JP2011527897A - 循環組織因子のインビトロアッセイ方法及び凝固疾患の検出における使用 - Google Patents

循環組織因子のインビトロアッセイ方法及び凝固疾患の検出における使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2011527897A
JP2011527897A JP2011517936A JP2011517936A JP2011527897A JP 2011527897 A JP2011527897 A JP 2011527897A JP 2011517936 A JP2011517936 A JP 2011517936A JP 2011517936 A JP2011517936 A JP 2011517936A JP 2011527897 A JP2011527897 A JP 2011527897A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
factor
activity
tissue factor
tfpi
inhibitor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2011517936A
Other languages
English (en)
Inventor
パトリック・ヴァン・ドレデン
オーレリー・ルソー
バリー・ウッドハムズ
Original Assignee
ディアグノスチカ・スタゴ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ディアグノスチカ・スタゴ filed Critical ディアグノスチカ・スタゴ
Publication of JP2011527897A publication Critical patent/JP2011527897A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
    • G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
    • G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
    • G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
    • G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G01N2800/226—Thrombotic disorders, i.e. thrombo-embolism irrespective of location/organ involved, e.g. renal vein thrombosis, venous thrombosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本発明は、血液凝固、特に、組織因子の異常な発現に関連し、かつ、前記因子の過剰発現に相関する病態生理学的現象に関連する血液凝固症の分野に関する。本発明は、生物学的試料中の循環組織因子の活性をアッセイするための方法に関する。本発明は、インビトロ、特に患者から回収した血液試料に対して実施される。

Description

本発明は、血液凝固、特に組織因子の異常な発現に関連する血液凝固疾患の分野、並びに前記因子の過剰発現と相関する病理学的現象に関する。
本発明は、生物学的試料中の循環組織因子の活性をアッセイするための方法に関する。
本発明の方法は、インビトロ、特に、患者から回収した血液試料、又は回収した血液試料から調製した試料に対して実施する。
本発明の方法は、好ましくは、血漿媒体中で実施する。有利には、発色タイプのアッセイを使用する。
インビボ凝固における主要な活性化因子である、組織因子は、４７ｋＤａの膜貫通糖タンパク質であり、第ＶＩＩ因子又は第ＶＩＩａ因子と結合して、組織因子−第ＶＩＩａ因子複合体を形成し、第ＩＸ因子及び第Ｘ因子の活性化によって凝固活性化を引き起こしトロンビンの生成及びフィブリンの形成を同調させる。実際、凝固の開始は、第ＶＩＩ因子が、一定の細胞又はその成分（内皮、単球−マクロファージ、平滑筋細胞、線維芽細胞、上皮細胞、細胞起源の微粒子、単球起源の微粒子から分子が移行した後の血小板、腫瘍性細胞）によって発現される、その特異的な表面タンパク質受容体である組織因子に結合することを必要とする。組織因子−ＶＩＩａ複合体の活性は、正常な血液凝固だけでなく、悪性疾患、急性冠状動脈症候群、及び重度の敗血症と関連する血栓の発生にも関与する。血液凝固の平衡の維持に必須の活性の制御は、組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ（組織因子経路インヒビター））によって確実にされる。当該インヒビター、すなわち、ＴＦＰＩは、組織因子を不活性化しないが、組織因子−第ＶＩＩａ因子複合体の触媒活性を阻害する。まず、ＴＦＰＩは第Ｘａ因子に結合し、次いで、第Ｘａ因子が阻害される。次に、Ｘａ／ＴＦＰＩ複合体が第ＶＩＩａ−組織因子複合体に結合し、４つの要素からなる第Ｘａ因子／ＴＦＰＩ／第ＶＩＩａ因子／組織因子複合体を形成する。ここでは、第Ｘａ因子、第ＶＩＩａ因子、及び組織因子はもはや活性を有しない。かくして、ＴＦＰＩは、組織因子（ＴＦ）の発現によって誘導される凝固の活性化を制限し、凝固の最初の分子事象が凝固カスケードの活性化を実際に誘導できるようになる前に、越えるべき所定の初期段階を与える。かくして、ＴＦＰＩは、凝固をもたらすことなく、組織因子の低いノイズ曝露を達成する。ＴＦＰＩは内皮細胞及び血小板によって合成される。
生理学的条件下においては、組織因子の発現は広範に分布しており、循環する血液と直接接触する細胞（内皮細胞及び例えば血液因子）を除く、広範な種類の細胞種の表面上に存在する。血管の外膜、心筋、粘膜組織、及び表皮組織は組織因子を非常に豊富に含む。
急性の虚血性動脈イベントに関与する、アテローム斑の血栓形成は、組織因子に対する病理学的曝露に密接に関連する。アテローム斑の血栓形成は、プラーク破裂の場合の血栓形成プロセスを大きく強化する、組織因子の存在量に相関する。同様に、敗血症の間に、組織因子は、単球及び内皮細胞によって発現され、散在性の血管内凝固に関与し得る。組織因子は、細胞膜由来の微粒子の表面上でも同定されている。その様な微粒子は、単球及びリンパ球に由来し、アテローム斑において同定されている。それらは、凝固促進活性を有し、アポトーシスを起こした細胞に由来する。
凝固促進活性に加えて、組織因子は、各種の細胞集団に対してホルモンの機能に相当する機能を有するタンパク質であると現在では解されている（１）。
したがって、例えば、組織因子が、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の生産を促進し、インビボ及びインビトロ血管新生を誘導することが示されている。
組織因子は、細胞移動も刺激し、その転移並びに腫瘍に関連する血管新生における血管壁の構成及び完全性への関与が既に開示されている（２）。
かくして、組織因子が各種の生理病理学的状況に関与していることが現在では明らかであり、血栓リスクの状況だけでなく、所定の病態、特に癌の進展の観察において、その活性の変化を理解するアッセイ方法を利用可能にすることが必要である。
血液又は血漿の組織因子をアッセイするための従来の方法は、ＥＬＩＳＡタイプの方法などの免疫学的タイプの方法であり、抗原のみを測定し、かくして、定性的というよりも定量的アッセイである。
各種の活性試験が文献に開示されている。その大半は、（３）に記載の原理を使用する、発色法（凝血塊形成時間を測定する）を使用することにより、細胞抽出物から開始して実施する。
他のＴＦ活性試験は、活性化第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩａ）、カルシウム、及び第Ｘａ因子の特異的な基質の存在下における、活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）の生成を評価することからなる。
かくして、前記試験は、ＦＸをＦＸａに活性化するＴＦ−ＦＶＩＩａ複合体の能力を測定することからなる。
このＦＸの活性化は、例えば、加水分解して発色器を生成する基質を使用する際に発色法を使用して、加水分解した基質の量から算出され得る。
前記スキームに基づく活性試験の大半は、繊維素を除いた、すなわち、フィブリン単量体のポリマー化を妨げるように処理された血漿試料に実施され、試験を実施する際に得られる最適な測定が乱され得る。しかしながら、この従来の工程は、このタイプの試験の自動化を複雑なものとし、二段階で試験を実施することを必要とする。
さらに、従来技術の活性試験は、血漿中のＴＦＰＩの量における変化を考慮に入れず、測定されたＴＦの実際の活性を歪め、かくして、ＴＦ測定に関連する患者の血栓形成の可能性に関する不正確な情報を提供する可能性がある。
Valery Daubie, Roland Pochet, Sophie Houard and Pierre Philippart. Tissue factor : a mini-review. J. Tissue Eng Regen Med. 2007 ; 1 : 161 -169. Rudiger Gerlach, Timm Scheuer, Martina Bohm, Jurgen Beck, Alina Woszczyk, Andreas Raabe, Inge Scharrer and Volker Seifert. Increased levels of plasma tissue factor pathway inhibitor in patients with glioblastoma and intracerebral metastases. Neurological Research, 2003 ; Vol 25, 335- 338. Anat Aharon, Benjamin Brenner, Tamar Katz, Yohei Miyagi, Naomi Lanir. Tissue factor and tissue factor pathway inhibitor levels in trophoblast cells : implications for placental hemostasis. Thromb. Haemost. 2004 ; 92 : 776- 86. Nigel Mackman. Role of tissue factor in hemostasis and thrombosis. Blood cells Molecules and Diseases 2006; 36: 104-107. Valery Daubie, Roland Pochet, Sophie Houard, Pierre Philippart. Tissue factor: a mini-review J Tissue Eng Regen Med 2007; 1 : 161 -169. Rachel Tilley, Nigel Mackman. Tissue factor in hemostasis and thrombosis. Semin Thromb and Hemost 2006; 31 : 5-10. Bjarne Osterud, Eirik Bjorklid. Sources of tissue factor. Semin Thromb and Hemost 2006; 32: 11 -23. Arthur J. Chu. Tissue factor mediates inflammation. Archives of Biochem and Biophy 2005; 440: 123-132. Janusz Rak, Chloe Milson, Linda May, Petr Klement, Joanne Yu. Tissue factor in cancer and angiogenesis: The molecular link between genetic tumor progression, tumor neovascularization, and cancer coagulopathy. Semin Thromb and Hemost 2006; 32: 54-70. Pierre-Francois Laterre, Xavier Wittebole, Christine Collienne. Pharmacological inhibition of tissue factor. Semin Thromb and Hemost 2006; 32: 71 -76.
本発明は、従来技術の試験において遭遇する問題から外れることを目的とする。
この目的のために、組織因子に対するＴＦＰＩの阻害効果を中和する、循環組織因子の活性をアッセイする単一工程アッセイのための方法を提案する。
実際、本発明は、フィブリンポリマー化インヒビター及び組織因子に対するＴＦＰＩの作用を阻害する化合物の存在下における、生物学的試料中の循環組織因子の活性のインビトロアッセイを実施することからなる。
より具体的には、本発明の方法は、試験生物学的試料、フィブリンポリマー化インヒビター、及びＴＦに対するＴＦＰＩの作用のインヒビターによって形成される反応媒体に、過剰な凝固因子ＶＩＩ及びＸが添加される際に、循環組織因子の活性によって生成される第Ｘａ因子の測定を可能にする。
本発明は、過剰な第ＶＩＩ因子及び第Ｘ因子の存在下において第Ｘａ因子を生成する循環組織因子の能力に基づく、循環組織因子の活性の、生物学的試料における、インビトロアッセイを実施する単一工程方法にも関する。
本発明の方法を実施する生物学的試料は、個体の試料回収に由来する試料である。
前記試料は、好ましくは血液試料、より好ましくは血漿試料である。
しかしながら、本発明の方法は、尿試料若しくは脳脊髄液（ＣＳＦ）又は他の生物学的試料に対して実施してもよい。
好ましくは、本発明の方法は、特異的な基質に対する当該因子の加水分解活性の測定によって、形成されるＸａの量が測定される、酵素タイプの方法である。
特に前記基質は、天然又は合成の、酵素の基質である。好ましくは、第Ｘａ因子のアミド分解活性をアッセイすることができる基質である。特に、発色又は蛍光性基質である。
発色タイプの、そのような基質は、例えば、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ社（他の可能な供給業者：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ；Ｂｉｏｐｅｐ ＳＡ；Ｋａｂｉ Ｖｉｔｒｕｍ；Ｂｉｏｇｅｎｉｃ；Ｂｉｏｐｈｅｎ；Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ）製のＣＢＳ ５２４４である。
生成される第Ｘａ因子の量（及び循環組織因子の活性の測定）は、加水分解された基質の量のアッセイから算出される。
前記アッセイは、選択した基質にしたがって決定される読み取りウィンドウにおける、反応混合物の最適な密度の変化を測定することによって実施してよい。
本発明の１つの特定の実施態様では、患者から取り出した生物学的試料から得られた血漿を適切な緩衝液で希釈する。
前記緩衝液は、例えば、血液凝固試験で頻繁に使用される、オウレン・コーラー（Ｏｗｒｅｎ Ｋｏｌｌｅｒ）緩衝液であってよい。
得られる希釈物は、試験試料の性質及び使用する基質の感度に依存する。
血漿試料の場合には、有利には、１／２から１／２０の範囲、好ましくは１／２から１／４の範囲にある。
カルシウムイオンは、例えば、ＣａＣｌ２の形態で提供される。
フィブリンポリマー化インヒビターは、当該技術分野において日常的に使用されている化合物から選択される。
特に、前記フィブリンポリマー化インヒビターは、Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ社製のＰｅｆａｂｌｏｃという商品名で既知のオリゴペプチドＧＰＲＰ．ＡｃＯＨなどのポリペプチドインヒビターである。
前記インヒビターは、試験血漿の希釈にしたがって選択される、５から２５ｇ／Ｌの濃度で反応媒体中において使用されてよい。例えば、血漿が１／３まで希釈される際は、前記インヒビターは、有利には、１０ｇ／Ｌの濃度、すなわち、０．６６６ｇ／Ｌから３．３３ｇ／Ｌの範囲、特に１．３３２ｇ／Ｌの終濃度で使用する。
Ｐｅｆａｂｌｏｃは本発明の好ましいフィブリンポリマー化インヒビターであるが、例えば抗フィブリノゲン抗体などの他のタイプのインヒビターを使用することもできる。
ＴＦＰＩインヒビターは、循環ＴＦに対するＴＦＰＩの阻害効果を阻害する化合物であり、かくして、試料中に存在するＴＦＰＩのレベルにおける変化を歪めることがないＴＦの定量アッセイを可能にする。
ＴＦＰＩインヒビターは、ＴＦＰＩアンタゴニスト効果を有する任意のタイプの化合物から選択される。好ましくは、抗ＴＦＰＩ抗体又はＴＦＰＩに結合する抗体断片であり、前記抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、又は単鎖であってよい。
本発明の特定の実施態様にしたがえば、Ｄａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏによって供給されるモノクローナル抗体である、抗体Ｔ４Ｅ２が使用される。
その濃度は、試験試料中に含有されるＴＦＰＩの全てを阻害するように選択される。それは、試験試料に応じて、５から５００μｇ／ｍＬ（希釈緩衝液中の濃度）で変化し得る。１／３で希釈された血漿試料の場合には、最終的な抗体濃度は好ましくは６．６μｇ／ｍＬである。
本発明の方法にしたがって、反応媒体が、有利には、過剰な第ＶＩＩ因子及び第Ｘ因子を含む。上で説明したとおり、組織因子が活性化第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩａ）に結合して第ＩＸ因子及び第Ｘ因子を活性化する複合体を形成するため、これらの因子を使用して、組織因子の活性を測定することができる。ＴＦの活性は生成される第Ｘａ因子の量によって測定されるため、Ｘａの特異的な基質の加水分解を測定するために、生成されるＸａの量がＴＦの活性に直接相関するように、第ＶＩＩ因子及び第Ｘ因子がその反応を制限してはならない。
かくして、これらの因子が過剰に添加され、それらの測定を干渉するリスクを避ける。
試験する試料のタイプに依存して、これら２種の因子の各々の終濃度が、有利には、第ＶＩＩ因子については５から２０ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの範囲にあり、第Ｘ因子については３から１６ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの範囲にある。
本発明の特定の実施態様によれば、試料が１／３に希釈された血漿である際に、第ＶＩＩ因子は１３７ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの濃度にあり、第Ｘ因子は８０ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの濃度にある（ＰＥＵ＝血漿当量単位）。
これらの因子は、精製された又は組換えのものであってよく、ヒト又は動物起源のものであってよい。それらは、例えば、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ、Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、又はＳｉｇｍａ社によって提供されている。
好ましい他の実施態様では、試験する血漿試料は、例えばヘパリン処理を受けた患者に由来する試料のアッセイにおいて、血漿に存在する可能性があるヘパリンから試験を独立したものとするために、ヘパリンインヒビター化合物も含む。
この化合物は、例えば、血液凝固試験におけるヘパリンの効果を阻害するために簡便に使用される、ポリブレンである。
それは、０．５から１０ｍｇ／Ｌの範囲の終濃度で有利に使用される。
当業者であれば、選択した試薬にしたがって濃度及び活性を適合させることができるであろう。
説明のために、試薬の濃度及び活性が、本願に含まれる目安に対して、±５０％、例えば±２０％、又は±１０％の量まで変化してよいことに注意すべきである。この変化は、他の試薬から独立して、各試薬に関連してよい。
特定の実施態様によれば、本発明の方法は、以下のプロトコールを使用して実施される。
測定は、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ社製のＳＴＡの範囲の自動化装置を使用して実施した。
血漿試料は、１２ｍｇ／Ｌのポリブレン及び５０μｇ／Ｌの抗ＴＦＰＩ抗体（Ｔ４Ｅ２）を添加したオウレン・コーラー緩衝液からなる希釈緩衝液で１／３に希釈した。
以下の物：
・８０ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの第Ｘ因子を含む２５μｌの溶液（凍結乾燥したフラスコに精製水を入れた：終濃度８ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬ）；
・１３７ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの第ＶＩＩ因子を含む２５μｌの溶液（凍結乾燥したフラスコに精製水を入れた：終濃度１３．７ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬ）；
・５０μｌの２５ｍＭＣａＣｌ２溶液
を、５０μｌの当該混合物に添加した。
当該反応媒体を３７℃で５００秒間にわたってインキュベートした。
インキュベーション工程の後に、０．８４μＭの濃度でＣＢＳ５２４４基質を含む１００μｌの溶液を添加して、３．３６μＭの終濃度を与えた（フラスコに精製水を入れた）。
組織因子の機能活性を与える検量線を作成するために、以下のもの：
・例えば０．００から４４ｐＭのＴＦを血漿に混入することによって、組織因子を混入した正常な血漿プール（図３）；又は
・組織因子を混入したＮａＣｌ−ＣａＣｌ２溶液（図３）
を使用した。
血漿の各希釈物を１／３の希釈で試験した。
４４ｐＭ、２２ｐＭ、１１ｐＭ、５．５０ｐＭ、２．７５ｐＭ、及び０ｐＭの活性に相当する血漿プールに添加したＴＦの濃度が測定される。
組織因子の活性は、第Ｘａ因子の合成基質であるＣＢＳ５２．４４で測定した。事実、ＦＶＩＩの存在下では、ＴＦがＦＸをＦＸａに活性化する。ＦＸａのアミド分解活性は、４０５ｎｍの波長においてパラニトロアニリンの遊離によって測定した。組織因子活性の各値（ｐＭ）に相当する光学密度を、４０５ｎｍの波長において６から６００秒の読み取りウィンドウで測定した。
次いで、検量上の抗ＴＦＰＩ抗体の効果を測定した（図４及び表１）。
本発明は、
・試験試料、フィブリンポリマー化インヒビター、ＴＦＰＩインヒビター、及び適当な場合にはヘパリンインヒビターを含む試薬１；
・精製された又は組換えの第ＶＩＩ因子、有利には凍結乾燥されているもの；
・精製された又は組換えの第Ｘ因子、有利には凍結乾燥されているもの；
・カルシウムイオン、例えばＣａＣｌ２の形態のもの；
・活性化因子Ｘの酵素基質、有利には凍結乾燥されているもの；
・適当な場合には、検量試薬、有利には凍結乾燥されているもの
を含む、特に血漿試料中における、循環組織因子の活性を測定するためのキットにも関する。
本発明は、本願に記載した循環組織因子の活性の測定を含む、異常な血液凝固のインビトロ検出方法にも関する。前記測定は、各種の生理病理学的な背景で実施されてよい。
特に、本発明は、血栓の発生の疑いがあり、かくして、第Ｘ因子に対する組織因子の活性の増大をもたらす組織因子の異常な放出が生じる患者の血栓形成の可能性を測定することにも関連してよい。
さらに、各種の試験を実施して、子癇前症と正常な妊娠とを区別するために、妊娠の間における複数の血液凝固マーカーの役割を評価した。
下記の実施例において報告したとおり、子癇前症を有する女性に由来する血漿において測定される組織因子活性は、正常な妊娠女性及び妊娠していない女性で測定される値よりも大きい。
かくして、組織因子は、子癇前症の場合における血管内皮が受ける損傷を評価するための新規生物学的マーカーであってよい。
かくして、本発明は、有利には、循環ＴＦ活性が本発明にしたがって測定される、妊娠の場合における子癇前症のリスクを評価するための方法を提供する。本発明は、前記方法を実施するためのキットも提供する。
同様に、下記の実施例に記載したように、ＴＦ活性アッセイ、特に活性ＴＦ／遊離ＴＦＰＩ比率は、対照と比較して、活性化ＴＦの数及び活性化ＴＦ／遊離ＴＦＰＩ比率の双方が増大する疾患である、例えば急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を観察するための、病態の進展を観察するための新規ツール、及び病態の進展に関して望ましい又は望ましくない予後を確立するための新規ツールを提供する。
かくして、本発明は、本発明にしたがって循環ＴＦ活性又は循環ＴＦ／遊離ＴＦＰＩ比率を測定する、急性心筋梗塞のための予後を観察又は確立するための方法も提供する。本発明は、前記方法を実施するためのキットも提供する。
最後に、例えば国際会議（ASH会議 Atlanta USA, 7-11 December 2007, Thrombosis and Haematosis Issues in Cancer, Bergame, Italy 26-28 October 2007）において、最近提示されたデータに示されているように、癌の発生及び発達における組織因子の関与は現在よく認識されている。診断レベルにおいては、ＴＦの活性、特にその増大をアッセイすることは、癌の病態の進展を観察するための新規指標である。
かくして、本発明は、有利には、本発明にしたがって循環ＴＦ活性を測定する、癌の病態の進展を観察するための方法を提供する。本発明は、前記方法を実施するためのキットも提供する。
かくして、組織因子活性のアッセイは、特に流産及び子癇前症、血栓症、敗血症、ガン、炎症、ＤＩＶＣ、糖尿病、血小板減少症などの妊娠合併症のリスクを評価するために、妊娠に関連する各種疾患の評価及び予後にも有利である。また、前記アッセイは、例えばＴＦＰＩ治療などの抗血栓症治療の評価にも関連してよい。
図面及び以下の実施例は、本発明を説明するものである。
図１は、TF濃度の検量線を示す。 図２は、濃度（ｎｇ／ｍＬ）とＯＤとの関係を示す。 図３は、プール及びＮａＣｌ−ＣａＣｌ２における検量を示す。 図４は、抗ＴＦＰＩ抗体有り又は無しでの検量線を示す。 図５は、試料の第ＶＩＩ因子の割合に対する感受性を示す。 図６は、試料の第Ｘ因子の割合に対する感受性を示す。 図７は、試料のＴＦＰＩの割合に対する感受性を示す。 図８は、Ｘ ＥＲＬ−Ｘ Ｓｔａｇｏの相関関係を示す。 図９は、死亡又は生存しているMI患者におけるTFの変化を示す。 図１０は、病態血漿における組織因子濃度を示す。
血漿の正常な値を推定するために、本発明を使用して、組織因子の活性について、３１の正常な血漿をアッセイした。光学密度及び対応するＴＦ活性の割合の測定を下表に記載している。前記測定は、正常な血漿中の組織因子の機能活性の正常な値の指標として解されてよい。
ヘパリンに対する感受性は、上述のアッセイ条件下でアッセイしたＴＦを混入した（２２ｐＭ）血漿に対するカルシパリンの濃度を増大させて添加する（０から２ＩＵ／ｍＬ）ことによって評価した。ヘパリンに対する不感受性試験は、９４％超の回収率を示した（表２）。これは、カルシパリンが、ＴＦの機能活性についての低い決定性を有することを示す。
所定の各種の濃度の第ＶＩＩ因子を含むＴＦを混入させた血漿を、上述の方法を使用してアッセイした。
それらは、
・第ＶＩＩ因子欠乏血漿（０％カラム）；
・第ＶＩＩ因子を多かれ少なかれ欠乏させたプール由来の血漿（２５から８７．５％カラム）；
・正常プール由来の血漿（１００％カラム）
であった。
結果（図５及び表３）は、９９％以上の回収率とともに、試料中の第ＶＩＩ因子の割合が、ＴＦの機能活性の値に影響を与えないことを示す。
所定の各種濃度の第Ｘ因子を含有するＴＦ混入血漿を、上述の方法を使用してアッセイした。
それらは、
・第Ｘ因子欠乏血漿（０％カラム）；
・第Ｘ因子を多かれ少なかれ欠乏させたプールに由来する血漿（２５から８７．５％カラム）；
・正常プールに由来する血漿（１００％カラム）
であった。
結果（図６及び表４）は、９９％以上の回収率とともに、サンプル中の第Ｘ因子の割合がＴＦの機能活性の値に影響を与えないことを示す。
所定の各種濃度のＴＦＰＩを含有するＴＦ混入血漿を、上述の方法を使用してアッセイした。
それらは、
・ＴＦＰＩ欠乏血漿（０％カラム）；
・ＴＦＰＩを多かれ少なかれ欠乏させたプールに由来する血漿（２５から８７．５％カラム）；
・正常プールに由来する血漿（１００％カラム）
であった。
結果（図７及び表５）は、９３％以上の回収率とともに、サンプル中のＴＦＰＩの割合がＴＦの機能活性の値に影響を与えないことを示す。
例として、各種の病態において、
・ＴＦ活性の測定を、症状を有しない対象の群に対して実施し、心筋梗塞（ＭＩ）の患者の関連群について入院日に実施した。前記群は、良好な予後を有する対象及び梗塞の数日後に死亡した患者に分類した（ＭＩ ＤＣＤ）。ＴＦ割合は正常な対象よりもＭＩ患者において顕著に大きく、死亡した患者において実質的により大きかった（図９）；
・循環ＴＦ活性を、癌、流産：胎児を亡くした段階に依存して３．６５±１．３５から３．９２±１．２９、ヘパリンによって誘導された血小板減少症（ＨＩＴ）：６．３３±２．１０ｐＭ；ＣＩＶＤ：２．８１±１．５２ｐＭ、重度の糖尿病：２．９８±０．９９ｐＭ；及びループス：１．９５±０．８２ｐＭなどの他の血栓症の病態又は妊娠の間、特に、子癇前症：正常な妊娠の間の１．９８±１．３５ｐＭと比較して３．５８±１．３４ｐＭなどの妊娠合併症の間においてもアッセイした。全ての測定によって、ＴＦ活性の顕著な増大が示されている（図１０）；
・再現性の測定：
測定の再現性を試験して、以下の値を得た：
・症状を有する患者の血漿に対する第Ｘ因子（ＥＲＬ及びＳｔａｇｏ）の複数の測定の相関は、図８に示すとおり、以下の結果をもたらした：
・Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ由来の組織因子の割合（ｐＭ）を本発明にしたがって測定した。
再構成後のＮｅｏ−Ｒフラスコ中の６．２ｎＭのＴＦの濃度に基づいて、Ｎｅｏ−Ｒ Ｓｔａｇｏ（単一試験）から得られた範囲にわたって結果を読取った。
（参考文献）
1. Valery Daubie, Roland Pochet, Sophie Houard and Pierre Philippart. Tissue factor : a mini-review. J. Tissue Eng Regen Med. 2007 ; 1 : 161 -169.
2. Rudiger Gerlach, Timm Scheuer, Martina Bohm, Jurgen Beck, Alina Woszczyk, Andreas Raabe, Inge Scharrer and Volker Seifert. Increased levels of plasma tissue factor pathway inhibitor in patients with glioblastoma and intracerebral metastases. Neurological Research, 2003 ; Vol 25, 335- 338.
3. Anat Aharon, Benjamin Brenner, Tamar Katz, Yohei Miyagi, Naomi Lanir. Tissue factor and tissue factor pathway inhibitor levels in trophoblast cells : implications for placental hemostasis. Thromb. Haemost. 2004 ; 92 : 776- 86.
4. Nigel Mackman. Role of tissue factor in hemostasis and thrombosis. Blood cells Molecules and Diseases 2006; 36: 104-107.
5. Valery Daubie, Roland Pochet, Sophie Houard, Pierre Philippart. Tissue factor: a mini-review J Tissue Eng Regen Med 2007; 1 : 161 -169.
6. Rachel Tilley, Nigel Mackman. Tissue factor in hemostasis and thrombosis. Semin Thromb and Hemost 2006; 31 : 5-10.
7. Bjarne Osterud, Eirik Bjorklid. Sources of tissue factor. Semin Thromb and Hemost 2006; 32: 11 -23.
8. Arthur J. Chu. Tissue factor mediates inflammation. Archives of Biochem and Biophy 2005; 440: 123-132.
9. Janusz Rak, Chloe Milson, Linda May, Petr Klement, Joanne Yu. Tissue factor in cancer and angiogenesis: The molecular link between genetic tumor progression, tumor neovascularization, and cancer coagulopathy. Semin Thromb and Hemost 2006; 32: 54-70.
10. Pierre-Francois Laterre, Xavier Wittebole, Christine Collienne. Pharmacological inhibition of tissue factor. Semin Thromb and Hemost 2006; 32: 71 -76.

Claims (30)

  1. 活性化第Ｘ因子（Ｘａ）の生成が、試験される生物学的試料、過剰な第ＶＩＩ因子及び第Ｘ因子、カルシウムイオン、フィブリンポリマー化インヒビター、及びＴＦＰＩ（組織因子経路インヒビター）活性インヒビターを含む反応媒体中で測定される、患者の事前試料回収に由来する生物学試料中の循環組織因子（ｃＴＦ）の活性のインビトロアッセイ方法。
  2. 前記生物学的試料が、血液試料又はその派生物、特に血漿試料であることを特徴とする、請求項１に記載の循環組織因子活性のインビトロ測定のための方法。
  3. 前記反応媒体中における第Ｘａ因子の生成が、特異的な基質に対する前記因子の加水分解活性を測定することによって測定されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記特異的な基質が酵素基質であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
  5. 活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）のアミド分解活性が、発色又は蛍光性基質を使用してアッセイされることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
  6. 合成発色基質であるＣＢＳ５２４４によるパラニトロアニリンの遊離が測定されることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
  7. 前記反応媒体が、適当な緩衝液、例えばオウレン・コーラー緩衝液で希釈された血漿を含むことを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記血漿が、１／２から１／２０の希釈範囲、例えば１／２から１／４の希釈範囲で希釈され、特に前記血漿が１／３に希釈されることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
  9. 前記フィブリンポリマー化インヒビターが、ポリペプチドインヒビター、例えば、Ｈ-ＧｌｙＰｒｏＡｒｇＰｒｏ-ＯＨ．ＡｃＯＨ （ＧＰＲＰ．ＡｃＯＨ）又は抗フィブリノゲン抗体であることを特徴とする、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 凝固の開始に必要なカルシウムイオンがＣａＣｌ２の形態で供給されることを特徴とする、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記循環組織因子に対するＴＦＰＩの活性のインヒビターが、循環組織因子に対するＴＦＰＩの活性を阻害することができる、抗ＴＦＰＩ抗体又はＴＦＰＩに結合する機能性抗体断片によって構成されることを特徴とする、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記ＴＦＰＩインヒビターが、モノクローナルＴ４Ｅ２抗体又は前記抗体の機能性断片である、請求項１１に記載の方法。
  13. ａ）フィブリンポリマー化インヒビター、ｃＴＦに対するＴＦＰＩの活性のインヒビター、適当な場合には希釈緩衝液を含む試薬１と血漿試料を接触させる工程；
    ｂ）活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）を生成するために、過剰な第Ｘ因子、過剰な第ＶＩＩ因子、及びカルシウムイオンを溶液中に含む試薬２と、工程ａ）で構成された反応媒体をインキュベートする工程；
    ｃ）インキュベートの後に、活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）の酵素基質と工程ｂ）で構成された反応媒体を接触させる工程；
    ｄ）第Ｘａ因子基質の変化を検出する工程
    を含む、請求項２から１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記試薬１が、ヘパリンインヒビター、例えばポリブレンも含むことを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の方法。
  15. １．２ｍｇ／Ｌのポリブレン及び５０μｇ／Ｌの抗ＴＦＰＩ抗体を添加したオウレン・コーラー緩衝液で前記血漿試料を１／３に希釈することを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の方法。
  16. 第Ｘａ因子の酵素基質の変化の定量測定が、所定のウィンドウで光学密度を読み取ることによって実施されることを特徴とする、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 変化した第Ｘａ因子基質の量が、検量線を参照してアッセイされることを特徴とする、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記反応が、以下の条件：
    ・工程ａ）に関して、オウレン・コーラー緩衝液で１／３に希釈した血漿試料を、５０μｇ／Ｌの抗ＴＦＰＩ抗体及び１．２ｍｇ／Ｌのポリブレン並びに１０ｇ／Ｌの濃度のＧＰＲＰ．ＡｃＯＨと示されるフィブリンポリマー化インヒビターと接触させる；
    ・工程ｂ）に関して、８０ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの割合の２５μｌの第Ｘ因子、１３７ＰＥＵ／ｍｇ／ｍＬの割合の２５μｌの第ＶＩＩ因子、及び５０μｌの２５ｍＭ ＣａＣｌ２溶液を工程ａ）の混合物５０μｌに添加し、得られた反応混合物を３７℃で５００秒間にわたってインキュベートする；
    ・工程ｃ）に関して、活性化第Ｘ因子の酵素基質の溶液１００μｌを添加して、４０５ｎｍの波長で６から６００秒の読み取りウィンドウで光学密度を読み取ることによって、変化した酵素基質の量を測定する、
    で実施されることを特徴とする、請求項１３から１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 内部対照をアッセイする工程をさらに含むことを特徴とする、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 得られた光学密度の値を、組織因子を混入させた正常血漿のプール又は組織因子を混入させたＮａＣｌ−ＣａＣｌ２溶液を使用して調製した検量線のものと比較することを特徴とする、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
  21. ・試験する試料のための希釈緩衝液、フィブリンポリマー化インヒビター、ＴＦＰＩインヒビター、及び適当な場合にはヘパリンインヒビターを含む試薬１；
    ・精製されたか又は組換えの第ＶＩＩ因子、有利には凍結乾燥されたもの；
    ・精製されたか又は組換えの第Ｘ因子、有利には凍結乾燥されたもの；
    ・カルシウムイオン、例えば、ＣａＣｌ２の形態のもの；
    ・活性化第Ｘ因子の酵素基質、有利には凍結乾燥されたもの；
    ・適当な場合には検量試薬、有利には凍結乾燥されたもの
    を含む、生物学的試料、特に血漿試料で生物学的媒体中の循環組織因子の活性を測定するためのキット。
  22. 前記試料希釈緩衝液がオウレン・コーラー緩衝液であり、前記へパリンインヒビターがポリブレンであり、かつ、前記フィブリンポリマー化インヒビターがＨ-ＧｌｙＰｒｏＡｒｇＰｒｏ-ＯＨ．ＡｃＯＨ （ＧＰＲＰ．ＡｃＯＨ）又は抗フィブリノゲン抗体であることを特徴とする、請求項２１に記載のキット。
  23. 内部対照をさらに含むことを特徴とする、請求項２１又は２２に記載のキット。
  24. 第Ｘａ因子の活性のための検量線を含むことを特徴とする、請求項２１から２３のいずれか一項に記載のキット。
  25. 請求項１から２０のいずれか一項に記載のとおりに循環組織因子の活性を測定する工程を含む、異常な凝固のインビトロ検出方法。
  26. 測定された循環組織因子の活性を前記活性の正常値と比較する工程を含む、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記正常値が、正常な血漿試料のプールにおける循環組織因子の活性をアッセイした後に得られる、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記正常値が、個々にアッセイされた正常な血漿試料で測定された循環組織因子の活性の値から確立される、請求項２６に記載の方法。
  29. 血栓症のリスク又は血栓症、特に、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性冠不全症候群、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＶＣ）、糖尿病、子癇前症、流産、血栓症、敗血症、炎症、又は癌の症状と関連する循環組織因子の割合における増大を検出するための、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 血栓症のリスク又は血栓症、特に、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、急性冠不全症候群、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＶＣ）、糖尿病、子癇前症、流産、血栓症、敗血症、炎症、又は癌の症状と関連する循環組織因子の割合における増大を検出するための、請求項２０から２５のいずれか一項に記載のキット。
JP2011517936A 2008-07-17 2009-07-16 循環組織因子のインビトロアッセイ方法及び凝固疾患の検出における使用 Pending JP2011527897A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0804073A FR2934052B1 (fr) 2008-07-17 2008-07-17 Dosage de l'activite du facteur tissulaire circulant
FR08/04073 2008-07-17
PCT/EP2009/059182 WO2010007140A1 (fr) 2008-07-17 2009-07-16 Méthode de dosage in vitro du facteur tissulaire circulant - application à la détection des désordres de la coagulation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2011527897A true JP2011527897A (ja) 2011-11-10

Family

ID=39967268

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2011517936A Pending JP2011527897A (ja) 2008-07-17 2009-07-16 循環組織因子のインビトロアッセイ方法及び凝固疾患の検出における使用

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8647833B2 (ja)
EP (1) EP2304050B1 (ja)
JP (1) JP2011527897A (ja)
CN (1) CN102159723A (ja)
FR (1) FR2934052B1 (ja)
WO (1) WO2010007140A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020021890A1 (ja) * 2018-07-25 2020-01-30 ソニー株式会社 血液凝固系解析装置
WO2022145475A1 (ja) * 2020-12-28 2022-07-07 藤森工業株式会社 血液凝固能の評価方法および血栓症リスクの検査方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2009327338B2 (en) 2008-12-19 2015-07-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited TFPI inhibitors and methods of use
NZ603028A (en) 2010-03-19 2014-11-28 Baxter Healthcare Sa Tfpi inhibitors and methods of use
CN103163295B (zh) * 2011-12-08 2015-11-18 吴宗贵 一种用于急性冠脉综合征的液相芯片试剂盒以其制备方法
NZ724133A (en) 2012-03-21 2020-07-31 Baxalta Inc Tfpi inhibitors and methods of use
EP3140650B1 (en) * 2014-05-05 2022-07-20 Haemonetics Corporation Methodologies and reagents for detecting fibrinolysis and hyperfibrinolysis
CN104714036B (zh) * 2015-04-01 2016-06-01 成都协和生物技术有限责任公司 抗凝血酶iii活性测定试剂盒的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005312A1 (fr) * 1997-07-23 1999-02-04 Tokuyama Corporation Procede de determination de parametres de coagulation
EP1367135A1 (en) * 2002-05-29 2003-12-03 Pentapharm AG Improved method for the assessment of thrombin formation in blood or plasma
WO2006096345A2 (en) * 2005-03-04 2006-09-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Coagulation and fibrinolytic cascades modulator
WO2008081094A2 (fr) * 2006-11-29 2008-07-10 Diagnostica Stago Methode de mesure fonctionnelle de l'activite de la thrombomoduline plasmatique

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4429660B4 (de) * 1994-08-20 2004-02-12 Dade Behring Marburg Gmbh Zusatzmittel für diagnostische Tests zur Bestimmung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes, Verfahren zur Reduzierung der Beeinflussung von diagnostischen Tests durch Heparin und Verwendung von Metallsalzen zu diesen Zwecken

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999005312A1 (fr) * 1997-07-23 1999-02-04 Tokuyama Corporation Procede de determination de parametres de coagulation
EP1367135A1 (en) * 2002-05-29 2003-12-03 Pentapharm AG Improved method for the assessment of thrombin formation in blood or plasma
WO2006096345A2 (en) * 2005-03-04 2006-09-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Coagulation and fibrinolytic cascades modulator
WO2008081094A2 (fr) * 2006-11-29 2008-07-10 Diagnostica Stago Methode de mesure fonctionnelle de l'activite de la thrombomoduline plasmatique

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6013051560; Ｂｅｎｄｚ　ｅｔ　ａｌ: Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ．　９７, 2000, ｐ．　４６３-４７２ *
JPN6013051562; Ｆｕｋｕｄａ　ｅｔ　ａｌ: ＣＬＩＮ．　ＣＨＥＭ． Ｖｏｌ．　３５，　Ｎｏ．　９, 1989, ｐ．　１８９７-１９００ *
JPN6013051564; Ｈｉｓｃｈｅ　ｅｔ　ａｌ: ＣＬＩＮ．　ＣＨＥＭ． Ｖｏｌ．　２７，　Ｎｏ．　８, 1981, ｐ．　１４２７-１４３０ *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020021890A1 (ja) * 2018-07-25 2020-01-30 ソニー株式会社 血液凝固系解析装置
JPWO2020021890A1 (ja) * 2018-07-25 2021-08-19 ソニーグループ株式会社 血液凝固系解析装置
JP7444059B2 (ja) 2018-07-25 2024-03-06 ソニーグループ株式会社 血液凝固系解析装置
WO2022145475A1 (ja) * 2020-12-28 2022-07-07 藤森工業株式会社 血液凝固能の評価方法および血栓症リスクの検査方法

Also Published As

Publication number Publication date
FR2934052B1 (fr) 2011-11-25
EP2304050B1 (fr) 2013-08-21
US8647833B2 (en) 2014-02-11
FR2934052A1 (fr) 2010-01-22
US20110250621A1 (en) 2011-10-13
CN102159723A (zh) 2011-08-17
EP2304050A1 (fr) 2011-04-06
WO2010007140A1 (fr) 2010-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2011527897A (ja) 循環組織因子のインビトロアッセイ方法及び凝固疾患の検出における使用
JP3047120B2 (ja) 活性化因子ｖｉｉに関する定量的凝血検定
Dempfle et al. Use of soluble fibrin antigen instead of D-dimer as fibrin-related marker may enhance the prognostic power of the ISTH overt DIC score
US7892842B2 (en) Procedure for the determination of the activity of the protease which activates factor VII from protein solutions
JP5613414B2 (ja) 可溶性フィブリン及びｄ−ダイマーの測定による静脈血栓塞栓症の検出
Simpson et al. Simultaneous thrombin and plasmin generation capacities in normal and abnormal states of coagulation and fibrinolysis in children and adults
JP2010510793A (ja) 血漿トロンボモジュリン活性の機能的測定方法
Khor et al. Laboratory evaluation of hypercoagulability
Michiels et al. Laboratory diagnosis of hereditary thrombophilia
JPWO2006049300A1 (ja) 血小板血栓症又は臓器障害の検出方法
Morrissey Tissue factor interactions with factor VII: measurement and clinical significance of factor VIIa in plasma
Laffan et al. 17 Investigation of a thrombotic tendency
Larrauri et al. Analysis of cold activation of the contact system in hereditary angioedema with normal C1 inhibitor
Reda et al. PC deficiency testing: thrombin-thrombomodulin as PC activator and aptamer-based enzyme capturing increase diagnostic accuracy
AU2012327215A1 (en) Detection of subject biomarker diagnostic assay for dengue fever and the differentiation of dengue hemorrhagic fever
Hiller Basic principles of hemostasis
JP4422228B2 (ja) 活性化血液凝固第ｖｉｉ因子に特異的なモノクローナル抗体およびその使用
JPH09168398A (ja) 活性化凝固因子ＶＩＩ（ＦＶＩＩａ）の定量法
Giddings et al. Laboratory support in the diagnosis of coagulation disorders
JP7152084B1 (ja) 組織因子経路インヒビターの抗凝固活性の検査試薬、検査試薬セット、および検査方法
He et al. A ROTEM method using APTT reagent and tissue factor as the clotting activators may better define bleeding heterogeneity in moderate or severe haemophilia A (part I: Study in plasma samples)
Misenheimer et al. A novel factor IXa–specific enzyme-linked immunosorbent assay detects factor IXa in human plasma
Rossi et al. Laboratory markers of hypercoagulability
Zrari A modified, optimized kinetic photometric thrombin generation assay components to measure the potency of thrombin in plasma
Soulier et al. Present knowledge on contact factors: theoretical and practical aspects

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20120402

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20131022

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20140122

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20140129

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20140422

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20141104