JP2009019006A

JP2009019006A - スルフォスチン、及びスルフォスチン関連化合物を有効成分とした抗腫瘍剤

Info

Publication number: JP2009019006A
Application number: JP2007182594A
Authority: JP
Inventors: Tetsuo Akiyama; 哲男秋山; Toru Masuda; 徹増田; Masatoshi Abe; 雅年阿部
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation; Nippon Kayaku Co Ltd
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation; Nippon Kayaku Co Ltd
Priority date: 2007-07-11
Filing date: 2007-07-11
Publication date: 2009-01-29
Anticipated expiration: 2027-07-11
Also published as: JP5148941B2; WO2009008508A1; US20100179324A1; EP2174930A1; EP2174930A4

Abstract

【課題】体内での腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害することができ、副作用が少なく、安全性の高い、優れた抗腫瘍剤、及び、前記抗腫瘍剤を含む医薬組成物を提供すること。
【解決手段】下記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及びその水和物の少なくともいずれかを有効成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤、並びに、前記抗腫瘍剤を含む医薬組成物である。
【化７】

ただし、前記一般式（Ｉ）中、ｎは１〜３の整数を表す。
【選択図】なし

Description

本発明は、スルフォスチン、及びスルフォスチン関連化合物を有効成分とした、悪性腫瘍、特に大腸癌の治療に好適な抗腫瘍剤に関する。

癌患者に対する治療としては様々な治療が行われているが、中でも、化学療法剤による治療が広く行われている。癌細胞は正常細胞と比べて細胞増殖が頻繁に行われていることから、従来から、抗腫瘍剤として、細胞の増殖を抑制乃至停止させる薬剤が臨床で多く用いられてきた。しかしながら、従来の薬剤は癌細胞のみを選択的に抑制することができないため、骨髄抑制などの副作用がおこることが問題となっていた。このため、癌細胞に特異的に作用する薬剤の開発が行われ、現在では、癌細胞に特異的に作用する薬剤が臨床で用いられるようになってきた。しかしながら、これらの薬剤でも臨床での効果は満足できるものではなく、正常細胞、正常組織に対する毒性が低く、かつ効果が十分に期待される薬剤が望まれている（特許文献１〜４参照）。

近年、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤、ＰＴ−１００が、マウスの皮下に移植した癌細胞の増殖を抑制することが報告された（非特許文献１参照）。しかしながら、前記化合物は、化合物自体の安全性に問題があることに加え、細胞増殖の阻害活性の選択性に問題がある。
したがって、癌細胞（腫瘍細胞）に対する特異的な阻害活性を有し、かつ、副作用が少なく、安全性の高い、新規な抗腫瘍剤、及び医薬組成物の開発が求められているのが現状である。

特開平８−１４３５６９号公報特開平８−２３９３７９号公報特開平９−２４９６４７号公報特開平１１−２１２６３号公報Ｍｏｌ．ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．，Ｖｏｌ．４，ｐ３５１，２００５

本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、体内（ｉｎｖｉｖｏ）での腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害することができ、副作用が少なく、安全性の高い、優れた抗腫瘍剤、及び、前記抗腫瘍剤を含む医薬組成物を提供することを目的とする。

前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、後述する一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物が、ｉｎｖｉｔｒｏでは癌細胞（腫瘍細胞）の増殖を抑制しないにも関わらず、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍細胞の増殖を阻害する強い抗腫瘍作用を有しており、また、従来抗腫瘍作用が知られていたＰＴ−１００やフルツロンなどと比べ毒性が低く、そのため、効果に優れ、かつ安全性の高い、優れた抗腫瘍剤となり得るという知見である。

スルフォスチンは、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｓｅｓ）属に属する微生物を培養することにより得ることができ、また、その関連化合物も化学的合成によって得ることができる。これらのスルフォスチン関連化合物（スルフォスチンを含む）は、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害活性作用を有することが知られており、例えば、骨髄抑制治療剤、感染症治療剤、白血球数増加剤、２型糖尿病治療剤、免疫調節剤、ホルモン調節剤、抗ＨＩＶ薬、抗アレルギー薬、抗炎症薬、抗リウマチ薬などとして期待されている（例えば、国際公開第９９／２５７１９号パンフレット；特開２０００−３２７６８９号公報；国際公開第２００２／０５５０８８号パンフレット；特開２００３−１８３２９２号公報；特開２００３−２４６７５４号公報；特開２００４−２６６７８号公報；Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，Ｖｏｌ．５４，ｐ７４４，２００１；Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，Ｖｏｌ．６７，ｐ９９９，２００４；ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１３，７８５，２００５；Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，Ｖｏｌ．５８，ｐ１１１，２００５；参照）。

しかしながら、前記スルフォスチン関連化合物が抗腫瘍作用を有することは全く知られておらず、本発明者らの新たな知見である。

本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞下記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及びその水和物の少なくともいずれかを有効成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤である。

ただし、前記一般式（Ｉ）中、ｎは１〜３の整数を表す。
＜２＞下記構造式（ＩＩ）で表されるスルフォスチンを有効成分とする前記＜１＞に記載の抗腫瘍剤である。

＜３＞前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗腫瘍剤を含むことを特徴とする医薬組成物である。
＜４＞大腸癌治療用医薬組成物である前記＜３＞に記載の医薬組成物である。

本発明によると、従来における諸問題を全く新しいメカニズムと思われる作用で解決することができ、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害することができ、副作用が少なく、安全性の高い、優れた抗腫瘍剤、及び、前記抗腫瘍剤を含む医薬組成物を提供することができる。

（抗腫瘍剤）
本発明の抗腫瘍剤は、下記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及びその水和物の少なくともいずれかを有効成分として含有し、必要に応じて更にその他の成分を含有する。

ただし、前記一般式（Ｉ）中、ｎは１〜３の整数を表す。

＜スルフォスチン関連化合物＞
前記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物の入手方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、国際公開第９９／２５７１９号パンフレット、特開２０００−３２７６８９号公報、特開２００３−１８３２９２号公報、特開２００３−２４６７５４号公報、ＡｋｉｙａｍａＴら，ＪＡｎｔｉｂｉｏｔ（Ｔｏｋｙｏ）．２００１Ｓｅｐ；５４（９）：７４４−６、ＡｂｅＭら，ＪＮａｔＰｒｏｄ．２００４Ｊｕｎ；６７（６）：９９９−１００４などに記載の製造方法に従って製造することにより得ることができる。

また、前記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物は、光学活性部位をアミノ基の付け根の環構成炭素（Ｃ）及び燐（Ｐ）に有しており、各々の光学異性体及びラセミ体が存在する。これらの光学異性体及びラセミ体も、前記スルフォスチン関連化合物に含まれる。

また、前記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物のうち、ｎが２であるものがスルフォスチンであり、これらの中でも、下記構造式（ＩＩ）で表されるスルフォスチンが好ましい。

なお、前記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物の具体例としては、例えば、３（Ｓ）−アミノ−１−（（Ｓ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピペリドン；３（Ｓ）−アミノ−１−（（Ｒ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピペリドン（前記構造式（ＩＩ）で表される好ましいスルフォスチンである）；３（Ｒ）−アミノ−１−（（Ｒ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピペリドン；３（Ｒ）−アミノ−１−（（Ｓ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピペリドン；３（Ｓ）−アミノ−１−（（Ｒ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−カプロラクタム；３（Ｓ）−アミノ−１−（（Ｓ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−カプロラクタム；３（Ｒ）−アミノ−１−（（Ｒ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−カプロラクタム；３（Ｒ）−アミノ−１−（（Ｓ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−カプロラクタム；３（Ｓ）−アミノ−１−（（Ｓ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピロリドン；３（Ｓ）−アミノ−１−（（Ｒ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピロリドン；３（Ｒ）−アミノ−１−（（Ｒ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピロリドン；３（Ｒ）−アミノ−１−（（Ｓ）−アミノ（スルホアミノ）ホスフィニル）−２−ピロリドンが挙げられる。

＜塩／水和物＞
また、前記抗腫瘍剤の有効成分としては、前記スルフォスチン関連化合物のほか、その薬理学上許容され得る塩や、その水和物を用いてもよい。
前記薬理学上許容され得る塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸、硫酸、燐酸等との無機酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸等との有機酸塩、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ等との無機金属塩、メチルアミン、エチルアミン、ジエタノールアミン等との有機アミン塩などが挙げられる。

前記有効成分（スルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及び／又はその水和物）は、いずれか一種を単独で使用してもよいし、二種以上を併用してもよい。
また、前記抗腫瘍剤中の前記有効成分（スルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及び／又はその水和物）の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記抗腫瘍剤は、前記スルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及び／又はその水和物そのものであってもよい。

＜その他の成分＞
前記その他の成分としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記スルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及び／又はその水和物を溶解、希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗腫瘍剤中の前記その他の成分の含有量としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

（医薬組成物）
本発明の医薬組成物は、本発明の前記抗腫瘍剤を少なくとも含み、必要に応じて更にその他の成分を含む。

前記医薬組成物中の、前記抗腫瘍剤の含有量としては、特に制限はなく、前記医薬組成物の剤型や所望の効果の程度等に応じて適宜選択することができるが、前記有効成分（スルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及び／又はその水和物）の含有量として、通常、０．０１〜１００質量％であり、０．１〜７０質量％が好ましい。

＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、本発明の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬理学上許容され得る担体などが挙げられる。前記担体としても、特に制限はなく、例えば、後述する前記医薬組成物の剤型等に応じて適宜選択することができる。また、前記医薬組成物中の前記その他の成分の含有量としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

＜剤型＞
前記医薬組成物の剤型としては、特に制限はなく、例えば、後述するような所望の投与方法に応じて適宜選択することができ、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、粉末剤、散剤、カプセル剤等）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等）、注射剤（溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤等）、坐剤などが挙げられる。

前記経口固形剤としては、例えば、前記抗腫瘍剤に、賦形剤、更には必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられる。前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。前記着色剤としては、例えば、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられる。前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。

前記経口液剤としては、例えば、前記抗腫瘍剤に、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤等の添加剤を加え、常法により製造することができる。
前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。前記安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチンなどが挙げられる。

前記注射剤としては、例えば、前記抗腫瘍剤に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下用、筋肉内用、静脈内用等の注射剤を製造することができる。
前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。前記等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。前記局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。

前記坐剤としては、例えば、前記抗腫瘍剤に、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセリド等の公知の坐剤製剤用担体と、必要に応じてツイーン（ＴＷＥＥＮ：登録商標）等の界面活性剤などを加えた後、常法により製造することができる。

[投与]
前記抗腫瘍剤、及び前記医薬組成物は、体内での腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害することができ、副作用が少なく、安全性が高いので、例えば、各種悪性腫瘍の治療剤として好適である。前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物の適用対象となる悪性腫瘍の種類としては、目的に応じて適宜選択することができるが、大腸癌、悪性黒色腫（メラノーマ）などに好適であり、中でも、大腸癌に特に好適である。

したがって、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物は、例えば、各種悪性腫瘍患者に投与することにより使用することができる。
前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物の投与方法としては、特に制限はなく、前記医薬組成物の剤型等に応じて適宜選択することができ、例えば、経口投与、注射による投与、直腸投与などが挙げられる。
また、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物の投与量としては、特に制限はなく、投与対象である患者の年齢、体重、所望の効果の程度等に応じて適宜選択することができるが、例えば、成人１人への１日の投与あたり、有効成分である前記スルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及び／又はその水和物の量として、０．０１〜８００ｍｇ程度が好ましい。なお、連投を必要とする場合には、１日あたりの使用量を抑えることが望ましい。

また、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物の投与時期としても、目的に応じて適宜選択することができる。
なお、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物の投与対象動物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ブタ、サルなどが挙げられる。

[効果]
本発明の抗腫瘍剤、及び本発明の医薬組成物は、体内での腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害することができ、副作用が少なく、安全性が高いので、各種悪性腫瘍の治療剤として、中でも、特に大腸癌の治療剤として有用である。
また、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物は、「体内（ｉｎｖｉｖｏ）」での腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害する（実験例１〜３参照、後述）一方で、「体外（ｉｎｖｉｔｒｏ）」での腫瘍細胞の増殖は阻害しない（実験例５参照、後述）。このことから、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物は、従来の抗腫瘍剤とは異なる、全く新しいメカニズムにより、体内での腫瘍細胞の増殖を阻害できる作用を有していると考えられる。したがって、前記抗腫瘍剤、前記医薬組成物によれば、効果に優れ、かつ安全性にも優れた、新しい癌治療を提供できることが期待される。

以下に、本発明の実施例（薬理実験及び製剤例）を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
なお、本実施例において、「スルフォスチン」としては前記構造式（ＩＩ）で表されるスルフォスチンを用いた。該スルフォスチンは、ＡｋｉｙａｍａＴら，ＪＡｎｔｉｂｉｏｔ（Ｔｏｋｙｏ）．２００１Ｓｅｐ；５４（９）：７４４−６や、ＡｂｅＭら，ＪＮａｔＰｒｏｄ．２００４Ｊｕｎ；６７（６）：９９９−１００４等を参照し、ストレプトミセス属に属する微生物を培養することにより、或いは合成により得たものを使用した。「ＰＴ−１００」は、Ｍｏｌ．ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．，Ｖｏｌ．４，ｐ３５１，２００５等を参照し、合成したものを使用した。「フルツロン」（一般名：ドキシフルリジン）は、日本ロシュ株式会社から入手したものを使用した。
また、本実施例において、「抑制率」は下記式に基づき算出した。
[式]
抑制率（％）＝（１−投与群の腫瘍重量／対照群の腫瘍重量）×１００

（実験例１：Ｃｏｌｏｎ２６に対する抗腫瘍作用）
ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒｊマウスの雌６週齢を試験に供した。群構成は６群構成で、第１群には溶媒である生理食塩水、第２群にはスルフォスチンの２００ｍｇ／ｋｇ、第３群にはスルフォスチンの５０ｍｇ／ｋｇ、第４群にはＰＴ−１００の２００ｍｇ／ｋｇ、第５群にはＰＴ−１００の５０ｍｇ／ｋｇ、第６群にはフルツロンの３０ｍｇ／ｋｇを設定した。動物数は、第１群（対照群）は８匹、第２群〜第６群（薬剤投与群）は各６匹とした。
Ｄａｙ０に、Ｃｏｌｏｎ２６大腸癌細胞２×１０^５個をマウスの鼠蹊部に移植した。スルフォスチン、及びＰＴ−１００は、ｄａｙ１〜６、８〜１３、１５〜２０、２２〜２７に、前記各用量を１日１回、腹腔内に投与した。フルツロンは、同様な投与日程で、経口で投与した。スルフォスチン、及びＰＴ−１００は生理食塩水で、フルツロンは０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウムで懸濁させてから生理食塩水で、目的の濃度に調整した。Ｄａｙ２８に腫瘍を採りだし、重量を測定して、各薬剤の効果の判定を行った。また、各薬剤投与中のマウスの体重変化、及び投与後のマウスの脱毛の様子を観察し、副作用の有無を確認した。
結果を図１〜４に示した。

スルフォスチン（Ｓｕｌｐｈｏｓｔｉｎ）は、２００、５０ｍｇ／ｋｇの投与量で、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対し、それぞれ抑制率９１．７％、８７．８％（有意差Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．００１）の強い抗腫瘍効果を示し、また、２００、５０ｍｇ／ｋｇでそれぞれ６匹中２匹の腫瘍が退縮した。また、ＰＴ−１００は、２００、５０ｍｇ／ｋｇの投与量でそれぞれ抑制率６２．３％、６６．７％（有意差Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．００１）の抗腫瘍効果を示したが、腫瘍退縮は示さなかった。また、既存薬であるフルツロン(Ｆｕｌｔｕｌｏｎ)についても、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で抑制率５６．９％（有意差Ｐ＜０．０５）の抗腫瘍効果を示したが、腫瘍退縮は示さなかった（図１〜２）。
また、スルフォスチンの連続投与による体重減少は、２００、５０ｍｇ／ｋｇのいずれの投与量においても認められなかったが、ＰＴ−１００の２００ｍｇ／ｋｇでは、強い体重減少が認められた（図３）。
また、スルフォスチンの連続投与による脱毛は、２００、５０ｍｇ／ｋｇのいずれの投与量においてもほとんど認められなかったが、ＰＴ−１００の２００、５０ｍｇ／ｋｇの投与量では、全身極度の脱毛が認められた（図４）。
これらの結果から、スルフォスチンは、ＰＴ−１００やフルツロンに比べ、腫瘍退縮を起こすほどの強い抗腫瘍作用を有していながら、副作用である体重減少、脱毛を示さないことが明らかとなった。

（実験例２：増殖の進行したＣｏｌｏｎ２６に対する抗腫瘍作用）
ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒｊマウスの雌６週齢を試験に供した。群構成は６群構成で、第１群には溶媒である生理食塩水、第２群にはスルフォスチンの５０ｍｇ／ｋｇ、第３群にはスルフォスチンの３．１ｍｇ／ｋｇ、第４群にはＰＴ−１００の５０ｍｇ／ｋｇ、第５群にはＰＴ−１００の３．１ｍｇ／ｋｇ、第６群にはフルツロンの３０ｍｇ／ｋｇを設定した。動物数は、第１群（対照群）は７匹、第２群〜第６群（薬剤投与群）は各５匹とした。
Ｄａｙ０に、Ｃｏｌｏｎ２６大腸癌細胞２×１０^５個をマウスの鼠蹊部に移植した。各薬剤は、移植癌細胞群が増殖していると考えられる１０日後より投与を開始した。スルフォスチン、及びＰＴ−１００は、ｄａｙ１０〜１８、２０〜２５に、前記各用量を１日１回、腹腔内に投与した。フルツロンは、同様な投与日程で、経口で投与した。スルフォスチン、及びＰＴ−１００は生理食塩水で、フルツロンは０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウムで懸濁させてから生理食塩水で、目的の濃度に調整した。Ｄａｙ２８に腫瘍を採りだし、重量を測定して、効果の判定を行った。また、各薬剤投与中のマウスの体重変化、及び脱毛の様子を観察し、副作用の有無を確認した。
結果を図５〜６に示した。

スルフォスチン（Ｓｕｌｐｈｏｓｔｉｎ）の５０、３．１ｍｇ/ｋｇの投与群では、腫瘍重量が、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対し、それぞれ８７．３、６６．２％（有意差Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．００１）の抑制率を示し、強い抗腫瘍効果を示した。ＰＴ−１００は、５０、３．１ｍｇ／ｋｇの投与量で、腫瘍重量が、対照群に対し、それぞれ７０．８、５１．５％（有意差Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．００１）の抑制率を示したが、スルフォスチンの抗腫瘍効果に比べ、弱かった。また、既存薬であるフルツロン(Ｆｕｌｔｕｌｏｎ)３０ｍｇ／ｋｇの投与群では、腫瘍重量が、対照群に対し、４７．０％の抑制率を示した（図５）。
また、スルフォスチンの連続投与における体重減少は認められなかったが、ＰＴ−１００の５０ｍｇ／ｋｇ投与群では、体重減少及び脱毛が認められた（図６）。
これらのことより、腫瘍が増殖成長した段階（１０日目）からのスルフォスチンの投与は、宿主の抗腫瘍免疫を調節して、抗腫瘍効果を示す可能性が明らかとなった。
なお、対照群、ＰＴ−１００３．１ｍｇ／ｋｇ投与群、及びフルツロン３０ｍｇ／ｋｇ投与群における体重増加（２〜４ｇ）は、腫瘍重量の増加（２〜４ｇ）を表していると考えられる（図６）。

（実験例３：Ｂ１６−ＢＬ６に対する抗腫瘍作用）
Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｊマウスの雌５週齢を試験に供した。群構成は３群構成で、第１群には溶媒である生理食塩水、第２群にはスルフォスチンの２００ｍｇ／ｋｇ、第３群にはスルフォスチンの５０ｍｇ／ｋｇを設定した。動物数は、第１群（対照群）は７匹、第２〜３群（薬剤投与群）は各５匹とした。
Ｄａｙ０に、Ｂ１６−ＢＬ６メラノーマ細胞２×１０^５個をマウスの鼠蹊部に移植した。スルフォスチンは、移植２４時間後より、ｄａｙ１〜５、７〜１２、１４〜１９に、前記各用量を１日１回、腹腔内に投与した。スルフォスチンは生理食塩水で目的の濃度に調整した。ｄａｙ２１に腫瘍を採りだし、重量を測定して、効果の判定を行った。
結果を図７に示した。

スルフォスチン（Ｓｕｌｐｈｏｓｔｉｎ）は、２００、５０ｍｇ／ｋｇの投与量において、対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対して、それぞれ抑制率５１．７、５３．３％の強い抗腫瘍効果を示した（図７）。

（実験例４：マウスに対する毒性試験）
ＩＣＲマウス（Ｃｒｊ：ＣＤ−１）の雌性４週齢を試験に供した。群構成は６群構成で、第１群には溶媒である生理食塩液、第２群にはスルフォスチンの５０ｍｇ／ｋｇ、第３群にはスルフォスチンの２５ｍｇ／ｋｇ、第４群にはＰＴ−１００の５０ｍｇ／ｋｇ、第５群にはＰＴ−１００の２５ｍｇ／ｋｇ、第６群にはＰＴ−１００の１２．５ｍｇ／ｋｇ、第７群にはＰＴ−１００の６．３ｍｇ／ｋｇを設定した。なお、前記各用量はそれぞれ１回あたりの投与量を示す。動物数は、各群３匹とした。投与は腹腔内に、１日２回、１０日間連続で行い、適時に体重を測定、経過観察をした。また、投与開始から１９日目に、各マウスを麻酔下で解剖して、所見を調べた。
体重変化を図８に、臓器重量（ｍｇ）を表１に示した。

スルフォスチンは、５０、２５ｍｇ／ｋｇの投与群で、体重減少を示さず、経過観察及び解剖所見においても異常を示さなかった。一方、ＰＴ−１００の５０、２５ｍｇ／ｋｇの投与群では、強い体重減少を起こした。また、経過観察の結果、ＰＴ−１００の５０、２５、１２．５ｍｇ／ｋｇの投与群では、耳の発赤が起こり、先端部が壊死、脱落した。また、解剖所見の結果、ＰＴ−１００の５０ｍｇ／ｋｇの投与群では、胸腺が対照群の５５％萎縮し、１２．５ｍｇ／ｋｇの投与群では、肝臓が１．４倍、脾臓も１．７倍に肥大していた（図８、表１）。
これらの結果から、スルフォスチンは連続投与においても副作用を示さず、薬剤として安全性を有するものであることが確認された。

（実験例５：細胞毒性試験）
インビトロにおける、スルフォスチンの腫瘍細胞に対する増殖阻害活性を調べた。培養液は１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ１６４０培地を用い、３７℃、５％ＣＯ_２−ａｉｒ中で培養した。ＥＬ−４ｍｏｕｓｅｔｈｙｍｏｍａ（マウス胸腺腫細胞）、Ｃｏｌｏｎ−２６ｍｏｕｓｅｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒ（マウス大腸癌細胞）、及びＢ１６−ＢＬ６ｍｏｕｓｅｍｅｌａｎｏｍａ（マウスメラノーマ細胞）を、それぞれ１×１０^４個／ウェルで２日間培養し、ＭＴＴ法により細胞数を測定した。即ち、ＭＴＴ（０．４％、１０μｌ）を細胞培養液に添加し、４時間培養後、更に２０％Ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｐｈａｔｅ（ＳＤＳ）を１００μｌ添加して、マイクロプレートリーダーで５７０、６９０ｎｍの吸収を測定した。スルフォスチンは、各腫瘍細胞培養開始と同時に添加した。
それぞれの細胞のＩＣ_５０値を表２に示した。

表２の結果、スルフォスチンは、マウス腫瘍由来培養細胞、ＥＬ４、Ｃｏｌｏｎ２６及びＢ１６−ＢＬ６に対するＩＣ_５０が１００μｇ／ｍｌ以上であったことから、インビトロでの細胞毒性は認められなかった。

（製剤例１：静脈注入用製剤の製造）
スルフォスチンを３０％（Ｗ／Ｖ）ポリエチレングリコール４００を含む生理食塩水に溶解して０．０５％溶液を調整し、滅菌濾過して、バイアル１個当たり１５ｍｇのスルフォスチンを含有する静脈注入用製剤を製造した。

（製剤例２：錠剤の製造）
スルフォスチン３０質量部、結晶乳糖１２０質量部、結晶セルロース１４７質量部、及びステアリン酸マグネシウム３質量部をＶ型混合機で混合した後、打錠して１錠３００ｍｇの錠剤を得た。

本発明の抗腫瘍剤、及び本発明の医薬組成物は、体内（ｉｎｖｉｖｏ）での腫瘍細胞の増殖を特異的かつ効果的に阻害することができ、副作用が少なく、安全性が高いので、各種悪性腫瘍、中でも、特に大腸癌の治療剤として有用である。

図１は、大腸癌細胞を移植したマウスに対する各薬剤の抗腫瘍作用を示す写真である。各マウスから移植後２８日目に採取したＣｏｌｏｎ２６腫瘍塊を示す。図２は、大腸癌細胞を移植したマウスに対する各薬剤の抗腫瘍作用を示すグラフである。各マウスから移植後２８日目に採取したＣｏｌｏｎ２６腫瘍塊の、各群ごとの平均重量を示す。バーは標準偏差を示す。図３は、大腸癌細胞を移植したマウスに対する各薬剤投与によるマウスの体重の変化を示すグラフである。バーは標準偏差を示す。ＰＴ−１００投与群では、体重減少がみられる。図４は、大腸癌細胞を移植したマウスに対する各薬剤の投与によるマウスの脱毛の様子を示す写真である。図５は、大腸癌細胞の移植後１０日目から各薬剤を投与した場合の、移植後２８日目（薬剤投与後１８日目）の各薬剤の抗腫瘍作用を示すグラフである。各マウスから採取したＣｏｌｏｎ２６腫瘍塊の、各群ごとの平均重量を示す。バーは標準偏差を示す。図６は、大腸癌細胞の移植後１０日目から各薬剤を投与した場合の、各薬剤投与によるマウスの体重の変化を示すグラフである。バーは標準偏差を示す。図７は、メラノーマ細胞を移植したマウスに対するスルフォスチンの抗腫瘍作用を示すグラフである。移植後２８日目に各マウスから採取したＢ１６−ＢＬ６腫瘍塊の、各群ごとの平均重量を示す。バーは標準偏差を示す。図８は、正常なマウスへの各薬剤の投与によるマウスの体重変化を示すグラフである。なお、図６中に記載した各用量（ｍｇ／ｋｇ）は１回あたりの投与量であり、１日あたりの投与量はこの２倍である。バーは標準偏差を示す。

Claims

下記一般式（Ｉ）で表されるスルフォスチン関連化合物、その薬理学上許容され得る塩、及びその水和物の少なくともいずれかを有効成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤。
ただし、前記一般式（Ｉ）中、ｎは１〜３の整数を表す。
下記構造式（ＩＩ）で表されるスルフォスチンを有効成分とする請求項１に記載の抗腫瘍剤。
請求項１から２のいずれかに記載の抗腫瘍剤を含むことを特徴とする医薬組成物。
大腸癌治療用医薬組成物である請求項３に記載の医薬組成物。