JP2010018530A - リンゴ二次残渣物又はチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法及びそのチロシナーゼ阻害活性剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】リンゴ二次残渣物やチシマザサを高圧圧搾を施すことにより得られる抽出液からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることによるチロシナーゼ阻害剤の抽出方法。特に、リンゴ二次残渣物とチシマザサを粉砕して高圧圧搾を施して得られる長繊維とを混合して常温で高圧圧搾を施し、得られた果汁を50〜60℃、減圧下で濃縮して得られた果汁からチロシナーゼ阻害活性剤を得る抽出方法、あるいは、チシマザサ単独で葉・枝・稈部を長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で高圧圧搾し、緑色の圧搾液を得、得られた圧搾液を90〜100℃で2〜4分程度加熱して凝固部分を取り除き、加熱後の液体を60〜80℃、減圧下で濃縮した無色透明の液体の溜出液からチロシナーゼ阻害活性剤を得る抽出方法であることが好ましい。
【選択図】なし
Description
リンゴ抽出物とチシマザサ抽出物によるチロシナーゼ阻害活性試験
1.試料
1)高圧圧搾リンゴ果汁
リンゴ二次原料(通常のリンゴジュースを製造した際に排出される残渣)20kgとチシマザサの葉・枝・稈部を1mm〜50mm程度に粉砕し、220kg/cm2程度の高圧圧搾を施した後の長繊維10kgを混合して常温で220kg/cm2程度の高圧圧搾を施した。そうすることによりリンゴ二次原料の絞られた果汁は流出せずに高圧圧搾して混合された長繊維のチシマザサの繊維間に表面張力で保水される。得られた果汁10Lを50℃〜60℃、好ましくは55℃で76mmHg程度の減圧下でBrix40.0±1.0まで濃縮して2Lの濃縮果汁を得た。この濃縮果汁をAH-3とし、試料として用いた。
2)チシマザサの非加熱圧搾液
青森県内に自生するチシマザサの葉・枝・稈部150kgを全て粉砕機により長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で220kg/cm2程度の高圧圧搾を施し、緑色の圧搾液35Lを得た。得られた圧搾液を90℃〜100℃、好ましくは95℃で2分から4分、好ましくは3分加熱して凝固部分を取り除き、加熱後の液体を60℃〜80℃、好ましくは70℃、76mmHg程度の減圧下でBrixが約40になるまで濃縮した。得られた溜出液25LをK-2(無色透明、液体)、濃縮液を24時間程度静置し二層に分離して得られた上層部1.5LをK-3(黒褐色、液体)、下層部150gをK-4(茶褐色、泥状)とした。
チロシナーゼ(Tyrosinase Mushroom, SIGMA Co. Ltd.)はpH 6.80の0.1Mリン酸緩衝液(pHを一定に保つ溶液)に溶解して93μg/ml酵素溶液とした。基質はL-DOPA(3,4-Dihydroxy
- L-phenylalanine, SIGMA Co. Ltd.)を用い、0.1Mリン酸緩衝液に溶解して2mMの基質溶液とした。阻害剤としてAH-3、K-3、K-4、NK-3は0.1Mリン酸緩衝液で希釈し、K-2、NK-2はそのまま用いた。また、陽性対照としてアルブチン(Arbutin, SIGMA Co. Ltd.)を用いた。
96穴のマイクロプレート(多種の試料を一斉に処理、測定できるプラスチック製容器)に2mM基質溶液50μlと阻害剤50μlを加えたものを2列作り、プレートを37℃で5分間プレインキュベート(前保温)した。プレインキュベート後、一方の列に93μg/ml 酵素溶液50μlを、もう一方に0.1M リン酸緩衝液50μlを加えた。プレートを37℃で15分間インキュベート(保温)した後、プレートリーダー(マイクロプレート測定用分光光度計)を用いて波長450nmにおける吸光度を測定し、一列の平均を測定値とした。
チロシナーゼ阻害活性を持たないリン酸緩衝液中で処理した(チロシナーゼの活性が阻害されていない)ものの吸光度をA、各阻害剤を添加しチロシナーゼの活性を阻害させたものの吸光度をBとおき、チロシナーゼ阻害率を 阻害率(%) = {(A−B)/A}×100 として計算した。各阻害剤の濃度と阻害率を表1と表2にまとめた。
表1は各実施例に示す各阻害剤がチロシナーゼの活性をどの程度阻害しているか(阻害率)を表している。「阻害率が高い」ことは「美白効果が強い」ことを示し、又、「濃度が低くても阻害率が高い」ものは「使用量が少なくても美白効果が強い」と言える。本実験では全ての阻害剤がチロシナーゼ阻害活性を示した。特にK−3、K−4の効果は強く、濃度が約66mg/ml でそれぞれ約77%、94%という高い阻害率を示した。
表2は、表1をグラフに表したものである。直線の傾きが急な(直線が縦になっている)ほど低濃度でも阻害率が高いため、美白効果が強いと言える。K−3、K−4が特に強く、次いでNK−3、AH−3がやや強い。K−2、NK−2はやや弱いが効果があることを示している。
Claims (8)
- リンゴ二次残渣物やチシマザサを高圧圧搾を施すことにより得られる抽出液からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするリンゴ又はチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- リンゴ二次残渣物と、チシマザサを粉砕して高圧圧搾を施して得られる長繊維とを混合して常温で220kg/cn2程度の高圧圧搾を施し、得られた果汁を50℃から60℃で76mmHg程度の減圧下でBrix 40.0±1.0まで濃縮して得られた果汁からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするリンゴを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- チシマザサの葉・枝・稈部を長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で高圧圧搾し、緑色の圧搾液を得、得られた圧搾液を90℃から100℃で2分〜4分程度加熱して凝固部分を取り除き、加熱後の液体を60℃〜80℃、76mmHg程度の減圧下でBrixが約40になるまで濃縮した無色透明の液体の溜出液からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- チシマザサの葉・枝・稈部を長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で高圧圧搾し、緑色の圧搾液を得、得られた圧搾液を90℃から100℃で2分〜4分程度加熱して凝固部分を取り除き、加熱後の液体を60℃〜80℃、76mmHg程度の減圧下でBrixが約40になるまで濃縮した残留液を24時間程度静置し、二層に分離した上層部の黒褐色の液体からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- チシマザサの葉・枝・稈部を長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で高圧圧搾し、緑色の圧搾液を得、得られた圧搾液を90℃から100℃で2分〜4分程度加熱して凝固部分を取り除き、加熱後の液体を60℃〜80℃、76mmHg程度の減圧下でBrixが約40になるまで濃縮した残留液を24時間程度静置し、二層に分離した下層部の茶褐色で泥状の物質からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- チシマザサの葉・枝・稈部を長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で高圧圧搾し、圧搾後の残渣を乾燥後170℃〜180℃、20分〜40分程度で熱水抽出し、黄褐色の液体を得、この抽出液をBrixが約40になるまで60℃〜80℃、76mmHg程度の減圧蒸留した無色透明の液体の溜出液からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- チシマザサの葉・枝・稈部を長さ1mm〜50mm程度に粉砕して非加熱で高圧圧搾し、圧搾後の残渣を乾燥後170℃〜180℃、20分〜40分程度で熱水抽出し、黄褐色の液体を得、この抽出液をBrixが約40になるまで60℃〜80℃、76mmHg程度の減圧蒸留した残留液を24時間程度静置し、その沈殿物を分離した黒褐色の液体からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤の抽出方法。
- リンゴ二次残渣物やチシマザサを高圧圧搾を施すことにより得られる抽出液からチロシナーゼ阻害活性剤を得ることを特徴とするリンゴ又はチシマザサを原料とするチロシナーゼ阻害活性剤。
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