JP2009234959A - Skin-whitening agent comprising 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone or derivative of the same, skin-whitening preparation for external use, and cosmetic containing the skin-whitening agent - Google Patents
Skin-whitening agent comprising 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone or derivative of the same, skin-whitening preparation for external use, and cosmetic containing the skin-whitening agent Download PDFInfo
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Abstract
Description
本発明は、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体からなる美白剤、並びにその美白剤を含有する美白用皮膚外用剤、化粧料であって、メラニンの生成を抑制し、日焼け後の色素沈着、しみ・そばかす、あるいは肝斑などの予防および改善に有効な美白剤、美白用皮膚外用剤、化粧料に関する。 The present invention relates to a whitening agent comprising 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone or a derivative thereof, as well as a skin whitening external preparation and a cosmetic containing the whitening agent, which can produce melanin. The present invention relates to a whitening agent, a whitening skin external preparation, and a cosmetic that are effective in suppressing and preventing pigmentation, sunburn, freckles, and measles after sunburn.
皮膚における色素異常には、日焼け後の色素沈着、しみ・そばかす、あるいは肝斑などがあげられる。このような色素沈着症の発生機序については、いまだ不明な点が多いが、一般的にはホルモンの異常や太陽光に含まれる紫外線の刺激が原因となってメラニン色素が生合成され、これらが皮膚内に異常沈着するものと考えられている。 Pigmental abnormalities in the skin include pigmentation after sunburn, spots, freckles, and liver spots. There are still many unclear points about the mechanism of pigmentation, but in general, melanin pigments are biosynthesized due to hormonal abnormalities or the stimulation of ultraviolet rays contained in sunlight. Is considered to be abnormally deposited in the skin.
このメラニン色素は、皮膚内では表皮基底層に存在するメラニン細胞（メラノサイト）内のメラニン生成顆粒（メラノソーム）において生合成され、生合成されたメラニンは隣接する表皮細胞へ拡散する。メラノサイト内におけるメラニン生成反応は、次のようなものが考えられている。すなわち、アミノ酸であるチロシンが酵素チロシナーゼの作用によりドーパキノンとなり、これが酵素的または非酵素的に反応が進行し、最終的に黒色のメラニンが生成される過程がメラニン色素の生成過程である。したがって、こうしたメラニン色素の生成反応の第一段階であるチロシナーゼの作用を抑制することがメラニン生成の抑制に重要である。 This melanin pigment is biosynthesized in melanin-producing granules (melanosomes) in melanocytes (melanocytes) existing in the basal layer of the epidermis in the skin, and the biosynthesized melanin diffuses to adjacent epidermis cells. The following is considered for the melanin production reaction in melanocytes. That is, tyrosine, which is an amino acid, is converted to dopaquinone by the action of the enzyme tyrosinase, and the reaction proceeds enzymatically or non-enzymatically, and finally black melanin is generated is the melanin pigment generating process. Therefore, it is important for the suppression of melanin production to suppress the action of tyrosinase, which is the first step of the melanin pigment production reaction.
こうしたことから、以前より、日焼け後の色素沈着、しみ・そばかす、あるいは肝斑などの予防および改善を目的に、乳液、化粧水、クリーム、ジェル、パック、洗浄料、ファンデーション、軟膏などの皮膚外用剤には、アスコルビン酸およびその誘導体、グルタチオンなどの美白成分が配合されている。たとえばアスコルビン酸誘導体を配合するものとして、下記特許文献１や特許文献２のような出願がなされ、グルタチオンを配合するものとして、下記特許文献３のような出願がなされている。 For these reasons, the topical use of skin, skin lotions, lotions, creams, gels, packs, cleaning agents, foundations, ointments, etc., for the purpose of preventing and improving pigmentation after sunburn, spots, freckles, and measles The agent contains whitening components such as ascorbic acid and its derivatives, and glutathione. For example, applications such as the following Patent Documents 1 and 2 have been filed as blending ascorbic acid derivatives, and applications such as the following Patent Document 3 have been filed as blending glutathione.
しかし、これらの美白成分を配合した化粧料では、美白成分の効果が十分でなく、或いは製剤中で変質するなどして十分な効果が得られていないのが実情である。一方、近年、ハイドロキノンを配合した皮膚外用剤が、皮膚科や美容クリニックなどで用いられている。一応、ハイドロキノンにはメラニン生成抑制効果が確認されているが、使用中のかぶれ、刺激が高頻度で発生することから、安全性に問題がある。 However, in cosmetics containing these whitening ingredients, the effect of the whitening ingredients is not sufficient, or the effect is not obtained due to alteration in the preparation. On the other hand, in recent years, external preparations for skin containing hydroquinone have been used in dermatology and beauty clinics. For the time being, hydroquinone has been confirmed to have an inhibitory effect on melanin production, but there is a problem in safety because rash and irritation occur frequently during use.
本発明は上記のような問題点を解決するためになされたものであり、美白効果と高い安全性を有する美白剤、並びにその美白剤を含有する美白用皮膚外用剤、化粧料を提供することを課題とする。 The present invention has been made to solve the above problems, and provides a whitening agent having a whitening effect and high safety, as well as a skin whitening external preparation and a cosmetic containing the whitening agent. Is an issue.
本発明者等はこのような課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体が優れたメラニン生成抑制効果を有すること、さらにこの３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体を美白剤として用いることにより、製剤中において安定で、使用中のかぶれや刺激などの問題のない、皮膚への安全性の高い皮膚外用剤や化粧料が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies to solve such problems, the present inventors have found that 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone or a derivative thereof has an excellent melanin production inhibitory effect, Furthermore, by using this 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone or a derivative thereof as a whitening agent, it is stable in the preparation and has no problems such as irritation and irritation during use, and is safe for the skin. The present inventors have found that a highly functional skin external preparation and cosmetics can be obtained, and have completed the present invention.
すなわち、本発明は、下記式（１）で示される３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体からなる美白剤を提供するものである。式（１）中、Ｒは水素原子、又は直鎖状若しくは分岐鎖状の炭素数１〜１２のアルキル基である。 That is, the present invention provides a whitening agent comprising 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone represented by the following formula (1) or a derivative thereof. In formula (1), R is a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group having 1 to 12 carbon atoms.
また本発明は、このような３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体からなる美白剤を含有する美白用皮膚外用剤及び化粧料を提供するものである。美白用皮膚外用剤中において、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンおよびその誘導体は０．００１％〜２０．０重量％含有されていることが好ましい。 Moreover, this invention provides the skin external preparation for whitening and cosmetics containing the whitening agent which consists of such 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4- pyridinone or its derivative (s). In the whitening skin external preparation, 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone and its derivatives are preferably contained in an amount of 0.001% to 20.0% by weight.
本発明の美白剤は、優れたメラニン生成抑制効果を有し、かつ安全性の高いものである。また本発明の美白剤、美白用皮膚外用剤、化粧料は、美白効果に優れ、製剤中において安定であり、皮膚への安全性も高いものである。 The whitening agent of the present invention has an excellent melanin production inhibitory effect and is highly safe. Further, the whitening agent, the whitening skin external preparation and the cosmetics of the present invention are excellent in whitening effect, stable in the preparation, and highly safe to the skin.
以下、本発明の実施形態について説明する。本発明の美白剤は、上述のように下記式（１）で示される３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体からなるものである。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described. The whitening agent of the present invention comprises 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone represented by the following formula (1) or a derivative thereof as described above.
式（１）においてＲは水素原子、又は直鎖状若しくは分岐鎖状の炭素数１〜１２、好ましくは炭素数１〜８のアルキル基である。尚、Ｒの好ましい具体例としては水素原子、メチル基、エチル基、ブチル基、オクチル基などが挙げられるが、これに限定されるものではない。式（１）で示されるこれらの化合物は、たとえばマルトールとアニリン又はアルキルアニリンを反応させることにより合成することができる。 In the formula (1), R is a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group having 1 to 12, preferably 1 to 8 carbon atoms. Preferable specific examples of R include a hydrogen atom, a methyl group, an ethyl group, a butyl group, and an octyl group, but are not limited thereto. These compounds represented by the formula (1) can be synthesized, for example, by reacting maltol with aniline or alkylaniline.
また本発明の美白用皮膚外用剤、及び化粧料は、上記のような３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体からなる美白剤を含有するものである。 Moreover, the skin external preparation for whitening of this invention, and cosmetics contain the whitening agent which consists of the above 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4- pyridinone or its derivative (s).
本発明の美白用皮膚外用剤において有効な美白効果を得るために、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン又はその誘導体の配合量は、通常乾燥固形分として０．０００１〜５０重量％とすることが好ましい。０．０００１重量％未満では本発明の効果が充分に得られない可能性があり、一方、５０重量％を超えても、その増量に見合った効果の向上は認められないからである。この観点から、０．００１〜２０重量％がより好ましい。 In order to obtain an effective whitening effect in the whitening skin external preparation of the present invention, the blending amount of 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone or a derivative thereof is usually 0.0001 to as a dry solid content. 50% by weight is preferable. If the amount is less than 0.0001% by weight, the effect of the present invention may not be sufficiently obtained. On the other hand, if the amount exceeds 50% by weight, an improvement in the effect commensurate with the increase is not recognized. In this respect, 0.001 to 20% by weight is more preferable.
本発明の美白用皮膚外用剤中には本発明の効果を損なわない範囲において、一般に化粧料で用いられ、あるいは医薬部外品、医薬品等の皮膚外用剤に用いられる各種任意成分を必要に応じて適宜配合することができる。このような任意成分として、例えば、精製水、エタノール、油性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、薬効成分、粉体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤等を挙げることができる。 In the skin whitening external preparation of the present invention, various optional ingredients generally used in cosmetics or used in skin external preparations such as quasi-drugs and pharmaceuticals are used as needed, as long as the effects of the present invention are not impaired. Can be appropriately blended. Examples of such optional components include purified water, ethanol, oily components, humectants, thickeners, preservatives, emulsifiers, medicinal components, powders, ultraviolet absorbers, dyes, fragrances, and emulsion stabilizers. Can do.
本発明の美白用皮膚外用剤の形態は、液状、乳液、軟膏、クリーム、ゲル、エアゾール、石けん等皮膚に適用可能な性状のものであれば問われるものではなく、必要に応じて適宜基剤成分等を配合して所望の形態の美白用皮膚外用剤を調製することができる。また、本発明の美白用皮膚外用剤は、医薬品、医薬部外品又は化粧料等の多様な分野において適用可能である。 The form of the skin external preparation for whitening of the present invention is not limited as long as it is applicable to the skin such as liquid, emulsion, ointment, cream, gel, aerosol, soap, etc. A whitening skin external preparation in a desired form can be prepared by blending ingredients and the like. Moreover, the skin external preparation for whitening of this invention is applicable in various fields, such as a pharmaceutical, a quasi-drug, or cosmetics.
本発明の美白用皮膚外用剤は、日焼け後の色素沈着、しみ・そばかす、あるいは肝斑などの予防および改善に用いることが可能である。なお、ここに示した色素沈着症状は例示であり、これらの色素沈着症状に本発明の美白用皮膚外用剤の適用が限定されるものではない。 The skin whitening preparation for whitening of the present invention can be used for the prevention and improvement of pigmentation after sunburn, spots, freckles, liver spots and the like. In addition, the pigmentation symptom shown here is an illustration, and application of the skin external preparation for whitening of this invention is not limited to these pigmentation symptom.
以下、本発明の実施例について説明する。
（実施例１）
本実施例は、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンの調製例についての実施例である。その調製例について説明すると、先ずマルトール（１５０ｇ）及びアニリン（２３６．３５ｇ）を濃硫酸（１１０ｍｌ）と水（３６７６ｍｌ）の混合溶媒中に懸濁させて、９５℃で７２時間撹拌した。
Examples of the present invention will be described below.
Example 1
This example is an example for the preparation of 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone. The preparation example will be described. First, maltol (150 g) and aniline (236.35 g) were suspended in a mixed solvent of concentrated sulfuric acid (110 ml) and water (3676 ml) and stirred at 95 ° C. for 72 hours.
２０℃まで冷却した後、析出した結晶を濾取し、次に水で洗浄し、５０℃で減圧乾燥した。さらに得られた粗結晶を熱メタノール（９００ｍｌ）に溶解し、活性炭（７．８ｇ）を加えて、７０℃で１時間撹拌した。熱時ろ過し、濾液を２０℃まで冷却、続いて氷冷し、析出した結晶を濾取した。濾取した結晶を冷メタノールで数回洗浄し、５０℃で減圧乾燥を行い、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン（１１３ｇ）を得た。 After cooling to 20 ° C., the precipitated crystals were collected by filtration, then washed with water and dried under reduced pressure at 50 ° C. Furthermore, the obtained crude crystal was dissolved in hot methanol (900 ml), activated carbon (7.8 g) was added, and the mixture was stirred at 70 ° C. for 1 hour. The mixture was filtered while hot, and the filtrate was cooled to 20 ° C. and then cooled with ice, and the precipitated crystals were collected by filtration. The crystals collected by filtration were washed several times with cold methanol and dried under reduced pressure at 50 ° C. to obtain 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone (113 g).
（実施例２）
本実施例は、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−ブチルフェニル−４−ピリジノンの調製例についての実施例である。その調製例について説明すると、先ずマルトール（１５ｇ）及び４−ブチルアニリン（３７．９ｇ）を濃硫酸（１１ｍｌ）と水（３６７mｌ）の混合溶媒中に懸濁させて、９５℃で７２時間撹拌した。
(Example 2)
This example is an example for the preparation of 3-hydroxy-2-methyl-Nn-butylphenyl-4-pyridinone. The preparation example will be described. First, maltol (15 g) and 4-butylaniline (37.9 g) are suspended in a mixed solvent of concentrated sulfuric acid (11 ml) and water (367 ml) and stirred at 95 ° C. for 72 hours. .
２０℃まで冷却した後、析出した結晶を濾取し、次に水で洗浄し、５０℃で減圧乾燥した。さらに得られた粗結晶を熱メタノール（１００ｍｌ）に溶解し、活性炭（１．５ｇ）を加えて、７０℃で１時間撹拌した。熱時ろ過し、濾液を２０℃まで冷却、続いて氷冷し、析出した結晶を濾取した。濾取した結晶を冷メタノールで数回洗浄し、５０℃で減圧乾燥を行い、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−ブチルフェニル−４−ピリジノン（１０．３ｇ）を得た。 After cooling to 20 ° C., the precipitated crystals were collected by filtration, then washed with water and dried under reduced pressure at 50 ° C. Furthermore, the obtained crude crystal was dissolved in hot methanol (100 ml), activated carbon (1.5 g) was added, and the mixture was stirred at 70 ° C. for 1 hour. The mixture was filtered while hot, and the filtrate was cooled to 20 ° C. and then cooled with ice, and the precipitated crystals were collected by filtration. The crystals collected by filtration were washed several times with cold methanol and dried under reduced pressure at 50 ° C. to obtain 3-hydroxy-2-methyl-Nn-butylphenyl-4-pyridinone (10.3 g).
（実施例３）
本実施例では、マウス由来のＢ１６メラノーマ培養細胞を用いたチロシナーゼ活性阻害試験を行った。
(Example 3)
In this example, a tyrosinase activity inhibition test using mouse-derived B16 melanoma cultured cells was performed.
被験化合物としては、式（１）におけるＲがＨの場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンの他、ＲがＣＨ3の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−メチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ2Ｈ5の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−エチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ4Ｈ9の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−ブチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ8Ｈ17の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ12Ｈ25の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ドデシルフェニル−４−ピリジノンを用いた。 Test compounds include 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone when R in Formula (1) is H, and 3-hydroxy-2-methyl-N when R is CH 3. - methylphenyl-4-pyridinone, R is 3-hydroxy-2-methyl -N- ethyl-phenyl-4-pyridinone the case of C 2 H 5, R is the case of C 4 H 9 3-hydroxy-2-methyl —Nn-butylphenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2-methyl-Nn-octylphenyl-4-pyridinone when R is C 8 H 17 , 3 when R is C 12 H 25 -Hydroxy-2-methyl-N-dodecylphenyl-4-pyridinone was used.
その試験方法について説明すると、先ず１０重量％ウシ胎児血清（ＩＣＮ社製）を含むダルベッコ改変イーグル培地（シグマ社製）にＢ１６メラノーマ細胞を懸濁し、９６ウェルマイクロプレート（ＩＷＡＫＩ社製）に播種し、ＣＯ2インキュベーター（９５容量％空気、５容量％二酸化炭素）内、３７℃の条件下で２４時間培養した。 The test method will be described. First, B16 melanoma cells are suspended in Dulbecco's modified Eagle medium (Sigma) containing 10% by weight fetal calf serum (ICN) and seeded on a 96-well microplate (IWAKI). The cells were cultured in a CO 2 incubator (95% by volume air, 5% by volume carbon dioxide) at 37 ° C. for 24 hours.
２４時間後、マイクロプレート中の培地を除去し、ＰＢＳ０．２ｍｌで１回洗浄した後、０．０５ｍｌの１重量％トリトンＸ−１００を含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を加えて、細胞を溶解し、チロシナーゼ溶液とした。次に被験化合物をエタノールに溶解した溶液、基質である０．２質量％Ｌ−ドーパ溶液を添加し、３７℃で３時間インキュベートした。 After 24 hours, the medium in the microplate was removed, washed once with 0.2 ml of PBS, 0.05 ml of 50 mM phosphate buffer (pH 6.8) containing 1 wt% Triton X-100 was added, Cells were lysed to make a tyrosinase solution. Next, a solution in which the test compound was dissolved in ethanol and a 0.2% by mass L-dopa solution as a substrate were added and incubated at 37 ° C. for 3 hours.
３時間後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。チロシナーゼ阻害活性は、上記被験化合物の添加濃度が１２．５ｍＭ、２５ｍＭ、及び５０ｍＭとなる３種類のものを準備し、それぞれ３種類のものについて行った。チロシナーゼ阻害活性の算出は、被験化合物の溶液に代えて溶媒として用いたエタノールを添加したものをコントロールとして４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、その吸光度に対する比率を求めることによって行った。すなわち、コントロールの吸光度を１００％として各被験化合物溶液のチロシナーゼ阻害率を算出した。その結果を表１に示す。 After 3 hours, the absorbance at 405 nm was measured. Three types of tyrosinase inhibitory activity were prepared, with the addition concentration of the test compound being 12.5 mM, 25 mM, and 50 mM. The tyrosinase inhibitory activity was calculated by measuring the absorbance at 405 nm with the addition of ethanol used as a solvent instead of the test compound solution, and determining the ratio to the absorbance. That is, the tyrosinase inhibition rate of each test compound solution was calculated with the absorbance of the control as 100%. The results are shown in Table 1.
尚、表１においては、被験化合物の上記式（１）におけるＲがＨの場合はＲ＝Ｈ、ＲがＣＨ3の場合はＲ＝ＣＨ3等の表示を行っている。表１からも明らかなように、被験化合物溶液の阻害率は、いずれも５０％以上であった。特に、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−メチルフェニル−４−ピリジノン、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−エチルフェニル−４−ピリジノンの阻害率は７８％以上と高く、また濃度が高いほど、阻害率も高くなることがわかった。このことから、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンおよびその誘導体は、マウス由来のＢ１６メラノーマ培養細胞のチロシナーゼ活性を阻害することがわかった。 In Table 1, R = H is displayed when R in the above formula (1) of the test compound is H, and R = CH 3 is displayed when R is CH 3 . As is clear from Table 1, the inhibition rate of the test compound solution was 50% or more. In particular, 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2-methyl-N-methylphenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2-methyl-N-ethylphenyl-4- It was found that the inhibition rate of pyridinone was as high as 78% or higher, and that the inhibition rate increased as the concentration increased. From this, it was found that 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone and its derivatives inhibit tyrosinase activity of mouse-derived B16 melanoma cultured cells.
（実施例４）
本実施例では、マウス由来のＢ１６メラノーマ培養細胞を用いたメラニン生成抑制試験を行った。
Example 4
In this example, a melanin production inhibition test using mouse-derived B16 melanoma cultured cells was performed.
被験化合物としては、式（１）におけるＲがＨの場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンの他、ＲがＣＨ3の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−メチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ2Ｈ5の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−エチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ4Ｈ9の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−ブチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ8Ｈ17の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ12Ｈ25の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ドデシルフェニル−４−ピリジノンを用いた。 Test compounds include 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone when R in Formula (1) is H, and 3-hydroxy-2-methyl-N when R is CH 3. - methylphenyl-4-pyridinone, R is 3-hydroxy-2-methyl -N- ethyl-phenyl-4-pyridinone the case of C 2 H 5, R is the case of C 4 H 9 3-hydroxy-2-methyl —Nn-butylphenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2-methyl-Nn-octylphenyl-4-pyridinone when R is C 8 H 17 , 3 when R is C 12 H 25 -Hydroxy-2-methyl-N-dodecylphenyl-4-pyridinone was used.
その試験方法について説明すると、先ず１０重量％ウシ胎児血清（ＩＣＮ社製）を含むダルベッコ改変イーグル培地（シグマ社製）にＢ１６メラノーマ細胞を懸濁し、６ウェルマイクロプレート（ＩＷＡＫＩ社製）に播種し、ＣＯ2インキュベーター（９５容量％空気、５容量％二酸化炭素）内、３７℃の条件下で２４時間培養した。 The test method will be described. First, B16 melanoma cells are suspended in Dulbecco's modified Eagle medium (Sigma) containing 10% by weight fetal calf serum (ICN) and seeded on a 6-well microplate (IWAKI). The cells were cultured in a CO 2 incubator (95% by volume air, 5% by volume carbon dioxide) at 37 ° C. for 24 hours.
２４時間後、マイクロプレート中の培地を除去し、あらかじめ被験化合物が、それぞれ最終濃度５mＭ、５０mＭ、及び５００mＭとなるように添加された１０重量％ウシ胎児血清（ＩＣＮ社製）を含むダルベッコ改変イーグル培地（シグマ社製）を加えて、ＣＯ2インキュベーター（９５容量％空気、５容量％二酸化炭素）内、３７℃の条件下で６日間培養した。培地を除去し、ＰＢＳ１ｍｌで１回洗浄したのち、０．２ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を加えて、細胞を完全に溶解した。 After 24 hours, the medium in the microplate was removed, and Dulbecco's modified eagle containing 10% by weight fetal calf serum (ICN) previously added with test compounds to final concentrations of 5 mM, 50 mM, and 500 mM, respectively. A medium (manufactured by Sigma) was added and cultured in a CO 2 incubator (95 vol% air, 5 vol% carbon dioxide) at 37 ° C for 6 days. After removing the medium and washing once with 1 ml of PBS, 0.2 ml of 1N sodium hydroxide solution was added to completely lyse the cells.
この細胞溶解液の４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。細胞溶解液中のメラニン量は、合成メラニン（シグマ社製）を標準メラニンとして作成した検量線から求めた。また、細胞溶解液中のタンパク質量はＤＣプロテインアッセイ（バイオラッド社製）を用いて求めた。メラニン生成量は、タンパク質量中のメラニン量で比較した。被験化合物のメラニン生成抑制効果は、被験化合物の溶液に代えて溶媒として用いたエタノールを添加した１０重量％ウシ胎児血清（ＩＣＮ社製）を含むダルベッコ改変イーグル培地で培養した時のメラニン産生量を１００とした場合の値（比率）で示した。その結果を表２に示す。表２においても、被験化合物の上記式（１）におけるＲがＨの場合はＲ＝Ｈ、ＲがＣＨ3の場合はＲ＝ＣＨ3等の表示を行っている。 The absorbance at 405 nm of this cell lysate was measured. The amount of melanin in the cell lysate was determined from a calibration curve created using synthetic melanin (manufactured by Sigma) as standard melanin. The amount of protein in the cell lysate was determined using a DC protein assay (Bio-Rad). The amount of melanin produced was compared by the amount of melanin in the amount of protein. The melanin production inhibitory effect of the test compound is the amount of melanin produced when cultured in Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% by weight fetal calf serum (ICN) supplemented with ethanol used as a solvent instead of the test compound solution. The value (ratio) in the case of 100 is shown. The results are shown in Table 2. Also in Table 2, when R in the above formula (1) of the test compound is H, R = H, and when R is CH 3 , R = CH 3 is displayed.
表２からも明らかなように、３種類の濃度の３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン溶液のメラニン産生量は、それぞれ９９％、７８％、５２％であり、
この他、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−メチルフェニル−４−ピリジノンについては、それぞれ９６％、６６％、４８％、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−エチルフェニル−４−ピリジノンについては、それぞれ９８％、５６％、５８％、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−ブチルフェニル−４−ピリジノンについては、それぞれ８８％、６２％、４８％、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノンについては、それぞれ１０１％、７４％、５５％、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ドデシルフェニル−４−ピリジノンについては、それぞれ１０３％、９０％、６３％となった。
As is clear from Table 2, the melanin production amounts of the 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone solutions at three concentrations are 99%, 78%, and 52%,
In addition, for 3-hydroxy-2-methyl-N-methylphenyl-4-pyridinone, 96%, 66%, 48% and for 3-hydroxy-2-methyl-N-ethylphenyl-4-pyridinone, respectively. , 98%, 56%, 58%, respectively, for 3-hydroxy-2-methyl-Nn-butylphenyl-4-pyridinone, 88%, 62%, 48%, 3-hydroxy-2-methyl- For Nn-octylphenyl-4-pyridinone, 101%, 74%, and 55%, respectively, and for 3-hydroxy-2-methyl-N-dodecylphenyl-4-pyridinone, 103%, 90%, and 63%, respectively. %.
いずれの被験化合物においても、濃度が５mＭの場合はさほどメラニン産生量を抑制させることができなかったが、被験化合物の濃度が５０mＭ及び５００mＭの場合は、優れたメラニン産生量を抑制効果が認められた。特に被験化合物の添加濃度が高いほど、メラニン産生量を抑制効果が向上した。このことから、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン及びその誘導体は、マウス由来のＢ１６メラノーマ培養細胞のメラニン産生量を抑制させることがわかった。 In any test compound, when the concentration was 5 mM, the amount of melanin production could not be suppressed so much, but when the concentration of the test compound was 50 mM and 500 mM, an excellent inhibitory effect on the amount of melanin production was observed. It was. In particular, the higher the concentration of the test compound added, the more effective the suppression of melanin production. From this, it was found that 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone and derivatives thereof suppress the melanin production amount of cultured B16 melanoma cells derived from mice.
（実施例５）
本実施例では、ヒト皮膚モデルを用いて色素沈着抑制試験を行った。その試験方法について説明すると、先ずヒト皮膚モデルＭＥＬ−３００Ａ（クラボウ）の上部に被験化合物を含む乳液製剤を５０ml添加し、８日間培養した。培地はメラニン合成促進因子を含むＬＬＭＭ培地を用い、２日毎に交換した。
(Example 5)
In this example, a pigmentation inhibition test was performed using a human skin model. The test method will be described. First, 50 ml of an emulsion preparation containing the test compound was added to the upper part of the human skin model MEL-300A (Kurabo) and cultured for 8 days. As the medium, an LLMM medium containing a melanin synthesis promoting factor was used and changed every two days.
被験化合物としては、式（１）におけるＲがＨの場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンの他、ＲがＣＨ3の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−メチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ2Ｈ5の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−エチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ4Ｈ9の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−ブチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ8Ｈ17の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノン、ＲがＣ12Ｈ25の場合の３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ドデシルフェニル−４−ピリジノンを用いた。 Test compounds include 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone when R in Formula (1) is H, and 3-hydroxy-2-methyl-N when R is CH 3. - methylphenyl-4-pyridinone, R is 3-hydroxy-2-methyl -N- ethyl-phenyl-4-pyridinone the case of C 2 H 5, R is the case of C 4 H 9 3-hydroxy-2-methyl —Nn-butylphenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2-methyl-Nn-octylphenyl-4-pyridinone when R is C 8 H 17 , 3 when R is C 12 H 25 -Hydroxy-2-methyl-N-dodecylphenyl-4-pyridinone was used.
各被験化合物および陽性対照としてのアルブチンを含む乳液製剤の調製は、次のように行った。処方例１に示す乳液を調製し、あらかじめ溶解した被験化合物のうち３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノンについては濃度が０．０５重量％、それ以外の被験化合物については濃度が０．１重量％、アルブチンの濃度が２重量％となるように添加し、ボルテックスミキサーで撹拌した。このように調製した被験化合物を含む乳液製剤についてL*値を測定することによる色素沈着抑制試験を行った。 Preparation of an emulsion preparation containing each test compound and arbutin as a positive control was performed as follows. The emulsion shown in Formulation Example 1 was prepared and, among the test compounds dissolved in advance, the concentration of 0.05% by weight of 3-hydroxy-2-methyl-Nn-octylphenyl-4-pyridinone, other test compounds Was added so that the concentration was 0.1 wt% and the concentration of arbutin was 2 wt%, and the mixture was stirred with a vortex mixer. The emulsion preparation containing the test compound thus prepared was subjected to a pigmentation inhibition test by measuring the L * value.
（処方例１）
組成 配合量（重量％）
（１）流動パラフィン ４．０％
（２）ワセリン ３．０％
（３）グリセリン ５．０％
（４）１，３−ブチレングリコール ５．０％
（５）ＰＯＥグリセロールトリイソステアリン酸エステル １．８％
（６）メチルセルロース ０．３％
（７）水 残量
(Prescription Example 1)
Composition Blending amount (% by weight)
(1) Liquid paraffin 4.0%
(2) Vaseline 3.0%
(3) Glycerin 5.0%
(4) 1,3-butylene glycol 5.0%
(5) POE glycerol triisostearate 1.8%
(6) Methylcellulose 0.3%
(7) Water remaining
L*値の測定は次のように行った。すなわち、培養終了後のヒト皮膚モデルをＰＢＳにより洗浄し、１０％ホルマリンを含む中性緩衝液で固定した。培養カップから皮膚組織を剥がしとり、水分を軽く拭った後、組織の反射光を分光光度計により求めた。分光光度計としては、「分光光度計ＵＶ−２４５０（株式会社島津製作所製）」を用いた。得られた反射光のスペクトルからL*a*b*表色系へ変換し、L*値を求めた。L*値の測定による色素沈着抑制試験の結果を表３に示す。 The L * value was measured as follows. That is, the human skin model after completion of the culture was washed with PBS and fixed with a neutral buffer containing 10% formalin. The skin tissue was peeled off from the culture cup, and after lightly wiping water, the reflected light of the tissue was determined with a spectrophotometer. As the spectrophotometer, “spectrophotometer UV-2450 (manufactured by Shimadzu Corporation)” was used. The obtained reflected light spectrum was converted to the L * a * b * color system and the L * value was determined. Table 3 shows the results of the pigmentation inhibition test by measuring the L * value.
表３からも明らかなように、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−n−ブチルフェニル−４−ピリジノン、３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノン及び３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ドデシルフェニル−４−ピリジノンのL*値はアルブチンに比較して著しく高く、色素沈着抑制効果が優れていることがわかった。 As is clear from Table 3, 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2-methyl-Nn-butylphenyl-4-pyridinone, 3-hydroxy-2- The L * value of methyl-Nn-octylphenyl-4-pyridinone and 3-hydroxy-2-methyl-N-dodecylphenyl-4-pyridinone is significantly higher than that of arbutin and is excellent in pigmentation inhibiting effect I understood it.
（実施例６）
本実施例では、美白効果の試験を行った。上記のとおり、優れた美白剤である３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンを配合した化粧水を調製し、その美白効果、すなわち色素沈着症状の改善効果について調べた。
(Example 6)
In this example, a whitening effect test was performed. As described above, a lotion containing 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone, which is an excellent whitening agent, was prepared, and the whitening effect, that is, the effect of improving pigmentation symptoms was examined.
その試験方法について説明すると、先ず女性パネル（２６〜５２歳）２０名をランダムに２グループに分け、一方のグループには処方例２を、もう一方のグループには比較例１を、毎日朝と夜の２回、３ケ月間にわたって洗顔後に顔面に塗布した。試験開始前および終了後の色素沈着の状態を比較して評価した。色素沈着の改善状態は、表４に示す判定基準に従って評価し、各グループ１０名の平均スコアを算出した。結果は表５に示した。 The test method will be explained. First, 20 female panels (26 to 52 years old) are randomly divided into two groups, one group is prescription example 2, the other group is comparative example 1, and each morning. It was applied to the face after washing the face twice a night for 3 months. The state of pigmentation before and after the start of the test was compared and evaluated. The improved state of pigmentation was evaluated according to the criteria shown in Table 4, and the average score of 10 people in each group was calculated. The results are shown in Table 5.
（処方例２）
組成 配合量（重量％）
（１）ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル ０．５％
（２）メチルセルロース ０．２％
（３）クインスシード ０．１％
（４）エタノール １０．０％
（５）３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン ０．２％
（６）水 残量
(Prescription example 2)
Composition Blending amount (% by weight)
(1) POE (20) oleyl alcohol ether 0.5%
(2) Methylcellulose 0.2%
(3) Quince Seed 0.1%
(4) Ethanol 10.0%
(5) 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone 0.2%
(6) Water remaining
（比較例１）
組成 配合量（重量％）
（１）ＰＯＥ（２０）オレイルアルコールエーテル ０．５％
（２）メチルセルロース ０．２％
（３）クインスシード ０．１％
（４）エタノール １０．０％
（５）水 残量
(Comparative Example 1)
Composition Blending amount (% by weight)
(1) POE (20) oleyl alcohol ether 0.5%
(2) Methylcellulose 0.2%
(3) Quince Seed 0.1%
(4) Ethanol 10.0%
(5) Water remaining
表５に美白効果試験の結果を示す。 Table 5 shows the results of the whitening effect test.
表５からも明らかなように処方例２を用いたパネルに色素沈着症状に対する改善効果が認められ、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンを含有する化粧水が、日焼け後の色素沈着、しみ・そばかす、あるいは肝斑などを予防および改善し、美しい肌とすることが明らかとなった。 As is clear from Table 5, the effect of improving pigmentation on the panel using Formulation Example 2 was observed, and the skin lotion containing 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone was applied after sunburn. It has become clear that skin pigmentation, spots, freckles, and melasma can be prevented and improved, resulting in beautiful skin.
尚、処方例２については、上記試験期間中に含有成分の析出、分離、凝集、変臭、変色といった製剤の状態変化は全く見られなかった。また、処方例２を使用したグループにおいて、皮膚の刺激反応や皮膚感作性反応を示したパネルは存在しなかった。 In Formulation Example 2, no changes in the state of the formulation such as precipitation, separation, aggregation, odor change, and discoloration of the components were observed during the test period. In the group using Formulation Example 2, there was no panel showing skin irritation or skin sensitization.
（その他の実施例）
尚、上記実施例１及び実施例２では、マルトールとアニリン及びマルトールとオクチルアニリンとを用い、濃硫酸と水の混合溶媒中に懸濁させて撹拌し、２０℃まで冷却した後、析出した結晶を濾取し、水での洗浄、減圧乾燥して得られた粗結晶を熱メタノールに溶解し、活性炭を加えて撹拌し、熱時ろ過し、濾液を２０℃まで冷却、氷冷し、析出した結晶を濾取し、濾取した結晶を冷メタノールで洗浄、減圧乾燥することによって３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノン及び３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノンを調製したが、３−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニル−４−ピリジノンの調製法は上記実施例１に限定されるものではない。また３−ヒドロキシ−２−メチル−Ｎ−ｎ−オクチルフェニル−４−ピリジノンの調製法は実施例２に限定されるものではなく、他の調製法によって調製してもよい。
(Other examples)
In Examples 1 and 2, maltol and aniline and maltol and octylaniline were suspended in a mixed solvent of concentrated sulfuric acid and water, stirred, cooled to 20 ° C., and then precipitated crystals. The crude crystals obtained by filtration, washing with water and drying under reduced pressure are dissolved in hot methanol, activated carbon is added and stirred, and the mixture is filtered while hot. The filtrate is cooled to 20 ° C., cooled with ice, and precipitated. The collected crystals were collected by filtration, washed with cold methanol, and dried under reduced pressure to give 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone and 3-hydroxy-2-methyl-Nn- Although octylphenyl-4-pyridinone was prepared, the method for preparing 3-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-4-pyridinone is not limited to Example 1 above. Moreover, the preparation method of 3-hydroxy-2-methyl-Nn-octylphenyl-4-pyridinone is not limited to Example 2, You may prepare by another preparation method.
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| JP2013521285A (en) * | 2010-03-04 | 2013-06-10 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | Inhibitors of catechol O-methyltransferase and their use in the treatment of mental disorders |
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2008
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JP2013521285A (en) * | 2010-03-04 | 2013-06-10 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | Inhibitors of catechol O-methyltransferase and their use in the treatment of mental disorders |
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