣ_Ｌから構成される。Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域中に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へとさらに下位分割できる。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で整列した、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、宿主の組織または因子（免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の最初の成分（Ｃｌｑ）が含まれる。）への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

用語、抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）は、本明細書中で使用する場合、抗原（例えば、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の断片をいう。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって遂行され得ることが示されている。用語、抗体の「抗原結合部分」内に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_ＬおよびＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片（ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）；（ｉｉｉ）Ｆａｂ’断片（これは、本質的に、ヒンジ領域の一部を伴うＦａｂである。）（ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ編、第３版、１９９３年）を参照のこと。）；（ｉｖ）Ｖ_ＨドメインおよびＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｖ）抗体の単一のアームのＶ_ＬドメインおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖｉ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６頁）；（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（ｖｉｉｉ）ナノボディ（単一の可変ドメインおよび２つの定常ドメインを含む重鎖可変領域）、が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶ_ＬおよびＶ_Ｈは別々の遺伝子によってコードされているが、これらのドメインは、組換え法を使用して、Ｖ_Ｌ領域およびＶ_Ｈ領域が対になって一価の分子を形成している単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３頁を参照のこと。）としてこれらのドメインが生成されるのを可能にする合成リンカーによって、連結され得る。かかる単鎖抗体もまた、用語、抗体の「抗原結合部分」内に包含される意図である。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングされる。

本明細書中に記載または包含される抗体を構成するアミノ酸は、しばしば略称される。アミノ酸の指定は、その１文字コード、その３文字コード、または当技術分野で充分に理解されている名称によってアミノ酸を指定することによって示され得る（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．、Ａ．Ｊｏｈｎｓｏｎら（２００２）．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＴｈｅＣｅｌｌ．ＮｅｗＹｏｒｋ、ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．）：

さらに、本明細書中に記載されるアミノ酸配列は、コード配列中の単一のアミノ酸または少数のアミノ酸を変更、付加または欠失する核酸の置換、欠失または付加を含む「保存的変異」を含み、このとき核酸の変更は、化学的に類似のアミノ酸の置換を生じる。保存的アミノ酸置換とは、第１のアミノ酸の特性と類似の化学的および／または物理的特性（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第２のアミノ酸による、第１のアミノ酸の置き換えをいう。保存的置換には、１つのアミノ酸の、以下の群内の別のアミノ酸による置き換えが含まれる：リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）；Ｎ、Ｑ、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）およびチロシン（Ｙ）；Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；Ｄ、Ｅ、ＮおよびＱ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｈ、Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ；ＣおよびＡ；ＳおよびＴ；Ｓ、ＴおよびＹ；Ｖ、ＩおよびＬ；Ｖ、ＩおよびＴ。他の保存的アミノ酸置換も、問題のアミノ酸の状況に依存して、有効であるとみなされる。例えば、ある場合には、メチオニン（Ｍ）はリジン（Ｋ）を置換し得る。さらに、保存的バリエーションが異なる配列は、一般に相同である。

「単離された抗体」は、本明細書中で使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体をいう意図である（例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに特異的に結合する単離された抗体は、ＩＬ−１２／２３のｐ４０サブユニット以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。）。さらに、単離された抗体は、他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含んでいなくてもよい。

用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書中で使用する場合、単一分子の組成の抗体分子調製物をいう。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。

用語「ヒト抗体」は、本明細書中で使用する場合、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含む意図である。さらに、抗体が定常領域を含む場合、この定常領域もまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によってインビトロで導入された変異または体細胞変異によってインビボで導入された変異）を含み得る。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書中で使用する場合、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含まない意図である。

用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体をいう。一実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合した、ヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物（例えばトランスジェニックマウス）から得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。

用語「組換えヒト抗体」には、本明細書中で使用する場合、組換え手段によって調製、発現、創出または単離された全てのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックまたは染色体導入（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）な動物（例えばマウス）またはそこから調製されたハイブリドーマ（以下にさらに記載する。）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞（例えば、トランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ））から単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の、他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、創出または単離された抗体、が含まれる。かかる組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、特定の実施形態において、かかる組換えヒト抗体は、インビトロの変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックな動物が使用される場合には、インビボの体細胞変異誘発）に供され得、したがって、この組換え抗体のＶ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列のＶ_Ｈ配列およびＶ_Ｌ配列に由来するおよびそれらに関連するものの、インビボでヒト抗体の生殖系列レパートリー内には天然には存在しないものであり得る配列である。

本明細書中で使用する場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）をいう。

語句「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書中で、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と相互交換可能に使用される。

用語「ヒト抗体誘導体」は、ヒト抗体の任意の改変形態（例えば、抗体および別の薬剤または抗体のコンジュゲート）をいう。

用語「ヒト化抗体」は、別の哺乳動物種（例えばマウス）の生殖系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体をいう意図である。さらなるフレームワーク領域の改変が、ヒトフレームワーク配列内になされ得る。配列が特定の種に「由来する」場合、前記配列がタンパク質配列であり得ること（例えば、可変領域アミノ酸がマウス抗体から取られた場合）、または前記配列がＤＮＡ配列であり得ること（例えば、可変領域をコードする核酸がマウスＤＮＡから取られた場合）が、当業者に理解される。ヒト化抗体はまた、ヒト抗体および非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体の既知の配列に基づいて設計され得る。ヒト残基および非ヒト残基の両方を組み込んでいる可能性のある設計された抗体は、化学的に合成できる。この配列はまた、ＤＮＡレベルで合成され得、インビトロまたはインビボで発現されてヒト化抗体を生成し得る。

用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体（例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体）をいう意図である。

用語「抗体模倣物」または「抗体ミミック」は、抗体が抗原に結合する能力を模倣可能であるが、ネイティブの抗体構造に限定されない分子をいう意図である。かかる抗体模倣物の例には、ドメイン抗体、アドネクチン（即ち、フィブロネクチンベースの結合分子）、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、ナノボディ、ユニボディ、ヴァーサボディ、アプタマーおよびペプチド性分子が含まれるがこれらに限定されず、これらは全て、伝統的な抗体結合を模倣するものの、別個の機構を介して形成され機能する結合構造を採用している。本発明の実施形態は、抗体またはその抗原結合部分に関しているので、上記抗体模倣物にも適用される。

アミノ酸置換（「点」）変異は、野生型アミノ酸残基の型、残基番号および変異したアミノ酸残基の型によって示される。例えば、グリシン９６のアスパラギンへの点変異は、アミノ酸についての標準的な３文字略称または１文字略称を使用して、「Ｇｌｙ−９６−Ａｓｎ」または「Ｇ９６Ｎ」のいずれかとして示される。

用語「Ｋａｂａｔ番号」、「Ｋａｂａｔ定義」および「Ｋａｂａｔ標識（ｌａｂｅｌｉｎｇ）」は、本明細書中で相互交換可能に使用される。これらの用語は当技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変領域および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基よりも可変性が高い（即ち、超可変性の）アミノ酸残基に番号付けするシステムをいう（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１頁およびＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２）。例えば、本明細書中でいうヒト抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体Ｊ６９５について、超可変領域は以下のとおりである。重鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置２７から３５の範囲、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０から６５の範囲、ＣＤＲ３についてはアミノ酸位置９５から１０２の範囲である。軽鎖可変領域について、超可変領域は、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置２４から３４の範囲、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０から５６の範囲、ＣＤＲ３についてはアミノ酸位置８９から９７の範囲である（図１中に示したＪ６９５についてのＫａｂａｔ番号を参照のこと。）。

用語「活性」には、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性（例えば、ＩＬ−１２抗原に結合する抗ｈＩＬ−１２抗体）および／または抗体の中和能力（例えば、ｈＩＬ−１２に結合する抗ｈＩＬ−１２抗体は、ｈＩＬ−１２の生物学的活性を阻害する（例えば、ＰＨＡ芽球増殖（ｂｌａｓｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）の阻害またはヒトＩＬ−１２レセプター結合アッセイにおけるレセプター結合の阻害））などの活性が含まれる。

用語「改変する」は、本明細書中で使用する場合、抗体またはその抗原結合部分中の１つまたは複数のアミノ酸を変化させることをいう意図である。この変化は、１つまたは複数の位置において、アミノ酸を付加、置換または欠失することによって生成され得る。この変化は、公知の技術（例えばＰＣＲ変異誘発）を使用して生成され得る。

値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間の、文脈が特に指定しない限り下限の単位の１０分の１までの各介在する値、およびその範囲内の任意の他の示された値もしくは介在する値が、本発明の範囲内に包含されることが理解される。より小さい範囲中に独立して含まれ得るこれらのより小さい範囲の上限および下限もまた、本発明の範囲内に包含され、示された範囲内の任意の具体的に除外された限界値の影響下にある。示された範囲がこれらの限界値の１つまたは両方を含む場合、その含まれた限界値の両方をいずれも除外する範囲もまた、本発明に含まれる。

本発明の種々の態様が、以下のサブセクションにおいてより詳細に記載される。

ＩＩ．Ｊ６９５Ｆａｂの結晶構造
本明細書中の実施例は、ヒトｍＡｂＪ６９５のＦａｂを含むポリペプチドの調製および結晶化を記載している。Ｊ６９５は、治療上の有用性および診断上の有用性を有する、ヒトＩＬ−１２およびヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対する組換えヒトｍＡｂである。Ｊ６９５は、ＩｇＧ１の重鎖およびλ軽鎖定常領域アイソタイプを含む。Ｊ６９５は、ヒトＩＬ−１２に緊密に（Ｋ_ｄ１０２±２５ｐＭ）結合し、ヒトＩＬ−１２のＩＬ−１２レセプターとの相互作用を防止する（Ｓａｌｆｅｌｄら、１９９２Ｓｃｉｅｎｃｅ２５５（５０４７）：９５９−９６５頁）。同様に、Ｊ６９５は、ｈｐ４０単独およびｈＩＬ−２３の両方に緊密に結合する。完全Ｊ６９５ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔａ番号システムを参照して以下である（図１および図２を参照のこと。）：Ｈ１：^２７ＦＴＦＳＳＹＧＭＨ^３５（配列番号１のａａ２７−３５）；Ｈ２：^５０ＦＩＲＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ^６５（配列番号１のａａ５０−６６）；Ｈ３：^９５ＨＧＳＨＤＮ^１０２（配列番号１のａａ９９−１０４）；Ｌ１：^２４ＳＧＳＲＳＮＩＧＳＮＴＶＫ^３４（配列番号２のａａ２３−３５）；Ｌ２：^５０ＹＮＤＱＲＰＳ^５６（配列番号２のａａ５１−５７）；Ｌ３：^８９ＱＳＹＤＲＹＴＨＰＡＬＬ^９７（配列番号２のａａ９０−１０１）。

Ｊ６９５Ｆａｂ断片は、パパイン消化とその後の精製によって、ＣＨＯ細胞が産生したＪ６９５免疫グロブリンから調製した。Ｊ６９５について、Ｆａｂは、配列番号２の約残基１から約残基２１７までの軽鎖アミノ酸残基（配列番号２に示すとおり）を伴う、配列番号１の約残基１から約残基２２０までの重鎖アミノ酸残基（配列番号１に示すとおり）から構成される。Ｆａｂの重鎖および軽鎖は、ジスルフィド結合によって共有結合していることが多い。結合したＩＬ−１２ｐ７０（ｐ４０鎖）と相互作用する特異的Ｊ６９５Ｆａｂアミノ酸残基は、以下でより詳細に論じる。

Ｊ６９５Ｆａｂを、種々の条件下で結晶化した。特に、Ｆａｂは、斜方晶空間群Ｐ２_１２_１２_１、ａ＝５３．９２Å、ｂ＝６７．３６Å、ｃ＝１１５．７９Åで結晶化した。この結晶形は、本明細書中で「フォームＩ」という（図４を参照のこと。）。特に、Ｊ６９５Ｆａｂは、単斜晶空間群Ｐ２_１、ａ＝８５．６２Å、ｂ＝１７３．４１Å、ｃ＝１３９．８５Å、β＝１０５．５°でも結晶化した。この結晶形は、本明細書中で「フォームＩＩ」という（図５を参照のこと。）。用語「空間群」は、結晶の単位格子の対称要素の集合をいう当技術分野の用語である。用語「単位格子」は、結晶の構成単位と同種の、基礎的な反復単位をいう当技術分野の用語である。これらの結晶形態のいずれも、以前には報告されていなかった。

７つのパラメータが、結晶の対称性および幾何学的特徴を一意的に記述する。これらのパラメータは、空間群（対称性）、３つの単位格子の軸長「ａ」、「ｂ」および「ｃ」、ならびに３つの単位格子の軸間角「α」、「β」および「γ」（幾何学）である。「単位格子の軸長」および「単位格子の軸間角」は、単位格子の３次元幾何学的特徴（本質においてその長さ、幅および高さ）をいい、構成単位が垂直であるか斜平行六面体であるかをいう、当技術分野の用語である。単位格子の軸長および軸間角は、その単位格子内の分子の配置を実質的に変更することなしに、±１０％も変動し得る。したがって、結晶格子の軸長および軸間角のそれぞれが、「約」特定の値として本明細書中で言及される場合、これは、これらの単位格子の軸長および軸間角の任意の組み合わせが、示された値から±１０％も変動し得ることを意味すると理解すべきである。同様に、特定の場合、結晶の空間群（およびしばしば単位格子パラメータと組み合わせて）は、当初は変更された対称性（および幾何学的）特徴を有する異なる結晶であるように見える結晶を提供するために変更され得る。しかし、実際には、この見かけ上新しい結晶は、実質的に同じ結晶形態を記述する別の方法に過ぎない。以下および実施例に詳細に記載するように、Ｊ６９５Ｆａｂは、単斜晶空間群Ｐ２_１で結晶化した。実質的に同じ結晶を提供するまたは提供しないのいずれかである結晶パラメータ変動の上記の論述の全てに関して、本明細書中に示されるＪ６９５Ｆａｂ結晶形態は、実質的に同じ結晶分子配置を記述するための代替的な同等に有効な方法に関わらず、独自である。

本明細書中で報告されるＰ２_１２_１２_１の斜方晶単位格子は、結晶学的非対称単位中に１つのＪ６９５Ｆａｂ分子を含む。用語「非対称単位」は、インタクトな単位格子を最初に生成し、次いで数学的並進対称操作の適用によって巨視的結晶全体を生成するために、特定の空間群に限られる当業者によく知られた数学的対称操作を使用して拡張され得る、結晶の分子内容の独自の部分をいう当技術分野の用語である。本明細書中で報告されるＰ２_１の単斜晶単位格子は、結晶学的非対称単位中に８つのＪ６９５Ｆａｂ分子を含む。フォームＩＩ結晶中の８つの独自のＦａｂは、非結晶学的擬似対称（ｐｓｅｕｄｏｓｙｍｍｅｔｒｙ）によって、互いに関連している。特に、＜０１１＞の結晶学的方向にほぼ沿った反平行様式で配置された２つのＦａｂは、［１００］に対して平行な擬似２回転（ｐｓｅｕｄｏ−ｔｗｏ−ｆｏｌｄｒｏｔａｔｉｏｎ）軸（「ダイアド（ｄｙａｄ）」）で互いに関連している。第２のＦａｂ対は、同じダイアドの周りに整列されるが、約１／２ａずれている。このテトラマーＦａｂアセンブリは、並進ベクトル［約１／２ａ、約１／２ｂ、約１／２ｃ］で複製されて、結晶学的非対称単位中に他の４つのＦａｂを与える。本明細書中で報告される新たなＪ６９５Ｆａｂ結晶形は両方とも、この抗体の抗原結合部位の詳細な原子配置を提供する利点を有する。

結晶学的構造決定によって示されるように、空間群Ｐ２_１２_１２_１のＪ６９５Ｆａｂ結晶は、実際、結晶学的非対称単位中にＪ６９５Ｆａｂ分子を１つ含むだけでなく、多くの秩序化された水分子もまた含む。結晶学的構造決定によって示されるように、空間群Ｐ２_１の新規Ｊ６９５Ｆａｂ結晶もまた、実際に、結晶学的非対称単位中にＪ６９５Ｆａｂ分子を８つ含むだけでなく、多くの秩序化された水分子もまた含む。

さらに、当業者に明らかなように、上記２つの結晶形態と実質的に異ならないさらなる結晶形が、タンパク質の僅かな改変または結晶化条件（例えば、使用するタンパク質の正確な形態）によって得られ得る。異なる空間群で存在し得る、したがって、一見別個であると思われるこれらの他の結晶形は、本明細書中で報告される結晶形と等価であるとみなすべきである。

実施例に記載されるように、特定のこれらの結晶をｘ線結晶解析によって試験し、ポリペプチドの原子座標を得た。Ｊ６９５Ｆａｂの結晶構造を、分子置換を使用して決定し、それぞれフォームＩおよびフォームＩＩの結晶について、１．３４Åおよび２．１０Åの解像度で、１９．７％および２６．１％のフリーＲ因子（ｆｒｅｅＲ−ｆａｃｔｏｒ）まで精緻化した。「フリーＲ因子」（または「Ｒ_ｆｒｅｅ」）は、結晶から実験的に決定されたｘ線回折データと実験データを説明するために構築された原子モデル（または原子座標）から計算した理論的回折データとの間の、不偏の程度の一致を示す、当技術分野の用語である。Ｒ_ｆｒｅｅ値は通常、０％（これは、完全一致を示す。）よりも大きく；１０％−３０％の範囲内の値は、原子モデルと実験データとの間のかなり正確な一致を示す。Ｒ_ｆｒｅｅ値は典型的に、実験的に決定されたｘ線回折データの解像度に依存する。より低い解像度のデータ（例えば、４Åから２Åまでの解像度）は一般に、より高いＲ_ｆｒｅｅ値と関連し、より高い解像度のデータ（例えば、１Åから２Åまでの解像度）は一般に、より低いＲ_ｆｒｅｅ値と関連する。

１．Ｊ６９５のＣＤＲＬ３は、異常なｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓペプチド結合異性化を示す。

Ｊ６９５結晶形Ｉにおいて、ＣＤＲＬ３（残基Ｌ８９−Ｌ９７）は、Ｈｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３とＰｒｏ−Ｌ９５Ｂ^Ｌ３との間にｃｉｓ−ペプチド結合を含む（図２）。かかるｃｉｓ−プロリンは、ＣＤＲＬ３のカノニカルクラス１および２の保存された構造的特徴である。Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．およびＡ．Ｍ．Ｌｅｓｋ（１９８７）．「ＣａｎｏｎｉｃａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓｆｏｒｔｈｅＨｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅＲｅｇｉｏｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．、Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋら（１９８９）．「Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３頁．．Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．、Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋら（１９９７）．「Ｓｔａｎｄａｒｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｃａｎｏｎｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８頁；Ｂａｒｒｅ，Ｓ．、Ａ．Ｓ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら（１９９４）．「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓｉｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．」ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ１（１２）：９１５−９２０頁を参照のこと。対照的に、ＣＤＲＬ３は、フォームＩＩの別個の立体配座をとり、この立体配座では、Ｈｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３−Ｐｒｏ−Ｌ９５Ｂ^Ｌ３ペプチド結合は、ｔｒａｎｓの立体配置をとる。この立体配置切り替えによってもたらされるＬ３の再配置は、抗インフルエンザウイルスヘマグルチニンＦａｂ１７／９について最初に記載されたＨ３の誘導適合再配置（Ｒｉｎｉ，Ｊ．Ｍ．、Ｕ．Ｓｃｈｕｌｚｅ−Ｇａｈｍｅｎら（１９９２）．「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｉｎｄｕｃｅｄｆｉｔａｓａｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．」Ｓｃｉｅｎｃｅ２５５（５０４７）：９５９−６５頁）および自己抗体ＢＶ０４−０１（Ｈｅｒｒｏｎ，Ｊ．Ｎ．、Ｘ．Ｍ．Ｈｅら（１９９１）．「Ａｎａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙｔｏｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｔｈｅｕｎｌｉｇａｎｄｅｄＦａｂａｎｄａｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−Ｆａｂｃｏｍｐｌｅｘ．」Ｐｒｏｔｅｉｎｓ１１（３）：１５９−７５頁）と類似している。この切り替えに起因して、２つの結晶形のＬ３ＣＤＲは、重なり合いに乏しく、２．３Åのｒ．ｍ．ｓ．偏差を有するが、他の５つのＣＤＲはよく重なり合い、０．２−０．４Åのｒ．ｍ．ｓ．偏差を有する。

ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ（２００３年３月２８日の時点で４５３のＡｂ構造エントリが入手可能）（Ｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ｍ．、Ｔ．Ｂａｔｔｉｓｔｕｚら（２００２）．「ＴｈｅＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔ．Ｄ５８：８９９−９０７頁）の体系的なアルゴリズム検索を実施して、両方とも全体としての抗体においてであるが、特にＣＤＲ内で、ｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓペプチド結合異性化の例を同定した。多数の擬似ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ対の排除を可能にする本明細書中で使用されるアルゴリズムは、Ｊ６９５で観察されたこの現象の以前の例（即ち、抗一本鎖ＤＮＡｍＡｂＤＮＡ−１）を１つだけ同定した（Ｔａｎｎｅｒ，Ｊ．Ｊ．、Ａ．Ａ．Ｋｏｍｉｓｓａｒｏｖら（２００１）．「ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｎＡｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇＦｒａｇｍｅｎｔＢｏｕｎｄｔｏＳｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ．」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１４：８０７−８２２頁）。したがって、Ｊ６９５だけが、ｃｉｓおよびｔｒａｎｓの両方の立体配置をとる任意のＣＤＲ中のペプチド結合を明白に示す第２のＡｂであり、ＣＤＲＬ３中のｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓ異性化を示す最初のＡｂであると考えられている。

２．ＣＤＲＬ３は、２つの新規な伸長ヘアピン立体配座をとる。

両方の結晶形において、Ｊ６９５のＣＤＲＬ３は、以前には観察されなかった別個の伸長ヘアピン立体配座をとる（図３）。Ｌ３は、１２残基の異常な長さであり、最も長いものは、構造的に特徴付けられたＡｂでなおも見られる。Ｌ３の異常な長さが、Ｌ３がその異常な立体配座をとることを可能にしている可能性が高い。

ＣＤＲＬ３は、カノニカルクラス１および２において以前に記載された位置９８Ｂにおける保存されたｃｉｓ−プロリンの存在にもかかわらず、３残基の伸長および保存された残基Ｇｌｎ−Ｌ９０の欠如に起因して、結晶形Ｉの独自の立体配座をとる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ１９８７Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３頁；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ１９８９Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３頁；ＢａｒｒｅおよびＧｒｅｅｎｂｅｒｇ１９９４ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ１（１２）：９１５−９２０頁；Ａｌ−ＬａｓｉｋａｎｉおよびＬｅｓｋ１９９７Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８頁）。Ｌ３立体配座はまた、ＭａｒｔｉｎおよびＴｈｏｒｔｏｎ（ＭａｒｔｉｎおよびＴｈｏｒｎｔｏｎ１９９６Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００−８１５頁）によって記載されたより新しいカノニカルクラスターのいずれにも対応せず、彼らが報告した新規非クラスターループ構造のいずれとも似ていない。過剰な残基は、Ｌ３がフレームワークから伸長し、Ｐｒｏ−Ｌ９５Ｂ^Ｌ３の周囲にバルジを形成することを可能にし、それにより、抗原結合部位の１端の境界を定める。この立体配座において、ｃｉｓ−プロリンは、カノニカルクラス１において観察される立体配座に対して反転しており、その結果、Ｃ_β原子は、抗原結合部位から離れるのではなく、抗原結合部位に向いている（図４）。

３つの密に結合した水分子は、伸長したＬ３立体配座を安定化する。通常保存されたＧｌｎ−Ｌ９０の構造的役割と類似した構造的役割を果たす、Ｌ３ヘアピンの中心の１つの水分子は、Ｔｈｒ−Ｌ９５^Ｌ３の側鎖（３．０Å）、Ａｓｐ−Ｌ９２^Ｌ３（３．１Å）およびＡｌａ−Ｌ９５Ｃ^Ｌ３（２．７Å）の主鎖カルボニル酸素原子、ならびにＡｓｐ−Ｌ９２^Ｌ３のアミド窒素（２．９Å）に対する水素結合を形成する（図３）。ヘアピンの先端に位置する第２の水は、Ａｒｇ−Ｌ９３^Ｌ３のカルボニル酸素（３．１Å）およびＨｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３のアミド窒素（２．７Å）に対する水素結合を形成し、第３の水は、Ｔｙｒ−Ｌ９４^Ｌ３のカルボニル酸素に対する水素結合（２．８Å）を形成する。ｃｉｓペプチド結合もまた、この新規構造を形成する助けになる。結合したリン酸（または硫酸）が、Ｌｙｓ−Ｌ３４^Ｌ１のＮ^ζ原子、Ｐｒｏ−Ｌ９５Ｂ^Ｌ３のカルボニル酸素、Ｔｙｒ−Ｌ９１^Ｌ３Ｏ^η、Ｈｉｓ−Ｈ３５^Ｈ１Ｎ^ε１およびＨｉｓ−Ｈ９５^Ｈ３Ｎ^δ１との水媒介性の直接的相互作用を介して、Ｌ１、Ｌ３、Ｈ２およびＨ３ＣＤＲ（図３）を連結している。

ＣＤＲＬ３は、ｔｒａｎｓ立体配置へのＨｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３−Ｐｒｏ−Ｌ９５Ｂ^Ｌ３ペプチド結合の異性化に部分的に起因して、結晶形ＩＩの、別個の非カノニカルでもある立体配座をとる。Ｌ３立体配座は、いくつかの密に結合した水分子との水素結合相互作用によって、フォームＩと類似の様式で固定されるが、Ｔｈｒ−Ｌ９５^Ｌ３の側鎖に対する水素結合は欠如している。フォームＩで見られるものとは異なる水媒介性の相互作用には、Ｇｌｎ−Ｌ３１^Ｌ１の側鎖ならびにＴｈｒ−Ｌ９５^Ｌ３およびＨｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３のいくつかの主鎖原子に対する架橋水素結合が含まれる。

３．第２のＦａｂの結合部位中へのＣＤＲＬ３の挿入は、抗原結合を模倣する。

結晶格子中の１分子から、第２の分子の抗原結合部位中へのＬ３の挿入は、結晶形ＩＩのＬ３立体配座を強化する。フォームＩでは見出されないこの分子間接触は、結晶学的対称関連のＦａｂ由来のＬ３’とＨ３’との間にＬ３を押し込む。この相互Ｌ３交換は、結晶形Ｉ中で観察される結合したリン酸アニオンを置き換え、生じた空隙は、ＣＤＲの通常の内向きの「締め付け（ｔｉｇｈｔｅｎｉｎｇ）」、２つの充分秩序化された水分子およびＴｙｒ−Ｌ’９４^Ｌ３の側鎖によって満たされる。

ｃｉｓ−ｔｒａｎｓ異性化および広範な結晶充填接触の引き続く形成によって引き起こされる、フォームＩＩのＣＤＲＬ３の先端の再編成は、抗原結合間隙中への、Ａｒｇ−Ｌ９３^Ｌ３からＨｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３への１５３°の残基の回転として記載され得る。Ａｒｇ−Ｌ９３^Ｌ３Ｃ^αおよびＰｒｏ−Ｌ９５Ｂ^Ｌ３のピロリジン環によっておおよそ規定される軸の周りでのこの回転は、Ｔｈｒ−Ｌ９５^Ｌ３を抗原結合部位に向けて９Åを超えてシフトさせる。Ｔｙｒ−Ｌ９４^Ｌ３のＣ^α原子は７．４Å移動し、その側鎖は、結合部位（Ｏ^ηは１５Å移動する。）中に回転して、対称関連Ｔｙｒ−Ｌ’９１^Ｌ３のＯ^ηに対する水素結合を形成する。Ｈｉｓ−Ｌ９５Ａ^Ｌ３は、２つの結晶形間でその配向を反転させる。いくつかのさらなる接触が、フォームＩＩにおいてＬ３と対称関連Ｈ２ＣＤＲおよびＨ３ＣＤＲとの間で観察される。対照的に、結晶形ＩのＣＤＲＬ３は、単一の分子間接触のみを形成する。

したがって、Ｊ６９５のＣＤＲＬ３は、抗原に対する２つのかなり異なる抗原結合部位をＡｂが提示するのを可能にする立体配置異性化を示す。結晶形ＩＩで観察される分子間Ａｂ／Ａｂ相互作用は、Ａｂ／Ａｇ相互作用を模倣し得る。

４．Ｊ６９５は、抗原結合の特徴である可変ドメイン界面にて、構造的変更を示す。

２つの結晶形中の可変ドメイン間の界面はかなり異なっており、フォームＩはリガンド結合していないＡｂと類似しており、フォームＩＩはリガンド結合したＡｂと類似している。第１に、非常に短い（６残基）ＣＤＲＨ３は、フォームＩＩのみで秩序化され、「バルジドトルソ（ｂｕｌｇｅｄｔｏｒｓｏ）」立体配座をとる（Ｍｏｒｅａら、１９９８Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ２７５：２６９−２９４頁）。上で論じたように、４つのＨ３残基Ｈ９６−Ｈ１０１の秩序化は、ＩＬ−１２との相互作用を置換し得る結晶接触の形成と関連している。抗原結合の際のＨ３の秩序化および立体配座変化が、一般に観察されている（ＳｔａｎｆｉｅｌｄおよびＷｉｌｓｏｎ１９９４ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２（７）：２７５−９頁）。

第２に、Ｖ_Ｌ−Ｖ_Ｈ界面において埋め込まれた溶媒露出表面積は、フォームＩからフォームＩＩで、３８％増加する（１，１１４Å^２対１，５４０±２８Å^２）。かかる増加はまた、非結合状態から抗原結合状態への変形の特徴である（Ｓｔａｎｆｉｅｌｄら、１９９３Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１５：８３−９３頁）。この増加の約３分の２は、Ｈ３の秩序化に起因する。表面積の差異と一致して、フォームＩ中のＶ_Ｌ−Ｖ_Ｈ界面は、水素結合相互作用（Ｇｌｎ−Ｌ３８の側鎖とＧｌｎ−Ｈ３９の側鎖との間の共通の埋め込まれた相互交換）を１つだけ含むが、フォームＩＩ中の界面は８つ有する。Ｖ_Ｌ−Ｖ_Ｈ界面におけるこれらの変化は、Ｃ_Ｌ−Ｃ_Ｈ１界面の定常性と対照をなす：Ｃ_ＬとＣ_Ｈ１との間の埋め込まれた表面積は、２つの結晶形において類似である（フォームＩ：１，７０２Å^２；フォームＩＩ：１，７５７＋１５９Å^２、範囲１，５１２−２，００３Å^２）。可変ドメインが示す定常性（１．８％）と比較した、フォームＩＩのＣ_Ｌ−Ｃ_Ｈ１界面における比較的大きい可変性（９％）は、フォームＩＩの定常ドメインのいくつかにおけるより高い程度の無秩序（より高い温度要因によって反映される。）に起因している可能性が高い。

第３に、結晶形ＩＩのＦａｂは、フォームＩと比較して、Ｖ_ＬをＶ_Ｈに関連付ける擬似２回転軸における変化を示す。フォームＩＩの８つのＶ_ＬドメインをフォームＩのＶ_Ｌ上に整列させる場合、さらなる回転をフォームＩＩのＶ_Ｈドメインに適用して、フォームＩのＶ_Ｈと整列させる必要がある。これらの回転は、平均２．１±０．９°（０．８−４．０°の範囲）である。かかるＶ_Ｌ−Ｖ_Ｈ回転の整列ミスは、リガンド結合したＦａｂとリガンド結合していないＦａｂとの間の差異の特徴である（Ｓｔａｎｆｉｅｌｄら、１９９３Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１５：８３−９３頁）。これらの回転の差異は、８つのフォームＩＩＦａｂのうち６つが、フォームＩと同一のエルボー角（ｅｌｂｏｗａｎｇｌｅ）を有する（１３６±５°対１３５°）ので、エルボー角の変化と関連付けられない。

５．Ｊ６９５の抗原結合部位は、負に荷電したペプチドに結合する準備がされた、顕著な正に荷電した間隙を有する。

両方の結晶形において、Ｊ６９５のＣＤＲは、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に深い間隙を形成する、これは、小分子ハプテンに対する抗体の、より典型的な結合部位である（図５）。対照的に、タンパク質に対する抗体の殆どは、比較的平坦な表面を有する抗原結合部位を含む（ＭａｃＣａｌｌｕｍ，Ｒ．Ｍ．、Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎら（１９９６）．「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：ｃｏｎｔａｃｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ．」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２−７４５頁）。この間隙は、結晶形Ｉでは両端で開放されているが、フォームＩＩでは両端で閉鎖されている。フォームＩＩにおけるＣＤＲＬ３の再編成は、間隙の一方の端を閉鎖し、Ｈ３の秩序化は、間隙の床部（ｆｌｏｏｒ）を完成させ、もう一方の端を閉鎖する。閉鎖された間隙は約９Åの幅（Ｖ_ＨからＶ_Ｌまで）、約１１Åの深さ（床部からＣＤＲ先端まで）および約１３Åの長さ（Ｈ３からＬ３まで）である。間隙の床部は、高度に電気的陽性である。したがって、Ｊ６９５は、ＩＬ−１２の表面から伸びる負に荷電したペプチドループに結合するために必要な、幾何学的特徴および荷電特徴を有する。

Ｊ６９５抗原結合部位の正の荷電を減少させ、それによって負に荷電したＩＬ−１２（図６）に対するその相補性に干渉する変異は、結合能力の喪失を引き起こす（ＰＣＴ公開ＷＯ００５６７７２Ａ１を参照のこと。）。正に荷電した間隙に寄与する残基には、以下が含まれる：Ａｓｎ−Ｌ３１^Ｌ１（配列番号２のａａ３２）；Ｌｙｓ−Ｌ３４^Ｌ１（配列番号２のａａ３５）；Ｇｌｎ−Ｌ８９^Ｌ３（配列番号２のａａ９０）；Ｈｉｓ−Ｈ３５^Ｈ１（配列番号１のａａ３５）；Ｌｙｓ−Ｈ９３（配列番号１のａａ９７）；Ｈｉｓ−Ｈ９５^Ｈ３（配列番号１のａａ９９）；Ｈｉｓ−Ｈ９８^Ｈ３（配列番号１のａａ１０２）；Ａｓｎ−Ｈ１０２^Ｈ３（配列番号１のａａ１０４）；およびＴｒｐ−Ｈ１０３（配列番号１のａａ１０５）。

Ｊ６９５前駆体Ｊｏｅ９のＣＤＲＨ３は、これらの残基のうち３つを欠いている。Ｈｉｓ−Ｈ９５^Ｈ３およびＨｉｓ−Ｈ９８^Ｈ３単独の導入は、ｍＡｂ７０−１において、約５倍の結合の改善をもたらした（図２）。１１０−１１を提供するための、７８−３４における再配置されたＬ３アルギニン残基との組み合わせは、５０倍よりも大きい改善を導いた。１０３−１４における通常と異なる配置（Ｍｏｒｅａ，Ｖ．、Ａ．Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら（１９９８）．「ＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｔｈｉｒｄｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＶＨｄｏｍａｉｎｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７５：２６９−２９４頁）のフレームワーク残基Ｌｙｓ−Ｈ９３の付加は、Ｊｏｅ９と比較して、有効性における１，０００倍の増加を提供した。高度に最適化されたＹ６１においてさえも、これらの正に荷電した残基の変異は、ＩＬ−１２結合に対して測定可能な影響を有した。例えば、負に荷電したグルタミン酸へのＹ６１Ｈｉｓ−Ｈ９５^Ｈ３の変異は、ｋ_ｏｆｆ速度定数における８倍の増加を引き起こし（および推論の結果、親和性における減少も同様）、アスパラギン酸へのＡｓｎ−Ｌ３１^Ｌ１の変異は、２．５倍の増加を導いた。したがって、親和性成熟データ、荷電相補性および単純な幾何学的考慮事項は全て、Ｊ６９５が、ＩＬ−１２上の突出した負に荷電したループに結合することを示している。

ＩＩＩ．ＩＬ−１２ｐ７０（ｐ４０／ｐ３５）に結合したＪ６９５Ｆａｂの結晶構造
ヒトｍＡｂＪ６９５のＦａｂを含むポリペプチドとヒトＩＬ−１２ｐ７０を含むポリペプチドとの間での複合体を調製した。上に示したように、ヒトＩＬ−１２ｐ７０は、２つのサブユニット、ｐ４０ポリペプチド鎖およびｐ３５ポリペプチド鎖から構成される。前駆体（またはプロペプチド）ｐ４０鎖のアミノ酸残基は、配列番号５として示す。前駆体（またはプロペプチド）ｐ３５鎖のアミノ酸残基は、配列番号６として示す。成熟ｐ４０鎖のアミノ酸残基、即ち、配列番号５の約残基２３から約残基３２８までは、成熟ｐ３５鎖のアミノ酸残基、即ち、配列番号６の約残基２３から約残基２１３までと会合して、ＩＬ−１２ｐ７０ヘテロダイマーサイトカインを形成する。ｐ４０鎖およびｐ３５鎖は、ジスルフィド結合によって共有結合される。これ以降、本特許出願において、ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチドおよびＩＬ−１２ｐ３５ポリペプチドの成熟番号を使用する。Ｊ６９５Ｆａｂと相互作用する特定のＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基は、以下でより詳細に論じる。

ネイティブヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸配列（配列番号５）は、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ；ＥｎｔｒｙＮａｍｅ：ＩＬ１２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ；ＰｒｉｍａｒｙＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｕｍｂｅｒ：Ｐ２９４６０）において規定されたように取得する。このＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴエントリにおけるアミノ酸残基２３−３２８は、配列番号３に示されるような成熟ＩＬ−１２ｐ４０ポリペプチド（本明細書中で残基１−３０６と呼ぶ。）に対応する。ネイティブヒトＩＬ−１２ｐ３５のアミノ酸配列（配列番号６）は、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ；ＥｎｔｒｙＮａｍｅ：ＩＬ１２Ａ＿ＨＵＭＡＮ；ＰｒｉｍａｒｙＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｕｍｂｅｒ：Ｐ２９４５９）において規定されたように取得する。このＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴエントリにおけるアミノ酸残基２３−２１９は、配列番号４に示されるような成熟ＩＬ−１２ｐ３５ポリペプチド（本明細書中で残基１−１９７と呼ぶ。）に対応する。

実施例に記載したように、この複合体を、多様な条件下で結晶化した。特に、Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体は、斜方晶空間群Ｃ２２２_１、ａ＝１３６．３１５１Å、ｂ＝２０９．５５６０Å、ｃ＝２１７．１１２７Åで結晶化した。この結晶形態は、以前には報告されていない。

以下および実施例においてより詳細に記載するように、本明細書中で報告されるＣ２２２_１の斜方晶単位格子は、結晶学的非対称単位中に２分子のＪ６９５Ｆａｂおよび２分子のＩＬ−１２ｐ７０を含む。結晶学的構造決定によって示されるように、空間群Ｃ２２２_１の新たなＪ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体結晶は、実際に、結晶学的非対称単位中に２分子のＪ６９５Ｆａｂおよび２分子のＩＬ−１２ｐ７０を含むだけでなく、多くの秩序化された水分子もまた含む。

さらに、当業者に明らかなように、上記斜方晶形態と実質的に異ならないさらなる結晶形が、タンパク質の僅かな改変または結晶化条件（例えば、使用したタンパク質の正確な形態）によって得られ得る。異なる空間群で存在し得る、したがって、一見別個であると思われるこれらの他の結晶形は、本明細書中で報告される結晶形と等価であるとみなすべきである。

実施例に記載するように、特定のこれらの結晶をｘ線結晶解析によって試験し、ポリペプチドの原子座標を得た。特に、ｘ線結晶解析によって試験した本明細書中で報告されるＣ２２２_１結晶形は、Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ７０との間の正確な分子相互作用（その結合部位における両分子の３次元立体配座が含まれる。）、ならびにどのＩＬ−１２アミノ酸残基が結合部位またはエピトープを構成するかを明らかにするという利点を有する。Ｊ６９５ＦａｂとＩＬ−１２ｐ７０との間の１対１の複合体の結晶構造を決定し、３．２５Åの解像度で２８．７％のフリーＲ因子まで精緻化した。

ＩＶ．ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体
本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット、好ましくは本明細書中に記載されるｐ４０サブユニットの特定のドメインまたは一部分または立体配座エピトープ、例えば、成熟ヒトｐ４０タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列の残基１−１９７から選択される少なくとも１つのアミノ酸を含む一部分および／または立体配座エピトープに、特異的に結合する。好ましい実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分の、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対する結合は、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性ならびに／またはｐ４０含有サイトカインの活性を、調節する（例えば、阻害するまたは低下させる。）。例えば、この抗体またはその抗原結合部分は、ｐ４０含有サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２またはＩＬ−２３）の、そのレセプター（例えば、それぞれＩＬ−１２レセプターまたはＩＬ−２３レセプター）への結合を遮断し得る。

本発明の抗体は、ｐ４０サブユニットの特定のドメインまたは一部分、例えば、成熟ヒトｐ４０タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列の残基１−１９７から選択される少なくとも１つのアミノ酸を含む一部分に結合するように、選択または設計される。一実施形態において、本発明の抗体は、成熟ヒトｐ４０タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列の残基１−１９７から選択される少なくとも１つのアミノ酸を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合するように、選択または設計される。他の実施形態において、本発明の抗体は、ｐ４０サブユニットのループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合するように、選択または設計され、例えばこのとき、少なくとも１つのアミノ酸残基は、成熟ヒトｐ４０タンパク質（配列番号３）のアミノ酸配列の残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７から選択される。他の実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのドメインに対する相同性を共有するタンパク質に結合するように、選択または設計される。例えば、抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのドメインに対して少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一のドメインに結合するように、選択または設計され得る。かかる抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのドメインと機能的に類似するタンパク質ドメインに結合できる。

一実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸の連続ストリングを提示するタンパク質モチーフに結合する。他の実施形態において、この抗体またはその抗原結合部分は、タンパク質中の３次元構造を提示するタンパク質モチーフまたはコンセンサス配列に結合する。かかるモチーフまたはコンセンサス配列は、アミノ酸の連続ストリングを提示しないが、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの３次元フォールディングから生じる非連続アミノ酸の配置（即ち、「構造モチーフ」または「非線状エピトープ」）を提示する。かかるモチーフの例は、セクションＩＶ（Ｃ）の表４に記載されるエピトープ１（例えば、ヒトｐ４０のＴｙｒ１６、Ａｓｐ８７およびＡｓｐ９３を含む。）である。一実施形態において、本発明の抗体は、例えば、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのループ１−７由来の１つまたは複数のアミノ酸残基を含む非線状エピトープに結合する。本発明の抗体は、以下のサブセクションにさらに詳細に記載される。

Ａ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造に基づく抗体
１．ＩＬ−１２ｐ４０に対する接触
Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造は、Ｊ６９５がｐ４０サブユニットを介してＩＬ−１２に結合することを示す。Ｊ６９５とｐ３５サブユニットとの間には接触はない（図７）。ＩＬ−１２ｐ４０サブユニットのアミノ酸残基に対する言及は全て、配列番号３に示される成熟ｐ４０ポリペプチドを参照してなされる。

Ｊ６９５Ｆａｂとｐ４０との間の相互作用の大部分は、ｐ４０のＮ末端ドメインＤ１、成熟ｐ４０ポリペプチド（未成熟配列の約残基２３−１３０；配列番号３に示される成熟ｐ４０ポリペプチド配列を参照のこと。）の約アミノ酸残基１−１９７、より好ましくはアミノ酸１−１０７中に存在する（図８）。したがって、例示的実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基１−１９７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基１−１０７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

いくつかの相互作用は、ＩＬ−１２ｐ４０の他のドメインに対しても起こる。特に、Ｊ６９５は、ＩＬ−１２ｐ４０に結合し、以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基と接触する：Ａｓｐ１４、Ｔｒｐ１５、Ｔｙｒ１６、Ｐｒｏ１７、Ａｓｐ１８、Ａｌａ１９、Ｐｒｏ２０、Ｇｌｙ２１、Ｇｌｕ２２、Ｍｅｔ２３、Ｌｙｓ５８、Ｇｌｕ５９、Ｐｈｅ６０、Ｌｙｓ８４、Ｌｙｓ８５、Ｇｌｕ８６、Ａｓｐ８７、Ｇｌｙ８８、Ｉｌｅ８９、Ｔｒｐ９０、Ｓｅｒ９１、Ｔｈｒ９２、Ａｓｐ９３、Ｉｌｅ９４、Ｌｅｕ９５、Ｌｙｓ９６、Ａｓｐ９７、Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９、Ｇｌｕ１００、Ｐｒｏ１０１、Ｌｙｓ１０２、Ａｓｎ１０３、Ｌｙｓ１０４、Ｔｈｒ１０５、Ｐｈｅ１０６、Ｌｅｕ１０７、Ｔｈｒ１２４、Ｔｈｒ１２５、Ｉｌｅ１２６、Ｓｅｒ１２７、Ｔｈｒ１２８、Ａｓｐ１２９、Ａｒｇ１５７、Ｖａｌ１５８、Ａｒｇ１５９、Ｇｌｙ１６０、Ａｓｐ１６１、Ａｓｎ１６２、Ｌｙｓ１６３、Ｇｌｕ１６４、Ｈｉｓ１９４、Ｌｙｓ１９５、Ｌｅｕ１９６およびＬｙｓ１９７（図８）。これらの残基は、ｐ４０サブユニットのループ１−７の少なくとも１つのループ中に、それぞれ位置付けられる。したがって、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体もまた本明細書に包含され、この抗体は、ループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。例示的実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、ループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内（例えば、このアミノ酸残基の０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０Å以内）を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

特に、Ｊ６９５は、ＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ１を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ａｓｐ１４、Ｔｒｐ１５、Ｔｙｒ１６、Ｐｒｏ１７、Ａｓｐ１８、Ａｌａ１９、Ｐｒｏ２０、Ｇｌｙ２１、Ｇｌｕ２２およびＭｅｔ２３と接触する（図８）。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。さらなる実施形態において、この抗体は、１４−１８からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。好ましい実施形態において、この抗体は、１４−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の好ましい実施形態において、この抗体は、１５−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

結晶構造分析は、Ｊ６９５がＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ２を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ｌｙｓ５８、Ｇｌｕ５９およびＰｈｅ６０と接触することもまた示している。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

さらに、結晶構造分析は、Ｊ６９５がＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ３を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ｌｙｓ８４、Ｌｙｓ８５、Ｇｌｕ８６、Ａｓｐ８７、Ｇｌｙ８８、Ｉｌｅ８９、Ｔｒｐ９０、Ｓｅｒ９１、Ｔｈｒ９２、Ａｓｐ９３およびＩｌｅ９４と接触することを示している（図８）。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の実施形態において、この抗体は、８５−９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。さらなる実施形態において、この抗体は、８６−８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。好ましい実施形態において、この抗体は、８６、８７、８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ａｓｐ８７は、Ｊ６９５への結合において特に突出している。その側鎖カルボン酸は、Ｊ６９５ＦａｂのフォームＩ結晶構造で観察された結合したリン酸イオンと同じ位置で、結合部位中に深く結合する（図９）。したがって、さらなる好ましい実施形態において、この抗体は、ループ３のアミノ酸残基８７またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

さらに、結晶構造分析は、Ｊ６９５がＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ４を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ｌｅｕ９５、Ｌｙｓ９６、Ａｓｐ９７、Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９、Ｇｌｕ１００、Ｐｒｏ１０１、Ｌｙｓ１０２、Ａｓｎ１０３、Ｌｙｓ１０４、Ｔｈｒ１０５、Ｐｈｅ１０６およびＬｅｕ１０７と接触することを示している（図８）。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の実施形態において、この抗体は、残基１０２−１０４からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。好ましい実施形態において、この抗体は、１０３および１０４からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の好ましい実施形態において、この抗体は、ループ４のアミノ酸残基１０４、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。なお別の好ましい実施形態において、この抗体は、ループ４のアミノ酸残基１０３、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

結晶構造分析は、Ｊ６９５がＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ５を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ｔｈｒ１２４、Ｔｈｒ１２５、Ｉｌｅ１２６、Ｓｅｒ１２７、Ｔｈｒ１２８およびＡｓｐ１２９と接触することもまた示している（図８）。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３（例えば、ヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３）のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１２４−１２９からなる群から選択されるループ５の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

結晶構造分析は、Ｊ６９５がＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ６を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ａｒｇ１５７、Ｖａｌ１５８，Ａｒｇ１５９、Ｇｌｙ１６０、Ａｓｐ１６１、Ａｓｎ１６２、Ｌｙｓ１６３およびＧｌｕ１６４と接触することもまた示している。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３（例えば、ヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３）のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１５７−１６４からなる群から選択されるループ６の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

結晶構造分析は、Ｊ６９５がＩＬ−１２ｐ４０に結合し、ＩＬ−１２ｐ４０ループ７を構成する以下のＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基、即ち、残基：Ｈｉｓ１９４、Ｌｙｓ１９５，Ｌｅｕ１９６およびＬｙｓ１９７と接触することもまた示している。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３（例えば、ヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３）のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１９４−１９７からなる群から選択されるループ７の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

結晶構造分析はさらに、Ｊ６９５とＩＬ−１２との間の特異的相互作用の大部分が、以下のＩＬ−１２ｐ４０ループ：ループ１、ループ３およびループ４との相互作用であることを示している。例えば、Ｊ６９５とエピトープ中のＩＬ−１２ｐ７０残基との間の特異的接触の殆どは、一次配列において連続していない（いわゆる「立体配座」エピトープ）４つのＩＬ−１２ｐ４０表面ループ（残基１４−２３、５８−６０、８４−９４および９５−１０７；それぞれ上記を参照してループ１、２、３および４）から主に構成される（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｊｒ．、Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓら（２００１）．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．ＮｅｗＹｏｒｋ、ＧａｒｌａｎｄＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ）。このように、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１４−２３、５８−６０、８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。さらなる実施形態において、本発明は、残基１４−１８、８５−９３および１０２−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する抗体を包含する。さらなる実施形態において、本発明は、残基１４−１７、８６−８９、９３および１０３−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する抗体を包含する。別の実施形態において、本発明は、残基１５−１７、８６−８７、８９、９３および１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する抗体を包含する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１４−２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の実施形態において、本発明は、残基１５、１７−２１、２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する抗体を包含する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。別の実施形態において、この抗体は、残基１４−２３および８４−９４からなる群から選択されるループ１および３の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。さらなる実施形態において、この抗体は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

さらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３、例えばヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基１４−２３および９５−１０７からなる群から選択されるループ１および４の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。さらなる実施形態において、この抗体は、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

さらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３（例えば、ヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３）のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、残基８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ３および４の少なくとも１つのアミノ酸残基またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。さらなる実施形態において、この抗体は、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分および／または立体配座エピトープに結合する。

Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ７０との間の実験的に決定された結合部位は、どのｐ４０残基がＪ６９５の結合、特にＪ６９５と種々の供給源由来のＩＬ−１２ｐ４０またはＩＬ−１２ｐ７０（例えば、ヒト、アカゲザル、イヌ、ラットまたはマウスのＩＬ−１２）（図１１）との間の既知の交差反応またはその欠如を調節するかに関する、既知のデータと一致している。例えば、結合部位における２つの重要なアミノ酸残基、即ち、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｔｙｒ１６（ループ１）およびＡｓｐ８７（ループ３）は、ヒトＩＬ−１２とラットＩＬ−１２またはマウスＩＬ−１２との間で保存されていない。これら２つの残基の変更、即ち、Ｔｙｒ１６Ａｒｇ（ラット）またはＴｙｒ１６Ｔｈｒ（マウス）およびＡｓｐ８７Ａｓｎ（ラットまたはマウス）は、ラットもしくはマウスＩＬ−１２、またはヒト／ラットキメラタンパク質（以下を参照）で見出されるように、Ｊ６９５への結合を本質的に無効にする。

さらに、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９およびＧｌｕ１００の欠失は、ラットまたはマウスのＩＬ−１２ｐ４０で見出されるように、ループ３およびループ４の形状を変更し、したがって、上記した重要な残基が、Ｊ６９５に対し適切に提示される。観察された結合部位は、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１２ｐ４０またはＩＬ−２３ｐ４０／ｐ１９ヘテロダイマーのいずれかに対するＪ６９５の既知の結合とも一致し、全て本質的に等しい親和性である（図７）。最後に、観察された結晶学的結合部位は、Ｊ６９５の親和性成熟からの既知の変異誘発データと一致する。即ち、Ｊ６９５前駆体抗体に対してなされたこの変異は、ＩＬ−１２の結合有効性に影響を与えた（ＰＣＴ公開ＷＯ００５６７７２Ａ１（その全内容は、本明細書中で参照により本明細書に組み込む。）に記載されている。）。

本発明の一実施形態において、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分は、非連続エピトープまたは立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、ループ１−７のアミノ酸残基（即ち、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７）から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基、またはこのアミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ１のアミノ酸残基、即ち、アミノ酸残基１４−２３から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ２のアミノ酸残基、即ち、アミノ酸残基５８−６０から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ３のアミノ酸残基、即ち、アミノ酸残基８４−９４から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ４のアミノ酸残基、アミノ酸残基９５−１０７から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ５のアミノ酸残基、即ち、アミノ酸残基１２４−１２９から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ６のアミノ酸残基、即ち、アミノ酸残基１５７−１６４から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ７のアミノ酸残基、即ち、アミノ酸残基１９４−１９７から選択される少なくとも２つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。

別の実施形態において、この抗体は、ループ１−７のアミノ酸残基から選択される２つ以上のアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合し、この２つ以上のアミノ酸残基のうち少なくとも２つは、異なるループ中に存在する。異なるループ中に存在する少なくとも２つのアミノ酸残基は、ループの任意の組み合わせ（例えば、ループ１および２、ループ１および３、ループ１および４、ループ１および５、ループ１および６、ループ１および７、ループ２および３、ループ２および４、ループ２および５、ループ２および６、ループ２および７、ループ３および４、ループ３および５、ループ３および６、ループ３および７、ループ４および５、ループ４および６、ループ４および７、ループ５および６、ループ５および７またはループ６および７）からの残基であり得ることを理解すべきである。

例えば、一実施形態において、この抗体は、ループ１のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基およびループ２のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ１のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基およびループ３のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ１のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基およびループ４のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ２のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基およびループ３のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ２のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基およびループ４のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この抗体は、ループ３のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基およびループ４のアミノ酸残基から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含むｐ４０サブユニットの立体配座エピトープに結合する。ｐ４０サブユニットの立体配座エピトープは、異なるループ中に存在する少なくとも２つのアミノ酸残基を含み得、この異なるループは、ループ１、２、３、４、５、６および７の任意の組み合わせであり得ることを理解すべきである。

２．Ｊ６９５に対する接触
Ｊ６９５の全ての相補性決定領域（ＣＤＲ）がＩＬ−１２４０と接触する。特に、ＩＬ−１２の結合は、Ｊ６９５結合部位全体の６つの領域を介して主に生じ、これらの領域は、以下に記載するように、および図８中において、「部位」と特定される。

部位１は、３つの芳香族残基（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓ）を含み、このうち２つはＣＤＲＨ１中に位置し（Ｐｈｅ−Ｈ２７およびＴｙｒ−Ｈ３２）、このうち１つはＣＤＲＨ３中に位置し（Ｈｉｓ−Ｈ９８）、その結果、これら３つの残基のＣβ原子は、約８Å（２つのＨ１残基の間）、１１Åおよび１１Å（各Ｈ１残基とＨ３残基との間）の寸法の三角形を形成する。部位１のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０の残基Ｔｙｒ１６およびＰｒｏ１７が挿入されるポケットを形成し、ここで、これらの残基は、Ｊ６９５との多数のファンデルワールス相互作用を生じる。本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、１つまたは複数の芳香族残基が、Ｐｈｅ−Ｈ２７、Ｔｙｒ−Ｈ３２またはＨｉｓ−Ｈ９８（例えば、それぞれ配列番号１のアミノ酸残基２７、３２および１０２に対応する。）を置換でき、Ｊ６９５の結合特性が保持またはさらには増強されることが明らかである。

部位２は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎから構成される群から引き出される３つの残基を含み、各１残基は、ＣＤＲＬ１（Ｌｙｓ−Ｌ３４）、Ｌ３（Ｔｙｒ−Ｌ９１）およびＨ３（Ｈ３を開始する３つのフレームワーク残基を含む；Ｌｙｓ−Ｈ９３）中に存在し、その結果、これら３つの残基のＣβ原子は、約１０Å（Ｌ１残基とＬ３残基との間）、１２Å（Ｌ１残基とＨ３残基との間）および１５Å（Ｌ３残基とＨ３残基との間）の寸法の三角形を形成する。Ｊ６９５の部位２のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０の残基Ａｓｐ８７が挿入されるポケットを形成し、３つのＪ６９５アミノ酸は、特異的な相補的電荷およびＡｓｐ８７側鎖カルボン酸との水素結合相互作用を形成する（図９）。本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎから構成される群から引き出される１つまたは複数の残基が、Ｌｙｓ−Ｌ３４（例えば、配列番号２のアミノ酸残基３５に対応する。）、Ｔｙｒ−Ｌ９１（例えば、配列番号２のアミノ酸残基９２に対応する。）またはＬｙｓ−Ｈ９３（例えば、配列番号１のアミノ酸残基９７に対応する。）を置換でき、Ｊ６９５の結合特性が、保持またはさらには増強されることが明らかである。

部位３は、２つの芳香族残基（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓ）を含み、これらの残基は共にＣＤＲＬ３中に位置し（Ｔｙｒ−Ｌ９１およびＨｉｓ−Ｌ９５Ａ）、その結果、これら２つの残基のＣβ原子は、約５Å離れている。部位３のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０の残基Ｉｌｅ８９が挿入されるポケットを形成し、ここで、この残基は、Ｊ６９５との多数のファンデルワールス相互作用を生じる。本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、１つまたは複数の芳香族残基が、Ｔｙｒ−Ｌ９１またはＨｉｓ−Ｌ９５Ａ（例えば、それぞれ配列番号２のアミノ酸残基９２および９７に対応する。）を置換でき、Ｊ６９５の結合特性が、保持またはさらには増強されることが明らかである。

部位４は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎから構成される群から引き出される２つの残基を含み、各１残基は、ＣＤＲＬ２（Ｔｙｒ−Ｌ５０）およびＨ３（Ｓｅｒ−Ｈ９７）中に存在し、その結果、これら２つの残基のＣβ原子は、約７Å離れている。Ｊ６９５の部位４のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０の残基Ａｓｐ１４が挿入されるポケットを形成し、２つのＪ６９５アミノ酸は、特異的な相補的電荷およびＡｓｐ１４側鎖カルボン酸との水素結合相互作用を形成する。本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎから構成される群から引き出される１つまたは複数の残基が、Ｔｙｒ−Ｌ５０（例えば、配列番号２のアミノ酸残基５１に対応する。）またはＳｅｒ−Ｈ９７（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１０１に対応する。）を置換でき、Ｊ６９５の結合特性が、保持またはさらには増強されることが明らかである。

部位５は、Ｊ６９５のＣＤＲＬ３全体（配列番号２のアミノ酸残基９０−１０１に対応する。）を含み、これは以下の特徴を有する：（ｉ）ＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である（ＣＤＲＬ３の長さは、Ｊ６９５では１２アミノ酸残基の長さである。）；（ｉｉ）ＣＤＲＬ３の位置９０におけるアミノ酸残基は、Ｇｌｎではない（この残基は、Ｊ６９５ではＳｅｒである。）；（ｉｉｉ）ＣＤＲＬ３の位置９４におけるアミノ酸残基は、芳香族である（この残基は、Ｊ６９５ではＴｙｒである。）；（ｉｖ）ＣＤＲＬ３の位置９５Ａにおけるアミノ酸残基は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎから構成される群から引き出される（この残基は、Ｊ６９５ではＨｉｓである。）；ＣＤＲＬ３の位置９５Ｂにおけるアミノ酸残基はＰｒｏである。

部位５のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０の残基Ｌｙｓ１０２、Ａｓｎ１０３およびＬｙｓ１０４に接触する、Ｊ６９５結合部位の中心から伸びるβ−ヘアピンループを形成する。上記特徴のそれぞれが、再現性のあるＣＤＲＬ３の結合立体配座またはＩＬ−１２との結合特異的相互作用のいずれかに寄与する。本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、ＣＤＲＬ３バリアント（ここで、以下の変化、即ち、（ｉ）ＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基より長い、（ｉｉ）異なる芳香族残基によるＴｙｒ−Ｌ９４の置換、または（ｉｉｉ）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎから構成される群から引き出される残基によるＨｉｓ−Ｌ９５Ａの置換、のうち１つまたは複数）が形成され得、Ｊ６９５の結合特性が、保持またはさらには増強されることが明らかである。

部位６は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇから構成される群から引き出される２つの残基を含み、両方の残基がＣＤＲＨ２中に存在し（Ａｒｇ−Ｈ５２およびＴｙｒ−Ｈ５２Ａ）、その結果、これら２つの残基のＣβ原子は、約６Å離れている。Ｊ６９５の部位６のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０残基のＡｓｐ９３がそれに対して配置される壁を形成し、２つのＪ６９５アミノ酸は、特異的な相補的電荷およびＡｓｐ９３側鎖カルボン酸との水素結合相互作用を形成する。本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇから構成される群から引き出される１つまたは複数の残基が、Ａｒｇ−Ｈ５２またはＴｙｒ−Ｈ５２Ａ（例えば、それぞれ配列番号１のアミノ酸残基５２または５３に対応する。）を置換でき、Ｊ６９５の結合特性が、保持またはさらには増強されることが明らかである。

さらに、本明細書中で決定されたＪ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０の結晶構造から、ＩＬ−１２ｐ４０または他のｐ４０含有サイトカインに結合するために上記６つの部位の全てが必要なわけではないことが明らかである。特に、上記部位１、部位２、部位３、部位４、部位５および部位６から構成される群から引き出される少なくとも１つの結合部位を有する抗体（部位のバリエーションは上記の通り許容される。）は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。同様に、上記部位１−６の群から引き出される２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの結合部位を有する抗体（部位のバリエーションは上記の通り許容される。）は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。

したがって、一態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１のアミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１以外の可変領域残基のいずれか１つは、異なるアミノ酸で独立して置換されている。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２の３５、５１および９０−１０１のうち１つまたは複数は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。この態様の一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つまたは複数は、芳香族残基で独立して置換されている。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは複数は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。さらなる実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは複数は、芳香族アミノ酸残基で独立して置換されている。なお別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。さらなる実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で独立して置換されている。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で独立して置換されている。なお別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。なお別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

さらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この抗体は、以下の置換のうち１つまたは複数を有する：（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である；（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；または（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

関連の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体の活性を変更する方法を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。本発明のこの態様の一実施形態において、この方法は、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１のうち１つまたは複数を異なるアミノ酸残基で置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２のｐ４０サブユニットに結合する抗体の活性を変更する。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つまたは複数は、芳香族残基で独立して置換される。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは複数は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。なお別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは複数は、芳香族アミノ酸残基で独立して置換される。なお別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換される。さらなる実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換され、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体の活性を変更する方法を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この抗体は、以下の置換のうち１つまたは複数を有する：（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数は、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さは、１２アミノ酸残基以上である；（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５は、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；または（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち１つまたは複数は、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている。

Ｂ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体構造に基づく、Ｊ６９５に対するさらなる有用な変更
上に詳細に記載したように、Ｊ６９５は、ＩＬ−１２との多数の特異的相互作用を生成するが、Ｊ６９５結合部位に対するさらなる変化が、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得るバリアント抗体を提供する。特に、大きいギャップが、結合部位においてＪ６９５とＩＬ−１２ｐ４０との間に存在する。ｐ４０の結合は、結合部位の深い間隙を部分的に満たすにとどまり、特にＪ６９５ＣＤＲＨ２およびＬ３とｐ４０ループ３および４との間に、満たされていないギャップ（図９、矢印）を残す。したがって、このギャップまたは他の欠損に対処するバリアントが、有益である。これらの抗体バリアントは、以下の４つの機構によって改善された特徴を示すと予測される：（ｉ）ＩＬ−１２ｐ４０とのさらなる特異的相互作用を生成する；（ｉｉ）Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ４０との間に存在するギャップを満たす；（ｉｉｉ）バリアント抗体の結合部位に一旦結合したＩＬ−１２ｐ４０の動きを制限する；または（ｉｖ）再現性のある結合立体配座へとバリアント抗体を事前編成する。これら４つの機構のある種の組み合わせはまた、治療上より有効な抗体を導き得る。特に、Ｊ６９５のアミノ酸配列に対するバリエーションの５つの群が、単独または組み合わせて、以下に記載するように実施され得る。

第１に、上記部位１、部位２、部位３、部位４、部位５および部位６からなる群から選択される結合部位のうち少なくとも２つを有し、さらにＣＤＲＨ１の位置３３（例えば、配列番号１のアミノ酸残基３３に対応する。）に、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基を有する抗体は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。特に、この位置における変異Ｇｌｙ−Ｈ３３−Ｌｙｓは、Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｕ８８との間のギャップを満たすと予測され、ＬｙｓＨ３３およびＧｌｕ８８は、さらなる塩橋相互作用を生成すると予測される。

第２に、上記部位１、部位２、部位３、部位４、部位５および部位６からなる群から選択される結合部位のうち少なくとも２つを有し、さらにＣＤＲＨ２の位置５０（例えば、配列番号１のアミノ酸残基５０に対応する。）に、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基を有する抗体は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。特に、この位置における変異Ｐｈｅ−Ｈ５０−ＴｙｒおよびＰｈｅ−Ｈ５０−Ｔｒｐは、Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｔｈｒ９２およびＬｙｓ１０４との間のギャップを満たすと予測される。

第３に、上記部位１、部位２、部位３、部位４、部位５および部位６からなる群から選択される結合部位のうち少なくとも２つを有し、さらにＣＤＲＨ２の位置５６（例えば、配列番号１のアミノ酸残基５７に対応する。）に、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基を有する抗体は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。特に、この位置における変異Ａｓｎ−Ｈ５６−ＩｌｅおよびＡｓｎ−Ｈ５６−Ｔｒｐは、Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ａｓｐ９７およびＬｙｓ１０４との間のギャップを満たし、この抗体に一旦結合したＩＬ−１２ｐ４０の動きを制限すると予測される。さらに、この位置における変異Ａｓｎ−Ｈ５６−ＳｅｒおよびＡｓｎ−Ｈ５６−Ｔｈｒは、ＳｅｒＯγ（Ｔｈｒ中のＯγ１）とＡｒｇＮεとの間の水素結合の形成によって、再現性のある結合立体配座へとＡｒｇＨ５２を事前編成するとさらに予測される。

第４に、上記部位１、部位２、部位３、部位４、部位５および部位６からなる群から選択される結合部位のうち少なくとも２つを有し、さらにＣＤＲＨ３の位置９５（例えば、配列番号１のアミノ酸残基９９に対応する。）に、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基を有する抗体は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。特に、この位置における変異Ｈｉｓ−Ｈ９５−ＴｙｒおよびＨｉｓ−Ｈ９５−Ｔｒｐは、Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｕ８６との間のギャップを満たし、この抗体に一旦結合したＩＬ−１２ｐ４０の動きを制限すると予測される。さらに、この位置における変異Ｈｉｓ−Ｈ９５−Ｔｙｒは、ＴｙｒＯηとＧｌｕ８６のカルボニル酸素原子との間の水素結合をさらに形成すると予測される。

第５に、上記部位１、部位２、部位３、部位４、部位５および部位６からなる群から選択される結合部位のうち少なくとも２つを有し、さらにＣＤＲＬ１の位置３２（例えば、配列番号２のアミノ酸残基３３に対応する。）に、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基を有する抗体は、Ｊ６９５と比較して、保持されたまたはさらには増強された結合特性を示し得る。特に、この位置における変異Ｔｈｒ−Ｌ３２−ＴｙｒおよびＴｈｒ−Ｌ３２−Ｔｒｐは、Ｊ６９５とＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｙ８８との間のギャップを満たすと予測される。

したがって、本発明はまた、一態様において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１つまたは複数は、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている。一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｌｙｓで置換されている。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。なお別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。

別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＩｌｅまたはＴｒｐで置換されている。なお別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＳｅｒまたはＴｈｒで置換されている。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。さらなる実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている。さらなる実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている。

別の態様において、本発明は、競合的結合を受ける、即ち、本明細書中に記載される任意の抗体を競合的に阻害することが可能な抗体を提供する。したがって、別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの結合について、本明細書中に記載される抗体種のいずれかと競合する抗体を含む。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体の活性を変更する方法を提供し、この抗体は、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、この方法は、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１つまたは複数を、異なるアミノ酸残基で置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体の活性を変更する。この方法の一実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｌｙｓで置換される。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。さらなる実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＩｌｅまたはＴｒｐで置換される。なお別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７は、ＳｅｒまたはＴｈｒで置換される。なお別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。別の実施形態において、配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。さらなる実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される。なお別の実施形態において、配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３は、ＴｙｒまたはＴｒｐで置換される。

さらなる態様において、本発明は、本明細書中に記載される方法のいずれかに従って生成された抗体を含む、本明細書中に記載される抗体を提供し包含する。例えば、本明細書中に記載される任意の抗体実施形態において、この抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに、１×１０^−３Ｍ^−１以下のＫ_ｏｆｆまたは１×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄで結合する。さらに、本発明が包含する任意の抗体実施形態において、この抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの生物学的活性を中和する。本発明が包含する抗体の機能的特徴は、以下のセクションＶ（Ｃ）においてさらに論じる。

なおさらなる態様において、本発明の抗体は、当技術分野で既存の、本明細書中で同定されたエピトープに対し生得的に結合する抗体のうちの１つではない。例えば、一実施形態において、本発明の抗体は、米国特許第６，９１４，１２８号に記載された抗体ではない、例えば、抗体Ｙ６１でも抗体Ｊ６９５でもない（米国特許第６，９１４，１２９号（その全内容は、本明細書中で本明細書に組み込む。）に記載される。）。

Ｃ．他の抗ＩＬ−１２抗体のエピトープの決定に基づく抗体
他の抗ＩＬ−１２抗体のエピトープを、ラット／ヒトＩＬ−１２ｐ４０キメラタンパク質（または「キメラ」）アプローチを使用して決定した。特定の位置において組み込まれた特定のラットＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基（複数可）を有する主にヒトのＩＬ−１２ｐ４０分子を、発現させ精製した。これらのキメラならびにＩＬ−１２対照タンパク質（例えば、ヒトおよびラットのＩＬ−１２ｐ４０および／またはｐ７０）の、抗体パネル（例えば、以下にさらに記載される、Ｊ６９５、Ｃ８．６．２またはＣ１１．５．１４）への結合を、表面プラズモン共鳴結合分析を使用して決定した。さらに、特定の位置において組み込まれた特定のヒトＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸残基（複数可）を有する主にラットのＩＬ−１２ｐ４０キメラを、同様に発現させ、精製し、分析した。

１．ヒト／ラットおよびラット／ヒトＩＬ−１２ｐ４０キメラの調製
ＩＬ−１２ｐ４０キメラ中の変異した特定のアミノ酸残基は、ＩＬ−１２ｐ４０内に位置するいくつかの異なる部位に見出される。試験したヒト／ラットＩＬ−１２ｐ４０キメラを表１に列挙し、ラット／ヒトＩＬ−１２ｐ４０キメラを表２に列挙する。

キメラを調製するための発現プラスミドのクローニングおよび構築を、以下のように実施した。ヒトＩＬ−１２ｐ４０サブユニットをコードするｃＤＮＡ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ＣＡから購入、カタログ番号ｐｏｒｆ−ｈｉｌ１２）を、プライマー５’−ＣＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＡＣＣＡＧＣＡＧＴＴＧＧＴＣ−３’（配列番号７）および５’−ＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＴＡＣＡＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＣＡＧＡＴＧＣＣＣＡＴＴＣＧＣ−３’（配列番号８）を使用して、ＥｘｐａｎｄＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＫｉｔ（Ｒｏｃｈｅ）によってＰＣＲ増幅した。得られた１００９ｂｐの産物を、ＧａｔｅｗａｙＢＰ反応（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してｐＥＮＴＲ／Ｄ−ＴＯＰＯ中にクローニングした。部位特異的変異誘発を、テンプレートとしてプラスミドｐＥＮＴＲ／Ｄ−ｈＩＬ−１２ｐ４０を使用し、表２．１に列挙したオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、製造業者の指示に従ってＱｕｉｃｋ−ＣｈａｎｇｅＸＬＳｉｔｅ−ＤｉｒｅｃｔｅｄＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓＫｉｔを使用して実施した。所望の変異の存在を、ＤＮＡ配列決定によって確認した。変異誘発後、野生型ｈＩＬ−１２ｐ４０および変異体を、ＧａｔｅｗａｙＬＲ反応を使用して哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡＤＥＳＴ４０中にサブクローニングして、ｐｃＤＮＡＤＥＳＴ４０−ｈＩＬ−１２ｐ４０およびそのバリアントを作製した。

ＩＬ−１２ｐ４０キメラタンパク質を、ＨＥＫ２９３．Ｆ細胞における一過性トランスフェクションによって発現させた。ＨＥＫ２９３．Ｆ細胞を、８％ＣＯ_２および３７℃で、２５０ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）中でＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。各構築物について、３０×１０^６細胞を、３０ｍＬスケールで１００ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ中で、２９３ｆｅｃｔｉｎを使用してプラスミドＤＮＡ３０μｇでトランスフェクトした。細胞を、撹拌しながら、加湿８％ＣＯ_２雰囲気中３７℃でインキュベートした。７２時間後、細胞を回収し、分泌されたＩＬ−１２ｐ４０についてウエスタンブロットによって上清を分析した。ｈＩＬ−１２ｐ４０含有上清を、以下に記載する引き続く結合アッセイにおいて直接使用した。

２．ヒト／ラットおよびラット／ヒトキメラは、ＩＬ−１２ｐ４０上の７つのさらなる部位を規定する。

Ｉｌ−１２ｐ４０キメラによって規定され描写された７つのさらなる「部位」を、いくつかのＩＬ−１２ｐ４０アミノ酸配列のアラインメントと関連付けて図１１中に示し、図６、１２および１３中に、ＩＬ−１２ｐ７０（および結合したＪ６９５）の３次元構造と関連させて示す。これらの部位は、以下でより詳細に記載し、以下の表３中にまとめる。

部位７は、ヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｔｙｒ１６、Ａｓｐ８７およびＡｓｐ９３を含む。これらの残基は、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン１上の２つの異なる表面ループ上に位置する（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）。単独では、Ｊ６９５／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造から明らかなように、部位７の残基は、不連続（または立体配座）エピトープを規定する。部位７は、３つの下位部位（ｓｕｂ−Ｓｉｔｅ）（即ち、下位部位７ａ（Ｔｙｒ１６）、下位部位７ｂ（Ａｓｐ８７）および下位部位７ｃ（Ａｓｐ９３））からなっているとみなすことができる。

部位８は、ヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｌｅｕ４０、Ａｓｐ４１、Ｇｌｎ４２、Ｓｅｒ４３、Ｓｅｒ４４、Ｇｌｕ４５、Ｖａｌ４６およびＬｅｕ４７を含む。これらの残基は、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン１上に表面ループを形成する（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）。単独では、部位８の残基は、連続（または線状）エピトープを規定する。

部位９は、ヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｙ３５を含む。この残基は、部位８ループの一方の側に位置する（部位１０の反対側、以下を参照のこと。）、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン１の表面ループ上に位置する（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）。単独では、部位９の残基は、連続（または線状）エピトープを規定する。

部位１０は、ヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｙ６１を含む。この残基は、部位８ループの一方の側に位置する（部位９の反対側、上を参照のこと。）、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン１上の表面ループ上に位置する（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）。単独では、部位１０の残基は、連続（または線状）エピトープを規定する。

部位１１は、ヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ａｓｐ９７、Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９、Ｇｌｕ１００およびＰｒｏ１０１を含む。これらの残基は、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン１上に表面ループを形成する（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）。単独では、部位１１の残基は、連続（または線状）エピトープを規定する。

部位１２は、ヒトＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ａｒｇ１５７、Ｖａｌ１５８、Ａｒｇ１５９、Ｇｌｙ１６０、Ａｓｐ１６１、Ａｓｎ１６２、Ｌｙｓ１６３およびＧｌｕ１６４を含む。これらの残基は、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン２上に（無秩序な）表面ループを形成する（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）；このループは、本明細書中に記載されるＪ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体構造中では秩序化されている。単独では、部位１２の残基は、連続（または線状）エピトープを規定する。

種々の抗体によるラット／ヒトＩＬ−１２ｐ４０キメラの結合を、表面プラズモン共鳴によって分析した。具体的には、マトリックス上のカルボキシル基を１００ｍＭＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）および４００ｍＭＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）で最初に活性化することによって、遊離のアミノ基を介して抗体をＢｉａｃｏｒｅチップデキストランマトリックスに共有結合させた。これを、４つの異なるフローセルにわたって完了した。酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈した各抗体（２５μｇ／ｍＬ）約５０マイクロリットルを、活性化したバイオセンサにわたって注入し、タンパク質上の遊離アミンを、活性化したカルボキシル基に直接結合させた。典型的には、５０００レゾナンスユニットを固定した。未反応のマトリックスＥＤＣエステルを、１Ｍエタノールアミンの注入によって非活性化した。

ＩＬ−１２ｐ４０上清試料に対するいくつかの異なるモノクローナル抗体のエピトープパターンを確認するために、直接的結合アッセイを実施した。組換えヒトＩＬ−１２ｐ４０のアリコート（１００ｎＭ）を、２５ｍＬ／分の流速で、Ｂｉａｃｏｒｅデキストランチップバイオセンサ表面上の共有結合により固定化した抗体にわたって注入した。抗原の注射前および直後に、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液単独を、各フローセルを通じて流した。ベースラインとリガンド注入の完了後約３０秒に対応する時点との間のシグナルにおける正味の差異を取得し、最終結合値を示した（約５００−２５００ＲＵ）。応答はレゾナンスユニット（ＲＵ）で測定した。標的分子に対する第１のプローブの結合が迅速で強力である場合にのみ、陽性のペアワイズ結合センサグラムと断じた。共有結合により固定化された抗体がカップリングした表面を、１０ｍＭＨＣｌ（５分の接触時間）を使用して完全に再生させたところ、２０サイクルにわたりその完全結合能力を保持した。

ヒト／ラットおよびラット／ヒトＩＬ−１２ｐ４０キメラについて表面プラズモン共鳴によって得られた結合データの概要を、以下の表３．１にまとめる。

３．ヒト／ラットＩＬ−１２ｐ４０キメラの結合分析によって決定した、７つのさらなるＩＬ−１２ｐ４０エピトープの描写および規定
結晶学的に決定されたＪ６９５エピトープ（例えば、セクションＩＩ−Ｖで上記したもの）に加えて、上記キメラおよび表面プラズモン共鳴法を使用して、ＩＬ−１２ｐ４０の７つのさらなるエピトープを描写し、規定した。キメラおよび表面プラズモン共鳴法を使用して同定したエピトープ１は、結晶学的に決定されたＪ６９５エピトープ内に入るアミノ酸残基を含み、それにより、結晶学的に決定されたＪ６９５エピトープが確認される。抗体／キメラ結合データは、上記表３．１にまとめる。これらのエピトープは、ＩＬ−１２ｐ４０の表面上の、上記１つまたは複数の抗原性「部位」を含む。これらの部位は、いくつかのＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸配列のアラインメントと関連付けて図１１中に示され、ＩＬ−１２ｐ７０（および結合したＪ６９５）の３次元構造と関連付けて図６、１２および１３中に示される。さらなる６つのエピトープ、即ち、エピトープ２、３．１または３．２、４ａ、４ｂ、４ｃおよび５は、図１４中に模式的に示される。全部で８つのエピトープ、即ち、エピトープ１−５（即ち、エピトープ１、２、３．１または３．２、４ａ、４ｂ、４ｃおよび５）は、表４にまとめ、以下で詳細に記載される。

エピトープ１．エピトープ１においてＩＬ−１２ｐ４０に結合する抗体には、Ｊ６９５（ＰＣＴ公開ＷＯ００５６７７２Ａ１に記載されている。）が含まれる。部位７ａ（Ｔｙｒ１６）および部位７ｂ（Ａｓｐ８７）における変異は、結合を除去する；部位７ｃ（Ａｓｐ９３）における変異は、軽微な影響を有する。この生化学的に規定されたエピトープは、結晶学的に観察されたエピトープと一致している。

エピトープ２．エピトープ２においてＩＬ−１２ｐ４０に結合する抗体には、ヒト化モノクローナル抗体８Ｅ１．１が含まれる。抗体８Ｅ１１．１の説明は、少なくとも米国特許第７，７００，７３９号において見出すことができ、この文献の全内容、特に抗体８Ｅ１１．１の説明を本明細書に組み込む。部位７ａ（Ｔｙｒ１６）、７ｂ（Ａｓｐ８７）および１１（Ａｓｐ９７、Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９、Ｇｌｕ１００およびＰｒｏ１０１）における変異は、結合に対して強い影響を有し、部位７ｃ（Ａｓｐ９３）における変異は、軽微な影響を有する。エピトープ２は、エピトープ１と明らかに関連しているが、部位１１における変異の、Ｊ６９５の結合ではなく８Ｅ１．１の結合に対する強い影響が、これら２つのエピトープを識別している。

エピトープ３．エピトープ３においてＩＬ−１２ｐ４０に結合する抗体には、ヒト化モノクローナル抗体１Ａ６．１が含まれる。抗体１Ａ６．１の説明は、少なくとも米国特許第７，７００，７３９号において見出すことができ、この文献の全内容、特に抗体１Ａ６．１の説明を本明細書に組み込む。部位９（Ｇｌｙ３５）および部位１０（Ｇｌｙ６１）における変異は一緒になって、結合に対して強い影響を有した。これら２つの残基は、一緒にしか変異させていない。単独では、エピトープ３が１つのグリシンによって規定されるか、もう一方のグリシンによって規定されるか、両方のグリシンによって規定されるかを決定することは不可能である。しかし、部位８（Ｌｅｕ４０、Ａｓｐ４１、Ｇｌｎ４２、Ｓｅｒ４３、Ｓｅｒ４４、Ｇｌｕ４５、Ｖａｌ４６およびＬｅｕ４７）における変異の影響の完全な欠如を、ＩＬ−１２ｐ４０の３次元構造の知識と合わせると、エピトープ３が、最小サイズの抗体結合部位を考慮して部位９（Ｄａｖｉｅｓ，Ｄ．Ｒ．、Ｅ．Ａ．Ｐａｄｌａｎら、１９９０「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．」ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５９：４３９−７３頁；Ｄａｖｉｅｓ，Ｄ．Ｒ．およびＧ．Ｈ．Ｃｏｈｅｎ１９９６「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎａｎｔｉｇｅｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９３（１）：７−１２頁）、部位８に対して遠位の、部位９（Ｇｌｙ３５）を囲む他の残基（即ち、エピトープ３．１）への結合、または部位１０（Ｇｌｙ６１）および部位８に対して遠位の、部位１０を囲む他の残基（即ち、エピトープ３．２）への結合のいずれかによって規定されることが示されるが、両方ではない。真のエピトープ３は、３．１および３．２の一方またはもう一方であるが、両方ではない。

エピトープ４．エピトープ４においてＩＬ−１２ｐ４０に結合する抗体には、参照マウス抗体Ｃ８．６．２（Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ａ．、Ｍ．Ｒｅｎｇａｒａｊｕら（１９９２）．「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１２）ｂｙｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ．」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１３８７−１３９８頁）および３つのヒト化モノクローナル抗体、即ち、３Ｇ７．２、１Ｄ４．１および１Ｄ４．７が含まれる。抗体３Ｇ７．２、１Ｄ４．１および１Ｄ４．７の説明は、少なくとも米国特許第７，７００，７３９号において見出すことができ、この文献の全内容、特に抗体３Ｇ７．２、１Ｄ４．１および１Ｄ４．７の説明を本明細書に組み込む。部位８（Ｌｅｕ４０、Ａｓｐ４１、Ｇｌｎ４２、Ｓｅｒ４３、Ｓｅｒ４４、Ｇｌｕ４５、Ｖａｌ４６およびＬｅｕ４７）における変異は、結合に強く影響を与え、部位９（Ｇｌｙ３５）または部位１０（Ｇｌｙ６１）のいずれかにおける変異は、弱いまたは強い影響を有した。先と同様にＩＬ−１２ｐ４０の３次元構造の知識を利用すると、部位８は部位９および部位１０と隣接しているので、任意のこれらの抗体の結合は、部位８および９、部位８および１０、または部位８、９および１０に対するものであり得る。したがって、エピトープ４は実際に、関連する部分的に重複するエピトープのファミリー、即ち、エピトープ４ａ（部位８および９）；エピトープ４ｂ（部位８および１０）；およびエピトープ４ｃ（部位８、９および１０）を規定している。抗体Ｃ８．６．２、３Ｇ７．２、１Ｄ４．１および１Ｄ４．７は、エピトープ４ａ、４ｂおよび４ｃのリストから取った任意のエピトープにそれぞれ結合し得る；これらの抗体は、同じエピトープへの結合に拘束されない。

エピトープ５．エピトープ５においてＩＬ−１２ｐ４０に結合する抗体には、参照マウス抗体Ｃ１１．５．１４（Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ａ．、Ｍ．Ｒｅｎｇａｒａｊｕら（１９９２）．「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１２）ｂｙｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ．」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１３８７−１３９８頁）が含まれる。部位１２（Ａｒｇ１５７、Ｖａｌ１５８、Ａｒｇ１５９、Ｇｌｙ１６０、Ａｓｐ１６１、Ａｓｎ１６２、Ｌｙｓ１６３およびＧｌｕ１６４）における変異は、Ｃ１１．５．１４の結合を除去し、部位１１における変異は弱い影響を有した（Ａｓｐ９７、Ｇｌｎ９８、Ｌｙｓ９９、Ｇｌｕ１００およびＰｒｏ１０１）。エピトープ５を規定するこれらのキメラ由来の結合結果は、チオレドキシン／フラジェリン融合タンパク質上での「ＦＬＩＴＲＸ」ペプチドディスプレイによって決定された、以前に決定されたＣ１１．５．１４エピトープと一致している（Ｌｕ，Ｚ．、Ｋ．Ｓ．Ｍｕｒｒａｙら（１９９５）．「ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎｒａｎｄｏｍｐｅｐｔｉｄｅｌｉｂｒａｒｉｅｓｏｎｔｈｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅａｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｕｓｉｏｎｓｔｏｆｌａｇｅｌｌｉｎ：ａｓｙｓｔｅｍｄｅｓｉｇｎｅｄｆｏｒｅｘｐｌｏｒｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．」Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）１３（４）：３６６−７２頁）。

したがって、さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は立体配座エピトープに結合する。一実施形態において、この立体配座エピトープは、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸残基１６、８７および９３からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む（例えば、部位７ａ−ｃを含むエピトープ１）。別の実施形態において、この抗体は、アミノ酸残基１６（即ち、部位７ａ）に結合する。特定の実施形態において、エピトープ（例えば、立体配座エピトープ）を結合する本発明の抗体について言及する場合、本発明は、抗体について、エピトープを構成する特定の残基だけに結合し、抗原（例えば、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）の線状アミノ酸配列中の他の残基には結合しないことを理解すべきである。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸残基１６、８７および９３からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位７ａ−ｃを含むエピトープ１）およびＵＳ２００９／０２０２５４９（その全内容は、本明細書中で参照により本明細書に組み込む。）に記載される任意のエピトープに結合する。

さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基９７、９８、９９、１００および１０１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位７ａ、７ｂおよび１１を含むエピトープ２）に結合する。別の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基１６、８７、９３、９７、９８、９９、１００および１０１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位７ａ、７ｂおよび１１および７ｃを含むエピトープ２）に結合する。

さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基３５および３６からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位９または１０を含むエピトープ３）に結合する。一実施形態において、この抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基３５またはアミノ酸残基３６を含む立体配座エピトープ（例えば、部位９または１０を含むエピトープ３）に結合する。関連の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基９３を含み、配列番号３のアミノ酸残基３５またはアミノ酸残基３６をさらに含む立体配座エピトープ（例えば、部位９または１０、および７ｃを含むエピトープ３）に結合する。

さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基４０−４７および３５からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位８および９を含むエピトープ４ａ）に結合する。関連の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基４０−４７および６１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位８および１０を含むエピトープ４ｂ）に結合する。さらなる関連の態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基４０−４７、３５および６２からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位８、９および１０を含むエピトープ４ｃ）に結合する。

さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体を提供し、この抗体は、配列番号３のアミノ酸残基１５７−１６４からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位１２を含むエピトープ５）に結合する。

一実施形態において、この抗体は、以下のうち１つまたは複数には結合しない：（ａ）配列番号３のアミノ酸配列の残基１６、８７および９７−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位７ａ、７ｂおよび１１を含むエピトープ２）；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列の残基３５および６１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位９または１０を含むエピトープ３）；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の残基４０−４７、３５および６１からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む立体配座エピトープ（例えば、部位８、９および／または１０を含むエピトープ４ａ−ｃ）；および（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列の残基１５７−１６４からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む連続エピトープ（例えば、部位１２を含むエピトープ５）。

４．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０結晶構造の知識と組み合わせた、ヒト／ラットＩＬ−１２ｐ４０キメラの結合分析によって決定したさらなるＩＬ−１２ｐ４０結合部位の説明。

さらなる結合部位は、Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０結晶構造によって提供される、これらの部位の３次元配置の知識と組み合わせて、上記のようにヒト／ラットＩＬ−１２ｐ４０キメラを用いて得られた表面プラズモン共鳴結合データから決定できる。これらのさらなる抗体結合部位を図１５中に示す。

例えば、エピトープ３．１および３．２を参照して上で論じたように、ヒト化モノクローナル抗体１Ａ６．１は、部位９（Ｇｌｙ３５）または部位１０（Ｇｌｙ６１）のいずれかに結合するが、両方に同時には結合しない。これは、同時結合は、抗体結合部位の公知のサイズおよび形状を考慮すると、部位８（Ｌｅｕ４０、Ａｓｐ４１、Ｇｌｎ４２、Ｓｅｒ４３、Ｓｅｒ４４、Ｇｌｕ４５、Ｖａｌ４６およびＬｅｕ４７）における変異の、結合に対する影響の完全な欠如と一致しないからである（Ｄａｖｉｅｓ，Ｄ．Ｒ．、Ｅ．Ａ．Ｐａｄｌａｎら（１９９０）．「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．」ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５９：４３９−７３頁；Ｄａｖｉｅｓ，Ｄ．Ｒ．およびＧ．Ｈ．Ｃｏｈｅｎ（１９９６）．「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎａｎｔｉｇｅｎｓｗｉｔｈａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９３（１）：７−１２頁）。

したがって、抗体１Ａ６．１は、部位８に対して遠位の、部位９（Ｇｌｙ３５）を囲む他の残基（即ち、エピトープ３．１）に加えて、部位９に結合する；または抗体１Ａ６．１は、部位８に対して遠位の、部位１０（Ｇｌｙ６１）を囲む他の残基（即ち、エピトープ３．２）に加えて、部位１０に結合する。ＩＬ−１２ｐ４０の表面露出したループ上に殆どが位置するこれらの「他の残基」は、以下に規定される：
部位１３（部位９の近傍に位置するが部位８に対して遠位である。）は、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｐｒｏ３１、Ｇｌｕ３２、Ｇｌｕ３３、Ａｓｐ３４、Ｉｌｅ３６、Ｔｈｒ３７、Ｔｒｐ３８およびＴｈｒ３９を含む。

部位１４（部位９の近傍に位置するが部位８に対して遠位である。）は、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｙ４８、Ｓｅｒ４９、Ｇｌｙ５０、Ｌｙｓ５１、Ｔｈｒ５２、Ｌｅｕ５３およびＴｈｒ５４を含む。

部位１５（部位９の近傍に位置するが部位８に対して遠位である。）は、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｇｌｙ６４、Ｇｌｎ６５、Ｔｈｒ６７、Ｌｙｓ６８、Ｈｉｓ６９、Ｌｙｓ７０、Ｇｌｙ７１、Ｇｌｙ７２、Ｇｌｕ７３、Ｖａｌ７４、Ｌｅｕ７５、Ｓｅｒ７６およびＨｉｓ７７を含む。

部位１６（部位１０の近傍に位置するが部位８に対して遠位である。）は、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｉｌｅ５５、Ｇｌｎ５６、Ｖａｌ５７、Ｌｙ５８、Ｇｌｕ５９、Ｐｈｅ６０、Ａｓｐ６２、Ａｌａ６３およびＴｙｒ６６を含む。

部位１７（部位１０の近傍に位置するが部位８に対して遠位である。）は、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｔｈｒ１２４、Ｔｈｒ１２５、Ｉｌｅ１２６、Ｓｅｒ１２７、Ｔｈｒ１２８、Ａｓｐ１２９、Ｌｅｕ１３０およびＴｈｒ１３１を含む。

部位１８（部位１０の近傍に位置するが部位８に対して遠位である。）は、ＩＬ−１２ｐ４０のアミノ酸残基Ｈｉｓ１９４、Ｌｙｓ１９５、Ｌｅｕ１９６およびＬｙｓ１９７を含む。

したがって、本発明は、部位９に結合するが部位８には結合せず、部位１３、部位１４および部位１５からなる群から選択される１つまたは複数の部位にさらに結合する抗体のクラスもまた提供する。さらに、本発明は、部位１０に結合するが部位８には結合せず、部位１６、部位１７および部位１８からなる群から選択される１つまたは複数の部位にさらに結合する抗体のクラスを提供する。さらに、これらの部位９、１０および１３−１７の３次元配置に起因して、本発明は、部位９に結合するが部位８には結合せず、部位１３、部位１４、部位１５、部位１６、部位１７および部位１８からなる群から選択される１つまたは複数の部位にさらに結合する抗体もまた提供する。本発明はさらに、部位１０に結合するが部位８には結合せず、部位１３、部位１４、部位１５、部位１６、部位１７および部位１８からなる群から選択される１つまたは複数の部位にさらに結合する抗体を提供する。

Ｄ．操作および改変された抗体
本発明の方法に従って調製される抗体のＶ_Ｈ配列および／またはＶ_Ｌ配列は、改変された抗体を操作するための出発物質として使用され得、この改変された抗体は、出発抗体から変更された特性を有し得る。抗体は、元の可変領域（即ち、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ）の一方または両方の内部、例えば、１つまたは複数のＣＤＲ領域内および／または１つまたは複数のフレームワーク領域内の１つまたは複数の残基を改変することによって、操作され得る。それに加えてまたはその代わりに、抗体は、例えば抗体のエフェクター機能（複数可）を変更するために、定常領域（複数可）内の残基を改変することによって操作され得る。

実施され得る可変領域操作の１つの型は、ＣＤＲ移植である。抗体は、６つの重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）中に位置するアミノ酸残基を主に介して、標的抗原と相互作用する。この理由のために、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列よりも、個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列は、殆どの抗体−抗原相互作用を担っているので、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列に移植された特定の天然に存在する抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２７頁；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５頁；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｅ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９−１００３３頁；Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号、およびＱｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号を参照のこと。）。

抗体のフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖の可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース（ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅにおいてインターネット上で利用可能）ならびにＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．ら（１９９２）「ＴｈｅＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅｏｆＨｕｍａｎＧｅｒｍｌｉｎｅＶ_ＨＳｅｑｕｅｎｃｅｓＲｅｖｅａｌｓａｂｏｕｔＦｉｆｔｙＧｒｏｕｐｓｏｆＶ_ＨＳｅｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈＤｉｆｆｅｒｅｎｔＨｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅＬｏｏｐｓ」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８頁；およびＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ら（１９９４）「ＡＤｉｒｅｃｔｏｒｙｏｆＨｕｍａｎＧｅｒｍ−ｌｉｎｅＶ_ＨＳｅｇｍｅｎｔｓＲｅｖｅａｌｓａＳｔｒｏｎｇＢｉａｓｉｎｔｈｅｉｒＵｓａｇｅ」Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６頁（各文献の内容は、本明細書中で参照により本明細書に明示的に組み込む。）中に見出すことができる。別の例として、ヒト重鎖および軽鎖の可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋデータベース中に見出すことができる。

一実施形態において、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する本発明の抗体は、Ｖ_Ｈ３ファミリーの生殖系列配列のメンバー由来の重鎖可変領域およびＶλ１ファミリーの生殖系列配列のメンバー由来の軽鎖可変領域を含む。さらに、Ｖ_Ｈ３ファミリーの重鎖配列の任意のメンバーは、Ｖλ１ファミリーの軽鎖配列の任意のメンバーと組み合わされ得ることが、当業者に明らかである。

抗体のタンパク質配列は、当業者に周知であるＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ２５：３３８９−３４０２頁）と呼ばれる配列類似性検索方法の１つを使用して、蓄積されたタンパク質配列データベースに対して比較される。ＢＬＡＳＴは、抗体配列とデータベース配列との間の統計的に有意なアラインメントが、アラインされたワードの高スコアセグメント対（ｈｉｇｈ−ｓｃｏｒｉｎｇｓｅｇｍｅｎｔｐａｉｒｓ（ＨＳＰ））を含む可能性が高いという点で、ヒューリスティックなアルゴリズムである。そのスコアが伸長でもトリミングでも改善できないセグメント対を、ヒットと呼ぶ。簡潔に述べると、ＶＢＡＳＥ起源（ｖｂａｓｅ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅ１／ｌｉｓｔ２．ｐｈｐ）のヌクレオチド配列が翻訳され、ＦＲ１フレームワーク領域からＦＲ３フレームワーク領域までの間でありそれらのフレームワーク領域を含む領域が保持される。データベース配列は、９８残基の平均長さを有する。タンパク質の全長にわたって正確に一致する重複配列が除去される。デフォルトの標準的なパラメータを用いてプログラムｂｌａｓｔｐを使用する、タンパク質に関するＢＬＡＳＴ検索は、低い複雑性のフィルター（これはオフにされる。）を除外し、ＢＬＯＳＵＭ６２の置換マトリックス、上位５つのヒットについてのフィルターが、配列一致を生じる。ヌクレオチド配列は、６つ全てのフレームで翻訳され、データベース配列の一致するセグメント中に終止コドンを有さないフレームが、潜在的なヒットとみなされる。これは次に、６つ全てのフレームで抗体配列を翻訳し、それらの翻訳物を、６つ全てのフレームで動的に翻訳されたＶＢＡＳＥヌクレオチド配列と比較するＢＬＡＳＴプログラムｔｂｌａｓｔｘを使用して確認される。他のヒト生殖系列配列データベース、例えば、ＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）から利用可能なデータベースが、上記のようなＶＢＡＳＥと同様に検索できる。

同一性は、配列の全長にわたる、抗体配列とタンパク質データベースとの間の正確なアミノ酸一致である。ポジティブ（同一性＋置換一致）は同一ではないが、ＢＬＯＳＵＭ６２置換マトリックスによって導かれるアミノ酸置換である。抗体配列が、同じ同一性で２つのデータベース配列を一致させる場合、最もポジティブなヒットは、一致する配列ヒットで決定される。

同定されたＶ_ＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列、ならびにＶ_ＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の配列が、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子中に見出される配列と同一の配列を有するフレームワーク領域に移植され得る、またはＣＤＲ配列が、生殖系列配列と比較して１つまたは複数の変異を含むフレームワーク領域に移植され得る。例えば、ある場合には、抗体の抗原結合能を保持または増強するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であることが見出されている（例えば、Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号を参照のこと。）。

別の型の可変領域改変は、Ｖ_Ｈならびに／またはＶ_ＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それにより、目的の抗体の１つまたは複数の結合特性（例えば、親和性）を改善することである。部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介変異誘発が、変異（複数可）を導入するために実施され得、抗体の結合または目的の他の機能的特性に対する影響が、当技術分野で公知のインビトロまたはインビボのアッセイで評価できる。例えば、本発明の抗体は、ライブラリーを創出するために変異され得、このライブラリーは次に、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットへの結合についてスクリーニングされ得る。好ましくは、保存的改変（上で論じた。）が導入される。変異は、アミノ酸の置換、付加または欠失であり得るが、好ましくは置換である。さらに、典型的には、ＣＤＲ領域内の、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下または５つ以下の残基が変更される。

別の型のフレームワーク改変は、フレームワーク領域内、またはさらには１つまたは複数のＣＤＲ領域内の、１つまたは複数の残基を変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより、抗体の潜在的な免疫原性を低下させることを含む。このアプローチは、「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第第２００３０１５３０４３号中にさらに詳細に記載されている。

フレームワーク領域内またはＣＤＲ領域内に形成された改変に加えてまたは代替的に、本発明の抗体は、典型的には抗体の１つまたは複数の機能的特性（例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃレセプター結合および／または抗原依存的細胞傷害）を変更するために、Ｆｃ領域内に改変を含むように操作され得る。さらに、本発明の抗体は、抗体の１つまたは複数の機能的特性をやはり変更するために、化学的に改変され得る（例えば、１つまたは複数の化学部分が、抗体に結合され得る。）またはそのグリコシル化を変更するために改変され得る。これらの実施形態のそれぞれは、以下にさらに詳細に記載される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。

一実施形態において、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が変更されるように、例えば増加または減少するように、改変される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号中にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを促進するため、または抗体の安定性を増加もしくは減少させるために、変更される。

別の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるために変異される。より具体的には、１つまたは複数のアミノ酸変異が、Ｆｃヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域中に導入され、その結果、この抗体は、ネイティブのＦｃヒンジドメインのブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ）プロテインＡ（ＳｐＡ）結合と比較して損なわれたＳｐＡ結合を有する。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載されている。

別の実施形態において、この抗体は、その生物学的半減期を増加させるために改変される。種々のアプローチが可能である。例えば、以下の変異のうち１つまたは複数が、Ｗａｒｄに対する米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように導入され得る：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。その代わりに、生物学的半減期を増加させるために、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載されるように、抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）レセプター結合エピトープを含むように、ＣＨ１領域またはＣＬ領域内で変更され得る。これらの戦略は、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対する抗体の結合が損なわれない限り、有効である。

なお他の実施形態において、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによって変更される。例えば、抗体が、エフェクターリガンドに対する変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能を保持するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１つまたは複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃレセプターまたは補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、共にＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号中にさらに詳細に記載されている。

別の例において、抗体が、変更されたＣ１ｑ結合および／または低下もしくは破壊された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１つまたは複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号中にさらに詳細に記載されている。

別の例において、アミノ酸位置２３１および２３９内の１つまたは複数のアミノ酸残基が変更され、それにより、抗体が補体を結合する能力を変更する。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１中にさらに記載されている。

なお別の例において、Ｆｃ領域は、以下の位置における１つまたは複数のアミノ酸を改変することによって、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増加させるためおよび／またはＦｃγレセプターに対する抗体の親和性を増加させるために、改変される：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９。このアプローチは、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開ＷＯ００／４２０７２中にさらに記載されている。さらに、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、改善された結合を有するバリアントが記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４頁を参照のこと。）。位置２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９における特定の変異が、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合を改善することが示された。さらに、以下の組み合わせ変異体が、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示された：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ。

なお別の実施形態において、本発明の抗体のＣ末端は、ＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０８／７３５６９（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０２６２７４号）（これは、その全体を本明細書に参照により組み込む。）に記載されるように、システイン残基の導入によって改変される。かかる改変には、全長重鎖配列のＣ末端またはその近傍にある既存のアミノ酸残基の置き換え、ならびに全長重鎖配列のＣ末端への、システイン含有伸長の導入が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、システイン含有伸長は、配列アラニン−アラニン−システイン（Ｎ末端からＣ末端へ）を含む。

好ましい実施形態において、かかるＣ末端システイン改変の存在は、パートナー分子（例えば、治療剤またはマーカー分子）のコンジュゲート化のための位置を提供する。特に、Ｃ末端システイン改変に起因する反応性チオール基の存在は、以下に詳細に記載されるジスルフィドリンカーを使用して、パートナー分子をコンジュゲート化するために使用され得る。この様式におけるパートナー分子への抗体のコンジュゲート化は、特定の結合の部位に対する制御の増加を可能にする。さらに、Ｃ末端またはその近傍において結合の部位を導入することによって、コンジュゲート化が、抗体の機能的特性の妨害を低下または排除し、コンジュゲート調製物の単純化された分析および品質制御を可能にするように、コンジュゲート化が最適化され得る。

なお別の実施形態において、抗体のグリコシル化が改変される。例えば、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｌａｔｅｄ）抗体が作製され得る（即ち、抗体はグリコシル化を欠く。）。グリコシル化は、例えば抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、変更され得る。かかる炭水化物改変は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化部位を変更することによって、達成され得る。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位の排除を生じる１つまたは複数のアミノ酸置換がなされ、それにより、その部位でのグリコシル化を排除できる。かかるグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。かかるアプローチは、Ｃｏらに対する米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号においてさらに詳細に記載されている。グリコシル化を変更するためのさらなるアプローチは、Ｈａｎａｉらに対する米国特許第７，２１４，７７５号、Ｐｒｅｓｔａに対する米国特許第６，７３７，０５６号、Ｐｒｅｓｔａに対する米国出願公開第２００７００２０２６０号、Ｄｉｃｋｅｙらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ／２００７／０８４９２６号、Ｚｈｕらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ／２００６／０８９２９４号およびＲａｖｅｔｃｈらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ／２００７／０５５９１６号（これらはそれぞれ、その全体を参照により本明細書に明確に組み込む。）中にさらに詳細に記載されている。

それに加えてまたはその代わりに、変更された型のグリコシル化を有する抗体、例えば、低下した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体または分岐ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体が作製され得る。かかる変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を増加させることが実証されている。かかる炭水化物改変は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって、達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野で記載されており、本発明の組換え抗体を発現させて、それにより変更されたグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用され得る。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠き、その結果、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９細胞株において発現された抗体は、それらの炭水化物上のフコースを欠いている。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９のＦＵＴ８^−／−細胞株は、２つの置換ベクターを使用した、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的化された破壊によって作製されたものである（Ｙａｍａｎｅらによる米国特許公開第２００４０１１０７０４号およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら（２００４）ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ８７：６１４−２２頁を参照のこと。）。別の例として、ＨａｎａｉらによるＥＰ１，１７６，１９５は、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子（これはフコシルトランスフェラーゼをコードする。）を有しており、その結果、かかる細胞株において発現された抗体が、α１，６結合関連の酵素を低下または排除することによって低フコシル化を示す、細胞株を記載している。Ｈａｎａｉらはまた、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加する酵素活性が低い、または酵素活性を有さない細胞株（例えば、ラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣＣＲＬ１６６２））もまた記載している。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０３５８３５号は、Ａｓｎ（２９７）連結した炭水化物にフコースを結合させる能力が低下しており、その宿主細胞において発現された抗体の低フコシル化もまた生じる、バリアントＣＨＯ細胞株Ｌｅｃ１３細胞を記載している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０頁もまた参照のこと。）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５４３４２号は、糖タンパク質改変グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作され、その結果、操作された細胞株において発現された抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加を生じる分岐ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示す、細胞株を記載している（Ｕｍａｎａら（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０頁もまた参照のこと。）。その代わりに、抗体のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断され得る。例えば、フコシダーゼα−Ｌフコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，Ａ．Ｌ．ら（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−２３頁）。

それに加えてまたはその代わりに、変更された型のグリコシル化を有する抗体が作製され得、このときの変更は、抗体のシアリル化（ｓｉａｌｙａｔｉｏｎ）のレベルに関連する。かかる変更は、Ｄｉｃｋｅｙらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ／２００７／０８４９２６号およびＲａｖｅｔｃｈらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ／２００７／０５５９１６号（これらは共に、その全体を参照により本明細書に明確に組み込む。）中に記載されている。例えば、シアリダーゼ（例えば、アルスロバクター・ウレアファシエンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｕｒｅａｆａｃｅｎｓ）のシアリダーゼ）を用いた酵素反応を使用できる。かかる反応の条件は、米国特許第５，８３１，０７７号（これは、その全体を参照により本明細書に組み込む。）中に一般に記載されている。適切な酵素の他の非限定的な例は、それぞれＳｃｈｌｏｅｍｅｒら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１５（４）、８８２−８９３頁（１９７５）およびＬｅｉｂｉｇｅｒら、ＢｉｏｃｈｅｍＪ．、３３８、５２９−５３８頁（１９９９）に記載されている、ノイラミニダーゼおよびＮ−グリコシダーゼＦである。脱シアル化抗体は、親和性クロマトグラフィーを使用することによってさらに精製され得る。その代わりに、例えば、シアリルトランスフェラーゼ酵素を使用することによって、シアリル化（ｓｉａｌｙａｔｉｏｎ）レベルを増加させる方法を使用できる。かかる反応の条件は、Ｂａｓｓｅｔら、ＳｃａｎｄｉｎａｖｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５１（３）、３０７−３１１頁（２０００）中に一般に記載されている。

本明細書において、本発明が企図する抗体の別の改変は、ペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化され得る。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は典型的に、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に結合する条件下で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）と反応させられる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実施される。本明細書中で使用する場合、用語「ポリエチレングリコール」は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されている任意の形態のＰＥＧ（例えば、モノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミド）を包含する意図である。特定の実施形態において、ペグ化される抗体は、非グリコシル抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は、当技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用可能である。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照のこと。このように、本明細書中に記載されるペグ化方法は、以下に記載される本発明のペプチド性分子にも適用される。

Ｅ．抗体断片および抗体模倣物
本発明は、伝統的な抗体に限定されず、抗体断片および抗体模倣物の使用を介して実施され得る。以下に詳述するように、広範な種々の抗体断片および抗体模倣物技術が現在開発されており、当技術分野で広く知られている。多数のこれらの技術（例えば、ドメイン抗体、ナノボディおよびユニボディ）は、伝統的な抗体構造の断片または伝統的な抗体構造に対する他の改変を使用しているが、伝統的な抗体の結合を模倣しつつ、別の機構から生成されるおよび別の機構を介して機能する結合構造を使用する代替的技術（例えば、アドネクチン、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン、アビマー、ヴァーサボディ、アプタマーおよびＳＭＩＰＳ）もまた存在する。これらの代替的構造のいくつかは、ＧｉｌｌおよびＤａｍｌｅ（２００６）１７：６５３−６５８頁中で概説されている。

ドメイン抗体（ｄＡｂ）は、ヒト抗体の重鎖（ＶＨ）または軽鎖（ＶＬ）のいずれかの可変領域に対応する、抗体の最小の機能的結合単位である。ドメイン抗体は、約１３ｋＤａの分子量を有している。Ｄｏｍａｎｔｉｓは、完全ヒトＶＨおよびＶＬｄＡｂの、一連の大きく高度に機能的なライブラリー（各ライブラリー中に１００億より多い異なる配列）を開発し、治療標的に対し特異的なｄＡｂを選択するためにこれらのライブラリーを使用している。多くの従来の抗体とは対照的に、ドメイン抗体は、細菌、酵母および哺乳動物細胞の系において良好に発現される。ドメイン抗体およびその製造方法のさらなる詳細は、米国特許第６，２９１，１５８号；同第６，５８２，９１５号；同第６，５９３，０８１号；同第６，１７２，１９７号；同第６，６９６，２４５号；米国公開第２００４／０１１０９４１号；欧州特許出願１４３３８４６号ならびに欧州特許第０３６８６８４号および同第０６１６６４０号；ＷＯ０５／０３５５７２、ＷＯ０４／１０１７９０、ＷＯ０４／０８１０２６、ＷＯ０４／０５８８２１、ＷＯ０４／００３０１９およびＷＯ０３／００２６０９（これらはそれぞれ、その全体を明細書中で参照により本明細書に組み込む。）を参照して得ることができる。

ナノボディは、独自の構造および天然に存在する重鎖抗体の機能的特性を含む、抗体由来の治療タンパク質である。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。重要なことには、クローニングおよび単離されたＶＨＨドメインは、元の重鎖抗体の完全な抗原結合能を保有する、完全に安定なポリペプチドである。ナノボディは、ヒト抗体のＶＨドメインとの高い相同性を有し、活性の喪失なしにさらにヒト化され得る。重要なことには、ナノボディは、低い免疫原性能を有しており、これは、ナノボディリード化合物を用いた霊長類研究において確認されている。

ナノボディは、従来の抗体の利点を、小分子薬物の重要な特徴と組み合わせている。従来の抗体と同様に、ナノボディは、高い標的特異性、その標的に対する高い親和性および低い固有の毒性を示す。しかし、小分子薬物同様、ナノボディは酵素を阻害でき、レセプター間隙に容易に接近できる。さらに、ナノボディは、非常に安定であり、注射以外の手段によって投与でき（例えば、ＷＯ０４／０４１８６７（その全体を明細書中で参照により本明細書に組み込む。）を参照のこと。）、製造が容易である。ナノボディの他の利点には、サイズが小さいことの結果として珍しいまたは隠れたエピトープを認識すること、それらの独自の３次元的な薬物形式の柔軟性に起因する高い親和性および選択性で、タンパク質標的の空洞または活性部位に結合すること、半減期ならびに薬物発見の容易さおよび速度を調整することが含まれる。

ナノボディは、単一の遺伝子によってコードされ、ほぼ全ての原核生物宿主および真核生物宿主、例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）（例えば、米国特許第６，７６５，０８７号（その全体を明細書中で参照により本明細書に組み込む。）を参照のこと。）、カビ（例えば、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）またはトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ））および酵母（例えば、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クリベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）またはピキア（Ｐｉｃｈｉａ））（例えば、米国特許第６，８３８，２５４号（その全体を本参照により本明細書に組み込む。）を参照のこと。）中で効率的に産生される。産生プロセスは拡大縮小が可能であり、複数キログラムの量のナノボディが産生されている。ナノボディは、従来の抗体と比較して優れた安定性を示すので、長い保存可能期間の、直ぐに使用できる溶液として製剤化され得る。

Ｎａｎｏｃｌｏｎｅ法（例えば、ＷＯ０６／０７９３７２（その全体を参照により本明細書に組み込む。）を参照のこと。）は、Ｂ細胞の自動化ハイスループット（ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ）選択に基づいて、所望の標的に対するナノボディを生成するための独占的な方法であり、本発明に関して使用され得る。

ユニボディは、別の抗体断片技術であるが、この技術は、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域の除去に基づいている。ヒンジ領域の欠失は、伝統的なＩｇＧ４抗体の本質的に半分のサイズであり、ＩｇＧ４抗体の二価結合領域ではなく一価結合領域を有する分子を生じる。ＩｇＧ４抗体は不活性であり、したがって、免疫系と相互作用しないことも充分に知られており、このことは、免疫応答が望まれない疾患の治療に有利であり得、この利点はユニボディに引き継がれている。例えば、ユニボディは、それらが結合した細胞を阻害または沈黙させるように機能し得るが、殺すことはない。さらに、癌細胞に結合するユニボディは、癌細胞を刺激して増殖させることはない。さらに、ユニボディは伝統的なＩｇＧ４抗体のサイズの約半分なので、潜在的に有利な有効性で、より大きい固形腫瘍に対するより良好な分布を示し得る。ユニボディは、ＩｇＧ４抗体全体と同様の速度で身体から除去され、それらの抗原に対して、抗体全体と類似の親和性で結合可能である。ユニボディのさらなる詳細は、特許出願ＷＯ２００７／０５９７８２（その全体を参照により本明細書に組み込む。）を参照して得ることができる。

アドネクチン分子は、フィブロネクチンタンパク質の１つまたは複数のドメインに由来する操作された結合タンパク質である。フィブロネクチンは、ヒト身体中に天然に存在している。フィブロネクチンは細胞外マトリックス中に、不溶性糖タンパク質ダイマーとして存在しており、リンカータンパク質としても機能する。フィブロネクチンはまた、ジスルフィド結合したダイマーとして、血漿中で可溶性形態で存在する。フィブロネクチンの血漿形態は、肝臓細胞（肝細胞）によって合成され、ＥＣＭ形態は、軟骨細胞、マクロファージ、内皮細胞、線維芽細胞および上皮のいくつかの細胞（ＷａｒｄＭ．およびＭａｒｃｅｙ，Ｄ．、ｃａｌｌｕｔｈｅｒａｎ．ｅｄｕ／Ａｃａｄｅｍｉｃ＿Ｐｒｏｇｒａｍｓ／Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｓ／ＢｉｏＤｅｖ／ｏｍｍ／ｆｉｂｒｏ／ｆｉｂｒｏ．ｈｔｍを参照のこと。）によって生成される。以前に言及されたように、フィブロネクチンは、細胞接着分子として天然に機能し得、または細胞外マトリックス中で接触することによって細胞の相互作用を媒介し得る。典型的には、フィブロネクチンは、３つの異なるタンパク質モジュール（Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型のモジュール）から形成されている。フィブロネクチンの機能の構造の概説については、ＰａｎｋｏｖおよびＹａｍａｄａ（２００２）ＪＣｅｌｌＳｃｉ．；１１５（Ｐｔ２０）：３８６１−３頁、ＨｏｈｅｎｅｓｔｅｒおよびＥｎｇｅｌ（２００２）２１：１１５−１２８頁、ならびにＬｕｃｅｎａら（２００７）ＩｎｖｅｓｔＣｌｉｎ．４８：２４９−２６２頁を参照のこと。

好ましい実施形態において、アドネクチン分子は、２つのβシート間に分布した複数のβストランドから構成されるネイティブタンパク質を変更することによって、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメインから誘導される。由来する組織に依存して、フィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎｇ）は、例えば^１Ｆｎ３、^２Ｆｎ３、^３Ｆｎ３などと称され得る複数のＩＩＩ型ドメインを含み得る。^１０Ｆｎ３ドメインは、インテグリン結合モチーフを含み、βストランドを接続する３つのループをさらに含む。これらのループは、ＩｇＧ重鎖の抗原結合ループに対応すると考えられ得、目的の標的（例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）に特異的に結合するように、以下に論じる方法によって変更され得る。好ましくは、本発明の目的のために有用なフィブロネクチンのＩＩＩ型ドメインは、アクセッションコード：１ｔｔｇを有するＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ（ＰＤＢ、ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｂ／ｈｏｍｅ／ｈｏｍｅ．ｄｏ）からアクセスできるフィブロネクチンのＩＩＩ型分子の構造をコードする配列に対し、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の配列同一性を示す配列である。アドネクチン分子はまた、単純なモノマー^１０Ｆｎ３構造ではなく、^１０Ｆｎ３関連分子のポリマーに由来し得る。

ネイティブの^１０Ｆｎ３ドメインは典型的にインテグリンに結合するが、アドネクチン分子になるように適合された^１０Ｆｎ３タンパク質は、目的の抗原、例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合するように変更されている。一実施形態において、^１０Ｆｎ３分子に対する変更は、βストランドに対する少なくとも１つの変異を含んでいる。好ましい実施形態において、^１０Ｆｎ３分子のβストランドを接続するループ領域は、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合するように変更されている。

^１０Ｆｎ３における変更は、当技術分野で公知の任意の方法によってなされ得、この方法には、エラープローンＰＣＲ、部位特異的変異誘発、ＤＮＡシャッフリングまたは本明細書中で言及している他の型の組換え変異誘発が含まれるが、これらに限定されない。１つの例において、^１０Ｆｎ３配列をコードするＤＮＡのバリアントは、インビトロで直接的に合成され得、後にインビトロまたはインビボで転写および翻訳され得る。その代わりに、天然の^１０Ｆｎ３配列は、標準的な方法を使用してゲノムから単離またはクローニングされ得（例えば、米国特許出願第２００７００８２３６５号のように実施される。）、次いで、当技術分野で公知の変異誘発法を使用して変異され得る。

一実施形態において、標的タンパク質（例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）は、固体支持体（例えば、カラム樹脂またはマイクロタイタープレート中のウェル）上に固定化され得る。標的は次いで、潜在的な結合タンパク質のライブラリーと接触される。このライブラリーは、^１０Ｆｎ３クローン、または^１０Ｆｎ３配列の変異誘発／ランダム化もしくは^１０Ｆｎ３ループ領域（βストランドではない。）の変異誘発／ランダム化によって野生型^１０Ｆｎ３から誘導されたアドネクチン分子を含み得る。好ましい実施形態において、ライブラリーは、Ｓｚｏｓｔａｋら、米国特許出願第０９／００７，００５号および同第０９／２４７，１９０号；Ｓｚｏｓｔａｋら、ＷＯ９８９／３１７００；ならびにＲｏｂｅｒｔｓおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９７）９４：１２２９７−１２３０２頁に記載された技術によって生成されたＲＮＡ−タンパク質融合ライブラリーであり得る。ライブラリーは、ＤＮＡ−タンパク質ライブラリー（例えば、Ｌｏｈｓｅ、米国特許出願第６０／１１０，５４９号、米国特許出願第０９／４５９，１９０号およびＷＯ００／３２８２３に記載されている。）であってもよい。融合ライブラリーは次いで、固定化した標的（例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）と共にインキュベートされ、固体支持体が洗浄されて、非特異的結合部分が除去される。次いで、密な結合物がストリンジェントな条件下で溶出され、遺伝子情報を増幅するために、またはこのプロセス（さらなる変異誘発ありまたはなし）を反復するために結合分子の新たなライブラリーを創出するために、ＰＣＲが使用される。選択／変異誘発プロセスは、標的に対する充分な親和性を有する結合物が得られるまで、反復され得る。本発明で使用するためのアドネクチン分子は、Ａｄｎｅｘｕｓ、Ｂｒｉｓｔｏｎ−ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ社によって使用されているＰＲＯｆｕｓｉｏｎ（商標）技術を使用して操作され得る。ＰＲＯｆｕｓｉｏｎ技術は、上で参照した技術に基づいて創出されたものである（例えば、ＲｏｂｅｒｔｓおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９７）９４：１２２９７−１２３０２頁）。変更された^１０Ｆｎ３ドメインのライブラリーを生成する方法および本発明で使用され得る適切な結合物を選択する方法は、以下の米国特許および特許出願書類（これらは、参照により本明細書中に組み込む。）中に完全に記載されている：米国特許第７，１１５，３９６号；同第６，８１８，４１８号；同第６，５３７，７４９号；同第６，６６０，４７３号；同第７，１９５，８８０号；同第６，４１６，９５０号；同第６，２１４，５５３号；同第６６２３９２６号；同第６，３１２，９２７号；同第６，６０２，６８５号；同第６，５１８，０１８号；同第６，２０７，４４６号；同第６，２５８，５５８号；同第６，４３６，６６５号；同第６，２８１，３４４号；同第７，２７０，９５０号；同第６，９５１，７２５号；同第６，８４６，６５５号；同第７，０７８，１９７号；同第６，４２９，３００号；同第７，１２５，６６９号；同第６，５３７，７４９号；同第６，６６０，４７３号；および米国特許出願第２００７００８２３６５号；同第２００５０２５５５４８号；同第２００５００３８２２９号；同第２００３０１４３６１６号；同第２００２０１８２５９７号；同第２００２０１７７１５８号；同第２００４００８６９８０号；同第２００４０２５３６１２号；同第２００３００２２２３６号；同第２００３００１３１６０号；同第２００３００２７１９４号；同第２００３００１３１１０号；同第２００４０２５９１５５号；同第２００２０１８２６８７号；同第２００６０２７０６０４号；同第２００６０２４６０５９号；同第２００３０１００００４号；同第２００３０１４３６１６号および同第２００２０１８２５９７号。選択工程に先立つ、フィブロネクチンのＩＩＩ型ドメイン（例えば、^１０Ｆｎ３）における多様性の生成は、当技術分野で公知の他の方法、例えば、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイまたは酵母表面ディスプレイ、例えば、Ｌｉｐｏｖｓｅｋら（２００７）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ３６８：１０２４−１０４１頁；Ｓｅｒｇｅｅｖａら（２００６）ＡｄｖＤｒｕｇＤｅｌｉｖＲｅｖ．５８：１６２２−１６５４頁；Ｐｅｔｔｙら（２００７）ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５：７−１５頁；Ｒｏｔｈｅら（２００６）ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＢｉｏｌＴｈｅｒ．６：１７７−１８７頁；およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ（２００５）ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５−１１１６頁を使用して達成され得る。

上で引用した方法の参考文献が、好ましい^１０Ｆｎ３ドメイン以外のタンパク質から抗体模倣物を誘導するために使用され得ることが、当業者に理解されるべきである。上記言及された方法を介して抗体模倣物を生成するために使用され得るさらなる分子には、ヒトフィブロネクチンモジュール^１Ｆｎ３−^９Ｆｎ３および^１１Ｆｎ３−^１７Ｆｎ３、ならびに非ヒト動物および原核生物由来の関連のＦｎ３モジュールが含まれるが、これらに限定されない。さらに、^１０Ｆｎ３に対する配列相同性を有する他のタンパク質（例えば、テネイシンおよびアンジュリン（ｕｎｄｕｌｉｎ））由来のＦｎ３モジュールもまた、使用され得る。免疫グロブリン様フォールドを有する（が、Ｖ_Ｈドメインと無関係の配列を有する。）他の例示的タンパク質には、Ｎ−カドヘリン、ＩＣＡＭ−２、タイチン、ＧＣＳＦレセプター、サイトカインレセプター、グリコシダーゼインヒビター、Ｅ−カドヘリンおよび抗生物質色素タンパク質が含まれる。関連の構造を有するさらなるドメインは、ミエリン膜接着分子Ｐ０、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２、クラスＩＭＨＣ、Ｔ細胞抗原レセプター、ＣＤ１、ＶＣＡＭ−１のＣ２およびＩ−ｓｅｔドメイン、ミオシン結合タンパク質ＣのＩ−ｓｅｔ免疫グロブリンフォールド、ミオシン結合タンパク質ＨのＩ−ｓｅｔ免疫グロブリンフォールド、テロキンのＩ−ｓｅｔ免疫グロブリンフォールド、テリキン（ｔｅｌｉｋｉｎ）、ＮＣＡＭ、トゥイッチン（ｔｗｉｔｃｈｉｎ）、ニューログリアン（ｎｅｕｒｏｇｌｉａｎ）、成長ホルモンレセプター、エリスロポエチンレセプター、プロラクチンレセプター、ＧＣ−ＳＦレセプター、インターフェロンγレセプター、β−ガラクトシダーゼ／グルクロニダーゼ、β−グルクロニダーゼ、ならびにトランスグルタミナーゼから誘導され得る。その代わりに、１つまたは複数の免疫グロブリン様フォールドを含む任意の他のタンパク質が、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎｇ）様結合部分を創出するために利用され得る。かかるタンパク質は、例えば、プログラムＳＣＯＰ（Ｍｕｒｚｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４７：５３６頁（１９９５）；ＬｏＣｏｎｔｅら、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：２５７頁（２０００））を使用して、同定され得る。

アプタマーは、本発明が包含する別の型の抗体模倣物である。アプタマーは典型的に、特定の分子標的に結合する小さいヌクレオチドポリマーである。アプタマーは、一本鎖または二本鎖の核酸分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）であり得るが、ＤＮＡベースのアプタマーは、最も一般には二本鎖である。アプタマー核酸について規定された長さは存在しないが、アプタマー分子は、最も一般には１５ヌクレオチド長と４０ヌクレオチド長との間である。

アプタマーは、標的分子に対するそれらの親和性を決定する複雑な３次元構造を形成していることが多い。アプタマーは、ほぼ完全にインビトロで操作および増幅できるので、単純な抗体を上回る多くの利点を提供できる。さらに、アプタマーは、免疫応答を殆どまたは全く誘導しないことが多い。

アプタマーは、種々の技術を使用して生成され得るが、元々は、インビトロ選択（ＥｌｌｉｎｇｔｏｎおよびＳｚｏｓｔａｋ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ．３４６（６２８７）：８１８−２２頁）およびＳＥＬＥＸ法（指数関数的増幅によるリガンドの体系的進化（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｓｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ））（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、１９９２．ＪＭｏｌＢｉｏｌ．２２８（３）：８６２−９頁）を使用して開発されたものであり、これらの文献の内容は、参照により本明細書中に組み込む。Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ．ＴｈｅＡｐｔａｍｅｒＨａｎｄｂｏｏｋ：ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＴｈｅｉｒＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＩＳＢＮ：９７８−３−５２７−３１０５９−３；Ｕｌｒｉｃｈら、２００６．ＣｏｍｂＣｈｅｍＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＳｃｒｅｅｎ９（８）：６１９−３２頁；ＣｅｒｃｈｉａおよびｄｅＦｒａｎｃｉｓｃｉｓ．２００７．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ．３６１：１８７−２００頁；ＩｒｅｓｏｎおよびＫｅｌｌａｎｄ．２００６．ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．２００６５（１２）：２９５７−６２頁；米国特許第５５８２９８１号；同第５８４０８６７号；同第５７５６２９１号；同第６２６１７８３号；同第６４５８５５９号；同第５７９２６１３号；同第６１１１０９５号；ならびに米国特許出願第１１／４８２，６７１号；同第１１／１０２，４２８号；同第１１／２９１，６１０号；および同第１０／６２７，５４３号（これらは全て、参照により本明細書中に組み込む。）を含む、アプタマーを生成および使用するための他の方法が公開されている。

ＳＥＬＥＸ法は、明らかに最も一般的であり、３つの基本的工程で実施される。第１に、候補核酸分子のライブラリーを、特定の分子標的への結合について選択する。第２に、標的に対する充分な親和性を有する核酸を、非結合物から分離する。第３に、結合した核酸を増幅し、第２のライブラリーを形成し、このプロセスを反復する。各反復において、標的分子に対するさらに高い親和性を有するアプタマーが選択される。ＳＥＬＥＸ法は、以下の刊行物（これらは参照により本明細書中に組み込む。）中でより完全に記載されている：Ｂｕｇａｕｔら、２００６．４（２２）：４０８２−８頁；Ｓｔｏｌｔｅｎｂｕｒｇら、２００７ＢｉｏｍｏｌＥｎｇ．２００７２４（４）：３８１−４０３頁；およびＧｏｐｉｎａｔｈ．２００７．ＡｎａｌＢｉｏａｎａｌＣｈｅｍ．２００７．３８７（１）：１７１−８２頁。

本発明の「アプタマー」は、ヌクレオチドの代わりにペプチドから生成されたアプタマー分子も含んでいる。ペプチドアプタマーは、ヌクレオチドアプタマーと多くの特性（例えば、小さいサイズおよび高い親和性で標的分子に結合する能力）を共有しており、ヌクレオチドアプタマーを生成するために使用される原理と類似の原理を有する選択方法によって生成され得る（例えば、ＢａｉｎｅｓおよびＣｏｌａｓ．２００６．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖＴｏｄａｙ．１１（７−８）：３３４−４１頁；およびＢｉｃｋｌｅら、２００６．ＮａｔＰｒｏｔｏｃ．１（３）：１０６６−９１頁（これらは参照により本明細書中に組み込む。））。

アフィボディ分子は、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する５８アミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づく、新しいクラスの親和性タンパク質を示している。この３ヘリックスバンドルのドメインは、コンビナトリアルファージミドライブラリーの構築のための足場として使用されており、ここから、所望の分子を標的化するアフィボディバリアントが、ファージディスプレイ技術を使用して選択され得る（ＮｏｒｄＫ、ＧｕｎｎｅｒｉｕｓｓｏｎＥ、ＲｉｎｇｄａｈｌＪ、ＳｔａｈｌＳ、ＵｈｌｅｎＭ、ＮｙｇｒｅｎＰＡ、Ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌｌｉｂｒａｒｉｅｓｏｆａｎ α−ｈｅｌｉｃａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｃｅｐｔｏｒｄｏｍａｉｎ、ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１９９７；１５：７７２−７頁．ＲｏｎｍａｒｋＪ、ＧｒｏｎｌｕｎｄＨ、ＵｈｌｅｎＭ、ＮｙｇｒｅｎＰＡ、ＨｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＡ（ＩｇＡ）−ｓｐｅｃｉｆｉｃｌｉｇａｎｄｓｆｒｏｍｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｐｒｏｔｅｉｎＡ、ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ２００２；２６９：２６４７−５５頁）。その低い分子量（６ｋＤａ）と組み合わせたアフィボディ分子の単純で強固な構造は、アフィボディ分子を、例えば、検出試薬としての（ＲｏｎｍａｒｋＪ、ＨａｎｓｓｏｎＭ、ＮｇｕｙｅｎＴら、Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｆｆｉｂｏｄｙ−ＦｃｃｈｉｍｅｒａｓｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ２００２；２６１：１９９−２１１頁）、およびレセプター相互作用を阻害するための（ＳａｎｄｓｔｏｒｍＫ、ＸｕＺ、ＦｏｒｓｂｅｒｇＧ、ＮｙｇｒｅｎＰＡ、ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣＤ２８−ＣＤ８０ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌｂｙａＣＤ２８−ｂｉｎｄｉｎｇＡｆｆｉｂｏｄｙｌｉｇａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｅｄｂｙｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ２００３；１６：６９１−７頁）広範な種々の適用に適したものにしている。アフィボディおよびその製造方法のさらなる詳細は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，８３１，０１２号を参照して得ることができる。

ＤＡＲＰｉｎ（設計アンキリン反復タンパク質（ＤｅｓｉｇｎｅｄＡｎｋｙｒｉｎＲｅｐｅａｔＰｒｏｔｅｉｎ））は、非抗体ポリペプチドの結合能を利用するために開発された抗体模倣物ＤＲＰ（設計反復タンパク質（ＤｅｓｉｇｎｅｄＲｅｐｅａｔＰｒｏｔｅｉｎ））技術の一例である。アンキリンまたはロイシンリッチ反復タンパク質などの反復タンパク質は、普遍的な結合分子であり、抗体と違って、細胞内および細胞外に存在する。それらの独自のモジュール式構造は、反復する構造的単位（反復）を特徴とし、これらの単位が一緒に積み重なって、変化するモジュール式の標的結合表面を示す、伸長した反復ドメインを形成する。このモジュール性に基づいて、高度に多様な結合特異性を有するポリペプチドのコンビナトリアルライブラリーが生成され得る。この戦略は、変化する表面残基を示す自己適合性反復のコンセンサス設計および反復ドメインへのそれらのランダムなアセンブリを含む。

ＤＡＲＰｉｎは、非常に高い収率で細菌発現系において産生でき、知られているうちで最も安定なタンパク質に属する。広範囲の標的タンパク質（ヒトレセプター、サイトカイン、キナーゼ、ヒトプロテアーゼ、ウイルスおよび膜タンパク質が含まれる。）に対する、高度に特異的な高親和性のＤＡＲＰｉｎが選択されている。１桁のナノモル濃度からピコモル濃度の範囲内の親和性を有するＤＡＲＰｉｎを得ることができる。

ＤＡＲＰｉｎは、ＥＬＩＳＡ、サンドウィッチＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー分析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、チップ適用、親和性精製またはウエスタンブロッティングを含む広範な適用において使用されてきた。ＤＡＲＰｉｎはまた、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）に融合した細胞内マーカータンパク質として、細胞内区画中で高度に活性であることが証明されている。ＤＡＲＰｉｎは、さらに、ｐＭの範囲のＩＣ５０でウイルスの侵入を阻害するために使用された。ＤＡＲＰｉｎは、タンパク質−タンパク質相互作用を遮断するのに理想的なだけではなく、酵素を阻害するのにも理想的である。プロテアーゼ、キナーゼおよびトランスポーターが首尾よく阻害されており、最も頻繁にはアロステリック阻害様式である。腫瘍上での非常に速く特異的な富化および非常に好ましい腫瘍対血液比は、ＤＡＲＰｉｎを、インビボの診断アプローチまたは治療アプローチに非常に適したものにしている。

ＤＡＲＰｉｎおよび他のＤＲＰ技術に関するさらなる情報は、米国特許出願公開２００４／０１３２０２８号および国際特許出願公開第ＷＯ０２／２０５６５号（これらは共に、その全体を参照により本明細書中に組み込む。）中に見出すことができる。

アンチカリンは、さらなる抗体模倣物技術であるが、この場合、結合特異性は、ヒトの組織および体液中で天然に豊富に発現される低分子量タンパク質のファミリーであるリポカリンに由来する。リポカリンは、化学的に敏感なまたは不溶性の化合物の生理学的輸送および貯蔵とインビボで関連する様々な機能を実行するように進化したものである。リポカリンは、タンパク質の１つの末端において４つのループを支持する高度に保存されたβバレルを含む強固な固有の構造を有している。これらのループは、結合ポケットへの入り口を形成し、分子のこの部分における立体配座上の差異は、個々のリポカリン間の結合特異性におけるバリエーションを説明する。

保存されたβシートのフレームワークによって支持される超可変ループの全体的構造は、免疫グロブリンを彷彿とさせるが、リポカリンは、サイズに関して抗体とはかなり異なっており、単一の免疫グロブリンドメインよりも僅かに大きい１６０−１８０アミノ酸の単一ポリペプチド鎖から構成されている。

リポカリンはクローニングされ、それらのループは、アンチカリンを創出するための操作に供される。構造的に多様なアンチカリンのライブラリーが生成されており、アンチカリンディスプレイにより、結合機能の選択およびスクリーニングと、その後の原核生物系または真核生物系におけるさらなる分析のための可溶性タンパク質の発現および産生とが可能になる。研究により、事実上任意のヒト標的タンパク質に特異的なアンチカリンが開発でき、単離でき、ナノモル濃度以上の範囲の結合親和性を得ることができることが、首尾よく実証されている。

アンチカリンは、二重標的化タンパク質、いわゆるデュオカリン（Ｄｕｏｃａｌｉｎ）としても形式付けされ得る。デュオカリンは、その２つの結合ドメインの構造的配向に関わらず標的特異性および親和性を保持しながら、標準的な製造プロセスを使用して容易に生成される１つのモノマータンパク質中の２つの別個の治療標的に結合する。

単一分子を介した複数標的の調節は、単一よりも多くの原因因子が関与することが公知の疾患において特に有利である。さらに、デュオカリンなどの二価または多価の結合形式は、疾患において細胞表面分子を標的化し、シグナル伝達経路に対するアゴニスト効果を媒介し、または細胞表面レセプターの結合およびクラスター化を介して増強された中和効果を誘導することにおいて、顕著な可能性を有する。さらに、デュオカリンの高い固有の安定性は、モノマー性アンチカリンに匹敵し、デュオカリンの柔軟な製剤化および送達の潜在力を提供する。

アンチカリンに関するさらなる情報は、米国特許第７，２５０，２９７号および国際特許出願公開第ＷＯ９９／１６８７３号（これらは共に、その全体を参照により本明細書中に組み込む。）中に見出すことができる。

本発明に関して有用な別の抗体模倣物技術は、アビマーである。アビマーは、結合および阻害特性を有する多ドメインのタンパク質を生成するインビトロエキソンシャッフリングおよびファージディスプレイによって、ヒト細胞外レセプタードメインの大きいファミリーから進化したものである。複数の独立した結合ドメインを連結することで、アビディティーが生み出され、従来の単一エピトープ結合タンパク質と比較して改善された親和性および特異性を生じることが示されている。他の潜在的な利点には、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）における複数標的特異的分子の単純で効率的な産生、改善された熱安定性、およびプロテアーゼに対する抵抗性が含まれる。ナノモル濃度を下回る親和性を有するアビマーが、種々の標的に対して得られている。

アビマーに関するさらなる情報は、米国特許出願公開第２００６／０２８６６０３号、同第２００６／０２３４２９９号、同第２００６／０２２３１１４号、同第２００６／０１７７８３１号、同第２００６／０００８８４４号、同第２００５／０２２１３８４、同第２００５／０１６４３０１号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００４８５１２号、同第２００４／０１７５７５６号（これらは全て、その全体を参照により本明細書中に組み込む。）中に見出すことができる。

ヴァーサボディは、本発明に関して使用され得る別の抗体模倣物技術である。ヴァーサボディは、＞１５％がシステインの３−５ｋＤａの小さいタンパク質であり、高いジスルフィド密度の骨格を形成して、典型的なタンパク質が有している疎水性コアを置き換えている。疎水性コアを構成する多数の疎水性アミノ酸の、少数のジスルフィドによる置き換えは、より小さく、より親水性が高く（凝集および非特異的結合が少ない。）、プロテアーゼおよび熱に対する抵抗性がより高く、ＭＨＣ提示に最も寄与する残基が疎水性であるためにＴ細胞エピトープ密度がより低い、タンパク質を生じる。これらの特性の４つ全てが、免疫原性に影響を与えることが周知であり、これらの特性が一緒になって、免疫原性の大きな減少を引き起こすと予測されている。

ヴァーサボディに関する着想は、ヒル、ヘビ、クモ、サソリ、カタツムリおよびアネモネによって産生される、予想外に低い免疫原性を示すことが公知の、天然の注射可能な生物医薬から来ている。設計により、およびサイズ、疎水性、タンパク質分解性の抗原プロセシングをスクリーニングすることにより、選択された天然タンパク質ファミリーから出発することで、エピトープ密度は、天然の注射可能タンパク質の平均を大きく下回るレベルまで最小化される。

ヴァーサボディの構造を考慮すると、これらの抗体模倣物は、多価、多重特異性、半減期機構の多様性、組織標的化モジュール、および抗体Ｆｃ領域の非存在を含む、多用途の形式を提供する。さらに、ヴァーサボディは、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）において高収率で製造され、その親水性および小さいサイズに起因して、ヴァーサボディは高度に可溶性であり、高い濃度で製剤化することができる。ヴァーサボディは、並外れて熱安定性であり（ヴァーサボディは茹でることができる。）、延長された保存可能期間を提供する。

ヴァーサボディに関するさらなる情報は、米国特許出願公開第２００７／０１９１２７２号（これは、その全体を参照により本明細書中に組み込む。）中に見出すことができる。

ＳＭＩＰ（商標）（小モジュール式免疫医薬（ＳｍａｌｌＭｏｄｕｌａｒＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）−ＴｒｕｂｉｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、標的結合、エフェクター機能、インビボ半減期および発現レベルを維持および最適化するよう操作されたものである。ＳＭＩＰＳは、３つの別個のモジュール状ドメインからなる。まず、ＳＭＩＰＳは、特異性を付与する任意のタンパク質（例えば、細胞表面レセプター、単鎖抗体、可溶性タンパク質など）からなり得る結合ドメインを含む。第２に、ＳＭＩＰＳは、結合ドメインとエフェクタードメインとの間の可撓性リンカーとして機能し、ＳＭＩＰ薬物のマルチマー化の制御の助けともなる、ヒンジドメインを含む。最後に、ＳＭＩＰＳは、Ｆｃドメインまたは他の特別に設計されたタンパク質を含む多様な分子から誘導され得るエフェクタードメインを含む。多様な異なる結合、ヒンジおよびエフェクタードメインを有するＳＭＩＰの単純な構築を可能にする設計のモジュラー性は、迅速でカスタマイズ可能な薬物設計を提供する。

ＳＭＩＰの設計方法の例を含むＳＭＩＰに関するさらなる情報は、Ｚｈａｏら（２００７）Ｂｌｏｏｄ１１０：２５６９−７７頁ならびに以下の米国特許出願第２００５０２３８６４６号；同第２００５０２０２５３４号；同第２００５０２０２０２８号；同第２００５０２０２０２３号；同第２００５０２０２０１２号；同第２００５０１８６２１６号；同第２００５０１８０９７０号および同第２００５０１７５６１４号中に見出すことができる。

上で提供した抗体断片および抗体模倣物技術の詳細な説明は、本明細書に関して使用され得る全ての技術の包括的なリストであることは意図していない。例えば、また限定ではないが、代替的なポリペプチドベースの技術、例えば、Ｑｕｉら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５（８）９２１−９２９頁（２００７）（これは、その全体を参照により本明細書中に組み込む。）中に概要が述べられた相補性決定領域の融合、ならびに核酸ベースの技術、例えば、米国特許第５，７８９，１５７号、同第５，８６４，０２６号、同第５，７１２，３７５号、同第５，７６３，５６６号、同第６，０１３，４４３号、同第６，３７６，４７４号、同第６，６１３，５２６号、同第６，１１４，１２０号、同第６，２６１，７７４号および同第６，３８７，６２０号（これらは全て、参照により本明細書中に組み込む。）に記載されたＲＮＡアプタマー技術を含む、多様なさらなる技術が、本発明に関して使用され得る。

Ｆ．抗体の物理的特性
ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する本発明の抗体は、種々の物理的特性によってさらに特徴付けることができる。種々のアッセイが、これらの物理的特性に基づいて異なるクラスの抗体を検出および／または識別するために使用され得る。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、軽鎖または重鎖のいずれかの可変領域中に、１つまたは複数のグリコシル化部位を含み得る。可変領域における１つまたは複数のグリコシル化部位の存在は、抗体の免疫原性の増加または変更された抗原結合に起因する抗体のｐＫの変更を生じ得る（Ｍａｒｓｈａｌｌら（１９７２）ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ４１：６７３−７０２頁；ＧａｌａＦＡおよびＭｏｒｒｉｓｏｎＳＬ（２００４）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１７２：５４８９−９４頁；Ｗａｌｌｉｃｋら（１９８８）ＪＥｘｐＭｅｄ１６８：１０９９−１０９頁；ＳｐｉｒｏＲＧ（２００２）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ１２：４３Ｒ−５６Ｒ頁；Ｐａｒｅｋｈら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１６：４５２−７頁；Ｍｉｍｕｒａら（２０００）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ３７：６９７−７０６頁）。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含むモチーフにおいて生じることが知られている。可変領域のグリコシル化は、抗体を切断してＦａｂを生成し、次いでグリコシル化について試験するＧｌｙｃｏｂｌｏｔアッセイを使用し、過ヨウ素酸酸化およびＳｃｈｉｆｆ塩基形成を測定するアッセイを使用して、試験され得る。その代わりに、可変領域のグリコシル化は、Ｆａｂから糖を切断して単糖にし、個々の糖含量を分析するＤｉｏｎｅｘライトクロマトグラフィー（Ｄｉｏｎｅｘ−ＬＣ）を使用して試験され得る。ある場合には、可変領域のグリコシル化を含まない抗体を有することが好ましい場合がある。これは、当技術分野で周知の標準的な技術を使用して、可変領域中にグリコシル化モチーフを含まない抗体を選択することにより、またはグリコシル化モチーフ内の残基を変異させることにより、達成され得る。

各抗体は、独自の等電点（ｐＩ）を有するが、一般には、抗体は、６と９．５との間のｐＨ範囲内に入る。ＩｇＧ１抗体に関するｐＩは、典型的には７−９．５のｐＨ範囲内に入り、ＩｇＧ４抗体に関するｐＩは、典型的には６−８のｐＨ範囲内に入る。抗体は、この範囲の外側のｐＩを有していてもよい。効果は一般には知られていないが、通常範囲の外側のｐＩを有する抗体が、インビボ条件下である種のアンフォールドおよび不安定性を有し得ることが推測される。等電点は、ｐＨ勾配を創出し、正確さを増加させるためのレーザーフォーカシングを利用し得る、キャピラリー等電点電気泳動アッセイを使用して試験され得る（Ｊａｎｉｎｉら（２００２）Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ２３：１６０５−１１頁；Ｍａら（２００１）Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ５３：Ｓ７５−８９頁；Ｈｕｎｔら（１９９８）ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ８００：３５５−６７頁）。ある場合には、通常範囲内に入るｐＩ値を含む抗体を有することが好ましい。これは、当技術分野で周知の標準的な技術を使用して、正常範囲内のｐＩを有する抗体を選択することにより、または荷電した表面残基を変異させることにより、達成され得る。

各抗体は、熱安定性を示す融解温度を有する（ＫｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙＲおよびＭａｎｎｉｎｇＭＣ（２００２）ＣｕｒｒＰｈａｒｍＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ３：３６１−７１頁）。より高い熱安定性は、インビボにおける全体的な抗体安定性がより高いことを示す。抗体の融点は、示差走査熱量測定（Ｃｈｅｎら（２００３）ＰｈａｒｍＲｅｓ２０：１９５２−６０頁；Ｇｈｉｒｌａｎｄｏら（１９９９）ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ６８：４７−５２頁）などの技術を使用して測定され得る。Ｔ_Ｍ１は、抗体の最初のアンフォールディングの温度を示す。Ｔ_Ｍ２は、抗体の完全なアンフォールディングの温度を示す。一般に、本発明の抗体のＴ_Ｍ１は、６０℃よりも高いことが好ましく、好ましくは６５℃より高い温度、なおより好ましくは７０℃よりも高い温度である。その代わりに、抗体の熱安定性は、円二色性を使用して測定され得る（Ｍｕｒｒａｙら（２００２）Ｊ．ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＳｃｉ４０：３４３−９頁）。

好ましい実施形態において、迅速に分解しない抗体が望まれ得る。抗体の断片化は、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）およびＭＡＬＤＩ−ＭＳを使用して測定され得、これもまた当技術分野で充分理解される（ＡｌｅｘａｎｄｅｒＡＪおよびＨｕｇｈｅｓＤＥ（１９９５）ＡｎａｌＣｈｅｍ６７：３６２６−３２頁）。

別の好ましい実施形態において、最小の凝集効果を有する抗体が選択される。凝集は、望ましくない免疫応答および／または変更されたもしくは好ましくない薬物動態学的特性の誘発を導き得る。一般に、２５％以下、好ましくは２０％以下、なおより好ましくは１５％以下、なおより好ましくは１０％以下、なおより好ましくは５％以下の凝集を有する抗体が許容可能である。凝集は、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、およびモノマー、ダイマー、トリマーまたはマルチマーを同定するための光散乱を含む、当技術分野で周知のいくつかの技術によって測定され得る。

Ｖ．本発明の抗体の生成
Ａ．本発明のポリクローナル抗体の生成
本発明のポリクローナル抗体は、当技術分野で周知の種々の技術によって生成され得る。ポリクローナル抗体は、異なるＢ細胞株から誘導され、したがって、同じ抗原上の複数のエピトープを認識し得る。ポリクローナル抗体は、典型的に、目的の抗原（例えば、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニット）を用いた適切な哺乳動物の免疫によって生成される。ポリクローナル抗体の生成にしばしば使用される動物は、ニワトリ、ヤギ、モルモット、ハムスター、ウマ、マウス、ラット、ヒツジ、および最も一般的にはウサギである。ポリクローナル抗体を生成するための標準的な方法は、当技術分野で広く知られており、本発明の方法と組み合わされ得る（例えば、ｒｅｓｅａｒｃｈ．ｃｍ．ｕｔｅｘａｓ．ｅｄｕ／ｂｋｉｔｔｏ／Ｋｉｔｔｏｌａｂｐａｇｅ／Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＰＡｂ．ｈｔｍｌ；米国特許第４，７１９，２９０号、同第６，３３５，１６３号、同第５，７８９，２０８号、同第２，５２０，０７６号、同第２，５４３，２１５号および同第３，５９７，４０９号（これらの全内容は、参照により本明細書中に組み込む。）。

Ｂ．本発明のモノクローナル抗体の生成
本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体方法論、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５頁の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む、種々の技術によって生成され得る。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原理上、モノクローナル抗体を生成するための他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルス性転化または癌化が使用され得る。抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニット上の任意のエピトープ（本明細書中に記載される任意の立体配座エピトープ、不連続エピトープまたは線状エピトープが含まれる。）に対して惹起され得ることに留意すべきである。

当技術分野で公知のいくつかの方法が、目的の不連続エピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を特異的に選択するために有用である。例えば、米国特許公開第２００５／０１６９９２５号（その全内容は、参照により本明細書中に組み込む。）に開示される技術は、タンパク質配列内の２つの異なるペプチドに結合する抗体の選択を可能にする。かかる方法は、本明細書中に開示される立体配座エピトープおよび不連続エピトープを特異的に標的化するために、本発明に従って使用され得る。立体配座エピトープがタンパク質二次構造である場合、かかる構造は、より小さいペプチド（例えば、＜５０アミノ酸）において容易に形成される場合が多い。したがって、より小さいペプチドで動物を免疫することで、いくつかの立体配座エピトープを捕捉することができる。その代わりに、立体配座エピトープを構成する２つの小さいペプチド（例えば、表５中で特定したペプチド）は、可撓性リンカー（例えば、ポリグリコール、または極性の非荷電アミノ酸のストレッチ）を介して接続され得る。リンカーは、ペプチドに種々の相互作用配向を探索させる。この構築物で免疫し、その後適切なスクリーニングを行うことで、立体配座エピトープに対する抗体の同定が可能になり得る。好ましい実施形態において、特定の立体配座エピトープまたは線状エピトープに対するペプチドは、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの特定のドメイン（例えば、上記表３中に記載された部位および表４中に記載されたエピトープを含む、セクションＩＩ（Ａ）およびＩＩ（Ｃ）中に記載されたエピトープ）で動物を免疫し、目的のエピトープに結合する抗体について引き続きスクリーニングすることによって生成され得る。一実施形態において、低温電子顕微鏡（Ｊｉａｎｇら（２００８）Ｎａｔｕｒｅ４５１、１１３０−１１３４頁；Ｊｏａｃｈｉｍ（２００６）ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ＿ＩＳＢＮ：０１９５１８２１８９）は、本発明の抗体または抗原結合断片が結合するエピトープを同定するために使用され得る。別の実施形態において、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットまたはそのドメインは、結合した抗体またはその抗原結合断片と共に結晶化され得、結合した正確なエピトープを決定するためにｘ線結晶解析によって分析され得る。さらに、エピトープは、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニット配列の一部分を、マウスまたは別の種由来の対応する配列で置き換えることによって、マッピングされ得る。目的のエピトープに対する抗体は、ヒト配列領域に選択的に結合し、したがって、標的エピトープを連続してマッピングすることが可能である。キメラベースのエピトープマッピングのこの技術は、種々の設定においてエピトープを同定するために首尾よく使用されてきた（ＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎおよびＰｅｔｔｅｒｓｓｏｎ（１９９７）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．１０（６）：５５９−５６８頁；Ｎｅｔｚｅｒら（１９９９）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．１９９９年４月１６日；２７４（１６）：１１２６７−７４頁；Ｈｓｉａら（１９９６）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９、５３−６３頁（その全内容は、参照により本明細書中に組み込む。）を参照のこと。）。

目的のＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのドメインがグリコシル化されている場合、抗体またはその抗原結合部分（および本発明の他の抗体模倣物）は、関連するアミノ酸および／または糖残基に結合するように、惹起され得る。ヒトＩＬ−１２／２３のｐ４０サブユニットは、１０個のシステイン残基および４つの潜在的なＮ−結合型グリコシル化部位を含んでいる。ＩＬ−１２／２３のｐ４０サブユニットのグリコシル化パターンは、少なくともＹｏｏｎら、２０００ＥＭＢＯ１９（１４）：３５３０−３５４１頁；Ｇｕｂｌｅｒら、１９９１Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：４１４３−４１４７頁；およびＢｒｕｎｄａら、１９９４Ｊ．ＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉｏｌ．５５：２８０−２８８頁（これらそれぞれの全内容は、参照により本明細書中に組み込む。）中にさらに記載されている。したがって、抗体またはその抗原結合部分（および本発明の他の部分）は、本明細書中で同定された任意のエピトープに結合し得る糖残基にも結合するように、惹起されることが企図される。この目的のために、目的の抗原性ペプチドは、この抗原性ペプチドが適切にグリコシル化され、グリコシル化された抗原性ペプチドが動物を免疫するために次に使用され得るように、動物細胞中で生成され得る。グリコシル化ペプチドを生成するために適切な細胞および技術は、当技術分野で公知であり、以下にさらに記載される（例えば、ＧｌｙｃｏＦｉ，Ｉｎｃ．、Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨおよびＢｉｏＷａ；Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪから入手可能な技術を参照のこと。）。ペプチドの適切なグリコシル化は、グリカンを同定するために、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、酸加水分解（単糖の組成を決定するため）、化学的または酵素的切断、および質量分析（ＭＳ）などの任意の標準的な方法を使用して試験され得る。グリカン分析をスピードアップするためにレクチンベースのアレイを使用する、Ｐｒｏｃｏｇｎｉａ（ｐｒｏｃｏｇｎｉａ．ｃｏｍ）が提供する技術もまた使用され得る。Ｏ−グリコシル化は、特に、還元的アルカリ切断または「β脱離（ｂｅｔａｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）」、ペプチドマッピング、液体クロマトグラフィーおよび質量分析、またはこれらの技術の任意の組み合わせなどの技術を使用して、検出され得る。

ハイブリドーマを調製するために好ましい動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ生成は、非常によく確立された手順である。免疫プロトコルおよび融合のために免疫した脾細胞の単離のための技術は、当技術分野で公知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順もまた公知である。

本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上記のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製され得る。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学的技術を使用して、目的のマウスハイブリドーマから得ることができ、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作できる。例えば、キメラ抗体を創出するために、マウス可変領域は、当技術分野で公知の方法を使用して、ヒト定常領域に連結され得る（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと。）。ヒト化抗体を創出するために、マウスＣＤＲ領域が、当技術分野で公知の方法を使用して、ヒトフレームワーク中に挿入され得る（例えば、Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号ならびにＱｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号を参照のこと。）。その代わりに、ヒト化抗体は、ヒト配列および非ヒト配列の知識を考慮して、ＤＮＡレベルまたはタンパク質レベルで設計され得る。かかる抗体は、化学的に直接合成され得る、またはＤＮＡは、ヒト化抗体を生成するためにインビトロまたはインビボで合成および発現され得る。

好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。本明細書中に記載されるＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのドメインまたはエピトープに対するかかるヒトモノクローナル抗体は、マウス系以外のヒト免疫系の一部を保有するトランスジェニックマウスまたは染色体導入（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍｉｃ）マウスを使用して生成され得る。これらのトランスジェニックマウスおよび染色体導入マウスには、それぞれ本明細書中でＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウス（商標）と称されるマウスが含まれ、本明細書中で集合的に「ヒトＩｇマウス」と称される。

ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、内在性のμ鎖およびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された変異と共に、再編成されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖の免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）を含む（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３６８（６４７４）：８５６−８５９頁を参照のこと。）。したがって、このマウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現低下を示し、免疫に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子が、高親和性のヒトＩｇＧκモノクローナルを生成するために、クラススイッチおよび体細胞変異を受ける（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら（１９９４）、上記；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１１３：４９−１０１頁中で概説される；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３頁ならびにＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６頁）。ＨｕＭａｂマウスの調製および使用、ならびにかかるマウスが保有するゲノム改変は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ら（１９９２）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ２０：６２８７−６２９５頁；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ら（１９９３）ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５：６４７−６５６頁；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：３７２０−３７２４頁；Ｃｈｏｉら（１９９３）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ４：１１７−１２３頁；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ら（１９９３）ＥＭＢＯＪ．１２：８２１−８３０頁；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０頁；Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ら（１９９４）ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６：５７９−５９１頁；およびＦｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ら（１９９６）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８４５−８５１頁（これら全ての内容は、その全体を参照により本明細書中に具体的に組み込む。）中にさらに記載されている。さらに、全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７４，２９９号および同第５，７７０，４２９号；Ｓｕｒａｎｉらに対する米国特許第５，５４５，８０７号；全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対するＰＣＴ公開ＷＯ９２／０３９１８、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９７／１３８５２、ＷＯ９８／２４８８４およびＷＯ９９／４５９６２；ならびにＫｏｒｍａｎらに対するＰＣＴ公開ＷＯ０１／１４４２４を参照のこと。

別の実施形態において、本発明のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体（ｔｒａｎｓｃｈｏｍｏｓｏｍｅ）上にヒト免疫グロブリン配列を保有するマウス、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を保有するマウスを使用して、惹起され得る。本明細書中で「ＫＭマウス（商標）」と称するかかるマウスは、Ｉｓｈｉｄａらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３４７８号中に詳細に記載されている。

なおさらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的トランスジェニック動物系が当技術分野で入手可能であり、本発明の抗体を惹起するために使用され得る。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と称される代替的トランスジェニック系が使用され得；かかるマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに対する米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１１４，５９８号；同第６，１５０，５８４号および同第６，１６２，９６３号中に記載されている。

さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的染色体導入動物系が当技術分野で入手可能であり、本発明の抗体を惹起するために使用され得る。例えば、「ＴＣマウス」と称される、ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両方を保有するマウスが使用され得、かかるマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：７２２−７２７頁中に記載されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖の導入染色体を保有するウシが、当技術分野で記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａら（２００２）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２０：８８９−８９４頁）、本発明の抗体を惹起するために使用され得る。

本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製され得る。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ法は、当技術分野で確立されている。例えば、Ｌａｄｎｅｒらに対する米国特許第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号および同第５，５７１，６９８号；Ｄｏｗｅｒらに対する米国特許第５，４２７，９０８号および同第５，５８０，７１７号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらに対する米国特許第５，９６９，１０８号および同第６，１７２，１９７号；ならびにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらに対する米国特許第５，８８５，７９３号；同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号および同第６，５９３，０８１号を参照のこと。一実施形態において、本発明のヒトモノクローナル抗体は、その全内容を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，９１４，１２８号中に記載されるファージディスプレイ技術を使用して調製され得る。別の実施形態において、本発明のヒトモノクローナル抗体は、その全内容を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，９１４，１２８号中に記載されるようなヒト抗体ライブラリーから調製され得る。

本発明のヒトモノクローナル抗体は、ヒト抗体応答が免疫の際に生成され得るように、ヒト免疫細胞が再構築されたＳＣＩＤマウスを使用しても調製され得る。かかるマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎらに対する米国特許第５，４７６，９９６号および同第５，６９８，７６７号中に記載されている。

別の実施形態において、本発明の抗体は、Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ら（（１９９１）．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２、５８１頁）、Ｎｉｓｓｉｍ，Ａ．ら（（１９９４）．ＥＭＢＯＪ．１３、６９２頁）ならびに米国特許第６，７９４，１３２号；同第６５６２３４１号；同第６０５７０９８号；同第５８２１０４７号および同第６５１２０９７号中に記載されるように、周知のファージディスプレイ技術を使用して構築され得る。

さらなる実施形態において、本発明の抗体は、例えば、米国特許第６，４２３，５３８号；同第６，３００，０６５号；同第６，６９６，２５１号；同第６，６９９，６５８号中に記載されるように、酵母細胞表面ディスプレイ技術を使用して見出すことができる。

本発明のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
本発明のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫したマウス由来の脾細胞および／またはリンパ節細胞が単離され、適切な不死化細胞株（例えば、マウス骨髄腫細胞株）に融合され得る。得られたハイブリドーマは、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングされ得る。例えば、免疫したマウス由来の脾臓リンパ球の単細胞懸濁物は、Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌性マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８０）の数の６分の１に、５０％ＰＥＧを用いて融合され得る。その代わりに、免疫したマウス由来の脾臓リンパ球の単細胞懸濁物は、ＣｙｔｏＰｕｌｓｅラージチャンバ細胞融合エレクトロポレーター（ＣｙｔｏＰｕｌｓｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、ＧｌｅｎＢｕｒｎｉｅＭａｒｙｌａｎｄ）を使用して、電場ベースの電気融合法を使用して融合され得る。細胞は、約２×１０^５で平底マイクロタイタープレート中にプレートされ、その後選択培地（２０％胎仔クローン血清（ＣｌｏｎｅＳｅｒｕｍ）、１８％「６５３」馴化培地、５％オリゲン（ｏｒｉｇｅｎ）（ＩＧＥＮ）、４ｍＭＬ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５ｍＭＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ２−メルカプトエタノール、５０単位／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシンおよび１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは、融合の２４時間後に添加する。）を含む。）中で２週間インキュベートされる。約２週間後、細胞は、ＨＡＴをＨＴで置き換えた培地中で培養され得る。次いで、個々のウェルは、ヒトモノクローナルＩｇＭ抗体およびＩｇＧ抗体について、ＥＬＩＳＡによってスクリーニングされ得る。広範なハイブリドーマ増殖が起きると、培地は、通常１０−１４日後に観察され得る。抗体分泌ハイブリドーマが再プレートされ、再度スクリーニングされ得、ヒトＩｇＧについてなお陽性の場合、モノクローナル抗体は、限界希釈によって少なくとも２回サブクローニングされ得る。次いで、特徴付けのために組織培養培地中に少量の抗体を生成するために、安定なサブクローンがインビトロで培養され得る。

ヒトモノクローナル抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマは、モノクローナル抗体精製のための２リットルスピナーフラスコ中で増殖され得る。上清が濾過および濃縮され、その後、プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を用いた親和性クロマトグラフィーにかけられ得る。溶出したＩｇＧは、純度を確認するために、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーによってチェックされ得る。緩衝溶液がＰＢＳに交換され得、濃度が、１．４３吸光係数を使用してＯＤ_２８０によって決定され得る。モノクローナル抗体は、アリコート化され、−８０℃で保存され得る。

本発明のモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
本発明の抗体はまた、例えば、組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを使用して、当技術分野で周知のとおりに（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１２０２頁）、宿主細胞トランスフェクトーマ（ハイブリドーマの１つの型）中で産生され得る。

例えば、抗体またはその抗体断片を発現させるために、単離された核酸分子、例えば、部分的または全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、標準的な分子生物学技術（例えば、ＰＣＲ増幅または目的の抗体を発現するハイブリドーマを使用したｃＤＮＡクローニング）によって得ることができ、このＤＮＡは、遺伝子が転写制御配列および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように、発現ベクター中に挿入され得る。

語句「核酸分子」には、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子が含まれる。核酸分子は、一本鎖でも二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。

語句「単離された核酸分子」には、「単離された抗体」を含む、ｈＩＬ−１２に結合する抗体または抗体部分（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコードする核酸に関して本明細書中で使用する場合、その抗体または抗体部分をコードするヌクレオチド配列が、ｈＩＬ−１２以外の抗原に結合する抗体または抗体部分をコードする他のヌクレオチド配列を含まない核酸分子が含まれ、この他の配列は、ヒトゲノムＤＮＡ中ではこの核酸に天然に隣接し得る。したがって、例えば、抗ＩＬ−１２抗体のＶＨ領域をコードする本発明の単離された核酸は、ＩＬ−１２以外の抗原に結合する他のＶＨ領域をコードする他の配列を含まない。語句「単離された核酸分子」は、二価の二重特異的抗体（例えば、ＶＨ領域およびＶＬ領域が、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）の配列以外の他の配列を含まないディアボディ）をコードする配列も含む意図である。

用語「ベクター」には、ベクターが連結された別の核酸を輸送することが可能な核酸分子が含まれる。１つの型のベクターは「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡループをいう。別の型のベクターはウイルスベクターであり、ウイルスベクターでは、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノム中にライゲートされ得る。特定のベクターは、導入される宿主細胞中で自律複製化能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）が、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を指示可能である。かかるベクターは、本明細書中で「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、プラスミドは、最も一般に使用される形態のベクターであるため、「プラスミド」および「ベクター」は相互交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、等価な機能を果たすかかる他の形態の発現ベクター、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を含む意図である。

これに関して、用語「作動可能に連結された」は、ベクター内の転写制御配列および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節する意図した機能を果たすように、抗体遺伝子がベクター中にライゲートされていることを意味する意図である。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別々のベクター中に挿入され得、またはより典型的には、両方の遺伝子が同じ発現ベクター中に挿入される。抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子断片およびベクター上の相補的制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合には平滑末端ライゲーション）によって発現ベクター中に挿入される。記載された抗体の軽鎖および重鎖可変領域は、Ｖ_Ｈセグメントがベクター内のＣ_Ｈセグメント（複数可）に作動可能に連結され、Ｖ_Ｋセグメントがベクター内のＣ_Ｌセグメントに作動可能に連結されるように、記載された抗体の軽鎖および重鎖可変領域を、所望のアイソタイプの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を既にコードしている発現ベクター中に挿入することによって、任意の抗体アイソタイプの全長抗体遺伝子を創出するために使用され得る。それに加えてまたはその代わりに、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクター中にクローニングされ得る。このシグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。

抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を保有する。語句「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）には、組換え発現ベクターが導入された細胞が含まれる。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫をいう意図であることを理解すべきである。変異または環境の影響に起因して、特定の改変が後続の世代において生じ得るので、かかる子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合があるが、本明細書中で使用する場合、用語「宿主細胞」の範囲内になおも含まれる。特定の実施形態において、宿主細胞は、真核生物細胞または原核生物細胞であり得る。

用語「調節配列」は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含む意図である。かかる調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８５、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０））中に記載されている。調節配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換する宿主細胞、所望のタンパク質の発現レベルなどの選択のような因子に依存し得ることが、当業者により理解される。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい調節配列には、哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を指示するウイルスエレメント、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））およびポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが含まれる。その代わりに、非ウイルス性調節配列、例えば、ユビキチンプロモーターまたはβ−グロビンプロモーターが、使用され得る。なおさらには、調節エレメントは、異なる供給源由来の配列、例えば、ＳＶ４０初期プロモーターおよびヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の末端反復配列由来の配列を含むＳＲαプロモーター系から構成される（Ｔａｋｅｂｅ，Ｙ．ら（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６−４７２頁）。

抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子などのさらなる配列を保有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を促進する（例えば、全てＡｘｅｌらによる米国特許第４，３９９，２１６号，同第４，６３４，６６５号および同第５，１７９，０１７号を参照のこと。）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、薬物（例えばＧ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサート）に対する抵抗性を付与する。好ましい選択マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅と共にｄｈｆｒ−宿主細胞において使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。

軽鎖および重鎖の発現のために、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）が、標準的な技術によって宿主細胞中にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクション」の種々の形態は、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞中への外因性ＤＮＡの導入のために一般に使用される広範な種々の技術（例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなど）を包含する意図である。原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞のいずれかにおいて本発明の抗体を発現させることは理論的には可能であるが、真核生物細胞、最も好ましくは哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましいが、これは、かかる真核生物細胞、特に哺乳動物細胞が、適正に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体をアセンブルし分泌するためには、原核生物細胞よりもふさわしいからである。抗体遺伝子の原核生物発現は、高収率の活性抗体の産生には無力であることが報告されている（Ｂｏｓｓ，Ｍ．Ａ．およびＷｏｏｄ，Ｃ．Ｒ．（１９８５）ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ６：１２−１３頁）。

上記に関して、本発明の別の態様は、本発明の抗体および抗体部分の組換え発現のために使用され得る、核酸、ベクターおよび宿主細胞組成物に関する。一実施形態において、本発明は、Ｊ６９５のＣＤＲ、ならびに／またはＪ６９５の全長重鎖および／または軽鎖可変領域をコードする、単離された核酸を特徴とする。したがって、一実施形態において、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列中に示されるＪ６９５重鎖ＣＤＲ３をコードする、抗体重鎖可変領域をコードする単離された核酸を提供する。一実施形態において、抗体重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号１のアミノ酸配列中に示されるＪ６９５重鎖ＣＤＲ２をさらにコードする。別の実施形態において、抗体重鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号１のアミノ酸配列中に示されるＪ６９５重鎖ＣＤＲ１をさらにコードする。別の実施形態において、単離された核酸は、配列番号１のアミノ酸配列（Ｊ６９５の完全ＶＨ領域）を含む抗体重鎖可変領域をコードする。種々の実施形態において、この核酸は、本明細書中で記載される１つまたは複数の置換（例えば、上記セクションＩＩ（Ａ）（２）およびＩＩ（Ｂ）に記載される。）をさらに含む抗体重鎖可変領域をコードする。

他の実施形態において、本発明は、配列番号２のアミノ酸配列中に示されるＪ６９５軽鎖ＣＤＲ３をコードする抗体軽鎖可変領域をコードする単離された核酸を提供する。一実施形態において、抗体軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号２のアミノ酸配列中に示されるＪ６９５軽鎖ＣＤＲ２をさらにコードする。一実施形態において、抗体軽鎖可変領域をコードする核酸は、配列番号２のアミノ酸配列中に示されるＪ６９５軽鎖ＣＤＲ１をさらにコードする。別の実施形態において、単離された核酸は、配列番号２のアミノ酸配列（Ｊ６９５の完全ＶＬ領域）を含む抗体軽鎖可変領域をコードする。種々の実施形態において、この核酸は、本明細書中で記載される１つまたは複数の置換（例えば、上記セクションＩＩ（Ａ）（２）およびＩＩ（Ｂ）に記載される。）をさらに含む抗体軽鎖可変領域をコードする。

本発明はまた、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを提供する。例えば、一実施形態において、本発明は、ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む可変領域を有する抗体重鎖；およびｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含む可変領域を有する抗体軽鎖をコードし、本明細書中で記載される１つまたは複数の置換（例えば、上記セクションＩＩ（Ａ）（２）およびＩＩ（Ｂ）に記載される。）をさらに含む、組換え発現ベクターを提供する。

本発明は、１つまたは複数の本発明の組換え発現ベクターが導入された宿主細胞もまた提供する。なおさらには、本発明は、本発明の組換えヒト抗体が合成されるまで適切な培地中で本発明の宿主細胞を培養することによって、本発明の組換えヒト抗体を合成する方法を提供する。この方法は、培養培地から組換えヒト抗体を単離することをさらに含み得る。

本発明の組換え抗体を発現させるための好ましい哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．ＫａｕｆｍａｎおよびＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１頁に記載されるようなＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６−４２２０頁に記載されたｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が含まれる。）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞およびＳＰ２細胞が含まれる。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞で使用するための別の好ましい発現系は、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ３３８，８４１中に開示されたＧＳ遺伝子発現系である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入される場合、この抗体は、宿主細胞における抗体の発現、またはより好ましくは宿主細胞が増殖した培養培地中への抗体の分泌を可能にするのに充分な期間にわたり、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して、培養培地から回収され得る。

Ｃ．ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体の特徴付け
本発明は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに特異的に結合する、抗ＩＬ−１２および／または抗ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体（それぞれ、本明細書中で、ＩＬ−１２ｐ４０抗体およびＩＬ−２３ｐ４０抗体ともいう。）を提供する。本明細書中で使用する場合、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに「特異的に結合する」抗体は、１×１０^−７Ｍ以下、より好ましくは５×１０^−８Ｍ以下、より好ましくは１×１０^−８Ｍ以下、より好ましくは５×１０^−９Ｍ以下、より好ましくは１ｘ１０^−９Ｍ以下、より好ましくは５×１０^−１０Ｍ以下、より好ましくは１×１０^−１０Ｍ以下、より好ましくは１×１０^−１１以下のＫ_ｄでＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体をいう意図である。

用語、タンパク質または細胞に「実質的に結合しない」は、本明細書中で使用する場合、そのタンパク質または細胞に対して結合しないまたは高い親和性で結合しないこと、即ち、１×１０^−６Ｍ以上、より好ましくは１×１０^−５Ｍ以上、より好ましくは１×１０^−４Ｍ以上、より好ましくは１×１０^−３Ｍ以上、さらにより好ましくは１×１０^−２Ｍ以上のＫ_ｄでタンパク質または細胞に結合することを意味する。

本発明が提供する抗ＩＬ−１２および／または抗ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対する高い親和性での結合により、場合によって特徴付けられ得る。抗原に対する抗体の親和性またはアビディティーは、任意の適切な方法を使用して実験的に決定され得る。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ＡｎｔｉｇｅｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」、ＩｎＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．編、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９８４）；Ｋｕｂｙ、ＪａｎｉｓＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏｍｐａｎｙ：ＮｅｗＹｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９２）；および本明細書中に記載される方法を参照のこと。）。特定の抗体−抗原相互作用の測定された親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ）下で測定された場合には変動し得る。したがって、親和性および他の抗原結合パラメータ（例えば、Ｋ_ａ）の測定は、抗体および抗原の標準化溶液、ならびに本明細書中に記載される緩衝液などの標準化緩衝液を用いて行うことが好ましい。例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットおよびＲＩＡを含む、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対する抗体の結合能を評価するための標準的なアッセイが、当技術分野で公知である。抗体の結合動態学（例えば、結合親和性）もまた、当技術分野で公知の標準的なアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳｃａｔｃｈａｒｄおよびＢｉａｃｏｒｅ分析によって、評価され得る。

用語「Ｋ_ｄ」は、本明細書中で使用する場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数をいう意図であり、モル濃度（Ｍ）で表現される。抗体のＫ_ｄ値は、当技術分野で充分確立された方法を試用して決定され得る。抗体のＫ_ｄを決定するための好ましい方法は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサシステムを好ましくは使用して、表面プラズモン共鳴を使用することによる。

抗体の解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）は、表面プラズモン共鳴によって決定され得る。一般に、表面プラズモン共鳴分析は、リガンド（例えば、バイオセンサマトリックス上に固定化された組換えヒトＩＬ−１２）と分析物（溶液中の抗体）との間のリアルタイムの結合相互作用を、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｓｅｎｓｏｒ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定する。表面プラズモン分析は、分析物（バイオセンサマトリックス上の抗体）を固定化し、リガンド（例えば、溶液中の組換えＩＬ−１２）を提示することによっても、実施され得る。

語句「表面プラズモン共鳴」には、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｓｅｎｓｏｒＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用した、バイオセンサマトリックス内のタンパク質濃度における変更の検出によって、リアルタイムの生体分子特異的な相互作用の分析を可能にする光学現象が含まれる。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６頁；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１１：６２０−６２７頁；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１頁；およびＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．ら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７頁を参照のこと。

特定の実施形態において、本発明が提供する抗体は、広範な親和性（Ｋ_ｄ）で、ＩＬ−１２（例えば、ヒトＩＬ−１２）および／またはＩＬ−２３（例えば、ヒトＩＬ−２３）のｐ４０サブユニットに結合し得る。一実施形態において、本発明の抗体は、高い親和性でヒトＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。例えば、抗体は、約１０^−７Ｍ以下のＫ_ｄ、例えば、これらに限定されないが、０．１−９．９（またはその中の任意の範囲もしくは値）×１０^−７、１０^−８、１０^−９、１０^−１０、１０^−１１、１０^−１２、１０^−１３またはその中の任意の範囲もしくは値で、ヒトＩＬ−１２および／またはヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し得る。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−６Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−７Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−８Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−９Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−１１Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−１２Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、約１×１０^−１３Ｍ以下のＫ_ｄで、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する。種々の実施形態において、本発明の抗体は、５×１０^−８Ｍ以下のＫ_ｄ、１×１０^−８Ｍ以下のＫ_ｄ、５×１０^−９Ｍ以下のＫ_ｄ、１×１０^−９Ｍ以下のＫ_ｄ、５×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄ、または１×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄで、ｐ４０サブユニット含有サイトカイン、例えば、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３に結合する。

特定の他の実施形態において、本発明が提供する抗体は、表面プラズモン共鳴によって決定されるように、０．１ｓ^−１以下のｋ_ｏｆｆ速度定数で、ＩＬ−１２（例えば、ヒトＩＬ−１２）および／またはＩＬ−２３（例えば、ヒトＩＬ−２３）のｐ４０サブユニットに結合し得る。一実施形態において、単離されたＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット抗体またはその抗原結合部分は、１×１０^−２ｓ^−１以下のｋ_ｏｆｆ速度定数で、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットから解離する。より好ましい実施形態において、単離されたＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット抗体、またはその抗原結合部分は、１×１０^−３ｓ^−１以下のｋ_ｏｆｆ速度定数で、ＩＬ−１２および／もしくはヒトＩＬ−２３、ならびに／またはそれらのｐ４０サブユニットから解離する。より好ましい実施形態において、単離されたＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット抗体またはその抗原結合部分は、１×１０^−４ｓ^−１以下のｋ_ｏｆｆ速度定数で、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３、ならびに／またはそれらのｐ４０サブユニットから解離する。より好ましい実施形態において、単離されたＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット抗体、またはその抗原結合部分は、１×１０^−５ｓ^−１以下のｋ_ｏｆｆ速度定数で、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３、ならびに／またはそれらのｐ４０サブユニットから解離する。

種々の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、中和する。本発明により提供される抗体またはその抗原結合部分の中和活性は、本明細書中に記載されるいくつかの適切なインビトロアッセイのうち１つまたは複数を使用して評価され得る。「中和抗体」（または「ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を中和する抗体」もしくは「ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性を中和する抗体」）には、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに対するその結合が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの生物学的活性、例えば、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の生物学的活性の阻害を生じる、抗体が含まれる。この生物学的活性の阻害は、ＩＬ−１２／２３のｐ４０サブユニットならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３の生物学的活性のうち１つまたは複数の指標（例えば、米国特許第６，９１４，１２８号（その全内容は、参照により本明細書中に組み込む。）に詳細に記載されるような、例えば、フィトヘマグルチニン芽球増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）におけるヒトフィトヘマグルチニン芽球増殖の阻害、ヒト芽細胞によるＩＬ−１２誘導性のインターフェロンγ産生の阻害（ＩＦＮγアッセイ）、またはＩＬ−１２（またはＩＬ−２３）レセプター結合アッセイ（ＲＢＡアッセイ）におけるレセプター結合の阻害）を測定することによって評価され得る。ＩＬ−１２／２３のｐ４０サブユニットならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３の生物学的活性のこれらの指標は、当技術分野で公知のいくつかの標準的なインビトロアッセイまたはインビボアッセイのうち１つまたは複数によって評価され得る。

抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体は、ＰＨＡ芽球増殖（その増殖は、ＩＬ−１２によって刺激される。）を阻害する能力について評価され得る。標準的なアッセイにおいて、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体の段階希釈物が、マイクロタイタープレート（Ｕ底、９６ウェル、Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）において、１００ｍｌのＲＰＭＩ完全培地中２３０ｐｇ／ｍｌのｈＩＬ−１２と共に、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間事前インキュベートされる。ＰＨＡ芽細胞が単離され、１回洗浄され、ＲＰＭＩ完全培地中に３×１０^５細胞／ｍｌの細胞密度になるように再懸濁される。ＰＨＡ芽球（１００ｍｌ、３×１０^４細胞）が抗体／ｈＩＬ−１２混合物中に添加され、３７℃、５％ＣＯ_２で３日間インキュベートされ、０．５ｍＣｉ／ウェルの（３Ｈ）−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＡｒｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）で４−６時間標識される。培養物内容は、細胞収集器（Ｔｏｍｔｅｃ、Ｏｒａｎｇｅ、ＣＴ）によってグラスファイバーフィルター上で収集され、細胞ＤＮＡへの（^３Ｈ）−チミジン取り込みが、液体シンチレーション計数によって測定される。

したがって、一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−６Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロフィトヘマグルチニン芽球増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）においてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−７Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロフィトヘマグルチニン芽球増殖アッセイ（ＰＨＡアッセイ）においてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−８Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロＰＨＡアッセイにおいてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−９Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロＰＨＡアッセイにおいてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−１０Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロＰＨＡアッセイにおいてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−１１Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロＰＨＡアッセイにおいてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、１×１０^−１２Ｍ以下のＩＣ_５０で、インビトロＰＨＡアッセイにおいてフィトヘマグルチニン芽球増殖を阻害する。

ＰＨＡ芽球によるＩＦＮγ産生（この産生は、ＩＬ−１２によって刺激される。）を阻害する抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体の能力は、以下のように分析され得る。種々の濃度の抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体が、マイクロタイタープレート（Ｕ底、９６ウェル、Ｃｏｓｔａｒ）において、１００ｍｌのＲＰＭＩ完全培地中２００−４００ｐｇ／ｍｌのｈＩＬ−１２と共に、３７℃、５％ＣＯ_２で１時間事前インキュベートされる。ＰＨＡ芽細胞が単離され、１回洗浄され、ＲＰＭＩ完全培地中に１×１０^７細胞／ｍｌの細胞密度になるように再懸濁される。ＰＨＡ芽球（１×１０^６細胞が１００μｌ）が抗体／ｈＩＬ−１２混合物中に添加され、３７℃および５％ＣＯ_２で１８時間インキュベートされる。インキュベーション後、１５０μｌの無細胞上清が、各ウェルから取り出され、産生されたヒトＩＦＮγのレベルが、ＥＬＩＳＡ（ＥｎｄｏｇｅｎＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇａｍｍａＥＬＩＳＡ、Ｅｎｄｏｇｅｎ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）によって測定される。

したがって、他の実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、約１．０×１０^−８ＭのＩＣ_５０値で、ヒト芽細胞によるＩＬ−１２誘導性のインターフェロンγ産生を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、約１．０×１０^−９ＭのＩＣ_５０値で、ヒト芽細胞によるＩＬ−１２誘導性のインターフェロンγ産生を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、約１．０×１０^−１０ＭのＩＣ_５０値で、ヒト芽細胞によるＩＬ−１２誘導性のインターフェロンγ産生を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、約１．０×１０^−１１ＭのＩＣ_５０値で、ヒト芽細胞によるＩＬ−１２誘導性のインターフェロンγ産生を阻害する。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合し、約１．０×１０^−１２ＭのＩＣ_５０値で、ヒト芽細胞によるＩＬ−１２誘導性のインターフェロンγ産生を阻害する。

抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体がＩＬ−２３の活性を阻害する能力は、公知の方法およびアッセイ、例えば、当技術分野で公知の（ＩＬ−２３タンパク質、ＩＬ−２３アッセイおよびＩＬ−１２アッセイについての記載および言及については、例えば、ＩＬ−２３の下で、ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅ（その内容は、参照により本明細書中に全体を組み込む。）を参照のこと。）および本明細書中に記載される方法およびアッセイを使用して、分析され得る。例えば、ヒトＩＬ−２３は、ＰＨＡ芽球Ｔ細胞およびメモリーＴ細胞によるＩＦＮγの産生を刺激することが示されており、また、両方の細胞型の増殖を誘導することも示されている。したがって、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体がＰＨＡ芽球によるＩＦＮγの産生（この産生は、ＩＬ−２３によって刺激される。）を阻害する能力は、ＩＬ−１２に関して上記したように分析され得る。さらに、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体は、ＰＨＡ芽球増殖（その増殖は、ＩＬ−２３によって刺激される。）を阻害する能力について、ＩＬ−１２に関して上記したように評価され得る。ＩＬ−２３およびＩＬ−１２は共に、ＪＡＫ２、ＴＹＫ２ならびにＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４およびＳＴＡＴ５を含む同じシグナル伝達分子を活性化する。ＩＬ−１２と比較して、ＩＬ−２３に応答したＳＴＡＴ４活性化はかなり弱く、異なるＤＮＡ結合ＳＴＡＴ複合体が形成する。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２レセプターのβ１サブユニットに結合するがβ２サブユニットには結合せず、ＳＴＡＴタンパク質の１つＳＴＡＴ４を、ＰＨＡ芽球Ｔ細胞において活性化する。したがって、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体がＰＨＡ芽球（ｂｌａｓｙ）Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ４の活性化を阻害する能力が、分析され得る（例えば、Ｐａｒｈａｍら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６８（１１）：５６９９−５７０８頁２００２（その全内容は、本明細書により参照により本明細書中に組み込む。）中に記載されるアッセイを参照のこと。）。Ｓｈｉｍｏｚａｔｏら（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１１７（１）：２２−２８頁（２００６））は、ＩＬ−２３機能、特に脾細胞におけるＩＬ−２３誘導性のサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）産生が、ＩＬ−１２−ｐ４０のｐ４０サブユニット（これは、ＩＬ−２３レセプターとの結合について競合する。）によって阻害されることを報告している。したがって、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体が脾細胞におけるサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）の活性化を阻害する能力が、例えば、Ｓｈｉｍｏｚａｔｏら（その全内容は、本明細書により参照により本明細書中に組み込む。）に記載されたように分析され得る。

別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、低い毒性を有する。特に、抗体またはその抗原結合部分（個々の成分、例えば可変領域、定常領域およびフレームワークが、個々におよび／または集合的に、低い免疫原性を有する。）が、本発明において有用である。本発明において使用され得る抗体は、場合によって、症状の測定可能な軽減ならびに低いおよび／または許容可能な毒性を伴い、長期にわたって患者を治療する能力を特徴とする。低いもしくは許容可能な免疫原性および／または高い親和性、ならびに他の適切な特性は、達成される治療結果に寄与し得る。「低い免疫原性」は、約７５％未満、または好ましくは約５０％未満の治療された患者において、顕著なＨＡＨＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＭＡ応答を生じさせる、および／または治療された患者において低い力価（二重抗原酵素イムノアッセイ（ｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｇｅｎｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）で測定して、約３００未満、好ましくは約１００未満）を生じさせるとして、本明細書中で規定される（Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｌａｎｃｅｔ３４４：１１２５−１１２７頁（１９９４）（これは、参照によって本明細書中に全体を組み込む。））。「低い免疫原性」は、同じように治療した患者における本発明の抗ＩＬ−１２抗体および／または抗ＩＬ−２３抗体に対する抗体の力価決定可能なレベルの発生率としても規定され得、治療期間の間の推奨された治療過程にわたり推奨された用量で治療された患者の２５％未満、好ましくは治療された患者の１０％未満で生じると規定される。

本発明の抗体は、例えば標準的なＥＬＩＳＡによって、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット（例えば、本明細書中のセクションＩＶ（Ａ）、ＩＶ（Ｃ）ならびに／または表３および表４中に記載されるような、一部分、ドメイン、部位またはエピトープ）に対する結合について試験され得る。簡潔に述べると、マイクロタイタープレートが、ＰＢＳ中０．２５μｇ／ｍｌで、精製されたｐ４０サブユニット（または好ましいｐ４０ドメイン）で被覆され、次いで、ＰＢＳ中５％のウシ血清アルブミンでブロッキングされる。抗体の希釈物（例えば、免疫したマウス、例えば、ｐ４０サブユニットドメインで免疫したマウス由来の血漿の希釈物）が各ウェルに添加され、３７℃で１−２時間インキュベートされる。プレートはＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄され、次いでアルカリホスファターゼにコンジュゲート化された二次試薬（例えば、ヒト抗体に対しては、ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的ポリクローナル試薬）と共に３７℃で１時間インキュベートされる。洗浄後、プレートは、ｐＮＰＰ基質（１ｍｇ／ｍｌ）で発色させ、４０５−６５０のＯＤで分析される。好ましくは、最も高い力価を生じるマウスが、融合のために使用される。

上記のＥＬＩＳＡアッセイは、免疫原との陽性の反応性を示すハイブリドーマについてスクリーニングするためにも使用され得る。例えば、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット（例えば、本明細書中のセクションＩＶ（Ａ）、ＩＶ（Ｃ）ならびに／または表３および表４中に記載されるような、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの一部分、ドメイン、部位またはエピトープ）に高いアビディティーで結合するハイブリドーマがサブクローニングされ、さらに特徴付けられる。親細胞の反応性を保持する（ＥＬＩＳＡによる）各ハイブリドーマからの１つのクローンが、−１４０℃で保存される５−１０バイアルの細胞バンクを作製するために、および抗体精製のために選択され得る。

抗ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマが、モノクローナル抗体精製のために２リットルのスピナーフラスコ中で増殖され得る。上清が濾過され、濃縮され、その後プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）での親和性クロマトグラフィーにかけられ得る。溶出したＩｇＧは、純度を確認するために、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーによってチェックされ得る。緩衝溶液がＰＢＳに交換され得、濃度が、１．４３吸光係数を使用してＯＤ_２８０によって決定され得る。モノクローナル抗体は、アリコート化され、−８０℃で保存され得る。

選択されたモノクローナル抗体が独自のエピトープに結合するか否かを決定するために、各抗体が、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用して、ビオチン化され得る。未標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用した競合研究が、上記のようにＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット（例えば、本明細書中のセクションＩＶ（Ａ）、ＩＶ（Ｃ）ならびに／または表３および表４中に記載されるような、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの一部分、ドメイン、部位またはエピトープ）で被覆されたＥＬＩＳＡプレートを使用して実施され得る。ビオチン化ｍＡｂ結合は、ストレプ−アビジン（ｓｔｒｅｐ−ａｖｉｄｉｎ）−アルカリホスファターゼプローブを用いて検出され得る。

精製された抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡが、特定のアイソタイプの抗体に特異的な試薬を使用して実施され得る。例えば、ヒトモノクローナル抗体のアイソタイプを決定するために、マイクロタイタープレートのウェルが、１μｇ／ｍｌの抗ヒト免疫グロブリンで４℃で一晩被覆され得る。１％ＢＳＡでブロッキングした後、プレートを、１または２時間にわたり周囲温度で１μｇ／ｍｌ以下の試験モノクローナル抗体または精製されたアイソタイプ対照と反応させる。次いで、ウェルを、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＭ特異的アルカリホスファターゼコンジュゲート化プローブのいずれかと反応させ得る。プレートは、上記のように発色および分析される。

抗ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３ｐ４０サブユニットヒトＩｇＧは、本明細書中に記載されるように、ウエスタンブロットによって、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットまたはそのドメインとの反応性についてさらに試験され得る。簡潔に述べると、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット（例えば、本明細書中のセクションＩＶ（Ａ）、ＩＶ（Ｃ）ならびに／または表３および表４中に記載されるような、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの一部分、ドメイン、部位またはエピトープ）が調製され得、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供され得る。電気泳動後、分離された抗原は、ニトロセルロースメンブレンに移され、１０％胎仔ウシ血清でブロッキングされ、試験すべきモノクローナル抗体で探査される。ヒトＩｇＧ結合は、抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼを使用して検出され得、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質錠剤（ＳｉｇｍａＣｈｅｍ．Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）を用いて発色され得る。

エピトープマッピングが、本発明の抗体またはその抗原結合断片の結合部位を決定するために使用され得る。立体配座エピトープのマッピングをさらに可能にするいくつかの方法が利用可能である。例えば、Ｔｉｍｍｅｒｍａｎら（ＭｏｌＤｉｖｅｒｓ．２００４；８（２）：６１−７７頁）に開示された方法が使用され得る。Ｔｉｍｍｅｒｍａｎらは、２つの新規技術、ドメインスキャン（ＤｏｍａｉｎＳｃａｎ）およびマトリックススキャン（ＭａｔｒｉｘＳｃａｎ）を使用して、不連続／立体配座エピトープを首尾よくマッピングできた。Ａｎｓｏｎｇら（ＪＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔ．２００６．４（４）：８４２−７頁）に開示された技術もまた使用され得る。Ａｎｓｏｎｇらは、抗体Ｒ８Ｂ１２によって認識される不連続エピトープをマッピングするために、親和性指向質量分析（ａｆｆｉｎｉｔｙｄｉｒｅｃｔｅｄｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）を使用した。さらに、タンパク質断層撮影（ＰｒｏｔｅｉｎＴｏｍｏｇｒａｐｈｙ）などの画像化技術が、標的ＲＴＫへの抗体またはペプチドの結合を可視化するために使用され得る。タンパク質断層撮影は、分子相互作用に関する洞察を得るために以前から使用されており、阻害抗体が、ＥＧＦＲのドメインＩＩＩに結合することによって作用し、それにより、ＥＧＦＲを柔軟性のない不活性な立体配座に縛り付けることを示すために使用された（Ｌａｍｍｅｒｔｓら、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２００８．１０５（１６）：６１０９−１４頁）。部位特異的変異誘発などのより伝統的な方法もまた、不連続エピトープをマッピングするために適用され得る。不連続エピトープに関与すると考えられているアミノ酸領域が、選択的に変異され得、本発明の抗体またはその抗原結合断片への結合についてアッセイされ得る。いずれかの領域が変異したときに抗体が結合できないことは、結合が、両方のアミノ酸セグメントに依存していることを示し得る。上記のように、いくつかの線状エピトープは、本発明の部分に結合するために存在しなくてはならない特定の３次元構造を特徴とする。かかるエピトープは、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットがそのネイティブ状態または折り畳まれた状態にある場合、またＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットが変性した場合に、抗体の結合をアッセイすることによって発見され得る。折り畳まれた状態でのみ結合が生じるという観察は、そのエピトープが、特定の折り畳まれた構造を特徴とする線状エピトープまたは折り畳まれたタンパク質中にのみ存在する不連続エピトープのいずれかであることを示す。

ＶＩ．本発明の抗体を含む医薬組成物および医薬品投与
本発明の抗体および抗体部分は、対象への投与に適した医薬組成物中に取り込まれ得る。典型的には、医薬組成物は、本発明の抗体または抗体部分および薬学的に許容される担体を含む。本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性の任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に許容される担体の例には、１つまたは複数の水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。薬学的に許容される担体は、抗体または抗体部分の保存可能期間または有効性を増強する、微量の補助物質、例えば湿潤剤もしくは乳化剤、防腐剤または緩衝剤をさらに含み得る。

本発明の抗体および抗体部分は、非経口投与に適した医薬組成物中に取り込まれ得る。好ましくは、抗体または抗体部分は、０．１−２５０ｍｇ／ｍｌの抗体を含む注射可能な溶液として調製される。注射可能な溶液は、フリントもしくはアンバーバイアル、アンプルまたは事前充填されたシリンジ中の、液体または凍結乾燥投薬形態のいずれかで構成され得る。緩衝液は、最適には５−１０ｍＭの、ｐＨ５．０−７．０（最適にはｐＨ６．０）の、Ｌ−ヒスチジン（１−５０ｍＭ）であり得る。他の適切な緩衝液には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。塩化ナトリウムは、０−３００ｍＭ（最適には、液体投薬形態について１５０ｍＭ）の濃度で、溶液の毒性を改変するために使用され得る。抗凍結剤（主に０−１０％のスクロース（最適には０．５−１．０％））が、凍結乾燥投薬形態に含まれ得る。他の適切な抗凍結剤には、トレハロースおよびラクトースが含まれる。充填剤（主に１−１０％のマンニトール（最適には２４％））が、凍結乾燥投薬形態に含まれ得る。安定剤（主に１−５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には５−１０ｍＭ））が、液体および凍結乾燥投薬形態の両方において使用され得る。他の適切な充填剤には、グリシン、アルギニンが含まれ、０−０．０５％のポリソルベート−８０（最適には０．００５−０．０１％）として含まれ得る。さらなる界面活性剤には、ポリソルベート２０およびＢＲＩＪ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。

好ましい実施形態において、医薬組成物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ−１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で抗体を含む。抗体のより好ましい投薬量には、１週間おきに投与される１ｍｇ／ｋｇまたは毎週投与される０．３ｍｇ／ｋｇが含まれる。

本発明の組成物は、種々の形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体および固体の投薬形態、例えば、液体溶液（例えば、注射可能な溶液および注入可能な溶液）、分散物または懸濁物、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤が含まれる。好ましい形態は、投与適用および治療適用の意図した様式に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射可能な溶液または注入可能な溶液の形態、例えば、他の抗体によるヒトの受動免疫に使用される組成物と同様の組成物である。投与の好ましい様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋内）である。好ましい実施形態において、抗体は、静脈内注入または静脈内注射によって投与される。別の好ましい実施形態において、抗体は、筋内注射または皮下注射によって投与される。

治療組成物は典型的に、製造および保存の条件下で無菌および安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序化された構造として製剤化され得る。無菌の注射可能な溶液は、上で列挙した成分のうち１つまたは成分の組み合わせと共に、適切な溶媒中に必要な量で活性化合物（即ち、抗体または抗体部分）を取り込み、必要に応じてその後濾過滅菌することによって、調製され得る。一般に、分散物は、塩基性分散媒および上で列挙した必要な他の成分を含む無菌ビヒクル中に活性化合物を取り込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌の凍結乾燥散剤の場合、好ましい調製方法は、事前に無菌濾過したその溶液から、活性成分＋任意のさらなる所望の成分の散剤を生じる、真空乾燥および噴霧乾燥である。溶液の適切な流動性が、例えば、レクチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射可能な組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによって、もたらされ得る。

本発明の抗体および抗体部分は、当技術分野で公知の種々の方法によって投与され得るが、多くの治療適用について、投与の好ましい経路／様式は、皮下注射、静脈内注射または注入である。当業者に理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に依存して変動する。特定の実施形態において、活性化合物は、化合物を迅速な放出から保護する担体を用いて調製され得る（例えば、徐放性製剤（移植物、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系が含まれる。））。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸が使用され得る。かかる製剤の調製のための多数の方法が特許されており、または当業者に一般に公知である。例えば、ＳｕｓｔａｉｎｅｄａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９７８を参照のこと。

特定の実施形態において、本発明の抗体または抗体部分は、例えば不活性希釈剤または同化可能な食用担体を用いて経口投与され得る。化合物（および望ましい場合には他の成分）はまた、硬殻ゼラチンカプセルもしくは軟殻ゼラチンカプセル中に封入され得、錠剤へと圧縮され得、または対象の食餌中に直接取り込まれ得る。経口治療投与のために、化合物は、賦形剤と共に取り込まれ得、摂取可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁物、シロップ、ウエハなどの形態で使用され得る。非経口投与以外で本発明の化合物を投与するために、その不活性化を防止する物質で化合物を被覆するまたはその不活性化を防止する物質と化合物を同時投与することが必要な場合がある。

補足的な活性化合物も、組成物中に取り込まれ得る。特定の実施形態において、本発明の抗体または抗体部分は、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害を治療するために有用な１つまたは複数のさらなる治療剤と同時製剤化および／または同時投与される。例えば、本発明の抗ＩＬ−１２抗体、抗ＩＬ−２３抗体および／もしくは抗ｐ４０抗体または抗体部分は、他の標的に結合する１つまたは複数のさらなる抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体または細胞表面分子に結合する抗体）と同時製剤化および／または同時投与され得る。さらに、１つまたは複数の本発明の抗体は、上記治療剤のうち２つ以上と併用して使用され得る。かかる併用療法は、より低い投薬量の投与される治療剤を有利に利用し得、したがって、種々の単独療法に伴って起こり得る毒性または合併症を回避し得る。本発明の抗体が併用療法の一部として使用される場合、抗体単独が対象に投与される場合よりも低い投薬量の抗体が望まれ得ることが、当業者に理解される（例えば、相乗的な治療効果は、併用療法の使用を介して達成され得、この併用療法は次に、所望の治療効果を達成するためにより低い用量の抗体を使用することを可能にする。）。

インターロイキン１２および／または２３は、免疫および炎症要素が関与する種々の疾患に伴う病理において重要な役割を果たす。これらの疾患には、以下が含まれるがこれらに限定されない：関節リウマチ、変形性関節症、若年性関節リウマチ、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎強皮症、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植片拒絶、臓器移植に伴う急性または慢性の免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎臓の微視的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性、多腺性機能不全Ｉ型および多腺性機能不全ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節症、関節症、ライター症候群、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎性関節症、腸炎性滑膜炎、クラミジア、エルシニアおよびサルモネラ関連関節症、脊椎関節症（ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｏｐａｔｈｙ）、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明自己免疫性肝炎、後天性免疫不全病症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、原因不明の線維化性胞隔炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連間質性肺疾患、全身性強皮症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性胆管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬物誘発性間質性肺疾患、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的な自己免疫性またはルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫介在性低血糖、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の微視的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、男性不妊症特発性またはＮＯＳ、***自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、インスリン依存性糖尿病、交感性眼炎、結合組織病に二次的な肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性強皮症、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫性昏睡、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎および白斑。本発明のヒト抗体および抗体部分は、自己免疫疾患、特に炎症を伴う自己免疫疾患（リウマチ性脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎が含まれる。）を治療するために使用され得る。

したがって、特定の態様において、本発明は、本明細書中に記載された任意の抗体またはそれらの併用の有効量を投与することを含む、疾患または障害を治療する方法を提供し、この抗体または抗体の併用は、疾患または障害を寛解するのに有効である。特定の実施形態において、本発明の抗体は、薬学的に許容される担体および／または賦形剤と共に投与される。

好ましくは、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、以下により詳細に記載されるように、関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病および乾癬を治療するために使用される。

本発明のヒト抗体または抗体部分はまた、自己免疫疾患および炎症性疾患の治療において有用な１つまたは複数のさらなる治療剤と共に投与され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、かかる疾患を治療するために、単独でまたは併用して使用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分が、単独でまたはさらなる薬剤（例えば治療剤）と併用して使用され得、前記さらなる薬剤が、その意図した目的のために当業者により選択されることを理解すべきである。例えば、さらなる薬剤は、本発明の抗体によって治療される疾患または状態を治療するために有用であると当技術分野で認識された治療剤であり得る。さらなる薬剤はまた、治療組成物に有益な特質を付与する薬剤、例えば、組成物の粘性をもたらす薬剤であり得る。

本発明の範囲内に含まれる併用は、その意図した目的に有用な併用であることを、さらに理解すべきである。以下に示す薬剤は例示目的であり、限定を意図しない。本発明の一部である併用は、本発明の抗体および以下のリストから選択される少なくとも１つのさらなる薬剤であり得る。その併用が、形成された組成物がその意図した機能を実行できるようなものである場合、この併用はまた、１つより多いさらなる薬剤、例えば、２つまたは３つのさらなる薬剤を含み得る。

したがって、さらなる実施形態において、本発明の抗体は、場合によって、抗感染薬物、心血管（ＣＶ）系薬物、中枢神経系（ＣＮＳ）薬物、自律神経系（ＡＮＳ）薬物、気道薬物、胃腸（Ｇ１）管薬物、ホルモン薬物、体液バランスまたは電解質バランスのための薬物、血液系薬物、抗悪性腫瘍薬、免疫調節薬物、眼、耳もしくは鼻の薬物、外用薬物、栄養薬物などのうち少なくとも１つから選択される少なくとも１つの化合物またはタンパク質の有効量をさらに含み得る。本明細書中に提示されるそれぞれについて、製剤、適応症、投薬および投与を含めて、かかる薬物は当技術分野で周知である（例えば、Ｎｕｒｓｉｎｇ２００１ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＤｒｕｇｓ、第２１版、ＳｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅＣｏｒｐ．、Ｓｐｒｉｎｇｈｏｕｓｅ、Ｐａ．、２００１；ＨｅａｌｔｈＰｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ’ｓＤｒｕｇＧｕｉｄｅ２００１、編、Ｓｈａｎｎｏｎ、Ｗｉｌｓｏｎ、Ｓｔａｎｇ、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ、ＵｐｐｅｒＳａｄｄｌｅＲｉｖｅｒ、Ｎ．Ｊ．；ＰｈａｒｍｃｏｔｈｅｒａｐｙＨａｎｄｂｏｏｋ、Ｗｅｌｌｓら編、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．を参照のこと。これらはそれぞれ、参照により本明細書中に全体を組み込む。）。

好ましい併用は、イブプロフェンなどの薬物を含む、ＮＳＡＩＤＳとも呼ばれる非ステロイド性抗炎症薬物（複数可）である。他の好ましい併用は、プレドニゾロンを含むコルチコステロイドであり、ステロイド使用の周知の副作用は、本発明の抗ＩＬ−１２抗体と併用して患者を治療する場合には、要求されるステロイド用量を次第に少なくすることによって、低下またはさらには排除され得る。本発明の抗体または抗体部分が併用され得る関節リウマチのための治療剤の非限定的な例には以下が含まれる：サイトカイン抑制性抗炎症薬物（複数可）（ＣＳＡＩＤ）；他のヒトサイトカインまたは成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）に対する抗体またはそれらのアンタゴニスト。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、細胞表面分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、またはＣＤ１５４（ｇｐ３９またはＣＤ４０Ｌ）を含む他のリガンドに対する抗体と併用され得る。

治療剤の好ましい併用は、自己免疫および引き続く炎症カスケード中の異なる地点において妨害し得、好ましい例には、ＴＮＦアンタゴニスト、例えばキメラ、ヒト化もしくはヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（米国特許出願第０８／５９９，２２６号、１９９６年２月９日出願）、ｃＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＤＰ８７０）、および可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦレセプター、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））またはｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３）、およびまたＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター；同様にＩＬ−１インヒビター（例えば、インターロイキン−１変換酵素インヒビター、例えば、Ｖｘ７４０またはＩＬ−１ＲＡなど）が含まれ、同じ理由で有効であり得る。他の好ましい併用は、インターロイキン１１、抗Ｐ７ｓおよびｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）を含む。なお別の好ましい併用は、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存して、またはＩＬ−１２機能に関連して作用し得る自己免疫応答の他の重要なプレーヤーであり、特に好ましいものは、ＩＬ−１８抗体もしくは可溶性ＩＬ−１８レセプター、またはＩＬ−１８結合タンパク質を含む、ＩＬ−１８アンタゴニストである。ＩＬ−１２およびＩＬ−１８は、重複するが別個の機能を有しており、両方に対するアンタゴニストの併用は、最も有効であり得ることが示されている。なお別の好ましい併用は、非枯渇性抗ＣＤ４インヒビターである。なお他の好ましい併用は、抗体、可溶性レセプターまたはアンタゴニストリガンドを含む、同時刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）またはＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストを含む。

本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジンクロロキニン（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｉｎｅ）／ヒドロキシクロロキン、ペンシラミン（ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）、金チオリンゴ酸塩（筋内および経口）、アザチオプリン、コチシン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）、β−２アドレナリンレセプターアゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール（ｓａｌｍｅｔｅｒａｌ））、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリケート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウムおよびオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデンソシン（ａｄｅｎｓｏｓｉｎｅ）アゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン系薬剤、炎症促進性サイトカイン、例えば、ＴＮＦαまたはＩＬ−１によるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター）、ＩＬ−１β変換酵素インヒビター（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）インヒビター、Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター、例えば、キナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカインレセプターおよびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦレセプターおよび誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３））および抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤とも併用され得る。好ましい併用は、メトトレキサートまたはレフルノミドを含み、中程度または重篤な関節リウマチの場合、シクロスポリンを含む。

本発明の抗体または抗体部分が併用され得る炎症性腸疾患のための治療剤の非限定的な例には、以下が含まれる：ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン、スルファサラジン；アミノサリチル酸塩；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼインヒビター；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサンインヒビター；ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト；抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼインヒビター；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカインまたは成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）に対する抗体またはそれらのアンタゴニスト。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、細胞表面分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０またはそれらのリガンドに対する抗体と併用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン系薬剤、炎症促進性サイトカイン、例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１によるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター）、ＩＬ−１β変換酵素インヒビター（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、ＴＮＦα変換酵素インヒビター、Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター、例えばキナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカインレセプターおよびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦレセプター、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３））および抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤とも併用され得る。

抗体または抗原結合部分が併用され得るクローン病のための治療剤の好ましい例には、以下が含まれる：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（米国特許出願第０８／５９９，２２６号、１９９６年２月９日出願）、ｃＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ５７１、抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＤＰ８７０）、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））およびｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３）およびＰＤＥ４インヒビター。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシドおよびデキサメタゾンと併用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸およびオルサラジンなどの薬剤、およびＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成または作用を妨害する薬剤、例えば、ＩＬ−１変換酵素インヒビター（例えば、Ｖｘ７４０）およびＩＬ−１ｒａとも併用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター、例えば、チロシンキナーゼインヒビター６−メルカプトプリンと共に使用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と併用され得る。

本発明の抗体または抗体部分が併用され得る多発性硬化症のための治療剤の非限定的な例には、以下が含まれる：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（Ａｖｏｎｅｘ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；コポリマー１（Ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ１）（Ｃｏｐ−１；Ｃｏｐａｘｏｎｅ；ＴｅｖａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）；他のヒトサイトカインまたは成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）に対する抗体またはそのアンタゴニスト。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、細胞表面分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドに対する抗体と併用され得る。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデンソシンアゴニスト、抗血栓剤、補体インヒビター、アドレナリン系薬剤、炎症促進性サイトカイン、例えばＴＮＦαまたはＩＬ−１などによるシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼインヒビター）、ＩＬ−１β変換酵素インヒビター（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、ＴＡＣＥインヒビター、Ｔ細胞シグナル伝達インヒビター、例えばキナーゼインヒビター、メタロプロテイナーゼインヒビター、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素インヒビター、可溶性サイトカインレセプターおよびその誘導体（例えば、可溶性ｐ５５またはｐ７５ＴＮＦレセプター、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、可溶性ＩＬ−１３レセプター（ｓＩＬ−１３））および抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦβ）などの薬剤とも併用され得る。

抗体または抗原結合部分が併用され得る多発性硬化症のための治療剤の好ましい例には、以下が含まれる：インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａおよびＩＦＮβ１ｂ；コパキソン（ｃｏｐａｘｏｎｅ）、コルチコステロイド、ＩＬ−１インヒビター、ＴＮＦインヒビター、ならびにＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体。

本発明の医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の本発明の抗体または抗体部分を含み得る。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために必要な投薬量および期間で有効な量をいう。抗体または抗体部分の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに抗体または抗体部分が個体において所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療有効量はまた、抗体または抗体部分の任意の毒性効果または有害効果を、治療的に有益な効果が上回る量でもある。「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な投薬量および期間で有効な量をいう。典型的には、予防的用量は、疾患の初期段階の前または初期段階で対象において使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。

投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答または予防応答）を提供するために調整され得る。例えば、単一のボーラスが投与され得、いくつかの分割された用量が経時的に投与され得、または用量は、治療状況の緊急の要件によって示されるように、比例して低下または増加され得る。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書中で使用する場合、投薬単位形態は、治療される哺乳動物対象に対する単位の投薬量として適合された物理的に別個の単位をいい、各単位は、必要な医薬担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形態のための仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特徴、および達成すべき特定の治療効果または予防効果、および（ｂ）個体における感受性の治療のためにかかる活性化合物を複合する際の当技術分野における固有の制限によって決定される、およびこれらに直接的に依存する。

本発明の抗体または抗体部分の治療有効量または予防有効量に関する例示的な非限定的な範囲は、０．０１−２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１−１０ｍｇ／ｋｇ、なおより好ましくは０．３−１ｍｇ／ｋｇである。投薬量の値は、軽減すべき状態の型および重篤度によって変動し得ることに留意すべきである。任意の特定の対象にとって、特定の投薬レジメンが、個体の要求、および組成物を投与するまたは組成物の投与を監督する人物の専門的な判断に従って経時的に調節すべきであること、本明細書中に示される投薬量範囲が例示に過ぎず、特許請求した組成物の範囲または実施を限定する意図ではないことを、さらに理解すべきである。

一実施形態において、本発明の抗体は、その全内容を参照により本明細書中に組み込む米国特許出願第１２／６２５，０５７号（米国特許公開２０１０−０１７２８６２Ａ２）に開示された医薬組成物中に含まれる。

ＶＩＩ．本発明の抗体の使用
ＩＬ−１２、ＩＬ−２３および／またはｐ４０サブユニットに結合するその能力を考慮すると、本発明の抗体またはその部分（例えば、その断片の抗原結合部分）は、従来のイムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または組織免疫組織化学を使用して、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３および／またはｐ４０サブユニット（例えば、生物学的試料、例えば血清または血漿中の）を検出するために使用され得る。

したがって、別の態様において、本発明は、生物学的試料中のＬ−１２、ＩＬ−２３および／またはｐ４０サブユニットを検出する方法を提供し、この方法は、生物学的試料を本発明の抗体または抗体部分と接触させること、およびＬ−１２、ＩＬ−２３および／もしくはｐ４０サブユニットに結合した抗体（または抗体部分）または未結合の抗体（または抗体部分）のいずれかを検出することを含み、それにより、生物学的試料中のＬ−１２、ＩＬ−２３および／またはｐ４０サブユニットを検出する。抗体は、結合した抗体または未結合の抗体の検出を容易にするために、検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが含まれ、適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれ、適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが含まれ、発光物質の例にはルミノールが含まれ、適切な放射性物質の例には、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓまたは^３Ｈが含まれる。

抗体を標識することの代替として、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３および／またはｐ４０サブユニットは、検出可能な物質で標識された組換え（「ｒ」）ＩＬ−１２および／またはｒＩＬ−２３および／またはｒｐ４０標準、ならびに未標識の抗ＩＬ−１２抗体および／または抗ＩＬ−２３抗体および／または抗ｐ４０サブユニット抗体を利用する競合イムノアッセイによって、生物学的流体中でアッセイされ得る。このアッセイにおいて、生物学的試料、標識されたｒＩＬ−１２および／またはｒＩＬ−２３および／またはｒｐ４０標準、ならびに抗ｈＩＬ−１２抗体および／または抗ＩＬ−２３抗体および／または抗ｐ４０サブユニット抗体が併用され、未標識の抗体に結合した、標識されたｒＩＬ−１２および／またはｒＩＬ−２３および／またはｒｐ４０標準の量が決定される。生物学的試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３および／またはｐ４０サブユニットの量は、それぞれ抗ＩＬ−１２抗体および／または抗ＩＬ−２３抗体および／または抗ｐ４０抗体に結合した、標識されたｒＩＬ−１２および／またはｒＩＬ−２３および／またはｒｐ４０サブユニット標準の量に反比例する。

本発明により包含される抗体（Ｙ６１およびＪ６９５が含まれる。）は、ヒト以外の種由来のＩＬ−１２、特に、霊長類由来のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３および／またはｐ４０を検出するためにも使用され得る。例えば、Ｙ６１は、カニクイザルおよびアカゲザルにおいてＩＬ−１２を検出するために使用され得る。Ｊ６９５は、カニクイザル、アカゲザルおよびヒヒにおいてＩＬ−１２を検出するために使用され得る。しかし、いずれの抗体も、マウスまたはラットのＩＬ−１２とは交差反応しない。

本発明の抗体および抗体部分は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を、インビトロおよびインビボで中和することが可能である。したがって、本発明の抗体および抗体部分は、例えば、それらを含む細胞培養物において、ヒト対象において、または本発明の抗体が交差反応するＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３および／もしくはｐ４０を有する他の哺乳動物対象（例えば、ヒヒ、カニクイザルおよびアカゲザルなどの霊長類）において、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３および／またはｐ４０の活性を阻害するために使用され得る。一実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性、ならびにヒヒのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット、マーモセットのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット、チンパンジーのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット、カニクイザルのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット、ならびにアカゲザルのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットからなる群から選択される、少なくとも１つのさらなる霊長類のＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を中和するが、マウスのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を中和しない、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましくは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットは、ヒトのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットである。例えば、ヒトＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはヒトＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットを含むまたは含むと疑われる細胞培養物において、培養物中のヒトＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはヒトＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を阻害するために、本発明の抗体または抗体部分が、培養培地に添加され得る。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性が有害である障害に罹患している対象において、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を阻害する方法を提供する。ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットは、広範な種々の障害の病態生理に関与している（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１９８５−１９９６頁；Ｍｏｒｉｔａら（１９９８）ＡｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄＲｈｅｕｍａｔｉｓｍ．４１：３０６−３１４頁；Ｂｕｃｈｔら（１９９６）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：３４７−３６７頁；Ｆａｉｓら（１９９４）Ｊ．ＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓ．１４：２３５−２３８頁；Ｐｙｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２頁；Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら（１９９７）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１１２：１１６９−１１７８頁、およびＢｅｒｒｅｂｉら（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ１５２：６６７−６７２頁；Ｐｙｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１５０：８２３−８３２頁）。本発明は、かかる障害に罹患している対象においてＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性を阻害する方法を提供し、この方法は、対象におけるＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性が阻害されるように、本発明の抗体または抗体部分を対象に投与することを含む。好ましくは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３および／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットは、ヒトのＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットであり、対象はヒト対象である。その代わりに、対象は、本発明の抗体が交差反応するＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットを発現している哺乳動物であり得る。なおさらに、対象は、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２３ならびに／またはヒトＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットが（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２３ならびに／またはヒトＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの投与により、またはヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−２３ならびに／またはヒトＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニット導入遺伝子の発現により）導入された哺乳動物であり得る。本発明の抗体は、治療目的（以下でさらに論じられる。）のためにヒト対象に投与され得る。さらに、本発明の抗体は、獣医学目的のためまたはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットを発現している非ヒト哺乳動物に投与され得る。後者に関して、かかる動物モデルは、本発明の抗体の治療有効性を評価（例えば、投薬量および投与の時間経過を試験）するために有用であり得る。

本明細書中で使用する場合、語句「ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性が有害である障害」は、その障害に罹患している対象におけるＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの存在が、障害の病態生理を担っていることが示された、もしくは障害の病態生理を担うと疑われる、または障害の悪化に寄与する因子であることが示された、もしくは障害の悪化に寄与する因子であると疑われる、疾患および他の障害を含む意図である。したがって、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性が有害である障害は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性の阻害が、障害の症状および／または進行を軽減すると予測される障害である。かかる障害は、例えば、上記のように抗ＩＬ−１２抗体、抗ＩＬ−２３抗体ならびに／または抗ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３ｐ４０サブユニット抗体を使用して検出され得る、例えば、障害に罹患している対象の生物学的流体中のＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液など中のＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの濃度の増加）によって、証明され得る。ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの活性が有害である障害には多数の例が存在する。一実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、本明細書中に記載される疾患または障害を治療するための療法において使用され得る。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、本明細書中に記載される疾患または障害を治療するための医薬の製造に使用され得る。

さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性のうち少なくとも１つ、ならびに／または生物学的試料中のＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性のうち少なくとも１つを調節する薬剤のスクリーニングの方法を提供し、この方法は、試験される試料（例えば、研究する細胞、組織、器官、個体）を提供すること；本発明の抗体を提供すること（この抗体は、検出可能な標識を含む、または検出可能な標識を有する第２の分子によって検出可能である。）；試験試料を試験薬剤（例えば、小分子化合物またはバイオポリマー）で処理すること；試験試料を抗体と接触させること；およびＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性、ならびに／または試料中のＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性を検出および／または測定することを含み、未処理の試料のものに対する、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性のうち少なくとも１つにおける増加または減少、ならびに／またはＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性のうち少なくとも１つにおける増加または減少は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性のうち少なくとも１つ、ならびに／または試料中のＩＬ−１２、ＩＬ−２３ならびに／またはＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの発現、量および／または活性のうち少なくとも１つを調節可能な薬剤を示す。

いくつかの非限定的な特定の障害の治療における本発明の抗体および抗体部分の使用が、以下でさらに論じられる：

関節リウマチ
インターロイキン−１２は、関節リウマチなどの炎症性疾患において役割を果たすことが示されている。誘導性のＩＬ−１２ｐ４０メッセージは、関節リウマチ患者由来の滑膜中で検出されており、ＩＬ−１２は、関節リウマチ患者由来の滑液中に存在することが示されている（例えば、Ｍｏｒｉｔａら（１９９８）ＡｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄＲｈｅｕｍａｔｉｓｍ４１：３０６−３１４頁を参照のこと。）。ＩＬ−１２陽性細胞は、関節リウマチ滑膜の下内層中に存在することが見出されている。本発明のヒト抗体および抗体部分は、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、ライム関節炎、リウマチ性脊椎炎、変形性関節症および痛風性関節炎を治療するために使用され得る。典型的には、抗体または抗体部分は全身投与されるが、特定の障害については、抗体または抗体部分の局所投与が有益であり得る。本発明の抗体または抗体部分はまた、自己免疫疾患の治療において有用な１つまたは複数のさらなる治療剤と共に投与され得る。

関節リウマチのコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）マウスモデルにおいて、関節炎前の抗ＩＬ−１２ｍＡｂ（ラット抗マウスＩＬ−１２モノクローナル抗体、Ｃ１７．１５）によるマウスの治療は、発症を大きく抑制し、疾患の発生率および重篤度を低下させた。関節炎の発症後早期の抗ＩＬ−１２ｍＡｂによる治療は、重篤度を低下させたが、疾患の発症後の抗ＩＬ−１２ｍＡｂによるマウスの後期の治療は、疾患の重篤度に対して最小の影響を有した。

クローン病
インターロイキン−１２は、炎症性腸疾患、クローン病においても役割を果たす。ＦＮ−γおよびＩＬ−１２の発現増加が、クローン病患者の腸管粘膜において生じる（例えば、Ｆａｉｓら（１９９４）Ｊ．ＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＲｅｓ．１４：２３５−２３８頁；Ｐｙｒｒｏｎｃｈｉら（１９９７）Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５０：８２３−８３２頁；Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら（１９９７）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ１１２：１１６９−１１７８頁；Ｂｅｒｒｅｂｉら（１９９８）Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５２：６６７−６７２頁を参照のこと。）。抗ＩＬ−１２抗体は、大腸炎のマウスモデル（例えば、ＴＮＢＳ誘導された大腸炎ＩＬ−２ノックアウトマウス、および最近ではＩＬ−１０ノックアウトマウス）において疾患を抑制することが示されている。したがって、本発明の抗体および抗体部分は、炎症性腸疾患の治療において使用され得る。

多発性硬化症
インターロイキン−１２は、多発性硬化症の重要なメディエーターとして示されている。誘導性ＩＬ−１２ｐ４０メッセージまたはＩＬ−１２自体の発現は、多発性硬化症患者の病変中で実証されている（Ｗｉｎｄｈａｇｅｎら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ１８２：１９８５−１９９６頁、Ｄｒｕｌｏｖｉｃら（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．１４７：１４５−１５０頁）。多発性硬化症を有する慢性進行性患者は、ＩＬ−１２の循環レベルを上昇させた。多発性硬化症患者由来のＴ細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）を用いた調査により、Ｔｈ１型免疫応答を導く進行性多発性硬化症の基礎として、免疫相互作用の自己永続的な連続が明らかになった。Ｔ細胞からのＩＦＮγ分泌の増加は、ＡＰＣによるＩＬ−１２産生の増加を導き、これらがＴｈ１型免疫活性化および疾患の慢性状態を導くサイクルを永続化した（Ｂａｌａｓｈｏｖら（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：５９９−６０３頁）。多発性硬化症におけるＩＬ−１２の役割は、マウスおよびラットの多発性硬化症の実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを使用して調査されている。マウスにおける多発性硬化症の再発寛解型ＥＡＥモデルにおいて、抗ＩＬ−１２ｍＡｂによる事前治療は、麻痺を遅延させ、臨床スコアを低下させた。麻痺のピーク時または引き続く寛解期間の間の抗ＩＬ−１２ｍＡｂによる治療は、臨床スコアを低下させた。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、ヒトにおいて多発性硬化症に伴う症状を軽減するように機能し得る。

インスリン依存性糖尿病
インターロイキン−１２は、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）の重要なメディエーターとして示されている。ＩＤＤＭは、ＩＬ−１２の投与によってＮＯＤマウスにおいて誘導され、抗ＩＬ−１２抗体は、ＩＤＤＭの養子移入モデルにおいて保護的であった。早期発症型ＩＤＤＭ患者は、いくつかの残留島細胞機能が維持される、いわゆる「ハネムーン期間」を経ることが多い。これらの残留島細胞は、インスリンを産生し、投与されたインスリンよりも血中グルコースレベルをより良く調節する。抗ＩＬ−１２抗体を用いたこれら早期発症型患者の治療は、島細胞のさらなる破壊を予防し得、それにより、インスリンの内因性供給源を維持する。

乾癬
インターロイキン−１２は、乾癬における重要なメディエーターとして示されている。乾癬は、ＴＨ１型サイトカイン発現プロフィールを伴う急性および慢性の皮膚病変を含む（Ｈａｍｉｄら（１９９６）Ｊ．ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：２２５−２３１頁；Ｔｕｒｋａら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１：６９０−６９９頁）。ＩＬ−１２のｐ３５およびｐ４０のｍＲＮＡが、罹患したヒト皮膚試料中で検出された。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、乾癬などの慢性皮膚障害を軽減するよう機能し得る。抗体またはその抗原結合部分は、乾癬の種々の形態、例えば尋常性乾癬および慢性乾癬を治療するために使用され得る。抗体またはその抗原結合部分は、変動する重篤度の乾癬、例えば、中程度から重篤な乾癬を治療するためにも使用され得る。

本発明は、決して限定と解釈すべきでない以下の実施例によって、さらに説明される。本出願中で引用された、全ての引用した文献（参考文献、発行された特許および公開された特許出願を含む。）の内容は、参照により本明細書中に明示的に組み込む。全ての表の内容を参照により組み込むことを、さらに理解すべきである。

本発明は、さらなる限定と解釈すべきでない以下の実施例によって、さらに説明される。本出願中で引用された、全ての数字および全ての文献、特許および公開された特許出願、ならびに図面の内容は、その全体を本明細書中で参照により明示的に組み込む。
［実施例１］タンパク質の発現および精製
Ａ．ヒトモノクローナル抗体Ｊ６９５の調製およびアッセイ
Ｊ６９５は、１，０００リットルのバイオリアクタ中で培養した組換えチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株ＡＬＰ９０５（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ００５６７７２Ａ１を参照のこと。）から分泌された。濾過によるＣＨＯ細胞の除去後、ｍＡｂを、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用して精製した。Ｊ６９５を、５ｍＭＬ−ヒスチジン、５ｍＭＬ−メチオニン、０．５％スクロース、２％Ｄ−マンニトール、０．００５％ポリソルベート−８０、ｐＨ６．０において７１．８ｍｇ／ｍｌに濃縮し、−８０℃で凍結した。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ、ＰＨＡ芽球アッセイおよびＲＢアッセイを、ＰＣＴ公開ＷＯ００５６７７２Ａ１（その全内容は、参照により本明細書中に組み込む。）に記載されたように実施した。

Ｂ．Ｊ６９５Ｆａｂ断片の調製
Ｊ６９５を、２０ｍＭリン酸塩、２．５ｍＭシステイン・ＨＣｌ、１０ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．０で２０ｍｇ／ｍｌに希釈し、次いで、１％固定化パパイン（カタログ番号２０３４１、ＰｉｅｒｃｅＥｎｄｏｇｅｎ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）および２．５ｍＭシステイン・ＨＣｌを含む溶液中で３７℃で一晩消化した。パパインを遠心分離（１５分間、３２００ｇ）によって除去し、２０ｍＭＮａＨ_２ＰＯ_４、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７の一部で希釈した上清を、同じ緩衝液で平衡化したＨｉ−ｔｒａｐプロテインＡカラム（カタログ番号１７−０４０２−０３、ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）に４℃で通過させた。Ｆａｂを流動中で単離し、遠心分離（カタログ番号ＵＦＶ４ＢＧＣ２５、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）によって４ｍｇ／ｍｌに濃縮し、２０ｍＭＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．０において透析した。Ｆａｂを、結晶化のために５５ｍｇ／ｍｌにさらに濃縮した。Ｆａｂ濃度を、６Ｍグアニジン・ＨＣｌ、２０ｍＭＮａＨ_２ＰＯ_４、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．０（ε＝０．６７Ｍ^−１ｃｍ^−１）において２８０ｎｍでＵＶ吸光度によって決定した（Ｇｉｌｌ，Ｓ．Ｃ．およびＰ．Ｈ．ｖｏｎＨｉｐｐｅｌ（１９８９）．「Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｅｘｔｉｎｃｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｆｒｏｍａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｔａ．」Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８２（２）：３１９−３２６頁）。

Ｃ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の調製
ＩＬ−１２ｐ７０を、安定なＣＨＯ細胞株から発現させた。細胞上清を、Ｑ−ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ、ＣＭ−ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ、ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅＨｉｇｈＳｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎＦａｓｔＦｌｏｗ、ＳｐｉｒａｌＣａｒｔｒｉｄｇｅＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒおよびＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ−２００ＨｉｇｈＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎから構成されるいくつかのカラムで精製した。最終カラム緩衝液はＰＢＳ（ｐＨ７．４）であり、これは最終的なＩＬ−１２ｐ７０保存緩衝液であった。上記のように生成されたＪ６９５Ｆａｂとの複合体を、等モル量のＦａｂおよびＩＬ−１２ｐ７０を混合し、その後サイズ排除クロマトグラフィーによって複合体を単離することによって、形成した。

［実施例２］タンパク質結晶化
Ａ．結晶形ＩのＪ６９５Ｆａｂの結晶化
Ｊ６９５Ｆａｂを、ハンギングドロップ蒸気拡散（ｈａｎｇｉｎｇ−ｄｒｏｐｖａｐｏｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）法を使用して結晶化した。Ｊ６９５Ｆａｂ（１μｌ）を、１μｌのレザバ溶液（２５％ＰＥＧ４０００、０．１Ｍクエン酸Ｎａ、ｐＨ５．６、０．２Ｍ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４）と混合し、１８℃で平衡化した。宝石様（ｊｅｗｅｌ−ｌｉｋｅ）の結晶が、７日間で０．１２５×０．１２５×０．０５ｍｍの寸法まで形成された。これらの結晶を本明細書中で「結晶形Ｉ」と称する。

Ｂ．結晶形ＩＩのＪ６９５Ｆａｂの結晶化
Ｊ６９５Ｆａｂを、ハンギングドロップ蒸気拡散法を使用して結晶化した。Ｊ６９５Ｆａｂ（１μｌ）を、１μｌのレザバ溶液（１２％ＰＥＧ４０００、０．１ＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．５）と混合し、４℃で平衡化した。錠剤様結晶が、７日間で０．２５×０．０５×０．０２５ｍｍの寸法まで成長した。これらの結晶を本明細書中で「結晶形ＩＩ」と称する。

Ｃ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶化
Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体を、ハンギングドロップ蒸気拡散法を使用して結晶化した。複合体（１μｌ）を、１μｌのレザバ溶液（１６％ＰＥＧ４Ｋ、１０％２−プロパノール、０．１ＭＮａＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．２Ｍ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４）と混合し、１８℃で平衡化した。レザバ中の添加剤（６％ジオキサンまたは４．３％キシリトール）が、回折を改善した。この結晶は、エッチングされた末端を有する、細長い矩形の錠剤であった。

［実施例３］結晶形ＩのＪ６９５Ｆａｂの結晶構造の決定
Ａ．Ｊ６９５ＦａｂフォームＩ結晶の凍結保護および瞬間冷却
２５％ＰＥＧ４０００、０．１Ｍクエン酸Ｎａ、ｐＨ５．６、０．２Ｍ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４の存在下で上記のように成長したフォームＩ結晶を、漸増量のグリセロール（５−１５％）を含む母液溶液中に回収し、次いで液体窒素中で瞬間凍結した。結晶を、ｘ線回折データを収集するまで、液体窒素冷蔵庫中で保存した。

Ｂ．Ｊ６９５ＦａｂフォームＩ結晶（結晶１）からのｘ線回折データ収集
Ｊ６９５ＦａｂフォームＩ結晶（結晶１）からのＸ線回折データを、ＮａｔｉｏｎａｌＳｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎＬｉｇｈｔＳｏｕｒｃｅ（ＮＳＬＳ）、ＢｒｏｏｋｈａｖｅｎＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｕｐｔｏｎ、ＮＹにおいて、ＡＤＳＣＱｕａｎｔｕｍ２１０検出器を使用して、ビームラインＸ２６Ｃ（λ＝１．１Å）で１．３４Åの解像度まで回転法によって収集した。Ｆａｂ結晶を、データ収集の間、ＯｘｆｏｒｄＣｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓＣｒｙｏｓｔｒｅａｍ冷却器で１００Ｋの温度に維持した。データの各フレーム（合計２４０）について、結晶を０．５°回転させた。データを、ＨＫＬ２０００スイートのプログラムを用いて処理した（Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ，Ｚ．およびＷ．Ｍｉｎｏｒ（１９９７）．ＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆＸ−ｒａｙＤｉｆｆｒａｃｔｉｏｎＤａｔａＣｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎＯｓｃｉｌｌａｔｉｏｎＭｏｄｅ．ＮｅｗＹｏｒｋ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）。結晶配向を決定した後、データを、ＤＥＮＺＯで積分し（空間群Ｐ２_１２_１２_１、ａ＝５３．９２Å、ｂ＝６７．３６Å、ｃ＝１１５．７９Å；単位格子情報は表５にまとめる。）、ＳＣＡＬＥＰＡＣＫでスケーリングおよび統合し、ＴＲＵＮＣＡＴＥを用いて絶対的スケールに対して配置し、構造因子振幅を得た。さらなるデータ操作を、ＣＣＰ４ＰｒｏｇｒａｍＳｕｉｔｅ（ＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＰｒｏｊｅｃｔ４（１９９４）「ＴｈｅＣＣＰ４Ｓｕｉｔｅ：ＰｒｏｇｒａｍｓｆｏｒＰｒｏｔｅｉｎＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０：７６０−７６３頁）を用いて実施した。独自の反射の５％を、フリーＲ因子（Ｒ_ｆｒｅｅ）の計算のために、ランダムな様式で「フリー」セットに割り当てた（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２）．「ＴｈｅｆｒｅｅＲｖａｌｕｅ：ａｎｏｖｅｌｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｑｕａｎｔｉｔｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３５５：４７２−４７４頁）；残り９５％の反射は、Ｒ因子（Ｒ）の計算のための「ワーキング」セットを構成した。ｘ線回折データを表６にまとめる。

Ｃ．Ｊ６９５ＦａｂフォームＩ結晶構造（結晶１）の分子置換解
結晶形ＩのＪ６９５Ｆａｂの構造を、ＣＮＸを使用して分子置換によって解明した（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．、Ｐ．Ｄ．Ａｄａｍｓら（１９９８）．「Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ＆ＮＭＲｓｙｓｔｅｍ（ＣＮＳ）：Ａｎｅｗｓｏｆｔｗａｒｅｓｙｓｔｅｍｆｏｒｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５４：９０５−９２１頁）。単位格子の体積およびＦａｂの分子量（４６，６０８Ｄａ）に基づいて、フォームＩは、非対称単位１つ当たり１つのＦａｂを含むと予測された（４５％溶媒、Ｖ_ｍ＝２．３Å^３／Ｄａ）（Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｂ．Ｗ．（１９６８）．「Ｓｏｌｖｅｎｔｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｉｎｃｒｙｓｔａｌｓ．」ＪＭｏｌＢｉｏｌ３３：４９１−７頁）。ランダムに選択された反射の５％を、精密化の間中、交差検定のために使用した（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２）．「ＴｈｅｆｒｅｅＲｖａｌｕｅ：ａｎｏｖｅｌｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｑｕａｎｔｉｔｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３５５：４７２−４７４頁）。成功したいくつかの相同なＦａｂ検索モデルのうち、Ｊ６９５と類似したエルボー角を有するのは１つだけであり（ＰＤＢエントリ８ｆａｂ、（Ｓｔｒｏｎｇ，Ｒ．Ｋ．、Ｒ．Ｃａｍｐｂｅｌｌら（１９９１）．「Ｔｈｒｅｅ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｍｕｒｉｎｅａｎｔｉ−ｐ−ａｚｏｐｈｅｎｙｌａｒｓｏｎａｔｅＦａｂ３６−７１．１．Ｘ−ｒａｙｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄｍｏｄｅｌｉｎｇｏｆｔｈｅｃｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈｈａｐｔｅｎ．」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３０：３７３９−３７４８頁）、剛体（ｒｉｇｉｄｂｏｄｙ）精密化がエルボー角をさらに変更した。並進関数は、正確な空間群がＰ２_１２_１２_１であることを示した。検索モデルとＪ６９５との間で保存されていない残基は、アラニンに切り詰め、ＣＤＲを除去した。シミュレートされたアニーリング、Ｐｏｗｅｌｌ最小化およびグループ温度因子（ｇｒｏｕｐｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｆａｃｔｏｒ）精密化を、ＣＮＸを使用して実施した（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．、Ｐ．Ｄ．Ａｄａｍｓら（１９９８）．「Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ＆ＮＭＲｓｙｓｔｅｍ（ＣＮＳ）：Ａｎｅｗｓｏｆｔｗａｒｅｓｙｓｔｅｍｆｏｒｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５４：９０５−９２１頁）。精密化後、正確な側鎖原子およびＣＤＲ残基を、可視化プログラムＯ（Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．Ａ．、Ｊ．Ｙ．Ｚｏｕら（１９９１）．「Ｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｂｕｉｌｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｍｏｄｅｌｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｎｄｅｎｓｉｔｙｍａｐｓａｎｄｔｈｅｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｅｒｒｏｒｓｉｎｔｈｅｓｅｍｏｄｅｌｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ａ４７：１１０−１１９頁）を使用して、ポジティブなＳｉｇｍａＡ重み付けした（Ｒｅａｄ，Ｒ．Ｊ．（１９８６）．「ＩｍｐｒｏｖｅｄＦｏｕｒｉｅｒｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｆｏｒｍａｐｓｕｓｉｎｇｐｈａｓｅｓｆｒｏｍｐａｒｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｉｔｈｅｒｒｏｒｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ａ４２：１４０−１４９頁）Ｆｏ−Ｆｃ電子密度（２σ）の領域へと構築した。ＣＤＲＨ３は無秩序化しているようであり、モデル化できなかった。代替的側鎖立体配座を追加し、異方性温度因子を使用して、モデルをＲＥＦＭＡＣ（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ，Ｇ．Ｎ．、Ａ．Ａ．Ｖａｇｉｎら（１９９７）．「Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔｏｆｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｂｙｔｈｅｍａｘｉｍｕｍ−ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄｍｅｔｈｏｄ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５３：２４０−２５５頁）中でさらに精密化した。水原子を追加し、１６．４／１９．７％の最終Ｒ_{ｃｒｙｓｔ}／Ｒ_ｆｒｅｅまでモデルを精密化した。モデルの質を、Ｐｒｏｃｈｅｃｋ（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ａ．、Ｍ．Ｗ．ＭａｃＡｒｔｈｕｒら（１９９３）．「ＰＲＯＣＨＥＣＫ：ａｐｒｏｇｒａｍｔｏｃｈｅｃｋｔｈｅｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌｑｕａｌｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．２６：２８３−２９１頁）およびＷｈａｔｃｈｅｃｋ（Ｈｏｏｆｔ，Ｒ．Ｗ．Ｗ．、Ｇ．Ｖｒｉｅｎｄら（１９９６）．「Ｅｒｒｏｒｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３８１：２７２頁）を使用して評価した。精密化統計値を表７中に報告する。

［実施例４］結晶形ＩＩのＪ６９５Ｆａｂの結晶構造の決定
Ａ．Ｊ６９５ＦａｂフォームＩＩ結晶の凍結保護および瞬間冷却
１２％ＰＥＧ４０００、０．１ＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．５の存在下で上記のように成長したフォームＩＩ結晶を、漸増量のグリセロール（５−１５％）を含む母液溶液中に回収し、次いで液体窒素中で瞬間凍結した。結晶を、ｘ線回折データを収集するまで、液体窒素冷蔵庫中で保存した。

Ｂ．６９５ＦａｂフォームＩＩ結晶（結晶２）からのｘ線回折データ収集
Ｊ６９５ＦａｂフォームＩＩ結晶（結晶２）からのＸ線回折データを、ＮａｔｉｏｎａｌＳｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎＬｉｇｈｔＳｏｕｒｃｅ（ＮＳＬＳ）、ＢｒｏｏｋｈａｖｅｎＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｕｐｔｏｎ、ＮＹにおいて、ＡＤＳＣＱｕａｎｔｕｍ２１０検出器を使用して、ビームラインＸ２６Ｃ（λ＝１．１Å）で２．１Åの解像度まで回転法によって収集した。Ｆａｂ結晶を、データ収集の間、ＯｘｆｏｒｄＣｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓＣｒｙｏｓｔｒｅａｍ冷却器で１００Ｋの温度に維持した。データの各フレーム（合計３６０）について、結晶を０．５°回転させた。データを、ＨＫＬ２０００スイートのプログラムを用いて処理した（Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ，Ｚ．およびＷ．Ｍｉｎｏｒ１９９７「ＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆＸ−ｒａｙＤｉｆｆｒａｃｔｉｏｎＤａｔａＣｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎＯｓｃｉｌｌａｔｉｏｎＭｏｄｅ」ＮｅｗＹｏｒｋ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）。結晶配向を決定した後、データを、ＤＥＮＺＯで積分し（空間群Ｐ２_１、ａ＝８５．６２Å、ｂ＝１７３．４１Å、ｃ＝１３９．８５Å、β＝１０５．５°；単位格子情報は表５にまとめる。）、ＳＣＡＬＥＰＡＣＫでスケーリングおよび統合し、ＴＲＵＮＣＡＴＥを用いて絶対的スケールに対して配置し、構造因子振幅を得た。さらなるデータ操作を、ＣＣＰ４ＰｒｏｇｒａｍＳｕｉｔｅ（ＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＰｒｏｊｅｃｔ４（１９９４）「ＴｈｅＣＣＰ４Ｓｕｉｔｅ：ＰｒｏｇｒａｍｓｆｏｒＰｒｏｔｅｉｎＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０：７６０−７６３頁）を用いて実施した。独自の反射の５％を、フリーＲ因子（Ｒ_ｆｒｅｅ）の計算のために、ランダムな様式で「フリー」セットに割り当てた（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２）．「ＴｈｅｆｒｅｅＲｖａｌｕｅ：ａｎｏｖｅｌｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｑｕａｎｔｉｔｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３５５：４７２−４７４頁）；残り９５％の反射は、Ｒ因子（Ｒ）の計算のための「ワーキング」セットを構成した。ｘ線回折データを表６にまとめる。

Ｃ．Ｊ６９５ＦａｂフォームＩＩ結晶構造（結晶２）の分子置換解
結晶形ＩＩのＪ６９５Ｆａｂの構造を、分子置換によって解明した。単位格子の体積およびＦａｂの分子量（４６，６０８Ｄａ）に基づいて、フォームＩＩは、非対称単位１つ当たり８つと６つとの間のＦａｂを含むと予測された（５０−６３％溶媒、Ｖ_ｍ＝２．７−３．６Å^３／Ｄａ）（Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｂ．Ｗ．（１９６８）．「Ｓｏｌｖｅｎｔｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｉｎｃｒｙｓｔａｌｓ．」ＪＭｏｌＢｉｏｌ３３：４９１−７頁）。ランダムに選択した反射の５％を、精密化の間中、交差検定のために使用した（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２）．「ＴｈｅｆｒｅｅＲｖａｌｕｅ：ａｎｏｖｅｌｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｑｕａｎｔｉｔｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３５５：４７２−４７４頁）。大まかに精密化したフォームＩの構造を検索モデルとして使用した、フォームＩＩの構造を解明するための最初の試みは成功しなかった。ネイティブＰａｔｔｅｒｓｏｎマップ中のオフオリジン（ｏｆｆ−ｏｒｉｇｉｎ）ピークと一致する偽並進対称が存在するようであり、可能性のある解の対を関連付けたが、ＣＮＸ（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．、Ｐ．Ｄ．Ａｄａｍｓら（１９９８）．「Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ＆ＮＭＲｓｙｓｔｅｍ（ＣＮＳ）：Ａｎｅｗｓｏｆｔｗａｒｅｓｙｓｔｅｍｆｏｒｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５４：９０５−９２１頁）、ＡＭＯＲＥ（Ｎａｖａｚａ，Ｊ．（１９９４）．「ＡＭｏＲｅ：ａｎａｕｔｏｍａｔｅｄｐａｃｋａｇｅｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇ．Ａ５０：１５７−１６３頁）およびＥＰＭＲ（Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｒ．、Ｄ．Ｋ．Ｇｅｈｌｈａａｒら（２００１）．ＥＰＭＲ：Ａｐｒｏｇｒａｍｆｏｒｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｂｙｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｓｅａｒｃｈ．ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ、ＡｇｏｕｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ）は、最終的な解を提供しなかった。ＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎ，Ａ．Ａ．およびＡ．Ｔｅｐｌｙａｋｏｖ（１９９７）．「ＭＯＬＲＥＰ：ａｎａｕｔｏｍａｔｅｄｐｒｏｇｒａｍｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ．」Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．３０：１０２２−１０２５頁）は、８つのＦａｂを位置付けることができた。それらの組み合わせは、空間群Ｐ２_１において４Åで３２．３％の相関係数および５５．４％のＲ因子を生じた。この解により、２つのＦａｂが、＜０１１＞に大まかに沿った反平行様式で配置され、［１００］に対して偽ダイアド（ｐｓｅｕｄｏ−ｄｙａｄ）平行で互いに関連していることが明らかになった。第２のＦａｂ対は、同じダイアドの周りに整列されているが、約１／２ａずれている。このテトラマーＦａｂアセンブリは、並進ベクトル［約１／２ａ、約１／２ｂ、約１／２ｃ］で複製されて、非対称単位中に他の４つのＦａｂを与える。

剛体精密化後、ＳｉｇｍａＡ重み付けしたマップの試験（Ｒｅａｄ，Ｒ．Ｊ．（１９８６）．「ＩｍｐｒｏｖｅｄＦｏｕｒｉｅｒｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｆｏｒｍａｐｓｕｓｉｎｇｐｈａｓｅｓｆｒｏｍｐａｒｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｉｔｈｅｒｒｏｒｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ａ４２：１４０−１４９頁）により、２つのＦａｂ中の無秩序な定常ドメインが明らかになった。これらのドメインを除去し、電子密度マップを、ＳＯＬＶＥ（Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ，Ｔ．Ｃ．およびＪ．Ｂｅｒｅｎｅｄｚｅｎ（１９９９）．「ＡｕｔｏｍａｔｅｄＭＡＤａｎｄＭＩＲｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔ．Ｄ．５５：８４９−８６１頁）を使用した溶媒平滑化（ｓｏｌｖｅｎｔｆｌａｔｔｅｎｉｎｇ）に供した。等方性Ｂ因子を使用するＲＥＦＭＡＣ（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ，Ｇ．Ｎ．、Ａ．Ａ．Ｖａｇｉｎら（１９９７）．「Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔｏｆｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｂｙｔｈｅｍａｘｉｍｕｍ−ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄｍｅｔｈｏｄ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５３：２４０−２５５頁）における精密化は、Ｏ（Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．Ａ．、Ｊ．Ｙ．Ｚｏｕら（１９９１）．「Ｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｂｕｉｌｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｍｏｄｅｌｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｎｄｅｎｓｉｔｙｍａｐｓａｎｄｔｈｅｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｅｒｒｏｒｓｉｎｔｈｅｓｅｍｏｄｅｌｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ａ４７：１１０−１１９頁）における再構築と順に交代した。定常ドメインおよびＣＤＲを、陽性の電子密度（２σ）に再構築した。２つの比較的無秩序な定常ドメインは、約７５Å^２および８５Å^２の平均Ｂ因子を有した。水原子を追加し、１９．５／２５．９％の最終Ｒ_{ｃｒｙｓｔ}／Ｒ_ｆｒｅｅまでモデルを精密化した。モデルの質を、Ｐｒｏｃｈｅｃｋ（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ａ．、Ｍ．Ｗ．ＭａｃＡｒｔｈｕｒら（１９９３）．「ＰＲＯＣＨＥＣＫ：ａｐｒｏｇｒａｍｔｏｃｈｅｃｋｔｈｅｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌｑｕａｌｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．２６：２８３−２９１頁）およびＷｈａｔｃｈｅｃｋ（Ｈｏｏｆｔ，Ｒ．Ｗ．Ｗ．、Ｇ．Ｖｒｉｅｎｄら（１９９６）．「Ｅｒｒｏｒｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３８１：２７２頁）使用して評価した。精密化統計値を表７中に報告する。

Ｄ．ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ中の抗体構造におけるｃｉｓ−ｔｒａｎｓペプチド結合異性体の分析
ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ中に存在するＡｂ構造中のペプチド結合のｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓ異性化の全ての存在を同定することを試みた。全ての利用可能なＡｂ構造のリストを編集するために実施したＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ（２００３年３月２８日のもの）の大規模な検索により、４５３のエントリが得られた。この検索は、ＡｎｄｒｅｗＣ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ博士によって維持されている要約したリストによって補助された（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）。最初に、４５３のＡｂ構造のこのセットのマニュアル検索を実施し、ＣＩＳＰＥＰフラッグの探索を実施した。このＣＩＳＰＥＰフラッグは、ｃｉｓ−ペプチド結合を含む構造のＰＤＢヘッダー中に見出される。ｃｉｓ−ペプチド結合を含む全てのＡｂ構造を、関連の構造でグループ分けした。１つのグループは、関連の抗体（例えば、変異体）、異なるライゲーション状態または結晶形のＡｂ、および単一の結晶形のＡｂの複数のコピーからなった。次いで、これらのグループを、ｃｉｓ−ペプチド結合がプロリン残基を含むか否か、１つのグループメンバー中に見出されたｃｉｓ−プロリンが他のグループメンバー中で保存されているか否かを決定するために、マニュアルで分析した。この分析は不完全に思われたが、このとき、ＣＩＳＰＥＰフラッグによるＰＤＢエントリのアノテーションは信頼性がないことに気がついた。

次いで、４５３のＰＤＢエントリを、以下のコンピュータアルゴリズムを使用して再検索した：４５３全てのＰＤＢエントリにおいて、全てのペプチド結合について測定、ペプチド結合ωねじれ角（ｔｏｒｓｉｏｎａｎｇｌｅ）の値。ペプチド結合は、ωが０±２０°であった場合にはｃｉｓとみなし、それ以外はｔｒａｎｓとみなした。このことのためにプログラムＭＯＬＥＭＡＮ２を使用した（Ｋｌｅｙｗｅｇｔ，Ｇ．Ｊ．（１９９５）．ＭＯＬＥＭＡＮ２：ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰＤＢｆｉｌｅｓ．Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ、Ｄｅｐｔ．ｏｆＣｅｌｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、ＵｐｐｓａｌａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｒｅ、Ｂｏｘ５９６、ＳＥ−７５１２４）。

（各ＰＤＢエントリ中の）各同定されたｃｉｓペプチド結合に隣接するアミノ酸配列を抽出した（合計８について±３残基、ペプチド結合を規定する２つの残基を含む。）。

各ＰＤＢエントリ中の各ｃｉｓペプチド結合についてのこのクエリ配列を、４５３のエントリの集合全体中で見出された８残基の配列全てと比較した。適切な補正が、鎖の末端および中断に対処した。検索は、同じ結晶構造中の複数コピーのＩｇドメインの（一般的な）可能性をもたらすために、クエリ配列が引き出されるＰＤＢエントリもまた含んだ。

残基の少なくとも６／８が同一であり、一致した配列中の中心的ペプチド結合がｃｉｓではなくｔｒａｎｓである場合に、一致を有意であるとみなした。

この様式で決定された一致は、ｃｉｓおよびｔｒａｎｓの両方の中心的ペプチド結合を有する４５３のＰＤＢエントリのセット中に提示される、高度に相同なまたは同一な８アミノ酸の配列を示している。予測されるように、いくつかの抗体は、定常ドメイン中にｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓプロリン異性化を含むことが見出された（Ｊ６９５は、その定常ドメイン中に、立体配置異性を示さないいくつかのｃｉｓ−プロリンを含む。）。この分析は、ＣＤＲ内のｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓプロリン異性化に焦点を当てた。

ｃｉｓ／ｔｒａｎｓ対の視覚的試験により、Ｊ６９５に加え、１つだけが明白に正確であることが明らかになった。この以前の例は、非対称単位中に２つのＦａｂを含む一本鎖ＤＮＡ結合ｍＡｂＤＮＡ−１（ＰＤＢエントリ１ｉ８ｍ；２．１Åの解像度）である（Ｔａｎｎｅｒ，Ｊ．Ｊ．、Ａ．Ａ．Ｋｏｍｉｓｓａｒｏｖら（２００１）．「ＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｎＡｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇＦｒａｇｍｅｎｔＢｏｕｎｄｔｏＳｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ．」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１４：８０７−８２２頁）。Ｆａｂ１ＣＤＲＨ３中のＡｒｇＨ９８^Ｈ３−ＰｒｏＨ９９^Ｈ３ペプチド結合はｔｒａｎｓであるが、Ｆａｂ２中のＡｒｇＨ９８^Ｈ３−ＰｒｏＨ９９^Ｈ３ペプチド結合はｃｉｓである。結晶中で、ｄＴ_５オリゴデオキシヌクレオチドは、特にＣＤＲＨ３により、２つのＦａｂ間で非対称に結合される。ＤＮＡ−１Ｈ３は、多数の立体配座によって示されるように、他のＣＤＲよりも柔軟であるように思われ、単一の結晶形内または複数の結晶形間で採用し得る（Ｔａｎｎｅｒ，Ｊ．Ｊ．（２００３）．私信）。

ＣＤＲ中、通常はＣＤＲＬ３の位置９５において、ｃｉｓ−ｔｏ−ｔｒａｎｓプロリン異性化を含むと報告されるいくつかの抗体が、この分析で見出された。しかし、全ての関連する構造の詳細な調査により、目的の領域における構造的エラーが相変わらず明らかになった。

［実施例５］Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造の決定
Ａ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体結晶の凍結保護および瞬間冷却
１６％ＰＥＧ４Ｋ、１０％２−プロパノール、０．１ＭＮａＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．２Ｍ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４の存在下で上記のように成長したＪ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体結晶を、漸増量のグルコース（５−１５％）を含む母液溶液中に回収し、次いで液体窒素中で瞬間凍結した。結晶を、ｘ線回折データを収集するまで、液体窒素冷蔵庫中で保存した。

Ｂ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体結晶（結晶３）からのＸ線回折データ収集
単一のＪ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体結晶（結晶３）からのＸ線回折データを、ＭＡＲＣＣＤ検出器を使用して、ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＡｃｃｅｓｓＴｅａｍ（ＩＭＣＡ−ＣＡＴ）ビームライン１７−ＢＭおよび１７−ＩＤ（λ＝１．０Å）、ＡｄｖａｎｃｅｄＰｈｏｔｏｎＳｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）、ＡｒｇｏｎｎｅＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ａｒｇｏｎｎｅ、ＩＬにおいて、３．２５Åの解像度まで、回転法によって収集した。複合体結晶を、データ収集の間、ＯｘｆｏｒｄＣｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓＣｒｙｏｓｔｒｅａｍ冷却器で１００Ｋの温度に維持した。データの各フレーム（合計２５８）について、結晶を０．５°回転させた。結晶配向の決定後、データを、ＭＯＳＦＬＭ（Ｌｅｓｌｉｅ，Ａ．Ｇ．Ｗ．（１９９２）．「ＲｅｃｅｎｔｃｈａｎｇｅｓｔｏｔｈｅＭＯＳＦＬＭｐａｃｋａｇｅｆｏｒｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｆｉｌｍａｎｄｉｍａｇｅｐｌａｔｅｄａｔａ．」ＣＣＰ４ａｎｄＥＳＦ−ＥＡＣＭＢＮｅｗｓｌｅｔｔｅｒｏｎＰｒｏｔｅｉｎＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ２６）を用いて積分し（空間群Ｃ２２２_１、ａ＝１３６．３１５１Å、ｂ＝２０９．５５６０Å、ｃ＝２１７．１１２７Å；単位格子情報は表５にまとめる。）、ＳＣＡＬＡ（Ｅｖａｎｓ，Ｐ．Ｒ．（１９９７）．「ＳＣＡＬＡ．」ＪｏｉｎｔＣＣＰ４ａｎｄＥＳＦ−ＥＡＣＢＭＮｅｗｓｌｅｔｔｅｒ３３：２２−２４頁）でスケーリングおよび統合し、ＴＲＵＮＣＡＴＥを用いて絶対的スケールに対して配置し、構造因子振幅を得た。さらなるデータ操作を、ＣＣＰ４ＰｒｏｇｒａｍＳｕｉｔｅ（ＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＰｒｏｊｅｃｔ４（１９９４）「ＴｈｅＣＣＰ４Ｓｕｉｔｅ：ＰｒｏｇｒａｍｓｆｏｒＰｒｏｔｅｉｎＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０：７６０−７６３頁）で実施した。独自の反射の５％を、フリーＲ因子（Ｒ_ｆｒｅｅ）の計算のために、ランダムな様式で「フリー」セットに割り当て（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２）．「ＴｈｅｆｒｅｅＲｖａｌｕｅ：ａｎｏｖｅｌｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｑｕａｎｔｉｔｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３５５：４７２−４７４頁）；残り９５％の反射は、Ｒ因子（Ｒ）の計算のための「ワーキング」セットを構成した。ｘ線回折データを表６にまとめる。

Ｃ．Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の結晶構造（結晶３）の分子置換解
Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の構造を、分子置換によって解明した。単位格子の体積ならびにＦａｂおよびＩＬ−１２ｐ７０の分子量（４６，６０８Ｄａおよび約７０，０００Ｄａ）に基づいて、この結晶は、非対称単位１つ当たり２つのＦａｂ／ｐ７０複合体を含むと予測された（約６１％溶媒、Ｖ_ｍ約３．３Å^３／Ｄａ）（Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｂ．Ｗ．（１９６８）．「Ｓｏｌｖｅｎｔｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｉｎｃｒｙｓｔａｌｓ．」ＪＭｏｌＢｉｏｌ３３：４９１−７頁）。自己回転関数により、２つの非結晶学的二回回転軸が示され、極回転角（ｐｏｌａｒｒｏｔａｔｉｏｎａｎｇｌｅ）［θ、φ、χ］は［９．７７、９０．００、１８０．００］および［８０．２３、９０．００、１８０．００］に等しく、それぞれが結晶学的二回軸のほぼ３分の１の強度であり、結晶学的ｃ軸からｂ軸に向かって相殺された二回軸約１０°で配向した非結晶学的ダイマーと一致した。ネイティブＰａｔｔｅｒｓｏｎマップ中のオフオリジンピークの欠如と一致する偽並進対称は存在しないようであった。ＣＮＸ（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．、Ｐ．Ｄ．Ａｄａｍｓら（１９９８）．「Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ＆ＮＭＲｓｙｓｔｅｍ（ＣＮＳ）：Ａｎｅｗｓｏｆｔｗａｒｅｓｙｓｔｅｍｆｏｒｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５４：９０５−９２１頁）、ＡＭＯＲＥ（Ｎａｖａｚａ，Ｊ．（１９９４）．「ＡＭｏＲｅ：ａｎａｕｔｏｍａｔｅｄｐａｃｋａｇｅｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇ．Ａ５０：１５７−１６３頁）、ＥＰＭＲ（Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｒ．、Ｄ．Ｋ．Ｇｅｈｌｈａａｒら（２００１）．ＥＰＭＲ：Ａｐｒｏｇｒａｍｆｏｒｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｂｙｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｓｅａｒｃｈ．ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ、ＡｇｏｕｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ）およびＭＯＬＲＥＰ（Ｖａｇｉｎ，Ａ．Ａ．およびＡ．Ｔｅｐｌｙａｋｏｖ（１９９７）．「ＭＯＬＲＥＰ：ａｎａｕｔｏｍａｔｅｄｐｒｏｇｒａｍｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ．」Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．３０：１０２２−１０２５頁）を使用して構造を解明しようとする最初の試みは成功しなかった。Ｊ６９５Ｆａｂ／ＩＬ−１２ｐ７０複合体の構造は、（精密化した）Ｊ６９５ＦａｂフォームＩおよびＩＬ−１２ｐ７０（ＰＤＢエントリ１ｆ４５；（Ｙｏｏｎ，Ｃ．、Ｓ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎら（２０００）．「Ｃｈａｒｇｅｄｒｅｓｉｄｕｅｓｄｏｍｉｎａｔｅａｕｎｉｑｕｅｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇｔｏｐｏｇｒａｐｈｙｉｎｔｈｅｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２．」ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ１９（１４）：３５３０−３５２１頁）座標を検索モデルとして使用して、空間群Ｃ２２２_１でＰＨＡＳＥＲ（Ｓｔｏｒｏｎｉ，Ｌ．Ｃ．、Ａ．Ｊ．ＭｃＣｏｙら（２００４）．「Ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ−ｅｎｈａｎｃｅｄｆａｓｔｒｏｔａｔｉｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒＤＢｉｏｌＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ６０（Ｐｔ３）：４３２−８頁）によって最終的に解明された。最初に２コピーのＦａｂを配置し、１２５０の明らかに正確な対数尤度ゲイン（ｌｏｇｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄｇａｉｎ（ＬＬＧ））を提供した。ＩＬ−１２ｐ７０分子単独の配置は、より問題があり、曖昧な結果を提供した（ＬＬＧ１３０、１分子だけ；第２のｐ７０分子は位置付けできなかった。）。上で決定したように配置された２つのＦａｂでは、ｐ７０についての検索は、かなり改善したＬＬＧ（２１５０）をさらに提供し、これは正確な解と一致していた。ｐ７０の明白な配置は、ｐ７０を単独で使用した場合に上記で決定された明白な配置とも一致していた。

剛体精密化を、ＲＥＦＭＡＣ（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ，Ｇ．Ｎ．、Ａ．Ａ．Ｖａｇｉｎら（１９９７）．「Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔｏｆｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｂｙｔｈｅｍａｘｉｍｕｍ−ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄｍｅｔｈｏｄ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ５３：２４０−２５５頁）を使用して実施した。ランダムに選択した反射の５％を、精密化の間中、交差検定のために使用した（Ｂｒｕｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２）．「ＴｈｅｆｒｅｅＲｖａｌｕｅ：ａｎｏｖｅｌｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｑｕａｎｔｉｔｙｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３５５：４７２−４７４頁）。２０−４．０Åの解像度からのデータを使用して、１０個のドメイン（それぞれ、Ｆａｂ免疫グロブリン［Ｉｇ］ドメインならびにＩＬ−１２のｐ４０およびｐ３５）を、Ｒ_ｆｒｅｅ／Ｒ＝０．４０１／０．４１３まで精密化した。ＳｉｇｍａＡ重み付けしたマップの試験（Ｒｅａｄ，Ｒ．Ｊ．（１９８６）．「ＩｍｐｒｏｖｅｄＦｏｕｒｉｅｒｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｆｏｒｍａｐｓｕｓｉｎｇｐｈａｓｅｓｆｒｏｍｐａｒｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｉｔｈｅｒｒｏｒｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ａ４２：１４０−１４９頁）により、背中合わせに配置された２つのＦａｂ分子が明らかとなり、１つのＦａｂ結合部位は、ＩＬ−１２ｐ４０のドメイン１（Ｎ末端ドメイン）に大部分が結合していた。マップは、第２のＩＬ−１２分子についての密度も示した。

ＰＨＡＳＥＲを再実行し、剛体精密化されたモデルを固定して維持し、第２のＩＬ−１２ｐ７０について検索した。このプロセスは成功し、２９２６の改善されたＬＬＧを提供した。ＰＨＡＳＥＲ内での精密化により、３５６２の最終ＬＬＧが得られた。剛体精密化を、今度は１６のドメイン（８つのＦａｂＩｇドメイン、６つのｐ４０Ｉｇ様ドメインおよび２つのｐ３５ドメイン）によりＲＥＦＭＡＣで繰り返して、Ｒ_ｆｒｅｅ／Ｒ＝０．４００／０．４０９（２０−３．５Å）を提供した。等方性Ｂ因子を使用する連続位置精密化（Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）（ＲＥＦＭＡＣ）は、Ｏ（Ｊｏｎｅｓ，Ｔ．Ａ．、Ｊ．Ｙ．Ｚｏｕら（１９９１）．「Ｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｂｕｉｌｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｍｏｄｅｌｓｉｎｅｌｅｃｔｒｏｎｄｅｎｓｉｔｙｍａｐｓａｎｄｔｈｅｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｅｒｒｏｒｓｉｎｔｈｅｓｅｍｏｄｅｌｓ．」ＡｃｔａＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ａ４７：１１０−１１９頁）における再構築と順に交代し、最終Ｒ_ｆｒｅｅ／Ｒ＝０．２８７／０．２１６を提供した。モデルの質を、Ｐｒｏｃｈｅｃｋ（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ａ．、Ｍ．Ｗ．ＭａｃＡｒｔｈｕｒら（１９９３）．「ＰＲＯＣＨＥＣＫ：ａｐｒｏｇｒａｍｔｏｃｈｅｃｋｔｈｅｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌｑｕａｌｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．２６：２８３−２９１頁）およびＷｈａｔｃｈｅｃｋ（Ｈｏｏｆｔ，Ｒ．Ｗ．Ｗ．、Ｇ．Ｖｒｉｅｎｄら（１９９６）．「Ｅｒｒｏｒｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．」Ｎａｔｕｒｅ３８１：２７２頁）を使用して評価した。精密化統計値を表７中に報告する。

参照による組み込み
本出願中で引用された、全ての引用した文献（参考文献、特許、特許出願およびウェブサイトを含む。）の内容、ならびに図面は、その全体を参照により本明細書中に明示的に組み込む。本発明の実施は、特に示さない限り、当技術分野で周知の従来の抗体産生技術を採用する。

均等物
本明細書中に記載された詳細な実施例および実施形態は、例示目的のためだけに例として与えられたものであり、本発明を限定するものと決して解釈すべきでないことが理解される。実施例および実施形態を考慮した種々の改変および変化が当業者に示唆され、それらは本出願の精神および範囲内に含まれ、添付の特許請求の範囲の範囲内であるとみなされる。例えば、成分の相対量は、所望の効果を最適化するために変動され得、さらなる成分が添加され得、および／または類似の成分が、記載された成分のうち１つまたは複数を置換し得る。本発明のシステム、方法およびプロセスに伴うさらなる有利な特徴および機能性は、添付の特許請求の範囲から明らかである。さらに、当業者は、慣用に過ぎない実験を使用して、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識する、または確定できる。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲に包含される意図である。

Claims

ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１９７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の残基１−１０７から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、ｐ４０サブユニットのループ１−７の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合し、前記少なくとも１つのアミノ酸残基が、配列番号３のアミノ酸配列の残基１４−２３、５８−６０、８４−１０７、１２４−１２９、１５７−１６４および１９４−１９７からなる群から選択される、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−１８からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；
抗体が、残基１４−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１５−１７からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基８５−９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；
抗体が、残基８６−８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；
抗体が、残基８６、８７、８９および９３からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、ループ３のアミノ酸残基８７または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項７に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１０２−１０４からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１２４−１２９からなる群から選択されるループ５の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；
抗体が、残基１５７−１６４からなる群から選択されるループ６の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１９４−１９７からなる群から選択されるループ７の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−２３、５８−６０、８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−１８、８５−９３および１０２−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；
抗体が、残基１４−１７、８６−８９、９３および１０３−１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１５−１７、８６−８７、８９、９３および１０４からなる群から選択されるループ１−４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項１１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１５、１７−２１、２３および５８−６０からなる群から選択されるループ１−２の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基５８−６０からなる群から選択されるループ２の少なくとも１つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項１３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−２３および８４−９４からなる群から選択されるループ１および３の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基１４−２３および９５−１０７からなる群から選択されるループ１および４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基１４−２３からなる群から選択されるループ１の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、残基８４−９４および９５−１０７からなる群から選択されるループ３および４の少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合するか；または
抗体が、残基８４−９４からなる群から選択されるループ３の少なくとも１つのアミノ酸残基および残基９５−１０７からなる群から選択されるループ４の少なくとも１つのアミノ酸残基、または前記アミノ酸残基の１−１０Å以内を含むｐ４０サブユニットの一部分に結合する、
請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分との結合について競合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体Ｙ６１でも抗体Ｊ６９５でもない、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体が、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１のアミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１以外の可変領域残基のいずれか１つが、異なるアミノ酸で独立して置換されている、単離された抗体またはその抗原結合部分。
ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体が、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２の３５、５１および９０−１０１のうち１つまたは複数が、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている、単離された抗体またはその抗原結合部分。
配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つまたは複数が、芳香族残基で独立して置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは複数が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されているか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは複数が、芳香族アミノ酸残基で独立して置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の５１のうち１つまたは複数が、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されているか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１が、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されているか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５が、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されているか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されているか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、ならびに抗体のＣＤＲＬ３の長さが、１２アミノ酸残基以上であるか；
抗体が、以下の置換：
（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、ならびに抗体のＣＤＲＬ３の長さが、１２アミノ酸残基以上である；
（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１が、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されている；
（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５が、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されている；もしくは
（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている
のうち１つまたは複数を有するか；または
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち１つまたは複数が、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されている、
請求項２１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体が、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１つまたは複数が、異なるアミノ酸残基で独立して置換されている、単離された抗体またはその抗原結合部分。
配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されているか；または
配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている、
請求項２３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３がＬｙｓで置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０がＴｙｒまたはＴｒｐで置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７がＩｌｅまたはＴｒｐで置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７がＳｅｒまたはＴｈｒで置換されているか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９がＴｙｒまたはＴｒｐで置換されているか；または
配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３がＴｙｒまたはＴｒｐで置換されている、
請求項２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体Ｊ６９５でも抗体Ｙ６１でもない、請求項２０、２１および２３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
請求項２０、２１および２３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分との結合について競合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する方法であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、前記方法が、配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２、５２、５３、９７、１０１および１０２ならびに配列番号２のアミノ酸残基３５、５１および９０−１０１のうち１つまたは複数を、異なるアミノ酸残基で独立して置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する、方法。
配列番号１の可変領域アミノ酸残基２７、３２および１０２のうち１つまたは複数が、芳香族残基で独立して置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基９７ならびに配列番号２の３５および９２のうち１つまたは複数が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されるか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９２および９７のうち１つまたは複数が、芳香族アミノ酸残基で独立して置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基１０１および配列番号２の可変領域アミノ酸残基５１のうち１つまたは複数が、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換されるか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１が、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換されるか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５が、異なる芳香族アミノ酸残基で置換されるか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されるか；
配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さが、１２アミノ酸残基以上である；
抗体またはその抗原結合部分が、以下の置換：
（ａ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９０−１０１のうち１つまたは複数が、少なくとも１つまたは複数の異なるアミノ酸で独立して置換されており、抗体のＣＤＲＬ３の長さが、１２アミノ酸残基以上である；
（ｂ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９１が、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸残基で置換される；
（ｃ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９５が、異なる芳香族アミノ酸残基で置換される；もしくは
（ｄ）配列番号２の可変領域アミノ酸残基９７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されている
のうち１つまたは複数を有するか；または
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５２および５３のうち１つまたは複数が、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＬｙｓおよびＡｒｇからなる群から選択されるアミノ酸残基で独立して置換される、
請求項２８に記載の方法。
ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する方法であって、前記抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１の重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号２の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含み、前記方法が、配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３、５０、５７および９９ならびに配列番号２の３３のうち１つまたは複数を、異なるアミノ酸残基で独立して置換することを含み、それにより、ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する抗体またはその抗原結合部分の活性を変更する、方法。
配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｓｎおよびＧｌｎからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換されるか；または
配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３が、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、ＧｌｎおよびＬｙｓからなる群から選択されるアミノ酸残基で置換される、
請求項３０に記載の方法。
配列番号１の可変領域アミノ酸残基３３がＬｙｓで置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５０がＴｙｒまたはＴｒｐで置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７がＩｌｅまたはＴｒｐで置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基５７がＳｅｒまたはＴｈｒで置換されるか；
配列番号１の可変領域アミノ酸残基９９がＴｙｒまたはＴｒｐで置換されるか；または
配列番号２の可変領域アミノ酸残基３３がＴｙｒまたはＴｒｐで置換される、
請求項３１に記載の方法。
請求項２８または３０に記載の方法に従って生成された、単離された抗体またはその抗原結合部分。
ＩＬ−１２および／もしくはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体が、配列番号３のアミノ酸配列のアミノ酸残基１６、８７および９３からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基または前記アミノ酸残基の１０Å以内を含む立体配座エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体がアミノ酸残基１６に結合する、請求項３４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに、１×１０^−３Ｍ^−１以下のＫ_ｏｆｆまたは１×１０^−１０Ｍ以下のＫ_ｄで結合する、請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
抗体が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの生物学的活性を中和する、請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
請求項３７に記載の抗体またはその抗原結合部分および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
少なくとも１つのさらなる生物学的に活性な薬剤をさらに含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸。
少なくとも１つの転写調節核酸配列に作動可能に連結された請求項４０に記載の核酸を含む、単離された核酸ベクター。
請求項４１に記載の核酸ベクターを含む、宿主細胞。
真核生物宿主細胞または原核生物宿主細胞である、請求項４２に記載の宿主細胞。
対象における少なくとも１つのＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３関連状態を診断する方法であって、前記対象由来の生物学的試料を、請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分と接触させること、ならびに試料中に存在するＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットの量を測定することを含み、試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのレベルの、正常または対照と比較した上昇または低下の検出が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３関連状態の存在または非存在を示し、それにより、対象における少なくとも１つのＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３関連状態を診断する、方法。
抗体またはその抗原結合部分が、検出可能な標識を含んでいるか、または検出可能な標識を有する第２の分子によって検出可能である、請求項４４に記載の方法。
生物学的試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つを調節する薬剤を同定する方法であって、前記試料を、請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分と接触させること、ならびに試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性を検出することを含み、未処理の試料と比較した、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つにおける増加または減少が、ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つを調節可能な薬剤を示し、それにより、試料中のＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現、レベルおよび／または活性のうち少なくとも１つを調節する薬剤を同定する、方法。
抗体またはその抗原結合部分が、検出可能な標識を含んでいるか、または検出可能な標識を有する第２の分子によって検出可能である、請求項４６に記載の方法。
ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害に罹患した対象においてＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性を阻害する方法であって、対象においてＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が阻害されるように、請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを含む、方法。
ＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の活性が有害である障害に罹患した対象を治療する方法であって、請求項１、２０、２１、２３および３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを含み、それにより対象を治療する、方法。