JP2012510461A - Ｃｄ３８を特異的に認識する抗体およびメルファランを含有する抗腫瘍性組合せ剤 - Google Patents

Abstract

ＣＤ３８を特異的に認識する抗体およびメルファランを含む薬学的組成物。

Description

本発明は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体と、腫瘍性疾患の治療に治療上有用なメルファランとの組合せ剤に関する。

ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有する４５ｋＤのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ^＋から環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への転化を触媒することができるとともに、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースへ加水分解することができる二機能表面酵素である。ＣＤ３８は、多くの造血器腫瘍においてアップレギュレートされるので、これらの腫瘍と関連づけられてきた。

モノクローナル抗体３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９は、ＣＤ３８を特異的に認識するもので、ＰＣＴ出願ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されている。これらの抗ＣＤ３８抗体は、アポトーシスの誘導、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の３種の異なる細胞障害機構により、ＣＤ３８^＋細胞を死滅させることができる。また、これらの抗体は、間質細胞または間質由来のサイトカインが存在しなくても、ＣＤ３８^＋細胞のアポトーシスを直接誘導することができる。メルファランは、化学療法で用いられるアルキル化剤である。それでもなお、依然として癌治療の新規の有効な医薬が必要とされている。

国際公開第２００８／０４７２４２号

今回、ヒト化抗ＣＤ３８抗体が、抗癌治療に治療上有用でありヒト化抗ＣＤ３８抗体のうちの１つの機構と同一または異なる機構を有する少なくとも１種の物質と組み合わせて投与すると、この抗体の効力が顕著に改善されることが見出され本発明に至った。本発明ではこの物質はメルファランに限定される。

「抗体」という用語は、本明細書中、最も広義で用いられ、具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥなどの任意のアイソタイプのモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む。）、ポリクローナル抗体、多選択性抗体、キメラ抗体、ならびに抗体断片を包含する。典型的なＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合でつながった、２本の同一重鎖と２本の同一軽鎖で構成される。重鎖および軽鎖のそれぞれが、定常領域および可変領域を含有する。各可変領域は、抗原のエピトープを結合するのにまず必要となる、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「高頻度可変領域」と呼ばれるセグメントを３つ含んでいる。これらのセグメントは通常、Ｎ末端から順に付番されてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と示される。ＣＤＲ外の可変領域のうちより高度に保存される部分は、「フレームワーク領域」と呼ばれる。

本明細書中使用される場合、「Ｖ_Ｈ」または「ＶＨ」は、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を示し、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２断片の重鎖を含む。「Ｖ_Ｌ」または「ＶＬ」という表現は、抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を示し、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２断片の軽鎖を含む。

３８ＳＢ１３抗体は、配列番号５０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号３８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１、２、および３からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびにこの軽鎖は配列番号：４、５、および６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ１８抗体は、配列番号５２からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：７、８、および９からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびにこの軽鎖は配列番号：１０、１１、および１２からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ１９抗体は、配列番号５４からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４２からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１３、１４、および１５からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびにこの軽鎖は配列番号：１６、１７、および１８からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ３０抗体は、配列番号５６からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４４からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１９、２０、および２１からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびにこの軽鎖は配列番号：２２、２３、および２４からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ３１抗体は、配列番号５８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４６からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：２５、２６、および２７からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびにこの軽鎖は配列番号：２８、２９、および３０からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ３９抗体は、配列番号６０からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の重鎖および配列番号４８からなるアミノ酸配列を有する少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：３１、３２、および３３からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを、ならびにこの軽鎖は配列番号：３４、３５、および３６からなるアミノ酸配列を有する３つの連続したＣＤＲを含む。

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９マウス抗ＣＤ３８抗体を産生するハイブリドーマ細胞株は、それぞれＰＴＡ−７６６７、ＰＴＡ−７６６９、ＰＴＡ−７６７０、ＰＴＡ−７６６６、ＰＴＡ−７６６８、およびＰＴＡ−７６７１の寄託番号で、２００６年６月２１日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９，ＵＳＡ）に寄託されている（ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されるとおり）。

「ヒト化抗体」という用語は、本明細書中使用される場合、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体を示す。ヒト化の最終目標は、抗体の完全な抗原結合親和性および特異性を維持しながらも、ヒトに導入するために、マウス抗体などの異種抗体の免疫原性を低下させることである。ヒト化抗体、または他の哺乳類による非拒絶に適合した抗体は、表面改修（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲ移植などの複数の技法を用いて作製することができる。本明細書中使用される場合、表面改修技法とは、分子モデル化、統計解析、および突然変異導入の組み合わせを用いて抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変し、標的宿主の既知の抗体の表面に似せるものである。ＣＤＲ移植技法は、例えば、マウス抗体の相補性決定領域をヒトフレームワークドメイン中に置換することを含む（例えば、ＷＯ９２／２２６５３を参照）。ヒト化されたキメラ抗体は、好ましくは、定常領域、および対応するヒト抗体領域に実質的にまたはもっぱら由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変領域、およびヒト以外の哺乳動物に実質的にまたはもっぱら由来するＣＤＲを有する。

抗体の表面改修に対する戦略および方法、ならびに異種宿主内での抗体の免疫原性を低下させる他の方法は、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６３９，６４１に開示される（この全体が参照として本明細書に援用される。）。抗体は、その他様々な技法によりヒト化することができ、このような技法として以下が挙げられる：ＣＤＲ移植（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５３０，１０１；およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５８５，０８９）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または表面改修（ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５６５，３３２）、ならびに柔軟な（ｆｌｅｘｉｂｌｅ）残基の同定（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４３８１）。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法をはじめとする、当該分野で既知の様々な方法によって作製することが可能である。Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，４４４，８８７、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，７１６，１１１、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５４５，８０６、およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，８１４，３１８；ならびに国際特許出願公開ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１も参照（これらの参照はこの全体が参照として本明細書援用される。）。

本発明の薬学的組合せ剤の抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８を認識してＣＤ３８^＋細胞をアポトーシス、ＡＤＣＣ、およびＣＤＣにより死滅させるヒト化抗体である。さらなる実施形態において、本発明のヒト化抗体は、間質細胞または間質由来のサイトカインが存在しなくても、アポトーシスによりこのＣＤ３８^＋細胞をアポトーシスにより死滅させることができる。

このようなヒト化抗体の好適な実施形態とは、ヒト化３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、もしくは３８ＳＢ３９抗体、またはこのエピトープ結合断片である。

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９抗体のＣＤＲは、モデリングで同定され、この分子構造は予測されてきている。従って、１つの実施形態において、本発明は、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、および３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲを１つ以上含む、ヒト化抗体またはこのエピトープ結合断片を提供する。好適な実施形態において、３８ＳＢ１３のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１、２、および３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：４、５、および６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ１８のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：７、８、および９で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：１０、１１、および１２で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ１９のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１３、１４、および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：１６、１７、および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ３０のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：１９、２０、および２１で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：２２、２３、および２４で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ３１のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：２５、２６、および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：２８、２９、および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。別の好適な実施形態において、３８ＳＢ３９のヒト化改変型が提供され、この改変型は少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含有し、この重鎖は配列番号：３１、３２、および３３で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を、ならびにこの軽鎖は配列番号：３４、３５、および３６で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む。

１つの実施形態において、本発明は、配列番号：６６および７２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化抗体またはこの断片を提供する。好適な実施形態において、配列番号６６で表されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体が提供される。別の好適な実施形態において、配列番号７２で表されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体が提供される。

別の実施形態において、本発明は、配列番号：６２、６４、６８、および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化抗体またはこの断片を提供する。好適な実施形態において、配列番号：６２および６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体が提供される。別の好適な実施形態において、配列番号：６８および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体が提供される。

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１、および３８ＳＢ３９抗体のヒト化改変型はそれぞれが抗癌剤として特別に有利であることを示してきた。これらの調製、物性、および有益な薬理学的性質は、ＷＯ２００８／０４７２４２に記載される（これはこの全体が本明細書中に参照として援用される。）。ヒトを治療するのに用いられる用量は、治療される被検体に特有の要因に依存するが、一般に、経口投与で１から１５０ｍｇ／ｋｇであるか、または静脈内投与で１から１５０ｍｇ／ｋｇである。

メルファラン（商標、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））は、窒素マスタードアルキル化剤のクラスに属する化学療法薬である。その他にＬ−フェニルアラニンマスタード、即ちＬ−ＰＡＭとして既知であるが、メルファランは、メクロレタミンのフェニルアラニン誘導体であり、二官能性アルキル化剤である。２つのビス−２−クロロエチル基のそれぞれから形成されたカルボニウム中間体が、ＤＮＡのグアニンの７−窒素と共有結合することでアルキル化し、２本のＤＮＡ鎖を架橋する。これにより細胞複製を防ぐことができる。メルファランは、多発性骨髄腫および卵巣癌を治療するのに主に使われるが、悪性黒色腫に用いられることもある。メルファランは、通常、経口投与または静脈内投与される。

本発明の１つの態様は、抗ＣＤ３８抗体を少なくともメルファランと組み合わせて含有する薬学的組成物である。完成品の活性は用いられる用量に依存するため、用いる用量を減らして毒性現象を減らしながらも活性を上げることが可能である。本発明による組合せ剤での効力の改善は、治療的相乗作用の定義により説明することができる。研究の最良な作用剤を単独で、この最大耐量でまたは毒性が動物種に及ばないかぎりの試験したこの最大用量で用いた場合よりも、ある組合せ剤の方が治療上優れているならば、この組合せ剤は治療的相乗作用を示している。

この効力は、例えば、ｌｏｇ_１０細胞死滅により定量することが可能であり、ｌｏｇ_１０細胞死滅は以下の式によって求められる：
ｌｏｇ_１０細胞死滅＝Ｔ−Ｃ（日数）／３．３２×Ｔ_ｄ
式中、Ｔ−Ｃは腫瘍増殖の遅延を表し、腫瘍があらかじめ定めた値（例えば、１ｇ）に達するまでの日数の、治療群についての中央値（Ｔ）および対照群についての中央値（Ｃ）であり、Ｔ_ｄは、対照動物で腫瘍体積が２倍になるのに必要な日数を表す［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，４０：２６６０−２６８０ （１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：３−５１，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９７９）］。ｌｏｇ_１０細胞死滅が０．７以上であれば、この完成品は活性であると判断される。ｌｏｇ_１０細胞死滅が２．８より大きければ、この完成品は非常に活性が高いと判断される。

組合せ剤のｌｏｇ_１０細胞死滅が、最良な構成要素を単独で、この最大耐量でまたは試験したこの最大用量で用いた場合のｌｏｇ_１０細胞死滅の値よりも高い場合、この組合せ剤は治療的相乗作用を示していることになるだろう。

組合せ剤の固形腫瘍に対する効力は、以下の様式で実験的に求めることができる：
０日目、実験に供される動物（一般にマウス）に、腫瘍断片３０から６０ｍｇを両側に皮下移植する。腫瘍を持たされた動物を、この腫瘍の大きさに関して無作為に割り振って様々な治療と対照に供する。移植後、腫瘍があらかじめ定めた大きさに到達したら、腫瘍の種類に依存して、化学療法を開始し、動物を毎日観察する。治療中、それぞれの動物群の重さを、重さの減少が最大になり、続いて重さが完全に回復するまで、毎日測定する。次いで、試験終了まで、動物群の重さを週に１回か２回測定する。腫瘍は、約２ｇに達するか動物が死亡する（腫瘍が２ｇに達する前にそうなってしまった場合）まで、腫瘍が２倍になる時間に依存して、週に１回から５回測定する。動物を、安楽死即ち死後直ちに死体解剖する。

抗腫瘍活性は、記録した異なるパラメータに応じて求められる。

ｈｕ３８ＳＢ１９およびメルファランをこれらの最適用量で用いた組合せ剤で得られる結果は、本明細書中以下、実施例として示される。

従って、本発明は、本発明による組合せ剤を含有する薬学的組成物にも関する。

組合せ剤を構成する構成要素は、この組合せ剤の最大効力が得られるように、同時に、半同時に、別々に、または時間的に間を空けて、投与することができる。それぞれの投与について、継続期間を急速投与から連続かん流まで変化させることが可能である。

結果として、本発明の目的について、組合せ剤は構成要素の物理的結合により得られるものに排他的に限定されるのではなく、個別投与を許容するものも含まれ、個別投与は同時または時間的に間を空けることが可能である。

本発明による組成物は、好ましくは非経口（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）で投与することができる組成物である。しかしながら、本発明による組成物は、局所領域治療（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｒｅｇｉｏｎａｌ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）の場合は、経口、皮下、または腹腔内投与されてもよい。

非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与用組成物は、一般に、薬学的に許容可能な滅菌溶液または懸濁液であり、溶液または懸濁液は必要に応じて使用時に随意に調製することができる。非水溶液または懸濁液の調製には、天然の植物油（オリーブ油、ゴマ油など）または石油または注射用有機エステル（オレイン酸エチルなど）を用いることができる。滅菌水溶液は、完成品の水溶液からなるものが可能である。水溶液のｐＨが適切に調節されており、この水溶液が例えば、十分な量の塩化ナトリウムまたはグルコースで等浸透圧になっていれば、これは静脈内投与に適している。滅菌は、加熱により、または組成物に悪影響を及ぼさない任意の他の手段により、行なうことができる。組合せ剤は、リポソームの形またはシクロデキストリンもしくはポリエチレングリコールなどのキャリアと会合した形を取ることもできる。

経口、皮下、または腹腔内投与用組成物は、好ましくは、水性懸濁液または水溶液である。

本発明による組合せ剤において、この組合せ剤の構成要素の使用は同時、別々、または時間的に間を空けることができ、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の量はこの組合せ剤の１０から９０重量％を占めることが特に有利であり、この含有量は、関連する物質の性質、得ようとする効力、および治療しようとする癌の性質によって変えることが可能である。

本発明による組合せ剤は、複数の種類の癌の治療に特に有用であり、このような癌として以下が挙げられる（が、これらに限定されない。）：膀胱、***、結腸、頭頸部、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頸部、甲状腺、および皮膚のもの、ならびに扁平上皮癌をはじめとするカルシノーマおよび腺癌；多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ性（またはリンパ様）白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えばバーキットリンパ腫）をはじめとするリンパ球系列の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性（骨髄または骨髄球性）白血病、ならびに前骨髄球性白血病をはじめとする骨髄球系列の造血器腫瘍；線維肉腫、骨肉腫、および横紋筋肉腫をはじめとする間葉系起源の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、およびシュワン細胞腫をはじめとする中枢神経系および末梢神経系の腫瘍；ならびに黒色腫、奇形癌腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、および精上皮腫をはじめとするその他の腫瘍、さらには今後ＣＤ３８が発現することが確認された癌。本発明の抗ＣＤ３８抗体は独特の作用機構を有しているので、本発明による組合せ剤は、一般的に用いられる抗癌剤が効かない白血病、リンパ腫、および癌を治療するのに主に役立つ。

従って、本発明は、癌の治療用医薬の製造のための上記組合せ剤の使用も包含する。

この実施例では、腫瘍増殖阻害について本発明の抗ＣＤ３８抗体／メルファラン組合せ剤の有効性をｉｎ ｖｉｖｏで実証した。

最初に選択した腫瘍モデルは、移植性ヒト多発性骨髄腫細胞株、ＲＰＭＩ−８２２６をＳＣＩＤマウスに移植したものであった。

Ｈｕ３８ＳＢ１９を、Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋を含まないリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）に配合した。腫瘍移植後１６、１９、２２、２５日目に、Ｈｕ３８ＳＢ１９を静脈内投与した。

メルファランを、エタノールが５％、ポリソルベート８０が５％、０．９％塩化ナトリウム水溶液が９０％の中に配合した。腫瘍移植後１６、１９、２２、２５日目に、メルファランをｈｕ３８ＳＢ１９と同時に静脈内投与した（この組合せの最高用量を除く、最高用量では１９日目に毒性が現れたため治療を停止した。）。

実験結果を表１にまとめる。

腫瘍が２倍になる時間＝３．２日。

以下の評価項目を用いた：
・≧２０％体重減少または≧１０％薬物死を誘導する投薬量では毒性であるとした、
・ｌｏｇ１０細胞死滅＝（Ｔ−Ｃ）／［３．３２×（腫瘍が２倍になる日数）］を計算することにより抗腫瘍効力を求めた
（Ｔは、処置したマウスで１０００ｍｇに達するまでの時間の中央値を意味し、Ｃは対照マウスで同じ大きさに達するまでの時間の中央値（２５．３日）を意味する；無再発生存個体はこれらの計算から排除し別々に集計する。）。ｌｏｇ細胞死滅＜０．７では抗腫瘍活性はないものとした。ｌｏｇ細胞死滅≧２．８では治療は非常に活性が高いものとした
・無再発生存個体（ＴＦＳ）：研究の全期間（最後の処置から１００日後以降）について触診限界（６３ｍｇ）未満の完全回復に相当する。
・治療的相乗作用：ある組合せ剤が研究の最良の薬剤単独よりも活性が高い（少なくとも１のｌｏｇ細胞死滅の差）ならばこの組合せ剤は治療的相乗作用を有する。

メルファラン単独の場合の毒性は、１６．１ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で観測され、マウス５匹中３匹が薬物関連死をとげた、即ち１０％閾値を超えた。メルファランの無毒の最高用量（ＨＮＴＤ）は１０ｍｇ／ｋｇ／注射であった（注射量合計＝４０ｍｇ／ｋｇ）。１０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量は、ｌｏｇ細胞死滅が１．９と活性であることがわかった。

ｈｕ３８ＳＢ１９に関して、完成品は、４０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で耐容性がよかった。毒性は観測されず、このことは抗体がマウスＣＤ３８との交差反応性を欠如していることで説明できる。ｌｏｇ細胞死滅は０．５であり、ｈｕ３８ＤＢ１９がこの条件下では活性ではなかったことを示している。

メルファランを１６．１ｍｇ／ｋｇ／注射、およびｈｕ３８ＳＢ１９を４０ｍｇ／ｋｇ／注射で組み合わせると毒性であり、５匹中５匹が薬物関連死をとげた、即ち同じ用量でのメルファラン単独で観測された結果と非常に類似していた。１０ｍｇ／ｋｇ／注射のメルファランに４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９を合わせた用量がＨＮＴＤであると判断された。この用量では、ｌｏｇ細胞死滅は２．２であり、この組合せが最良作用剤、即ちメルファランぐらい活性があることを示した。

別の実験を、ＲＰＭＩ−８２２６と比較してメルファランに対する感受性が高いヒト多発性骨髄腫モデル、ＬＰ１で行なった。この骨髄腫モデルをＳＣＩＤマウスに移植した。

Ｈｕ３８ＳＢ１９を５％グルコース水溶液に配合した。移植後１２、１５、１８、２１日目に、Ｈｕ３８ＳＢ１９を静脈内投与した。

メルファランを、エタノールが５％、ポリソルベート８０が５％、０．９％塩化ナトリウム水溶液が９０％の中に配合した。移植後１２、１５、１８、２１日目に、メルファランをｈｕ３８ＳＢ１９と同時に静脈内投与した。

実験結果を表２にまとめる。

腫瘍が２倍になる時間＝１．５日。

以下の評価項目を用いた：
・≧２０％体重減少または≧１０％薬物死を誘導する投薬量では毒性であるとした、
・ｌｏｇ１０細胞死滅＝（Ｔ−Ｃ）／［３．３２×（腫瘍が２倍になる日数）］を計算することにより抗腫瘍効力を求めた
（Ｔは、処置したマウスで１０００ｍｇに達するまでの時間の中央値を意味し、Ｃは対照マウスで同じ大きさに達するまでの時間の中央値（１６．８日）を意味する；無再発生存個体はこれらの計算から排除し別々に集計する。）。ｌｏｇ細胞死滅＜０．７では抗腫瘍活性はないものとした。ｌｏｇ細胞死滅≧２．８では治療は非常に活性が高いものとした
・治療的相乗作用：ある組合せ剤が研究の最良の薬剤単独よりも活性が高い（少なくとも１のｌｏｇ細胞死滅の差）ならばこの組合せ剤は治療的相乗作用を有する。

メルファラン単独の場合の毒性は、１６．１ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で観測され、２２日目の最下点で３３．６％の体重減少であり、即ち２０％閾値を超えた、また４／５は薬物関連死をとげた。メルファランのＨＮＴＤは１０ｍｇ／ｋｇ／注射であった（注射量合計＝４０ｍｇ／ｋｇ）。１０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量は、ｌｏｇ細胞死滅が９．３と活性であることがわかった。

ｈｕ３８ＳＢ１９に関して、完成品は、４０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で耐容性がよかった。毒性は観測されず、このことは抗体がマウスＣＤ３８との交差反応性を欠如していることで説明できる。ｌｏｇ細胞死滅は０．２であり、ｈｕ３８ＤＢ１９がこの条件下では活性ではなかったことを示している。

メルファランを１６．１ｍｇ／ｋｇ／注射、およびｈｕ３８ＳＢ１９を４０ｍｇ／ｋｇ／注射で組み合わせると毒性であり、２２日目の最下点で３４．２％の体重減少、および５／５が薬物関連死をとげた、即ち同じ用量でのメルファラン単独で観測された結果と非常に類似していた。１０ｍｇ／ｋｇ／注射のメルファランに４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９を合わせた用量が無毒の最高用量であると判断された。際立ったことに、この用量は、１８．９のｌｏｇ細胞死滅（および１４８日目で１／５がＴＦＳ）という高い抗腫瘍効力を示し、メルファラン単独のＨＮＴＤ（９．３のｌｏｇ細胞死滅）との比較から治療的相乗作用が実証された。メルファラン単独の等毒性用量と比較して、組合せ剤の用量レベルを下げても治療的相乗作用は維持された。

腫瘍が２倍になる時間＝３．２日。治療開始時の腫瘍の大きさの中央値＝１３１から１４８ｍｇ。腫瘍が中央値で１０００ｍｇに達するまでの時間＝２５．３日。配合：ｈｕ３８ＳＢ１９＝Ｃａ^２＋およびＭｇ^２＋を含まないリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）；メルファラン＝エタノールが５％、ポリソルベート８０が５％、０．９％塩化ナトリウム水溶液が９０％。ＢＷＣ＝体重変化、Ｔ−Ｃ＝腫瘍増殖の遅延、ＨＮＴＤ＝無毒性の最高用量、ＨＤＴ＝試験した最高用量、ＩＶ＝静脈内。

腫瘍が２倍になる時間＝１．５日。治療開始時の腫瘍の大きさの中央値＝１１１から１２７ｍｇ。腫瘍が中央値で１０００ｍｇに達するまでの時間＝１６．８日。配合：ｈｕ３８ＳＢ１９＝５％グルコース水溶液、メルファラン：エタノールが５％、ポリソルベート８０が５％、０．９％塩化ナトリウム水溶液が９０％。ＢＷＣ＝体重変化、Ｔ−Ｃ＝腫瘍増殖の遅延、ＨＮＴＤ＝無毒性の最高用量、ＨＤＴ＝試験した最高用量、ＴＦＳ＝無再発生存個体、ＮＴＢＡ＝無癌動物、ＩＶ＝静脈内。^ａ毒性が現れたため、１８日目に治療を停止した。

Claims (10)

1. アポトーシス、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により、ＣＤ３８^＋細胞を死滅させることができる、ＣＤ３８を特異的に認識する抗体、および少なくともメルファランを含む薬学的組合せ剤。
2. 抗体がヒト化抗体である、請求項１に記載の組合せ剤。
3. 前記抗体が、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、および３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域を１つ以上含む、請求項２に記載の組合せ剤。
4. 前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号６６で表されるアミノ酸配列を有するとともに前記重鎖は配列番号：１３、１４、および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖は配列番号：６２および６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するとともに軽鎖は配列番号：１６、１７、および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項３に記載の組合せ剤。
5. 前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号７２で表されるアミノ酸配列を有するとともに重鎖は配列番号：２５、２６、および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖は配列番号：６８および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するとともに軽鎖は配列番号：２８、２９、および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項３に記載の組合せ剤。
6. 癌治療用医薬を製造するための請求項１に記載の薬学的組合せ剤を調製するためのＣＤ３８を特異的に認識する抗体の使用。
7. 抗体がヒト化抗体である、請求項６に記載の使用。
8. 前記抗体が、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、および３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域を１つ以上含む、請求項７に記載の使用。
9. 前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号６６で表されるアミノ酸配列を有するとともに重鎖は配列番号：１３、１４、および１５で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖は配列番号：６２および６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するとともに軽鎖は配列番号：１６、１７、および１８で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項８に記載の使用。
10. 前記抗体が、少なくとも１本の重鎖および少なくとも１本の軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号７２で表されるアミノ酸配列を有するとともに前記重鎖は配列番号：２５、２６、および２７で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含み、ならびに前記軽鎖は配列番号：６８および７０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するとともに軽鎖は配列番号：２８、２９、および３０で表されるアミノ酸配列を有する３つの連続した相補性決定領域を含む、請求項８に記載の使用。