JP2013159564A - Tlr9 inhibitor including pyrazolopyrimidine-7-amine derivative as active ingredient - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a therapeutic agent which inhibits TLR9 and which is excellent in a prevention and/or therapeutic effect of/for autoimmune disease, inflammation, allergy, asthma, graft rejection, or graft versus host disease (GvHD).SOLUTION: A TLR9 inhibitor includes a compound represented by general formula (1), or a salt thereof, or a solvate of them as an active ingredient [wherein Rrepresents a halogen atom or a 1-6C alkyl group; L represents a 1-6C alkyl group; a ring A represents a five to seven membered nitrogen-containing saturated heterocyclic group; and ring B represents a bicyclic aromatic heterocyclic group which optionally includes at least one substituent selected from a group composed of a halogen atom, a 1-6C alkyl group, and a 1-6C alkyloxy group].

Description

本発明はＴｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）９阻害作用を有し、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防、及び／又は治療剤として有用な新規化合物に関する。   The present invention has a Toll-like receptor (TLR) 9 inhibitory action, and diseases caused by activation of TLR9 signal, such as rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), Sjogren's syndrome (SS) ), Multiple sclerosis (MS), inflammatory bowel disease (IBD), psoriatic arthritis, Behcet's syndrome, vasculitis and other autoimmune diseases, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease (GvHD) ) Novel compounds useful as preventive and / or therapeutic agents.

病原体が生体に侵入すると、免疫系はそれらの病原体をすみやかに識別し排除する。哺乳類では免疫系は大きく自然免疫と獲得免疫に分けることが出来る。獲得免疫では、遺伝子再構成という方法で無数の個々に異なる抗原特異性を有する受容体がＴ細胞やＢ細胞表面に発現され、あらゆる未知の外来抗原に対処する（非特許文献１）。   As pathogens enter the body, the immune system quickly identifies and eliminates them. In mammals, the immune system can be broadly divided into innate immunity and acquired immunity. In acquired immunity, a myriad of receptors having different antigen specificities are expressed on the surface of T cells and B cells by a method called gene rearrangement, and deal with any unknown foreign antigen (Non-patent Document 1).

一方で、マクロファージや樹状細胞などによって担われる自然免疫系は非特異的な免疫応答で微生物の排除が行われると考えられていたが、Ｔｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）の発見や樹状細胞を中心とした諸研究の急速な進展により、適応免疫系における抗原認識ほどの親和性や特異性は高くない、特徴的な微生物認識機構が存在していることが明らかになってきた（非特許文献２）。とくにＴＬＲに代表される細胞内にシグナルを伝達する認識受容体は、感染をいち早く前線においてキャッチするという役割のみならず、その後、細胞内にシグナルを伝え、自然免疫系活性化のスイッチをオンにする重要な役割がある。その意味において、これまで知られていた自然免疫系の活性化によって誘導されるＩ型インターフェロン等のサイトカインやケモカイン、そして抗原提示に関与する分子群の遺伝子発現誘導と、その後の適応免疫系の活性化へと連携させて特異的な免疫応答発動へと導くという経路が明らかとなった（非特許文献２）。   On the other hand, the innate immune system carried by macrophages, dendritic cells, etc. was thought to eliminate microorganisms with a nonspecific immune response, but discovery of a Toll-like receptor (TLR) As a result of the rapid progress of various researches centering on cells and dendritic cells, it has become clear that there is a characteristic microbial recognition mechanism that does not have as high affinity and specificity as antigen recognition in the adaptive immune system. (Non-Patent Document 2). In particular, recognition receptors that transmit signals into cells typified by TLRs not only play a role in catching infection at the front line, but also transmit signals to cells and turn on the activation of the innate immune system. There is an important role to play. In that sense, induction of gene expression of cytokines and chemokines such as type I interferon and the group of molecules involved in antigen presentation induced by activation of the innate immune system known so far, and subsequent activity of the adaptive immune system It has become clear that the pathway leads to activation of specific immune responses by coordinating with the development (Non-patent Document 2).

ＴＬＲ９は細菌のＣｐＧ ＤＮＡを認識して活性化される。ＣｐＧ ＤＮＡは細菌のゲノムＤＮＡの特徴的な配列で、メチル化されてないＣｐＧ配列がある頻度で繰り返されている。哺乳類のゲノムＤＮＡではＣｐＧ配列の頻度が少なく高頻度にメチル化されているため、免疫賦活作用はない（非特許文献３）。   TLR9 recognizes and activates bacterial CpG DNA. CpG DNA is a characteristic sequence of bacterial genomic DNA and is repeated at a certain frequency with an unmethylated CpG sequence. In mammalian genomic DNA, the frequency of CpG sequences is low and methylated frequently, so there is no immunostimulatory effect (Non-patent Document 3).

これまでＤＮＡセンサーの一つとして知られていたＴＬＲ９に関しては多くの研究がなされ、その詳細がかなり明らかになってきている。ＴＬＲ９はエンドソームやライソソームにおいて細胞外に存在するＤＮＡを認識する受容体として機能し、Ｉ型インターフェロンや炎症性サイトカインの遺伝子発現を誘導する。この両者ともＭｙＤ８８依存性のシグナル伝達経路を介するが、前者がＩＲＡＫ１／ＩＫＫα−ＩＲＦ−７が関与するのに対し、後者では、ＮＦ−κＢやＩＲＦ−５やＭＡＰキナーゼの経路が関与する。ＭｙＤ８８にはＩＲＦ−７やＩＲＦ−５の他に、ＩＲＦ−１やＩＲＦ−４が会合することが知られているが（非特許文献４、５、６）、ＴＬＲ９下流で関与するＩＲＦ転写因子の種類や役割は細胞の種類によって異なっている。   Much research has been done on TLR9, which has been known as a DNA sensor, and the details have become quite clear. TLR9 functions as a receptor for recognizing extracellular DNA in endosomes and lysosomes, and induces gene expression of type I interferon and inflammatory cytokines. Both are mediated by a MyD88-dependent signal transduction pathway, whereas the former involves IRAK1 / IKKα-IRF-7, while the latter involves NF-κB, IRF-5 and MAP kinase pathways. MyD88 is known to associate with IRF-1 and IRF-4 in addition to IRF-7 and IRF-5 (Non-Patent Documents 4, 5, and 6), but IRF transcription factors involved downstream of TLR9 The type and role vary depending on the cell type.

上記に示したようにＴＬＲ９はＤＮＡをリガンドとして認識するが、正常な状態では自己ＤＮＡはリガンドとして認識されず、自然免疫を活性化しない。これは細胞死により放出された自己ＤＮＡは血清中のヌクレアーゼによりＴＬＲにより認識される前に分解されるからである。またＴＬＲ９の細胞表面ではなく、エンドソームでの細胞内局在も自己ＤＮＡを認識しない機構として考えられている。しかしながら、自己免疫反応や炎症が起こっている状況下ではこのような防御機構が破綻し、内在性のタンパク質と複合体を形成し、ＴＬＲ９シグナルを活性化することが考えられる（非特許文献７）。   As shown above, TLR9 recognizes DNA as a ligand, but in a normal state, self DNA is not recognized as a ligand and does not activate innate immunity. This is because the self DNA released by cell death is degraded before being recognized by the TLR by nucleases in the serum. In addition, intracellular localization of TLR9, not the cell surface, is also considered as a mechanism that does not recognize self DNA. However, under the circumstances where autoimmune reaction or inflammation occurs, it is considered that such a defense mechanism breaks down, forms a complex with an endogenous protein, and activates the TLR9 signal (Non-patent Document 7). .

これらのことからＴＬＲ９を阻害することにより、ＲＡ、ＳＬＥ、ＳＳ、ＭＳ、ＩＢＤ、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又はＧｖＨＤを改善することが可能であると考えられる。   Therefore, inhibiting TLR9 improves RA, SLE, SS, MS, IBD, psoriatic arthritis, autoimmune diseases such as Behcet's syndrome or vasculitis, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or GvHD It is considered possible.

ＲＡについてはＴＬＲ９阻害作用を有する核酸配列を用いて、ＴＬＲ９を阻害することによりプリスタン誘導性ラット関節炎モデルにおいて発症と病態が抑制されたことが報告されている（非特許文献８）。また抗マラリア薬であるヒドロキシクロロキンはエンドソームの酸性化抑制によりＴＬＲ７、９の阻害作用を有していることが知られ、日本を除くほとんどの国でＲＡ、ＳＬＥの治療薬として承認されている（非特許文献９）。   Regarding RA, it has been reported that onset and pathology were suppressed in a pristane-induced rat arthritis model by inhibiting TLR9 using a nucleic acid sequence having a TLR9 inhibitory effect (Non-patent Document 8). Further, hydroxychloroquine, which is an antimalarial drug, is known to have an inhibitory action on TLR7 and 9 by suppressing acidification of endosomes and is approved as a therapeutic drug for RA and SLE in most countries except Japan ( Non-patent document 9).

ＳＬＥについてはＴＬＲ９ノックアウトマウスにおいてＳＬＥ様の病体において見られる抗核抗体の減弱が報告されており（非特許文献１０）、ＴＬＲ９阻害作用を有する核酸を用いた実験においても同様の結果が報告されている（非特許文献１１）さらに同様の結果を有する低分子化合物についても報告されている（ＣＰＧ５２３６４：特許文献１）。   Regarding SLE, the attenuation of antinuclear antibodies observed in SLE-like pathogens in TLR9 knockout mice has been reported (Non-patent Document 10), and similar results have been reported in experiments using TLR9-inhibiting nucleic acids. (Non-Patent Document 11) Further, a low-molecular compound having a similar result has also been reported (CPG 52364: Patent Document 1).

ヒドロキシクロロキンはＴＬＲ９阻害作用としてはそれほど強くなく、さらに強いＴＬＲ９阻害作用を有する薬剤により、より強力な薬効が期待できる。またヒドロキシクロロキンにはクロロキン網膜症などの副作用が知られているが、異なる骨格の化合物により、このような副作用の懸念は払拭できる可能性も考えられる。したがって、強いＴＬＲ９阻害作用を示し、経口投与可能な低分子性の薬剤が、今後のＲＡ、ＳＬＥ、ＳＳ、ＭＳ、ＩＢＤ、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶及びＧｖＨＤの治療において有用であると考えられる。   Hydroxychloroquine is not so strong as a TLR9 inhibitory action, and a more potent medicinal effect can be expected from a drug having a stronger TLR9 inhibitory action. Hydroxychloroquine is known to have side effects such as chloroquine retinopathy, but the possibility of such side effects may be eliminated by compounds having different skeletons. Therefore, a low molecular weight drug that exhibits a strong TLR9 inhibitory action and can be administered orally will be used in future RA, SLE, SS, MS, IBD, psoriatic arthritis, Behcet's syndrome, vasculitis and other autoimmune diseases, inflammation, allergy It is considered useful in the treatment of asthma, graft rejection and GvHD.

一方、ピラゾロピリミジン誘導体としては、例えば、ＣＤＫ阻害作用を有し癌、炎症、関節炎、アルツハイマー病などの治療薬としての効果が知られている（特許文献２、３、４、５、６、７）。また、ＣＣＲ４機能調節作用を有し、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、関節炎リウマチ、全身性エリテマトーデスなどの治療薬としての効果も知られている（特許文献８、９）。しかしながら、これらの文献に開示されている化合物は、ピラゾロピリミジン環上の置換基の組み合わせが本発明の化合物と異なる。また、これらいずれの文献においてもＴＬＲ阻害作用に関連する記載や示唆はない。   On the other hand, as a pyrazolopyrimidine derivative, for example, it has a CDK inhibitory action and is known to be effective as a therapeutic agent for cancer, inflammation, arthritis, Alzheimer's disease, etc. (Patent Documents 2, 3, 4, 5, 6, 7). In addition, it has a CCR4 function regulating action and is also known to be effective as a therapeutic agent for atopic dermatitis, bronchial asthma, rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, etc. (Patent Documents 8 and 9). However, the compounds disclosed in these documents differ from the compounds of the present invention in the combination of substituents on the pyrazolopyrimidine ring. In addition, none of these documents has any description or suggestion related to the TLR inhibitory action.

ＷＯ２００８／１５２４７１号パンフレットWO 2008/152471 pamphlet ＷＯ２００４／０２２５６１号パンフレットWO2004 / 022561 pamphlet ＷＯ２００５／０７７９５４号パンフレットWO2005 / 077954 pamphlet 特表２００９−５１１４８７号公報Special table 2009-511487 gazette ＷＯ２０１０／１１８２０７号パンフレットWO2010 / 118207 pamphlet ＷＯ２００８／１３０５７０号パンフレットWO2008 / 130570 pamphlet ＷＯ２００８／１３０５６９号パンフレットWO2008 / 130569 pamphlet ＷＯ２００７／０６３９３４号パンフレットWO2007 / 063934 Pamphlet 特開２００９−００７３４１号公報JP 2009-007341 A

植松智ら ウイルス、５４：１４５−１５２（２００４）Satoshi Uematsu et al. Virus, 54: 145-152 (2004) 高岡晃教ら ウイルス、５８：３７−４６（２００８）Takaoka Yunkyo et al. Virus, 58: 37-46 (2008) Ｔａｋｅｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．,Ａｎｎｕ．,Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．,２１：３３５−３７６（２００３）Takeda K et al. , Annu. Rev. Immunol. 21: 335-376 (2003) Ｈｏｎｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．,Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ,１０１：１５４１６−１５４２１（２００４）Honda K et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101: 15416-15421 (2004). Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．,Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ,１０２：１５９８９−１５９９４（２００５）Negishi H et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102: 15589-15994 (2005). Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．,Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ,１０３：１５１３６−１５１４１（２００６）Negishi H et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103: 15136-15141 (2006) Ｋｉｍ,Ｙ．Ｍ ｅｔ ａｌ．,Ｎａｔｕｒｅ，４５２：２３４−２３８（２００８）Kim, Y .; M et al. , Nature, 452: 234-238 (2008). Ｓ Ｈｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．,Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．,７０ ：Ａ３９ ｄｏｉ：１０．１１３６／ａｒｄ．２０１０．１４８９７３．８（２０１１）S Herman et al. , Ann. Rheum. Dis. , 70: A39 doi: 10.136 / ard. 2010.148973.8 (2011) 横川直人、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ,２８：８５−９１（２０１０）Naoto Yokokawa, Current Therapy, 28: 85-91 (2010) Ｓｅａｎ Ｒ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．,Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．,２０２：３２１−３３１（２００５）Sean R. Christensen et al. , J .; Exp. Med. 202: 321-331 (2005) Ｒａｈｕｌ Ｄ．Ｐａｗａｒｅｔ ａｌ．,Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １８：１７２１−１７３１（２００７）Rahul D. Poweret al. , J Am Soc Nephrol 18: 1721-1733 (2007)

本発明の目的は、低分子性のＴＬＲ９阻害作用を有する新規化合物を提供することにある。さらに詳細には、ＲＡ、ＳＬＥ、ＳＳ、ＭＳ、ＩＢＤ、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又はＧｖＨＤの予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。   An object of the present invention is to provide a novel compound having a low molecular weight TLR9 inhibitory action. More particularly, it is useful for the prevention and / or treatment of RA, SLE, SS, MS, IBD, psoriatic arthritis, Behcet's syndrome, vasculitis and other autoimmune diseases, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or GvHD To provide medicine.

上記実情に鑑み、本発明者らは、鋭意ＴＬＲ９阻害作用を持つ化合物を探索した結果、下記一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体が、ヒトＴＬＲ９を発現させたヒト胎児腎臓細胞由来のＨＥＫ２９３細胞を用いた試験においてＴＬＲ９阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。   In view of the above circumstances, as a result of searching for compounds having an inhibitory action on TLR9, the present inventors have found that a pyrazolopyrimidin-7-amine derivative represented by the following general formula (1) expresses human TLR9. In a test using HEK293 cells derived from fetal kidney cells, it was found to have a TLR9 inhibitory effect, and the present invention was completed.

すなわち本発明は、次の一般式（１）：   That is, the present invention provides the following general formula (1):

［式中、
Ｒ¹は、ハロゲン原子又はＣ_1-6アルキル基を示し、
Ｌは、Ｃ_1-6アルキレン基を示し、
環Ａは、５乃至７員の含窒素飽和複素環基を示し、
環Ｂは、ハロゲン原子、Ｃ_1-6アルキル基及びＣ_1-6アルキルオキシ基からなる群から選ばれる少なくとも１つの置換基を有してもよい２環性芳香族複素環基を示す］
で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。また、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９阻害剤に関する。さらに、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物に関する。 [Where:
R ¹ represents a halogen atom or a C _1-6 alkyl group,
L represents a C _1-6 alkylene group,
Ring A represents a 5- to 7-membered nitrogen-containing saturated heterocyclic group,
Ring B represents a bicyclic aromatic heterocyclic group which may have at least one substituent selected from the group consisting of a halogen atom, a C _1-6 alkyl group and a C _1-6 alkyloxy group]
Or a salt thereof, or a solvate thereof. Moreover, it is related with the TLR9 inhibitor which uses the compound or its salt as described in said General formula (1), or those solvates as an active ingredient. Furthermore, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the compound represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.

さらに詳細には、本発明は、
5-(1-((5-フルオロ-1-メチル-1H-インドール-3-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、
5-(1-((5-メトキシ-3-メチル-1H-インドール-2-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、及び
2-メチル-5-(1-((3-メチル-1H-インドール-2-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。 More particularly, the present invention provides:
5- (1-((5-fluoro-1-methyl-1H-indol-3-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine,
5- (1-((5-methoxy-3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine, and
Selected from the group consisting of 2-methyl-5- (1-((3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) pyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine At least one compound or a salt thereof, or a solvate thereof.

さらに詳細には、本発明は、
5-(1-((5-フルオロ-1-メチル-1H-インドール-3-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、
5-(1-((5-メトキシ-3-メチル-1H-インドール-2-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、及び
2-メチル-5-(1-((3-メチル-1H-インドール-2-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する医薬組成物、又はＴＬＲ９阻害剤に関する。 More particularly, the present invention provides:
5- (1-((5-fluoro-1-methyl-1H-indol-3-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine,
5- (1-((5-methoxy-3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine, and
Selected from the group consisting of 2-methyl-5- (1-((3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) pyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine The present invention relates to a pharmaceutical composition containing at least one compound or a salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient, or a TLR9 inhibitor.

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤に関する。   The present invention also relates to a preventive and / or therapeutic agent for diseases caused by activation of TLR9 signal, which comprises the compound represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), or Sjögren's syndrome, which comprises the compound represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient. (SS), multiple sclerosis (MS), inflammatory bowel disease (IBD), psoriatic arthritis, autoimmune diseases such as Behcet's syndrome or vasculitis, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease The present invention relates to a preventive and / or therapeutic agent for (GvHD).

また、本発明は、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤の製造のための、前記一般式（１）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用に関する。   The present invention also relates to diseases caused by activation of TLR9 signal, such as rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), Sjogren's syndrome (SS), multiple sclerosis (MS), inflammatory bowel disease ( IBD), psoriatic arthritis, autoimmune diseases such as Behcet's syndrome or vasculitis, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease (GvHD) and the like for the manufacture of preventive and / or therapeutic agents The present invention relates to the use of the compound represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof.

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を患者に投与する、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療方法に関する。   The present invention also relates to a disease caused by activation of TLR9 signal, for example, rheumatoid arthritis, wherein an effective amount of the compound represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof is administered to a patient. (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), Sjogren's syndrome (SS), multiple sclerosis (MS), inflammatory bowel disease (IBD), psoriatic arthritis, autoimmune diseases such as Behcet's syndrome or vasculitis, inflammation, The present invention relates to a method for preventing and / or treating allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease (GvHD).

本発明のＴＬＲ９阻害剤の有効成分である、一般式（１）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤として有用である。   The compound represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof, which is an active ingredient of the TLR9 inhibitor of the present invention, is rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), Sjogren's syndrome ( SS), multiple sclerosis (MS), inflammatory bowel disease (IBD), psoriatic arthritis, autoimmune diseases such as Behcet's syndrome or vasculitis, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease ( GvHD) and the like are useful as preventive and / or therapeutic agents.

化合物１の¹Ｈ−ＮＭＲのチャートである。1 is a ¹ H-NMR chart of Compound 1. 化合物２の¹Ｈ−ＮＭＲのチャートである。 ¹ is a ¹ H-NMR chart of Compound 2. 化合物３の¹Ｈ−ＮＭＲのチャートである。 ¹ is a ¹ H-NMR chart of Compound 3.

以下、本発明について詳細に説明する。本発明における用語の定義は以下のとおりである。   Hereinafter, the present invention will be described in detail. The definitions of terms in the present invention are as follows.

本明細書中で使用するとき、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。   As used herein, examples of the “halogen atom” include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_1-6アルキル基」とは、炭素数１乃至６の直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を意味する。具体的には、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基等が挙げられる。 As used herein, “C _1-6 alkyl group” means a linear or branched saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms. Specific examples include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, an n-butyl group, an isobutyl group, an s-butyl group, and a t-butyl group.

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_1-6アルキレン基」とは、炭素数１乃至６の直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を意味する。具体的には、例えば、メチレン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、イソプロピレン基、ｎ−ブチレン基、イソブチレン基、ｓ−ブチレン基、ｔ−ブチレン基等が挙げられる。 As used herein, “C _1-6 alkylene group” means a linear or branched saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms. Specific examples include a methylene group, an ethylene group, an n-propylene group, an isopropylene group, an n-butylene group, an isobutylene group, an s-butylene group, and a t-butylene group.

本明細書中で使用するとき、「５乃至７員の含窒素飽和複素環基」とは、隣接する環員原子間で多重結合を有さず、環員原子として少なくとも１つのヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ）を含有し、但し環員原子として窒素原子を少なくとも１つ含有する、５乃至７員の環状基を意味する。具体的には、例えば、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、アゼピニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニル S−オキシド、チオモルホリニル S，S−ジオキシド、ピペラジニル、ならびにＮ−メチルピペラジニル基等が挙げられる。   As used herein, a “5- to 7-membered nitrogen-containing saturated heterocyclic group” means that there are no multiple bonds between adjacent ring member atoms, and at least one heteroatom (N , O, S), but means a 5- to 7-membered cyclic group containing at least one nitrogen atom as a ring member atom. Specific examples include azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, azepinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, thiomorpholinyl S-oxide, thiomorpholinyl S, S-dioxide, piperazinyl, and N-methylpiperazinyl group.

本明細書中で使用するとき、「２環性芳香族複素環基」とは、少なくとも１つのヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ）、好ましくは１乃至４個のヘテロ原子を含有する５員乃至７員の芳香族複素環が２つ縮合した環状基、又は１つの当該芳香族複素環とベンゼン環とが縮合した環状基を意味する。具体的には、例えば、２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、２−キナゾリニル、４−キナゾリニル、２−キノキサリニル、２−ベンゾフリル、３−ベンゾフリル、２−ベンゾチエニル、３−ベンゾチエニル、２−ベンゾオキサゾリル、２−ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾール−１−イル、ベンズイミダゾール−２−イル、インドール−１−イル、インドール−２−イル、インドール−３−イル、１Ｈ−インダゾール−３−イル、１Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−２−イル、１Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピリジン−６−イル、１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｂ］ピリジン−２−イル、１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］ピリジン−２−イル、１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｂ］ピラジン−２−イル、イソキノリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンズトリアゾリル基等を挙げることができる。   As used herein, a “bicyclic aromatic heterocyclic group” refers to a 5-membered to 5 containing at least one heteroatom (N, O, S), preferably 1 to 4 heteroatoms. It means a cyclic group in which two 7-membered aromatic heterocycles are condensed, or a cyclic group in which one aromatic heterocycle and a benzene ring are condensed. Specifically, for example, 2-quinolyl, 3-quinolyl, 4-quinolyl, 2-quinazolinyl, 4-quinazolinyl, 2-quinoxalinyl, 2-benzofuryl, 3-benzofuryl, 2-benzothienyl, 3-benzothienyl, 2 -Benzoxazolyl, 2-benzothiazolyl, benzimidazol-1-yl, benzimidazol-2-yl, indol-1-yl, indol-2-yl, indol-3-yl, 1H-indazol-3-yl, 1H-pyrrolo [2,3-b] pyrazin-2-yl, 1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-6-yl, 1H-imidazo [4,5-b] pyridin-2-yl, 1H- Imidazo [4,5-c] pyridin-2-yl, 1H-imidazo [4,5-b] pyrazin-2-yl, isoquinolyl, benzooxadiazolyl, Zochiajiazoriru include a benztriazolyl group.

本明細書中で使用するとき、「Ｃ_1-6アルキルオキシ基」とは、前記Ｃ_1-6アルキル基が酸素原子に結合した基を意味する。具体的には、例えば、メチルオキシ基、エチルオキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓ−ブチルオキシ基、ｔ−ブチルオキシ基等が挙げられる。 As used herein, “C _1-6 alkyloxy group” means a group in which the C _1-6 alkyl group is bonded to an oxygen atom. Specific examples include a methyloxy group, an ethyloxy group, an n-propyloxy group, an isopropyloxy group, an n-butyloxy group, an isobutyloxy group, an s-butyloxy group, and a t-butyloxy group.

一般式（１）中、Ｒ¹におけるＣ_1-6アルキル基としては、メチル基が好ましい。 In general formula (1), the C _1-6 alkyl group in R ¹ is preferably a methyl group.

一般式（１）中、ＬにおけるＣ_1-6アルキレン基としては、メチレン基が好ましい。 In general formula (1), the C _1-6 alkylene group in L is preferably a methylene group.

一般式（１）中、Ａにおける５乃至７員の含窒素飽和複素環基としては、ピペリジニル基が好ましい。   In general formula (1), the 5- to 7-membered nitrogen-containing saturated heterocyclic group in A is preferably a piperidinyl group.

一般式（１）中、Ｂにおける２環性芳香族複素環基としては、インドール−２−イル又はインドール−３−イル基が好ましい。   In general formula (1), the bicyclic aromatic heterocyclic group in B is preferably indol-2-yl or indol-3-yl.

一般式（１）中、Ｂにおける置換基としては、フッ素原子、メチル基又はメチルオキシ基が好ましい。   In general formula (1), the substituent in B is preferably a fluorine atom, a methyl group or a methyloxy group.

本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の具体例として、下記化合物を挙げることができる。   Specific examples of the pyrazolopyrimidine-7-amine derivative represented by the general formula (1) of the present invention include the following compounds.

本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。   The pyrazolopyrimidine-7-amine derivative represented by the general formula (1) of the present invention, or a salt thereof, or a solvate thereof is not only a pyrazolopyrimidine-7-amine derivative of the present invention, but also a pharmaceutical product thereof. Salts, various hydrates and solvates thereof, substances having crystalline polymorphs, and substances that become prodrugs of these substances.

本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の許容される塩としては、具体的には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との酸付加塩等が挙げられる。   Specific examples of acceptable salts of the pyrazolopyrimidin-7-amine derivative represented by the general formula (1) of the present invention include inorganic acids (for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, Acid addition salts with organic acids (for example, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, etc.).

本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノール等のアルコールとの溶媒和物等）が挙げられる。   Examples of solvates of pyrazolopyrimidin-7-amine derivatives represented by the general formula (1) of the present invention and pharmaceutically acceptable salts thereof include hydrates and various solvates (for example, ethanol and the like). Solvates with alcohol, etc.).

本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体は、公知の方法により製造することができる。ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の製造方法を下記反応工程図に示すが、製造法はこれに限定されるものではない。   The pyrazolopyrimidine-7-amine derivative represented by the general formula (1) of the present invention can be produced by a known method. Although the manufacturing method of a pyrazolopyrimidine-7-amine derivative is shown in the following reaction process drawing, a manufacturing method is not limited to this.

［式中、
Ｒ¹、Ｌ、Ａ、Ｂは、前記定義と同じものを示し、Ｌ²は、単結合又はＣ_1-5アルキル基を示し、Ｘは脱離基を示し、Ｐは、保護基を示す。］ [Where:
R ¹ , L, A and B are as defined above, L ² represents a single bond or a C _1-5 alkyl group, X represents a leaving group, and P represents a protecting group. ]

［工程１］
ニトリル誘導体（ＩＩ）とアミノピラゾール（ＩＩＩ）を縮合させ、ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（ＩＶ）を製造することができる。 [Step 1]
Nitrile derivative (II) and aminopyrazole (III) can be condensed to produce pyrazolopyrimidin-7-amine derivative (IV).

本工程において、脱水剤や酸触媒を添加することもできる。脱水剤としては、モレキュラーシーブスなどが挙げられる。酸触媒としては、濃硫酸などの無機酸や、トリクロロアルミニウム、チタニウムクロリド、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジクロロメタン、１、２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温乃至１４５℃、好ましくは５０℃乃至１００℃であり、反応時間は、通常、１時間乃至３日間、好ましくは３時間乃至２４時間である。   In this step, a dehydrating agent or an acid catalyst can be added. Examples of the dehydrating agent include molecular sieves. Examples of the acid catalyst include inorganic acids such as concentrated sulfuric acid, and organic acids such as trichloroaluminum, titanium chloride, benzenesulfonic acid, and p-toluenesulfonic acid. The solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol dimethyl ether; dichloromethane, 1,2-dichloroethane, etc. And halogenated hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene and the like. The reaction temperature in this step varies depending on the raw materials and the solvent to be used, but is usually room temperature to 145 ° C., preferably 50 ° C. to 100 ° C., and the reaction time is usually 1 hour to 3 days, preferably 3 hours to 24 hours.

［工程２］
アミン誘導体（ＩＶ）はアミノ基の脱保護により、アミン誘導体（Ｖ）を製造することができる。 [Step 2]
The amine derivative (IV) can be produced by deprotecting the amino group.

脱保護の方法及び条件は保護基Ｐの種類によって異なる。例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基は酸により脱保護できるが、有機化学で一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考に行うことができる。   The deprotection method and conditions vary depending on the type of protecting group P. For example, a tert-butoxycarbonyl group can be deprotected with an acid, but a method generally used in organic chemistry (Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.) can be used as a reference.

［工程３］
アミン誘導体（Ｖ）と芳香族複素環（ＶＩ）、（ＶＩ’）又は（ＶＩ”）を反応させ、ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（１）を製造することができる。 [Step 3]
A pyrazolopyrimidine-7-amine derivative (1) can be produced by reacting the amine derivative (V) with an aromatic heterocycle (VI), (VI ′) or (VI ″).

アミン誘導体（Ｖ）と芳香族複素環（ＶＩ）は、塩基存在下、置換反応を行いピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（１）を製造することができる。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類、水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温乃至１２０℃、好ましくは室温乃至１００℃であり、反応時間は、通常、１時間乃至３日間、好ましくは３時間乃至２４時間である。   The amine derivative (V) and the aromatic heterocycle (VI) can be subjected to a substitution reaction in the presence of a base to produce a pyrazolopyrimidine-7-amine derivative (1). The base used in this step is not particularly limited, and examples thereof include pyridine, 4-dimethylaminopyridine (DMAP), collidine, lutidine, 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (DBU). ), 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene (DBN), 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane (DABCO), triethylamine, diisopropylethylamine, diisopropylpentylamine, trimethylamine Organic bases such as lithium hydride, sodium hydride, potassium hydride, lithium hydroxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium carbonate, sodium carbonate, potassium carbonate, cesium carbonate, sodium hydrogen carbonate, potassium hydrogen carbonate, Sodium methoxide, potassium methoxide, sodium t- butoxide, inorganic bases such as potassium t- butoxide. The solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, amides such as N, N-dimethylformamide and N, N-dimethylacetamide; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, Examples include ethers such as dioxane and ethylene glycol dimethyl ether; sulfoxides such as dimethyl sulfoxide and sulfolane; and halogenated hydrocarbons such as dichloromethane and 1,2-dichloroethane. The reaction temperature in this step varies depending on the raw materials and the solvent to be used, but is usually room temperature to 120 ° C., preferably room temperature to 100 ° C., and the reaction time is usually 1 hour to 3 days, preferably 3 hours to 24 It's time.

アミン誘導体（Ｖ）と芳香族複素環（ＶＩ’）は、脱水縮合させることができる。本工程で用いる試薬としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ジイソプロピルカルボジイミド塩酸塩、（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート、ヨウ化２−クロロ−１−メチルピリジニウム等の脱水縮合剤と４−（ジメチルアミノ）ピリジンの併用や、アゾジカルボン酸エチル、アゾジカルボン酸イソプロピル等のアゾ化合物とトリフェニルホスフィンの併用といった光延条件を用いることができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、０℃乃至１５０℃、好ましくは０℃乃至８０℃であり、反応時間は、通常、１時間乃至３日間、好ましくは３時間乃至２４時間である。   The amine derivative (V) and the aromatic heterocycle (VI ′) can be dehydrated and condensed. The reagents used in this step include dicyclohexylcarbodiimide, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride, diisopropylcarbodiimide hydrochloride, (1H-benzotriazol-1-yloxy) tris (dimethylamino) phosphonium hexa Combined use of dehydrating condensing agents such as fluorophosphate and 2-chloro-1-methylpyridinium iodide and 4- (dimethylamino) pyridine, and combined use of azo compounds such as ethyl azodicarboxylate and isopropyl azodicarboxylate and triphenylphosphine Such Mitsunobu conditions can be used. The solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, amides such as N, N-dimethylformamide and N, N-dimethylacetamide; diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, Examples include ethers such as dioxane and ethylene glycol dimethyl ether; sulfoxides such as dimethyl sulfoxide and sulfolane; halogenated hydrocarbons such as dichloromethane and 1,2-dichloroethane; and aromatic hydrocarbons such as toluene and xylene. The reaction temperature in this step varies depending on the raw materials and the solvent to be used, but is usually 0 ° C. to 150 ° C., preferably 0 ° C. to 80 ° C., and the reaction time is usually 1 hour to 3 days, preferably 3 hours. ~ 24 hours.

アミン誘導体（Ｖ）と芳香族複素環（ＶＩ”）は、還元的アミノ化により縮合させることができる。本工程で用いる試薬としては、ギ酸、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム、ボラン−ピコリン等を用いることができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、トルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類；メタノール、エタノール等のアルコール類；酢酸等の有機酸類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；アセトニトリル等のニトリル類；塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭素類等が挙げられる。また、ディーンスターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔｅｒk）装置を用いてもよく、ｐ−トルエンスルホン酸・一水和物、トリフルオロ酢酸、酢酸、シュウ酸等の有機酸を添加してもよい。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、０℃乃至１５０℃、好ましくは２５℃乃至１００℃であり、反応時間は、通常、５分乃至３日間、好ましくは３０分乃至１０時間である。   The amine derivative (V) and the aromatic heterocycle (VI ″) can be condensed by reductive amination. Examples of reagents used in this step include formic acid, sodium borohydride, sodium cyanoborohydride, hydrogenation. Sodium triacetoxyboron, borane-picoline, etc. can be used, and the solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction, but for example, aromatic hydrocarbons such as toluene, xylene, benzene, etc. Alcohols such as methanol and ethanol; organic acids such as acetic acid; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane and ethylene glycol dimethyl ether; nitriles such as acetonitrile; halogenation such as methylene chloride, chloroform and dichloroethane Carbon etc. In addition, a Dean-Stark apparatus may be used, and an organic acid such as p-toluenesulfonic acid / monohydrate, trifluoroacetic acid, acetic acid, or oxalic acid may be added. The reaction temperature in the step varies depending on the raw materials and the solvent to be used, but is usually 0 ° C. to 150 ° C., preferably 25 ° C. to 100 ° C., and the reaction time is usually 5 minutes to 3 days, preferably 30 minutes to 10 hours.

また、ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（ＩＶ）は以下の通り製造することもできる。   The pyrazolopyrimidine-7-amine derivative (IV) can also be produced as follows.

［式中、
Ｒ¹及びＡは、前記定義と同じものを示し、Ｒは、Ｃ_1-5アルキル基を示し、Ｐは、保護基を示し、Ｍ⁺は、金属カチオンを示す。］ [Where:
R ¹ and A are as defined above, R represents a C _1-5 alkyl group, P represents a protecting group, and M ⁺ represents a metal cation. ]

［工程４］
カルボン酸誘導体（ＶＩＩ）とエステル誘導体（ＶＩＩＩ）を縮合剤存在下で反応させ、β−ケトエステル誘導体（ＩＸ）を製造することができる。 [Step 4]
Carboxylic acid derivative (VII) and ester derivative (VIII) can be reacted in the presence of a condensing agent to produce β-ketoester derivative (IX).

本工程で用いる縮合剤としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、2,4,6-トリクロロベンゾイルクロリド、ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ-トリスジメチルアミノホスホニウム塩、カルボニルジイミダゾール、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、N-ヒドロキシスクシンイミド、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール等が挙げられる。また、塩基を加えてもよく、塩基としては反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１、８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１、５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１、４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類、水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジクロロメタン、１,２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；アセトニトリル等の二トリル類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温乃至１４５℃、好ましくは５０℃乃至１００℃であり、反応時間は、通常、１時間乃至３日間、好ましくは３時間乃至２４時間である。   The condensing agent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, 2,4,6-trichlorobenzoyl chloride, benzotriazol-1-yloxy-trisdimethylaminophosphonium salt, Examples include imidazole, 1-hydroxybenzotriazole, N-hydroxysuccinimide, 1-hydroxy-7-azabenzotriazole and the like. Further, a base may be added, and the base is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, pyridine, 4-dimethylaminopyridine (DMAP), collidine, lutidine, 1,8-diazabicyclo [5 4.0] undec-7-ene (DBU), 1,5-diazabicyclo [4.3.0] non-5-ene (DBN), 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane (DABCO) ), Organic bases such as triethylamine, diisopropylethylamine, diisopropylpentylamine, trimethylamine, lithium hydride, sodium hydride, potassium hydride, lithium hydroxide, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium carbonate, sodium carbonate, potassium carbonate , Cesium carbonate, sodium bicarbonate, potassium bicarbonate, sodium Kishido, potassium methoxide, sodium t- butoxide, inorganic bases such as potassium t- butoxide. The solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol dimethyl ether; dichloromethane, 1,2-dichloroethane, etc. Halogenated hydrocarbons; aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene and xylene; and nitriles such as acetonitrile. The reaction temperature in this step varies depending on the raw materials and the solvent to be used, but is usually room temperature to 145 ° C., preferably 50 ° C. to 100 ° C., and the reaction time is usually 1 hour to 3 days, preferably 3 hours to 24 hours.

［工程５］
β−ケトエステル誘導体（ＩＸ）とアミノピラゾール（ＩＩＩ）を縮合させ、７−ヒドロキシピラゾロピリミジン誘導体（Ｘ）を製造することができる。 [Step 5]
β-ketoester derivative (IX) and aminopyrazole (III) can be condensed to produce 7-hydroxypyrazolopyrimidine derivative (X).

本工程において、脱水剤や酸触媒を添加することもできる。脱水剤としては、モレキュラーシーブスなどが挙げられる。酸触媒としては、酢酸、濃硫酸などの無機酸や、トリクロロアルミニウム、チタニウムクロリド、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジクロロメタン、１、２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温乃至１４５℃、好ましくは５０℃乃至１００℃であり、反応時間は、通常、１時間乃至３日間、好ましくは３時間乃至２４時間である。   In this step, a dehydrating agent or an acid catalyst can be added. Examples of the dehydrating agent include molecular sieves. Examples of the acid catalyst include inorganic acids such as acetic acid and concentrated sulfuric acid, and organic acids such as trichloroaluminum, titanium chloride, benzenesulfonic acid, and p-toluenesulfonic acid. The solvent used in this step is not particularly limited as long as it does not inhibit the reaction. For example, ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, ethylene glycol dimethyl ether; dichloromethane, 1,2-dichloroethane, etc. And halogenated hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene and the like. The reaction temperature in this step varies depending on the raw materials and the solvent to be used, but is usually room temperature to 145 ° C., preferably 50 ° C. to 100 ° C., and the reaction time is usually 1 hour to 3 days, preferably 3 hours to 24 hours.

［工程６］
７−ヒドロキシピラゾロピリミジン誘導体（Ｘ）に対し官能基変換を行いピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（ＩＶ）を製造することができる。 [Step 6]
Functional group conversion is performed on the 7-hydroxypyrazolopyrimidine derivative (X) to produce a pyrazolopyrimidine-7-amine derivative (IV).

本官能基変換は、有機化学で一般に用いられる方法（Richard C. Larock ; "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., 1999）を参考に行うことができる。例えば、７−ヒドロキシピラゾロピリミジン誘導体（Ｘ）をオキサリルクロリド等のハロゲン化剤と反応させ７−ハロゲノピラゾロピリミジン誘導体へ誘導後、アンモニアと反応させることでピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（ＩＶ）を製造することができる。また、７−ヒドロキシピラゾロピリミジン誘導体（Ｘ）をベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリスジメチルアミノホスホニウム塩（カストロ試薬）等の縮合剤で処理後、アンモニアと反応させることでピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（ＩＶ）を製造することができる。   This functional group transformation should be performed with reference to a method commonly used in organic chemistry (Richard C. Larock; "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., 1999). Can do. For example, a 7-hydroxypyrazolopyrimidine derivative (X) is reacted with a halogenating agent such as oxalyl chloride to induce a 7-halogenopyrazolopyrimidine derivative, and then reacted with ammonia to give a pyrazolopyrimidine-7-amine derivative (IV ) Can be manufactured. In addition, the 7-hydroxypyrazolopyrimidine derivative (X) is treated with a condensing agent such as benzotriazol-1-yloxy-trisdimethylaminophosphonium salt (Castro reagent) and then reacted with ammonia to give pyrazolopyrimidine-7-amine. Derivative (IV) can be produced.

前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。   Intermediates and target products obtained in the above reactions are necessary for purification methods commonly used in organic synthetic chemistry, such as filtration, extraction, washing, drying, concentration, recrystallization, various chromatography, etc. Can be isolated and purified. In addition, the intermediate can be subjected to the next reaction without any particular purification.

さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。   Furthermore, various isomers can be isolated by applying a conventional method using the difference in physicochemical properties between the isomers. For example, a racemic mixture is obtained by a general racemic resolution method such as a method of optically resolving a diastereomeric salt with a general optically active acid such as tartaric acid or a method using optically active column chromatography. Can lead to optically pure isomers. Further, the diastereomeric mixture can be divided by, for example, fractional crystallization or various chromatography. An optically active compound can also be produced by using an appropriate optically active raw material.

本発明のＴＬＲ９阻害剤、或いは自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤は、一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。   The TLR9 inhibitor of the present invention or the preventive and / or therapeutic agent for autoimmune disease, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease (GvHD) is a pyrazolo represented by the general formula (1). It contains a pyrimidine-7-amine derivative, a salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient, and can be used as a pharmaceutical composition. In that case, the compound of the present invention may be used alone, but it is usually used in combination with a pharmaceutically acceptable carrier and / or diluent.

投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。   The administration route is not particularly limited, but can be appropriately selected depending on the purpose of treatment. For example, any of oral preparations, injections, suppositories, inhalants and the like may be used. Pharmaceutical compositions suitable for these dosage forms can be produced by utilizing known preparation methods.

経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。   When preparing an oral solid preparation, the compound represented by the general formula (1) is a pharmaceutically acceptable excipient, and further, if necessary, a binder, a disintegrant, a lubricant, a coloring agent, and a corrigent. After adding a flavoring agent, tablets, coated tablets, granules, powders, capsules and the like can be produced using conventional methods. The additive may be one commonly used in the art. Examples of excipients include lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, starch, calcium carbonate, kaolin, microcrystalline cellulose, silicic acid and the like. Examples of the binder include water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution, gelatin solution, carboxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxypropyl starch, methylcellulose, ethylcellulose, shellac, calcium phosphate, polyvinylpyrrolidone and the like. . Examples of the disintegrant include dry starch, sodium alginate, agar powder, sodium hydrogen carbonate, calcium carbonate, sodium lauryl sulfate, stearic acid monoglyceride, and lactose. Examples of the lubricant include purified talc, stearate, borax, and polyethylene glycol. Examples of the corrigent include sucrose, orange peel, citric acid, tartaric acid and the like.

経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が、安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。   When preparing an oral liquid preparation, an oral solution, syrup, etc. are added to the compound represented by the general formula (1) by adding a corrigent, a buffer, a stabilizer, a corrigent and the like using a conventional method. An elixir or the like can be produced. Examples of the flavoring agent include those listed above. Examples of the buffering agent include sodium citrate, and examples of the stabilizing agent include tragacanth, gum arabic, and gelatin.

注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ（エデト酸ナトリウム）、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。   When preparing an injection, a pH regulator, a buffer, a stabilizer, a tonicity agent, a local anesthetic, etc. are added to the compound represented by the general formula (1), and subcutaneously using a conventional method. Intramuscular and intravenous injections can be manufactured. Examples of the pH adjusting agent and buffer include sodium citrate, sodium acetate, sodium phosphate and the like. Examples of the stabilizer include sodium pyrosulfite, EDTA (sodium edetate), thioglycolic acid, and thiolactic acid. Examples of the local anesthetic include procaine hydrochloride and lidocaine hydrochloride. Examples of the isotonic agent include sodium chloride and glucose.

坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。   When preparing a suppository, a known suppository carrier such as polyethylene glycol, lanolin, cacao butter, fatty acid triglyceride, etc., and a surfactant (for example, , Tween (registered trademark)) and the like can be added and then manufactured using a conventional method.

上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。   In addition to the above, it is possible to appropriately prepare a preferable preparation using a conventional method.

本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり０．１ｍｇ乃至１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ乃至１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ乃至５００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。   The dose of the pyrazolopyrimidine-7-amine derivative represented by the general formula (1) of the present invention varies depending on age, body weight, symptom, dosage form, number of times of administration, etc. It is preferable that 0.1 mg to 1000 mg, preferably 1 mg to 1000 mg, more preferably 1 mg to 500 mg per day as the compound represented by (1) is orally or parenterally administered in one or several divided doses.

以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。   The present invention will be described more specifically with reference to the following examples. However, the present invention is not limited to these examples.

なお、下記実施例中で用いられている略号は下記の意味を示す。
¹Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＤＭＳＯ−ｄ６：重ジメチルスルホキシド In addition, the symbol used in the following Example shows the following meaning.
¹ H-NMR: proton nuclear magnetic resonance DMSO-d6: deuterated dimethyl sulfoxide

［実施例１］
5-(1-((5-フルオロ-1-メチル-1H-インドール-3-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミンの製造 [Example 1]
Preparation of 5- (1-((5-fluoro-1-methyl-1H-indol-3-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine

［工程１］4-(2-メトキシカルボニルアセチル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステルの製造
1-(tert-ブトキシカルボニル)ピペリジン-4-カルボン酸（81.4 g, 0.355 mol）を無水アセトニトリル溶媒（200 ml）に溶解し、カルボニルジイミダゾール（67.0 g, 0.414 mol）を少しずつ加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、3-メトキシ-3-オキソプロパン酸カリウム（64.7 g, 0.414 mol）と無水塩化マグネシウム（39.4 g, 0.414 mol）を少しずつ加え、60℃で12時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、減圧下溶媒を留去し、水とジクロロメタンを加え希釈した。2%硫酸と2%水酸化ナトリウム水溶液を加えさらに希釈し抽出後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン-酢酸エチル (1:1(v/v))の流分より4-(2-メトキシカルボニルアセチル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（70.9 g, 70%）を得た。 [Step 1] Preparation of 4- (2-methoxycarbonylacetyl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
1- (tert-Butoxycarbonyl) piperidine-4-carboxylic acid (81.4 g, 0.355 mol) was dissolved in anhydrous acetonitrile solvent (200 ml), and carbonyldiimidazole (67.0 g, 0.414 mol) was added little by little. The reaction solution was stirred at room temperature for 1 hour, potassium 3-methoxy-3-oxopropanoate (64.7 g, 0.414 mol) and anhydrous magnesium chloride (39.4 g, 0.414 mol) were added little by little, and the mixture was stirred at 60 ° C. for 12 hours. . After cooling the reaction solution to room temperature, the solvent was distilled off under reduced pressure, and water and dichloromethane were added for dilution. 2% sulfuric acid and 2% aqueous sodium hydroxide solution were added for further dilution and extraction, the organic layer was dried over sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography. From the hexane-ethyl acetate (1: 1 (v / v)) fraction, 4- (2-methoxycarbonylacetyl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (70.9 g, 70%).

［工程２］4-(7-ヒドロキシ-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステルの製造
4-(2-メトキシカルボニルアセチル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（42.3 g, 0.148 mol）の酢酸溶液（50 mL）に5-メチル-2H-ピラゾロ-3-イルアミン（14.4 g, 0.148 mol）を加え、60乃至65℃で8時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、水を加え希釈した。析出物を濾過し水で洗浄後、60℃（1mm Hg）で8時間乾燥し、4-(7-ヒドロキシ-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（27.4 g, 56%）を得た。 [Step 2] Preparation of 4- (7-hydroxy-2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
4- (2-methoxycarbonylacetyl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (42.3 g, 0.148 mol) in acetic acid solution (50 mL) was added 5-methyl-2H-pyrazolo-3-ylamine (14.4 g, 0.148 mol) was added, and the mixture was stirred at 60 to 65 ° C. for 8 hours. The reaction solution was cooled to room temperature and diluted with water. The precipitate was filtered, washed with water, dried at 60 ° C. (1 mm Hg) for 8 hours, and 4- (7-hydroxy-2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl) -piperidine-1- Carboxylic acid tert-butyl ester (27.4 g, 56%) was obtained.

［工程３］4-[7-(ベンゾトリアゾロ-1-イルオキシ)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル]-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステルの製造
4-(7-ヒドロキシ-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（28.3 g, 0.085 mol）の無水アセトニトリル溶液（200 mL）に1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（14.3 g, 0.094 mol）とヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム（41.6 g, 0.094 mol）を加え、加熱還流下3時間撹拌した。反応溶液を室温まで冷却し、減圧下溶媒を留去後した。残渣にジクロロメタンと水を加え抽出した後、減圧下溶媒を留去し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル)に付し、酢酸エチルの流分から4-[7-(ベンゾトリアゾロ-1-イルオキシ)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル]-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（32.5 g, 85%）を得た。 [Step 3] Preparation of 4- [7- (benzotriazolo-1-yloxy) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl] -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
4- (7-hydroxy-2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (28.3 g, 0.085 mol) in anhydrous acetonitrile solution (200 mL) Add 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (14.3 g, 0.094 mol) and benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate (41.6 g, 0.094 mol) The mixture was stirred for 3 hours with heating under reflux. The reaction solution was cooled to room temperature, and the solvent was distilled off under reduced pressure. Dichloromethane and water were added to the residue for extraction, the solvent was distilled off under reduced pressure, the residue was subjected to silica gel column chromatography (ethyl acetate), and 4- [7- (benzotriazolo-1-yloxy) was obtained from the ethyl acetate stream. ) -2-Methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl] -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (32.5 g, 85%) was obtained.

［工程４］4-(7-アミノ-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステルの製造
4-[7-(ベンゾトリアゾロ-1-イルオキシ)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル]-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（32.4 g, 0.072 mol）をジオキサン（100 mL）に溶解し、水酸化アンモニウム(49.0 g, 0.72 mol)を加え、25％アンモニア水溶液を少量加え、50℃で3時間撹拌した。室温まで冷却後、減圧下溶媒を留去した。残渣にジクロロメタンを加え、5%水酸化ナトリウム水溶液で有機層を洗浄後、硫酸ナトリウムで有機層を乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）に付し、酢酸エチルの流分より4-(7-アミノ-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（14.8 g, 62%）を得た。 [Step 4] Preparation of 4- (7-amino-2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
4- [7- (Benzotriazolo-1-yloxy) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl] -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (32.4 g, 0.072 mol) Dissolved in dioxane (100 mL), ammonium hydroxide (49.0 g, 0.72 mol) was added, a small amount of 25% aqueous ammonia was added, and the mixture was stirred at 50 ° C. for 3 hr. After cooling to room temperature, the solvent was distilled off under reduced pressure. Dichloromethane was added to the residue, and the organic layer was washed with 5% aqueous sodium hydroxide solution. The organic layer was dried over sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography (ethyl acetate), and 4- (7-amino-2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl) -piperidine-1-carboxylic acid was obtained from the ethyl acetate stream. The tert-butyl ester (14.8 g, 62%) was obtained.

［工程５］2-メチル-5-ピペリジン-4-イルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン 2塩酸塩の製造
4-(7-アミノ-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-5-イル)-ピペリジン-1-カルボン酸 tert-ブチルエステル（14.9 g, 0.045 mol）を無水ジオキサン（50 mL）に溶解し、15%塩化水素アセトニトリル溶液（100 mL）を加え、40乃至45℃で3時間撹拌した。反応液を室温まで冷却し、析出物を濾過しジオキサンとヘキサンで洗浄後、60℃（1mm Hg）で8時間乾燥させ、2-メチル-5-ピペリジン-4-イルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン 2塩酸塩（12.3 g, 91%）を得た。 [Step 5] Production of 2-methyl-5-piperidin-4-ylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine dihydrochloride
4- (7-Amino-2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-5-yl) -piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (14.9 g, 0.045 mol) dissolved in anhydrous dioxane (50 mL) 15% hydrogen chloride acetonitrile solution (100 mL) was added, and the mixture was stirred at 40 to 45 ° C. for 3 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, the precipitate was filtered, washed with dioxane and hexane, dried at 60 ° C. (1 mm Hg) for 8 hours, and 2-methyl-5-piperidin-4-ylpyrazolo [1,5-a] Pyrimidine-7-amine dihydrochloride (12.3 g, 91%) was obtained.

［工程６］5-[1-(5-フルオロ-1-メチル-1H-インドール-3-イルメチル)-ピペリジン-4-イル]-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミンの製造
2-メチル-5-ピペリジン-4-イルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン 2塩酸塩(11.3 g, 0.037 mol)とトリエチルアミン（11.3 g, 0.112 mol）をジクロロメタン（150 mL）に溶解し、5-フルオロ-1-メチル-1H-インドール-3-カルボアルデヒド（6.55 g, 0.037 mol）を加え、加熱還流下、1時間撹拌した。その後、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（23.4 g, 0.112 mol）を加え、加熱還流下、3時間撹拌した。反応液を室温まで冷却し、150 mLの水を加え希釈し、重曹を用い中和した。抽出後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）に付し、酢酸エチルの流分より5-[1-(5-フルオロ-1-メチル-1H-インドール-3-イルメチル)-ピペリジン-4-イル]-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン（13.1 g, 90%）を得た。 [Step 6] 5- [1- (5-Fluoro-1-methyl-1H-indol-3-ylmethyl) -piperidin-4-yl] -2-methyl-pyrazolo [1,5-a] pyrimidine-7- Amine production
2-Methyl-5-piperidin-4-ylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine dihydrochloride (11.3 g, 0.037 mol) and triethylamine (11.3 g, 0.112 mol) dissolved in dichloromethane (150 mL) Then, 5-fluoro-1-methyl-1H-indole-3-carbaldehyde (6.55 g, 0.037 mol) was added, and the mixture was stirred for 1 hour with heating under reflux. Thereafter, sodium triacetoxyborohydride (23.4 g, 0.112 mol) was added, and the mixture was stirred for 3 hours with heating under reflux. The reaction solution was cooled to room temperature, diluted by adding 150 mL of water, and neutralized with sodium bicarbonate. After extraction, the organic layer was dried over sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography (ethyl acetate). From the ethyl acetate stream, 5- [1- (5-fluoro-1-methyl-1H-indol-3-ylmethyl) -piperidin-4-yl]- 2-Methyl-pyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine (13.1 g, 90%) was obtained.

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）を図１に示す。 ¹ H-NMR (DMSO-d6) is shown in FIG.

［実施例２］
5-(1-((5-メトキシ-3-メチル-1H-インドール-2-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミンを実施例１と同様の手順で製造した。 [Example 2]
Example of 5- (1-((5-methoxy-3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine 1 in the same procedure.

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）を図２に示す。 ¹ H-NMR (DMSO-d6) is shown in FIG.

［実施例３］
2-メチル-5-(1-((3-メチル-1H-インドール-2-イル)メチル)ピペリジン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミンを実施例１と同様の手順で製造した。 [Example 3]
2-Methyl-5- (1-((3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) pyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine was the same as in Example 1. It was manufactured according to the procedure.

¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）を図３に示す。 ¹ H-NMR (DMSO-d6) is shown in FIG.

［試験例１］
ＴＬＲ９発現レポーター細胞を用いたＴＬＲ９活性化阻害試験
１）ＴＬＲ９発現レポーター細胞の樹立
ヒトＴＬＲ９発現細胞は、ヒト胎児腎臓細胞株であるＨＥＫ２９３にヒトＴＬＲ９を発現させた細胞をＩｎｖｉｖｏｇｅｎ社より購入した（ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬ）。ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬは１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ（ｓｉｇｍａ社））を用いて継代培養した。ＮＦκＢ認識配列の４回繰り返しにホタルルシフェラーゼ遺伝子を連結したｐＧＬ４．２８（Ｐｒｏｍｅｇａ社）をＦｕｇｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ社）を用いてリポフェクションにより遺伝子導入した。ハイグロマイシン、ブラストサイジン耐性細胞クローンを選択し、ＴＬＲ９発現レポーター細胞とした（ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬ）。 [Test Example 1]
TLR9 activation inhibition test using TLR9-expressing reporter cells 1) Establishment of TLR9-expressing reporter cells Human TLR9-expressing cells were purchased from Invivogen (HTLR9) in which human TLR9 was expressed in human fetal kidney cell line HEK293. / 293xL). hTLR9 / 293 × L was subcultured using Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM (Sigma)) containing 10% fetal bovine serum, penicillin, and streptomycin. PGL4.28 (Promega) in which a firefly luciferase gene was linked to the NFκB recognition sequence four times was introduced by means of lipofection using Fugene 6 (Roche). Hygromycin and blasticidin resistant cell clones were selected and used as TLR9 expression reporter cells (hTLR9 NFκB-luc / 293 × L).

２）ＴＬＲ９活性化阻害試験
ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬを９６ウェルホワイトマイクロタイタープレートに１．０×１０⁴／８０μＬで播き、ＣＯ₂インキュベータ中で３７℃、１晩培養した。ＤＭＥＭにより希釈した被検化合物（１０μＬ）を添加し、終濃度０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭとした。１時間後にＴＬＲ９リガンドであるＣｐＧ−Ｂ ＤＮＡ（ＯＤＮ２００６）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）を終濃度１μＭとなるように添加した（１０μＬ）。合計１００μＬとして４時間ＣＯ₂インキュベータ中でインキュベート後にルシフェラーゼ活性をＴＬＲ９活性として測定した。ルシフェラーゼ活性はＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を６０μＬ添加し、マルチマイクロプレートリーダーＡＲＶＯ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）により発光量を測定した。被検化合物を添加していない場合のルシフェラーゼ活性を１００％として、各被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀値）を計算した。また、被験化合物として用いた化合物１、２及び３はＡＳＩＮＥＸ社より入手可能であり、本試験においては同社より購入したものをそのまま用いた。 2) TLR9 plated at activation inhibition test hTLR9 NFκB-luc / 96 well-white 293xL microtiter plate ^{1.0 × 10 4 / 80μL, 37} ℃ in CO ₂ incubator, and cultured overnight. A test compound (10 μL) diluted with DMEM was added to a final concentration of 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, and 1 μM. One hour later, CpG-B DNA (ODN2006) (Invivogen) as a TLR9 ligand was added to a final concentration of 1 μM (10 μL). Luciferase activity was measured as TLR9 activity after incubation in a CO ₂ incubator for a total of 100 μL for 4 hours. Luciferase activity was measured by adding 60 μL of Bright Glo (Promega) and measuring the amount of luminescence with a multi-microplate reader ARVO (Perkin Elmer). The 50% inhibitory concentration (IC ₅₀ value) of each test compound was calculated with the luciferase activity in the absence of the test compound as 100%. Compounds 1, 2 and 3 used as test compounds are available from ASINEX, and those purchased from the company were used as they were in this test.

３）結果
化合物１は１．０６μＭ、化合物２は１．１３μＭ、化合物３は１．２５μＭのＩＣ₅₀値を示した。以上より、本発明の化合物は強いＴＬＲ９阻害作用を有していることが確認された。したがって、本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体は、ＴＬＲ９阻害剤として、ＴＬＲ９シグナルの活性化に関連する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防剤及び／又は治療剤の有効成分として有用であることがわかった。 3) Results Compound 1 showed an IC ₅₀ value of 1.06 μM, Compound 2 of 1.13 μM, and Compound 3 of 1.25 μM. From the above, it was confirmed that the compound of the present invention has a strong TLR9 inhibitory action. Therefore, the pyrazolopyrimidin-7-amine derivative represented by the general formula (1) of the present invention is used as a TLR9 inhibitor for diseases associated with activation of TLR9 signal such as rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), Sjogren's syndrome (SS), multiple sclerosis (MS), inflammatory bowel disease (IBD), psoriatic arthritis, Behcet's syndrome, vasculitis and other autoimmune diseases, inflammation, allergy, asthma, graft rejection Or it turned out that it is useful as an active ingredient of the preventive agent and / or therapeutic agent of graft versus host disease (GvHD).

本発明は、一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＴＬＲ９阻害作用を有していることを初めて見出し、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。   The present invention for the first time finds that the pyrazolopyrimidine-7-amine derivative represented by the general formula (1) or a salt thereof, or a solvate thereof has an excellent TLR9 inhibitory action, The present invention provides a preventive and / or therapeutic agent for diseases, inflammation, allergies, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease (GvHD). The present invention provides a preventive and / or therapeutic agent for autoimmune disease, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease (GvHD), is useful in the pharmaceutical industry, and has industrial applicability. have.

Claims (4)

次の一般式（１）：

［式中、
Ｒ¹は、ハロゲン原子又はＣ_1-6アルキル基を示し、
Ｌは、Ｃ_1-6アルキレン基を示し、
環Ａは、５乃至７員の含窒素飽和複素環基を示し、
環Ｂは、ハロゲン原子、Ｃ_1-6アルキル基及びＣ_1-6アルキルオキシ基からなる群から選ばれる少なくとも１つの置換基を有してもよい２環性芳香族複素環基を示す］
で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、ＴＬＲ９阻害剤。 The following general formula (1):

[Where:
R ¹ represents a halogen atom or a C _1-6 alkyl group,
L represents a C _1-6 alkylene group,
Ring A represents a 5- to 7-membered nitrogen-containing saturated heterocyclic group,
Ring B represents a bicyclic aromatic heterocyclic group which may have at least one substituent selected from the group consisting of a halogen atom, a C _1-6 alkyl group and a C _1-6 alkyloxy group]
Or a salt thereof, or a solvate thereof, as an active ingredient. 一般式（１）で表される化合物が、
５−（１−（（５−フルオロ−１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）ピペリジン−４−イル）−２−メチルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、
５−（１−（（５−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ピペリジン−４−イル）−２−メチルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン、及び
２−メチル−５−（１−（（３−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）メチル）ピペリジン−４−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載の阻害剤。 The compound represented by the general formula (1)
5- (1-((5-fluoro-1-methyl-1H-indol-3-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine,
5- (1-((5-methoxy-3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) -2-methylpyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine, and 2 Selected from the group consisting of -methyl-5- (1-((3-methyl-1H-indol-2-yl) methyl) piperidin-4-yl) pyrazolo [1,5-a] pyrimidin-7-amine The inhibitor according to claim 1, which is at least one compound. 請求項１又は２に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤。   Prevention and / or treatment of autoimmune disease, inflammation, allergy, asthma, graft rejection or graft-versus-host disease comprising the compound according to claim 1 or 2 or a salt thereof, or a solvate thereof as an active ingredient Agent. 自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、多発性硬化症、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群又は血管炎である、請求項３に記載の予防及び／又は治療剤。   The prophylactic and / or therapeutic agent according to claim 3, wherein the autoimmune disease is rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, inflammatory bowel disease, psoriatic arthritis, Behcet's syndrome or vasculitis.

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