JP2014012740A - テトラヒドロビオプテリンの安定性錠剤処方物 - Google Patents

Abstract

【課題】テトラヒドロビオプテリンの安定な固体処方物、それらを生産するためのプロセスおよびそのような処方物を使用する処置方法を提供すること
【解決手段】本発明は、テトラヒドロビオプテリンの安定な固体処方物、それらを生産するためのプロセスおよびそのような処方物を使用する処置方法に関連する。本発明はまた、テトラヒドロビオプテリン、あるいはその前駆体、誘導体またはアナログの安定な固体処方物を提供し、これは延長した期間のための安定性を維持する。本発明の組成物は、室温で８時間より長く安定なＢＨ４の安定な結晶形態および薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤を含有し得る。本発明の例示的な安定な錠剤は、乾燥錠剤化プロセスを使用して調製され、室温で少なくとも６〜９ヶ月の貯蔵寿命を有することが示されている。
【選択図】なし

Description

（背景）
（分野）
本発明は、一般にヒトを処置するためのテトラヒドロビオプテリンあるいはそれらの前駆体、誘導体またはアナログの安定性錠剤処方物に関する。

（関連技術の背景）
テトラヒドロビオプテリン（時々ＢＨ４と呼ばれる）は、天然に存在するプテリンファミリーの生体アミンであり、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）、チロシンヒドロキシラーゼ、トリプトファンヒドロキシラーゼおよび一酸化窒素合成酵素を含む多くの異なる酵素に対する補因子である。プテリンは、還元型および酸化型で生理学的体液および組織中に存在するが、５，６，７，８，テトラヒドロビオプテリンのみが生物学的に活性である。これはキラル分子であり、この補因子の６Ｒエナンチオマーが、生物学的に活性なエナンチオマーであることが公知である。ＢＨ４に関する合成および疾患の詳細な概説は、非特許文献１を参照のこと。

ＰＡＨ酵素の欠失または変異したＰＡＨ酵素、あるいはＰＡＨの補因子であるＢＨ４の欠損によるＰＡＨの活性の欠損は、アミノ酸のフェニルアラニン（Ｐｈｅ）の過剰として現れ、これは極めて軽度の形態の場合には高フェニルアラニン血症（ＨＰＡ）、中程度または重篤な形態の場合にはフェニルケトン尿症（ＰＫＵ）として公知である。ＰＡＨの欠損はまた、神経伝達物質の合成のための前駆体であるアミノ酸のチロシンの欠損を生じる。チロシンヒドロキシラーゼ活性またはトリプトファンヒドロキシラーゼ活性の欠損は、神経伝達物質の産生の欠損として現れ得る。

フェニルケトン尿症におけるＢＨ４の欠損の役割の解明にもかかわらず、ＢＨ４を用いる処置は提案されていない。なぜなら、フェニルアラニンを制限した食事療法が青年または成人において１年あたり６，０００ドルであるのに対して、ＢＨ４を用いる処置は青年または成人において１年あたり３０，０００ドルと極めて高価なためである（非特許文献２）。ＢＨ４に関する別の重要な問題としては、本化合物は不安定であり、容易に室温で好気的酸化を受け（非特許文献３；特許文献１）、室温で８時間未満の貯蔵寿命を有する（非特許文献４）ことである。

市場において入手可能な他のテトラヒドロビオプテリン製品は、特別にパッケージ化されるかまたは凍結して保存される必要がある。例えばＳｃｈｉｒｃｋ’ｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにより販売される錠剤のラベリングは、この錠剤が凍結して保存されるべきであることを指定し、この製品が室温でたった２ヶ月の貯蔵寿命しか有しないことを提示する。ＢＩＯＰＴＥＮ（テトラヒドロビオプテリンの顆粒）は、室温での安定性を維持するために、高価で、密封したホイルパッケージ化（ｈｅｒｍｅｔｉｃａｌｌｙ−ｓｅａｌｅｄ
ｆｏｉｌ ｐａｃｋａｇｉｎｇ）を必要とする。そのようなＢＨ４組成物の不安定性は、商業的に望ましくなく、不適当な貯蔵による有意な分解は患者の治療を妨げ得る。

薬剤物質の多形相（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｏｒｍ）は、吸湿性、粒子の形状、密度、流動性および成形性を含む異なる物理的特性および機械的特性を示し得、このことは今度は、薬剤物質の加工および／また製剤の製造に影響を与え得る。薬学的加工における多形性の影響はまた、処方および製造プロセスに依存している。薬剤物質の多形相は、乾燥、製粉、微粉末化、湿式造粒、噴霧乾燥および圧縮のような一連の製造プロセスに曝露されると相変化を起こし得る。湿気および気温のような環境条件への曝露はまた、多形変化を誘導し得る。変化の程度は、一般的に多形の相対的な安定性、相変化の動的な障壁および加えた圧力に依存する。ＦＤＡ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＣＤＥＲ）Ｄｒａｆｔ Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ
Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ＡＮＤＡｓ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｌｉｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ， ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，２００４年１２月を参照のこと。

米国特許第４，７０１，４５５号明細書

Ｂｌａｕら、「Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｂｉｏｐｔｅｒｉｎ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｂｉｏｇｅｎｉｃ ａｍｉｎｅｓ．」：Ｓｃｒｉｖｅｒ ＣＲ、Ｂｅａｕｄｅｔ ＡＬ、Ｓｌｙ ＷＳ、Ｖａｌｌｅ Ｄ、Ｃｈｉｌｄｓ Ｂ、Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ Ｂ編。Ｔｈｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅ 第８版 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、２００１年：１２７５〜１７７６ Ｈａｎｌｅｙ、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ、２００３年 ３４８（１７）：１７２３ Ｄａｖｉｓら、１９８８年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｖｏｌ １７３、３４５〜３５１ ＢｅｒｎｅｇｇａｒおよびＢｌａｕ、２００２年、Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔａｂｏｌ．７７：３０４〜３１３

従って、テトラヒドロビオプテリンの安定な固体処方物、およびそのような安定な処方物を製造するためのプロセスに対する必要性が残っている。本発明は、そのような必要性に取り込むことに関する。

（発明の要旨）
本発明は、テトラヒドロビオプテリンの安定な固体処方物（特に安定な錠剤）、そのような処方物を生産するためのプロセスおよびそのような処方物を使用する処置方法に関する。

本発明は、テトラヒドロビオプテリン、あるいはその前駆体、誘導体またはアナログの安定な固体処方物を提供し、これは延長した期間のための安定性を維持する。本発明の組成物は、室温で８時間より長く安定なＢＨ４の安定な結晶形態および薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤を含有し得る。本発明の例示的な安定な錠剤は、乾燥錠剤化プロセスを使用して調製され、室温で少なくとも６〜９ヶ月の貯蔵寿命を有することが示されている。

本発明の別の局面は、安定な固体処方物を調製するための乾燥処方プロセスを提供し、このプロセスは、水を添加せずに、テトラヒドロビオプテリン、あるいはその前駆体、誘導体またはアナログと別の薬学的キャリア、希釈剤または賦形剤とを混合する工程を包含する。

例示的な実施形態において、この活性な薬学的成分および賦形剤は乾燥混和され、圧縮される。この錠剤は、湿度が、約６５％（±５％）以下に維持される湿度制御された部屋において加工される。一度加工されると、この錠剤は、プラスチックバッグの外側２層の間に満たされた乾燥ピロー（ｄｅｓｉｃｃａｎｔ ｐｉｌｌｏｗ）を有するプラスチックで三重に裏打ちされた耐水性容器に貯蔵される。従って、本発明は、初期量の（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形（好ましくはｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂ）と１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤とを混合する工程、およびこの混合物から錠剤を形成する工程を包含する乾燥処方方法を含み、ここでこの工程は、液体の水を加える工程を包含しない。例示的な粒子サイズとしては、例えば約０．２μｍ〜約５００μｍ、約１μｍ〜約２５０μｍまたは約２μｍ〜約２００μｍ、あるいは約５００μｍより大きい、約６００μｍより大きい、約７００μｍより大きい、または約８５０μｍより小さい粒子サイズが挙げられる。

例示的な実施形態において、この錠剤は、以下に「ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂ」として記載される（６Ｒ）−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリンの安定な結晶型を使用して最初に製造され、そして少なくとも約９５％の活性薬学的成分（ＡＰＩ）が、室温で３ヶ月後、６ヶ月後、または９ヶ月後、あるいは好ましくは１２ヶ月以上（例えば、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２年、２．５年、３年またはそれ以上）後に保持される。好ましくは、この錠剤は、そのような期間、室温で貯蔵後、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％のＡＰＩを保持している。この錠剤はまた、好ましくは、そのような期間後、２％以下、１．５％以下、１％以下、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下の乾燥による損失を示す。例示的な錠剤は、テトラヒドロプテリンの活性薬学的成分の初期量が、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇまたはそれ以上の用量で製造され得る。好ましい錠剤はまた、投与時にて迅速な崩壊（例えば、３分以下）を示し、投与の容易さを改善する。

従って、本発明は、初期量のｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂとの名称の（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形および薬学的に受容可能な賦形剤を含有する安定性錠剤処方物を提供し、ここで室温および約６０％の湿度で６ヶ月後、この安定性錠剤処方物は、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの初期量の少なくとも約９５％を保持し、ここでこの結晶多形は、塩酸塩として、ｄ値（Ａ）で表される以下の特性ピーク：８．７（ｖｓ）、５．６３（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．００（ｓ）、３．２３（ｓ）、３．１１（ｖｓ）、好ましくは８．７（ｖｓ）、６．９（ｗ）、５．９０（ｖｗ）、５．６３（ｍ）、５．０７（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．１５（ｗ）、４．００（ｓ）、３．９５（ｍ）、３．５２（ｍ）、３．４４（ｗ）、３．３２（ｍ）、３．２３ （ｓ）、３．１７（ｗ）、３．１１（ｖｓ）、３．０６（ｗ）、２．９９（ｗ）、２．９６ （ｗ）、２．９４（ｍ）、２．８７（ｗ）、２．８４（ｓ）、２．８２（ｍ）、２．６９ （ｗ）、２．５９（ｗ）および２．４４（ｗ）、を有するＸ線粉末回折パターンを示す。好ましくは、この錠剤は、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの初期量の少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％を保持する。

安定な固体処方物は、好ましくは処方物の安定性または他の特性を改善する以下の付加的な成分：結合剤、崩壊剤、酸性抗酸化剤または滑沢剤、あるいはそれらの組み合わせ、を１つ以上含有する。１つの例示的な好ましい組成物は、無水二塩基リン酸カルシウム、クロスポビドン、アスコルビン酸およびフマル酸ステアリルを、必要に応じてマンニトールおよびリボフラビンとともに含有する。安定な固体処方物は、必要に応じて処置される状態に適した他の治療薬、例えば、フォレート（ｆｏｌａｔｅ）（葉酸前駆体、葉酸または葉酸誘導体を含む）；および／またはビタミン（ビタミンＣおよび／またはビタミンＢ１２のような）；および／または神経伝達物質前駆体（Ｌ−ドパまたはカルビドパのような）；および／または５−ヒドロキシトリプトファン；および／またはアルギニンを含有し得る。テトラヒドロビオプテリン（または前駆体または誘導体またはアナログ）およびフォレートを含有する組成物、および必要に応じてさらにアルギニンを含有する組成物が、特に意図される。

さらに本発明は、経口投与のための他の安定な固体処方物、例えば、同様に安定な特性を有するカプセル、丸剤またはトローチを意図する。

さらに本発明の別の局面は、そのような安定な固体処方物を使用する処置方法を提供する。本発明は、そのような本発明の処方物が、代謝障害、特にアミノ酸代謝に関わる代謝障害における介入に有用であることを意図する。さらに詳しくは、この安定性処方物は、上昇したフェニルアラニンレベルまたは減少したチロシンレベルを示す被験体（例えば、高フェニルアラニン血症、軽度のフェニルケトン尿症または古典的に重篤なフェニルケトン尿症を患っている被験体）；および一酸化窒素合成酵素活性の増強の恩恵を受ける状態（血管疾患、虚血性疾患、炎症性疾患、糖尿病またはインスリン抵抗性を含む）を患っている被験体の処置のために使用され得る。各処置に必要とされる総用量は、複数回用量または単回用量で投与され得る。この安定性処方物は、毎日またはある他の間隔（例えば、１日おき毎またはさらには１週毎に）で投与され得る。

この安定性処方物は、単独で使用され得るかまたは、処置される障害（内在する疾患または臨床症状を含む）に適した他の治療との組み合わせで使用され得る。例えば、ＨＰＡに対して、本発明の安定性処方物は、タンパク質を制限した食事（例えば、被験体は、１日のタンパク質が約６００ｍｇ以下または約３００ｍｇ以下に制限される）との組み合わせで、必要に応じて、チロシン、バリン、イソロイシンおよびロイシンのような補充アミノ酸とともに投与され得る。この安定性処方物はまた、フォレート、アルギニン、ビタミンまたは神経伝達物質前駆体との組み合わせで投与され得る。別の例として、血管疾患、糖尿病またはインスリン抵抗性に対して、本発明の安定性処方物は、抗高血圧薬、抗血小板薬、コレステロール降下薬、インスリンまたは経口血糖降下薬のような他の治療薬との組み合わせで投与され得る。

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明により明らかになる。しかしながら、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すが、例証のみで与えられることが理解されるべきである。なぜなら本発明の精神および範囲内における種々の変更および改変は、この詳細な説明より当業者に明らかになるからである。

図１は、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶形態Ｂについての特徴的なＸ線粉末回折パターンを示す。

（好ましい実施形態の説明）
本発明は、活性成分の安定な結晶多形を維持する安定性処方物を提供する。以下にｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂとして記載される、室温で空気中の酸素および通常の湿度に対して安定である（６Ｒ）−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの無水多形が同定された。しかしながら、相対湿度のパーセントが８０％に近づくと、ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂはさらに多くの水を吸収するようであり、その結晶形態を失い、酸化を起こしやすくなる。

乾燥処方プロセスを使用することにより、この多形の安定な結晶構造は、最終生成物において維持される。対照的に、テトラヒドロビオプテリン組成物を調製するための他のプロセスは、本発明の生成物に比較して、安定性を欠いた生成物を生じる。

本発明の安定性錠剤処方物は、乾燥処方プロセスにおいてｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂを使用して作られ、通常の室温および通常の湿度、ならびに加速試験条件下で、少なくとも６ヶ月間または９ヶ月間、最初の（６Ｒ）−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリンのうち、９９％以上を保持することが示された。加速試験条件下（すなわち、高温および高湿度）で観察された安定性は、この錠剤処方物が通常の室温および通常の湿度で６ヶ月間または９ヶ月間よりはるかに長く安定であることを示す。

本明細書中で用いられる場合、「貯蔵寿命」は、薬学的処方物が、特定の貯蔵条件下（例えば、通常の湿度で室温）で貯蔵される場合、薬学的処方物中の活性薬学的成分（ＡＰＩ）が、最小の分解（例えば、約５％以下の分解）を有する間の貯蔵期間を意味する。

本発明の安定性処方物の貯蔵寿命は以下のように測定され得る。試験される処方物は、１つ以上の異なるバッチに分けられ、代表的な貯蔵条件下（例えば、４℃（冷蔵庫）、または２５℃（室温））で貯蔵され得る。薬学的処方物におけるＡＰＩの分解もまた、薬剤物質の分解速度を増加させることを意図した過度の貯蔵条件下で、加速試験を使用して検出され得る。例えば、１つのバッチは、「負荷を加えられる（ｓｔｒｅｓｓｅｄ）」（４５℃の温度および７５％湿度を維持するチャンバーに置かれる）であり得る。次いで処方物の各バッチのサンプルは、処方物において依然として存在するＡＰＩの量を、異なる時間点（例えば、時間０、２週、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年またはより長い）で分析される。処方物中のＡＰＩの分析は、高速液体クロマトグラフィー、結晶または粉末のＸ線回折、赤外線またはラーマンスペクトルの研究、顕微鏡、示差走査熱量測定、熱性重量分析、高温ステージ顕微鏡（ｈｏｔ−ｓｔａｇｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）および固体核磁気共鳴を含む種々の検出方法により実施され得る。ある特定の多形形態の維持は、例えば、粉末または結晶のＸ線回折研究または最初に多形を分析するために使用される任意の同じ手法を実施することにより決定され得る。

（Ｉ．テトラヒドロビオプテリン、前駆体、誘導体およびアナログの合成）
テトラヒドロビオプテリン、前駆体、誘導体およびアナログを合成するための種々の方法が当該分野において公知である。米国特許第５，６９８，４０８号；同第２，６０１，２１５号；同第３５０５３２９号；同第４，５４０，７８３号；同第４，５５０，１０９号；同第４，５８７，３４０号；同第４，５９５，７５２号；同第４，６４９，１９７号；同第４，６６５，１８２号；同第４，７０１，４５５号；同第４，７１３，４５４号；同第４，９３７，３４２号；同第５，０３７，９８１号；同第５，１９８，５４７号；同第５，３５０，８５１号；同第５，４０１，８４４号；同第５，６９８，４０８号、カナダ出願ＣＡ２４２０３７４、欧州出願ＥＰ０７９ ５７４、ＥＰ１９１ ３３５およびサントリーの日本特許公開ＪＰ４−０８２８８８、ＪＰ５９−０２１６８５およびＪＰ９−１５７２７０およびＳｕｇｉｍｏｔｏおよびＭａｔｓｕｕｒａ、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊａｐａｎ、４８（１２）：３７６７〜３７６８（１９７５）、ＳｕｇｉｍｏｔｏおよびＭａｔｓｕｕｒａ、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊａｐａｎ、５２（１）：１８１〜１８３（１９７９）、Ｍａｔｓｕｕｒａら．、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（日本）、７３５〜７３８（１９８４）、Ｍａｔｓｕｕｒａら．、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ、Ｖｏｌ．２３、Ｎｏ．１２、３１１５〜３１２０、１９８５およびＷｈｉｔｅｌｅｙら．、Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３７（２）：３９４〜６（１９８４）（それぞれは本明細書中に参考として援用される）はそれぞれ本発明の組成物として使用され得るジヒドロビオプテリン、ＢＨ４およびそれらの誘導体の作製方法を記載する。

その全体が参考として本明細書中に援用される国際公開第２００５０４９６１４号、米国特許第４，５４０，７８３号、特許第５９−０２１６８５号、Ｓｃｈｉｒｃｋｓら．、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、６０：２１１（１９７７）、Ｓｕｇｉｍｏｔｏら．、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐ、５２（１）：１８１（１９７９）、Ｓｕｇｉｍｏｔｏら．、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐ、４８（１２）：３７６７（１９７５）、Ｖｉｓｏｎｔｉｎｉら．、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、５２：１２２５（１９６９）およびＭａｔｓｕｕｒａら．、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、ｐ７３５（１９８４）はＢＨ４を合成する方法を記載する。

明細書中に記載される組成物および方法における使用のためのアナログの非限定的な例としては、プテリジン、プテリン、ネオプテリン、ビオプテリン、７，８−ジヒドロビオプテリン、６−メチルテトラヒドロプテリンならびに他の６−置換したテトラヒドロプテリンおよび他の６−置換したテトラヒドロプテリン類、セピアプテリン、６，７−ジメチルテトラヒドロプテリン、６−メチルビオプテリンおよび他の６−置換したビオプテリン類、ならびに当該分野において記載される他のアナログが挙げられる。本明細書中に記載される組成物および方法の使用のための誘導体の非限定的な例としては、米国特許第４，７５８，５７１号；同第４，７７４，２４４号；同第６，１６２，８０６号；同第５，９０２，８１０号；同第２，９５５，１１０号；同第２，５４１，７１７号；同第２，６０３，６４３号；および同第４，３７１，５１４号に記載される誘導体が挙げられ、それらの開示が本明細書中に援用される。

当該分野において公知の任意のそのような方法または他の方法が、本発明の安定性処方物および治療方法における使用のためにＢＨ４あるいは前駆体、誘導体またはアナログの生成のために使用され得る。

（ＩＩ．６Ｒ−テトラヒドロビオプテリン塩酸塩の結晶多形）
ＢＨ４、および特にＢＨ４のジヒドロクロライドは、結晶多形性を示すことが見出されている。ＢＨ４の構造は以下：

に示される。

ＢＨ４のこの（６Ｒ）の形態は、生物学的に活性型として公知であるが、ＢＨ４は、周囲温度に不安定であることが公知である。

ＢＨ４は、取り扱いが困難である。それゆえ、吸湿特性および酸化に対する感受性による物質の分解を防止するために窒素下で封入されたアンプル内で、ＢＨ４のジヒドロクロライド（Ｓｃｈｉｒｃｋｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｊｏｎａ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）として生産され提供された。米国特許第４，６４９，１９７号は、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドおよび６（Ｓ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドをそのジアステレオマーに分離することは、６（Ｒ，Ｓ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの乏しい結晶性のため困難であることを開示する。欧州特許番号第０ ０７９ ５７４号は、テトラヒドロビオプテリンの調製を記載し、ここで固体のテトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドは、中間体として得られる。Ｓ．Ｍａｔｓｕｕｒａらは、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９８４年、７３５〜７３８頁およびＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ、Ｖｏｌ．２３、Ｎｏ．１２、１９８５年、３１１５〜３１２０頁に、無色針状結晶の形態の結晶性固体として、６（Ｒ）−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドを記載し、これはＪ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９８、１３４１〜１３４８（１９８５）に開示されるＸ線解析により特徴付けられる。旋光度６．８１°は結晶生成物であることが見出され、これはＥＰ−Ａ２−０ １９１ ３３５の実施例６における白色結晶の形態の結晶性固体について報告される旋光度６．５１°に極めて類似している。

（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの開発中に得られた結果は、この化合物が、多形形態および溶媒和物を含む異なる結晶形態で存在し得ることを示した。１つのＢＨ４の結晶多形がより安定であり、周囲条件下で分解に安定であることが見出された。

（多形形態Ｂ）
最も安定であることが見出された結晶多形は、本明細書中で「形態Ｂ（ｆｏｒｍ Ｂ）」あるいは「ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂ」と呼ばれる。

Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂは、約２０℃より上で最も高い熱力学的安定性を有するわずかに吸湿性の無水物である。さらに、形態Ｂは、その熱安定性、標的とした条件による調製の可能性、その適切な形態および粒子サイズのため、容易に加工され取り扱われ得る。融点は２６０℃付近（ΔＨｆ＞１４０ Ｊ／ｇ）であるが、融解前および融解中の分解のため、明確な融点は検出され得ない。これらの顕著な特性は、特に薬学的適用に適した多形形態Ｂを与え、これはしばしば上昇した温度で調製される。Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂは、０．２μｍ〜５００μｍの範囲であり得る粒子サイズを有する微細粉末として得られ得る。

形態Ｂは、ｄ値（Å）：８．７（ｖｓ）、６．９（ｗ）、５．９０（ｖｗ）、５．６３
（ｍ）、５．０７（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．１５（ｗ）、４．００（ｓ）、３．９５（ｍ）、３．５２（ｍ）、３．４４（ｗ）、３．３２（ｍ）、３．２３（ｓ）、３．１７（ｗ）、３．１１（ｖｓ）、３．０６（ｗ）、２．９９（ｗ）、２．９６（ｗ）、２．９４（ｍ）、２．８７（ｗ）、２．８４（ｓ）、２．８２（ｍ）、２．６９（ｗ）、２．５９（ｗ）、２．４４（ｗ）で表されるＸ線粉末回折パターンを示す。図１は、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの形態Ｂにより示される、特徴的なＸ線回折パターンのグラフである。本明細書中に使用される、以下の括弧内の略語は：（ｖｓ）＝極めて強い強度；（ｓ）＝強い強度；（ｍ）＝中程度の強度；（ｗ）＝弱い強度；および（ｖｗ）＝極めて弱い強度、を意味する。

形態Ｂは、極めて大量（例えば、１００キロスケール）に調製され得、延長した期間にわたり貯蔵され得る。

結晶形態Ｂを含むすべての結晶形態（多形、水和物および溶媒和物）は、最も安定なｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂの調製のために使用され得る。Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂは、適した極性の非水溶性溶媒中において、非結晶性または他の形態の懸濁液の相平衡により得られ得る。

ＢＨ４の他の形態は、ＢＨ４の他の形態を室温で溶媒中に分散し、多形形態Ｂを生成するのに十分な時間、この懸濁液を周囲温度で攪拌し、その後結晶形態Ｂを単離し、そして単離した形態Ｂから溶媒を除去することにより、形態Ｂに変換され得る。本明細書中に使用される周囲温度は、０℃〜６０℃、好ましくは１５℃〜４０℃の範囲の温度を意味する。適用される温度は、処理中および攪拌中に段階的または継続的に温度を低下させることにより変更され得る。他の形態の形態Ｂへの変換のために適した溶媒は限定されないが、メタノール、エタノール、イソプロパノール、他のＣ３−アルコールおよびＣ４−アルコール、酢酸、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、メチル（ｍｅｔｈｙ）−ｔ−ブチルエーテル、１，４−ジオキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、他のＣ３−Ｃ６−酢酸塩、メチルエチルケトンおよび他のメチル−Ｃ３−Ｃ５アルキル−ケトンが挙げられる。完全な相平衡に至るまでの時間は、３０時間までおよび好ましくは２０時間以下までであり得る。

Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂは、約５％まで水を含有する溶媒混合物（具体的にはエタノール、酢酸および水の混合物からなる）からの結晶化により得られ得る。（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドのＰｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂは、必要に応じて上昇した温度で、好ましくは形態Ｂより低いエネルギーの固体形態または（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの形態Ｂをエタノール、酢酸および水を含有する溶媒混合物中に溶解し、この溶液にシードを添加し、得られた懸濁液を冷却し、形成された結晶を単離することにより調製され得る。溶解は、室温または７０℃までで、好ましくは５０℃までで実施され得る。溶解のために最終溶媒混合物が使用され得るか、または出発物質が最初に水中に溶解され得、そして他の溶媒が両方または交互に溶媒に加えられ得るかである。この溶媒混合物の組成物は、水：酢酸：テトラヒドロフランを容量比１：３：２〜１：９：４および好ましくは１：５：４で含有し得る。この溶液は、好ましくは攪拌される。冷却は、−４０℃〜０℃まで、好ましくは１０℃〜３０℃までの温度の低下を意味する。適したシードは、別のバッチ由来の多形形態Ｂあるいは同様なまたは同一の形態を有する結晶である。単離後、この結晶形態Ｂは、アセトンまたはテトラヒドロフランのような非溶媒を用いて洗浄され得、常法で乾燥され得る。

Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂはまた、メタノール、エタノールおよび酢酸のような非溶媒の添加を通して水溶液からの結晶化により得られ得る。この結晶化手順および単離手順は、溶液を冷却することなしに室温で有利に実施され得る。そのためこのプロセスは、産業規模での実施に極めて適している。

本明細書に記載される組成物および方法の１つの実施形態において、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの多形形態Ｂを含む組成物は、周囲温度で水中において形態Ｂ以外の固体形態または（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの形態Ｂを溶解し、懸濁液を形成するのに十分な量の非溶媒の添加し、必要に応じてこの懸濁液をある時間攪拌し、そしてその後形成された結晶を単離することにより調製される。この組成物は、以下に記載されるように、さらに薬学的組成物に改変される。

水溶液中における（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライドの濃度は、この溶液を参照すると１０〜８０重量％、より好ましくは２０〜６０重量％であり得る。好ましい非溶媒（すなわち、ＢＨ４の懸濁液を調製するのに有用な溶媒）は、メタノール、エタノールおよび酢酸である。この非溶媒は、水溶液に加えられ得る。さらに好ましくは、この水溶液は非溶媒に加えられる。懸濁液形成後の攪拌時間は３０時間まで、好ましくは２０時間以下までであり得る。濾過および乾燥による単離は上に記載されるように公知の様式で実施される。

多形形態Ｂは極めて安定な結晶形態であり、容易に濾過、乾燥され、薬学的処方物に望ましい粒子サイズに粉砕される。これらのすぐれた特性は、特に薬学的適用に適した多形形態Ｂを与える。

（ＩＩＩ 安定な薬学的処方物）
薬学的処方物は、初めに薬学的に受容可能なキャリアとともにテトラヒドロビオプテリンあるいはその前駆体または誘導体またはアナログの安定な結晶形態を含有する。本発明の安定性処方物は、好ましくは１つ以上の以下のさらなる成分：結合剤、崩壊剤、酸性抗酸化剤または滑沢剤あるいはそれらの組み合わせを含有し、これらは処方物の安定性または他の特性を改善する。好ましくは、安定性錠剤処方物は、結合剤および崩壊剤を必要に応じて酸性抗酸化剤とともに含有し、そして必要に応じてさらに滑沢剤を含有する。

処方物を調製するために使用される（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形の初期量は、例えば、処方物の約３０ｗｔ％〜約４０ｗｔ％の範囲または約３２ｗｔ％〜約３５ｗｔ％の範囲あるいは約３３ｗｔ％であり得る。

結合剤は、錠剤処方物を維持するのを助ける。ある場合には、無水の結合剤が無水状態のｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂを貯蔵するために使用される。ある場合には、結合剤が乾燥剤として作用し得る。例示的な結合剤としては、無水二塩基リン酸カルシウムおよびその一水和物が挙げられる。

本発明の安定性錠剤処方物における結合剤の例示的な濃度は、約１ｗｔ％〜約５ｗｔ％の間である。特に意図した濃度は、約１．５ｗｔ％〜３ｗｔ％の間である。また少なくとも約１．６ｗｔ％、１．７ｗｔ％、１．８ｗｔ％、１．９ｗｔ％、２．０ｗｔ％、２．１ｗｔ％、２．２ｗｔ％、２．３ｗｔ％、２．４ｗｔ％、２．５ｗｔ％、２．６ｗｔ％、２．７ｗｔ％、２．８ｗｔ％、２．９ｗｔ％および３．０ｗｔ％の結合剤の濃度が意図されるかまたは約３．１ｗｔ％、３．２ｗｔ％、３．３ｗｔ％、３．４ｗｔ％、３．５ｗｔ％、３．６ｗｔ％、３．７ｗｔ％、３．８ｗｔ％、３．９ｗｔ％、４．０ｗｔ％、４．１ｗｔ％、４．２ｗｔ％、４．３ｗｔ％、４．４ｗｔ％、４．５ｗｔ％、４．６ｗｔ％、４．７ｗｔ％、４．８ｗｔ％、４．９ｗｔ％および５．０ｗｔ％までの濃度が意図される。本発明の安定性錠剤処方物中の結合剤のテトラヒドロビオプテリンに対する重量比は、例えば約１：１０から約１：２０の範囲である。また、約１：１０．２５、１：１０．５、１：１０．７５、１：１１、１：１１．２５、１：１１．５、１：１１．７５、１：１２、１：１２．２５、１：１２．５、１：１２．７５、１：１３、１：１３．２５、１：１３．５、１：１３．７５、１：１４、１：１４．２５、１：１４．５、１：１４．７５、１：１５、１：１５．２５、１：１５．５、１：１５．７５、１：１６、１：１６．２５、１：１６．５、１：１６．７５、１：１７、１：１７．２５、１：１７．５、１：１７．７５、１：１８、１：１８．２５、１：１８．５、１：１８．７５、１：１９、１：１９．２５、１：１９．５および１：１９．７５の重量比が意図される。

崩壊剤は、水を吸収し膨張することにより固体処方物の迅速な崩壊を助ける。例示的な崩壊剤としては、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、例えばＰＯＶＩＤＯＮＥという名で販売されている）、ポビドンの架橋した形態（ＣＰＶＰ、例えばＣＲＯＳＰＯＶＩＤＯＮＥという名で販売されている）、カルボキシメチルセルロースナトリウムの架橋した形態（ＮａＣＭＣ、例えばＡＣ−ＤＩ−ＳＯＬという名で販売されている）、他の改変したセルロースおよび改変したデンプンが挙げられる。ＣＰＶＰを用いて処方された錠剤は、ＰＶＰを用いて処方された錠剤より極めて迅速な崩壊を示した。

本発明の安定性錠剤処方物中の崩壊剤の例示的濃度は、約１ｗｔ％〜約２０ｗｔ％の間である。特に意図した濃度は、約３ｗｔ％と約１０ｗｔ％との間である。また少なくとも約１．１ｗｔ％、１．２ｗｔ％、１．３ｗｔ％、１．４ｗｔ％、１．５ｗｔ％、１．６ｗｔ％、１．７ｗｔ％、１．８ｗｔ％、１．９ｗｔ％、２．０ｗｔ％、２．１ｗｔ％、２．２ｗｔ％、２．３ｗｔ％、２．４ｗｔ％、２．５ｗｔ％、２．６ｗｔ％、２．７ｗｔ％、２．８ｗｔ％、２．９ｗｔ％および３．０ｗｔ％の崩壊剤の濃度あるいは約４．０ｗｔ％、４．１ｗｔ％、４．２ｗｔ％、４．３ｗｔ％、４．４ｗｔ％、４．５ｗｔ％、４．６ｗｔ％、４．７ｗｔ％、４．８ｗｔ％、４．９ｗｔ％、５．０ｗｔ％、５．２ｗｔ％、５．４ｗｔ％、５．６ｗｔ％、５．７ｗｔ％、５．８ｗｔ％、６．０ｗｔ％、６．２５ｗｔ％、６．５ｗｔ％、６．７５ｗｔ％、８．０ｗｔ％、８．２５ｗｔ％、８．５ｗｔ％、８．７５ｗｔ％、９．０ｗｔ％、９．２５ｗｔ％、９．５ｗｔ％、９．７５ｗｔ％および１０．０ｗｔ％までの崩壊剤の濃度が意図される。本発明の安定性錠剤処方物中の崩壊剤対テトラヒドロビオプテリンの重量比は、例えば約１：５〜約１：１０の範囲である。また、約１：５．２５、１：５．５、１：５．７５、１：６．０、１：６．２５、１：６．５、１：６．７５、１：７．０、１：７．２５、１：７．５、１：７．７５、１：８．０、１：８．２５、１：８．５、１：８．７５、１：９．０、１：９．２５、１：９．５および１：９．７５の重量比が意図される。

抗酸化剤が含まれ得、特に溶解後のテトラヒドロビオプテリン生成物を安定化させるのを助け得る。ＡＰＩの低ｐＨ水溶液は、高ｐＨ溶液より安定である。例示的な酸性抗酸化剤としては、アスコルビン酸、アスコルビン酸パルミテートおよびアスコルビン酸ステアレートのようなアスコルビン酸の脂肪酸エステルおよびアスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カルシウムまたはアスコルビン酸カリウムのようなアスコルビン酸の塩が挙げられる。非酸性抗酸化剤もまた、安定性錠剤処方物に使用され得る。非酸性抗酸化剤の非限定的な例として、β−カロテン、α−トコフェロールが挙げられる。酸性添加物は、錠剤処方物の安定性を増強するために加えられ得、これらとしてはクエン酸またはリンゴ酸が挙げられる。

本発明の安定性錠剤処方物中の抗酸化剤の例示的濃度は、約１ｗｔ％と約３ｗｔ％との間である。特に意図した濃度は、少なくとも約１．１ｗｔ％、１．２ｗｔ％、１．３ｗｔ％、１．４ｗｔ％、１．５ｗｔ％、１．６ｗｔ％、１．７ｗｔ％、１．８ｗｔ％、１．９ｗｔ％および２．０ｗｔ％であるかまたは約２．１ｗｔ％、２．２ｗｔ％、２．３ｗｔ％、２．４ｗｔ％、２．５ｗｔ％、２．６ｗｔ％、２．７ｗｔ％、２．８ｗｔ％、２．９ｗｔ％および３．０ｗｔ％までの濃度である。本発明の安定性錠剤処方物中の抗酸化剤対テトラヒドロビオプテリンの重量比は、例えば約１：５〜１：３０の範囲である。また約１：５．５、１：６、１：６．５、１：７、１：７．５、１：８、１：８．５、１：９、１：９．５、１：１０、１：１０．５、１：１１、１：１１．５、１：１２、１：１２．５、１：１３、１：１３．５、１：１４、１：１４．５、１：１５、１：１５．５、１：１６、１：１６．５、１：１７、１：１７．５、１：１８、１：１８．５、１：１９、１：１９．５、１：２０、１：２０．５、１：２１、１：２１．５、１：２２、１：２２．５、１：２３、１：２３．５、１：２４、１：２４．５、１：２５、１：２５．５、１：２６、１：２６．５、１：２７、１：２７．５、１：２８、１：２８．５、１：２９および１：２９．５の重量比が意図される。

Ｓｃｈｉｒｋ’ｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙの錠剤において、アスコルビン酸は、ＢＨ４に対して１：１の比で存在する。対照的に、本発明の安定性処方物中のアスコルビン酸の濃度ははるかに低く、例えばアスコルビン酸対ＢＨ４が１：２０の重量比（ｍｇ／ｍｇ）である。従って本発明はまた、１：１未満（例えば、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８または１：１９であり、好ましくは１：１０未満の比）のＢＨ４に対する比でアスコルビン酸を含有する処方物を意図する。

滑沢剤は固体処方物の安定性、硬度および均一性を改善する。例示的な滑沢剤としては、フマル酸ステアリルおよびステアリン酸マグネシウムが挙げられる。

本発明の安定性錠剤処方物中の滑沢剤の例示的な濃度は、約０．１ｗｔ％と約２ｗｔ％との間である。特に意図した濃度は、約０．５ｗｔ％と１ｗｔ％との間である。また、少なくとも約０．１ｗｔ％、０．２ｗｔ％、０．３ｗｔ％、０．４ｗｔ％、０．５ｗｔ％、０．６ｗｔ％、０．７ｗｔ％、０．８ｗｔ％、０．９ｗｔ％および１．０ｗｔ％の滑沢剤の濃度、あるいは約１．１ｗｔ％、１．２ｗｔ％、１．３ｗｔ％、１．４ｗｔ％、１．５ｗｔ％、１．６ｗｔ％、１．７ｗｔ％、１．８ｗｔ％、１．９ｗｔ％および２．０ｗｔ％までの滑沢剤の濃度が意図される。本発明の安定性錠剤処方物中の滑沢剤対テトラヒドロビオプテリンの重量比は、例えば、約１：２５〜１：６５の範囲である。また、約１：２６、１：２７、１：２８、１：２９、１：３０、１：３１、１：３２、１：３３、１：３４、１：３５、１：３６、１：３７、１：３８、１：３９、１：４０、１：４１、１：４２、１：４３、１：４４、１：４５、１：４６、１：４７、１：４８、１：４９、１：５０、１：５１、１：５２、１：５３、１：５４、１：５５、１：５６、１：５７、１：５８、１：５９、１：６０、１：６１、１：６２、１：６３、１：６４および１：６５の重量比が意図される。

安定な固体処方物は、必要に応じて処置される状態に適した他の治療薬、例えば、葉酸前駆体、葉酸または葉酸誘導体を含むフォレート；および／またはアルギニン；および／またはビタミンＣおよび／またはビタミンＢ２（リボフラビン）および／またはビタミンＢ１２のようなビタミン；および／またはＬ−ドパまたはカルビドパのような神経伝達物質前駆体；および／または５−ヒドロキシトリプトファンを含有し得る。

葉酸前駆体、葉酸または葉酸誘導体を含む例示的なフォレートは、米国特許第６，０１１，０４０号および同第６，５４４，９９４号に開示され、これら両方は参考として本明細書中に援用され、葉酸（プテリルモノグルタメート）、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸、５−メチルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニルテトラヒドロ葉酸、５，１０−ホルムイミノテトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸、１０−メチルテトラヒドロ葉酸、１つ以上のホリルポリグルタメート、ジヒドロフォレートまたはテトラヒドロフォレートを与えるために葉酸のプテリン部分のピラジン環またはホリルポリグルタメートのピラジン環が還元された化合物、あるいは種々の酸化レベルでＮ−５またはＮ−１０部分が１つの炭素単位を保有する前述のすべての化合物の誘導体、あるいはそれらの薬学的に適合性の塩、あるいはそれらの２つ以上の組み合わせが挙げられる。例示的なテトラヒドロフォレートとしては、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−ホルムイミノ−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸または（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸およびそれらの薬学的に受容可能な塩が挙げられる。例示的な塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩またはアンモニウム塩が挙げられる。

例示的なＢＨ４対フォレート対アルギニンの相対重量比は、約１：１０：１０〜約１０：１：１であり得る。

必要に応じて本発明の安定性処方物はまた、マンニトール、ヒドロキシルプロピルセルロース、微結晶性セルロースまたはスクロース、トレハロース、メレジトース（ｍｅｌｅｚｉｔｏｓｅ）、プランテオース（ｐｌａｎｔｅｏｓｅ）およびラフィノースのような他の非還元糖も含み得る。還元糖は、ＢＨ４と反応し得る。

経口投与の固体処方物を製造するための薬学的に受容可能な成分は、例えば、成分を混合し、必要に応じてそれらを微細に分割し、次いでカプセル（例えば硬ゼラチンまたは軟ゼラチンからなるカプセル）を充填するか、錠剤、丸剤またはトローチを圧縮することにより組み込まれ得る。コーティングは、丸剤を形成するために圧縮後適用され得る。

薬学的に受容可能な成分は、種々のタイプの処方において周知であり、例えば天然ポリマーまたは合成ポリマーのような結合剤、賦形剤、滑沢剤、界面活性剤、甘味剤および香料、コーティング剤、保存料、色素、増粘剤、アジュバント、抗菌剤、抗酸化剤および種々の処方タイプのためのキャリアであり得る。本明細書に記載される組成物に有用な結合剤の非限定的な例としては、例えば、トラガカントゴム（ｇｕｍ ｔｒａｇａｃａｎｔｈ）、アカシア、デンプン、ゼラチン、ならびにジカルボン酸、アルキレングリコール、ポリアルキレングリコールおよび／または脂肪性のヒドロキシルカルボン酸のホモポリエステルまたはコポリエステル；ジカルボン酸、アルキレンジアミンおよび／または脂肪性のアミノカルボン酸のホモポリアミドまたはコポリアミド；関連したポリエステルポリアミドコポリマー、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリホスファゼンおよびポリカーボネートのような生物学的に分解可能なポリマーが挙げられる。生物学的に分解可能なポリマーは線状であるか、分枝されるかまたは架橋され得る。具体的な例は、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびポリｄ，ｌ−ラクチド／グリコリドである。ポリマーの他の例はポリオキサアルキレン（ポリオキサエチレン、ポリオキサプロピレンおよびそれらの混合ポリマー、ポリアクリルアミドおよびヒドロキシルアルキル化ポリアクリルアミド、ポリマレイン酸およびそれらのポリエステルまたはポリアミド、ポリアクリル酸およびそれらのポリエステルまたはポリアミド、ポリビニルアルコールおよびそれらのポリエステルまたはポリエーテル、ポリビニルイミダゾール、ポリビニルピロリドンおよびキトサンのような天然ポリマーのような水溶解性ポリマーである。

本明細書中に記載される組成物に有用な賦形剤の非限定的な例としては、リン酸二カルシウムのようなリン酸塩が挙げられる。本明細書中に記載される組成物に有用な滑沢剤の非限定的な例としては、天然油または合成油、脂質、ろう、ステアリン酸マグネシウムのような脂肪酸塩が挙げられる。

本明細書中に記載される組成物に有用な界面活性剤は、陰イオン性、陰イオン性、両性または中性であり得る。本明細書中に記載される組成物に有用な界面活性剤の非限定的な例としては、レシチン、リン脂質、硫酸オクチル、硫酸デシル、硫酸ドデシル、硫酸テトラデシル、硫酸ヘキサデシルおよび硫酸オクタデシル、オレイン酸ナトリウムまたはカプリン酸ナトリウム、１−オクタノイルアミノエタン−２−スルホン酸、１−デカノイルアミノエタン−２−スルホン酸、１−ドデカノイルアミノエタン−２−スルホン酸、１−テトラデカノイルアミノエタン−２−スルホン酸、１−ヘキサデカノイルアミノエタン−２−スルホン酸および１−オクタデカノイルアミノエタン−２−スルホン酸のような１−アシルアミノエタン−２−スルホン酸ならびにタウロコール酸およびタウロデオキシコール酸、胆汁酸および、コール酸、デオキシコール酸およびグリココール酸ナトリウムのようなそれらの塩、カプリン酸ナトリウムまたはラウリン酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、硫酸化ヒマシ油およびジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、コカミドプロピルベタインおよびラウリルベタイン、脂肪アルコール、コレステロール、モノステアリン酸グリセロールまたはジステアリン酸グリセロール、モノオレイン酸グリセロールまたはジオレイン酸グリセロールおよびモノパルミチン酸グリセロールまたはジパルミチン酸グリセロールおよびステアリン酸ポリオキシエチレンが挙げられる。

本明細書中に記載される組成物に有用な甘味剤の非限定的な例としては、スクロース、フルクトース、ラクトースまたはアスパルテームが挙げられる。本明細書中に記載される組成物に有用な香料の非限定的な例としては、ペパーミント、ウインターグリーンオイルまたはチェリーの香料またはオレンジの香料のような果実の香料が挙げられる。本明細書中に記載される組成物に有用なコーティング剤の非限定的な例としては、ゼラチン、ろう、シェラック、糖または他の生物学的に分解可能なポリマーが挙げられる。本明細書中に記載される組成物に有用な保存料の非限定的な例としては、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、ソルビン酸、クロロブタノール、フェノールおよびチメロサールが挙げられる。

本明細書に記載される多形はまた、発泡性錠剤または粉末として処方され得、水性環境において崩壊し飲用溶液を提供する。徐放性処方物はまた、消化管中の体液と接触して活性物質の制御放出を達成するために、本明細書に記載される多形から調製され得、実質的に一定かつ有効な血漿中の活性物質レベルを提供する。結晶形態は本目的のために、生物学的に分解可能なポリマーのポリマーマトリックス、水溶性ポリマーのポリマーマトリックスまたは両方の混合物のポリマーマトリックスおよび必要に応じて適した界面活性剤に埋め込まれ得る。この文脈において埋め込みは、ポリマーのマトリックス中に微粒子を組み込むことを意味し得る。制御放出処方物はまた、公知の分散技術またはエマルジョンコーティング技術を介して分散した微粒子または乳化した微小な液滴（ｍｉｃｒｏ−ｄｒｏｐｌｅｔ）のカプセル化により得られる。

本明細書に記載される組成物に使用されるＢＨ４は、好ましくは、ジヒドロクロライドとして処方されるが、ＢＨ４の他の塩の形態は望ましい生物学的活性を有し、結果としてＢＨ４の他の塩の形態が使用され得ることが意図される。具体的には、無機酸または有機酸のＢＨ４の塩が好ましい。代替のＢＨ４塩の形態の非限定的な例としては、酢酸、クエン酸、シュウ酸、酒石酸、フマル酸およびマンデル酸のＢＨ４の塩が挙げられる。

薬学的に受容可能な塩基性付加塩は、アルカリ金属およびアルカリ土類金属または有機アミンのような金属またはアミンを用いて形成され得る。化合物の薬学的に受容可能な塩はまた、薬学的に受容可能な陽イオンを用いて調製され得る。適した薬学的に受容可能な陽イオンは、当業者において公知であり、それらとしてはアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよび４級アンモニウムの陽イオンが挙げられる。炭酸塩または炭酸水素塩もまた可能である。陽イオンとして使用される金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシウムまたは第二鉄などである。適したアミンの例としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、Ｎ，Ｎ’ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎメチルグルカミンおよびプロカインが挙げられる。

薬学的に受容可能な酸性付加塩としては、無機酸塩または有機酸塩が挙げられる。適した酸性塩としては、塩酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、サリチル酸塩、硝酸塩、リン酸塩が挙げられる。他の適した薬学的に受容可能な塩は当業者において周知であり、例えば、酢酸、クエン酸、シュウ酸、酒石酸またはマンデル酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸またはリン酸；有機カルボン酸、有機スルホン酸、有機スルホ酸（ｓｕｌｆｏ ａｃｉｄ）または有機リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏ ａｃｉｄ）またはＮ置換したスルファミン酸（例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシルマレイン酸、メチルマレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸、シュウ酸、 グルコン酸、グルカル酸、グルクロン酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、サリチル酸、４アミノサリチル酸、２フェノキシ安息香酸、２アセトキシ安息香酸、パモ酸（ｅｍｂｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ニコチン酸またはイソニコチン酸）との塩；および天然においてタンパク質の合成に関与する２０のαアミノ酸のようなアミノ酸（例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸）との塩およびまたフェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン１，２ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン２スルホン酸、ナフタレン１，５ジスルホン酸、２または３ホスホグリセリン酸、グルコース６リン酸、Ｎシクロヘキシルスルファミン酸（シクラメートの形成を伴う）、あるいはアスコルビン酸のような他の酸性有機化合物との塩が挙げられる。

本発明の安定性処方物は、商業的に望まれる場合、例えば乾燥カプセルまたは乾燥ポーチを用いて提供されるＨＤＰＥボトル中；あるいはホイルの上にホイルを重ねた（ｆｏｉｌ−ｏｎ−ｆｏｉｌ）ブリスター包装中、またはシースルーポリマーフィルムを含むブリスター包装中に錠剤または丸剤あるいはカプセルとして提供され得る。

句「薬学的に受容可能または薬理学的に受容可能」は、動物またはヒトに投与した場合、副反応、アレルギー反応または他の有害反応を生じない分子の実体および組成を言及する。本明細書中に使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は任意かつすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張性物質および吸収遅延物質などを含む。薬学的に活性な物質のためにそのような溶媒や薬剤を使用することは、当業者において周知である。任意の従来の媒体または薬剤が治療組成物と配合禁忌である場合を除いて、治療組成物において溶媒や薬剤を使用することが意図される。補充的な活性成分はまた、組成物に組み込まれ得る。

本明細書中に使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は任意のかつすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張性物質および吸収遅延物質などを含む。薬学的に活性な物質のためにそのような溶媒や薬剤を使用することは、当業者において周知である。任意の従来のよい媒体または薬剤が治療組成物と配合禁忌である場合を除いて、治療組成物において溶媒や薬剤を使用することが意図される。補充的な活性成分はまた、組成物に組み込まれ得る。

本発明の薬学的組成物および処置方法は、ヒト医薬品および獣医医薬品の分野において有用であり得ると認識される。従って、処置される被験体は哺乳動物、好ましくはヒトまたは他の動物であり得る。獣医学的目的のために、被験体として、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマおよびヤギを含む家畜、イヌおよびネコのようなコンパニオン動物、外来動物および／または動物園の動物、マウス、ラット、ウサギ、モルモットおよびハムスターを含む実験動物；およびニワトリ、シチメンショウ、アヒルおよびガチョウのような家禽が挙げられる。

（ＩＶ．安定性処方物を使用する処置方法）
本発明の安定性処方物は、例えば減少したフェニルアラニンヒドロキシラーゼ活性、チロシンヒドロキシラーゼ活性またはトリプトファンヒドロキシラーゼ活性により引き起こされ得る上昇したフェニルアラニンレベル、あるいは減少したチロシンレベルまたはトリプトファンレベルと関連する状態の処置に使用され得る。上昇したフェニルアラニンレベルと関連する状態としては具体的に、本明細書に記載されるように軽度および古典的両方のフェニルケトン尿症、高フェニルアラニン血症が挙げられ、例示的な患者集団として、本明細書に記載される患者のサブグループおよび正常より高いフェニルアラニンレベルを示す任意の他の患者が挙げられる。減少したチロシンレベルまたはトリプトファンレベルと関連する状態としては、神経伝達物質の欠損、パーキンソン病のような神経性障害および精神医学的障害、ジストニー、脊髄小脳の変性、痛み、疲労、うつ病、他の情動障害および統合失調症が挙げられる。

安定性処方物はまたＢＨ４欠損（例えば限定されないが、ドパ反応性失調症（ＤＲＤ）、セピアプテリンレダクターゼ（ＳＲ）欠乏症またはジヒドロプテリジンレダクターゼ（ＤＨＰＲ）欠乏症を含むＢＨ４合成のための経路を欠損していることによる）を患っている患者を処置するために使用され得る。

本発明の安定性処方物を用いる処置に適した被験体として、治療なしで上昇した血漿Ｐｈｅ濃度（例えば、１８００mＭ／Ｌより高い、または１６００mＭより高い、１４００m
Ｍより高い、１２００mＭより高い、１０００mＭより高い、８００mＭより高い、または
６００mＭより高い、４２０mＭより高い、３００mＭより高い、２００μＭより高い、または１８０mＭより高い）を有する被験体が挙げられる。一般的に、軽度のＰＫＵは６０
０μＭ／Ｌまでの血漿Ｐｈｅ濃度として、中程度のＰＫＵは６００μＭ／Ｌ〜約１２００μＭ／Ｌの間の血漿Ｐｈｅ濃度として、および古典的または重篤なＰＫＵは１２００μＭ／Ｌより高い血漿Ｐｈｅ濃度として分類される。好ましくは、安定性処方物のみを用いる処置またはタンパク質を制限した食事とともに安定性処方物を用いる処置は、被験体の血漿フェニルアラニン濃度を６００mＭ未満、または５００mＭ未満、または３６０mＭ±１
５mＭ未満、または２００mＭ未満、または１００mＭ未満に減少させる。他の適した被験
体として、減少したフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）活性を有すると診断された被験体が挙げられる。減少したＰＡＨ活性は、ＰＡＨ酵素の変異（例えばＰＡＨの触媒ドメインの変異またはＦ３９Ｌ、Ｌ４８Ｓ、Ｉ６５Ｔ、Ｒ６８Ｓ、Ａ１０４Ｄ、Ｓ１１０Ｃ、Ｄ１２９Ｇ、Ｅ１７８Ｇ、Ｖ１９０Ａ、Ｐ２１１Ｔ、Ｒ２４１Ｃ、Ｒ２６１Ｑ、Ａ３００Ｓ、Ｌ３０８Ｆ、Ａ３１３Ｔ、Ｋ３２０Ｎ、Ａ３７３Ｔ、Ｖ３８８Ｍ Ｅ３９０Ｇ、Ａ３９５Ｐ、Ｐ４０７ＳおよびＹ４１４Ｃからなる群より選択される１つ以上の変異）；あるいは妊娠した女性、妊娠する可能性のある子供を出産する（ｃｈｉｌｄ−ｂｅａｒｉｎｇ）年齢の女性、あるいは０歳と３歳との間、または０〜２歳、０〜１．５歳または０〜１歳の幼児である被験体；または単回用量ＢＨ４負荷試験または４用量負荷試験または７日負荷試験のような複数回用量負荷試験に対して２４時間以内に応答しないと診断された被験体に起因し得る。例示的な患者集団および例示的なＢＨ４負荷試験は、国際公開第２００５／０４９０００号に開示され、その全体が参考として援用される。

米国特許第４，７５２，５７３号；同第４，７５８，５７１号；同第４，７７４，２４４号；同第４，９２０，１２２号；同第５，７５３，６５６号；同第５，９２２，７１３号；同第５，８７４，４３３号；同第５，９４５，４５２号；同第６，２７４，５８１号；同第６，４１０，５３５号；同第６，４４１，０３８号；同第６，５４４，９９４号；および米国特許出願公開２００２０１８７９５８号；同第２００２０１０６６４５号；同第２００２／００７６７８２号；同第２００３００３２６１６号（それぞれが参考として本明細書中に援用される）は、それぞれ非ＰＫＵ処置のためにＢＨ４組成物を投与する方法を記載する。これら特許のそれぞれが、当業者において公知のＢＨ４組成物を投与する方法の一般的な教示を提供する参考として本明細書中に援用され、これらは本明細書に記載される処置に適合され得る。

個々の要求は様々であるが、各成分の有効量の至適範囲の決定は、当該分野の技術内である。代表的なＢＨ４の投薬量は、１日あたり体重１ｋｇにつき約１〜約２０ｍｇを含み、これは通常、約５ｍｇ／日（１ｍｇ／ｋｇ×体重５ｋｇ）〜３０００ｍｇ／日（３０ｍｇ／ｋｇ×体重１００ｋｇ）の量である。継続的な毎日投与が意図されるが、ＨＰＡに関して、Ｐｈｅレベルの症状がある閾値レベルより下に減少された場合、ＢＨ４治療を中止することが望まれ得る。もちろん、Ｐｈｅレベルがまた上昇する場合には、治療が再開され得る。適切な投薬量は、用量反応データと関連してＰｈｅの血中レベルを決定するための確立されたアッセイの使用を通して確かめられ得る。

好ましい実施形態において、本発明の方法は、それを必要とする患者に１日用量約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇのＢＨ４を提供することが意図される。もちろん当業者は、投与により達成される効能に依存して、この用量の増加または減少を調整し得る。１日の用量は、単回用量で投与され得るか、あるいは代替的に都合のよい時間間隔で、複数回用量で投与され得る。例示的な実施形態において、１日用量は１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３２ｍｇ／ｋｇ、３４ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、３８ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、４６ｍｇ／ｋｇ、４８ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上のｍｇ／ｋｇであり得る。

本発明はさらに本発明の安定性処方物が、一酸化窒素合成酵素活性の増強から恩恵を受ける状態を患っている被験体および血管疾患、虚血性疾患、炎症性疾患、またはインスリン抵抗性を患っている患者の処置に使用され得る。この処置は、例えば、一酸化窒素合成酵素活性の欠損を軽減し得るか、または例えば、正常レベルを超えての一酸化窒素合成酵素活性の上昇を提供し得る。一酸化窒素合成酵素活性の欠損を患っている患者はフォレート前駆体、葉酸またはフォレート誘導体を含むフォレートを使用する共処置による恩恵を受けることが示唆される。

一酸化窒素は、血圧および血管緊張の調節において重要な生理学的役割を果たす血管内皮細胞により構成的に生産される。一酸化窒素の生物活性の欠損は、冠状動脈疾患、任意の動脈（冠状動脈、頚動脈、大脳動脈または末梢血管動脈を含む）のアテローム性硬化症、虚血再灌流傷害、高血圧、糖尿病、糖尿病性血管症、心臓血管疾患、末梢血管疾患を含む血管機能傷害、あるいは脳卒中のような虚血および／または炎症から派生する神経変性状態の病因と関連し、そのような病因としては、損傷した内皮、臓器および組織への不十分な酸素の流れ、上昇した全身血管抵抗（高血圧）、血管平滑筋の増殖、血管狭窄の進展（狭窄（ｎａｒｒｏｗｉｎｇ））および炎症が挙げられることが示唆される。従って、任意のこれらの状態の処置は、本発明の方法に従って意図される。

一酸化窒素合成酵素活性の増強はまた、参考として本明細書中に援用される米国特許番号第６，４１０，５３５号に記載されるように上昇したスーパーオキシドレベルの減少、増加したインスリン感受性およびインスリン抵抗性に関連した血管機能障害の減少をもたらすことがまた示唆される。従って、糖尿病（Ｉ型またはＩＩ型）、高インスリン血症またはインスリン抵抗性の処置は、本発明に従って意図される。インスリン抵抗性に関連する血管機能障害を有する疾患として、インスリン抵抗性により引き起こされるかまたはインスリン抵抗性により悪化される疾患、あるいはインスリン抵抗性により治癒が遅れる疾患（インスリン抵抗性に関する限りでは高血圧、高脂血症、動脈硬化、冠状血管狭窄性狭心症、労作性狭心症、脳血管狭窄性病変、脳血管不全、大脳血管攣縮、末梢循環障害、経皮経管冠状動脈形成（ＰＴＣＡ）または冠状動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）に続く冠状動脈狭窄、肥満、インスリン依存性糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、冠状動脈硬化心疾患などのような）が挙げられる。これらの疾患を有する患者に投与される場合、ＢＨ４はＮＯＳの機能を活性化し、ＮＯの産生を増加させ、そして活性酸素種の産生を抑制することによりこれらの疾患を予防し得るか処置し得、血管内皮細胞の障害を改善することが意図される。

本発明に従う組成物の適した用量は、受容者の年齢、健康状態および体重、もしあれば同時処置の種類、処置の頻度および望まれる作用の性質（すなわち、望まれる血漿Ｐｈｅ濃度の減少量）に依存することが理解される。投薬頻度はまた、Ｐｈｅレベルに対する薬力学的作用にも依存する。この作用が単回用量により２４時間持続する場合。しかしながら、最も好ましい投薬は、個々の被験体に合わせられ得、過度の実験なしに当業者により理解され決定可能である。これは代表的に標準的な用量の調整（例えば患者の体重が少ない場合、用量を減少させ）を包含する。

ＢＨ４の投薬頻度は、薬剤の薬物動態学的パラメーターおよび投与経路に依存する。最適な薬学的処方物は、投与経路および望まれる投薬量に依存して当業者により決定される。例えば参考として本明細書中に援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版（１９９０、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ １８０４２）ＰＰ１４３５ １７１２を参照のこと。そのような処方物は、物理的状態、安定性、投与した薬剤のインビボの放出速度およびインビボのクリアランス速度に影響を与え得る。投与経路に依存して、適した用量が体重、体表面積または臓器サイズに従って計算され得る。適した処置用量を決定するために必要な計算のさらなる修正が、過度の実験なしに、特に本明細書中に開示される投薬情報およびアッセイならびに動物またはヒトの臨床試験において観察される薬物動態学的データを鑑みて、当業者により慣習的に行われる。

最終投薬レジメンは、担当医により、薬物の作用を変化させる因子（例えば薬物の比活性、患者の損傷の重症度および応答性、患者の年齢、状態、体重、性別および食事、任意の感染の重症度、投与の回数および他の臨床的要因）を考慮して決定される。研究が行われるにつれ、特定の疾患および状態のための適した投薬量レベルおよび処置の延長に関するさらなる情報が明らかになる。

（Ｖ. 併用療法）
本発明のある方法は、本発明の安定性処方物と１つ以上の他の治療剤とを組み合わせた使用を包含する。

そのような併用療法において、本発明の安定性処方物の投与は、第２の治療剤の投与と同時であり得るか、あるいは第２の治療剤の投与に先行するか後に続き得る（例えば、数分〜数時間におよぶ間隔で、両薬剤がオーバーラップする期間で治療効果を及ぼすことができる限り）。従って本発明は、第２の治療剤と使用するための本発明の安定性処方物を意図する。本発明はまた、本発明の安定なテトラヒドロビオプテリン処方物、前駆体処方物、誘導体処方物またはアナログ処方物を用いる投与のための医薬の調製において第２の治療剤の使用を意図する。

テトラヒドロビオプテリン療法は、種々の形態のＨＰＡを有する患者において治療結果をもたらすために食事性タンパク質の制限と組み合わせられ得る。例えば、望ましい治療結果（すなわち、血漿Ｐｈｅ濃度の減少および／または血漿Ｐｈｅ濃度の付随的な増加を生じることなくより多量のＰｈｅ／タンパク質摂取を許容する能力）を生じるために組み合わせた有効量でＢＨ４組成物および低フェニルアラニン医療用タンパク質組成物を被験体に投与し得る。このプロセスは、ＢＨ４組成物および食事性タンパク質の治療組成物を同時に投与する工程を包含し得る。これは、単一の組成物または薬理学的タンパク質処方物を投与することにより達成され得、これらは食事性タンパク質の所要量をすべて含有し、またこのタンパク質処方物内にＢＨ４を含有する。あるいは、食事性タンパク質（サプリメントまたは標準的なタンパク質の食事）はＢＨ４の薬理学的処方物（錠剤、注射または飲料）とほぼ同時に摂取される。

他の代替法において、ＢＨ４処置は、数分〜数時間におよぶ間隔で食事性タンパク質療法に先行し得るまたは後に続き得る。タンパク質およびＢＨ４組成物が別々に投与される実施形態において、ＢＨ４が患者において有利な効果を依然として示すことができるように、有意な期間がそれぞれの送達の時間の間に終わらなかったことを一般的に保障する。そのような場合には、ＢＨ４を食事性タンパク質摂取の約２〜６時間（前または後）以内、最も好ましくは約１時間のみ時間を遅らせて投与することが意図される。ある実施形態において、ＢＨ４療法は、１日用量のＢＨ４が無期限に患者に投与される継続的な治療であることが意図される。他の状況（例えばより軽度な形態のＰＫＵおよびＨＰＡのみを有する妊娠女性）において、ＢＨ４療法は、女性が妊娠している限りおよび／または母乳を与えているに限ってのみ、継続され得る。

さらにＢＨ４の送達および食事性タンパク質の調節のみをベースにした治療に加え、本発明の方法はまた、１つ以上のＨＰＡの症状を特異的に標的とする第３の組成物との併用療法を意図する。例えば、ＨＰＡにより引き起こされるチロシンの欠乏は、神経伝達物質のドパミンおよびセロトニンの欠乏を生じることが公知である。従って、本発明の背景において、ＢＨ４および食事性タンパク質をベースにした方法は、食事中の減少したチロシンの量により生じる障害を治すために、Ｌ−ドパ、カルビドパおよび５−ヒドロキシトリプトファンの神経伝達物質の投与とさらに組み合わされ得ることが意図される。

さらに、ＰＡＨ（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｔ．Ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌ．７６：３１３−３１８、２００２；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら．、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、７：１９７１−１９７８、２０００）およびフェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ Ｌｉｕら．、Ａｒｔｓ．Ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．Ｓｕｂｓ ａｎｄ
Ｉｍｍｏｂ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．３０（４）２４３−２５７、２００２）の両方を用いる遺伝子治療は、当業者により意図されている。そのような遺伝子治療技術は、本発明の治療をベースに組み合わされたＢＨ４／食事性タンパク質制限と組み合わせて使用され得る。さらなる併用療法において、フェニラーゼは、患者において低Ｐｈｅ濃度を打ち消すために注射可能な酵素として提供され得ることが意図される。フェニラーゼの投与がチロシンを生成しない（ＰＡＨの投与とは異なる）ので、そのような処置は、そのような患者に必須なアミノ酸であるチロシンを依然として生じる。そのためチロシンを用いる食事性の補充は、ＢＨ４療法と組み合わせてフェニラーゼを与えられている患者において望ましくあり得る。

（ＶＩＩ．実施例）
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を証明するために包含される。続く実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能することが本発明者らにより発見された技術を示し、従ってその実施のために好ましい様式を構成するとみなされ得ることは当業者により理解されるはずである。しかしながら、当業者は、本開示を鑑みて、多くの変更が開示される特定の実施形態においてなされ得、かつ本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様な結果または類似の結果を依然として得ることを理解すべきである。

（実施例１）
（ＢＨ４の安定化した結晶化形態の調製）
その全体が参考として本明細書中に援用される国際公開番号第２００５／０６５０１８号は、水和物または溶媒和物を含むＢＨ４の多形を特徴付けるためのＸ線およびラーマンスペクトル研究ならびに多形が調製され得る例示的な結晶化条件を記載する。その全体が参考として本明細書中に援用される国際公開番号第２００５／０４９０００号は、ＢＨ４処置が適している種々の患者集団を記載し、ＢＨ４を用いてそのような患者を処置するための方法を記載する。その全体が参考として本明細書中に援用される国際公開番号第２００５／０４９６１４号は、ＢＨ４を合成する方法を記載する。

本明細書の全体にわたり引用される参考文献は、例示的な手順の詳細または本明細書の記載に補充的な他の詳細を提供するという範囲で、すべて具体的に参考として本明細書中に援用される。

（実施例２）
（テトラヒドロビオプテリンの安定性錠剤処方物）
３つの錠剤処方物を、以下詳細に記載するように表Ｉに示す成分を混合することにより調製した。

表Ｉの各処方物に対して、まず４ｋｇの６Ｒ−Ｌ−エリスロ−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリンジヒドロクロライド（ＳＡＰＲＯＰＴＥＲＩＮ塩酸塩、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓｕｎｔｏｒｙ Ｐｈａｒｍａ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、Ｊａｐａｎから入手可能な）をブレンダーに充填し、ＢＨ４を１０分間、１分あたり２５回転（ＲＰＭ）で混合することにより１２キログラムのバッチを調製した。次いで６．９１ｋｇのＤ−マンニトール（ＰＥＡＲＬＩＴＯＬ、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ａｍｅｒｉｃａ、Ｉｎｃ．、Ｋｅｏｋｕｋ、Ｉｏｗａから入手可能）をブレンダーに加え、この混合物をさらに１０分間、２５ＲＰＭで混合した。次いで２６０グラムの無水二塩基リン酸カルシウム（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ
Ｂａｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙから入手可能な）ならびに（ａ）処方物Ｉにおいては、４３６グラムのヒドロキシプロピルセルロースおよび１０４グラムをブレンダーに加え、（ｂ）処方物ＩＩにおいては、５４０グラムのヒドロキシプロピルセルロースをブレンダーに加え；（ｃ）処方物ＩＩＩにおいては、５４０グラムのポリビニルピロリドン（ＫＯＬＬＩＤＯＮ ＣＬ、ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｆｌｏｒｈａｍ Ｐａｒｋ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙから入手可能）をブレンダーに加え、この混合物をさらに１０分間、２５ＲＰＭで混合した。２００グラムのアスコルビン酸および１２０グラムのリボフラビンをブレンダーに加え、この混合物を３分間、２５ＲＰＭで混合した。フマル酸ステアリルナトリウム滑沢剤（ＰＲＵＶ、Ｐｅｎｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏ．、Ｄａｎｂｕｒｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔから入手可能）を２５メッシュのステンレス鋼ふるいに通してバッグ中に濾取し、次いでブレンダーを、ふるいをかけた９ｋｇのフマル酸ステアリルナトリウムを用いて充填し、生じた混合物を５分間、２５ＲＰＭで混和した。

次いで混和した各処方物の混合物をブレンダーから取り出し、１５０ｍｇ錠剤、３００ｍｇ錠剤および６００ｍｇ錠剤の調製のために、各処方物について３つのサンプルを集めた。各処方物について、この錠剤サンプル（１５０ｍｇ、３００ｍｇおよび６００ｍｇ）を錠剤プレス（Ｊｅｎｎ−Ｃｈｉａｎｇ Ｍａｈｉｎｅｒｙ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、Ｔａｉｗａｎ、Ｒ．Ｏ．Ｃ．から入手可能な）に置き、ここでこの錠剤プレスのパラメーターを、４．５〜５．５ミリメートルの範囲の厚さおよび７ＫＰの標的硬度を有する錠剤を提供するために設定した。

次いで生じた錠剤を処方物の安定性を決定するために分析した。処方物の安定性を、異なる間隔で目視検査により時間にわたる外観の変化、米国薬局方推奨ｎｏ．７０１を利用する処方物の崩壊、そして処方物の成分をアッセイすることにより化学的変化を研究した。安定性試験の結果を以下の表ＩＩにまとめる。

安定性試験は、錠剤処方物ＩＩＩが、ＢＨ４の他の処方物より安定であることを示す。各薬学的な調製物は、ＢＨ４の送達に有用な処方物である。処方物ＩＩＩは、処方物Ｉおよび処方物ＩＩより良好な安定性を示した。従って、好ましい実施形態の１つにおいて、安定化した錠剤処方物は最適な崩壊剤（例えば、クロスポビドンまたはヒドロキシプロピルセルロースよりもポリビニルピロリドンに類似の崩壊剤）を含有する。好ましい処方物は、処方物ＩＩＩである。他の適した錠剤処方物は、少なくとも０．０１重量％または少なくとも０．０５重量％または少なくとも０．１重量％の濃度で少なくともアスコルビン酸を含有する。

（実施例３）
１００ｍｇテトラヒドロビオプテリンを含む３００ｍｇ錠剤は、望ましい初期量のｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂを使用し、以下の乾燥製錠プロセスを使用して以下の表ＩＩＩに示される相対量の他の成分と混合して調製した。他の望ましい量のテトラヒドロビオプテリンを含有する錠剤は、同様な方法で調製され得る。

６Ｒ−Ｌ−エリスロ−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリンおよびＤ−マンニトールを２０メッシュふるい（約８５０μＭより大きいサイズの粒子を濾別するように設計した）を用いて手でふるいにかけ、ブレンダーに置いた。この混合物を１０分間、２１ＲＰＭで混和した。次に、無水二塩基リン酸カルシウムおよびクロスポビドンを、２０メッシュふるいを用いて手でふるいにかけ、そしてＢＨ４およびＤ−マンニトールとともに１０分間、２１ＲＰＭで混和した。アスコルビン酸およびリボフラビンを、２０メッシュふるいを用いて手でふるいにかけた後ブレンダーに加え、生じた混合物を１０分間、２１ＲＰＭで混和した。次に、フマル酸ステアリルナトリウムを、４０メッシュふるいを用いて手でふるいにかけた後ブレンダーに加え、５分間、２１ＲＰＭで混和した。次いでこの混和した混合物をバッグ内に注ぎ、錠剤に圧縮する前に均一性について試験した。

錠剤を、ホイルブリスターパックか１ボトルあたり４５錠の量でＨＤＰＥボトルのどちらかに充填した。各タイプの充填した錠剤を、２つのバッチに分けた。１つのバッチを室温、２５±２℃および６０±５％相対湿度で貯蔵した。もう一方のバッチを加速試験条件下（４０±２℃および７５±５％相対湿度）で貯蔵した。規則的な間隔で、錠剤を貯蔵庫から取り出し、活性な薬学的成分（６Ｒ−Ｌ−エリスロ−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリン）の保持を試験した。３００ｍｇ錠剤に関して例示的な結果を、以下の表ＩＶ、表Ｖ、表ＶＩおよび表ＶＩＩに示す。室温または加速試験条件下で６ヶ月後貯蔵後、４つの各バッチは、ＨＰＬＣアッセイにより少なくとも元の量の９９％の６Ｒ−Ｌ−エリスロ−５，６，７，８−テトラヒドロビオプテリンの保持（１％未満の乾燥における損失）および３分以下の迅速な崩壊を示した。

本発明の好ましい実施形態によれば、例えば、以下が提供される。
（項１）
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ Ｂと称される（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形の初期量および薬学的に受容可能な賦形剤を含有する安定性錠剤処方物であって、この安定性錠剤処方物が、室温および約６０％の湿度で６ヶ月後、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの該初期量の少なくとも約９５％
を保持し、
ここで該結晶多形が塩酸塩として、ｄ値（Ａ）で表される以下の特性ピーク：８．７（ｖｓ）、５．６３（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．００（ｓ）、３．２３（ｓ）、３．１１（ｖｓ）、好ましくは８．７（ｖｓ）、６．９（ｗ）、５．９０（ｖｗ）、５．６３（ｍ）、５．０７（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．１５（ｗ）、４．００（ｓ）、３．９５（ｍ）、３．５２（ｍ）、３．４４（ｗ）、３．３２（ｍ）、３．２３（ｓ）、３．１７（ｗ）、３．１１（ｖｓ）、３．０６（ｗ）、２．９９（ｗ）、２．９６（ｗ）、２．９４（ｍ）、２．８７（ｗ）、２．８４（ｓ）、２．８２（ｍ）、２．６９（ｗ）、２．５９（ｗ）および２．４４（ｗ）、を有するＸ線粉末回折パターンを示す、安定性錠剤処方物。
（項２）
前記安定性錠剤処方物が、室温および約６０％の湿度で９ヶ月後、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量の少なくとも約９５％を保持する、上記項１に記載の安定性錠剤処方物。
（項３）
前記安定性錠剤処方物が、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量の少なくとも約９８％を保持する、上記項１または２に記載の安定性錠剤処方物。
（項４）
（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量が、前記処方物の約３０重量％〜約４０重量％の範囲である、上記項１に記載の安定性錠剤処方物。
（項５）
（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量が、前記処方物の約３２重量％〜約３５重量％の範囲である、上記項１に記載の安定性錠剤処方物。
（項６）
（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量が、前記処方物の約３３重量％の範囲である、上記項１に記載の安定性錠剤処方物。
（項７）
各錠剤中の（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量が、約１００ｍｇである、上記項１〜５のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項８）
各錠剤中の（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの前記初期量が、約２００ｍｇである、上記項１〜５のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項９）
さらに結合剤を含有する、上記項１〜８のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項１０）
前記結合剤が、無水二塩基リン酸カルシウムである、上記項９に記載の安定性錠剤処方物。
（項１１）
前記結合剤が、約１重量％〜約５重量％の範囲である、上記項９〜１０のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項１２）
前記結合剤が、約１．５重量％〜約３重量％の範囲である、上記項９〜１０のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項１３）
テトラヒドロビオプテリンに対する結合剤の重量比が、約１：１０〜約１：２０の範囲である、上記項９〜１２のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項１４）
テトラヒドロビオプテリンに対する結合剤の重量比が、約１：１５である、上記項１３に記載の安定性錠剤処方物。
（項１５）
さらに崩壊剤を含有する、上記項１〜１４のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項１６）
前記崩壊剤が、クロスポビドンである、上記項１５に記載の安定性錠剤処方物。
（項１７）
前記崩壊剤が、約３重量％〜約１０重量％の範囲である、上記項１５〜１６のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項１８）
前記崩壊剤が、約３重量％〜約５重量％の範囲である、上記項１７に記載の安定性錠剤処方物。
（項１９）
テトラヒドロビオプテリンに対する崩壊剤の重量比が、約１：５〜約１：１０の範囲である、上記項１〜１８のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項２０）
テトラヒドロビオプテリンに対する崩壊剤の重量比が、約１：７．５である、上記項１９に記載の安定性錠剤処方物。
（項２１）
さらに酸性抗酸化剤を含有する、上記項１〜２０のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項２２）
前記酸性抗酸化剤が、アスコルビン酸である、上記項２１に記載の安定性錠剤処方物。
（項２３）
前記酸性抗酸化剤が、約１重量％〜約３重量％の範囲である、上記項２１〜２２のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項２４）
テトラヒドロビオプテリンに対する酸性抗酸化剤の重量比が、約１：５〜約１：３０の範囲である、上記項１〜２３のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項２５）
テトラヒドロビオプテリンに対する酸性抗酸化剤の重量比が、約１：２０である、上記項２４に記載の安定性錠剤処方物。
（項２６）
さらに滑沢剤を含有する、上記項１〜２５のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項２７）
前記滑沢剤が、フマル酸ステアリルである、上記項２６に記載の安定性錠剤処方物。
（項２８）
前記滑沢剤が、約０．１重量％〜約２重量％の範囲である、上記項２５〜２６のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項２９）
前記滑沢剤が、約０．５重量％〜約１重量％の範囲である、上記項２８に記載の安定性錠剤処方物。
（項３０）
テトラヒドロビオプテリンに対する滑沢剤の重量比が、約１：２５〜約１：６５の範囲である、上記項１〜２９のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項３１）
テトラヒドロビオプテリンに対する滑沢剤の重量比が、約１：４５である、上記項３０に記載の安定性錠剤処方物。
（項３２）
さらにビタミンＢ２（リボフラビン）を含有する、上記項１〜３１のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項３３）
さらにビタミンＢ１２を含有する、上記項１〜３２のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項３４）
さらにフォレートを含有する、上記項１〜３３のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項３５）
さらにアルギニンを含有する、上記項１〜３４のいずれかに記載の安定性錠剤処方物。
（項３６）
前記フォレートが、葉酸（プテロイルモノグルタメート）、ジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸、５−メチルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニルテトラヒドロ葉酸、５，１０−ホルムイミノテトラヒドロ葉酸、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸、１０−メチルテトラヒドロ葉酸、ホリルポリグルタメート、ジヒドロフォレート、テトラヒドロフォレート、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−ホルムイミノ−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸または（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩である、上記項３４に記載の安定性錠剤処方物。
（項３７）
（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの安定性錠剤処方物であって、該処方物の約３２重量％〜約３５重量％の範囲で（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形の初期量、約３重量％〜約５重量％の範囲でクロスポビドン、約１．５重量％〜約３重量％の範囲で無水二塩基リン酸カルシウムおよび約０．５重量％〜約１重量％の範囲でフマル酸ステアリルを含有し、
ここで該安定性錠剤処方物は、室温で少なくとも６ヶ月の貯蔵寿命を有し、そして
ここで該結晶多形は、塩酸塩として、ｄ値（Ａ）で表される以下の特性ピーク：８．７（ｖｓ）、５．６３（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．００（ｓ）、３．２３（ｓ）、３．１１（ｖｓ）、好ましくは８．７（ｖｓ）、６．９（ｗ）、５．９０（ｖｗ）、５．６３（ｍ）、５．０７（ｍ）、４．７６（ｍ）、４．４０（ｍ）、４．１５（ｗ）、４．００（ｓ）、３．９５（ｍ）、３．５２（ｍ）、３．４４（ｗ）、３．３２（ｍ）、３．２３（ｓ）、３．１７（ｗ）、３．１１（ｖｓ）、３．０６（ｗ）、２．９９（ｗ）、２．９６（ｗ）、２．９４（ｍ）、２．８７（ｗ）、２．８４（ｓ）、２．８２（ｍ）、２．６９（ｗ）、２．５９（ｗ）および２．４４（ｗ）、を有するＸ線粉末回折パターンを示す、（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの安定性錠剤処方物。
（項３８）
室温で少なくとも９ヶ月の貯蔵寿命を有する、上記項３７に記載の安定性錠剤処方物。
（項３９）
前記（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形の初期量が約３３重量％であり、クロスポビドンが約４．５重量％であり、無水二塩基リン酸カルシウムが約２重量％であり、そしてフマル酸ステアリルが約０．７５重量％である、上記項３７または上記項３８に記載の安定性錠剤処方物。
（項４０）
前記（６Ｒ）−Ｌ−エリスロ−テトラヒドロビオプテリンの結晶多形の初期量および１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤を混合する工程、ならびにこの混合物から錠剤を形成する工程を含み、ここで該工程が液体の水を加える工程を包含しない、上記項１〜３９のいずれかに記載の安定性錠剤処方物を製造する方法。
（項４１）
前記１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤が、１つの結合剤を含む、上記項４０に記載の方法。
（項４２）
前記結合剤が、無水二塩基リン酸カルシウムである、上記項４１に記載の方法。
（項４３）
前記１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤が、１つの崩壊剤を含む、上記項１〜４２のいずれかに記載の方法。
（項４４）
前記崩壊剤が、クロスポビドンである、上記項４３に記載の方法。
（項４５）
前記１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤が、１つの酸性抗酸化剤を含む、上記項１〜４４のいずれかに記載の方法。
（項４６）
前記酸性抗酸化剤が、アスコルビン酸である、上記項４５に記載の方法。
（項４７）
前記１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤が、１つの滑沢剤を含む、上記項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項４８）
前記滑沢剤が、ステアリン酸ホルミルである、上記項４７に記載の方法。

Claims (1)

1. 本願明細書または図面に記載の発明。
   

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