JP2013531474A - 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法 - Google Patents

溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2013531474A
JP2013531474A JP2013508251A JP2013508251A JP2013531474A JP 2013531474 A JP2013531474 A JP 2013531474A JP 2013508251 A JP2013508251 A JP 2013508251A JP 2013508251 A JP2013508251 A JP 2013508251A JP 2013531474 A JP2013531474 A JP 2013531474A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
conjugate
cancer
her2
neu
tumor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2013508251A
Other languages
English (en)
Inventor
ヘクター アリラ，
キャローラ ルーシナー，
マーサ ジュバン，
アン コールター，
Original Assignee
エスペランス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by エスペランス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド filed Critical エスペランス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
Publication of JP2013531474A publication Critical patent/JP2013531474A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Abstract

Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドを含む結合体が開示される。そのリガンドは、成長因子、ホルモン、抗体および抗体フラグメントを含むポリペプチドを含む。本開示はまた、過剰増殖性障害（例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現する腫瘍、がん、新形成および悪性疾患）を含む、望ましくないかまたは異常な細胞増殖に関連する障害を処置するために、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する結合体を使用する方法も提供する。本発明は、本明細書中で結合体または融合構築物と呼ばれる、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２としても知られるヒト上皮成長因子レセプター２）に結合するリガンドに融合されたかまたは結合体化された溶解性ドメインに少なくとも部分的に基づく。細胞と溶解性ドメインとの接触は、細胞死をもたらす細胞膜の破壊を引き起こすと考えられる。

Description

関連出願
この出願は、２０１０年４月３０日に出願された出願番号６１／３３０，００５、および２０１０年７月８日に出願された出願番号６１／３６２，６０３への優先権を主張し、上記出願番号６１／３３０，００５および出願番号６１／３６２，６０３は、各々、その全容が参考として本明細書に援用される。
技術分野
本発明は、溶解性ペプチドとＨｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２としても知られるヒト上皮成長因子レセプター２）リガンドとの結合体、結合体を使用する方法、例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性障害（例えば、非転移性および転移性の新形成（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、がん、腫瘍および悪性疾患）を処置する方法において、結合体を使用する方法に関する。
緒言
がん患者の５年生存率（肺がん、結腸直腸がん、乳がんおよび前立腺がんを有する患者については、遠隔転移性疾患と診断された場合、わずか１０〜４０％しか生存しない）を考えると、原発腫瘍および転移を処置するための新しい治療薬を開発する必要性は、明らかに明白である。
要旨
本発明は、本明細書中で結合体または融合構築物と呼ばれる、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２としても知られるヒト上皮成長因子レセプター２）に結合するリガンドに融合されたまたは結合体化された溶解性ドメインに少なくとも部分的に基づく。細胞と溶解性ドメインとの接触は、細胞死をもたらす細胞膜の破壊を引き起こすと考えられる。Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび／または溶解性ドメインによる破壊のために、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞（望ましくないまたは異常な増殖細胞または過剰増殖細胞（例えば、非転移性および転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性疾患）を含む）を標的にする。いくつかの非転移性および転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性の細胞は、レセプターまたはリガンドを過剰発現している。例えば、多くの非転移性および転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性疾患が、上記結合体または融合構築物の標的として使用され得るＨｅｒ２／ｎｅｕを発現している。
結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している任意の細胞または細胞集団を標的にするように設計され得る。抗体およびそのフラグメント、ホルモン、成長因子、サイトカインなどを含む、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現しているかまたはそれを含む細胞の標的化された殺滅を提供する溶解性ドメインに連結され得、それによって、細胞の増殖または成長を減少させるかまたは阻害する。
結合体は、標的細胞を殺滅するために、細胞が***することを必要としない。さらに、その結合体は、比較的小さいサイズに作製され得るので、免疫原性である可能性は低い。さらに、その結合体は、多剤耐性細胞を殺滅する。
本発明によると、第１ドメインおよび第２のドメインを含む結合体が提供される。１つの実施形態において、結合体は、成るＨｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド、および１０〜１２０アミノ酸フラグメントからなる第２のドメイン（例えば、
から選択されるペプチド配列、あるいはＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、
から選択されるペプチドを含む配列を含む、例えば、Ｌ−またはＤ−アミノ酸配列）を含むかまたはそれらからなる。別の実施形態において、結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド、ならびに
から選択されるＬ−またはＤ−アミノ酸配列、あるいはＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、
から選択されるペプチドを含む配列からなる第２のドメインを含むかまたはそれらからなる。さらなる実施形態（ｅｍｏｄｉｍｅｎｔ）において、結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド、ならびに
から選択されるＬ−またはＤ−アミノ酸配列、あるいはＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、
から選択されるペプチドを含む配列からなる第２のドメインを含む。
本発明によると、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび第２のドメインを含むかまたはそれらからなる、単離され、精製されたペプチドも提供される。様々な実施形態において、第２のドメインは、
である。追加の実施形態において、第２のドメインは、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、
である。
結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドを含む。リガンドは、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２としても知られるヒト上皮成長因子レセプター２）に結合する分子を含むかまたはそれからなる。リガンドまたは溶解性ペプチドは、線状構造もしくは環状構造を含み得るか、またはそれからなり得る。リガンドは、抗体および抗体フラグメントを含む。
リガンドの特定の非限定的な例としては、１つ以上のアミノ酸（例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質）、核酸および炭水化物が挙げられる。リガンドの特定の非限定的なクラスとしては、ホルモン、成長因子、ホルモンおよび成長因子のアナログ、ならびにホルモン、ホルモンアナログ、成長因子、成長因子アナログのフラグメント、成長因子およびアナログのフラグメント、ならびにＨｅｒ２／ｎｅｕに結合する抗体および抗体のフラグメントが挙げられる。抗体フラグメントの特定の非限定的な例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、ラクダＩｇ、Ｖ−ＮＡＲ、ＶＨＨ、三重特異性（Ｆａｂ３）、二重特異性（Ｆａｂ２）、ダイアボディ（（ＶＬ−ＶＨ）２または（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）（三価）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）（四価）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、二重特異性一本鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）、ＩｇＧデルタＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）（例えば、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：２、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：４、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：７、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：８）、アフィボディ、アプタマー、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）またはナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）が挙げられる。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕおよび／またはリガンドは、必要に応じて細胞上に発現され得る。Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞または本発明の方法に従って標的化され得る細胞には、過剰増殖性細胞が含まれる。Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞または本発明の方法に従って標的化され得る細胞としては、例えば、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）、肺、胃部（ｇａｓｔｒｉｃ）、結腸、膀胱、グリア、血液および子宮内膜の細胞が挙げられる。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび第２のドメインは、アミノ酸またはアミノ酸配列を含み得るか、またはそれからなり得る。特定の態様において、第１ドメインまたは第２のドメインは、約１〜１０、１０〜２０、１５〜２０（すなわち、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸）、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００またはそれ以上のアミノ酸残基を有する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドおよび第２のドメインは、互いに対してＮＨ２末端またはＣ末端のいずれか（またはその両方）に位置し得る。したがって、１つの実施形態では、第１（結合リガンド）ドメインは、第２（溶解性ペプチド）ドメインに対してＮＨ末端に位置し、別の実施形態では、第２（溶解性ペプチド）ドメインは、第１（結合リガンド）ドメインに対してＣ末端に位置し、さらなる実施形態では、第１（結合リガンド）ドメインは、第２（溶解性ペプチド）ドメインに対してＣ末端に位置し、なおも別の実施形態では、第２（溶解性ペプチド）ドメインは、第１（結合リガンド）ドメインに対してＮＨ末端に位置する。そのような第２（溶解性ペプチド）ドメインは、Ｃ末端、ＮＨ末端またはＣ末端とＮＨ末端の両方に位置し得る。したがって、そのような複数の第２（溶解性ペプチド）ドメインが、本発明の結合体内に含められ得る。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドおよび第２のドメインは、１つ以上のＤ−アミノ酸を含み得るか、またはそれらからなり得る。特定の態様において、第１ドメインは、例えば、任意のＫ、ＦまたはＡ残基において、Ｄ−アミノ酸を有する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドおよび第２のドメインは、共有結合性の（例えば、ペプチドまたは非ペプチド）結合によって接続され得る。例えば、第１ドメインと第２のドメインとは、ペプチドリンカーまたは非ペプチドリンカーによって接続され得る。特定の態様において、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドと第２のドメインとは、約１〜２５アミノ酸残基を有するかまたは線状炭素鎖を有するペプチド配列によって接続される。より特定の態様において、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドと第２のドメインとは、１つ以上のＡ、ＳもしくはＧアミノ酸残基を含むかまたはそれらからなるペプチド配列によって接続される。さらに特定の態様において、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドと第２のドメインとは、ペプチド配列によって接続され、第１ドメインと第２のドメインとは、ＧＳＧＧＳ、ＡＳＡＡＳまたはＣＣＣＣＣＣなどの線状炭素鎖を含むかまたはそれらからなるペプチド配列によって接続される。他のペプチドリンカーとしては、様々な長さにおけるＧＳ、ＡＦ、ＦＫ、ＶＫ、ＦＦＫ、ＦＡ、ＧＳＧＲＳＡ、ＲＶＲＲＳＶ、ＳＳ、Ｃｉｔ−Ｖ、Ｆ−Ｃｉｔが挙げられるがこれらに限定されない。チオエーテル、Ｎ−スクシニジル−３−（２−ピリジロチオ）プロピオネート、チオエーテル結合（例えば、ＳＩＡＢ［Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート］、ＳＭＣＣ［スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート］、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）およびＳＭＰＢ［スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート］）、マレイミドおよびヒドラゾンリンカー。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合リガンドおよび第２のドメインは、追加のドメインをさらに含み得るか、またはそれらからなり得る。したがって、様々な態様において、結合体は、第３、第４、第５、第６、第７ドメインなどを含む。
結合体は、単離され精製された形態を含むか、またはそれらからなる。結合体はまた、混合物を含むか、またはそれからなる。そのような混合物は、組成物（例えば、被験体への投与もしくは被験体とのインビボでの接触にとって適切な薬学的に許容され得るキャリアもしくは賦形剤と結合体との混合物、または結合体と抗細胞増殖剤もしくは免疫刺激剤との混合物）を含む。
結合体は、単位剤形を含むか、またはそれからなる。１つの実施形態において、結合体は、望ましくない細胞増殖または過剰増殖性障害を有する被験体を処置するのに有効な量の単位用量剤（ｕｎｉｔ ｄｏｓａｇｅ）である。別の実施形態において、結合体は、新形成、腫瘍またはがんを有する被験体を処置するのに有効な量の単位用量剤である。追加の実施形態において、結合体は、被験体の繁殖可能性を低下させるのに有効な量の単位用量剤である。
結合体は、キット内に、必要に応じて、方法を実施するための指示書と共に、含められ得る。１つの実施形態において、キットは、結合体、および細胞の増殖を減少させるためもしくは阻害するため、過剰増殖細胞の増殖を減少させるためもしくは阻害するため、新形成、腫瘍もしくはがん細胞の増殖を減少させるためもしくは阻害するため、過剰増殖性障害を有する被験体を処置するため、新形成、腫瘍もしくはがんを有する被験体を処置するため、または動物の繁殖可能性を低下させるための指示書を備える。
本発明によると、結合体をコードする核酸も提供される。１つの実施形態において、核酸は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび第２のドメイン、ならびに例えば、
から選択されるペプチド配列、あるいはＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、
から選択されるペプチドを含む配列を含むかまたはそれらからなる結合体をコードする。別の実施形態において、核酸は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび第２のドメイン、ならびに
から選択されるＬ−またはＤ−アミノ酸配列からなるペプチドを含むかまたはそれらからなる結合体をコードする。
核酸は、ベクター（例えば、細胞内で発現されるとき結合体をコードする発現ベクター）内に含められ得る。宿主細胞は、ベクターとしての核酸で形質転換され得、その結果、その細胞は、その核酸によってコードされる結合体を発現する。
結合体は、とりわけ、細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するため、細胞増殖を減少させるかまたは阻害するため、過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するため、新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するため、および望ましくないまたは異常な細胞増殖（例えば、過剰増殖細胞または過剰増殖性障害）を処置するために有用である。過剰増殖性障害の非限定的な例としては、良性の過形成、非転移性および転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性疾患が挙げられる。
本発明によると、細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法；細胞増殖を減少させるかまたは阻害する方法；過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法；および新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法がさらに提供される。様々な実施形態において、方法は、細胞と結合体とを、その細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程；細胞と結合体とを、細胞増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程；細胞と結合体とを、過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程；および細胞と結合体とを、新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含する。
本発明によると、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法；Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している過剰増殖細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法；およびＨｅｒ２／ｎｅｕを発現している新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法がさらに提供される。様々な実施形態において、方法は、細胞と結合体とを、その細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程；細胞と結合体とを、過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程；および細胞と結合体とを、新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含し、ここで、その結合体のリガンドは、その細胞によって発現されるＨｅｒ２／ｎｅｕに結合する。
本発明の方法に従って標的化される細胞には、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞が含まれる。ゆえに、本発明の方法に従って標的化される細胞としては、例えば、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃、肺、胃部、結腸、膀胱、グリア、血液および子宮内膜の細胞が挙げられる。
実施される方法は、とりわけ、細胞（例えば、過剰増殖細胞または望まれずに増殖している細胞）の増殖、生存、分化、死または活性の阻害、減少または予防を必要とする被験体と接触させる工程を包含する。例示的な被験体としては、望ましくないもしくは異常な細胞増殖を有するかもしくは有するリスクのある被験体；良性の過形成；または非転移性もしくは転移性の新形成、がん、腫瘍もしくは悪性疾患（例えば、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃、肺、胃部、結腸、膀胱、グリア、血液または子宮内膜の細胞のいずれかにおける固形腫瘍または液体腫瘍（ｌｉｑｕｉｄ ｔｕｍｏｒ））を有するかもしくは有するリスクのある被験体が挙げられる。
本発明によると、過剰増殖性障害を有する被験体を処置する方法、および新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患（転移性、非転移性または良性のもの）を有する被験体を処置する方法がさらに提供される。様々な実施形態において、方法は、過剰増殖性障害を処置するのに十分な量の結合体を被験体に投与する工程；および新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の結合体を被験体に投与する工程を包含する。
方法は、転移を有するかまたは有するリスクのある被験体を処置する工程を包含する。例えば、被験体内の他の部位、位置または領域への腫瘍、がんまたは新形成の拡散または播種を減少させるかまたは阻害するのに有効な量の結合体。様々な実施形態において、方法は、１つ以上の他の部位への原発腫瘍または原発がんの転移、１つ以上の他の部位、位置または領域における転移の形成または確立を減少させるかまたは阻害し、それによって、腫瘍もしくはがんの再発または腫瘍もしくはがんの進行を減少させるかまたは阻害する。さらなる実施形態において、方法は、潜在的に転移を起こすかもしくは転移を起こす腫瘍もしくはがん細胞（例えば、播種性腫瘍細胞）の成長、増殖、移動性もしくは浸潤性を減少させるかもしくは阻害するか；原発腫瘍もしくは原発がんとは異なる１つ以上の他の部位、位置もしくは領域への、原発腫瘍もしくは原発がんから生じる転移の形成もしくは確立を減少させるかもしくは阻害するか；転移が形成された後もしくは確立された後に、原発腫瘍もしくは原発がんとは異なる１つ以上の他の部位、位置もしくは領域における転移の成長もしくは増殖を減少させるかもしくは阻害するか；または転移が形成された後もしくは確立された後に、追加の転移の形成もしくは確立を減少させるかもしくは阻害する。なおも別の実施形態において、方法は、新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患の再発または進行を減少させるか、または阻害する。
本発明によると、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の他の部位への転移、または原発性の新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患から遠位の他の部位における転移性の新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の形成もしくは確立を減少させるかまたは阻害する方法がなおもさらに提供される。様々な実施形態において、方法は、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の他の部位への転移、または原発性の新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患から遠位の他の部位における転移性の新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の形成もしくは確立を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の結合体を被験体に投与する工程を包含する。
本発明に従って処置可能な新形成、腫瘍、がんおよび悪性疾患には、固形細胞塊、造血細胞またはがん腫、肉腫（例えば、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫または線維肉腫）、リンパ腫、白血病、アデノーマ、腺がん、メラノーマ、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、乏突起膠細胞腫（ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｏｍａ）、中皮腫、細網内皮性、リンパ性または造血性（例えば、骨髄腫、リンパ腫または白血病）の新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が含まれる。
本発明に従って処置可能な新形成、腫瘍、がんおよび悪性疾患は、肺（小細胞肺がんまたは非小細胞肺がん）、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃、肺、胃部、結腸、膀胱、グリア、血液、子宮内膜、リンパ、血液、筋肉または皮膚の細胞の新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患に存在し得るか、またはそれらを冒し得る。
方法は、他の処置または治療（例えば、外科的切除、放射線療法、電離もしくは化学放射線治療、化学療法、免疫療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種）とともに実施され得る。そのような処置または治療は、結合体の投与の前、それと実質的に同時に（別個にまたは混合物として）、またはその後に、適用され得る。１つの実施形態において、方法は、抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がんまたは免疫増強の処置または治療を適用する工程を包含する。さらなる実施形態において、方法は、アルキル化剤、抗代謝産物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシドアナログまたはヌクレオチドアナログ；シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）および５−アザシチジン関連化合物、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン（ｏｘｉｐｌａｔｉｎ）、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシンまたはジブロモマンニトール、トポイソメラーゼインヒビター、（イリノテカン、トポテカン、エトポシド、テニポシド）、ゲムシタビン、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）などを投与する工程を包含する。細胞療法または免疫療法には、リンパ球、形質細胞、マクロファージ、樹状細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＢ細胞；抗体、細胞成長因子、細胞生存因子、細胞分化因子、サイトカインまたはケモカイン（例は、インターロイキンＩＬ−２、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＴＮＦβ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＳＤＦ−１、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、エオタキシン、エオタキシン−２、
またはリンホタクチンである）などが含まれる。
結合体とともに適用可能な追加の薬剤は、標的化薬物または生物製剤（例えば、抗体または小分子）である。モノクローナル抗体の非限定的な例としては、とりわけ本発明に係る結合体と組み合わせて使用され得る、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、ザルツムマブ（ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ（ｆｉｇｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、ガリキシマブ（ｇａｌｉｘｉｍａｂ）、ファルレツズマブ（ｆａｒｌｅｔｕｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ（ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ）などが挙げられる。結合体とともに使用する場合に適用可能な他の標的化薬物は、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｚｏｍｉｂ）（Ｖｅｌｃａｄｅ）、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）（Ｔｙｋｅｒｂ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）（Ｓｕｔｅｎｔ）、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（Ｎｅｖａｘａｒ）、ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ）などである。
本発明の方法は、被験体に利益を提供する工程を包含する。特定の実施形態において、処置方法は、新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の質量、体積、サイズまたは細胞数の部分的または完全な消失をもたらすか、新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞のネクローシス、溶解またはアポトーシスを刺激するか、誘導するかまたは増加させるか、新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患の体積、サイズ、細胞質量を減少させるか、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の進行またはそれらの体積、質量、サイズもしくは細胞数の増加を阻害するかまたは予防するか、あるいは寿命の延長をもたらすか；新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患に関連するかまたはそれによって引き起こされる有害な症状または合併症の重症度、持続時間または頻度を減少させるかまたは低減させるか；疼痛、不快、悪心、脱力または嗜眠を減少させるかまたは低減させるか；あるいはエネルギーの増加、食欲の増加、運動性の改善または心理的に良好な状態をもたらす。
上記方法に従って処置可能な被験体には、哺乳動物が含まれる。特定の実施形態において、被験体は、ヒトである。
図１Ａおよび１Ｂは、４８時間後に測定された、Ｈｅｒ２−ｎｅｕレセプター陽性のＡ）乳がん細胞株（ＳＫＢＲ−３）；およびＢ）卵巣がん細胞株（ＳＫＯＶ−３）に対する組換えｓｃＦＶ−ＣＨ３（裸の抗体）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ１８およびｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫの細胞傷害性を示している。 図２Ａおよび２Ｂは、ＳＫＯＶ−３異種移植マウスにおける、６４日間の研究期間中にＭＡｂ（裸）、Ａ）ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８ならびにＢ）組換えｓｃＦＶ−ＣＨ３裸抗体およびｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８結合体で処置されたマウスの腫瘍体積の中央値を、食塩水を注射されたマウスと比較して示している。 図３は、ＳＫＯＶ−３異種移植マウスにおけるＭＡｂ（裸）、ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８および組換えｓｃＦＶ−ＣＨ３裸抗体およびｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８結合体で処置されたマウスの６４日目の平均腫瘍重量を、食塩水を注射されたマウスと比較して示している。 図４は、ＳＫＯＶ−３異種移植マウスにおける、６４日間の研究期間中の、ＭＡｂ（裸）、ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８および組換えｓｃＦＶ−ＣＨ３裸抗体およびｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８結合体で処置されたマウスの平均体重を、食塩水を注射されたマウスと比較して示している。
詳細な説明
本発明は、第２溶解性ドメインに接続されたまたは融合された、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドを含む結合体に少なくとも部分的に基づく。代表的な配置において、結合体の第１ドメインは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドを含み、第２のドメインは、細胞に対して直接または間接的に毒性であり、それにより、細胞の増殖もしくは生存を減少させ得るか、または細胞死、殺滅もしくはアポトーシスを刺激し得るか、誘導し得るか、増加させ得るかもしくは増強し得る、溶解性部分を含む。
本発明によると、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する第１リガンドドメインを含むかまたはそれからなり、かつ第２の溶解性または毒性ドメインを含むかまたはそれからなる、結合体が提供される。１つの実施形態において、結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド、およびペプチド配列（リジン＝Ｋ、フェニルアラニン＝Ｆおよびアラニン＝Ａなどのアミノ酸から選択される）、例えば、
を含む１２〜１００残基のＬ−またはＤ−アミノ酸配列からなる第２のドメインを含む。別の実施形態において、結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する第１リガンドドメイン、ならびに
から選択されるＬ−またはＤ−アミノ酸配列からなる第２のドメインを含む。
本明細書中で使用されるとき、用語「結合体」または「融合構築物」およびそれらの文法上のバリエーションは、その構築物が、互いに異なりかつ通常天然では一緒に存在しない、２つの異なる分子実体に由来するか、それらから得られるかもしくは単離されるか、またはそれらに基づくかもしくはそれらをモデルにしている、一部または区分を含むことを意味する。つまり、例えば、その結合体の一部は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドを含むかまたはそれからなり、その結合体の第２の部分は、溶解性の部分を含むかまたはそれからなり、第１ドメインおよび第２のドメインの各々は、構造的に異なる。結合体は、「融合構築物」とも呼ばれ得、ここで、その結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する第２のドメインリガンドおよび第２のドメイン溶解性部分を含むかまたはそれからなる。
結合体の第１ドメインおよびまたは第２のドメインは、アミノ酸配列（ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、レクチン）、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）および炭水化物（糖類、シアル酸、ガラクトース、マンノース、フコース、アセチルノイラミン酸など）を含むか、またはそれらからなる。用語「アミノ酸配列」、「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」は、アミド結合もしくは等価物によって共有結合的に連結された２つ以上のアミノ酸または「残基」のことを指すために本明細書中で交換可能に使用される。アミノ酸配列は、非天然および非アミド化学の結合（例えば、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、二官能性マレイミドまたはＮ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて形成されるものを含む）によって連結され得る。非アミド結合としては、例えば、ケトメチレン、アミノメチレン、オレフィン、エーテル、チオエーテルなどが挙げられる（例えば、
を参照のこと）。
結合体または融合構築物の第１ドメインおよび第２のドメインは、Ｌ−アミノ酸配列、Ｄ−アミノ酸配列、およびＬ−アミノ酸とＤ−アミノ酸との混合物を含むアミノ酸配列を含む。第１ドメインおよび第２のドメインのアミノ酸配列は、線状構造または環状構造であり得、異なる部分（例えば、第３、第４、第５、第６、第７ドメインなど）と結合体化され得、分子内または分子間のジスルフィド結合を形成し得、また、同じもしくは異なるアミノ酸配列または他の分子と高次多量体またはオリゴマーを形成し得る。
結合体の例示的な長さは、約５〜１５、２０〜２５、２５〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００もしくは２００〜３００またはそれ以上のアミノ酸残基長である。特定の実施形態において、第１ドメインまたは第２のドメインは、約１〜１０、１０〜２０、１５〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００またはそれ以上の残基のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。より特定の実施形態において、第１ドメインは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２８またはそれ以上の残基のアミノ酸配列からなる。
第１ドメインおよび第２のドメイン、必要に応じて、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド溶解性ドメインまたは第２溶解性ドメインを有する結合体は、両親媒性アルファ−ヘリックスを形成する。両親媒性アルファ−ヘリックスは、アルファ−ヘリックスの片側に主に親水性アミノ酸を含み、他方の側は、主に疎水性アミノ酸を含む。アルファヘリックスは、３．６残基ごとに完全に回転するので、両親媒性アルファヘリックスのアミノ酸配列では、親水性残基と疎水性残基とが３〜４残基ごとに互い違いになる。ＰＮＮＰＮＮＰ反復パターンまたはモチーフは、両親媒性アルファ−ヘリックスを形成すると予測され、ここで、Ｐは、正に帯電したアミノ酸残基を表し、Ｎは、中性のアミノ酸残基を表す。ＰＮＮＰＮＮＰ反復パターンは、膜の相互作用／貫入のための負に帯電した細胞膜および疎水性部位に、溶解性ペプチドに対する陽イオン性結合部位を提供する。ゆえに、結合体は、両親媒性アルファ−ヘリックスを形成し得る、中断なしの１つ以上のＰＮＮＰＮＮＰ反復パターンもしくはモチーフまたは中断ありの１つ以上のＰＮＮＰＮＮＰ反復パターンもしくはモチーフを有する第２のドメインを含む。例えば、１５または１８残基のアミノ酸配列（例えば、ＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫＦＡＫＫおよびＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫ）が、中断なしおよび中断ありのＰＮＮＰＮＮＰ反復モチーフを有する。
結合体の第１ドメイン（例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド）は、リガンド、抗体、ホルモン、成長因子またはそれらのアナログもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕは、代表的には、細胞によって、または細胞上に（例えば、膜レセプター）または細胞内で、発現される。Ｈｅｒ２／ｎｅｕは、細胞膜表面と会合し得るか、または細胞膜を貫通し得る。例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕは、必要に応じて細胞質もしくは細胞外またはその両方である部分とともに、細胞膜を貫通する膜貫通ドメインを有し得る。ゆえに、Ｈｅｒ２／ｎｅｕは、細胞外、膜貫通または細胞質の部分を含む完全長のインタクトな天然Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ならびにその切断型またはフラグメント（例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ単独のまたは組み合わせにおける、細胞外、膜貫通もしくは細胞質の部分または部分配列）を含む。例えば、可溶性Ｈｅｒ２／ｎｅｕは、代表的には膜貫通を欠き、必要に応じて、天然の細胞外または細胞質の領域の全部または一部も欠き得る（天然のＨｅｒ２／ｎｅｕに存在する場合）。そのような切断型およびフラグメントは、リガンドに対して少なくとも部分的な結合性を保持し得る。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する結合体のリガンドは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに特異的または非特異的に結合する任意の実体を含むか、またはそれからなる。ゆえに、リガンドの非限定的な例としては、抗体、抗体フラグメント、ホルモン、ホルモンアナログ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するホルモンまたはホルモンアナログのフラグメント、成長因子、成長因子アナログ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する成長因子または成長因子アナログのフラグメントなどが挙げられる。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する例示的なリガンドとしては、アフィボディ（例えば、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：２、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：４、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：７、ＺＨｅｒ２−ｎｅｕ：８およびＦａｂ６３）が挙げられる。例示的なアフィボディ配列は、以下のとおりである：
Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドとして有用な例示的な成長因子としては、上皮成長因子および上皮成長因子アナログが挙げられる。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕリガンドおよび結合部分としては、さらに、抗体および抗体フラグメントが挙げられる。「抗体」とは、任意のモノクローナルまたはポリクローナル免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤおよびそれらの任意のサブクラス）のことを指す。ＩｇＧに対する例示的なサブクラスは、様々なグリコシル化パターンを有する操作された抗体サブクラスおよび組換え抗体を含む、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。抗体には、Ｂ細胞などの細胞によって産生された抗体もしくはそれらの細胞上に発現された抗体、または他の細胞、例えば、ＣＨＯ細胞によって合成された抗体もしくは産生されるように操作された抗体が含まれる。そのような抗体には、改善された特徴（例えば、高い血清安定性および／またはインビボでの長い半減期、高いＰＫなど（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ １，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎ Ｒ および Ｄｕｅｂｅｌ Ｓ，ｅｄｓ．，２０１０，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、ＷＯ２００６／１３０８３４およびＨｏｒｔｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６８：８０４９（２００８）に記載されているようなもの））を有する抗体が含まれる。
Ｆｃにおける非限定的な変異としては、例えば、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３５Ｒ、Ｈ４３５Ｑ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ３２８Ｒ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅが挙げられる。ＩｇＧ１における非限定的な変異は、Ｆｃ領域の残基
におけるものであり得る。
抗体フラグメントまたは部分配列とは、対照の完全長抗体の少なくとも部分的な抗原結合能を保持する完全長抗体の一部のことを指す。例示的な抗体フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、ラクダＩｇ、Ｖ−ＮＡＲ、ＶＨＨ、三重特異性（Ｆａｂ３）、二重特異性（Ｆａｂ２）、ダイアボディ（（ＶＬ−ＶＨ）２または（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディ（三価）、テトラボディ（四価）、ミニボディ（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、二重特異性一本鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）、ＩｇＧデルタＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ、アフィボディ、アプタマー、アビマー、ナノボディまたは他の抗原結合フラグメントが挙げられる。
例示的な抗体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ上に存在するエピトープに結合する。例示的なＨｅｒ２／ｎｅｕエピトープ（Ｈｅｒ２エピトープのアミノ酸の位置の番号は、「ｐ」の後のアラビア数字によって言及される）としては、
が挙げられる。
例示的な抗体としては、米国特許第５，８２１，３３７号に記載されているようなヒト化抗ＥｒｂＢ２抗体であるｈｕＭＡｂ４Ｄ１−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮＴＭ）；米国特許第７，０９７，８４０号に記載されているようなヒト化５２０Ｃ９（ＷＯ９３／２１３１９）およびヒト化２Ｃ４（ペルツズマブ）ならびにＵＳ２００９／０２８５８３７Ａ１に記載されているようなペルツズマブバリアントが挙げられる。
様々な特性を有する追加の抗ＥｒｂＢ２抗体は、
に記載されている。
結合体は、アミノ末端に第１ドメインおよびカルボキシル末端に第２のドメインを有する結合体を含む。結合体は、カルボキシル末端に第１ドメインおよびアミノ末端に第２のドメインを有する結合体も含む。追加のドメインが存在する場合（例えば、第３、第４、第５、第６、第７ドメインなど）、第１ドメインは、第２のドメインに対してＮＨ２末端に位置するか、または第２のドメインは、第１ドメインに対してＮＨ２末端に位置する。
本明細書中に示される様々な配列、例えば、
またはＨｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドの部分配列およびアミノ酸置換もまた含められる。特定の実施形態において、第１ドメインまたは第２のドメインの部分配列は、少なくとも５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００またはそれ以上のアミノ酸残基を有する。
ゆえに、本発明は、改変またはバリエーション（例えば、第１ドメインもしくは第２のドメインまたは第１ドメインと第２のドメインの両方の置換、付加または欠失）を含む。したがって、保存的または非保存的アミノ酸置換が、第１ドメインまたは第２のドメインの活性（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合性または溶解性）を破壊しない限り、第１ドメインまたは第２のドメインのペプチド配列を含む結合体は、任意の数のそのような置換を組み込み得る。したがって、例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する改変されたリガンドまたは第２の溶解性部分ドメインは、改変されていない第２のドメインの少なくとも部分的なＨｅｒ２／ｎｅｕ結合性または溶解活性（例えば、細胞殺滅またはアポトーシス）を保持し得る。
「保存的置換」は、１つのアミノ酸を生物学的、化学的または構造的に類似の残基によって置き換えることである。生物学的に類似とは、その置換が、生物学的活性、例えば、溶解活性と適合可能であることを意味する。構造的に類似とは、それらのアミノ酸が、類似の長さの側鎖（例えば、アラニン、グリシンおよびセリン）もしくは類似のサイズを有する側鎖を有するか、または第１、第２もしくは追加のドメインの構造（例えば、両親媒性アルファヘリックス）が維持されることを意味する。化学的に類似とは、それらの残基が、同じ電荷を有するか、または親水性および疎水性であることを意味する。特定の例としては、１つの疎水性残基（例えば、イソロイシン、バリン、ロイシンまたはメチオニン）の、別のものに対する置換、または１つの極性残基の、別のものに対する置換（例えば、リジンに対するアルギニン、アスパラギン酸に対するグルタミン酸、またはアスパラギンに対するグルタミン、トレオニンに対するセリンの置換など）が挙げられる。通例のアッセイを用いることにより、結合体のバリアントが、活性、例えば、結合活性または溶解活性を有するかを判定することができる。
特定の例としては、ペプチドの第１ドメインまたは第２のドメインの１つ以上のアミノ酸（例えば、１〜３、３〜５、５〜１０、１０〜２０またはそれ以上の）残基の置換または欠失が挙げられる。改変された結合体は、参照配列（例えば、第１ドメイン（例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド）または第２のドメイン（例えば、
）に対して５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％またはそれ以上の同一性を有するペプチド配列を有し得る。
特定の実施形態において、結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドを含むかまたはそれからなるペプチドの第１ドメイン、ならびにＦもしくはＬ残基で置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基で置換された１つ以上のＦ残基またはＫ、ＦもしくはＬ残基で置換された１つ以上のＡ残基を有する、
から選択されるペプチドを含むＬ−またはＤ−アミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２の溶解性ドメインを含む。別の特定の実施形態では、結合体は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド、ならびにＦもしくはＬ残基で置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基で置換された１つ以上のＦ残基またはＫ、ＦもしくはＬ残基で置換された１つ以上のＡ残基（例えば、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８残基長）を有する、
から選択されるＬ−またはＤ−アミノ酸配列からなる第２のドメインを含む。
用語「同一性」および「相同性」ならびにそれらの文法上のバリエーションは、言及されている２つ以上の実体が同じであることを意味する。したがって、２つのアミノ酸配列が同一である場合、それらは、同じアミノ酸配列を有する。「同一性の範囲、領域またはドメイン」は、言及されている２つ以上の実体の一部が同じであることを意味する。したがって、２つのアミノ酸配列が、１つ以上の配列領域にわたって同一または相同である場合、それらは、これらの領域において同一性を共有する。用語「相補性」は、核酸配列に対する言及において使用されるとき、言及されている領域が、１００％の相補性である、すなわち、ミスマッチなしに１００％の塩基対形成を示すことを意味する。
構造的に関係するタンパク質と機能的に関係するタンパク質との間の配列保存の量のばらつきに起因して、機能または活性（例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合性または溶解性）を保持するために必要とされる配列同一性の量は、そのタンパク質、領域、およびその領域の機能または活性に依存する。例えば、溶解性ペプチド配列の場合、複数のＰＮＮＰＮＮＰ配列反復パターンまたはモチーフが存在し得るが、中断ありまたは中断なしの１つ以上のＰＮＮＰＮＮＰ配列反復パターンまたはモチーフは存在する必要はない。
２つの配列間の同一性の程度は、当該分野で公知のコンピュータプログラムおよび数学的アルゴリズムを用いて確かめることができる。パーセント配列同一性（相同性）を計算するそのようなアルゴリズムは、一般に、比較領域にわたる配列のギャップおよびミスマッチを説明する。例えば、ＢＬＡＳＴ（例えば、ＢＬＡＳＴ２．０）検索アルゴリズム（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）を参照のこと、ＮＣＢＩから公的に入手可能）は、以下のとおりの例示的な検索パラメータを有する：ミスマッチ−２；ギャップオープン５；ギャップ伸長２。ポリペプチド配列を比較する場合、代表的には、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムが、スコア行列（例えば、ＰＡＭ１００、ＰＡＭ２５０、ＢＬＯＳＵＭ６２またはＢＬＯＳＵＭ５０）と組み合わせて使用される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）およびＳＳＥＡＲＣＨ配列比較プログラムもまた、同一性の程度を定量するために使用される（Ｐｅａｒｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１３２：１８５（２０００）；およびＳｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５（１９８１））。Ｄｅｌａｕｎａｙベースのトポロジカルマッピングを用いてタンパク質の構造的類似性を定量するためのプログラムもまた開発されている（Ｂｏｓｔｉｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．３０４：３２０（２００３））。
個別の残基、ならびに第１、第２および追加のドメインは、共有結合または非共有結合によって接続され得る。共有結合の非限定的な例は、アミド結合、非天然および非アミドの化学結合であり、それらとしては、例えば、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、二官能性マレイミド、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）が挙げられる。アミド結合に代わる連結基としては、例えば、ケトメチレン（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−に代わる−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−）、アミノメチレン（ＣＨ２−ＮＨ）、エチレン、オレフィン（ＣＨ＝ＣＨ）、エーテル（ＣＨ２−Ｏ）、チオエーテル（ＣＨ２−Ｓ）、テトラゾール（ＣＮ４−）、チアゾール、レトロアミド、チオアミドまたはエステルが挙げられる（例えば、Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ．７，ｐｐ２６７−３５７「Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｃｋｅｒ，ＮＹを参照のこと）。
第１ドメインおよび第２のドメインは、共有結合または非共有結合によって互いに直接隣接して融合され得るか、または接続され得る。第１ドメインおよび第２のドメインは、第１ドメインと第２のドメインとの間に位置する介在領域（例えば、ヒンジ、スペーサーまたはリンカー）によって分断され得る。１つの実施形態において、第１ドメインおよび第２のドメインは、炭素鎖（例えば、ＣＣＣＣＣ）によって接続される。多炭素鎖には、グルタル酸、コハク酸およびアジピン酸などのカルボン酸（例えば、ジカルボン酸）が含まれる。
別の実施形態において、第１ドメインおよび第２のドメインは、第１ドメインと第２のドメインとの間に位置する、アミノ酸、ペプチドまたは非ペプチドのヒンジ、スペーサーまたはリンカーによって接続される。ペプチドのヒンジ、スペーサーまたはリンカー配列は、任意の長さであり得るが、代表的には、約１〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０または４０〜５０アミノ酸残基の範囲であり得る。特定の実施形態において、第１ドメインと第２のドメインとの間に位置するペプチドのヒンジ、スペーサーまたはリンカーは、１〜５、１〜１０、１〜２０、１〜２５個のＬ−もしくはＤ−アミノ酸残基または１〜６個のＬ−もしくはＤ−アミノ酸残基である。第１ドメインと第２のドメインとの間に位置する配列に含められる特定のアミノ酸残基は、１つ以上のＣ、Ａ、ＳもしくはＧアミノ酸残基を含む。第１ドメインと第２のドメインとの間に位置するペプチドの特定の非限定的な例としては、ＧＳＧＧＳ、ＡＳＡＡＳまたは炭素鎖（例えば、ＣＣＣＣＣＣ）内の、またはそれらとして示される配列が挙げられる。第１ドメインと第２のドメインとの間にアミノ酸およびペプチドの誘導体が位置され得る。アミノ酸誘導体の特定の非限定的な例は、リジン誘導体、または６炭素リンカー（例えば、α−アミノ−カプロン酸）である。
ヒンジ、スペーサーもしくはリンカーまたは第３、第４、第５、第６、第７などのドメインを含むかまたは含まない結合体は、全体的に、天然のアミノ酸、または合成アミノ酸、非天然アミノ酸もしくはアミノ酸アナログから構成され得るか、あるいは誘導体化された形態を含み得る。様々な実施形態において、結合体は、第１ドメイン内または第２のドメイン内に、Ｌ−アミノ酸に対して置換された１つ以上のＤ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸とＬ−アミノ酸との混合物、または全体的にＤ−アミノ酸残基から構成される配列を含む。
結合体は、代表的に３つの構造上の基：ａ）天然のアミド結合（「ペプチド結合」）以外の残基結合基；ｂ）天然に存在するアミノ酸残基の代わりの非天然の残基；またはｃ）二次構造の模倣を誘導する残基（すなわち、二次構造、例えば、アルファヘリックスコンフォメーションを誘導するかまたは安定化する残基）に由来する非天然の構造上の構成要素の任意の組み合わせを含み得る。結合体は、環状構造（例えば、分子のアミノ末端とカルボキシ末端との間の末端と末端とのアミド結合、または分子内もしくは分子間ジスルフィド結合）を含む。結合体は、例えば、糖または炭水化物残基、リン酸基、脂肪酸、脂質などを含むように、インビトロまたはインビボにおいて改変され得る（例えば、翻訳後に改変され得る）。
追加の特定の例としては、第３、第４、第５、第６または第７ドメインが挙げられる。ゆえに、第１ドメインおよび第２のドメインを有する結合体は、異なるまたは補完的な機能または活性を付与する、それに共有結合的に連結される１つ以上の追加のドメイン（第３、第４、第５、第６、第７など）を含む。例示的な追加のドメインとしては、単離を容易にするドメインが挙げられ、それらとしては、例えば、金属キレートペプチド（例えば、固定化された金属上での精製を可能にするポリヒスチジントラクトおよびヒスチジン−トリプトファンモジュール）；固定化された免疫グロブリン上での精製を可能にするプロテインＡドメイン；ならびにＦＬＡＧＳ伸長／親和性精製系（Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐ，Ｓｅａｔｔｌｅ ＷＡ）において利用されるドメインが挙げられる。必要に応じて、切断可能な配列（例えば、Ｘａ因子またはエンテロキナーゼ）を精製ドメインと結合体との間に含めることが、精製を容易にするために使用され得る。例えば、発現ベクターは、６ヒスチジン残基に続いてチオレドキシンおよびエンテロキナーゼ切断部位に連結された、結合体をコードする核酸配列を含み得る。そのヒスチジン残基は、結合体の検出および精製を容易にし、エンテロキナーゼ切断部位は、その残りのタンパク質から構築物を精製するための手段を提供する（例えば、Ｋｒｏｌｌ，ＤＮＡ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２：４４１（１９９３）を参照のこと）。
結合体の活性は、様々な因子によって影響され得るので、結合体は、これらの因子の１つ以上を考慮に入れることによって、設計され得るか、または最適化され得る。そのような因子としては、例えば、細胞に毒性をもたらし得る長さが挙げられる。溶解性ペプチドドメインを形成するアルファヘリックスの細胞殺滅活性は、そのヘリックスの安定性にも左右され得る。ヒンジおよびスペーサーは、第１ドメインとペプチド溶解性ドメインのヘリックス構造との膜相互作用に影響し得る。溶解性ペプチドドメインに存在する特定のアミノ酸残基によって部分的に決定されるそのドメインの電荷もまた、細胞殺滅効力に影響する。Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドの、溶解性ドメインに対する位置（ＮまたはＣ末端）もまた、結合体の細胞殺滅活性に影響し得る。
結合体のインビボ半減期は、１つ以上の天然に存在しないアミノ酸または誘導体を用いてペプチドドメインを構築することによって延長され得る。例えば、Ｄ−アミノ酸を有する結合体（例えば、すべての残基の、最大３０％、４０％、５０％、６０％またはそれ以上がＤ−エナンチオマーである）は、血清タンパク質分解に対して耐性があり、ゆえに、より長時間にわたって活性であり得、それによって、インビボでの効力が高まり得る。さらに、１つ以上の天然に存在しないアミノ酸または誘導体を用いてペプチドドメインを構築することにより、溶血活性が低下し得る。そのようなＤ−エナンチオマーを有する結合体はまた、溶液中で単量体である傾向がより高く、それらは、有意に凝集しない。
ペプチドおよびペプチド模倣物は、当該分野で公知の方法を用いて生成され得、単離され得る。ペプチドは、当該分野で公知の化学的方法を用いて全体的または部分的に合成され得る（例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ（１９８０）．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５；Ｈｏｒｎ（１９８０）；およびＢａｎｇａ，Ａ．Ｋ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９５）Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＰＡを参照のこと）。ペプチド合成は、様々な固相法を用いて行われ得（例えば、Ｒｏｂｅｒｇｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：２０２（１９９５）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２８９：３（１９９７）を参照のこと）、自動化された合成が、例えば、ＡＢＩ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を製造者の指示書に従って用いることにより、達成され得る。ペプチドおよびペプチド模倣物は、コンビナトリアル法を用いても合成され得る。合成残基、および模倣物を組み込んでいるポリペプチドは、当該分野で公知の種々の手順および方法を用いて合成され得る（例えば、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ Ｖｏｌｕｍｅｓ，Ｇｉｌｍａｎら（Ｅｄｓ）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹを参照のこと）。改変されたペプチドは、化学修飾法（例えば、Ｂｅｌｏｕｓｏｖ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３４４０（１９９７）；Ｆｒｅｎｋｅｌ，Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９：３７３（１９９５）；およびＢｌｏｍｍｅｒｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：７８８６（１９９４）を参照のこと）によって生成され得る。
本発明はさらに、本発明の結合体をコードする核酸および結合体をコードする核酸を含むベクターを提供する。本明細書中で遺伝子、ポリヌクレオチド、ヌクレオチド配列、プライマー、オリゴヌクレオチドまたはプローブとも呼ばれ得る核酸は、任意の長さの天然のまたは改変されたプリン含有ポリマーおよびピリミジン含有ポリマー、ポリリボヌクレオチドもしくはポリデオキシリボヌクレオチドまたは混合されたポリリボ−ポリデオキシリボヌクレオチドおよびそれらのα−アノマー型のことを指す。２つ以上のプリン含有ポリマーおよびピリミジン含有ポリマーは、代表的には、リン酸エステル結合またはそのアナログによって連結される。それらの用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）を含む、すべての形態の核酸のことを指すために交換可能に使用され得る。それらの核酸は、一本鎖、二本鎖または三本鎖の線状または環状であり得る。核酸には、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびアンチセンスが含まれる。ＲＮＡ核酸は、スプライシングされたもしくはスプライシングされてないｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡまたはアンチセンスであり得る。核酸には、天然に存在するもの、合成のもの、ならびにヌクレオチドのアナログおよび誘導体が含まれる。
遺伝暗号の縮重の結果として、核酸は、本発明の結合体をコードする配列に対して縮重した配列を含む。したがって、結合体をコードする縮重核酸配列が提供される。
核酸は、種々の公知の標準的なクローニング法および化学合成法のいずれかを用いて生成され得、部位特異的突然変異誘発または当業者に公知の他の組換え手法によって意図的に変更され得る。ポリヌクレオチドの純度は、配列決定、ゲル電気泳動、ＵＶ分光法によって測定され得る。
核酸は、核酸構築物に挿入されている場合があり、ここで、その核酸の発現は、本明細書中で「発現カセット」と呼ばれる「発現調節エレメント」によって影響されるかまたは制御される。用語「発現調節エレメント」とは、それと作動可能に連結された核酸配列の発現を制御するかまたはそれに影響する１つ以上の核酸配列エレメントのことを指す。発現調節エレメントは、必要に応じ、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、遺伝子サイレンサー、タンパク質をコードする遺伝子の前の開始コドン（例えば、ＡＴＧ）などを含み得る。
核酸配列に作動可能に連結された発現調節エレメントは、転写、および必要に応じ、その核酸配列の翻訳を調節する。用語「作動可能に連結された」とは、言及されている構成要素が、意図された様式で機能するのを可能にする関係性で存在している並列のことを指す。代表的には、発現調節エレメントは、その遺伝子の５’または３’末端に並べられるが、イントロンでもあり得る。
発現調節エレメントは、転写を構成的に活性化するエレメント、すなわち、誘導可能である（すなわち、活性化のために外部シグナルを必要とする）かまたは抑制解除可能である（すなわち、転写を止めるためにシグナルを必要とする；そのシグナルがもはや存在しなくなると、転写が活性化されるかまたは「抑制解除される」）エレメントを含む。特定の細胞型または組織に対して遺伝子発現を調節可能にするのに十分な調節エレメント（すなわち、組織特異的調節エレメント）も、本発明の発現カセットに含まれる。代表的には、そのようなエレメントは、コード配列の上流または下流（すなわち、５’および３’）に配置される。プロモーターは、代表的には、コード配列の５’に位置する。組換えＤＮＡ法または合成法によって生成されるプロモーターは、本発明のポリヌクレオチドの転写を提供するために使用され得る。「プロモーター」は、転写を指示するのに十分な最小配列エレメントのことを意味する。
核酸は、宿主細胞への伝播のため、および所望であれば、その後の遺伝的操作のためにプラスミドに挿入され得る。プラスミドは、宿主細胞において安定的に増幅され得る核酸であり；プラスミドは、その核酸の発現を駆動するために、必要に応じて発現調節エレメントを含んでもよい。ベクターは、本明細書中でプラスミドの同意語として使用され、宿主細胞において発現するための発現調節エレメントも含み得る。プラスミドおよびベクターは、一般に、細胞内で増幅するための複製起点およびプロモーターを少なくとも含む。ゆえに、プラスミドおよびベクターは、例えば、核酸をコードする結合体の遺伝的操作のため、結合体またはアンチセンス核酸を生成するため、ならびに宿主細胞および生物において結合体を発現するために有用である。
細菌系プロモーターとしては、Ｔ７および誘導性プロモーター（例えば、バクテリオファージλのｐＬ、ｐｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ−ｌａｃハイブリッドプロモーター）およびテトラサイクリン応答性プロモーター）が挙げられる。昆虫細胞系プロモーターとしては、構成的または誘導性のプロモーター（例えば、エクジソン）が挙げられる。哺乳動物細胞の構成的プロモーターとしては、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）および他のウイルスのプロモーター、または哺乳動物細胞のゲノムに由来する誘導性プロモーター（例えば、メタロチオネインＩＩＡプロモーター；熱ショックプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルスに由来する誘導性プロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；誘導可能なマウス乳がんウイルス長末端反復配列）が挙げられる。あるいは、レトロウイルスゲノムが、適切な宿主細胞において結合体を導入するためおよびその発現を指示するために遺伝的に改変され得る。
発現系はさらに、インビボで使用するために設計されたベクターを含む。特定の非限定的な例としては、アデノウイルスベクター（米国特許第５，７００，４７０号および同第５，７３１，１７２号）、アデノ随伴ベクター（米国特許第５，６０４，０９０号）、単純ヘルペスウイルスベクター（米国特許第５，５０１，９７９号）、レトロウイルスベクター（米国特許第５，６２４，８２０号、同第５，６９３，５０８号および同第５，６７４，７０３号）、ＢＰＶベクター（米国特許第５，７１９，０５４号）およびＣＭＶベクター（米国特許第５，５６１，０６３号）が挙げられる。
酵母ベクターには、構成的および誘導性のプロモーターが含まれる（例えば、
を参照のこと）。ＡＤＨもしくはＬＥＵ２などの構成的酵母プロモーター、またはＧＡＬなどの誘導性プロモーターが、使用され得る（Ｒ．Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ：ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌ．１１，Ｃｈ．３，ｅｄ．Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈ．，Ｄ．Ｃ．，１９８６）。例えば、相同組換えによる酵母染色体への外来核酸配列の組み込みを促進するベクターが当該分野で公知である。挿入されるポリヌクレオチドが、より従来のベクターにとって大きすぎるとき（例えば、約１２Ｋｂより大きいとき）、代表的には酵母人工染色体（ＹＡＣ）が使用される。
選択圧または識別可能なマーカー（例えば、ベータ−ガラクトシダーゼ）に対する耐性を付与することによって、そのベクターを有する細胞の選択、成長および増加を可能にする選択可能なマーカーも発現ベクターは含み得る。あるいは、選択可能なマーカーは、結合体をコードする核酸を含む第１ベクターとともに宿主細胞に同時にトランスフェクトされる第２ベクター上に存在し得る。
選択系としては、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ １１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（Ｓｚｙｂａｌｓｋａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２６（１９６２））およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら、Ｃｅｌｌ ２２：８１７（１９８０））遺伝子（それぞれ、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞において使用され得る）が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、代謝拮抗物質耐性が、メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７（１９８１））；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ遺伝子（Ｍｕｌｌｉｇａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２（１９８１））；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するネオマイシン遺伝子（Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１（１９８１））；ピューロマイシン；およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するハイグロマイシン遺伝子（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ ３０：１４７（１９８４））に対する選択の根拠として使用され得る。さらなる選択可能な遺伝子としては、細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用することを可能にするｔｒｐＢ；細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノールを利用することを可能にするｈｉｓＤ（Ｈａｒｔｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：８０４７（１９８８））；およびオルニチンデカルボキシラーゼインヒビターである２−（ジフルオロメチル）−ＤＬ−オルニチン，ＤＦＭＯに対する耐性を付与するＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼ）（ＭｃＣｏｎｌｏｇｕｅ（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）が挙げられる。
結合体を発現する宿主細胞、ならびに結合体をコードする核酸および結合体をコードする核酸を含むベクターで形質転換された宿主細胞もまた提供される。１つの実施形態において、宿主細胞は、原核細胞である。別の実施形態において、宿主細胞は、真核細胞である。様々な態様において、真核細胞は、酵母または哺乳動物（例えば、ヒト、霊長類など）の細胞である。
本明細書中で使用されるとき、「宿主細胞」は、発現される結合体を伝播し得るか、転写し得るかまたはコードし得る核酸が導入された細胞である。この用語は、宿主細胞の任意の子孫またはサブクローンも包含する。宿主細胞は、結合体を発現する細胞を含む。
宿主細胞としては、微生物（例えば、細菌および酵母）；ならびに植物、昆虫および哺乳動物の細胞が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、組換えバクテリオファージ核酸、プラスミド核酸またはコスミド核酸発現ベクターで形質転換された細菌；組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス，ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス，ＴＭＶ）に感染したまたは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；および組換えウイルス発現ベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス）に感染した動物細胞系、または一過性もしくは安定的な増幅もしくは発現のために操作された形質転換された動物細胞系。
結合体、結合体をコードする核酸、ベクター、ならびに結合体を発現するかまたは結合体をコードする核酸およびアンチセンスで形質転換された宿主細胞は、単離された形態および精製された形態を含む。用語「単離された」は、本発明の組成物の修飾語として使用されるとき、その組成物が、人間の手によって作製されたか、または天然に存在するインビボ環境から実質的に完全にもしくは少なくとも部分的に分離されていることを意味する。一般に、単離された組成物は、それが通常天然において関連する１つ以上の材料、例えば、１つ以上のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物、細胞膜を実質的に含まない。用語「単離された」は、その組成物の代替の物理的形態（例えば、多量体／オリゴマー、バリアント、改変、または誘導体化された形態もしくは人間の手によって作製された宿主細胞において発現される形態）を除外しない。用語「単離された」は、その中に組み合わせ（そのうちのいずれか１つが人間の手によって作製されたものである）が存在する形態（例えば、薬学的製剤および組み合わせ組成物）も除外しない。
「単離された」組成物は、それが通常天然において関連する材料のいくつか、相当数、ほとんどまたはすべてを含まないとき、「精製された」組成物でもあり得る。したがって、実質的に純粋でもある単離された結合体は、何百万の他の配列の中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド（例えば、タンパク質ライブラリーのタンパク質、またはゲノムライブラリーもしくはｃＤＮＡライブラリーにおける核酸）を含まない。「精製された」組成物は、１つ以上の他の分子と併用され得る。
本発明によると、結合体の混合物および組み合わせ組成物が提供される。１つの実施形態において、混合物は、１つ以上の結合体および薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤を含む。別の実施形態において、混合物は、１つ以上の結合体、および抗細胞増殖、抗腫瘍、抗がんまたは抗新形成の処置または薬剤を含む。さらなる実施形態において、混合物は、１つ以上の結合体および免疫増強剤を含む。組み合わせ（例えば、薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤中の１つ以上の結合体と、抗細胞増殖、抗腫瘍、抗がんまたは抗新形成の処置または薬剤および免疫増強の処置または薬剤の１つ以上との組み合わせ）もまた提供される。
本発明の結合体（例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する第１リガンド（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ結合部分）ドメインおよび第２溶解性ドメインを含むアミノ酸配列を有するポリペプチド）を用いることにより、溶解、細胞死またはアポトーシスのために細胞を標的にすることができる。そのような細胞は、選択的に標的化され得る。例えば、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞は、結合体によって標的化され得、それによって、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現していないかまたはほとんど発現していない細胞と比べて優先的に殺滅され得る。
本発明によると、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法、および細胞増殖を減少させるかまたは阻害する方法が提供される。１つの実施形態において、方法は、細胞と結合体とを、その細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含する。別の実施形態において、方法は、細胞と結合体とを、細胞増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している過剰増殖性細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法、およびＨｅｒ２／ｎｅｕを発現している過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法もまた提供される。１つの実施形態において、方法は、過剰増殖性細胞または過剰増殖細胞と結合体とを、増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している非転移性または転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法がさらに提供される。１つの実施形態において、方法は、新形成、がん、腫瘍または悪性の細胞と結合体とを、その細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している休止中または非***性の非転移性または転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法がなおもさらに提供される。１つの実施形態において、方法は、休止中または非***性の新形成、がん、腫瘍または悪性の細胞と結合体とを、その休止中または非***性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞（例えば、過剰増殖細胞）の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法がさらに提供される。１つの実施形態において、方法は、その細胞と結合体とを、その細胞（例えば、過剰増殖細胞）の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含し、ここで、その結合体は、その細胞によって発現されているＨｅｒ２／ｎｅｕに結合する。
Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している発現している新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法がなおもさらに提供される。１つの実施形態において、方法は、その細胞と結合体とを、その新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量で接触させる工程を包含し、ここで、その結合体は、その細胞によって発現されているＨｅｒ２／ｎｅｕに結合する。
用語「接触」は、２つ以上の実体間（例えば、結合体と細胞との間）の直接または間接的な結合または相互作用のことを意味する。本明細書中で使用される接触は、溶液、固相、インビトロ、エキソビボ、細胞およびインビボにおけるものを含む。インビボでの接触は、投与する、または投与もしくは送達と呼ばれ得る。
非選択的または選択的に増殖を減少させるかまたは阻害するために標的化する細胞には、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞が含まれる。非限定的な例示的な細胞としては、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃、肺、胃部、結腸、膀胱、グリア、血液および子宮内膜の細胞が挙げられる。したがって、標的細胞には、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞が含まれる。
本発明の結合体および方法は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞を含む、望ましくないまたは異常な細胞増殖および過剰増殖性障害の処置にも適用可能である。したがって、本発明によると、望ましくないまたは異常な細胞増殖および過剰増殖性障害を処置する方法が提供される。１つの実施形態において、方法は、その望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性障害を処置するのに十分な量の結合体を被験体（処置を必要とする被験体）に投与する工程を包含する。
用語「過剰増殖性障害」とは、任意の望ましくないまたは異常な細胞の生存（例えば、プログラム細胞死またはアポトーシスを起こすのに失敗したもの）、成長または増殖のことを指す。そのような障害には、良性の過形成、非転移性および転移性の新形成、がん、腫瘍および悪性疾患が含まれる。望ましくないまたは異常な細胞増殖および過剰増殖性障害は、被験体内の任意の細胞、組織、器官に影響し得る。望ましくないまたは異常な細胞増殖および過剰増殖性障害は、被験体内に、局部的に、領域性にまたは全身性に、存在し得る。過剰増殖性障害は、多数の組織および器官（***、肺（例えば、小細胞または非小細胞）、甲状腺、頭頸部、脳、鼻咽頭、咽頭、鼻または洞、リンパ系、副腎、脳下垂体、甲状腺、リンパ、胃腸（口腔、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖路（子宮、卵巣、膣、子宮頸部、子宮内膜、ファロピウス管、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液（血液学）、脳（グリア）、筋肉、皮膚および幹細胞が挙げられるがこれらに限定されない）から生じ得、それらは、他の二次的な部位、領域または位置に転移するかもしれないし、しないかもしれない。
本発明の結合体および方法は、任意の細胞、器官または組織起源の転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成にも適用可能である。そのような障害は、実質的に任意の細胞または組織タイプに影響し得る（例えば、がん腫、肉腫、メラノーマ、神経性および細網内皮性または造血性の新形成障害（例えば、骨髄腫、リンパ腫または白血病））。
本明細書中で使用されるとき、用語「新形成」および「腫瘍」とは、その成長、増殖または生存が、対応する正常細胞の成長、増殖または生存よりも高い細胞または細胞の集団、例えば、細胞増殖障害または細胞分化障害のことを指す。腫瘍は、異なる質量または成長を形成した新形成である。「がん」または「悪性疾患」とは、隣接する空間、組織または器官を浸潤し得る新形成または腫瘍のことを指す。「転移」とは、その原発部位から被験体内の１つ以上の二次的な部位、位置または領域に播種したまたは拡散した新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患のことを指し、ここで、その部位、位置または領域は、原発腫瘍または原発がんと異なる。そのような細胞のすべてまたは一部が、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現し得るので、本発明に係る結合体を用いて標的化され得る。
新形成、腫瘍、がんおよび悪性の細胞（転移性または非転移性）には、休止中のまたは残存する新形成、腫瘍、がんおよび悪性の細胞が含まれ、それらのすべてまたは一部は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現する。そのような細胞は、代表的には、***していない（Ｇ０−Ｇ１停止）レムナント腫瘍細胞からなる。これらの細胞は、原発部位に存続し得るか、または微小残存病変として播種性の新形成、腫瘍、がんもしくは悪性の細胞として存続し得る。これらの休止中の新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞は、無症候性のままであるが、これらの休止中の細胞は、いったん増殖すると、重篤な症状および死をもたらし得る。本発明の方法を用いることによって、休止中の新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害することができ、そしてそれにより、腫瘍もしくはがんの再発、または腫瘍もしくはがんの転移もしくは進行が阻害され得るかまたは減少し得る。
本発明によると、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を有する被験体を処置する方法が提供される。１つの実施形態において、方法は、その転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を処置する（例えば、増殖を減少させるかまたは阻害する）のに十分な量の結合体を被験体（処置を必要とする被験体）に投与する工程を包含する。
上記転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成は、任意のステージ、例えば、初期または進行期（例えば、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶの腫瘍）であり得る。その転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成は、前処置に供されたことがあってもよいし、安定化されていてもよいし（進行していなくてもよいし）、緩解になっていてもよい。
転移に関して、本発明の方法を用いることにより、原発腫瘍もしくは原発がんの他の部位への転移、または原発腫瘍もしくは原発がんから遠位の他の部位における転移性の腫瘍もしくはがんの形成もしくは確立を減少させるかまたは阻害することができ、それによって、腫瘍もしくはがんの再発または腫瘍もしくはがんの進行が阻害されるかまたは減少する。したがって、本発明の方法は、とりわけ、１）潜在的に転移するかまたは転移する腫瘍またはがん細胞（例えば、播種性腫瘍細胞，ＤＴＣ）の成長、増殖、移動性または浸潤性を減少させるかまたは阻害する工程；２）原発腫瘍または原発がんから、その原発腫瘍または原発がんとは異なる１つ以上の他の部位、位置または領域に生じる転移の形成もしくは確立を減少させるかまたは阻害する工程；３）転移が形成された後または確立された後に、原発腫瘍または原発がんとは異なる１つ以上の他の部位、位置または領域における転移の成長または増殖を減少させるかまたは阻害する工程；および４）転移が形成された後または確立された後に、追加の転移の形成または確立を減少させるかまたは阻害する工程を包含する。
転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成の細胞（その全部または一部が、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現する）は、「固形」細胞塊に凝集され得るか、または分散され得るか、もしくは拡散され得る。「固形」腫瘍とは、代表的には一緒に凝集して塊を形成する、がん、新形成または転移のことを指す。特定の非限定的な例としては、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃、肺、胃部、結腸、膀胱、グリアおよび子宮内膜の腫瘍／がんが挙げられる。
がん腫（上皮または内分泌の組織の悪性疾患のことを指す）には、呼吸器系がん腫、胃腸系がん腫、泌尿生殖路系がん腫、精巣がん腫、***がん腫、前立腺がん腫、内分泌系がん腫およびメラノーマが含まれる。例示的ながん腫としては、子宮、子宮頸部、肺、前立腺、***、頭頸部、結腸、膵臓、精巣、副腎、腎臓、食道、胃、肝臓および卵巣から形成されるがん腫が挙げられる。その用語は、がん肉腫（例えば、がん性および肉腫性の組織から構成される悪性の腫瘍を含む）も包含する。腺がんには、腺組織のがん腫、またはその腫瘍が腺様構造を形成するがん腫が含まれる。
肉腫とは、間葉系細胞起源の悪性の腫瘍のことを指す。例示的な肉腫としては、例えば、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫および線維肉腫が挙げられる。
神経性の新形成には、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫および乏突起膠細胞腫が含まれる。
「液体腫瘍（ｌｉｑｕｉｄ ｔｕｍｏｒ）」は、代表的には固体塊を形成しない、性質上、分散性または拡散性の新形成のことを指す。特定の例としては、細網内皮性または造血系の新形成（例えば、リンパ腫、骨髄腫および白血病）が挙げられる。白血病の非限定的な例としては、急性および慢性のリンパ芽球性、骨髄芽球性（ｍｙｅｏｌｂｌａｓｔｉｃ）および多発性の骨髄腫が挙げられる。代表的には、そのような疾患は、未分化型急性白血病、例えば、赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病から発生する。特定の骨髄性障害としては、急性前骨髄性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。リンパ系の悪性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（Ｂ細胞性ＡＬＬ（Ｂ−ＡＬＬ）およびＴ細胞性ＡＬＬ（Ｔ−ＡＬＬ）を含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＬＬ）およびワルデンシュトレーム（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｅｍ’ｓ）マクログロブリン血症（ＷＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の悪性リンパ腫としては、非ホジキンリンパ腫および亜型、末梢Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病およびリード・シュテルンベルク病が挙げられる。
本明細書中に開示されるように、望ましくないまたは異常な細胞増殖または過剰増殖性障害は、子宮、***、膣、子宮頸部、子宮内膜およびファロピウス管に生じ得る。したがって、本発明によると、子宮、***、膣、子宮頸部、子宮内膜およびファロピウス管の過剰増殖性障害を処置する方法が提供される。１つの実施形態において、方法は、子宮、***、膣、子宮頸部、子宮内膜またはファロピウス管の過剰増殖性障害を処置するのに十分な量の結合体を被験体に投与する工程を包含する。
抗細胞増殖活性または抗細胞増殖作用を有する任意の組成物、処置、プロトコル、治療またはレジメンが、結合体と併用され得るか、または本発明の方法と組み合わせて使用され得る。ゆえに、本発明の結合体および方法は、抗増殖性、抗腫瘍、抗がん、抗新形成および抗転移性の処置、プロトコルおよび治療を含み、それらは、過剰増殖性障害（例えば、腫瘍、がん、悪性または新形成の成長、進行、転移、増殖もしくは生存、またはインビトロもしくはインビボでの悪化）を阻害するか、低減させるか、遅らせるか、遅延させるか、減少させるか、または予防する、他の任意の組成物、処置、プロトコルまたは治療レジメンを含む。抗増殖性（例えば、腫瘍）治療の特定の非限定的な例としては、化学療法、免疫療法、放射線療法（電離または化学）、局所温熱療法（加温療法）、外科的切除およびワクチン接種が挙げられる。結合体は、抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がん、抗転移性または免疫増強の処置または治療の適用の前、それと実質的に同時に、またはその後に、投与され得る。結合体は、抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がん、抗転移性または免疫増強の処置または治療、転移性もしくは非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成との組み合わせ組成物として投与され得る。
抗増殖性、抗新形成、抗腫瘍、抗がんおよび抗転移性の組成物、治療、プロトコルまたは処置には、細胞周期の進行または細胞増殖を予防するか、妨害するか、中断するか、阻害するかもしくは遅延させるもの；アポトーシスもしくは細胞死を刺激するかもしくは増強するもの、核酸もしくはタンパク質の合成もしくは代謝を阻害するもの、細胞***を阻害するもの、あるいは細胞生存または必要な細胞生存因子、成長因子またはシグナル伝達経路（細胞外または細胞内）の産生もしくは利用を低減させるか、減少させるかまたは阻害するものが含まれる。抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がんおよび抗転移性の活性を有する化学剤のクラスの非限定的な例としては、アルキル化剤、抗代謝産物、植物抽出物、植物アルカロイド、ニトロソ尿素、ホルモン、ヌクレオシドアナログおよびヌクレオチドアナログが挙げられる。抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がんおよび抗転移性の活性を有する薬物の特定の例としては、シクロホスファミド、アザチオプリン、シクロスポリンＡ、プレドニゾロン、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン、ブスルファン、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、チオグアニン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド、ＡＺＴ、５−アザシチジン（５−ＡＺＣ）および５−アザシチジン関連化合物（例えば、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）（５−アザ−２’デオキシシチジン）、シタラビン、１−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−５−アザシトシンおよびジヒドロ−５−アザシチジン）、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾトシン、ヒドロキシ尿素、シスプラチン、ミトタン、プロカルバジン、ダカルバジン、タキソール、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシンおよびジブロモマンニトールなどが挙げられる。
結合体および方法とともに適用可能な追加の薬剤は、当該分野で公知であり、それらを使用することができる。例えば、生物製剤（例えば、抗体、細胞成長因子、細胞生存因子、細胞分化因子、サイトカインおよびケモカイン）が投与され得る。モノクローナル抗体の非限定的な例としては、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、ペルツズマブ（Ｏｍｎｉｔａｒｇ）、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ）などが挙げられ、それらは、とりわけ、本発明に係る結合体と組み合わせて使用され得る。その結合体とともに使用するために適用可能な他の標的化薬物は、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）（Ｔｙｋｅｒｂ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）（Ｓｕｔｅｎｔ）、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）（Ｎｅｖａｘａｒ）、ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ）などである。細胞成長因子、細胞生存因子、細胞分化因子、サイトカインおよびケモカインの非限定的な例としては、ＩＬ−２、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＴＮＦβ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＳＤＦ−１、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、エオタキシン、エオタキシン−２、
およびリンホタクチンが挙げられる。
追加の非限定的な例としては、細胞に基づく治療を含む、免疫増強の処置および治療が挙げられる。特に、免疫増強の処置および治療は、リンパ球、形質細胞、マクロファージ、樹状細胞、ＮＫ細胞およびＢ細胞の投与を含む。
転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を処置する方法、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を有するかまたはそれを有するリスクがあることに起因して処置を必要とする被験体を処置する方法、および有効性を高めるかまたは抗増殖性、抗腫瘍、抗がん、抗新形成もしくは抗悪性疾患の治療を改善する方法が提供される。それぞれの実施形態において、方法は、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を有するかまたはそのリスクのある被験体に、その転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を処置するのに十分な量の結合体を投与する工程；その被験体を処置するのに十分な量の結合体をその被験体に投与する工程；および転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成の治療を受けているかまたはそれを受けた被験体に、抗増殖性、抗腫瘍、抗がん、抗新形成または抗悪性疾患の治療の有効性を高めるのに十分な量の結合体を投与する工程を包含する。
本発明の方法は、望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性の障害、疾患もしくは状態のエビデンス（例えば、１つ以上の症状）が出現し始める前に（すなわち、予防）、それと同時に、またはその後に、実施され得る。望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性障害の症状を発症する前、それと同時、またはその直後の結合体の投与は、その被験体における望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性の障害、疾患もしくは状態の１つ以上の症状の出現、頻度、重症度、進行または持続時間を減少させ得る。さらに、望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性の障害、疾患もしくは状態の１つ以上の症状を発症する前、それと同時、またはその直後の結合体の投与は、被験体内の他の部位、領域、組織もしくは器官への過剰増殖細胞の拡散もしくは播種（例えば、転移）、または被験体内の他の部位、領域、組織もしくは器官における過剰増殖細胞の確立（例えば、転移）を阻害し得るか、減少させ得るか、または予防し得る。
本発明の結合体および方法（例えば、処置方法）は、検出可能または測定可能な治療的な利益または改善を被験体に提供し得る。治療的な利益または改善は、その被験体に対する、任意の測定可能もしくは検出可能な、客観的もしくは主観的な、一過性、一時的もしくはより長期間の利益、またはその被験体の組織、器官、細胞もしくは細胞集団における、状態、障害もしくは疾患、有害な症状、結果もしくは根本原因の任意の程度の改善である。治療的な利益および改善としては、障害、疾患もしくは状態に関連する１つ以上の症状もしくは合併症の出現、頻度、重症度、進行もしくは持続時間、またはその障害、疾患もしくは状態の根本原因もしくは結果として起こる作用を減少させるかまたは低減させることが挙げられるが、これらに限定されない。ゆえに、本発明の結合体および方法は、治療的な利益または改善を被験体に提供することを含む。
治療的な利益または改善が所望の結果である本発明の方法において、本発明の結合体は、それを必要とする被験体に十分量または有効量で投与され得る。「十分な量」または「有効な量」とは、単回投与または複数回投与において、単独で、または１つ以上の他の組成物（化学療法（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｕｔｉｃ）薬または免疫刺激薬などの治療薬）、処置、プロトコルもしくは治療レジメンの薬剤と組み合わせて、任意の長さの持続時間（長期間または短期間）の検出可能な応答、任意の測定可能もしくは検出可能な程度のまたは任意の長さの持続時間にわたる（例えば、数時間、数日間、数ヶ月間、数年間にわたるまたは治癒するまでの）、被験体における所望の結果または被験体に対する利益を提供する量のことを指す。処置のための（例えば、治療的な利益または改善を提供するための）用量または「十分量」または「有効量」は、代表的には、障害、疾患もしくは状態、またはその障害、疾患もしくは状態の１つ、複数もしくはすべての有害な症状、結果もしくは合併症を、測定可能な程度にまで回復させるのに有効であるが、その障害、疾患もしくは状態または症状の進行または悪化を減少させるかまたは阻害することが、良好な結果と考えられる。
用語「回復させる」は、被験体の状態の検出可能な客観的または主観的な改善を意味する。検出可能な改善には、障害、疾患もしくは状態によって引き起こされるかもしくはそれに関連する症状の出現、頻度、重症度、進行もしくは持続時間の主観的もしくは客観的な減少、その障害、疾患もしくは状態の根本原因もしくは結果の改善、またはその障害、疾患もしくは状態の逆転が含まれる。
ゆえに、処置は、障害、疾患もしくは状態または関連する症状もしくは結果あるいは根本原因を阻害し得るか、減少させ得るか、または予防し得るか；障害、疾患、状態、症状もしくは結果または根本原因の進行もしくは悪化を阻害し得るか、減少させ得るか、または予防し得るか；あるいはその障害、疾患状態または症状の１つ以上の追加の症状のさらなる増悪または出現を阻害し得るか、減少させ得るか、または予防し得る。したがって、成功した処置結果は、「治療効果」もしくは「利益」、または被験体における１つ以上の症状または根本原因または状態、障害、疾患もしくは症状の結果の出現、頻度、重症度、進行もしくは持続時間の阻害、減少もしくは予防をもたらす。ゆえに、その状態、障害、疾患または症状の１つ以上の根本原因に影響する処置方法は、有益であると考えられる。障害または状態の進行または悪化の安定化または阻害もまた、成功した処置結果である。
ゆえに、治療的な利益または改善は、上記状態、障害または疾患に関連するいずれか１つ、ほとんどまたはすべての症状、合併症、結果または根本原因の完全な消失である必要はない。したがって、良好なエンドポイントは、短いまたは長い持続時間（数時間、数日間、数週間、数ヶ月間など）にわたって、被験体の状態が漸増的に改善するとき、あるいは１つ以上の関連する有害な症状もしくは合併症または結果もしくは根本原因の出現、頻度、重症度、進行もしくは持続時間が部分的に減少するかまたはそれらが阻害されるかもしくは逆転するとき、その障害または疾患の生理学的な、生化学的なまたは細胞の徴候または特徴の１つ以上の悪化または進行（例えば、その状態、障害または疾患の１つ以上の症状または合併症の安定化）が部分的に減少するかまたはそれらが阻害されるかもしくは逆転するとき、達成される。
特定の実施形態において、処置方法は、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性または新形成の細胞の質量、体積、サイズまたは細胞数の部分的または完全な消失をもたらすか；転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性または新形成の細胞のネクローシス、溶解またはアポトーシスを刺激するか、誘導するかまたは増加するか；転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性または新形成の体積、サイズ、細胞質量を減少させるか；転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性もしくは新形成の進行またはその体積、質量、サイズもしくは細胞数の増加を阻害するかまたは予防するか；被験体内の他の（二次的な）部位、領域、組織もしくは器官への過剰増殖細胞の拡散もしくは播種（例えば、転移）、または被験体内の他の（二次的な）部位、領域、組織もしくは器官における過剰増殖細胞の確立（例えば、転移）を阻害するかまたは減少させるか；あるいは被験体の寿命を延長する。追加の特定の実施形態において、処置方法は、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成に関連するかまたはそれによって引き起こされる有害な症状または合併症の重症度、持続時間または頻度を減少させるかまたは低減させる。
十分量または有効量は、単回投与で提供され得るが、そのように提供される必要はなく、単独で、または別の組成物（例えば、化学療法剤または免疫増強剤もしくは免疫刺激剤）、処置、プロトコルもしくは治療レジメンと組み合わせて、投与され得るが、そのように投与される必要はない。例えば、その量は、被験体の要求、処置される障害、疾患もしくは状態の状況または処置の副作用によって示されるのと比例的に増加され得る。さらに、所与の被験体において有効であるかまたは十分であると考えられるために、十分量または有効量より多いそれらを超える追加の用量、量もしくは持続時間、または追加の組成物（例えば、化学療法剤または免疫刺激剤）、処置、プロトコルもしくは治療レジメンを含めてもよいので、第２の組成物（例えば、化学療法剤または免疫刺激剤）、処置、プロトコルまたは治療レジメンなしで単回投与または複数回投与で投与される場合、そのような十分量または有効量は、十分であるかまたは有効である必要はない。十分であると考えられる量には、別の処置、治療レジメンまたはプロトコルの使用を減少させる量も含まれる。
十分量または有効量は、処置される各々のおよびすべての被験体においても、所与の群または集団内の処置される被験体の大部分においても、予防的にまたは治療的に有効である必要はない。処置または治療方法にとって代表的であるように、一部の被験体は、所与の処置、治療レジメンまたはプロトコルに対してより高いまたは低い応答を示し得る。十分量または有効量とは、特定の被験体における十分性または有効性のことを指し、群または一般集団における十分性または有効性のことを指すわけではない。そのような量は、処置される状態（例えば、望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成））のタイプまたはステージ、所望の治療効果、ならびに個別の被験体（例えば、その被験体内のバイオアベイラビリティ、性別、年齢など）に部分的に依存し得る。
望ましくないまたは異常な細胞増殖（例えば、過剰増殖性障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成））に対する治療的な利益または改善の特定の非限定的な例としては、細胞のサイズ、質量または体積の減少、細胞のサイズ、質量または体積の増加の阻害、悪化または進行の遅延または阻害、細胞のネクローシス、溶解またはアポトーシスの刺激、新形成または腫瘍の悪性度または転移の減少または阻害、死亡率の低下、および被験体の寿命の延長が挙げられる。したがって、細胞のサイズ、質量、体積の増加または転移（安定化）の阻害または遅延は、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成の完全な消失が起きなかったとしても、たとえたった数日間、数週間または数ヶ月間でも寿命を延長し得る（死亡率を低下させ得る）。減少され得るかまたは低減され得る過剰増殖性障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成）に関連する有害な症状および合併症としては、例えば、疼痛、悪心、不快、食欲不振、嗜眠および脱力が挙げられる。ゆえに、望ましくないまたは異常な細胞増殖（例えば、過剰増殖性障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成））の症状の出現、頻度、重症度、進行または持続時間の減少（例えば、主観的な感覚の改善（例えば、エネルギー増加、食欲増加、悪心の減少、運動性の改善または心理的に良好な状態など））はすべて、治療的な利益または改善の例である。
例えば、結合体の十分量または有効量は、その投与によって、望ましくないまたは異常な細胞増殖（例えば、過剰増殖性障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成））の処置に必要な化学療法薬、放射線照射または免疫療法がより少なくなる場合に、治療効果を有すると考えられる。
用語「被験体」とは、動物、代表的には、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、マカク）、家庭内の動物（イヌおよびネコ）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）および実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）のことを指す。被験体には、動物疾患モデル、例えば、インビボにおいて結合体を解析するための、望ましくないまたは異常な細胞増殖（例えば、過剰増殖性障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成））の動物モデルが含まれる。
処置にとって適切な被験体は、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性または新形成の細胞を有するかまたはそれを有するリスクのある被験体、抗増殖性の（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成の）治療を受けている被験体、ならびに、それを受けているかまたはそれを受けた被験体（その腫瘍が緩解状態である被験体を含む）を含む。「リスクのある」被験体は、代表的には、望ましくないまたは異常な細胞の増殖、過形成（例えば、腫瘍）の発症に関連する危険因子を有する。
リスクのある被験体または被験体候補の特定の例としては、結合体が結合し得るＨｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞を有する者が挙げられ、ここで、特に、ネクローシス、溶解、殺滅または破壊のために標的化される細胞は、非標的細胞よりも多い数または多い量のＨｅｒ２／ｎｅｕを発現している。そのような細胞は、ネクローシス、溶解または殺滅のために選択的または優先的に標的化され得る。
リスクのある被験体には、外科的切除、化学療法、免疫療法、電離もしくは化学放射線療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種の候補およびそれを受けた被験体も含まれる。ゆえに、本発明は、転移性もしくは非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患もしくは新形成、または例えば安定もしくは緩解の期間の後の転移性もしくは非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患もしくは新形成の再出現または再成長に起因する、転移性もしくは非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患もしくは新形成に関連する合併症のリスクのある被験体の処置に適用可能である。
危険因子としては、性別、生活習慣（食事、喫煙）、職業（医療および臨床の職員、農業および畜産業）、環境要因（発がん性物質への曝露）、家族歴（自己免疫障害、糖尿病など）、遺伝的素因などが挙げられる。例えば、メラノーマを発症するリスクのある被験体には、過度の日光曝露（紫外線照射）、色白の皮膚、多数の母斑（異形成母斑）、患者の表現型、家族歴または以前のメラノーマの病歴が含まれる。ゆえに、がんを発症するリスクのある被験体は、生活習慣、職業、環境要因、家族歴、および腫瘍関連遺伝子、遺伝子欠失または遺伝子変異に対する遺伝的スクリーニングによって同定され得る。乳がんを発症するリスクのある被験体は、例えば、Ｂｒｃａ１を欠く。結腸がんを発症するリスクのある被験体は、例えば、早期もしくは高頻度のポリープ形成を有するか、または欠失したまたは変異したがん抑制遺伝子を有する（例えば、大腸腺腫性ポリポーシス（ＡＰＣ））。
被験体には、他の処置から除外された被験体も含まれる。例えば、ある特定の被験体は、外科的切除、化学療法、免疫療法、電離もしくは化学放射線療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種に対しては優良な候補でない場合がある。したがって、本発明に係る処置の被験体候補には、外科的切除、化学療法、免疫療法、電離もしくは化学放射線療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種の候補でない者が含まれる。
結合体は、単位用量または単位剤形に製剤化され得る。特定の実施形態において、結合体は、望ましくないもしくは異常な細胞増殖または過剰増殖性障害を有する被験体を処置するのに有効な量で存在する。追加の特定の実施形態において、結合体は、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成を有する被験体を処置するのに有効な量で存在する。例示的な単位用量は、約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００または２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００ｎｇ；および約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００または２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００μｇの範囲である。
本発明の組成物および方法は、インビトロ、エキソビボまたはインビボにおいて、接触され得るか、または提供され得る。組成物は、単回投与量または複数回投与量として、例えば、有効量または十分量で、意図される効果をもたらすように投与され得る。例示的な用量は、連日、または１日おきに、または断続的に、約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００または２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００ｐｇ／ｋｇ；約５０〜５００、５００〜５０００、５０００〜２５，０００または２５，０００〜５０，０００ｎｇ／ｋｇ；および約２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１０００、１０００〜２５００または２５００〜５０００、５０００〜２５，０００、５０００〜５０，０００μｇ／ｋｇの範囲である。単回用量または複数回用量が、連日、１日おきに、または断続的に、投与され得る。
任意の経路による、全身投与、領域投与または局部投与によって、組成物が投与され得、方法が実施され得る。例えば、結合体は、全身性に、領域性にまたは局部性に、静脈内に、経口的に（例えば、経口摂取または吸入）、筋肉内に、腹腔内に、皮内に、皮下に、腔内に、頭蓋内に、経皮的に（局所的に）、非経口的に、例えば、経粘膜的に、または直腸に投与され得る。薬学的製剤を含む本発明の組成物および方法は、（マイクロ）カプセル送達系を介して投与され得るか、または投与用の埋没物中に詰められ得る。
本発明はさらに、結合体および方法を提供し、ここで、その結合体は、薬学的組成物中に含められる。薬学的組成物とは、「薬学的に許容され得る」および「生理的に許容され得る」キャリア、希釈剤または賦形剤のことを指す。本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得る」および「生理的に許容され得る」は、キャリア、希釈剤または賦形剤に対して言及しているとき、薬学的投与およびその製剤の他の構成要素と適合性の、溶媒（水性または非水性）、界面活性剤、溶液、エマルジョン、分散媒、コーティング、等張剤および吸収促進剤または吸収遅延剤を含む。そのような製剤は、錠剤（コーティングされているかまたはコーティングされていない）、カプセル（硬または軟）、マイクロビーズ、エマルジョン、散剤、顆粒剤、結晶、懸濁液、シロップ剤またはエリキシル剤中に含められ得る。
薬学的組成物は、特定の投与経路と適合性であるように製剤化され得る。非経口、皮内または皮下投与用の組成物は、滅菌された希釈剤（例えば、水、食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）を含み得る。その調製物は、微生物の成長を防止するために１つ以上の保存剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度を調整するための薬剤）を含み得る。
注射用の薬学的組成物には、滅菌された水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌された注射可能な溶液または分散液の即時調製用の滅菌された粉末が含まれる。静脈内投与の場合、好適なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。そのキャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用すること、または界面活性物質を使用することによって、維持され得る。抗菌剤および抗真菌剤としては、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸およびチメロサールが挙げられる。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによって、注射可能な組成物の吸収が延長し得る。
追加の薬学的製剤および送達系は、当業者に公知であり、本発明の方法において適用可能である（例えば、
を参照のこと）。
本発明は、好適な包装材料に包装された、本発明の結合体、組み合わせ組成物およびそれらの薬学的製剤を備えるキットを提供する。キットは、必要に応じて、構成要素の説明を含むラベルもしくは添付文書、またはその中の構成要素をインビトロ、インビボもしくはエキソビボにおいて使用するための指示書を備える。例示的な指示書としては、細胞の増殖を減少させるかもしくは阻害するための指示書、望ましくないもしくは異常な細胞（例えば、過剰増殖細胞）の増殖を減少させるかもしくは阻害するための指示書、転移性もしくは非転移性の腫瘍、がん、悪性もしくは新形成の細胞の増殖を減少させるかもしくは阻害するための指示書、過剰増殖性障害を有する被験体を処置するための指示書、転移性もしくは非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患もしくは新形成を有する被験体を処置するための指示書、または動物の繁殖可能性を低下させるための指示書が挙げられる。
キットは、そのような構成要素の一群、例えば、２つ以上の結合体を単独でまたは別の治療的に有用な組成物（例えば、抗増殖薬または免疫増強薬）と組み合わせて備え得る。
用語「包装材料」とは、キットの構成要素を収容する物理的構造のことを指す。その包装材料は、その構成要素を無菌に維持し得、そのような目的のために通常使用される材料（例えば、紙、段ボール（ｃｏｒｒｕｇａｔｅｄ ｆｉｂｅｒ）、ガラス、プラスチック、泊、アンプル、バイアル、チューブなど）から作製され得る。
本発明のキットは、ラベルまたは挿入文書（ｉｎｓｅｒｔ）を備え得る。ラベルまたは挿入文書には、「印刷物」、例えば、紙もしくは厚紙、あるいは構成要素、キットもしくは包装材料（例えば、箱）とは別個のものもしくはそれらに貼付されたもの、またはキットの構成要素を含むアンプル、チューブもしくはバイアルに接着されたものが含まれる。ラベルまたは挿入文書には、コンピュータ可読媒体（例えば、ディスク（例えば、フロッピー（登録商標）ディスケット、ハードディスク、ＺＩＰディスク）、光ディスク（例えば、ＣＤ−またはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ）、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープまたは電気的記憶媒体（例えば、ＲＡＭおよびＲＯＭ）またはこれらのハイブリッド（例えば、磁気／光学式記憶媒体、ＦＬＡＳＨメディアまたはメモリータイプカード））がさらに含まれ得る。
ラベルまたは挿入文書は、その中の１つ以上の構成要素の識別情報、用量、活性成分の臨床薬理学（作用機序、薬物動態および薬力学を含む）を含み得る。ラベルまたは挿入文書は、製造者情報、ロット番号、製造者の所在地および日付を特定する情報を含み得る。
ラベルまたは挿入文書は、キットの構成要素を使用してもよい状態、障害、疾患または症状に関する情報を含み得る。ラベルまたは挿入文書は、方法、処置プロトコルまたは治療レジメンにおいて、そのキットの構成要素の１つ以上を使用するための臨床医または被験体に対する指示を含み得る。指示には、投与の量、頻度または持続時間、および本明細書中に示される方法、処置プロトコルまたは治療レジメンのいずれかを実施するための指示が含まれ得る。例示的な指示としては、望ましくないまたは異常な細胞増殖、過剰増殖細胞および障害（例えば、転移性または非転移性の腫瘍、がん、悪性疾患または新形成）を処置するための指示が挙げられる。ゆえに、本発明のキットは、本明細書中に記載される本発明の方法（処置方法を含む）のいずれかを実施するためのラベルまたは指示書をさらに備え得る。
ラベルまたは挿入文書は、構成要素が提供し得る任意の利益（例えば、予防的または治療的な利益）に関する情報を含み得る。ラベルまたは挿入文書は、潜在的な有害な副作用に関する情報（例えば、特定の組成物を使用するのに適切でない可能性がある状況に関する被験体または臨床医に対する警告）を含み得る。有害な副作用は、被験体が、組成物と適合しない可能性がある１つ以上の他の医薬を摂取していたとき、摂取することになっているとき、もしくは同時に摂取するとき、または被験体が、組成物と適合しない可能性がある別の処置プロトコルまたは治療レジメンを受けていたとき、受けることになっているとき、もしくは同時に受けるときにも起き得るので、指示書は、そのような不適合性に関する情報を含み得る。
本発明のキットは、他の構成要素をさらに備え得る。そのキットの各構成要素は、個別の容器の中に封入され得、その様々な容器のすべてが、単一の包装の中に入れられ得る。本発明のキットは、冷蔵保存用に設計され得る。本発明のキットは、さらに、本発明の結合体を発現するかまたは結合体をコードする核酸を含む宿主細胞を含むように設計され得る。そのキット内の細胞は、その細胞を使用する準備が整うまで、適切な保存条件下で維持され得る。例えば、１種以上の細胞を備えるキットは、それらの細胞が解凍され得、増殖され得るように、適切な細胞保存培地を備え得る。
別段定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または等価な方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が本明細書中に記載される。
本明細書中に引用されるすべての出願、刊行物、特許および他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ引用およびＡＴＣＣ引用は、それらの全体が参考として援用される。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配するものとする。
本明細書中で使用されるとき、単数形「ａ」、「および」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別のことを示さない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「結合体」または「Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンド」または「溶解性ドメイン」に対する言及は、複数のそのような結合体、リガンドまたは溶解性ドメインなどを含む。
本明細書中で使用されるとき、数値は、本文書全体を通じてしばしば範囲の形式で示される。範囲の形式の使用は、単に便宜のためおよび簡潔さのためであり、文脈が明らかに別のことを示さない限り、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されるべきでない。したがって、ある範囲の使用は、文脈が明らかに別のことを示さない限り、すべての可能性のある部分的な範囲、その範囲内のすべての個別の数値、ならびにその範囲内の整数およびその範囲内の値の分数または整数を含むすべての数値または数値範囲を明確に含む。この解釈は、その範囲の幅に関係なく、かつ本特許文書全体のすべての文脈において、適用される。したがって、例えば、９０〜１００％の範囲に対する言及は、９１〜９９％、９２〜９８％、９３〜９５％、９１〜９８％、９１〜９７％、９１〜９６％、９１〜９５％、９１〜９４％、９１〜９３％などを含む。９０〜１００％の範囲に対する言及はまた、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、ならびに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％なども含む。
さらに、１〜５，０００倍の範囲に対する言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍など、ならびに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５倍など、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍など、およびそのような範囲内の任意の数値範囲（例えば、１〜２、５〜１０、１０〜５０、５０〜１００、１００〜５００、１００〜１０００、５００〜１０００、１０００〜２０００、１０００〜５０００）などを含む。さらなる例において、ＫＤ１０−５Ｍ〜約ＫＤ１０−１３Ｍの範囲に対する言及は、そのような値以内のまたはそのような値を包含する任意の数値または数値範囲を含む。
本明細書中で使用されるように、一連の範囲が本文書全体を通じて開示される。一連の範囲の使用は、別の範囲を提供するより高い範囲およびより低い範囲の組み合わせを含む。この解釈は、その範囲の幅に関係なく、かつ本特許文書全体のすべての文脈において、適用される。したがって、例えば、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０および１５０〜１７１などの一連の範囲に対する言及は、５〜２０、５〜３０、５〜４０、５〜５０、５〜７５、５〜１００、５〜１５０、５〜１７１および１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、１０〜７５、１０〜１００、１０〜１５０、１０〜１７１および２０〜４０、２０〜５０、２０〜７５、２０〜１００、２０〜１５０、２０〜１７１などの範囲を含む。
本発明は、通常、多数の実施形態を記載するために肯定的な言語を用いて本明細書中に開示される。本発明はまた、特定の主題（例えば、物質もしくは材料、方法の工程および条件、プロトコル、手順、アッセイまたは解析）が全部または部分的に排除される実施形態を明確に含む。したがって、本発明は、本発明が含まないものに関して本明細書中に広く表現されなかったとしても、それにもかかわらず、本発明に明白に含まれない態様が、本明細書中に開示される。
本発明のいくつかの実施形態が記載されている。それにもかかわらず、本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な改変が行われ得ると理解されるだろう。したがって、以下の実施例は、請求項に記載される本発明の範囲を限定するのではなく、例証すると意図される。
実施例１
インビトロ研究において組換え的に生成された抗体の細胞傷害性を測定するために（抗体として）、Ｈｅｒ−２レセプターに対するｓｃＦｖ−ＣＨ３を、溶解性ペプチドであるＰｈｏｒ−１８（ＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫ）または（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫに結合体化した。様々なリンカー（ＧＳおよびＮＲＶＲＲＳ）、および抗体分子１つあたり１または２分子の溶解性ペプチドを研究した。
研究されたペプチドは：Ｐｈｏｒ１８−ｓｃＦｖ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８（２分子のＰｈｏｒ−１８が抗体のＮおよびＣ末端に接続されたもの）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８（１分子のＰｈｏｒ−１８がＣ末端においてＧＳリンカーによって抗体に接続されたもの）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫ（１分子の（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫがＣ末端においてＧＳリンカーによって抗体に連結されたもの）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−−ＮＲＶＲＲＳ−Ｐｈｏｒ−１８（１分子のＰｈｏｒ−１８がＣ末端においてＮＲＶＲＲＳリンカーによって抗体に連結されたもの）、およびｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＮＲＶＲＲＳ−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫ（１分子の（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫがＣ末端においてＮＲＶＲＲＳリンカーによって抗体に連結されたもの）だった。Ｈｅｒ−２レセプター陽性細胞（ＳＫＢＲ−３およびＳＫＯＶ−３、それぞれヒト乳がん細胞およびヒト卵巣がん細胞）およびＨｅｒ−２レセプター陰性乳がん細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）において、細胞傷害性を裸の抗体（溶解性ペプチドを有しない抗体）と比較した。
実施例２
この実施例では、本明細書中に記載される研究において使用された様々な材料および方法を記載する。
材料：組換えＤＮＡ法を用いることにより、抗Ｈｅｒ２抗体を組換え抗体として大腸菌において合成した。ｓｃＦＶ−ＣＨ３抗体（Ｏｌａｆｓｅｎ Ｔ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １７，３１５−３２３，２００４）を、表１に記載されるようにペプチドリンカーを介してまたはリンカーなしで、Ｐｈｏｒ−１８または両親媒性アルファ−ヘリックス溶解性ペプチド（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫのいずれかに結合体化し、インビトロにおいて細胞傷害性について解析した。そのプラスミドは、遺伝子のコドン最適化によって得た。その遺伝子を、Ｎ−Ｈｉｓタグ配列とともに合成し、そのプラスミドを大腸菌発現ベクターｐＵＣ５７にサブクローニングした。発現の最適化および評価の後、Ｈｉｓ−タグ産物を選択し、１Ｌの細菌発現産物を、１工程の親和性精製において精製した。各構築物に対するプラスミド遺伝子挿入物の配列を、表１に記載する。
表１：組換えＨｅｒ２／ｎｅｕ抗体および抗体結合体の各々を生成するためのプラスミド挿入物のヌクレオチド配列。
モノクローナル抗Ｈｅｒ２抗体ＩｇＧ１（ＭＡｂ）へのＰｈｏｒ−１８の化学的結合体化：リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の精製された抗体を、およそ２ｍｇ／ｍＬの濃度に濃縮する。Ｎ−スクシニジル−３−（２−ピリジロチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）の２０ｍＭ溶液を、新たにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に調製し、その抗体溶液に２０倍過剰で加える。その混合物を室温で約３０分間インキュベートすることにより、抗体−リンカー中間体を生成する。過剰な未反応のＳＰＤＰをサイズ排除により除去する。システインを含む細胞傷害性分子を、１０倍過剰のレダクタクリル（ｒｅｄｕｃｔａｃｒｙｌ）試薬との反応によって完全に還元した後、抗体−リンカー構築物と１０倍過剰で混合する。その反応物を室温で１８時間インキュベートし、次いで、脱塩することにより、未反応の細胞毒分子を除去する。その溶液を、貯蔵前に濾過滅菌する。
インビトロ：組換え抗体調製物（結合体化されたものおよび結合体化されていないもの）の細胞傷害性を測定するために、インビトロ細胞傷害性研究を行い、溶解性ペプチドＰｈｏｒ−１８をコントロールインキュベーションにおいて使用した。９６ウェルプレートにおいて２，０００細胞／ウェルで細胞を調製し、４８時間にわたって接着させた。凍結乾燥された形態のＰｈｏｒ−１８を新たに食塩水に溶解し、０、０．００００１、０．０００１、０．００１、０．０１、０．１、１、１０、２５および１００μＭと濃度を上げながらマルチウェルプレートに加えた。Ｔｒｉｓ／ＨＣＬ緩衝液中の、Ｈｅｒ２抗体−Ｐｈｏｒ−１８結合体（Ｐｈｏｒ１８−ｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＮＲＶＲＲＳ−Ｐｈｏｒ−１８、Ｈｅｒ２抗体−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫ（ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫおよびｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＮＲＶＲＲＳ−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫ）またはｓｃＦＶ−ＣＨ３−レセプター抗体（裸）を、食塩水で希釈し、０、０．００１２、０．０１２、０．１２、１．２、６．０、１２．０、１２０、３６０および７２０ｎＭと濃度を上げながら細胞に加えた。３７℃において４８時間インキュベーションを行った。ホルマザン変換アッセイ（ＭＴＴアッセイ）を用いて細胞生存率を測定した。コントロールは、０および１００％細胞死に対する参照として、それぞれＵＳＰ食塩水または０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ＴＭを含んだ。すべてのデータを、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｚｍ４ＴＭソフトウェア（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｚｍ，Ｉｎｃ）を用いて処理し、解析した。
実施例３
この実施例では、抗Ｈｅｒ２−Ｐｈｏｒ−１８抗体結合体がｈｅｒ２発現乳がん細胞を殺滅したことを示唆する研究を記載する。
表２に示されるように、抗Ｈｅｒ２−Ｐｈｏｒ−１８抗体結合体（Ｐｈｏｒ１８−ｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＮＲＶＲＲＳ−Ｐｈｏｒ−１８）は、４８時間後までにＨｅｒ２陽性のヒト乳がんＳＫＢＲ−３およびヒト卵巣がんＳＫＯＶ−３細胞株を殺滅した一方で、Ｈｅｒ２陰性ヒト乳がんＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株は、殺滅されなかった。細胞傷害性の証拠は、インキュベーションの２４時間後でも顕微鏡によって観察された。予想どおり、結合体化されていないＰｈｏｒ−１８は、適度の細胞傷害性しか示さなかった。
Ｐｈｏｒ−１８に結合体化されたＨＥＲ２抗体は、溶解性ペプチド（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫに結合体化された抗体よりも有意に細胞傷害性だった（図１、表２）。Ｈｅｒ２陰性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞が、いずれの組換え抗体−溶解性ペプチド結合体によっても殺滅されなかったことから、それらの抗体の細胞傷害性は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕレセプターによって媒介されたことが示唆される。「裸の」（結合体化されていない）抗体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）は、３つすべての細胞株において細胞傷害性でなかったことから、その抗体−溶解性ペプチド結合体の細胞殺滅特性が、溶解性ペプチドの負荷の存在および溶解性ペプチドの配列に起因したと示唆される。また、予想どおり、結合体化されていないＰｈｏｒ−１８は、すべての細胞株において非常に最小の非特異的な細胞傷害性しか示さなかった（表２）。
表２：Ｈｅｒ２レセプター陽性ＳＫＯＶ−３、ＳＫＢＲ−３およびＨｅｒ２レセプター陰性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１がん細胞における、抗Ｈｅｒ２−Ｐｈｏｒ−１８抗体結合体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８および−ｓｃＦＶ−ＣＨ３−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫ結合体、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ ｓｃＦＶ−ＣＨ３）ならびに結合体化されていないＰｈｏｒ−１８のインビトロ細胞傷害性。値は、ｎＭの単位で表わされるＩＣ５０である。
上記の結果は、組換え的に生成されたＨｅｒ２抗体ｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８およびＨｅｒ２抗体ｓｃＦＶ−ＣＨ３−（ＫＬＡＫＬＡＫ）２ＫＬＡＫ結合体が、Ｈｅｒ２／ｎｅｕレセプター発現細胞株に対してナノモルの範囲において活性であることを示唆している。結合体化されていない抗体または遊離溶解性ペプチド（Ｐｈｏｒ−１８）は、効果がなかったことから、Ｈｅｒ２／ｎｅｕレセプターに結合するリガンド（例えば、抗体）に対する溶解性ペプチドの結合体化が、細胞傷害性の効力を増強すると示唆される。
実施例４
この実施例には、溶解性ペプチドＰｈｏｒ−１８（ＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫ）に結合体化された、Ｈｅｒ−２レセプターに対する組換え的に生成された抗体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８）、および化学的に結合体化されたＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８結合体の、Ｈｅｒ２陽性卵巣がん細胞株ＳＫＯＶ−３に対するインビトロ細胞傷害性研究の説明が含まれる。
９６ウェルプレートにおいて５，０００細胞／ウェルで細胞を調製し、４８時間にわたって接着させた。ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３を食塩水に希釈し、０、０．００１２、０．０１２、０．１２、１．２、６．０、１２、１２０、３６０および７２０ｎＭと濃度を上げながら加えた（濃度１つあたりＮ＝８データポイント）。３７℃において２４時間インキュベーションを行った。ホルマザン変換アッセイ（ＭＴＴアッセイ）を用いて細胞生存率を測定した。コントロールは、０および１００％細胞死に対する参照として、それぞれＵＳＰ食塩水または０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ＴＭを含んだ。
Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｚｍ４ＴＭソフトウェア（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｚｍ，Ｉｎｃ）を用いてデータを処理し、解析した。有意性に対する統計解析を両側のスチューデントのＴ検定によって行った。ホールＭＡｂ−Ｐｈｏｒ−１８では、６０．５３±３．８ｎＭのＩＣ５０値をもたらし、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８は、５９．８±３．８ｎＭだった。「裸の」（結合体化されていない）抗体（ＭＡｂおよびｓｃＦＶ−ＣＨ３）は、細胞傷害性でなかった。インビトロにおいて、化学的に連結されたＨＥＲ２抗体（ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８）および組換えＰｈｏｒ１８結合体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８）は、ＳＫＯＶ−３細胞に対して類似の毒性を示した一方で、裸の組換え抗体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）は、毒性でなかった。
実施例５
この実施例では、様々な用量の抗Ｈｅｒ２−Ｐｈｏｒ−１８抗体結合体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８、ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ１８）、裸のホール抗体（ＭＡｂ）および裸の組換え抗体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）での処置を用いた、ヒト卵巣がんのマウス異種移植片モデルにおけるインビボ研究を記載する。
雌Ｎｕ／Ｎｕマウスの皮下にＳＫＯＶ−３／Ｍａｔｒｉｇｅｌ懸濁液（４×１０６細胞）を注射した。４２日目に殺傷されたマウスの腫瘍重量をベースラインとした。簡潔には、１３０．３±１０．２５ｍｍ３という腫瘍体積の中央値の腫瘍に対して腫瘍細胞注射後の４３日目に処置を開始し、処置を外側尾静脈への単回のボーラス注射として４７、５０、５４、５７および６０日目に続けた。
この研究全体にわたって、腫瘍の体積を１週間に２回測定し、体重を計測した。最後のネクロプシーを、腫瘍細胞注射後の６４日目に行い、腫瘍を切除し、計量し、組織学的評価のためにホルマリン中で固定した。
処置は：食塩水コントロール、裸のモノクローナルホール抗Ｈｅｒ２抗体であるＭＡｂ（３ｍｇ／ｋｇ）、裸の組換えＨｅｒ２抗体（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）（３ｍｇ／ｋｇ）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８（０．３および３ｍｇ／ｋｇ）、ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ−１８（０．３および３ｍｇ／ｋｇ）だった。処置開始時に屠殺されたマウスの腫瘍を、Ｈｅｒ２／ｎｅｕレセプターの免疫組織化学評価に供した。各群は、８〜９匹のマウスからなった。
マウスのすべての群が、注射を十分許容した。マウスは、注射の結果として死亡することはなかった。
抗体に結合体化されたＰｈｏｒ−１８の注射および裸の抗体の、最初の腫瘍に対する作用（体積および腫瘍重量、図２Ａ、２Ｂおよび３）および体重に対する作用を図４に図示する。図２Ａおよび２Ｂは、研究経過中の腫瘍体積の中央値、ならびに食塩水コントロール、ならびにＭＡｂ（裸）（３ｍｇ／ｋｇ）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３（３ｍｇ／ｋｇ）、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８（０．３および３ｍｇ／ｋｇ）、ＭＡｂ−Ｐｈｏｒ−１８（０．３および３ｍｇ／ｋｇ）で処置されたマウスの各個別の処置群に対する６４日目の平均腫瘍重量を示している。
腫瘍の体積および重量は、３ｍｇ／ｋｇの化学的に連結されたＭＡｂ−Ｐｈｏｒ−１８（ｐ＜０．０４）または組換え的に生成されたｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ−１８結合体（ｐ＜０．０２）で処置されたすべての動物において有意に減少した。裸のＭＡｂまたはｓｃＦＶ−ＣＨ３は、３ｍｇ／ｋｇの用量において、食塩水コントロールと比べて腫瘍体積または腫瘍重量を減少させなかった（図２Ａ、２Ｂおよび３）。Ｇｒａｐｈｐａｄ ｐｒｉｚｍ４においてウィルコクソンの符号順位検定を用いて統計解析を行った。体重は、すべての処置群およびコントロール動物において安定していた（図４）。
実施例６
この実施例では、溶解性ペプチドＰｈｏｒ−１８（ＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫＦＡＫＫＦＡＫ）に結合体化された、Ｈｅｒ−２レセプターに対する組換え的に生成された抗体の、卵巣がん細胞に対するインビトロ細胞傷害性研究を記載する。
ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８（１分子のＰｈｏｒ−１８が、ＶＬ−−Ｇリンカー−−ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３−−Ｇリンカー−ＣＨ３−ＣＨ２−−ＶＨ−−−Ｇリンカー−ＶＬ−ＧＳ−（Ｐｈｏｒ−１８）からなるＧＳリンカーによってＣ末端において抗体に接続されたもの）。Ｈｅｒ−２レセプター陽性細胞（ＳＫＯＶ−３，ヒト卵巣がん細胞）における裸の抗体（ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３；溶解性ペプチドなしの抗体）と細胞傷害性を比較した。
材料：組換えＤＮＡ法を用いることにより、抗Ｈｅｒ２抗体をｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３抗体として大腸菌において合成した。その抗体（Ｏｌａｆｓｅｎ Ｔ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １７，３１５−３２３，２００４）を、ペプチドリンカーを介していずれかのＰｈｏｒ−１８に結合体化し、インビトロにおける細胞傷害性について解析した。そのプラスミドは、遺伝子のコドン最適化によって得た。その遺伝子を、Ｎ−Ｈｉｓタグ配列とともに合成し、そのプラスミドを大腸菌発現ベクターｐＵＣ５７にサブクローニングした。発現の最適化および評価の後、Ｈｉｓ−タグ産物を選択し、１Ｌの細菌発現産物を、１工程の親和性精製において精製した。各構築物に対するアミノ酸配列を、表３に記載する。
表３：各組換え抗体、（Ａ）ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３；および抗体結合体（Ｂ）ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８を生成するためのアミノ酸配列
インビトロ細胞傷害性研究を行うことにより、組換え抗体調製物（ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３、ｓｃＦＶ−ＣＨ３およびｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８）の細胞傷害性を測定した。Ｈｅｒ−２レセプター陽性ＳＫＯＶ−３細胞を、９６ウェルプレートにおいて２，０００細胞／ウェルで調製し、４８時間にわたって接着させた。Ｔｒｉｓ／ＨＣＬ緩衝液中のＨｅｒ２抗体−Ｐｈｏｒ−１８結合体（ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３−ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８、ｓｃＦＶ−ＣＨ３ＧＳ−Ｐｈｏｒ−１８）または裸の抗体（ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３、ｓｃＦＶ−ＣＨ３）を、食塩水で希釈し、０、０．００１２、０．０１２、０．１２、１．２、６．０、１２．０、１２０、３６０および７２０ｎＭと濃度を上げながら細胞に加えた。３７℃において４８時間インキュベーションを行った。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞生存率を測定した。コントロールは、０および１００％細胞死に対する参照として、それぞれＵＳＰ食塩水または０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ＴＭを含んだ。すべてのデータを、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｚｍ４ＴＭソフトウェア（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｚｍ，Ｉｎｃ）を用いて処理し、解析した。
Ｐｈｏｒ−１８に結合体化されたＨｅｒ２抗体（ｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３、ｓｃＦＶ−ＣＨ３）は、ｓｃＦＶ−ＣＨ３−Ｐｈｏｒ１８の場合は５３．７±０．６３ｎＭおよびｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｆｖ−Ｐｈｏｒ−１８の場合は５６．７±０．９２ｎＭというＩＣ５０値をもたらした。「裸の」（結合体化されていない）抗体であるｓｃＦｖ−ＣＨ２−ＣＨ３、ｓｃＦＶ−ＣＨ３は、細胞傷害性でなかった。インビトロにおける組換えＰｈｏｒ−１８結合体は、ＳＫＯＶ−３細胞に対して類似の毒性を示す。

Claims (71)

  1. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび第２のドメインを含む結合体であって、ここで、該第２のドメインは、
    から選択されるペプチドを含む１２〜１００アミノ酸の配列、または、
    から選択されるペプチドを含む１２〜１００アミノ酸の配列であって、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、１２〜１００アミノ酸の配列
    からなる、結合体。
  2. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合するリガンドおよび第２のドメインを含む結合体であって、ここで、該第２のドメインは、
    から選択されるアミノ酸配列；または
    から選択されるアミノ酸配列であって、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＫ残基、Ｋ、ＡもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＦ残基、またはＫ、ＦもしくはＬ残基のいずれかで置換された１つ以上のＡ残基を有する、アミノ酸配列
    からなる、結合体。
  3. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸または炭水化物を含む、請求項１または２に記載の結合体。
  4. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドが、線状構造または環状構造を有する、請求項１または２に記載の結合体。
  5. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドが、抗体または抗体フラグメントを含む、請求項１または２に記載の結合体。
  6. 前記抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、ラクダＩｇ、Ｖ−ＮＡＲ、ＶＨＨ、三重特異性（Ｆａｂ３）、二重特異性（Ｆａｂ２）、ダイアボディ（（ＶＬ−ＶＨ）２または（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディ（三価）、テトラボディ（四価）、ミニボディ（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、二重特異性一本鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ）、ＩｇＧデルタＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ、アフィボディ、アプタマー、アビマーまたはナノボディを含む、請求項５に記載の結合体。
  7. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドが、ホルモンまたは成長因子を含む、請求項１または２に記載の結合体。
  8. 前記ホルモンまたは前記成長因子が、ホルモンアナログまたは成長因子アナログ、ホルモンまたはホルモンアナログまたは成長因子または成長因子アナログのフラグメントであって、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する、フラグメントを含む、請求項７に記載の結合体。
  9. 前記リガンドが、アゴニストまたはアンタゴニストを含む、請求項１または２に記載の結合体。
  10. 前記抗体が、モノクローナル抗体を含む、請求項５に記載の結合体。
  11. 前記抗体が、哺乳動物抗体を含む、請求項５に記載の結合体。
  12. 前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体またはキメラ抗体を含む、請求項５に記載の結合体。
  13. 前記抗体が、トラスツズマブまたはペルツズマブを含む、請求項５に記載の結合体。
  14. 前記Ｈｅｒ２／ｎｅｕが、細胞上に発現されている、請求項１または２に記載の結合体。
  15. 前記細胞が、過剰増殖性細胞である、請求項１４に記載の結合体。
  16. 前記細胞が、***、卵巣、子宮、子宮頸部、胃、肺、胃部、結腸、膀胱、グリア、血液学的または子宮内膜の細胞である、請求項１４に記載の結合体。
  17. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドまたは前記第２のドメインが、約１〜１０、１０〜２０、１５〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００またはそれ以上のアミノ酸のアミノ酸配列からなるか、または該アミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の結合体。
  18. 前記第２のドメインが、約１０〜約５０アミノ酸の配列からなる、請求項１または２に記載の結合体。
  19. 前記第２のドメインが、約１０〜約２８アミノ酸の配列からなる、請求項１または２に記載の結合体。
  20. 前記第２のドメインが、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸を有する配列からなる、請求項１または２に記載の結合体。
  21. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドが、前記第２のドメインに対してＮＨ２末端に位置する、請求項１または２に記載の結合体。
  22. 前記第２のドメインが、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドに対してＮＨ２末端に位置するか、または該第２のドメインが、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する該リガンドに対してＣ末端に位置するか、またはＨｅｒ２／ｎｅｕに結合する該リガンドが、該第２のドメインに対してＮＨ２末端に位置するか、またはＨｅｒ２／ｎｅｕに結合する該リガンドが、該第２のドメインに対してＣ末端に位置する、請求項１または２に記載の結合体。
  23. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドまたは前記第２のドメインが、１つ以上のＤ−アミノ酸を有する、請求項１または２に記載の結合体。
  24. 前記第２のドメインが、両親媒性アルファ−ヘリックスを形成する、請求項１または２に記載の結合体。
  25. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドと前記第２のドメインとが、共有結合によって接続されている、請求項１または２に記載の結合体。
  26. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドと前記第２のドメインとが、ペプチドリンカーまたは非ペプチドリンカーによって接続されている、請求項１または２に記載の結合体。
  27. Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する前記リガンドと前記第２のドメインとが、１〜２５アミノ酸残基を有するペプチド配列または線状炭素鎖によって接続されている、請求項１または２に記載の結合体。
  28. 第３、第４、第５、第６または第７のドメインをさらに含む、請求項１または２に記載の結合体。
  29. 前記結合体が、単離されているか、または精製されている、請求項１または２に記載の結合体。
  30. 前記結合体が、混合物を含む、請求項１または２に記載の結合体。
  31. 請求項１または２に記載の結合体を含む組成物。
  32. 請求項１または２に記載の結合体を含む薬学的組成物。
  33. 請求項１または２に記載の結合体、および抗細胞増殖剤または免疫刺激剤を含む組成物。
  34. 望ましくない細胞増殖または過剰増殖性障害を有する被験体を処置するのに有効な量で、請求項１または２に記載の結合体を含む単位用量剤。
  35. 新形成、腫瘍またはがんを有する被験体を処置するのに有効な量で、請求項１または２に記載の結合体を含む単位用量剤。
  36. 請求項１または２に記載の結合体、および
    細胞の増殖を減少させるかもしくは阻害するため、過剰増殖細胞の増殖を減少させるかもしくは阻害するため、新形成、腫瘍もしくはがんの細胞の増殖を減少させるかもしくは阻害するため、過剰増殖性障害を有する被験体を処置するため、または新形成、腫瘍もしくはがんを有する被験体を処置するための指示書
    を備えるキット。
  37. 請求項１または２に記載の結合体をコードする核酸分子。
  38. 請求項３７に記載の核酸分子を含むベクター。
  39. 請求項３７に記載の核酸または請求項３８に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
  40. 請求項１または２に記載の結合体を発現する細胞。
  41. 細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法であって、細胞と、該細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  42. 細胞増殖を減少させるかまたは阻害する方法であって、細胞と、細胞増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  43. 過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法であって、細胞と、過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  44. 新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害する方法であって、該細胞と、該新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  45. 前記細胞が、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している、請求項４１〜４４のいずれかに記載の方法。
  46. Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法であって、該細胞と、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している該細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  47. Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している過剰増殖細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法であって、該細胞と、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している該過剰増殖細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  48. レセプターまたは抗原を発現している新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を選択的に減少させるかまたは阻害する方法であって、該細胞と、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現している該新形成、腫瘍、がんまたは悪性の細胞の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体とを接触させる工程を包含する、方法。
  49. 過剰増殖性障害を有する被験体を処置する方法であって、該過剰増殖性障害を処置するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
  50. 新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患を有する被験体を処置する方法であって、該新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患の増殖を減少させるかまたは阻害するのに十分な量の請求項１または２に記載の結合体を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
  51. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、転移性、非転移性または良性である、請求項４８または５０に記載の方法。
  52. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、固形細胞塊を含む、請求項４８または５０に記載の方法。
  53. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、造血細胞を含む、請求項４８または５０に記載の方法。
  54. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、がん腫、肉腫、リンパ腫、白血病、アデノーマ、腺がん、メラノーマ、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、乏突起膠細胞腫、中皮腫、細網内皮性、リンパ性または造血性の新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患を含む、請求項４８または５０に記載の方法。
  55. 前記肉腫が、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫または線維肉腫を含む、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記造血性の新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、骨髄腫、リンパ腫または白血病を含む、請求項５４に記載の方法。
  57. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、肺、甲状腺、頭頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻または洞、脳、脊柱、***、副腎、脳下垂体、甲状腺、リンパ、胃腸（口腔、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖路（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉または皮膚、ウィルムス、胆管、Ｂ−ＡＬＬまたは血液学的な新形成、腫瘍またはがんを含む、請求項４８または５０に記載の方法。
  58. 前記肺の新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、小細胞肺がんまたは非小細胞肺がんを含む、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患が、幹細胞の新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患を含む、請求項４８または５０に記載の方法。
  60. 前記新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患の再発または進行を阻害するかまたは減少させる、請求項４８または５０に記載の方法。
  61. 抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がんまたは免疫増強の処置または治療を適用する工程をさらに包含する、請求項４８または５０に記載の方法。
  62. 前記処置または治療が、外科的切除、放射線療法、電離もしくは化学放射線治療、化学療法、免疫療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種を含む、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記結合体が、前記抗細胞増殖、抗新形成、抗腫瘍、抗がんまたは免疫増強の処置または治療の適用の前、該適用と実質的に同時に、または該適用の後に投与される、請求項６１に記載の方法。
  64. 前記被験体が、外科的切除、化学療法、免疫療法、電離もしくは化学放射線療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種を受けたことがある、請求項４８または５０に記載の方法。
  65. 前記被験体が、外科的切除、化学療法、免疫療法、電離もしくは化学放射線療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種の候補である、請求項４８または５０に記載の方法。
  66. 前記被験体が、外科的切除、化学療法、免疫療法、電離もしくは化学放射線療法、局所もしくは領域温熱療法（加温療法）またはワクチン接種の候補ではない、請求項４８または５０に記載の方法。
  67. 前記処置が、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性の細胞の質量、体積、サイズもしくは細胞数の部分的もしくは完全な消失をもたらすか、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性の細胞のネクローシス、溶解もしくはアポトーシスを刺激するか、誘導するかもしくは増加させるか、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の体積、サイズ、細胞質量を減少させるか、新形成、腫瘍、がんもしくは悪性疾患の進行もしくはそれらの体積、質量、サイズもしくは細胞数の増加を阻害するかもしくは予防するか、または寿命の延長をもたらす、請求項４８または５０に記載の方法。
  68. 前記処置が、新形成、腫瘍、がんまたは悪性疾患に関連するかまたはそれによって引き起こされる有害な症状または合併症の重症度、持続時間または頻度を減少させるかまたは低減させる、請求項４８または５０に記載の方法。
  69. 前記処置が、疼痛、不快、悪心、脱力もしくは嗜眠を減少させるかもしくは低減させるか、またはエネルギーの増加、食欲の増加、運動性の改善もしくは心理的に良好な状態をもたらす、請求項４８または５０に記載の方法。
  70. 前記被験体が、哺乳動物である、請求項４８または５０に記載の方法。
  71. 前記被験体が、ヒトである、請求項４８または５０に記載の方法。
JP2013508251A 2010-04-30 2011-04-28 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法 Pending JP2013531474A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US33000510P 2010-04-30 2010-04-30
US61/330,005 2010-04-30
US36260310P 2010-07-08 2010-07-08
US61/362,603 2010-07-08
PCT/US2011/034338 WO2011137245A2 (en) 2010-04-30 2011-04-28 Lytic-peptide-her2/neu (human epidermal growth factor receptor 2) ligand conjugates and methods of use

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016179731A Division JP6509169B2 (ja) 2010-04-30 2016-09-14 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2013531474A true JP2013531474A (ja) 2013-08-08

Family

ID=44862116

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2013508251A Pending JP2013531474A (ja) 2010-04-30 2011-04-28 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法
JP2016179731A Active JP6509169B2 (ja) 2010-04-30 2016-09-14 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016179731A Active JP6509169B2 (ja) 2010-04-30 2016-09-14 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法

Country Status (3)

Country Link
US (3) US9586996B2 (ja)
JP (2) JP2013531474A (ja)
WO (1) WO2011137245A2 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019500894A (ja) * 2015-11-04 2019-01-17 ジェイ． プライスマン，ソール Ｈｅｒ２を標的とするキメラ抗原受容体

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013531474A (ja) * 2010-04-30 2013-08-08 エスペランス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法
WO2013169377A1 (en) * 2012-05-10 2013-11-14 Massachusetts Institute Of Technology Agents for influenza neutralization
HUE034505T2 (en) * 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepine anti-her2 antibody conjugates
CN105121472A (zh) * 2012-10-30 2015-12-02 埃斯佩兰斯医药公司 抗体/药物缀合物及其使用方法
CN107614762B (zh) * 2015-02-24 2022-08-05 台湾地区“中央研究院” 一种由噬菌体表达的单链变异片段抗体库
WO2019126768A1 (en) * 2017-12-24 2019-06-27 Phoenix Biomolecular Engineering Foundation Composite, multidomain, genomically engineered molecules (gem)
CN115925972A (zh) * 2019-02-18 2023-04-07 Atb治疗公司 在植物细胞或整株植物中产生结合物-毒素融合蛋白的方法
US11058725B2 (en) 2019-09-10 2021-07-13 Obsidian Therapeutics, Inc. CA2 compositions and methods for tunable regulation

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08507749A (ja) * 1992-12-03 1996-08-20 マガイニン ファーマシューティカルズ，インク． 皮膚悪性疾患の生物学的活性を有するペプチドによる治療
JP2000514836A (ja) * 1997-03-27 2000-11-07 ボード オブ スーパーバイザーズ オブ ルイジアナ ステイト ユニバーシティー アンド アグリカルチュラル アンド メカニカル カレッジ リガンド／細胞溶解ペプチド組成物及びその使用方法
WO2007115033A2 (en) * 2006-03-31 2007-10-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Layered nanoparticles for sustained release of small molecules
WO2009036082A2 (en) * 2007-09-12 2009-03-19 Genentech, Inc. Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009042618A1 (en) * 2007-09-24 2009-04-02 Tragara Pharmaceuticals, Inc. Therapies for treating cancer using combinations of cox-2 inhibitors and anti-her2(erbb2) antibodies or combinations of cox-2 inhibitors and her2(erbb2) receptor tyrosine kinase inhibitors
WO2009094634A1 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Esperance Pharmaceuticals Lytic domain fusion constructs and methods of making and using same
WO2009114641A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Genentech, Inc. Antibodies with enhanced adcc function
JP2010154842A (ja) * 2008-12-03 2010-07-15 Koji Kawakami Ｅｇｆｒを標的にした新規抗がんキメラペプチド

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0590058B1 (en) * 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
US6635740B1 (en) * 1997-03-27 2003-10-21 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Ligand/lytic peptide compositions and methods of use
EP1189931B1 (en) * 1999-07-02 2006-06-21 Genentech, Inc. Peptide compounds that bind her2
US20120156134A1 (en) * 2007-12-20 2012-06-21 Shayne Squires Compositions and methods for detecting or eliminating senescent cells to diagnose or treat disease
US9562104B2 (en) * 2009-03-10 2017-02-07 Baylor Research Institute Anti-CD40 antibodies
WO2011031477A2 (en) * 2009-08-25 2011-03-17 Esperance Pharmaceuticals, Inc. Nucleolin-binding peptides, nucleolin-binding lytic peptides, fusion constructs and methods of making and using same
JP2013531474A (ja) * 2010-04-30 2013-08-08 エスペランス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08507749A (ja) * 1992-12-03 1996-08-20 マガイニン ファーマシューティカルズ，インク． 皮膚悪性疾患の生物学的活性を有するペプチドによる治療
JP2000514836A (ja) * 1997-03-27 2000-11-07 ボード オブ スーパーバイザーズ オブ ルイジアナ ステイト ユニバーシティー アンド アグリカルチュラル アンド メカニカル カレッジ リガンド／細胞溶解ペプチド組成物及びその使用方法
WO2007115033A2 (en) * 2006-03-31 2007-10-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Layered nanoparticles for sustained release of small molecules
WO2009036082A2 (en) * 2007-09-12 2009-03-19 Genentech, Inc. Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009042618A1 (en) * 2007-09-24 2009-04-02 Tragara Pharmaceuticals, Inc. Therapies for treating cancer using combinations of cox-2 inhibitors and anti-her2(erbb2) antibodies or combinations of cox-2 inhibitors and her2(erbb2) receptor tyrosine kinase inhibitors
WO2009094634A1 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Esperance Pharmaceuticals Lytic domain fusion constructs and methods of making and using same
WO2009114641A1 (en) * 2008-03-11 2009-09-17 Genentech, Inc. Antibodies with enhanced adcc function
JP2010154842A (ja) * 2008-12-03 2010-07-15 Koji Kawakami Ｅｇｆｒを標的にした新規抗がんキメラペプチド

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MOLECULAR AND CELLULAR ENDOCRINOLOGY, vol. vol. 260-262, JPN6013039873, 2007, pages 183 - 189, ISSN: 0003096633 *
PROTEIN ENGINEERING, DESIGN & SELECTION, vol. 17, no. 4, JPN6015024178, 2004, pages 315 - 323, ISSN: 0003096632 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019500894A (ja) * 2015-11-04 2019-01-17 ジェイ． プライスマン，ソール Ｈｅｒ２を標的とするキメラ抗原受容体
US11197919B2 (en) 2015-11-04 2021-12-14 City Of Hope Chimeric antigen receptors targeting HER2
JP2021192617A (ja) * 2015-11-04 2021-12-23 ジェイ． プライスマン，ソール Ｈｅｒ２を標的とするキメラ抗原受容体
JP7264954B2 (ja) 2015-11-04 2023-04-25 ジェイ． プライスマン，ソール Ｈｅｒ２を標的とするキメラ抗原受容体

Also Published As

Publication number Publication date
US9586996B2 (en) 2017-03-07
JP6509169B2 (ja) 2019-05-08
US10729740B2 (en) 2020-08-04
US20130157961A1 (en) 2013-06-20
WO2011137245A2 (en) 2011-11-03
JP2017043620A (ja) 2017-03-02
US20170157199A1 (en) 2017-06-08
WO2011137245A3 (en) 2012-08-02
US20200353032A1 (en) 2020-11-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6509169B2 (ja) 溶解性ペプチド−Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ヒト上皮成長因子レセプター２）リガンド結合体およびその使用方法
EP2914633B1 (en) Antibody/drug conjugates and methods of use
CN107849148B (zh) 三特异性结合蛋白质及使用方法
JP5616233B2 (ja) 溶解ドメイン融合コンストラクト及びその生成及び使用方法
US20110124564A1 (en) Nucleolin-binding peptides, nucleolin- binding lytic peptides, fusion constructs and methods of making and using same
WO2012050892A2 (en) Methods for stimulating, increasing or enhancing killing of a cell that expresses luteinizing hormone releasing hormone (lhrh) receptors
AU2013344701A1 (en) Follicle-stimulating hormone (FSH)/lytic domain fusion constructs and methods of making and using same
JP2010508020A (ja) Ｌｉｇｈｔを介する抗細胞増殖性組成物および方法
JP2023518977A (ja) 溶解性ドメイン融合構築物、チェックポイント阻害剤、およびそれらを作出し、使用する方法

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20140403

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20150616

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20150707

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20150812

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20150911

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20151215

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20160517