JP2008516961A - Carbamate compounds for use in treating neurodegenerative disorders - Google Patents

Carbamate compounds for use in treating neurodegenerative disorders Download PDF

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Abstract

本発明は、式（Ｉ）および式（ＩＩ）：
【化１】

Figure 2008516961

［式中、
フェニルはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素よりなる群から選択される１〜５個のハロゲン原子でＸで置換され；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルよりなる群から独立して選択され；ここで、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは場合によりフェニルで置換されていてもよい（ここで、フェニルは場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロおよびシアノよりなる群から独立して選択される置換基で置換されていてもよい）］
よりなる群から選択される化合物またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルの治療的に有効な量を神経保護を必要とする被験体に投与することを含んでなる神経保護を与える方法に関する。The present invention relates to formula (I) and formula (II):
[Chemical 1]
Figure 2008516961

[Where:
Phenyl is substituted with X with 1 to 5 halogen atoms selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine and iodine; and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are hydrogen and Independently selected from the group consisting of C 1 -C 4 alkyl; wherein C 1 -C 4 alkyl is optionally substituted with phenyl, where phenyl is optionally halogen, C 1 -C And optionally substituted with a substituent independently selected from the group consisting of 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro and cyano)]
A method of providing neuroprotection comprising administering to a subject in need of neuroprotection a therapeutically effective amount of a compound selected from the group consisting of or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof. .

Description

［関連出願へのクロスリファレンス］
本願は、２００４年１０月１５日に出願された米国仮出願第６０／６１９，４０２号および２００５年７月１２日に出願された米国仮出願第６０／６９８，４０３号の利益を請求する。これら２つの仮出願は、引用することにより本明細書に組み込まれる。 [Cross-reference to related applications]
This application claims the benefit of US Provisional Application No. 60 / 619,402 filed October 15, 2004 and US Provisional Application No. 60 / 698,403 filed July 12, 2005. These two provisional applications are incorporated herein by reference.

［発明の分野］
本発明は、一般に薬理学、神経学および精神医学の分野、そして損傷もしくは傷害から哺乳類中枢神経系の細胞を保護する方法に関する。さらに特に、本発明は、神経保護のためのある種のカルバメート化合物の使用の方法を提供する。 [Field of the Invention]
The present invention relates generally to the fields of pharmacology, neurology and psychiatry, and to methods for protecting cells of the mammalian central nervous system from injury or injury. More particularly, the present invention provides methods for the use of certain carbamate compounds for neuroprotection.

［関連技術の記述］
中枢神経系（ＣＮＳ）もしくは末梢神経系（ＰＮＳ）への様々な種類の損傷もしくは外傷は、重大なそして長期の神経学的および／もしくは精神医学的症状および障害を引き起こす可能性がある。これがとり得る１つの形態は、中枢神経系（ＣＮＳ）のニューロンもしくは他の細胞の進行性の死、すなわち、神経変性もしくはニューロン変性である。例えば、アルツハイマー病、多発性硬化症、脳血管障害（ＣＶＡ）発作、外傷性脳損傷、脊髄損傷、視神経の変性、例えば虚血性視神経障害もしくは網膜変性および他の中枢神経系障害の結果としてのニューロン変性は、その高い発生率および長期の後遺症の頻度の両方のために大きな医学的および公衆衛生問題である。動物研究および臨床試験により、アミノ酸伝達物質（特にグルタメート）、酸化的ストレスおよび炎症反応がこれらの症状における細胞死に強く寄与することが示されている。 [Description of related technology]
Various types of damage or trauma to the central nervous system (CNS) or peripheral nervous system (PNS) can cause serious and long-term neurological and / or psychiatric symptoms and disorders. One form this may take is the progressive death of neurons or other cells of the central nervous system (CNS), ie neurodegeneration or neuronal degeneration. For example, neurons as a result of Alzheimer's disease, multiple sclerosis, cerebrovascular disorder (CVA) attacks, traumatic brain injury, spinal cord injury, optic nerve degeneration, such as ischemic optic neuropathy or retinal degeneration and other central nervous system disorders Degeneration is a major medical and public health problem due to both its high incidence and the frequency of long-term sequelae. Animal studies and clinical trials have shown that amino acid transmitters (particularly glutamate), oxidative stress and inflammatory responses contribute strongly to cell death in these conditions.

損傷の際にもしくは虚血性傷害の際に、損傷を受けたニューロンは大量の神経伝達物質グルタメートを放出し、それは周囲のニューロンに対して興奮毒性である（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５）。グルタメートは、哺乳類神経系における興奮性シナプス伝達物質である負に荷電したアミノ酸である。グルタメートの濃度は神経終末においてミリモルの範囲に達することができるが、その細胞外濃度は神経毒性を防ぐために低いレベルで保たれる。グルタメートは、高濃度で与えられる場合にニューロンに対して有毒であり得ることが認められている。「興奮毒性」という用語は、グルタメート（および他のそのような興奮性アミノ酸）が高投与量で適用される場合にニューロンに対して有し得る細胞傷害効果を表すために用いられている。   Upon injury or upon ischemic injury, damaged neurons release large amounts of the neurotransmitter glutamate, which is excitotoxic to surrounding neurons (Non-Patent Document 1; Non-Patent Document 2; Non-patent document 3; Non-patent document 4; Non-patent document 5). Glutamate is a negatively charged amino acid that is an excitatory synaptic transmitter in the mammalian nervous system. The concentration of glutamate can reach the millimolar range at the nerve ending, but its extracellular concentration is kept at a low level to prevent neurotoxicity. It has been recognized that glutamate can be toxic to neurons when given at high concentrations. The term “excitotoxicity” is used to describe the cytotoxic effects that glutamate (and other such excitatory amino acids) can have on neurons when applied at high doses.

生理的に、過剰の放出、取り込みの抑制もしくはその両方は、高レベルのグルタメートをもたらすことができる。通常、細胞外グルタメートの低い濃度は、ニューロンおよび星状細胞の両方により保たれる。ニューロンは細胞内貯蔵にグルタメートを蓄え、そしてその放出を調節する。非特許文献６を参照。星状細胞は特定の輸送体により細胞外グルタメートを取り込み、そしてグルタメートをグルタミンに転化し、それは次にニューロンの取り込みのために放出される。非特許文献７を参照。興奮毒性の過程で、グルタメートはニューロンにより自己永続的な形で放出され、グルタミン酸受容体の過剰のもしくは持続的活性化をもたらす。   Physiologically, excessive release, inhibition of uptake, or both can lead to high levels of glutamate. Usually, low concentrations of extracellular glutamate are maintained by both neurons and astrocytes. Neurons store glutamate in intracellular stores and regulate its release. See Non-Patent Document 6. Astrocytes take up extracellular glutamate by a specific transporter and convert glutamate to glutamine, which is then released for neuronal uptake. See Non-Patent Document 7. In the process of excitotoxicity, glutamate is released in a self-perpetuating manner by neurons, resulting in excessive or sustained activation of glutamate receptors.

細胞外グルタメートの有毒なレベルを封鎖する（ｓｅｑｕｅｓｔｅｒ）神経支持（ｎｅｕｒｏｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ）星状細胞の損なわれた能力とともに行われるエネルギー枯渇ニューロンヘのそのような過剰のグルタメート刺激の共起（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ）は、壊死およびアポトーシスによってニューロン死をもたらす。中枢神経系損傷および疾
患と関連するニューロン死を減らすために様々な介入が現在調べられている。非特許文献８を参照。そのような治療には、グルタミン酸放出インヒビター、グルタミン酸受容体アンタゴニスト、Ｃｓ２＋チャンネル遮断薬、ＧＡＢＡ受容体アゴニスト、ガングリオシド、神経栄養因子、カルパインインヒビター、カスパーゼインヒビター、フリーラジカル捕捉剤、免疫および細胞代謝モジュレーターが包含される。 Such excessive glutamate-stimulated conjugation to energy-depleted neurons performed in conjunction with the impaired ability of neurosupportive astrocytes to sequester toxic levels of extracellular glutamate is necrotic. And leads to neuronal death by apoptosis. Various interventions are currently being investigated to reduce neuronal death associated with central nervous system damage and disease. See Non-Patent Document 8. Such therapies include glutamate release inhibitors, glutamate receptor antagonists, Cs2 + channel blockers, GABA receptor agonists, gangliosides, neurotrophic factors, calpain inhibitors, caspase inhibitors, free radical scavengers, immune and cellular metabolism modulators. Is done.

例えば、１）ハンチントン病（ＨＤ）（非特許文献９）；２）アルツハイマー病（ＡＤ）（非特許文献１０）；３）癲癇（非特許文献１１）；４）ラチリスム（非特許文献１２）；５）筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびグアム島のパーキンソン認知症（非特許文献１３）の病態生理学におけるならびに発作、虚血および再かん流（非特許文献１４を参照）と関連する神経病理学におけるグルタメートの関与がいくつかの研究により示されている。   For example, 1) Huntington's disease (HD) (Non-patent document 9); 2) Alzheimer's disease (AD) (Non-patent document 10); 3) Acupuncture (Non-patent document 11); 4) Latirism (Non-patent document 12); 5) Neurons in the pathophysiology of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson's dementia on Guam (Non-Patent Document 13) and associated with stroke, ischemia and reperfusion (see Non-Patent Document 14) Several studies have shown the involvement of glutamate in pathology.

従って、ニューロンへの損傷は、グルタメートおよびアスパルテートを包含する興奮性アミノ酸による受容体の過剰刺激によって引き起こされ得る（非特許文献１５を参照）。実際に、グルタミン酸受容体のＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）サブタイプは、シナプス伝達、学習および記憶、ならびにニューロンの発生を包含する、正常な脳機能において多数の重要な役割を有することが示唆される（例えば、非特許文献１５；非特許文献１６を参照）。しかしながら、グルタミン酸受容体のＮＭＤＡサブタイプの過剰刺激は、増加したフリーラジカル生成およびニューロン細胞死をもたらし、それは酸化防止剤により調節することができる（非特許文献１７；非特許文献１８を参照）。   Thus, damage to neurons can be caused by over-stimulation of receptors with excitatory amino acids including glutamate and aspartate (see Non-Patent Document 15). Indeed, the N-methyl-D-aspartate (NMDA) subtype of glutamate receptors has many important roles in normal brain function, including synaptic transmission, learning and memory, and neuronal development (For example, see Non-Patent Document 15; Non-Patent Document 16). However, overstimulation of the glutamate receptor NMDA subtype results in increased free radical production and neuronal cell death, which can be regulated by antioxidants (see Non-Patent Document 17; Non-Patent Document 18).

さらに、多数の慢性神経変性症状において、炎症および酸化的ストレスは病理学の重要な成分である。これらの症状には、アルツハイマー病（ＡＤ）が包含される。アルツハイマー病（ＡＤ）は、神経原線維変化および老人斑の蓄積、ならびに脳におけるニューロンの広範囲に及ぶ進行性の変性を特徴とする。老人斑は、第２１染色体上に位置するＡＰＰ遺伝子によりコードされるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に富んでいる。ＡＤの発症の根底にある一般に受け入れられている仮説は、ＡＰＰの異常なタンパク質分解切断が、ニューロンに対して有毒であることが示されているベータ−アミロイド（Ａβ）ペプチドの過剰な細胞外蓄積をもたらすことである（非特許文献１９；非特許文献２０；非特許文献２１；非特許文献２２を参照）。   In addition, inflammation and oxidative stress are important components of pathology in many chronic neurodegenerative conditions. These symptoms include Alzheimer's disease (AD). Alzheimer's disease (AD) is characterized by neurofibrillary tangles and senile plaque accumulation, and extensive progressive degeneration of neurons in the brain. Senile plaques are rich in amyloid precursor protein (APP) encoded by the APP gene located on chromosome 21. The generally accepted hypothesis underlying the development of AD is excessive extracellular accumulation of beta-amyloid (Aβ) peptide, where abnormal proteolytic cleavage of APP has been shown to be toxic to neurons. (See Non-Patent Document 19; Non-Patent Document 20; Non-Patent Document 21; Non-Patent Document 22).

パーキンソン病（ＰＤ）は、運動不能、硬直、振せんおよび***異常よりなる運動の機能障害を特徴とする進行性の神経変性傷害である。この疾患は、黒質緻密部（ＳＮｐｃ）におけるドーパミン作動性ニューロンの実質的な喪失（非特許文献２３を参照）および線条体における内容物（ｃｏｎｔｅｎｔ）、ドーパミンのシナプスおよび小胞輸送体の減少（例えば非特許文献２４を参照）により明らかなように黒質線条体ドーパミン作動性ニューロンの完全性および機能性の喪失と関連している。   Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative injury characterized by motor dysfunction consisting of inability to move, stiffness, tremor and postural abnormalities. The disease involves substantial loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra (SNpc) (see Non-Patent Document 23) and content in the striatum, reduction of dopamine synapses and vesicular transporters. (See, for example, Non-Patent Document 24), which is associated with a loss of integrity and functionality of nigrostriatal dopaminergic neurons.

外傷、多数の種類の損傷、虚血、代謝異常、例えば糖尿病、低酸素症、毒素もしくは外科的介入の結果としてのヒトを包含する哺乳類の中枢（ＣＮＳ）もしくは末梢（ＰＮＳ）神経系におけるニューロンおよび支持細胞の死は、機能の急性および慢性の両方のそして進行性の喪失および障害を引き起こす。従って、哺乳類神経系の細胞をこの変性から保護することができる、すなわち、神経を保護する方法および化合物の開発の必要性がある。   Neurons in the mammalian central (CNS) or peripheral (PNS) nervous system, including humans as a result of trauma, numerous types of injury, ischemia, metabolic abnormalities such as diabetes, hypoxia, toxins or surgical interventions Supporter cell death causes both acute and chronic and progressive loss and impairment of function. Accordingly, there is a need for the development of methods and compounds that can protect cells of the mammalian nervous system from this degeneration, ie, protect the nerves.

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［発明の要約］
本発明は一般に神経保護方法、そしてさらに特に、損傷、外傷、手術または急性もしく
は慢性疾患過程に起因する哺乳類の中枢および末梢神経系の細胞への損傷の防止のための方法および化合物に関する。 [Summary of Invention]
The present invention relates generally to neuroprotective methods, and more particularly to methods and compounds for the prevention of damage to mammalian central and peripheral nervous system cells resulting from injury, trauma, surgery or acute or chronic disease processes.

本発明は、一つには、単独でのまたは１つもしくはそれ以上の他の神経保護薬と組み合わせた一群のカルバメート化合物の１種もしくはそれ以上のメンバーの投与が哺乳類神経系に神経保護効果を与えるという発見に基づく。   The present invention provides, in part, that the administration of one or more members of a group of carbamate compounds, alone or in combination with one or more other neuroprotective agents, has a neuroprotective effect on the mammalian nervous system. Based on the discovery of giving.

本発明により提供される神経保護には、神経損傷もしくは傷害に起因するかまたは興奮毒性を包含する神経毒性に起因する損傷からの保護が包含される。従って、本発明により提供される神経保護は、発作／虚血、外科的外傷、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、鈍的、閉鎖性もしくは穿通性頭部外傷、癲癇、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性神経障害および低血糖性脳障害を包含する、興奮毒性、例えばグルタメート興奮毒性を伴い得る急性および慢性神経変性障害の処置において有用である。   Neuroprotection provided by the present invention includes protection from damage caused by neurotoxicity, including neurotoxicity or excitotoxicity. Thus, the neuroprotection provided by the present invention includes seizure / ischemia, surgical trauma, traumatic brain injury (TBI), blunt, closed or penetrating head trauma, epilepsy, Huntington's disease, muscle atrophic side It is useful in the treatment of acute and chronic neurodegenerative disorders that can be associated with excitotoxicity, such as glutamate excitotoxicity, including cordiosclerosis (ALS), diabetic neuropathy and hypoglycemic encephalopathy.

本発明により提供される神経保護は、損傷したもしくは罹患した組織上にまたは神経傷害をもたらすと予想される事象の間もしくは前に予防的な形でもたらされることができる。   The neuroprotection provided by the present invention can be provided in a prophylactic manner on damaged or diseased tissue or during or before an event that is expected to result in nerve injury.

本発明は、製薬学的に許容しうる賦形剤と一緒に単独でもしくは別の薬剤と組み合わせて、本発明の化合物またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルの有効量を被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与することにより、神経保護を必要とする被験体において神経保護を与えるための；細胞変性もしくは細胞死を抑制するための；神経変性疾患の処置もしくは予防のための；または化合物（例えば、グルタメートのような興奮性アミノ酸；毒素；または細胞傷害性副作用を与える予防もしくは治療化合物）の細胞傷害効果を改善するための方法を提供する。様々な態様において、本発明の方法には興奮毒性、例えばグルタメート興奮毒性からの保護が包含される。   The present invention provides an effective amount of a compound of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof, in combination with a pharmaceutically acceptable excipient, alone or in combination with another agent. by administration to a subject, to provide neuroprotection in a subject in need of neuroprotection; to inhibit cell degeneration or cell death; to treat or prevent neurodegenerative diseases; or a compound (eg, A prophylactic amino acid such as glutamate; a toxin; or a prophylactic or therapeutic compound that provides cytotoxic side effects). In various embodiments, the methods of the invention include protection from excitotoxicity, eg, glutamate excitotoxicity.

様々な態様において、被験体、例えばヒトは神経傷害もしくは損傷を患っていることができ；または薬物乱用、外傷、発作、虚血、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病、筋萎縮性もしくは低血糖性脳障害から選択される症状を患っていることができ；または手術もしくは他の介入を受けていることができる。被験体は、神経保護により利益を得る既存症状を有することができ、または患者は、手術もしくは他の介入の間に起こり得るような、同時に起こるかもしくは後に起こる神経損傷の有害な影響を減らすために処置することができる。   In various embodiments, a subject, eg, a human, can suffer from nerve injury or injury; or drug abuse, trauma, stroke, ischemia, Huntington's disease, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, prion disease, mutant Creutzfeldt May be suffering from a symptom selected from Jacob disease, muscular atrophy or hypoglycemic encephalopathy; or may have undergone surgery or other intervention. The subject may have pre-existing symptoms that benefit from neuroprotection, or the patient will reduce the detrimental effects of concurrent or subsequent nerve damage, such as may occur during surgery or other intervention Can be treated.

従って、本発明は式１もしくは式２：   Accordingly, the present invention provides Formula 1 or Formula 2:

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［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素もしくはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；そしてＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は独立して水素、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素である］
を有する少なくとも１つの化合物を含んでなる組成物の治療的に有効な量を神経保護を必要とする被験体に投与することを含んでなる神経保護を与える方法を提供する。式１もしくは式２の該Ｃ１〜Ｃ４アルキル基は、置換されるかもしくは非置換であることができる。本発明の１つの態様において、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基はフェニル基で置換される。フェニル基は、非置換であるかもしくは置換されることができる。ある態様において、フェニル基は非置換であるかまたはハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロもしくはシアノで置換される。 [Wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently hydrogen or C 1 -C 4 alkyl; and X 1 , X 2 , X 3 , X 4 and X 5 are independently hydrogen. , Fluorine, chlorine, bromine or iodine]
A method of providing neuroprotection comprising administering to a subject in need of neuroprotection a therapeutically effective amount of a composition comprising at least one compound having: The C 1 -C 4 alkyl group of formula 1 or formula 2 can be substituted or unsubstituted. In one aspect of the present invention, C 1 -C 4 alkyl group is substituted with a phenyl group. The phenyl group can be unsubstituted or substituted. In some embodiments, the phenyl group or halogen is unsubstituted, C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro or cyano.

本発明において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は水素、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素であることができる。ある態様において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は独立して水素もしくは塩素である。本発明の好ましい態様において、Ｘ１はフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素である。１つの態様において、Ｘ１は塩素であり、そしてＸ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は独立して水素である。別の好ましい態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素である。 In the present invention, X 1 , X 2 , X 3 , X 4 and X 5 can be hydrogen, fluorine, chlorine, bromine or iodine. In some embodiments, X 1 , X 2 , X 3 , X 4 and X 5 are independently hydrogen or chlorine. In a preferred embodiment of the present invention, X 1 is fluorine, chlorine, bromine or iodine. In one embodiment, X 1 is chlorine and X 2 , X 3 , X 4 and X 5 are independently hydrogen. In another preferred embodiment, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently hydrogen.

本発明は、被験体において神経保護を与えるための式１もしくは式２の鏡像異性体を提供する。ある態様において、式１もしくは式２の化合物はその単一の鏡像異性体の形態である。別の態様において、式１もしくは式２の化合物は、一方の鏡像異性体がもう一方の鏡像異性体に対して優位である鏡像異性体混合物の形態である。１つの態様において、鏡像異性体は９０％以上の程度までもしくは９８％以上の程度まで優位である。   The present invention provides an enantiomer of Formula 1 or Formula 2 for providing neuroprotection in a subject. In certain embodiments, the compound of Formula 1 or Formula 2 is in the form of its single enantiomer. In another embodiment, the compound of Formula 1 or Formula 2 is in the form of an enantiomeric mixture in which one enantiomer is dominant over the other. In one embodiment, the enantiomer predominates to the extent of 90% or greater or to the extent of 98% or greater.

本発明はまた、式１もしくは式２（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素もしくはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；そしてＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は独立して水素、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素である）を有する少なくとも１つの化合物を含んでなる組成物の神経保護量を被験体に投与することを含んでなる方法も提供する。１つの態様において、被験体への組成物の投与の前に、被験体が急性もしくは慢性神経変性もしくは神経系損傷の何らかの形態を患っているかどうかについて決定が行われる。 The invention also provides Formula 1 or Formula 2 wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently hydrogen or C 1 -C 4 alkyl; and X 1 , X 2 , X 3 , A method comprising administering to a subject a neuroprotective amount of a composition comprising at least one compound having X 4 and X 5 independently are hydrogen, fluorine, chlorine, bromine or iodine) provide. In one embodiment, prior to administration of the composition to a subject, a determination is made as to whether the subject is suffering from any form of acute or chronic neurodegeneration or nervous system damage.

本発明はまた、以下に定義されるように、急性もしくは慢性神経変性もしくは神経系損傷を発症する危険がある患者または神経保護薬（ＮＰＤ）での処置を必要とする患者を同定すること、および被験体に式１もしくは式２を有する少なくとも１つの化合物を含んでなる組成物を投与することを含んでなる方法も提供する。   The invention also identifies a patient at risk of developing acute or chronic neurodegeneration or nervous system damage or a patient in need of treatment with a neuroprotective drug (NPD), as defined below, and Also provided is a method comprising administering to a subject a composition comprising at least one compound having Formula 1 or Formula 2.

本発明のある態様として、神経保護を与えるための式１もしくは式２を有する化合物の治療的に有効な量は約１．０ｍｇ／Ｋｇ／投与〜約１５０ｍｇ／Ｋｇ／投与である。７０ｋｇのヒトにおいて、これは約７０ｍｇ／日〜約１０，５００ｍｇ／日の１日量に対応する。   In certain embodiments of the invention, the therapeutically effective amount of a compound having Formula 1 or Formula 2 to confer neuroprotection is from about 1.0 mg / Kg / dose to about 150 mg / Kg / dose. In a 70 kg human, this corresponds to a daily dose of about 70 mg / day to about 10,500 mg / day.

ある態様において、本発明の鏡像異性体またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルの１つもしくはそれ以上および製薬学的に許容しうる担体もしくは賦形剤を含んでなる神経保護を与えるための製薬学的組成物の治療的に有効な量は、神経保護薬もしくはＮＰＤでの処置を必要とする被験体もしくは患者に投与される。   In certain embodiments, to provide neuroprotection comprising one or more of the enantiomers of the invention or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. A therapeutically effective amount of the pharmaceutical composition is administered to a subject or patient in need of treatment with a neuroprotective drug or NPD.

式１もしくは式２を有する少なくとも１つの化合物を含んでなる製薬学的組成物は、それを必要とする被験体に投与される。ある態様において、神経保護薬もしくはＮＰＤでの処置を必要とする被験体もしくは患者は、中枢もしくは末梢神経の細胞への急性の外傷もしくは損傷の何らかの形態を経験しているかまたは急性もしくは慢性の神経変性障害の何らかの形態を有するものであることができる。１つの態様において、被験体もしくは患者は、投与の時点で急性もしくは慢性の神経変性障害を発症する危険がある、すなわち、神経保護薬での処置を必要とする患者であると決定される。別の態様において、それを必要とする被験体は、投与の時点でそれらの神経系の細胞への急性損傷もしくは外傷を有するものである。   A pharmaceutical composition comprising at least one compound having Formula 1 or Formula 2 is administered to a subject in need thereof. In certain embodiments, the subject or patient in need of treatment with a neuroprotective drug or NPD is experiencing some form of acute trauma or damage to cells of the central or peripheral nerve, or acute or chronic neurodegeneration It can have some form of failure. In one embodiment, the subject or patient is determined to be a patient at risk of developing an acute or chronic neurodegenerative disorder at the time of administration, i.e. requiring treatment with a neuroprotective agent. In another embodiment, a subject in need thereof has acute damage or trauma to cells of their nervous system at the time of administration.

［発明の詳細な記述］
本発明のカルバメート化合物
本発明は、神経保護を必要とする哺乳類に神経保護を与えるためにある種の２−フェニル−１，２−エタンジオールモノカルバメート（ｍｏｎｏｃａｒｂｏｍａｔｅｓ）およびジカルバメートを用いる方法を提供する。 [Detailed Description of the Invention]
Carbamate Compounds of the Invention The present invention provides a method of using certain 2-phenyl-1,2-ethanediol monocarbamates and dicarbamates to provide neuroprotection to a mammal in need thereof. .

本発明の方法において使用する、カルバメート鏡像異性体を包含するカルバメート化合物を合成しそして精製する適当な方法は、当業者に周知である。例えば、２−フェニル−１，２−エタンジオールモノカルバメートおよびジカルバメートの純粋な鏡像異性体および鏡像異性体混合物は、米国特許第５，８５４，２８３号、第５，６９８，５８８号および第６，１０３，７５９号に記述されており、それらの開示はそれらの全部が引用することにより本明細書に組み込まれる。   Suitable methods for synthesizing and purifying carbamate compounds, including carbamate enantiomers, used in the methods of the present invention are well known to those skilled in the art. For example, pure enantiomers and enantiomeric mixtures of 2-phenyl-1,2-ethanediol monocarbamate and dicarbamate are described in US Pat. Nos. 5,854,283, 5,698,588 and 6 No. 103,759, the disclosures of which are hereby incorporated by reference in their entirety.

本発明の代表的なカルバメート化合物には、式１もしくは式２：   Representative carbamate compounds of the invention include Formula 1 or Formula 2:

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［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素もしくはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、そしてＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は独立して水素、フッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素である］
を有するものが包含される。 Wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently hydrogen or C 1 -C 4 alkyl, and X 1 , X 2 , X 3 , X 4 and X 5 are independently hydrogen , Fluorine, chlorine, bromine or iodine]
Are included.

「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、本明細書において用いる場合、１〜４個の炭素原子を有する置換されたもしくは非置換の脂肪族炭化水素をさす。「アルキル」の定義内に特に包含されるのは、場合により置換されていてもよい脂肪族炭化水素である。本発明の好ましい態様において、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは非置換であるかもしくはフェニルで置換される。 “C 1 -C 4 alkyl” as used herein refers to a substituted or unsubstituted aliphatic hydrocarbon having from 1 to 4 carbon atoms. Specifically included within the definition of “alkyl” are those aliphatic hydrocarbons that are optionally substituted. In a preferred embodiment of the present invention, C 1 -C 4 alkyl is substituted with one or phenyl is unsubstituted.

「フェニル」という用語は、単独でもしくは別の基の一部として用いられようと、本明細書において用いる場合、６個の炭素原子を有する置換されたもしくは非置換の芳香族炭化水素環基として定義される。「フェニル」の定義内に特に包含されるのは、場合により置換されていてもよいフェニル基である。例えば、本発明の好ましい態様において、「フェニル」基は非置換であるかまたはハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロもしくはシアノで置換される。 The term “phenyl”, whether used alone or as part of another group, as used herein, as a substituted or unsubstituted aromatic hydrocarbon ring group having 6 carbon atoms. Defined. Specifically included within the definition of “phenyl” are those phenyl groups that are optionally substituted. For example, in a preferred embodiment of the invention, the “phenyl” group is unsubstituted or substituted with halogen, C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro or cyano.

本発明の好ましい態様において、Ｘ１はフッ素、塩素、臭素もしくはヨウ素であり、そしてＸ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は水素である。 In a preferred embodiment of the invention, X 1 is fluorine, chlorine, bromine or iodine and X 2 , X 3 , X 4 and X 5 are hydrogen.

本発明の別の好ましい態様において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５は独立して塩素もしくは水素である。 In another preferred embodiment of the present invention, X 1 , X 2 , X 3 , X 4 and X 5 are independently chlorine or hydrogen.

本発明の別の好ましい態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は全て水素である。 In another preferred embodiment of the invention, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are all hydrogen.

本発明の化合物上の置換基および置換パターンは、化学的に安定でありそして当該技術分野において既知である技術ならびに本明細書に提供される方法により容易に合成することができる化合物を提供するために当業者により選択され得ることが理解される。   The substituents and substitution patterns on the compounds of the present invention are intended to provide compounds that are chemically stable and can be readily synthesized by techniques known in the art and methods provided herein. It will be understood that these can be selected by those skilled in the art.

代表的な２−フェニル−１，２−エタンジオールモノカルバメートおよびジカルバメートには、例えば、以下の化合物が包含される：   Representative 2-phenyl-1,2-ethanediol monocarbamates and dicarbamates include, for example, the following compounds:

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本発明には、式１もしくは式２の単離された鏡像異性体の使用が包含される。１つの好ましい態様において、式１の単離されたＳ−鏡像異性体を含んでなる製薬学的組成物が、被験体において神経保護を与えるために使用される。別の好ましい態様において、式２の単離されたＲ−鏡像異性体を含んでなる製薬学的組成物が、被験体において神経保護を与えるために使用される。別の態様において、式１の単離されたＳ−鏡像異性体および式２の単離されたＲ−鏡像異性体を含んでなる製薬学的組成物を被験体において神経保護を与えるために使用することができる。   The present invention includes the use of isolated enantiomers of Formula 1 or Formula 2. In one preferred embodiment, a pharmaceutical composition comprising an isolated S-enantiomer of Formula 1 is used to provide neuroprotection in a subject. In another preferred embodiment, a pharmaceutical composition comprising an isolated R-enantiomer of Formula 2 is used to provide neuroprotection in a subject. In another embodiment, a pharmaceutical composition comprising an isolated S-enantiomer of formula 1 and an isolated R-enantiomer of formula 2 is used to provide neuroprotection in a subject. can do.

本発明にはまた、式１もしくは式２の鏡像異性体の混合物の使用も包含される。本発明の１つの態様において、１つの鏡像異性体が優位である。混合物において優位である鏡像異性体は、混合物に存在する別の鏡像異性体のいずれかより多い量で、例えば、５０％より多い量で混合物に存在するものである。１つの態様において、１つの鏡像異性体は９０％の程度まであるいは９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％もしくは９８％またはそれ以上の程度まで優位である。１つの好ましい態様において、式１の化合物を含んでなる組成物において優位である鏡像異性体は式１のＳ−鏡像異性体である。別の好ましい態様において、式２の化合物を含んでなる組成物において優位である鏡像異性体は式２のＲ−鏡像異性体である。   The invention also encompasses the use of a mixture of enantiomers of Formula 1 or Formula 2. In one embodiment of the invention, one enantiomer is dominant. An enantiomer that is predominant in a mixture is one that is present in the mixture in an amount greater than any of the other enantiomers present in the mixture, eg, greater than 50%. In one embodiment, one enantiomer predominates to the extent of 90% or to the extent of 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% or 98% or more. In one preferred embodiment, the predominant enantiomer in a composition comprising a compound of formula 1 is the S-enantiomer of formula 1. In another preferred embodiment, the predominant enantiomer in a composition comprising a compound of formula 2 is the R-enantiomer of formula 2.

本発明の好ましい態様において、本発明の組成物において唯一の鏡像異性体としてもしくは優位である鏡像異性体として存在する鏡像異性体は、式３もしくは式５（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記のとおり定義される）により、または式７もしくは式８により表される。 In a preferred embodiment of the invention, the enantiomer present as the sole enantiomer or as the predominant enantiomer in the composition of the invention is represented by formula 3 or formula 5 wherein X 1 , X 2 , X 3 , X 4 , X 5 , R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are defined as above) or are represented by formula 7 or formula 8.

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本発明は、式１および式２により表される化合物の鏡像異性体および鏡像異性体混合物を使用する方法を提供する。式１もしくは式２のカルバメート鏡像異性体はベンジル位で不斉キラル炭素を含有し、それはフェニル環に隣接した脂肪族炭素である。   The present invention provides methods of using enantiomers and enantiomeric mixtures of the compounds represented by Formula 1 and Formula 2. The carbamate enantiomer of Formula 1 or Formula 2 contains an asymmetric chiral carbon at the benzyl position, which is an aliphatic carbon adjacent to the phenyl ring.

単離される鏡像異性体は、対応する鏡像異性体を実質的に含まないものである。従って、単離された鏡像異性体は、分離技術によって分離されるかもしくは対応する鏡像異性体を含まずに製造される化合物をさす。「実質的に含まない」という用語は、本明細書において用いる場合、化合物が有意により大きい割合の１つの鏡像異性体で構成されていることを意味する。好ましい態様において、化合物には少なくとも約９０重量％の好ましい鏡像異性体が含まれる。本発明に別の態様において、化合物には少なくとも約９９重量％の好ましい鏡像異性体が含まれる。好ましい鏡像異性体は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化を包含する、当業者に既知である任意の方法によりラセミ混合物から単離することができ、もしくは好ましい鏡像異性体は本明細書に記述される方法により製造することができる。   An isolated enantiomer is one that is substantially free of the corresponding enantiomer. Thus, an isolated enantiomer refers to a compound that is separated by separation techniques or prepared without the corresponding enantiomer. The term “substantially free” as used herein means that the compound is made up of a significantly larger proportion of one enantiomer. In a preferred embodiment, the compound includes at least about 90% by weight of the preferred enantiomer. In another embodiment of the invention, the compound includes at least about 99% by weight of a preferred enantiomer. Preferred enantiomers can be isolated from racemic mixtures by any method known to those skilled in the art, including high performance liquid chromatography (HPLC) and chiral salt formation and crystallization, or preferred enantiomers Can be produced by the methods described herein.

好ましい鏡像異性体の製造の方法は当業者に既知であり、そして例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｅ．Ｌ．Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ
Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；およびＷｉｌｅｎ，Ｓ．Ｈ．Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ，ＩＮ １９７２）に記述されている。 Methods for the preparation of preferred enantiomers are known to those skilled in the art and are described, for example, in Jacques, et al. , Enantiomers, Racemates and Solutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen, S .; H. , Et al. Tetrahedron 33: 2725 (1977); Eliel, E .; L. Stereochemistry of Carbon
Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); and Wilen, S .; H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (EL Liel, Ed., Univ. Of Notre Name Press, Notre Name, IN 1972).

さらに、本発明の化合物は米国特許第３，２６５，７２８号（その開示は、その全部がそして全ての目的のために引用することにより本明細書に組み込まれる）、第３，３１３，６９２号（その開示は、その全部がそして全ての目的のために引用することにより本明細書に組み込まれる）ならびに以前に参照した米国特許第５，８５４，２８３号、第５，６９８，５８８号および第６，１０３，７５９号（それらの開示は、それらの全部がそして全ての目的のために引用することにより本明細書に組み込まれる）に記載のとおり製造することができる。   In addition, the compounds of the present invention are disclosed in US Pat. No. 3,265,728, the disclosure of which is incorporated herein by reference in its entirety and for all purposes, US Pat. No. 3,313,692. (The disclosure of which is incorporated herein by reference in its entirety and for all purposes) and previously referenced US Pat. Nos. 5,854,283, 5,698,588 and No. 6,103,759 (the disclosures of which are incorporated herein by reference in their entirety and for all purposes).

神経保護の性質
網膜を包含する中枢（ＣＮＳ）もしくは末梢（ＰＮＳ）神経系への任意の種類の傷害もしくは損傷を有する患者は、これらの神経保護方法から利益を得ることができる。この神経系損傷は、ニューロン細胞死もしくは障害をもたらす急性損傷、低酸素虚血もしくはその組み合わせが包含されるがこれらに限定されるものではない例えば急性神経変性障害におけるような神経系への突然の傷害もしくは急性損傷の形態をとることができる。急性損傷には、閉鎖性、鈍的もしくは穿通性頭部外傷を包含する外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、局所性脳外傷、びまん性脳損傷、脊髄損傷、頭蓋内もしくは脊椎内損傷（打撲傷、穿通、剪断、圧迫もしくは裂傷が包含されるがこれらに限定されるものではない）、脊髄の損傷またはむち打ち揺さぶられっ子症候群が包含されるがこれらに限定されるものではない。 Neuroprotective properties Patients with any type of injury or damage to the central (CNS) or peripheral (PNS) nervous system, including the retina, can benefit from these neuroprotective methods. This nervous system damage includes, but is not limited to, acute damage that results in neuronal cell death or damage, hypoxic ischemia or a combination thereof. It can take the form of injury or acute injury. Acute injuries include traumatic brain injury (TBI), including obstructive, blunt or penetrating head trauma, focal brain injury, diffuse brain injury, spinal cord injury, intracranial or intraspinal injury (bruise, penetration) Including, but not limited to, shear, compression or laceration), including but not limited to spinal cord injury or whiplash babbling syndrome.

さらに、酸素もしくは血液供給の欠乏は一般に、脳血管不全、脳虚血もしくは脳梗塞（塞栓性閉塞および血栓症に由来する脳虚血もしくは梗塞を包含する）、網膜虚血（糖尿病性かそうでないもの）、緑内障、網膜変性、多発性硬化症、中毒性および虚血性視神経障害、急性虚血後の再かん流、周産期低酸素虚血性傷害、心停止または任意のタイプの頭蓋内出血（硬膜外、硬膜下、くも膜下もしくは脳内出血が包含されるがこれらに限定されるものではない）が包含されるがこれらに限定されるものではない低酸素症および／もしくは虚血におけるような急性損傷を引き起こし得る。   In addition, a lack of oxygen or blood supply generally results in cerebrovascular failure, cerebral ischemia or cerebral infarction (including cerebral ischemia or infarction resulting from embolic obstruction and thrombosis), retinal ischemia (diabetic or not ), Glaucoma, retinal degeneration, multiple sclerosis, toxic and ischemic optic neuropathy, reperfusion after acute ischemia, perinatal hypoxic ischemic injury, cardiac arrest or any type of intracranial hemorrhage (hard Such as in hypoxia and / or ischemia, including but not limited to epidural, subdural, subarachnoid or intracerebral hemorrhage). Can cause acute damage.

神経系の組織への外傷もしくは損傷はまた、アルツハイマー病、ピック病、びまん性レヴィー小体病、進行性核上麻痺（スティール−リチャードソン症候群）、多系統変性（シャイ−ドレーガー症候群）、神経変性と関連する慢性癲癇症状、運動ニューロン疾患（筋萎縮性側索硬化症）、多発性硬化症、退行性（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ）運動失調、皮質基底核変性症、グアム島のＡＬＳ−パーキンソン認知症症候群、亜急性硬化性汎脳炎、ハンチントン病、パーキンソン病、シヌクレイノパチー（多系統萎縮症を包含する）、原発性進行性失語症、線条体黒質変性症、マチャド−ジョセフ病もしくは脊髄小脳失調症３型およびオリーブ橋小脳変性、球および偽球麻痺、脊髄性および球脊髄性筋萎縮症（ケネディー病）、原発性側索硬化症、家族性痙性対麻痺、ウェルドニッヒ−ホフマン病、クーゲルベルク−ヴェランデル病、テイ−サックス病、サンドホフ病、家族性痙攣性疾患、ヴォールファルト−クーゲルベルク−ヴェランデル病、痙攣性不全対麻痺、進行性多病巣性白質脳障害、家族性自律神経障害（ライリー−デイ症候群）またはプリオン病（クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン−ストロイスラー−シャインカー病、クールー病もしくは致死性家族性不眠症が包含されるがこれらに限定されるものではない）が包含されるがこれらに限定されるものではないある期間にわたる進行性のニューロン細胞死もしくは障害と関連するもののような、より慢性のそして進行性の神経変性障害の形態をとることもできる。   Trauma or damage to nervous system tissues can also include Alzheimer's disease, Pick's disease, diffuse Lewy body disease, progressive supranuclear palsy (Steel-Richardson syndrome), multisystem degeneration (Shy-Drager syndrome), neurodegeneration Related chronic epilepsy, motor neuron disease (amyotrophic lateral sclerosis), multiple sclerosis, degenerative ataxia, corticobasal degeneration, ALS-Parkinson dementia syndrome in Guam, sub Acute sclerosing panencephalitis, Huntington's disease, Parkinson's disease, synucleinopathies (including multiple system atrophy), primary progressive aphasia, striatal nigra degeneration, Machado-Joseph disease or spinocerebellar ataxia 3 Type and olive bridge cerebellar degeneration, bulbar and pseudobulbar paralysis, spinal and bulbospinal amyotrophy (Kennedy's disease), primary lateral sclerosis Familial spastic paraplegia, Weldnich-Hoffmann disease, Kugelberg-Welander disease, Tay-Sachs disease, Sandhoff disease, familial convulsive disease, Wohlfart-Kügelberg-Welander disease, convulsive insufficiency paraplegia, progressive multifocal disease Including leukoencephalopathy, familial autonomic neuropathy (Riley-Day syndrome) or prion disease (Kreuzfeld-Jakob disease, Gerstmann-Streisler-Scheinker disease, Kourou disease or lethal familial insomnia) Of chronic and progressive neurodegenerative disorders such as those associated with progressive neuronal cell death or disorder over a period of time, including but not limited to It can also take forms.

さらに、神経系への外傷および進行性損傷は、双極性障害もしくは統合失調性感情障害もしくは統合失調症、衝動調節障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、側頭葉癲癇における行動変化および人格障害の進行性の悪化形態が包含されるがこれらに限定されるものではない様々な精神医学的障害において起こり得る。   In addition, trauma and progressive injury to the nervous system can be bipolar disorder or schizophrenic emotional disorder or schizophrenia, impulse control disorder, obsessive compulsive disorder (OCD), behavioral changes in temporal lobe epilepsy, and progression of personality disorder It can occur in a variety of psychiatric disorders, including but not limited to sexually impaired forms.

１つの好ましい態様において、本発明の化合物は様々な精神医学的障害における神経系への外傷および進行性損傷を伴う障害において神経保護を与えるために用いられる。これらの障害は、統合失調性感情障害、統合失調症、衝動調節障害、強迫性障害（ＯＣＤ）および人格障害よりなる群から選択される。   In one preferred embodiment, the compounds of the invention are used to provide neuroprotection in disorders involving trauma and progressive damage to the nervous system in various psychiatric disorders. These disorders are selected from the group consisting of schizophrenic emotional disorder, schizophrenia, impulse control disorder, obsessive compulsive disorder (OCD) and personality disorder.

さらに、外傷および損傷は、加齢性認知症、血管性認知症、びまん性白質疾患（ビンスヴァンガー病）、内分泌もしくは代謝由来の認知症、頭部外傷およびびまん性脳損傷の認知症、拳闘家認知症もしくはピック病が包含されるがこれに限定されるものではない前頭葉認知症と関連する神経変性障害が包含されるがこれらに限定されるものではない明白なそして高度の記憶喪失と関連する障害の形態をとることができる。   In addition, trauma and injury include age-related dementia, vascular dementia, diffuse white matter disease (Binswanger disease), endocrine or metabolic dementia, dementia of head trauma and diffuse brain injury, fist fighting Associated with obvious and severe memory loss, including but not limited to neurodegenerative disorders associated with frontal dementia, including but not limited to home dementia or Pick's disease Can take the form of obstacles.

ニューロン損傷と関連する他の障害には、網膜を包含する神経系の化学的、毒性、感染性および放射線傷害、胎児の発育中の傷害、出産時の未熟、無酸素虚血、肝臓、血糖、***、電解質および内分泌由来からの傷害、精神由来の傷害（精神病理学、鬱病もしくは不安が包含されるがこれらに限定されるものではない）、末梢疾患および神経叢障害（神経叢麻痺を包含する）からの傷害もしくは神経障害（多病巣性、感覚、運動、感覚−運動、自律性、感覚−自律性もしくは脱髄性神経障害（ギラン−バレー症候群もしくは慢性炎症性脱髄性多発神経根神経障害が包含されるがこれらに限定されるものではない）から選択される神経障害または感染、炎症、免疫傷害、薬物乱用、薬理学的処置、毒素、外傷（圧迫、挫傷、裂傷もしくはセグメンテーション（ｓｅｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）外傷が包含されるがこれらに限定されるものではない）、代謝障害（内分泌もしくは腫瘍随伴性が包含されるがこれらに限定されるものではない）、シャルコー−マリー−ツース病（１ａ、１ｂ、２、４ａもしくは１−Ｘ連鎖型が包含されるがこれらに限定されるものではない）、フリードライヒ失調症、異染性白質萎縮症、レフサム病、副腎脊髄神経障害、毛細血管拡張性運動失調、デジェリン−ソッタ（ＡもしくはＢ型が包含されるがこれらに限定されるものではない）、ランバート−イートン症候群もしくは脳神経の障害に由来する神経障害が包含される）からの傷害と関連する障害が包含されるがこれらに限定されるものでは
ない。 Other disorders associated with neuronal damage include chemical, toxic, infectious and radiation damage to the nervous system, including the retina, injury during fetal development, prematurity at birth, anoxic ischemia, liver, blood sugar, Uremia, electrolyte and endocrine injuries, psychiatric injuries (including but not limited to psychopathology, depression or anxiety), peripheral diseases and plexus disorders (including plexus palsy) ) Injury or neuropathy (multifocal, sensory, motor, sensory-motor, autonomy, sensory-autonomous or demyelinating neuropathy (Guillain-Barre syndrome or chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy) Neuropathies or infections selected from, including but not limited to, inflammation, immune injury, drug abuse, pharmacological treatment, toxins, trauma (compression, contusion, laceration or segment) Segmentation trauma (including but not limited to), metabolic disorders (including but not limited to endocrine or paraneoplastic), Charcot-Marie-Tooth disease (Including but not limited to 1a, 1b, 2, 4a or 1-X linkage), Friedreich ataxia, metachromatic leukotrophy, refsum disease, adrenal spinal neuropathy, capillary Injuries from vasodilatory ataxia, dejerin-sotta (including but not limited to type A or B), neuropathy from Lambert-Eaton syndrome or cranial nerve disorders But not limited to these.

従って、「神経保護」という用語は、本明細書において用いる場合、ヒトを包含する哺乳類の中枢もしくは末梢神経系における神経細胞、軸索もしくはそれらの支持細胞の機能障害、変性もしくは死の重度を抑制すること、防止すること、改善することもしくは減少することを意味するものとする。これには、それを必要とする患者における神経変性疾患の処置もしくは予防；興奮毒性からの保護もしくは化合物（例えば、グルタメートのような興奮性アミノ酸；毒素；またはアポトーシスの即時もしくは遅延誘導が包含されるがこれらに限定されるものではない即時もしくは遅延細胞傷害性副作用を与える予防もしくは治療化合物）の細胞傷害性効果を改善することが包含される。   Thus, the term “neuroprotection” as used herein inhibits the severity of dysfunction, degeneration or death of neurons, axons or their supporting cells in the central or peripheral nervous system of mammals, including humans. Means to prevent, prevent, improve or reduce. This includes treatment or prevention of neurodegenerative diseases in patients in need thereof; protection from excitotoxicity or compounds (eg excitatory amino acids such as glutamate; toxins; or immediate or delayed induction of apoptosis) Including, but not limited to, improving the cytotoxic effects of prophylactic or therapeutic compounds that provide immediate or delayed cytotoxic side effects.

従って、「神経保護薬（ＮＰＤ）での処置を必要とする患者」という用語は、本明細書において用いる場合、上記の症候群もしくは障害のいずれか、または任意の神経学的もしくは精神医学的障害の発症、進行、悪化もしくは処置への増加した抵抗性を防ぐために神経保護を与えることから患者の現在の臨床症状もしくは予後が利益を得ることができる任意の障害を現在有するかもしくは発症し得る任意の患者をさす。   Thus, the term “patient in need of treatment with a neuroprotective drug (NPD)” as used herein refers to any of the above syndromes or disorders, or any neurological or psychiatric disorder. Any who currently has or can develop any disorder that can benefit the patient's current clinical symptoms or prognosis from providing neuroprotection to prevent onset, progression, worsening or increased resistance to treatment Point to the patient.

「抗癲癇薬（ＡＥＤ）」という用語は、「抗痙攣薬」という用語と交換可能に用いられ、そして本明細書において用いる場合、両方の用語は、薬剤が被験体もしくは患者に投与される場合に発作活動もしくは発作原性を抑制すること（例えば、防止すること、遅くすること、停止させることもしくは改善すること）ができる薬剤をさす。   The term “antiepileptic drug (AED)” is used interchangeably with the term “anticonvulsant drug” and, as used herein, both terms are used when the drug is administered to a subject or patient. An agent that can suppress (eg, prevent, slow, stop, or improve) seizure activity or seizure motility.

「処置すること」もしくは「処置」という用語は、本明細書において用いる場合、軽減；寛解；症状の減少または損傷、病変もしくは症状を患者にとってより耐容可能にすること；変性もしくは減退の速度を遅くすること；変性の最終点をあまり衰弱させないようにすること；あるいは患者の肉体もしくは精神の健康を改善することのような任意の他覚的もしくは自覚的パラメーターを包含する、損傷、病変もしくは症状の防止もしくは改善における成功の任意の兆候をさす。症状の処置もしくは改善は、身体検査、神経学的検査および／もしくは精神鑑定の結果を包含する、他覚的もしくは自覚的パラメーターに基づくことができる。従って、「処置すること」もしくは「処置」という用語には、神経保護を与えるための本発明の化合物もしくは薬剤の投与が包含される。ある場合において、本発明の化合物での処置は、ニューロン死もしくは損傷または脳機能障害の進行あるいは脳過剰興奮性を防ぐか、抑制するかもしくは停止させるために他の神経保護化合物もしくはＡＥＤと組み合わせて行われる。   The terms “treating” or “treatment”, as used herein, reduce; remission; reduce or reduce symptoms, or make a lesion or symptom more tolerable for a patient; slow down the rate of degeneration or decline To make the final point of degeneration less debilitating; or any damage or lesion or symptom, including any objective or subjective parameters such as improving the physical or mental health of the patient Any sign of success in prevention or improvement. The treatment or amelioration of symptoms can be based on objective or subjective parameters, including the results of physical examination, neurological examination and / or psychological examination. Accordingly, the term “treating” or “treatment” includes administration of a compound or agent of the invention to confer neuroprotection. In certain cases, treatment with a compound of the invention may be combined with other neuroprotective compounds or AEDs to prevent, inhibit or stop neuronal death or injury or progression of brain dysfunction or brain hyperexcitability. Done.

「治療効果」という用語は、本明細書において用いる場合、患者の中枢もしくは末梢神経系の細胞の死もしくは損傷もしくは機能障害を防ぐかもしくは最小限にするための神経保護効果の有効な提供をさす。   The term “therapeutic effect” as used herein refers to the effective provision of a neuroprotective effect to prevent or minimize the death or damage or dysfunction of cells in the central or peripheral nervous system of a patient. .

「治療的に有効な量」という用語は、本明細書において用いる場合、そのような神経保護処置を必要とする被験体もしくは患者において、上記に定義されるとおり、治療効果をもたらすための本発明の化合物の１つもしくはそれ以上の十分な量を意味する。   The term “therapeutically effective amount” as used herein refers to the present invention for providing a therapeutic effect as defined above in a subject or patient in need of such neuroprotective treatment. A sufficient amount of one or more of the following compounds:

「被験体」もしくは「患者」という用語は本明細書において交換可能に使用され、そして本明細書において用いる場合、本発明の組成物を投与することができるヒト患者もしくは被験体を包含するヒトが包含されるがこれに限定されるものではない任意の哺乳類を意味する。哺乳類という用語には、ヒト患者および非ヒト霊長類、ならびにウサギ、ラットおよびマウスのような実験動物、および他の動物が包含される。   The terms “subject” or “patient” are used interchangeably herein and, as used herein, include human patients or subjects to whom the compositions of the invention can be administered. It means any mammal, including but not limited to. The term mammal includes human patients and non-human primates, as well as laboratory animals such as rabbits, rats and mice, and other animals.

ある態様において、本発明の方法は、カルバメート化合物または現在既知である神経保
護化合物もしくはＡＥＤで有効に処置されることが当該技術分野において既知である症状を患っていないかもしくは患っていることが既知でない患者を処置するために都合よく用いられる。これらの場合において、本発明の方法および化合物を使用する決定は、該患者が「神経保護薬（ＮＰＤ）での処置を必要とする患者」（該用語が上記に定義されるとおり）であるかどうかを決定することに基づいて行われる。 In certain embodiments, the methods of the invention do not suffer from or are known to suffer from symptoms known in the art to be effectively treated with carbamate compounds or currently known neuroprotective compounds or AEDs. Conveniently used to treat non-patients. In these cases, the decision to use the methods and compounds of the invention is whether the patient is a “patient in need of treatment with a neuroprotective drug (NPD)” (as the term is defined above). It is based on determining whether.

ある態様において、本発明は神経保護の方法を提供する。ある態様において、これらの方法は、神経系の細胞への傷害もしくは損傷の明白な臨床的徴候もしくは症状をまだ発症していないが、神経系への傷害もしくは外傷のためにあるいは生化学的もしくは遺伝的のいずれかのある既知の素因またはこれらの障害の１つもしくはそれ以上の確認されたバイオマーカーの発見のためにニューロン損傷の発症の高リスク群に入る可能性がある患者に本発明のカルバメート化合物の治療的に有効な量を投与することを含んでなる。   In certain embodiments, the present invention provides a method of neuroprotection. In certain embodiments, these methods have not yet developed overt clinical signs or symptoms of injury or damage to cells of the nervous system, but are due to injury or trauma to the nervous system or biochemical or genetic. Carbamates of the present invention for patients who may enter the high risk group of developing neuronal damage due to the discovery of any known predisposition or one or more confirmed biomarkers of these disorders Administering a therapeutically effective amount of the compound.

従って、ある態様において、本発明の方法および組成物は、ニューロン損傷を発症する危険があるが臨床的証拠をまだ発症していない被験体における神経保護に対して向けられる。この患者は、ニューロン損傷を発症することについて平均より大きいリスクを示す被験体もしくはそれらの家族、病歴、身体検査もしくは試験における任意の因子の認識により決定されるように単に「より大きい危険」にさらされている可能性がある。従って、患者が任意の利用可能な手段により「より大きい危険」にさらされている可能性があるというこの決定は、該患者が本発明の方法で処置されるべきであるかどうかを決定するために用いることができる。   Accordingly, in certain embodiments, the methods and compositions of the invention are directed against neuroprotection in a subject at risk of developing neuronal damage but not yet developing clinical evidence. This patient is simply exposed to a “greater risk” as determined by the recognition of any factor in subjects or their families, medical history, physical examination or testing that present a greater than average risk for developing neuronal damage. May have been. Thus, this determination that the patient may be at “greater risk” by any available means is to determine whether the patient should be treated with the method of the present invention. Can be used.

従って、典型的な態様において、本発明の方法および化合物による処置から利益を得ることができる被験体は、ニューロン損傷の危険因子を決定するために一般に認められたスクリーニング方法を用いて同定することができる。例えば、これらのスクリーニング方法には、例えば、閉鎖性もしくは穿通性のいずれかの頭部外傷、細菌もしくはウイルスのＣＮＳ感染、発作、脳腫瘍、脳浮腫、嚢虫症、ポルフィリン症、代謝性脳症が包含されるがこれらに限定されるものではない脳血管疾患、催眠鎮静薬もしくはアルコール離脱症状が包含されるがこれらに限定されるものではない薬物離脱症状、出生時の酸素欠乏症もしくは任意の種類の分娩外傷を包含する異常な周産期歴、脳性麻痺、学習障害、多動性、子供の頃の熱性痙攣の病歴、癲癇重積持続状態の病歴、癲癇もしくは任意の発作関連障害の家族歴、狼瘡（ｌｕｐｕｓ）を包含する脳の炎症疾患、コカイン中毒が包含されるがこれに限定されるものではない直接的もしくは胎盤通過によるいずれかの薬物中毒、親の血族、および向精神薬を包含する神経系に対して毒性がある薬剤での処置が包含されるがこれらに限定されるものではない危険因子を決定するための通常の検査が包含される。   Thus, in an exemplary embodiment, subjects who can benefit from treatment with the methods and compounds of the present invention can be identified using generally accepted screening methods to determine risk factors for neuronal damage. it can. For example, these screening methods include, for example, either closed or penetrating head trauma, bacterial or viral CNS infection, stroke, brain tumor, brain edema, cystosis, porphyria, metabolic encephalopathy Cerebrovascular diseases, hypnotic sedatives or alcohol withdrawal symptoms, including but not limited to, drug withdrawal symptoms, hypoxia at birth or any type of delivery trauma Abnormal perinatal history, including cerebral palsy, learning disabilities, hyperactivity, history of febrile convulsions in childhood, history of intussusception, family history of epilepsy or any seizure related disorder, lupus ( inflammatory diseases of the brain, including lupus), drug addiction, either directly or by placenta passage, including but not limited to ***e addiction, parent Consanguinity, and treatment with drugs that are toxic to psychotropic drugs include nervous system encompasses conventional test to determine the risk factors are not limited thereto, and the like.

臨床徴候もしくは症状を有さない患者においてどの患者がＮＰＤでの処置から利益を得ることができるかという決定は、様々な「代理マーカー」もしくは「バイオマーカー」に基づくことができる。   The determination of which patients can benefit from treatment with NPD in patients without clinical signs or symptoms can be based on various “surrogate markers” or “biomarkers”.

本明細書において用いる場合、「代理マーカー」および「バイオマーカー」という用語は交換可能に用いられ、そしてニューロン損傷の現在の存在もしくは将来の発症と確実に相関することができる任意の解剖学的、生化学的、構造的、電気的、遺伝的もしくは化学的指標もしくはマーカーをさす。ある場合において、被験体がニューロン損傷の危険があるかどうかを決定するためにコンピューター断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）もしくはポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）のような脳撮像技術を用いることができる。   As used herein, the terms “surrogate marker” and “biomarker” are used interchangeably and can be any anatomical that can be reliably correlated with the current presence or future onset of neuronal damage, A biochemical, structural, electrical, genetic or chemical indicator or marker. In some cases, brain imaging techniques such as computed tomography (CT), magnetic resonance imaging (MRI) or positron emission tomography (PET) to determine whether a subject is at risk of neuronal damage Can be used.

本発明の方法に適当なバイオマーカーには、海馬における硬化、萎縮もしくは容積減少または明白な内側側頭葉硬化（ＭＴＳ）もしくは同様の関連する解剖学的病変のＭＲＩ、
ＣＴもしくは他の撮像技術による決定；タンパク質もしくは他の生化学的バイオマーカーのような分子種の患者の血液、血清もしくは組織における検出、例えば、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）の上昇したレベルもしくはニューロン分解産物の上昇した血清レベル；あるいは患者が神経保護薬での処置を必要とするという代理マーカーもしくはバイオマーカーからの他の証拠が包含されるがこれらに限定されるものではない。 Suitable biomarkers for the methods of the present invention include MRI of sclerosis, atrophy or volume loss in the hippocampus or overt medial temporal lobe sclerosis (MTS) or similar associated anatomical lesions,
Determination by CT or other imaging techniques; detection of molecular species such as proteins or other biochemical biomarkers in the patient's blood, serum or tissue, eg elevated levels of ciliary neurotrophic factor (CNTF) or Elevated serum levels of neuronal degradation products; or other evidence from surrogate markers or biomarkers that the patient requires treatment with a neuroprotective agent are included, but are not limited to.

多種多様な検出技術を利用するさらに多くのそのようなバイオマーカーは将来開発されることが予想される。ニューロン損傷の存在もしくは起こり得る将来の発症の任意のそのようなマーカーもしくは指標は、後者の用語を本明細書において用いる場合、本発明の化合物および方法での処置の必要性を決定するために本発明の方法において用いることができるものとする。   Many more such biomarkers utilizing a wide variety of detection techniques are expected to be developed in the future. Any such marker or indicator of the presence or possible future onset of neuronal damage can be used to determine the need for treatment with the compounds and methods of the invention when the latter term is used herein. It can be used in the method of the invention.

被験体がニューロン損傷を有するかもしくは発症する危険があり得るという決定にはまた、例えば、詳細な病歴、身体検査および一連の関連する血液検査を含む医学的評価も包含される。それにはまた、脳波（ＥＥＧ）、ＣＴ、ＭＲＩもしくはＰＥＴスキャンも包含することができる。ニューロン損傷もしくは傷害を発症する増加した危険の決定はまた、遺伝子発現プロファイリングもしくはプロテオミクス技術を包含する遺伝子検査を用いて行うこともできる（Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｄ．Ｒｏｇａｗｓｋｉ，Ｍ．Ａ．Ｅｐｉｌｅｐｓｙ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０；７１−７８（２００２）およびＬｏｓｃｈｅｒ，Ｗ．Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｄ．Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０；３−１６（２００２）を参照）。 Determining that a subject may have or be at risk of developing neuronal damage also includes medical evaluation, including, for example, a detailed medical history, physical examination, and a series of related blood tests. It can also include an electroencephalogram (EEG), CT, MRI or PET scan. Determination of an increased risk of developing neuronal damage or injury can also be done using genetic testing, including gene expression profiling or proteomic techniques (Schmidt, D. Rogawski, MA Epilepsy).
Research 50; 71-78 (2002) and Loscher, W. et al. Schmidt D.C. Epilepsy Research 50; see 3-16 (2002)).

神経保護薬により安定化されるかもしくは改善されることができる精神医学的障害、例えば、双極性障害、統合失調性感情障害、統合失調症、衝動調節障害などについて、上記の検査にはまた現状検査および経時的なそして患者が経時的に受けている可能性がある他の処置に関連する気分障害症状および精神病症状のような患者の症状の経過の詳細な病歴、例えば生涯病歴（ｌｉｆｅ ｃｈａｒｔ）を包含することもできる。これらのおよび他の専門的なそして日常的な方法は、臨床医が本発明の方法および製剤を用いる治療を必要とする患者を選択することを可能にする。   For psychiatric disorders that can be stabilized or ameliorated by neuroprotective drugs, such as bipolar disorder, schizophrenic emotional disorder, schizophrenia, impulsive dysregulation, etc., the above tests are also Detailed history of the patient's symptoms, such as mood disorders and psychotic symptoms related to the examination and over time and other treatments that the patient may be undergoing over time, such as a life chart Can also be included. These and other specialized and routine methods allow the clinician to select patients in need of treatment using the methods and formulations of the present invention.

本発明のある態様において、本発明の実施における使用に適当なカルバメート化合物は、単独でまたは少なくとも１つもしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬と、例えば他の神経保護薬もしくは抗癲癇薬、抗痙攣薬と同時に投与される。これらの態様において、本発明は患者におけるニューロン損傷を処置するかもしくは防止する方法を提供する。該方法には、神経保護を与えるかまたは発作もしくは癲癇発生を処置するかもしくは防止する能力あるいは本発明の化合物の神経保護効果を増大する能力を有する１つもしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬の有効量と組み合わせて本明細書に開示されるカルバメート化合物の１つの有効量を処置を必要とする患者に投与する段階が包含される。   In certain embodiments of the present invention, carbamate compounds suitable for use in the practice of the present invention are alone or in combination with at least one or more other compounds or therapeutic agents, such as other neuroprotective or antiepileptic drugs, It is given at the same time as a convulsant. In these embodiments, the present invention provides a method of treating or preventing neuronal damage in a patient. The method includes one or more other compounds or therapeutic agents that have the ability to confer neuroprotection or to treat or prevent seizures or epilepsy or to increase the neuroprotective effects of the compounds of the invention. Administering an effective amount of one of the carbamate compounds disclosed herein to a patient in need of treatment in combination with an effective amount of.

本明細書において用いる場合、本発明の化合物と化合物、治療薬もしくは既知の薬剤との「同時投与」もしくは「組み合わせ投与」という用語は、既知の薬剤および化合物の両方が治療効果を有するような時間での薬剤および１つもしくはそれ以上の化合物の投与を意味する。ある場合において、この治療効果は相乗的である。そのような同時投与は、本発明の化合物の投与に対する薬剤の同時の（すなわち、同時に）、前のもしくは後の投与を含むことができる。当業者は、特定の薬剤および本発明の化合物の投与の適切なタイミング、順序および投薬量を決定するのに何の困難もない。   As used herein, the term “simultaneous administration” or “combination administration” of a compound of the invention and a compound, therapeutic agent or known agent refers to a time period during which both the known agent and the compound have a therapeutic effect. Means administration of the drug and one or more compounds. In some cases, this therapeutic effect is synergistic. Such co-administration can include simultaneous (ie, simultaneous), prior or subsequent administration of the agents relative to the administration of the compound of the invention. Those skilled in the art have no difficulty in determining the appropriate timing, sequence and dosage of administration of a particular drug and the compounds of the present invention.

該１つもしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬は、以下の特性：抗酸化活性；ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト活性；内因性ＧＡＢＡ抑制の増大；ＮＯシンターゼインヒビター活性；鉄結合能力、例えば鉄キレート剤；カルシウム結合能力、例えばＣａ（ＩＩ）
キレート剤；亜鉛結合能力、例えばＺｎ（ＩＩ）キレート剤；ナトリウムもしくはカルシウムイオンチャンネルを効果的に遮断するか、または患者のＣＮＳにおけるカリウムもしくは塩化物イオンチャンネルを開く能力の１つもしくはそれ以上を有する化合物から選択することができる。 The one or more other compounds or therapeutic agents have the following properties: antioxidant activity; NMDA receptor antagonist activity; increased endogenous GABA inhibition; NO synthase inhibitor activity; iron binding capacity, eg, iron chelator; Calcium binding capacity, eg Ca (II)
A chelating agent; a zinc-binding ability, such as a Zn (II) chelator; one or more of the ability to effectively block sodium or calcium ion channels or open potassium or chloride ion channels in the patient's CNS It can be selected from compounds.

ある好ましい態様において、１つもしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬は、ＮＭＤＡ受容体に結合することにより（例えば、ＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位に結合することにより）ＮＭＤＡ受容体を中和し、そして／もしくは該薬剤はグリアのＧＡＢＡ取り込みを減少することによりＧＡＢＡ抑制を増大する。   In certain preferred embodiments, one or more other compounds or therapeutic agents neutralize the NMDA receptor by binding to the NMDA receptor (eg, by binding to the glycine binding site of the NMDA receptor). And / or the agent increases GABA inhibition by decreasing GABA uptake of glia.

さらに、該１つもしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬は、たとえその化合物が神経保護を与えることが既知でないとしても発作活動を抑制することが既知である任意の薬剤であることができる。そのような薬剤には、当業者に既知であるかもしくは将来発見される任意の有効なＡＥＤが包含されるがこれらに限定されるものではなく、例えば、適当な薬剤にはカルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、エトスクシミド、フェルバメート、ガバペンチン、ラモトリジン（ｌａｍｏｔｉｇｉｎｅ）、レベチラセタム、オキシカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、プリミドン、レチガビン、タラムパネル、チアガビン、トピラメート、バルプロエート、ビガバトリン、ゾニサミド、ベンゾジアゼピン、バルビツレートおよび一般に催眠鎮静薬が包含されるがこれらに限定されるものではない。   Further, the one or more other compounds or therapeutic agents can be any agent known to inhibit seizure activity even if the compound is not known to confer neuroprotection. Such agents include, but are not limited to, any effective AED known to those skilled in the art or discovered in the future, for example, suitable agents include carbamazepine, clobazam, clonazepam , Etosuximide, ferbamate, gabapentin, lamotrigine, levetiracetam, oxcarbazepine, phenobarbital, phenytoin, pregabalin, primidone, retigabine, talampanel, thiagabine, topiramate, valproate, vigabatrin, benzoxamide, sleep Drugs are included, but are not limited to these.

さらに、ある態様において、本発明の化合物は、神経保護を必要とする患者もしくは被験体に神経保護を与えるという目的で薬剤を製造するために、単独でまたは相互に組み合わせてあるいは上記のような１つもしくはそれ以上の他の治療薬、またはそれらの塩もしくはエステルと組み合わせて用いられる。
薬剤としてのカルバメート化合物：
本発明は、薬剤として式１および／もしくは式２の鏡像異性体混合物および単離された鏡像異性体を提供する。これらのカルバメート化合物は、被験体において神経保護を与えるために薬剤として調合される。 Further, in certain embodiments, the compounds of the present invention can be used alone or in combination with each other or as described above to produce a medicament for the purpose of providing neuroprotection to a patient or subject in need of neuroprotection. Used in combination with one or more other therapeutic agents, or salts or esters thereof.
Carbamate compounds as drugs:
The present invention provides enantiomeric mixtures of Formula 1 and / or Formula 2 and isolated enantiomers as drugs. These carbamate compounds are formulated as drugs to provide neuroprotection in the subject.

一般に、本発明のカルバメート化合物は、経口、口腔、局所、全身（例えば、経皮、鼻腔内、もしくは座薬による）もしくは非経口（例えば、筋肉内、皮下もしくは静脈内注射）を包含する治療薬を投与するための当該技術分野において既知である任意の方法により製薬学的組成物として投与することができる。神経系への直接的化合物投与には、例えば、ポンプ装置でのもしくはそれなしの頭蓋内もしくは脊椎内針もしくはカテーテルを介した送達による投与の脳内、心室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、脳室内、髄腔内、嚢内、脊髄内もしくは脊髄周囲経路への投与を包含することができる。   In general, the carbamate compounds of the present invention include therapeutic agents including oral, buccal, topical, systemic (eg, transdermal, intranasal, or suppository) or parenteral (eg, intramuscular, subcutaneous or intravenous injection). It can be administered as a pharmaceutical composition by any method known in the art for administration. Direct compound administration to the nervous system includes, for example, intracranial, intraventricular, intraventricular, intrathecal, of administration by delivery via intracranial or intraspinal needles or catheters with or without a pump device Administration to the internal, intracapsular, intraspinal or perispinal routes can be included.

さらに、網膜虚血（糖尿病性かそうでないもの）、緑内障、網膜変性、黄斑変性、多発性硬化症、中毒性および虚血性視神経障害が包含されるがこれらに限定されるものではない眼の疾患もしくは障害の場合において、化合物の組み合わせを包含する本発明の化合物は、眼への、すなわち強膜かそうでないものへの直接の外からの適用、例えば点眼剤を用いてまたは眼球埋め込みもしくは硝子体液への直接注入によるなどを包含するミクロスフェアを包含する他の緩徐送達装置により投与することができる。   In addition, eye diseases including but not limited to retinal ischemia (diabetic or otherwise), glaucoma, retinal degeneration, macular degeneration, multiple sclerosis, toxic and ischemic optic neuropathy Alternatively, in the case of a disorder, the compounds of the invention, including combinations of compounds, can be applied directly to the eye, ie directly to the sclera or not, such as with eye drops or ocular implantation or vitreous humor It can be administered by other slow delivery devices, including microspheres, including by direct injection into.

組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、半固体、散剤、持続放出製剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ、エリキシル剤、エアロゾルもしくは任意の他の適切な組成物の形態をとることができ；そして少なくとも１つの製薬学的に許容しうる賦形剤と組み合わせて本発明の少なくとも１つの化合物を含んでなる。適当な賦形剤は当業者に周知であり、そしてそれらおよび組成物を調合する方法は、Ａｌｆｏｎｓｏ ＡＲ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ，１９８５（その開示は、その全部がそして全ての目的のために引用することにより本明細書に組み込まれる）のような標準的な参考文献に見出すことができる。特に注入可能な液剤に適当な液状担体には、水、食塩水溶液、デキストロース水溶液およびグリコールが包含される。 The composition may take the form of tablets, pills, capsules, semi-solids, powders, sustained release formulations, solutions, suspensions, emulsions, syrups, elixirs, aerosols or any other suitable composition. Possible; and comprises at least one compound of the invention in combination with at least one pharmaceutically acceptable excipient. Suitable excipients are well known to those skilled in the art, and methods for formulating them and compositions are described in Alfonso AR: Remington's.
Pharmaceutical Sciences , 17th ed. , Mack Publishing Company, Easton PA, 1985, the disclosure of which is incorporated herein by reference in its entirety and for all purposes. Liquid carriers particularly suitable for injectable solutions include water, saline solution, dextrose solution and glycol.

カルバメート化合物は、水性懸濁剤として提供することができる。本発明の水性懸濁液は、水性懸濁剤の製造に適当な賦形剤と混合したカルバメート化合物を含有することができる。そのような賦形剤には、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴムのような沈殿防止剤、および天然に存在するリン脂質（例えばレシチン）、脂肪酸とアルキレンオキシドとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンステアレート）、長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキシドとの縮合生成物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、脂肪酸とヘキシトールから得られる部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）もしくは脂肪酸と無水ヘキシトールから得られる部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）のような分散剤もしくは湿潤剤を包含することができる。   The carbamate compound can be provided as an aqueous suspension. The aqueous suspensions of the present invention can contain carbamate compounds mixed with excipients suitable for the manufacture of aqueous suspensions. Such excipients include, for example, sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium alginate, polyvinylpyrrolidone, suspending agents such as gum tragacanth and gum arabic, and naturally occurring phospholipids (eg lecithin), Condensation products of fatty acids and alkylene oxides (for example, polyoxyethylene stearate), condensation products of long-chain aliphatic alcohols and ethylene oxide (for example, heptadecaethyleneoxycetanol), partial esters obtained from fatty acids and hexitol and ethylene oxide Condensation products (eg, polyoxyethylene sorbitol monooleate) or partial esters of fatty acids and anhydrous hexitol with ethylene oxide For example a dispersing or wetting agents such as polyoxyethylene sorbitan monooleate) can be included.

水性懸濁剤はまた、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはｎ−プロピルのような１つもしくはそれ以上の防腐剤、１つもしくはそれ以上の着色剤、１つもしくはそれ以上の香料、およびショ糖、アスパルテームもしくはサッカリンのような１つもしくはそれ以上の甘味料を含有することもできる。製剤は、オスモル濃度に関して調整することができる。   Aqueous suspensions also contain one or more preservatives, such as ethyl p-hydroxybenzoate or n-propyl, one or more colorants, one or more perfumes, and sucrose, One or more sweeteners such as aspartame or saccharin may also be included. The formulation can be adjusted for osmolarity.

本発明の方法における使用のための油状懸濁剤は、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナッツ油のような植物油に、または流動パラフィンのような鉱油；またはこれらの混合物にカルバメート化合物を懸濁することにより調合することができる。油状懸濁剤は、蜜蝋、固形パラフィンもしくはセチルアルコールのような増粘剤を含有することができる。口当たりの良い経口製剤を提供するために、グリセロール、ソルビトールもしくはショ糖のような甘味料を加えることができる。これらの製剤は、アスコルビン酸のような酸化防止剤の添加により保存することができる。注入可能な油賦形剤の例として、Ｍｉｎｔｏ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２８１：９３−１０２，１９９７を参照。本発明の製薬学的製剤はまた、水中油滴型乳剤の形態であることもできる。油相は、上記の植物油もしくは鉱油、またはこれらの混合物であることができる。   Oily suspensions for use in the method of the present invention comprise suspending the carbamate compound in a vegetable oil such as peanut oil, olive oil, sesame oil or coconut oil, or a mineral oil such as liquid paraffin; or a mixture thereof. Can be prepared. Oily suspensions may contain a thickening agent such as beeswax, hard paraffin or cetyl alcohol. Sweeteners such as glycerol, sorbitol or sucrose can be added to provide a palatable oral preparation. These formulations can be preserved by the addition of an anti-oxidant such as ascorbic acid. As examples of injectable oil excipients, see Minto, J. et al. Pharmacol. Exp. Ther. 281: 93-102, 1997. The pharmaceutical formulations of the present invention can also be in the form of oil-in-water emulsions. The oily phase can be a vegetable or mineral oil as described above, or a mixture of these.

適当な乳化剤には、アラビアゴムおよびトラガカントゴムのような天然に存在するゴム、ダイズレシチンのような天然に存在するリン脂質、ソルビタンモノオレエートのような、脂肪酸と無水ヘキシトールから得られるエステルもしくは部分エステル、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートのような、エチレンオキシドとこれらの部分エステルとの縮合生成物が包含される。乳剤はまた、シロップおよびエリキシル剤の製剤におけるように、甘味料および香料を含有することもできる。そのような製剤はまた、粘滑剤、防腐剤もしくは着色剤を含有することもできる。   Suitable emulsifiers include naturally occurring gums such as gum arabic and tragacanth, naturally occurring phospholipids such as soy lecithin, esters or partial esters derived from fatty acids and anhydrous hexitol, such as sorbitan monooleate. And condensation products of ethylene oxide with these partial esters, such as polyoxyethylene sorbitan monooleate. Emulsions can also contain sweetening and flavoring agents, as in syrup and elixir formulations. Such formulations can also contain a demulcent, a preservative, or a coloring agent.

単独でのもしくは他の適当な成分と組み合わせた選択の化合物は、吸入によって投与されるエアロゾル製剤（すなわち、それらは「噴霧する」ことができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などのような、加圧した許容しうる噴射剤に入れることができる。   Selected compounds, alone or in combination with other suitable ingredients, can be in aerosol formulations (ie, they can be “nebulized”) to be administered by inhalation. The aerosol formulation can be placed in a pressurized acceptable propellant such as dichlorodifluoromethane, propane, nitrogen and the like.

例えば、関節内（関節における）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内および皮下経路によるような非経口投与に適当な本発明の製剤には、酸化防止剤、バッファー、静菌薬、およ
び製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる水性および非水性の等張滅菌注入溶液、ならびに沈殿防止剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および防腐剤を含むことができる水性および非水性の滅菌懸濁剤を包含することができる。用いることができる許容しうる賦形剤および溶媒の中には、水およびリンガー溶液、等張塩化ナトリウムがある。さらに、滅菌不揮発性油を溶媒もしくは懸濁媒質として都合よく用いることができる。この目的のために、合成のモノもしくはジグリセリドを包含する任意の口当りのよい（ｂｌａｎｄ）不揮発性油を用いることができる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸を同様に注入物質の製造において用いることができる。これらの溶液は無菌であり、そして望ましくない物質を一般に含まない。 For example, formulations of the present invention suitable for parenteral administration, such as by intra-articular (in the joint), intravenous, intramuscular, intradermal, intraperitoneal and subcutaneous routes, include antioxidants, buffers, bacteriostatic agents, and Aqueous and non-aqueous isotonic sterile infusion solutions that can contain solutes that are isotonic with the blood of the recipient intended for the formulation, as well as suspending agents, solubilizers, thickeners, stabilizers and preservatives Aqueous and non-aqueous sterile suspensions can be included. Among the acceptable excipients and solvents that can be employed are water and Ringer's solution, isotonic sodium chloride. In addition, sterile, fixed oils can be conveniently employed as a solvent or suspending medium. For this purpose any bland fixed oil may be employed including synthetic mono- or diglycerides. In addition, fatty acids such as oleic acid can likewise be used in the manufacture of injectables. These solutions are sterile and generally free of undesirable matter.

化合物が十分に溶解性である場合、それらをプロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールのような適当な有機溶媒を使用してもしくは使用せずに生理食塩水に直接溶解することができる。微粉化した化合物の分散剤は、水性澱粉もしくはナトリウムカルボキシメチルセルロース溶液において、またはラッカセイ油のような適当な油において作り上げることができる。これらの製剤は、通常の周知の滅菌技術により滅菌することができる。製剤は、ｐＨ調整および緩衝剤、毒性調整剤、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどのような生理的条件に近づけるために必要に応じて製薬学的に許容しうる補助剤を含有することができる。   If the compounds are sufficiently soluble, they can be dissolved directly in physiological saline with or without the use of a suitable organic solvent such as propylene glycol or polyethylene glycol. Finely divided compound dispersants may be made up in aqueous starch or sodium carboxymethylcellulose solution, or in a suitable oil such as peanut oil. These preparations can be sterilized by ordinary well-known sterilization techniques. The formulation may be pharmaceutically acceptable as necessary to approach physiological conditions such as pH adjusters and buffers, toxicity modifiers such as sodium acetate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, sodium lactate, etc. An adjuvant can be contained.

これらの製剤におけるカルバメート化合物の濃度は幅広く異なることができ、そして選択される投与の特定の方法および患者の必要性に従って、主に液体容量、粘度、体重などに基づいて選択される。ＩＶ投与用に、製剤は滅菌した注入可能な水性もしくは油性懸濁剤のような滅菌した注入可能な製剤であることができる。この懸濁剤は、適当な分散剤もしくは湿潤剤および沈殿防止剤を用いて既知の技術に従って調合することができる。滅菌した注入可能な製剤はまた、１，３−ブタンジオールの溶液のような、無毒の非経口的に許容しうる希釈剤もしくは溶媒における滅菌した注入可能な液剤もしくは懸濁剤であることもできる。推奨の製剤は、アンプルおよびバイアルのような、単位用量もしくは複数回用量密封容器において与えることができる。注入液剤および懸濁剤は、以前に記述される種類の滅菌した散剤、顆粒剤および錠剤から製造することができる。   The concentration of the carbamate compound in these formulations can vary widely and is selected primarily based on fluid volume, viscosity, weight, etc., according to the particular method of administration selected and the needs of the patient. For IV administration, the formulation can be a sterile injectable formulation, such as a sterile injectable aqueous or oleaginous suspension. This suspension can be formulated according to the known art using those suitable dispersing or wetting agents and suspending agents. The sterile injectable preparation may also be a sterile injectable solution or suspension in a nontoxic parenterally acceptable diluent or solvent, such as a solution in 1,3-butanediol. . Recommended formulations can be given in unit-dose or multi-dose sealed containers such as ampoules and vials. Infusion solutions and suspensions can be prepared from sterile powders, granules, and tablets of the kind previously described.

本発明の実施における使用に適当なカルバメート化合物は、経口投与することができ、そして好ましくはそうされる。組成物における本発明の化合物の量は、組成物のタイプ、単位投薬量のサイズ、賦形剤の種類および当業者に周知である他の因子により幅広く異なることができる。一般に、最終組成物は、例えば、０．０００００１重量パーセント（％ｗ）〜１０％ｗのカルバメート化合物、好ましくは０．００００１％ｗ〜１％ｗを含んでなることができ、残りは賦形剤もしくは複数の賦形剤である。   Carbamate compounds suitable for use in the practice of the present invention can and are preferably administered orally. The amount of the compound of the invention in the composition can vary widely depending on the type of composition, the size of the unit dosage, the type of excipient and other factors well known to those skilled in the art. Generally, the final composition can comprise, for example, 0.000001 weight percent (% w) to 10% w carbamate compound, preferably 0.00001% w to 1% w, with the remainder being excipients Or a plurality of excipients.

経口投与用の製薬学的製剤は、経口投与に適当な投薬量において当該技術分野において周知である製薬学的に許容しうる担体を用いて調合することができる。そのような担体は、製薬学的製剤を患者による摂取に適当な錠剤、丸剤、散剤、糖衣錠、カプセル剤、液体、トローチ剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤などのような単位投与形態物において調合することを可能にする。   Pharmaceutical formulations for oral administration can be formulated using pharmaceutically acceptable carriers well known in the art at dosages suitable for oral administration. Such carriers include unit dosage forms such as tablets, pills, powders, dragees, capsules, liquids, troches, gels, syrups, slurries, suspensions, etc., suitable for consumption by the patient. Allows to formulate in the object.

経口投与に適当な製剤は、（ａ）水、食塩水もしくはＰＥＧ４００のような希釈剤に懸濁した有効量の製薬学的製剤のような液状溶液；（ｂ）液体、固体、顆粒もしくはゼラチンとして、有効成分の既定量を各々含有するカプセル剤、サシェ（ｓａｃｈｅｔ）もしくは錠剤；（ｃ）適切な液体における懸濁剤；および（ｄ）適当な乳剤からなることができる。   Formulations suitable for oral administration include: (a) a liquid solution such as an effective amount of a pharmaceutical formulation suspended in a diluent such as water, saline or PEG400; (b) as a liquid, solid, granule or gelatin Capsules, sachets or tablets each containing a predetermined amount of the active ingredient; (c) a suspension in a suitable liquid; and (d) a suitable emulsion.

経口使用のための製薬学的製剤は、固形賦形剤と本発明の化合物との組み合わせによっ
て得られ、場合により得られる混合物を粉砕し、そして所望に応じて、適当な追加の化合物を加えた後に、顆粒の混合物を処理して、錠剤もしくは糖衣錠コアを得ることができる。適当な固形賦形剤は、炭水化物もしくはタンパク質増量剤であり、そしてラクトース、ショ糖、マンニトールもしくはソルビトールを包含する糖；トウモロコシ、コムギ、コメ、ジャガイモもしくは他の植物からの澱粉；メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースもしくはナトリウムカルボキシメチルセルロースのようなセルロース；およびアラビアゴムおよびトラガカントゴムを包含するゴム；ならびにゼラチンおよびコラーゲンのようなタンパク質が包含されるがこれらに限定されるものではない。所望に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のような崩壊剤もしくは可溶化剤を加えることができる。錠剤形態は、ラクトース、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、コーンスターチ、ジャガイモ澱粉、微晶質セルロース、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ならびに他の賦形剤、着色剤、増量剤、結合剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤、香料、色素、崩壊剤および製薬学的に適合する担体の１つもしくはそれ以上を含むことができる。トローチ形態はフレーバー、例えばショ糖中の有効成分、ならびに有効成分に加えて、当該技術分野において既知である担体を含有するゼラチンおよびグリセリンもしくはショ糖およびアカシアエマルジョン（ａｃａｃｉａ ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、ゲルなどのような不活性ベースに有効成分を含んでなる芳香錠を含んでなることができる。 Pharmaceutical formulations for oral use are obtained by combination of solid excipients and compounds of the invention, optionally milling the resulting mixture and adding appropriate additional compounds as desired Later, the mixture of granules can be processed to obtain tablets or dragee cores. Suitable solid excipients are carbohydrates or protein extenders and sugars including lactose, sucrose, mannitol or sorbitol; starch from corn, wheat, rice, potato or other plants; methylcellulose, hydroxymethylcellulose, Cellulose such as hydroxypropylmethylcellulose or sodium carboxymethylcellulose; and gums including gum arabic and tragacanth; and proteins such as gelatin and collagen are included, but are not limited to these. If desired, disintegrating or solubilizing agents can be added, such as the cross-linked polyvinyl pyrrolidone, agar, alginic acid, or a salt thereof such as sodium alginate. Tablet forms include lactose, sucrose, mannitol, sorbitol, calcium phosphate, corn starch, potato starch, microcrystalline cellulose, gelatin, colloidal silicon dioxide, talc, magnesium stearate, stearic acid and other excipients, colorants, One or more of bulking agents, binders, diluents, buffers, wetting agents, preservatives, perfumes, dyes, disintegrants and pharmaceutically compatible carriers may be included. The lozenge forms are flavors such as gelatin and glycerin or sucrose and acacia emulsions, gels and the like containing active ingredients in sucrose and carriers known in the art in addition to the active ingredients An aromatic tablet comprising an active ingredient on an inert base can be included.

本発明の化合物はまた、薬剤の直腸投与用の座薬の形態において投与することもできる。これらの製剤は、常温で固体であるが直腸温度で液体でありそしてそのために直腸において融解して薬剤を放出する適当な非刺激賦形剤と薬剤を混合することにより製造することができる。そのような物質は、ココアバターおよびポリエチレングリコールである。   The compounds of the present invention can also be administered in the form of suppositories for rectal administration of the drug. These formulations can be prepared by mixing the drug with a suitable non-irritating excipient that is solid at ambient temperature but liquid at rectal temperature and therefore melts in the rectum to release the drug. Such materials are cocoa butter and polyethylene glycol.

本発明の化合物はまた、鼻腔内、眼球内、膣内、および座薬を包含する直腸内経路、吹送、散剤およびエアロゾル製剤により投与することもできる（ステロイド吸入剤の例については、Ｒｏｈａｔａｇｉ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５：１１８７−１１９３，１９９５；Ｔｊｗａ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７５：１０７−１１１，１９９５を参照）。   The compounds of the present invention can also be administered by intrarectal routes including nasal, intraocular, intravaginal, and suppositories, insufflation, powders and aerosol formulations (for examples of steroid inhalants, see Rohatagi, J. et al. Clin. Pharmacol.35: 1187-1193, 1995; Tjwa, Ann.Allergy Asthma Immunol.75: 107-111, 1995).

本発明の化合物は、アプリケータースティック、液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル、クリーム、軟膏、パスタ剤、ゼリー、塗布剤、散剤およびエアロゾルとして調合して、局所経路により経皮的に送達することができる。   The compounds of the invention can be formulated as applicator sticks, solutions, suspensions, emulsions, gels, creams, ointments, pasta, jelly, coatings, powders and aerosols and delivered transdermally via the topical route. it can.

カプセル封入材料もまた本発明の化合物とともに用いることができ、そして「組成物」という用語には、他の担体を有してもしくは有さずに、製剤としてカプセル封入材料と組み合わせた有効成分を含むことができる。例えば、本発明の化合物はまた、体内での持続放出用のミクロスフェアとして送達することもできる。１つの態様において、ミクロスフェアは、皮下でゆっくりと放出する薬剤（例えばミフェプリストン）含有ミクロスフェアの皮内注入によって（例えば、Ｒａｏ，Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄ．７：６２３−６４５，１９９５）：生物分解性のそして注入可能なゲル製剤として（例えば、Ｇａｏ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：８５７−８６３，１９９５を参照）；もしくは経口投与用のミクロスフェアとして（例えば、Ｅｙｌｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：６６９−６７４，１９９７を参照）投与することができる。経皮および皮内経路は両方とも、数週もしくは数ヶ月間一定送達を与える。カシェ剤もまた、本発明の化合物の送達において使用することができる。   Encapsulating materials can also be used with the compounds of the invention, and the term “composition” includes the active ingredient in combination with the encapsulating material as a formulation, with or without other carriers. be able to. For example, the compounds of the present invention can also be delivered as microspheres for sustained release in the body. In one embodiment, the microspheres are obtained by intradermal injection of microspheres containing a drug that slowly releases subcutaneously (eg, mifepristone) (eg, Rao, J. Biomaterial Sci. Polym. Ed. 7: 623-645, 1995): as a biodegradable and injectable gel formulation (see, eg, Gao, Pharm. Res. 12: 857-863, 1995); or as a microsphere for oral administration (eg, Eyles, J. Pharm). Pharmacol.49: 669-674, 1997). Both transdermal and intradermal routes provide constant delivery for weeks or months. Cachets can also be used in delivering the compounds of the present invention.

別の態様において、本発明の化合物は、細胞膜と融合するかもしくは取り込まれるリポソームの使用により、すなわち、エンドサイトーシスをもたらす細胞の表面膜タンパク質
受容体に結合するリポソームに結合したリガンドを用いることにより送達することができる。リポソームを用いることにより、特にリポソーム表面が標的細胞に特異的なリガンドを保有するか、もしくはそうでなければ特定の臓器に優先的に導かれる場合、カルバメート化合物の送達をインビボで標的細胞に焦点を合わせることができる。（例えば、Ａｌ−Ｍｕｈａｍｍｅｄ，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．１３：２９３−３０６，１９９６；Ｃｈｏｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：６９８−７０８，１９９５；Ｏｓｔｒｏ，Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６−１５８７，１９８９を参照）。 In another embodiment, the compounds of the present invention are produced by the use of liposomes that fuse or are taken up by the cell membrane, i.e., by using a ligand bound to the liposome that binds to the surface membrane protein receptor of the cell resulting in endocytosis. Can be delivered. By using liposomes, the delivery of carbamate compounds is focused on target cells in vivo, especially when the liposome surface carries a ligand specific for the target cell or is otherwise preferentially directed to a specific organ. Can be matched. (For example, Al-Muhammed, J. Microencapsul. 13: 293-306, 1996; Chon, Curr. Opin. Biotechnol. 6: 698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46: 1576-1587. , 1989).

本発明の製薬学的製剤は塩として提供することができ、そして塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などが包含されるがこれらに限定されるものではない多数の酸で形成することができる。塩は、対応する遊離塩基形態より水性もしくは他のプロトン性溶媒において溶解しやすい。別の場合において、好ましい製剤は、使用前にバッファーと合わせる、４．５〜５．５のｐＨ範囲で、例えば以下のもの：１ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン、０．１％〜２％のショ糖、２％〜７％のマンニトールのいずれかもしくは全てを含有することができる凍結乾燥粉末であることができる。   The pharmaceutical formulations of the present invention can be provided as salts and include a number of acids including, but not limited to, hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, and the like. Can be formed. Salts are more soluble in aqueous or other protic solvents than the corresponding free base form. In another case, a preferred formulation is in the pH range of 4.5 to 5.5, combined with the buffer prior to use, such as: 1 mM to 50 mM histidine, 0.1% to 2% sucrose, It can be a lyophilized powder that can contain any or all of 2% to 7% mannitol.

製薬学的に許容しうる塩およびエステルは、製薬学的に許容できそして所望の薬理学的特性を有する塩およびエステルをさす。そのような塩には、化合物に存在する酸性プロトンが無機もしくは有機塩基と反応することができる場合に形成することができる塩が包含される。適当な無機塩には、アルカリ金属、例えばナトリウムおよびカリウム、マグネシウム、カルシウムおよびアルミニウムで形成されるものが包含される。適当な有機塩には、アミン塩基、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎメチルグルカミンなどのような有機塩基で形成されるものが包含される。製薬学的に許容しうる塩にはまた、無機酸（例えば、塩酸および臭化水素酸）および有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、マレイン酸ならびにメタンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸のようなアルカンおよびアレーンスルホン酸）と親化合物におけるアミン部分との反応から形成される酸付加塩を包含することもできる。製薬学的に許容しうるエステルには、化合物に存在するカルボキシ、スルホニルオキシおよびホスホノキシ基から形成されるエステルが包含される。存在する２個の酸性基がある場合、製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルはモノ酸−モノ塩もしくはエステルまたはジ塩もしくはエステルであることができ；そして同様に存在する２個より多くの酸性基がある場合、そのような基のあるものもしくは全てを塩化するかもしくはエステル化することができる。   Pharmaceutically acceptable salts and esters refer to salts and esters that are pharmaceutically acceptable and have the desired pharmacological properties. Such salts include salts that can be formed when acidic protons present in the compound can react with inorganic or organic bases. Suitable inorganic salts include those formed with alkali metals such as sodium and potassium, magnesium, calcium and aluminum. Suitable organic salts include amine bases such as those formed with organic bases such as ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, tromethamine, N-methylglucamine and the like. Pharmaceutically acceptable salts also include inorganic acids (eg, hydrochloric acid and hydrobromic acid) and organic acids (eg, acetic acid, citric acid, maleic acid and alkanes such as methanesulfonic acid and benzenesulfonic acid) It may also include acid addition salts formed from the reaction of arenesulfonic acid) with the amine moiety in the parent compound. Pharmaceutically acceptable esters include esters formed from carboxy, sulfonyloxy and phosphonoxy groups present in the compound. Where there are two acidic groups present, the pharmaceutically acceptable salt or ester can be a mono-acid-mono salt or ester or a di-salt or ester; and more than two present as well If there are acidic groups, some or all of such groups can be salified or esterified.

本発明において命名される化合物は、非塩化もしくは非エステル化形態において、または塩化および／もしくはエステル化形態において存在することができ、そしてそのような化合物の命名には、元の（非塩化および非エステル化）化合物ならびにその製薬学的に許容しうる塩およびエステルの両方が包含されるものとする。本発明には、式１および式２の製薬学的に許容しうる塩およびエステル形態が包含される。式１もしくは式２の鏡像異性体の１つより多くの結晶形態が存在することができ、そしてそのようなものとして同様に本発明に包含される。   The compounds named in the present invention can exist in non-chlorinated or non-esterified forms, or in chlorinated and / or esterified forms, and the nomenclature of such compounds includes the original (non-chlorinated and non-esterified forms). Both esterified compounds and their pharmaceutically acceptable salts and esters are intended to be included. The present invention includes pharmaceutically acceptable salt and ester forms of Formula 1 and Formula 2. There can be more than one crystalline form of the enantiomer of Formula 1 or Formula 2, and as such are encompassed by the present invention.

本発明の製薬学的組成物は場合により、カルバメート化合物に加えて、神経保護を与えることと関連する疾患もしくは症状の処置において有用な少なくとも１つの他の治療薬を含有してもよい。   The pharmaceutical composition of the present invention may optionally contain, in addition to the carbamate compound, at least one other therapeutic agent useful in the treatment of a disease or condition associated with providing neuroprotection.

製薬学的組成物を調合する方法は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ．第２版、改訂および増補、Ｖｏｌｕｍｅｓ １−３、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ編集；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｉｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｖｏｌｕｍｅｓ １−２、Ａ
ｖｉｓ ｅｔ ａｌ編集；ならびにＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｖｏｌｕｍｅｓ １−２、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ編集；Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ出版（これらの開示は、それらの全部がそして全ての目的のために引用することにより本明細書に組みこまれる）のような多数の出版物に記載されている。 Methods for formulating pharmaceutical compositions are described in Pharmaceutical Dosage Forms: Tables . 2nd edition, revisions and augmentations, Volumes 1-3, edited by Lieberman et al; Pharmaceutical Dosage Forms : Parental Medicines. Volumes 1-2, A
vis et al editing; and Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems . Numerous publications such as Volumes 1-2, edited by Lieberman et al; published by Marcel Dekker, Inc. (the disclosures of which are incorporated herein by reference in their entirety and for all purposes) It is described in the thing.

製薬学的組成物は、無菌の、実質的に等張のようにそして米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規則を完全に順守して一般に調合される。   Pharmaceutical compositions are generally formulated as sterile, substantially isotonic and in full compliance with all Good Manufacturing Practice (GMP) regulations of the US Food and Drug Administration.

投与処方計画
本発明は、本発明のカルバメート化合物もしくは組成物を用いてヒト被験体もしくは患者を包含する哺乳類において神経保護を与える方法を提供する。神経保護を与えるために必要なカルバメート化合物の量は、治療的にもしくは製薬学的に有効な用量として定義される。この用途に有効な投与スケジュールおよび量、すなわち、投薬もしくは投与処方計画は、病期、患者の身体状態、年齢などを包含する様々な因子により決まる。患者の投与処方計画を計算することにおいて、投与の方法もまた考慮に入れられる。この目的を達成するために、本発明の化合物もしくは組成物は、下記のように、正確な治療的に有効な量もしくは用量において用いられなければならない。 Dosage regimen The present invention provides a method of providing neuroprotection in a mammal, including a human subject or patient, using a carbamate compound or composition of the present invention. The amount of carbamate compound required to confer neuroprotection is defined as a therapeutically or pharmaceutically effective dose. The effective dosing schedule and amount for this application, i.e., dosing or dosing regimen, will depend on various factors including stage, patient physical condition, age and the like. In calculating the patient's dosage regimen, the method of administration is also taken into account. In order to accomplish this goal, the compounds or compositions of the invention must be used in the exact therapeutically effective amount or dose as described below.

この用途に有効な投与スケジュールおよび量、すなわち、投薬もしくは投与処方計画は、疾患もしくは損傷の正確な性質、患者の身体状態、体重、年齢などを包含する様々な因子により決まる。患者の投与処方計画を計算することにおいて、投与の方法もまた考慮に入れられる。   The effective dosing schedule and amount for this application, ie the dosing or dosing regimen, will depend on various factors including the exact nature of the disease or injury, the patient's physical condition, weight, age, etc. In calculating the patient's dosage regimen, the method of administration is also taken into account.

以下の実施例１および２におけるリチウム−ピロカルピンラットモデルならびに実施例４における一過性脳虚血中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットモデルと同様である重度のそして急性の臨床状況のヒトにおいて神経保護効果をもたらすことに有効であると予想される用量の範囲は、ラットおよびヒトにおける既知の有効用量および血液レベルを比較することにより決定される。   Neuroprotective effects in humans in severe and acute clinical situations similar to the lithium-pilocarpine rat model in Examples 1 and 2 below and the transient cerebral ischemia middle cerebral artery occlusion (MCAO) rat model in Example 4 The range of doses that are expected to be effective in bringing about is determined by comparing known effective doses and blood levels in rats and humans.

薬物動態学
ヒトにおいて、試験化合物（ＴＣ）と本明細書において呼ばれる本発明の化合物の１つ、すなわち式７の薬物動態学は、成人健常者における単回および反復経口投与後に直線状であることが既知である（実施例５を参照）。 Pharmacokinetics In humans, one of the compounds of the present invention, referred to herein as test compound (TC), ie the pharmacokinetics of formula 7, should be linear after single and repeated oral administration in healthy adults Is known (see Example 5).

ヒトにおける血液レベル
ヒトでの毒物学的研究において、７日間の様々な用量での試験化合物（ＴＣ）の経口投与は以下のＣｍａｘおよびＡＵＣ（０〜２４）をもたらした：
１）１００ｍｇ．ｂ．ｉ．ｄ．（２４時間で２００ｍｇもしくは７０ｋｇのヒトにおいて２．８５ｍｇ／ｋｇ／日）で、Ｃｍａｘは３．６マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは４２．２マイクログラム−時間／ｍＬであり；
２）２５０ｍｇ．ｂ．ｉ．ｄ．（２４時間で５００ｍｇもしくは７０ｋｇのヒトにおいて７．１４ｍｇ／ｋｇ／日）で、Ｃｍａｘは８．２マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは１０２．３マイクログラム−時間／ｍＬであり；
３）５００ｍｇ．ｂ．ｉ．ｄ．（２４時間で１０００ｍｇもしくは７０ｋｇのヒトにおいて１４．２８ｍｇ／ｋｇ／日）で、Ｃｍａｘは１７．２マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは２０４．１マイクログラム−時間／ｍＬであり；
４）７５０ｍｇ．ｂ．ｉ．ｄ．（２４時間で１５００ｍｇもしくは７０ｋｇのヒトにおいて２１．４ｍｇ／ｋｇ／日）で、Ｃｍａｘは２８．２マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは３２２．７マイクログラム−時間／ｍＬであった。 Blood levels in humans In human toxicology studies, oral administration of test compound (TC) at various doses for 7 days resulted in the following Cmax and AUC (0-24):
1) 100 mg. b. i. d. (200 mg at 24 hours or 2.85 mg / kg / day in a 70 kg human), Cmax is 3.6 micrograms / mL, and AUC is 42.2 micrograms-hour / mL;
2) 250 mg. b. i. d. (7. 14 mg / kg / day in 500 mg or 70 kg human in 24 hours), Cmax is 8.2 micrograms / mL, and AUC is 102.3 micrograms-hour / mL;
3) 500 mg. b. i. d. (14.28 mg / kg / day in 1000 mg or 70 kg human in 24 hours), Cmax is 17.2 microgram / mL, and AUC is 204.1 microgram-hour / mL;
4) 750 mg. b. i. d. (21.4 mg / kg / day in 1500 mg or 70 kg human in 24 hours), Cmax was 28.2 micrograms / mL and AUC was 322.7 micrograms-hour / mL.

ラットにおける血液レベル；
ラットでの毒物学的研究において、８日間の試験化合物（ＴＣ）の経口投与は以下のＣｍａｘおよびＡＵＣをもたらした：
１）３０ｍｇ／ｋｇ／日で、Ｃｍａｘは９．３３マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは９７．３２マイクログラム−時間／ｍＬであり；
２）１００ｍｇ／ｋｇ／日で、Ｃｍａｘは２０．６３マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは２３０．３３マイクログラム−時間／ｍＬであり；
３）３００ｍｇ／ｋｇ／日で、Ｃｍａｘは７０．３４マイクログラム／ｍＬであり、そしてＡＵＣは５２５．９５マイクログラム−時間／ｍＬであった。 Blood levels in rats ;
In a toxicological study in rats, 8-day oral administration of test compound (TC) resulted in the following Cmax and AUC:
1) At 30 mg / kg / day, Cmax is 9.33 microgram / mL and AUC is 97.32 microgram-hour / mL;
2) At 100 mg / kg / day, Cmax is 20.63 microgram / mL and AUC is 230.33 microgram-hour / mL;
3) At 300 mg / kg / day, the Cmax was 70.34 microgram / mL and the AUC was 525.95 microgram-hour / mL.

実施例２で抗癲癇発生および神経保護効果についてラットにおいて試験した用量は、３０ｍｇ／ｋｇ／日〜１２０ｍｇ／ｋｇ／日の間であった。この実施例において試験した最も低い用量、すなわち、３０ｍｇ／ｋｇはいくらかの測定可能な保護効果をもたらし、一方、実施例１において試験した最も低い用量は１０ｍｇ／ｋｇ／日であり、そして最小の保護効果をもたらした（以下の実施例１および２を参照）。しかしながら、実施例４の一過性脳虚血中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットモデルにおいて、ラットにおける１０ｍｇ／ｋｇの用量は梗塞サイズの中程度のしかし有意な減少を示した。   The dose tested in rats for antidepressant development and neuroprotective effect in Example 2 was between 30 mg / kg / day and 120 mg / kg / day. The lowest dose tested in this example, ie 30 mg / kg, provided some measurable protective effect, while the lowest dose tested in Example 1 was 10 mg / kg / day and the least protection Effected (see Examples 1 and 2 below). However, in the transient cerebral ischemic middle cerebral artery occlusion (MCAO) rat model of Example 4, the 10 mg / kg dose in rats showed a moderate but significant reduction in infarct size.

ラットにおいて、試験化合物（ＴＣ）の３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量は、９．３３マイクログラム／ｍＬのＣｍａｘおよび９７．３２マイクログラム−時間／ｍＬのＡＵＣの血液レベルをもたらすと予想される。ヒトにおいて、これらの血液レベルは、約５００ｍｇ／日〜約６００ｍｇ／日もしくは７０ｋｇのヒトにおける約７．１〜約８．６ｍｇ／ｋｇ／日の用量から予想される。   In rats, a 30 mg / kg / day dose of test compound (TC) is expected to result in a blood level of 9.33 microgram / mL Cmax and 97.32 microgram-hour / mL AUC. In humans, these blood levels are expected from a dose of about 7.1 to about 8.6 mg / kg / day in a human of about 500 mg / day to about 600 mg / day or 70 kg.

しかしながら、実施例１および２において、使用した急性のそして非常に重度の動物モデルおよび立証される神経保護抗癲癇発生効果をもたらす必要性のために比較的高い用量および血液レベルが必要とされた。また、この重度の急性動物モデルにおいて、化合物は外傷性事象もしくは損傷が起こった、すなわち、Ｌｉ−ピロカルピンの投与による癲癇重積持続状態の誘導の後に与えられた。実施例４における一過性脳虚血中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットモデルにおいて、化合物は同様に中大脳動脈の閉塞後１時間で投与された。このタイプの損傷後モデルは、重度のＣＮＳ損傷がすでに起きた後まで投薬治療を開始しないようなヒト患者における同様に急性のそして重度の臨床状況に相関すると思われる。そのような状況において、神経保護および抗癲癇発生効果に必要とされる投薬量は、より低い急性もしくは重度の状況においてまたは慢性化した状況そして特に薬剤が予防的に用いられる場合に必要とされると思われるものより高いと予想される。   However, in Examples 1 and 2, relatively high doses and blood levels were required due to the acute and very severe animal model used and the need to provide a demonstrated neuroprotective anti-epileptic effect. In this severe acute animal model, the compound was also given after a traumatic event or injury, i.e., after induction of an intussusception by administration of Li-pilocarpine. In the transient cerebral ischemic middle cerebral artery occlusion (MCAO) rat model in Example 4, the compound was also administered 1 hour after occlusion of the middle cerebral artery. This type of post-injury model appears to correlate with similarly acute and severe clinical situations in human patients who do not begin medication until after severe CNS injury has already occurred. In such situations, the dosage required for neuroprotective and anti-epileptic effects is needed in lower acute or severe situations or in chronic situations and especially when the drug is used prophylactically Expected to be higher than expected.

一次予防もしくは処置前パラダイムにおいて薬剤が予防的に用いられる状況で、臨床的に重要な神経保護効果をもたらすために必要とされる必要な用量および血液レベルは、実施例４において用いられる１０ｍｇ／ｋｇの用量のヒト同等物よりいくらか低く、そして実施例２において有効と見出される３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量より有意に低いと予想される。そのようなものとして、大部分の場合で、ヒトでの臨床実践において治療的に有効であると予想される用量は、これらの重度の動物モデルにおいて同定されるものより少ない。ラットにおいて発作を防ぐための試験化合物のＥＤ５０は約４ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇであり（時間および実験タイプによる）、従って、神経保護ラットモデルにおける１０ｍｇ／ｋｇの最小有効用量は予想外ではない。このデータに基づいて、予想される有効神経保護ヒト用量は、ヒトにおいて抗痙攣効能に必要とされる最小用量と同様である。任意の傷害もしくは病的過程が開始されるよりも十分前に投与が行われる一次予防パラダイムにおいて、ヒトにおける有効用量および血液レベルは、実施例４における一過性脳虚血中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットモデルにおいて最小限有効であると見出される１０
ｍｇ／ｋｇのヒト同等物よりいくらか低いと予想される。 In situations where drugs are used prophylactically in a primary prevention or pre-treatment paradigm, the required dose and blood levels required to produce clinically significant neuroprotective effects are 10 mg / kg used in Example 4. It is expected to be somewhat lower than the human equivalent of 1 mg and significantly lower than the 30 mg / kg / day dose found to be effective in Example 2. As such, in most cases, the dose expected to be therapeutically effective in clinical practice in humans is less than that identified in these severe animal models. Test compounds to prevent seizures in rats have an ED50 of about 4 mg / kg to about 30 mg / kg (depending on time and experimental type), and therefore a minimum effective dose of 10 mg / kg in a neuroprotective rat model is not unexpected . Based on this data, the expected effective neuroprotective human dose is similar to the minimum dose required for anticonvulsant efficacy in humans. In a primary prevention paradigm where administration takes place well before any injury or pathological process is initiated, the effective dose and blood level in humans is the transient cerebral ischemic middle cerebral artery occlusion (MCAO in Example 4). 10) found to be minimally effective in the rat model
It is expected to be somewhat lower than the mg / kg human equivalent.

ヒト患者において、ヒト神経系への任意の傷害もしくは損傷の前に投薬治療が始まる一次予防パラダイムにおいて、神経保護有効用量の下限は約１００ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日もしくは７０ｋｇのヒトにおいて約１．４３ｍｇ／ｋｇ／日〜約２．８５ｍｇ／ｋｇ／日であり、約３．６マイクログラム／ｍＬの予想Ｃｍａｘ（２００ｍｇ／日で）および約４２．２マイクログラム−時間／ｍＬのＡＵＣをもたらすと予想される。   In a primary prevention paradigm where medication therapy begins in a human patient prior to any injury or damage to the human nervous system, the lower limit of the neuroprotective effective dose is from about 100 mg / day to about 200 mg / day or about 1. 43 mg / kg / day to about 2.85 mg / kg / day, resulting in an expected Cmax of about 3.6 microgram / mL (at 200 mg / day) and an AUC of about 42.2 microgram-hour / mL is expected.

損傷が持続した後に投薬治療が開始される状況において、用量範囲はいくらか高い、例えば、約２００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日もしくは７０ｋｇのヒトにおいて約２．８５〜約５．７１ｍｇ／ｋｇ／日であると予想される。   In situations where medication is initiated after injury has persisted, the dose range is somewhat higher, for example from about 2.85 to about 5.71 mg / kg / day in about 200 mg / day to about 400 mg / day or 70 kg human. Expected to be.

本発明の化合物および組成物は、それらの臨床的に有効な用量範囲に理論的上限を有さない。従って、治療的に有効な範囲の上限は、患者により耐容され得る最大量により決定される。しかしながら、非常に著しい神経保護および抗癲癇発生効果を示した、ラットにおいて試験した最も高い用量、すなわち１２０ｍｇ／ｋｇは、上記のデータに基づいて、１日２回７５０ｍｇの用量（１５００ｍｇ／日もしくは約２１．４ｍｇ／ｋｇ／日）でヒトにおいてもたらされるものと同様のもしくはそれより低いＣｍａｘおよびＡＵＣを有すると予想される。１日２回７５０ｍｇの用量（１５００ｍｇの総１日用量）はヒトにおいて使用され、そして容易に耐容されることが見出されている。これに基づいて、最大耐容用量は多数の患者についてこれよりかなり高いと予想される。おそらく２５００ｍｇ／日〜３０００ｍｇ／日もしくは７０ｋｇのヒトにおいて約３５．７ｍｇ／ｋｇ／日〜約４２．９ｍｇ／ｋｇ／日。   The compounds and compositions of the present invention do not have a theoretical upper limit in their clinically effective dose range. Therefore, the upper limit of the therapeutically effective range is determined by the maximum amount that can be tolerated by the patient. However, the highest dose tested in rats that showed very significant neuroprotective and anti-epileptic effects, i.e., 120 mg / kg, was based on the above data, a dose of 750 mg twice a day (1500 mg / day or about 21.4 mg / kg / day) is expected to have Cmax and AUC similar to or lower than those provided in humans. A twice daily dose of 750 mg (1500 mg total daily dose) is used in humans and has been found to be easily tolerated. Based on this, the maximum tolerated dose is expected to be significantly higher for many patients. Probably 2500 mg / day to 3000 mg / day or about 35.7 mg / kg / day to about 42.9 mg / kg / day in a 70 kg human.

従って、ヒト被験体もしくは患者に神経保護を与える目的のために、本発明の製薬学的化合物および組成物は約１．４ｍｇ／ｋｇ／日〜約４３．０ｍｇ／ｋｇ／日（７０ｋｇのヒトにおいて１００ｍｇ／日〜３０００ｍｇ／日）、好ましくは約２．９ｍｇ／ｋｇ／日〜約３５．７ｍｇ／ｋｇ／日（７０ｋｇのヒトにおいて２００ｍｇ／日〜２５００ｍｇ／日）、より好ましくは約３．６ｍｇ／ｋｇ／日〜約２８．６ｍｇ／ｋｇ／日（７０ｋｇのヒトにおいて２５０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日）もしくはさらにより好ましくは約４．３ｍｇ／ｋｇ／日〜約２１．４ｍｇ／ｋｇ／日（７０ｋｇのヒトにおいて３００ｍｇ／日〜１５００ｍｇ／日）もしくは最も好ましくは約５．０ｍｇ／ｋｇ／日〜約１７．１ｍｇ／ｋｇ／日（７０ｋｇのヒトにおいて３５０ｍｇ／日〜１２００ｍｇ／日）の投薬量で投与することができる。しかしながら、これらの投薬量は被験体の個々の特性および耐容性にそして処置している症状の正確な性質により異なり得る。   Thus, for the purpose of providing neuroprotection to a human subject or patient, the pharmaceutical compounds and compositions of the present invention are about 1.4 mg / kg / day to about 43.0 mg / kg / day (in a 70 kg human). 100 mg / day to 3000 mg / day), preferably about 2.9 mg / kg / day to about 35.7 mg / kg / day (200 mg / day to 2500 mg / day in a 70 kg human), more preferably about 3.6 mg / day. kg / day to about 28.6 mg / kg / day (250 mg / day to 2000 mg / day in a 70 kg human) or even more preferably from about 4.3 mg / kg / day to about 21.4 mg / kg / day (70 kg 300 mg / day to 1500 mg / day in humans or most preferably from about 5.0 mg / kg / day to about 17.1 mg / kg / day (70 kg human) There may be administered at a dosage of 350 mg / day ～1200Mg / day) with. However, these dosages can vary depending on the individual characteristics and tolerability of the subject and the exact nature of the condition being treated.

この開示に基づき、当業者は、その技量を考慮して、必要以上の実験なしに、
癲癇を処置するためのおよび臨床的に有意な神経保護効果をもたらすための本発明の特定の置換されたカルバメート化合物の治療的に有効な用量もしくは量を決定することができる。（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（Ｖｏｌｓ．１−３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，１９９９，Ｔｈｅ ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ；およびＰｉｃｋａｒ，１９９９，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓを参照）。 Based on this disclosure, those skilled in the art will be able to consider the skill without undue experimentation,
A therapeutically effective dose or amount of a particular substituted carbamate compound of the present invention for treating epilepsy and for providing a clinically significant neuroprotective effect can be determined. (See, e.g., Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (Vols. 1-3, 1992); Lloyd, 1999, Theart, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding; and Pickar, 1999, Puls.

治療的に有効な用量はまた、治療的に有益な効果が臨床的な意味において有効成分の任意の有毒なもしくは有害な副作用を上回るものでもある。各特定の被験体について、特定の投与処方計画は、個々の必要性および化合物を投与するかもしくはその投与を指導する人物の専門的判断に従って経時的に評価されそして調整されるべきであることにもさらに注意すべきである。本発明の組成物は低いもしくは中程度の用量で開始され、そして次に
ある期間にわたって十分に治療的に有効な用量および血液レベルまで増加され得ることもまた予想される。 A therapeutically effective dose is also one in which the therapeutically beneficial effect outweighs any toxic or harmful side effects of the active ingredient in the clinical sense. For each particular subject, the particular dosing regimen should be evaluated and adjusted over time according to individual needs and the professional judgment of the person administering or instructing the administration of the compound. Should be more careful. It is also anticipated that the compositions of the present invention can be initiated at low or moderate doses and then increased to a sufficiently therapeutically effective dose and blood level over a period of time.

処置目的のために、本明細書に開示される組成物もしくは化合物は、単一のボーラス送達において、長期間にわたって連続送達によって、もしくは反復投与プロトコルにおいて（例えば１時間ごとの、毎日のもしくは毎週の、反復投与プロトコルにより）被験体に投与することができる。本発明の製薬学的製剤は、例えば、毎日１、２もしくはそれ以上の回数、週に３回、もしくは毎週投与することができる。本発明の１つの態様において、本発明の製薬学的製剤は毎日１回もしくは２回経口投与される。   For treatment purposes, the compositions or compounds disclosed herein may be administered in a single bolus delivery, by continuous delivery over a long period of time, or in a repeated dose protocol (eg, hourly, daily or weekly). , By repeated dose protocols). The pharmaceutical formulations of the invention can be administered, for example, 1, 2 or more times daily, 3 times a week, or weekly. In one embodiment of the invention, the pharmaceutical formulation of the invention is orally administered once or twice daily.

ある態様において、本発明の化合物での処置処方計画は、例えば、被験体が脳に損傷を与える傷害もしくは発作のような他の初期傷害を患った後に、開始することができる。さらに別の態様において、本発明の化合物での処置処方計画は、神経系への任意の損傷もしくは傷害が起こる前にしかし同時にそのような損傷もしくは傷害が起こると予想できるかもしくは思われる場合に開始することができる。例えば、そのような処置処方計画は、被験体が神経外科的処置を受けるかまたは他の形態の頭部もしくは脳外傷を患う可能性が高い、例えば、戦闘、激しいスポーツもしくは競争、再発性発作、ＴＩＡなどの前に開始することができる。   In certain embodiments, a treatment regimen with a compound of the invention can be initiated after the subject has suffered from other initial injury, such as, for example, an injury or stroke that damages the brain. In yet another embodiment, a regimen of treatment with a compound of the present invention begins before any damage or injury to the nervous system occurs, but at the same time such damage or injury can be expected or expected can do. For example, such a treatment regimen is likely to result in a subject undergoing neurosurgical treatment or having other forms of head or brain trauma, such as combat, intense sports or competition, recurrent seizures, Can be started before TIA etc.

ある態様において、本発明のカルバメート化合物は、脳に損傷を与える傷害もしくは初期傷害の発生後に設定期間（週、月、年）にわたって毎日投与することができる。主治医は、カルバメート化合物が治療的に有効なレベルに到達していることを決定する方法（例えば、患者の臨床試験、または血液もしくは脳脊髄液における薬剤レベルを測定することによる）を知っている。当業者は、不明瞭な発語、昏睡もしくは協調運動障害のような副作用の存在および重症度を決定するために身体検査を用いて最大耐容用量を決定することができる。   In certain embodiments, the carbamate compounds of the invention can be administered daily for a set period of time (weeks, months, years) following the occurrence of brain damage or initial injury. The attending physician knows how to determine that the carbamate compound has reached a therapeutically effective level (eg, by patient clinical trials or by measuring drug levels in blood or cerebrospinal fluid). One skilled in the art can determine the maximum tolerated dose using physical examination to determine the presence and severity of side effects such as ambiguous speech, coma or impaired coordination.

これに関連して、生物学的に活性の薬剤（１つもしくは複数）の治療的に有効な投薬量には、神経保護効果を与えるために臨床的に有意な結果をもたらす長期の処置処方計画内の反復用量を包含することができる。これに関連する有効投薬量の決定は、典型的に、ヒト臨床試験により追跡される動物モデル研究に基づき、そして被験体における標的とする暴露症候もしくは症状の発生もしくは重症度を有意に減らす有効投薬量および投与プロトコルを決定することにより導かれる。これに関連する適当なモデルには、例えば、マウス、ラット、ブタ、ネコ、非ヒト霊長類、および当該技術分野において既知である他の一般に認められている動物モデル被験体が包含される。   In this regard, therapeutically effective dosages of the biologically active agent (s) provide a long-term treatment regimen that provides clinically significant results to provide a neuroprotective effect. Of which repeated doses can be included. The determination of effective dosage in this context is typically based on animal model studies followed by human clinical trials and effective dosages that significantly reduce the occurrence or severity of targeted exposure symptoms or symptoms in a subject. Guided by determining amount and administration protocol. Suitable models in this regard include, for example, mice, rats, pigs, cats, non-human primates, and other generally accepted animal model subjects known in the art.

あるいはまた、有効投薬量はインビトロモデル（例えば、免疫学的および組織病理学的アッセイ）を用いて決定することができる。そのようなモデルを用いて、通常の計算および調整のみを典型的に必要として生物学的に活性の薬剤（１つもしくは複数）の治療的に有効な量（例えば、所望の応答を引き出すために鼻腔内で有効な、経皮的に有効な、静脈内で有効なもしくは筋肉内で有効な量）を投与するために適切な濃度および用量を決定する。   Alternatively, effective dosages can be determined using in vitro models (eg, immunological and histopathological assays). With such a model, a therapeutically effective amount (eg, to elicit the desired response) of the biologically active agent (s) typically requiring only routine calculations and adjustments Determine the appropriate concentration and dose to administer nasally effective, transdermally effective, intravenously effective or intramuscularly effective amount).

本発明の典型的な態様において、化合物の単位投与形態物は標準的な投与処方計画用に製造される。このようにして、組成物は医師の指示でより小さい用量に容易にさらに分割することができる。例えば、単位投薬量は、パック入り粉末、バイアルもしくはアンプルにおいて、そして好ましくはカプセル剤もしくは錠剤形態において作り上げることができる。   In an exemplary embodiment of the invention, the unit dosage form of the compound is manufactured for a standard dosage regimen. In this way, the composition can be easily subdivided into smaller doses as directed by the physician. For example, unit dosages can be made up in packed powders, vials or ampoules, and preferably in capsule or tablet form.

組成物のこれらの単位投与形態物に存在する活性化合物は、患者の特定の必要性に従っ
て、単回もしくは複数回毎日投与について、例えば約２５ｍｇ〜約８００ｍｇの量において、または好ましくは本発明の活性カルバメート化合物の１つもしくはそれ以上の約５０、１００、２００、２５０、４００、４５０、５００および６００ｍｇの単位投与量において存在することができる。 The active compound present in these unit dosage forms of the composition may be administered in an amount of, for example, from about 25 mg to about 800 mg, or preferably the activity of the invention for single or multiple daily administration, according to the patient's specific needs One or more of the carbamate compounds can be present in unit dosages of about 50, 100, 200, 250, 400, 450, 500 and 600 mg.

本発明の方法はまた、神経保護を与えることにおける使用のためのキットも提供する。治療利益のある１つもしくはそれ以上の他の化合物を場合により添加して、本発明の１つもしくはそれ以上のカルバメート化合物を含んでなる製薬学的組成物を適当な担体において調合した後に、それを適切な容器に入れ、そして神経保護を与えることについてラベルを付けることができる。さらに、神経保護、癲癇発生、癲癇またはニューロン損傷と関連する別の障害もしくは症状の処置を与えることにおいて有用な少なくとも１つの他の治療薬を含んでなる別の薬剤を同様に容器に入れ、そして示される疾患の処置についてラベルを付けることができる。そのようなラベリングには、例えば、各薬剤の投与の量、頻度および方法に関する説明書を包含することができる。   The methods of the invention also provide kits for use in providing neuroprotection. After formulating a pharmaceutical composition comprising one or more carbamate compounds of the invention in a suitable carrier, optionally with one or more other compounds having therapeutic benefit, Can be placed in a suitable container and labeled for providing neuroprotection. In addition, another container comprising at least one other therapeutic agent useful in providing neuroprotection, sputum development, treatment of sputum or another disorder or condition associated with neuronal damage is also placed in the container, and Labels can be provided for treatment of the indicated diseases. Such labeling can include, for example, instructions regarding the amount, frequency and method of administration of each drug.

前述の発明は理解の明瞭さの目的のために例として詳細に記述されているが、ある種の変更および改変が開示により包含され、そして限定ではなく説明のために提示される、添付の請求項の範囲内で必要以上の実験なしに実施できることは、当業者に明らかである。以下の実施例は、本発明の特定の態様を説明するために提供され、そして限定ではないものとする。
［実施例］ Although the foregoing invention has been described in detail by way of example for purposes of clarity of understanding, certain changes and modifications are encompassed by the disclosure and presented for purposes of illustration and not limitation. It will be apparent to those skilled in the art that the present invention can be performed without undue experimentation within the scope of the term. The following examples are provided to illustrate certain embodiments of the invention and are not intended to be limiting.
[Example]

実験実施例
神経保護を与えることにおける使用のための式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物の活性を以下の実験実施例において評価した。「試験化合物（Ｔｅｓｔ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」もしくは「ＴＣ」もしくは「試験化合物（ｔｅｓｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」と本明細書において呼ばれる、式１の単離されたＳ−鏡像異性体（例えば、上記に示される式７）の活性を、実施例１および２のラットにおけるリチウムおよびピロカルピンにより誘導される側頭葉癲癇のモデルにおいてそして神経保護効果の予測に有用な他の動物モデルにおいて神経保護についてのそして癲癇発生の処置における化合物の効能を決定するために以下の実験において評価した。これらの実施例は、本発明の様々な態様を説明する手段であるものとし、しかし決して本発明を限定するものではない。 Experimental Examples The activity of compounds of formula (I) and formula (II) for use in providing neuroprotection was evaluated in the following experimental examples. An isolated S-enantiomer of formula 1, referred to herein as “Test Compound” or “TC” or “test compound” (eg, Formula 7 shown above) Activity in the rats of Examples 1 and 2 in the model of temporal lobe epilepsy induced by lithium and pilocarpine and in other animal models useful for predicting neuroprotective effects and in the treatment of epilepsy The following experiments were evaluated to determine the efficacy of the compounds. These examples are meant to illustrate various aspects of the present invention, but are not intended to limit the invention in any way.

側頭葉癲癇のリチウム−ピロカルピンモデル
リチウムと関連する（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ）ピロカルピン（Ｌｉ−Ｐｉｌｏ）によりラットにおいて誘導されるモデルは、ヒト側頭葉癲癇の臨床的および神経生理学的特徴の大部分を再現する（Ｔｕｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｙｎａｐｓｅ
３：１５４−１７１；Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ，１９９５，Ｉｔａｌ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ
Ｓｃｉ １６：３３−３７）。成体ラットにおいて、ピロカルピンの全身投与は癲癇重積持続状態（ＳＥ）をもたらす。致死率は、１日目の間に３０〜５０％に達する。生存する動物において、ニューロン損傷は海馬体、梨状および内嗅皮質、視床、扁桃体、新皮質ならびに黒質内で際立っている。この急性発作期間の後に１４〜２５日の平均期間にわたって続く「サイレント」無発作期が続き、その後に全ての動物は週に２〜５回の通常の頻度で自発性再発性痙攣発作を示す（Ｔｕｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｙｎａｐｓｅ ３：１５４−１７１；Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ，１９９５，Ｉｔａｌ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ １６：３３−３７；Ｄｕｂｅ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １６７：２２７−２４１）。 Lipo-Pilocarpine Model of Temporal Lobe The model induced in rats by lithium-associated pilocarpine (Li-Pilo) reproduces most of the clinical and neurophysiological features of human temporal lobe (Turski et al., 1989, Synapse
3: 154-171; Cavalheiro, 1995, Ital J Neurol
Sci 16: 33-37). In adult rats, systemic administration of pilocarpine results in a status epilepticus (SE). The fatality rate reaches 30-50% during the first day. In surviving animals, neuronal damage is prominent in the hippocampus, piriform and entorhinal cortex, thalamus, amygdala, neocortex and substantia nigra. This acute seizure period is followed by a “silent” seizure period that lasts for an average period of 14-25 days, after which all animals show spontaneous recurrent seizures with a normal frequency of 2-5 times per week ( Turski et al., 1989, Synapse 3: 154-171; Cavalheiro, 1995, Ital J Neuro Sci 16: 33-37; Dube et al., 2001, Exp Neurol 167: 227-241).

リチウム−ピロカルピンおよび試験化合物での処置
Ｊａｎｖｉｅｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｌｅ Ｇｅｎｅｓｔ−Ｓｔ−Ｉｓｔｅ，Ｆｒａｎｃｅ）により提供される、２２５〜２５０ｇの重さのオスウィスターラットを制御された標準条件下（明暗サイクル、７．００ａ．ｍ．〜７．００ｐ．ｍ．明かりをつける）で飼育し、餌および水は任意に入手可能であった。全ての動物実験は、１９８６年１１月２４日の欧州共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）およびフランス農務省（ライセンスＮ°６７−９７）の規則に従って行った。電極埋め込みのために、２．５ｍｇ／ｋｇのジアゼパム（ＤＺＰ，Ｖａｌｉｕｍ，Ｒｏｃｈｅ，Ｆｒａｎｃｅ）および１ｍｇ／ｋｇのケタミンクロルハイドレート（Ｉｍａｌｇｅｎｅ １０００，Ｒｈｏｎｅ Ｍｅｒｒｉｅｕｘ，Ｆｒａｎｃｅ）のｉ．ｐ．注入によりラットを麻酔した。４つの単一接点記録電極をそれぞれの側に２個、頭頂葉皮質上、頭蓋骨上に置いた。 Treatment with Lithium-Pilocarpine and Test Compound Provided by Janvier Breeding Center (Le Genest-St-Iste, France), male Wistar rats weighing 225-250 g under controlled standard conditions (light-dark cycle, 7. 00a.m. to 7.00pm., With lights on), food and water were optionally available. All animal experiments were performed in accordance with the rules of the European Community Council Directive (86/609 / EEC) of November 24, 1986 and the French Ministry of Agriculture (License N ° 67-97). For electrode implantation, i.e. 2.5 mg / kg diazepam (DZP, Valium, Roche, France) and 1 mg / kg ketamine chlorhydrate (Imalgene 1000, Rhone Merrieux, France). p. Rats were anesthetized by injection. Four single contact recording electrodes, two on each side, were placed on the parietal cortex and on the skull.

癲癇重積持続状態誘導：
試験化合物での処置および自発性再発性発作（ＳＲＳ）の発生
全てのラットに塩化リチウム（３ｍｅｑ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を与え；約２０ｈ後に、ベースライン皮質ＥＥＧを記録するために、動物をプレキシグラスボックスに入れた。痙攣誘発薬の末梢効果を限定するために臭化メチルスコポラミン（１ｍｇ／ｋｇ，ｓ．ｃ．，Ｓｉｇｍａ）を投与した。メチルスコポラミンの３０分後にピロカルピン塩酸塩（２５ｍｇ／ｋｇ，ｓ．ｃ．，Ｓｉｇｍａ）を注入することによりＳＥを誘導した。両側のＥＥＧ皮質活性をＳＥの全期間中に記録し、そして行動変化を書き留めた。 癲癇 Intussusception induction:
Treatment with test compound and development of spontaneous recurrent seizures (SRS) All rats receive lithium chloride (3 meq / kg, ip, Sigma, St Louis, MO, USA); After 20 h, animals were placed in a Plexiglas box to record baseline cortical EEG. Methyl scopolamine bromide (1 mg / kg, sc, Sigma) was administered to limit the peripheral effects of convulsants. SE was induced by injecting pilocarpine hydrochloride (25 mg / kg, sc, Sigma) 30 minutes after methyl scopolamine. Bilateral EEG cortical activity was recorded during the entire period of SE and behavioral changes were noted.

試験化合物の増加する用量の効果を３群のラットで研究した。第１群の動物にはＳＥの発症後１ｈで１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を与え（ｉ．ｐ．）（ｐｉｌｏ−ＴＣ１０）、一方、群２および３の動物にはそれぞれ３０および６０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を与えた（ｐｉｌｏ−ＴＣ３０およびｐｉｌｏ−ＴＣ６０）。   The effect of increasing doses of test compound was studied in 3 groups of rats. Group 1 animals were given 10 mg / kg of test compound 1 h after the onset of SE (ip) (pilo-TC10), whereas animals in groups 2 and 3 were 30 and 60 mg / kg, respectively. Test compounds were given (pilo-TC30 and pilo-TC60).

別の群にＳＥの発症後１ｈで２ｍｇ／ｋｇのジアゼパム（ＤＺＰ，ｉ．ｍ．）を注入し、それはＳＥ後の動物生存を向上するための我々の標準的な処置である（ｐｉｌｏ−ＤＺＰ）。コントロール群にはピロカルピンおよび試験化合物の代わりに食塩水を与えた（食塩水−食塩水）。次に、ＳＥを生き延びるｐｉｌｏ−試験化合物ラットに第一の試験化合物注入の約１０ｈ後に試験化合物の同じ用量の第二のｉ．ｐ．注射を注入し、そしてさらに６日間試験化合物での毎日２回の処置下で維持した。Ｐｉｌｏ−ＤＺＰには、第一のものの後約１０ｈでＳＥの当日に１ｍｇ／ｋｇのＤＺＰの第二の注入を与えた。その後、Ｐｉｌｏ−ＤＺＰおよび食塩水−食塩水ラットには等容量の食塩水を毎日２回与えた。   Another group was infused with 2 mg / kg diazepam (DZP, im) 1 h after the onset of SE, which is our standard treatment to improve animal survival after SE (pilo-DZP). ). The control group was given saline instead of pilocarpine and the test compound (saline-saline). The pilo-test compound rats that survive SE are then subjected to a second i.d. of the same dose of test compound approximately 10 h after the first test compound injection. p. Injections were infused and maintained under twice daily treatment with test compounds for an additional 6 days. Pilo-DZP was given a second infusion of 1 mg / kg DZP on the day of SE approximately 10 h after the first. Thereafter, Pilo-DZP and saline-saline rats were given an equal volume of saline twice daily.

１日当たり１０ｈにわたる動物の毎日のビデオ記録および８ｈにわたる週に２回のエレクトログラフィー（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ）活動の記録によりＥＥＧへのそしてＳＲＳの発生までの潜伏時間への試験化合物の効果を調べた。   The effect of the test compound on the EEG and on the latency to the onset of SRS was examined by daily video recording of animals over 10 h per day and recording of electrographic activity twice a week for 8 h.

細胞密度の定量化
細胞密度の定量化を８匹のｐｉｌｏ−ＤＺＰ、８匹のｐｉｌｏ−ＴＣ１０、７匹のｐｉｌｏ−ＴＣ３０、７匹のｐｉｌｏ−ＴＣ６０および６匹の食塩水−食塩水ラットでＳＥ後６日で行った。ＳＥ後１４日で、動物を１．８ｇ／ｋｇのペントバルビタール（Ｄｏｌｅｔｈａｌ(R)、Ｖｅｎｔｏｑｕｉｎｏｌ，Ｌｕｒｅ，Ｆｒａｎｃｅ）で深く麻酔した。次に脳を取り除き、そして凍結させた。連続２０μｍ切片を低温槽において切断し、チオニン染色の前に数日間風乾させた。 Quantification of cell density Quantification of cell density was performed with SE in 8 pilo-DZP, 8 pilo-TC10, 7 pilo-TC30, 7 pilo-TC60 and 6 saline-saline rats. 6 days later. In 14 days after SE, pentobarbital animals 1.8g / kg (Dolethal (R) , Ventoquinol, Lure, France) were deeply anesthetized with. The brain was then removed and frozen. Serial 20 μm sections were cut in a cryostat and allowed to air dry for several days prior to thionine staining.

・細胞密度の定量化は、ラット脳地図の定位座標に従って冠状切片上で１０ｘ１０ボックスの１ｃｍ２顕微鏡グリッドで行った（Ｐａｘｉｎｏｓ Ｇ，Ｗａｔｓｏｎ Ｃ（１９８６）Ｔｈｅ Ｒａｔ Ｂｒａｉｎ ｉｎ Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ Ｃｏｏｒｄｉｎａｔ
ｅｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏを参照）。
・細胞計数は盲目方法において２回行い、そして各個々の動物における２つの隣接する切片からの少なくとも３つの値の平均であった。計数は１０μｍより大きい細胞のみを含み、より小さいものはグリア細胞とみなした。 Quantification of cell density was performed on a coronal section according to the stereotaxic coordinates of a rat brain map with a 10 × 10 box 1 cm 2 microscope grid (Paxinos G, Watson C (1986) The Rat Brain in Stereotaxic Coordinator.
es, 2nd ed. (See Academic Press, San Diego).
Cell counts were performed twice in a blinded manner and were the average of at least 3 values from 2 adjacent sections in each individual animal. Counts included only cells larger than 10 μm and smaller were considered glial cells.

ティム染色
自発性再発性発作の発症後２ヶ月で、試験化合物もしくはＤＺＰにさらした慢性期間におけるラット上でそして３匹の食塩水−食塩水ラットにおいて苔状線維発芽を調べた。動物を深く麻酔し、そして食塩水、続いて１００ｍｌの０．１Ｍリン酸バッファー中１．１５％（ｗ／ｖ）のＮａ２Ｓおよび１００ｍｌの０．１Ｍリン酸バッファー中４％（ｖ／ｖ）のホルムアルデヒドを経心臓的にかん流させた。脳を頭蓋骨から取り除き、３〜５ｈの間４％のホルムアルデヒドにおいて後固定し、そして４０μｍの切片をスライディングビブラトーム上で切断し、そしてゼラチン被覆スライドガラス上で標本にした。 Two months after the onset of Tim staining spontaneous recurrent seizures, mossy fiber sprouting was examined on rats in the chronic period exposed to test compound or DZP and in 3 saline-saline rats. The animals were deeply anesthetized and saline followed by 1.15% (w / v) Na 2 S in 100 ml 0.1 M phosphate buffer and 4% (v / v) in 100 ml 0.1 M phosphate buffer. ) Formaldehyde was transcardially perfused. The brain was removed from the skull, postfixed in 4% formaldehyde for 3-5 h, and 40 μm sections were cut on a sliding vibratome and sampled on a gelatin-coated glass slide.

翌日、切片を５０％（ｗ／ｖ）のアラビアゴム（１６０ｍｌ）、クエン酸ナトリウムバッファー（３０ｍｌ）、５．７％（ｗ／ｖ）のヒドロキノン（８０ｍｌ）および１０％（ｗ／ｖ）の硝酸銀（２．５ｍｌ）の２６℃溶液中で４０〜４５分間暗所で発色させた。次に、切片を４０℃で少なくとも４５分間水道水ですすぎ、蒸留水で迅速にすすぎ、そして乾燥させた。それらをエタノールにおいて脱水し、そしてカバースリップを載せた。   The next day, sections were cut with 50% (w / v) gum arabic (160 ml), sodium citrate buffer (30 ml), 5.7% (w / v) hydroquinone (80 ml) and 10% (w / v) silver nitrate. Color was developed in a dark place in a solution (2.5 ml) of 26 ° C. for 40-45 minutes. The sections were then rinsed with tap water for at least 45 minutes at 40 ° C., quickly rinsed with distilled water, and dried. They were dehydrated in ethanol and covered with a coverslip.

苔状線維発芽を背側海馬において以前に記述された基準に従って評価し（Ｃａｖａｚｏｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １１：２７９５−２８０３）、それは下記のとおりである：０−ＤＧの先端と稜との間に顆粒なし；１−ＤＧの先端と稜との間に斑状分布した顆粒上領域（ｓｕｐｒａｇｒａｎｕｌａｒ ｒｅｇｉｏｎ）におけるまばらな顆粒；２−ＤＧの先端と稜との間に連続分布したより多数の顆粒；３−先端と稜との間に時折の斑状の融合性顆粒を有して、先端と稜の間に連続パターンの顕著な顆粒；４−先端と稜との間に融合性の濃い薄層状バンドを形成する顕著な顆粒および５−内側分子層に広がる顆粒の融合性の濃い薄層状バンド。   Mossy fiber sprouting was evaluated according to previously described criteria in the dorsal hippocampus (Cavazos et al., 1991, J Neurosci 11: 2795-803), which is: 0-DG tips and ridges No granules between; 1- sparse granules in the supragranular region distributed patchy between the tips and edges of the DG; 2- more granules continuously distributed between the tips and edges of the DG 3-with occasional patchy fusogenic granules between tip and ridge, with a continuous pattern of prominent granules between tip and ridge; 4- dense thin lamina with fusibility between tip and ridge; A dense, thin lamellar band of prominent granules forming the band and a granule spreading over the 5-inner molecular layer.

データ分析
ｐｉｌｏ−食塩水およびｐｉｌｏ−試験化合物動物におけるＳＥの特性の比較のために、対応のないスチューデントｔ検定を用いた。両方の群における発作を起こす（ｓｅｉｚｉｎｇ）ラットの数の比較は、カイ二乗検定を用いて行った。ニューロン損傷について、群間の統計分析はＡＮＯＶＡ、続いて多重比較のフィッシャー検定を用いてＳｔａｔｖｉｅｗソフトウェア（Ｆｉｓｈｅｒ ＲＡ，１９４６ａ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗｏｒｋｅｒｓ（第１０版）Ｏｌｉｖｅｒ ＆ Ｂｏｙｄ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ；Ｆｉｓｈｅｒ ＲＡ，１９４６ｂ，Ｔｈｅ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ（第４版）Ｏｌｉｖｅｒ ＆ Ｂｏｙｄ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ）を使用して行った。 Data Analysis Unpaired Student t-test was used for comparison of SE properties in pilo-saline and pilo-test compound animals. Comparison of the number of rats seizing in both groups was performed using the chi-square test. For neuronal injury, statistical analysis between groups was performed using ANOVA, followed by Statview software (Fisher RA, 1946a, Statistical Methods for Research Workers (10th edition) Oliver & Boyd, RAF 46; , The Design of Experiments (4th edition) Oliver & Boyd, Edinburgh).

リチウム−ピロカルピン癲癇重積持続状態の行動およびＥＥＧ特性
２５０〜３３０ｇの重さのスプラーグ−ドーリーラットの総数をＬ−ｐｉｌｏに誘導されるＳＥに供した。ＳＥの行動特性は、ｐｉｌｏ−食塩水およびｐｉｌｏ−試験化合物群の両方において同一であった。ピロカルピン注入後５分以内に、ラットは下痢、立毛およびコリン作動性刺激の他の徴候を発症した。その後の１５〜２０分の間に、ラットは頭部上下運動、引っかくこと、かむことおよび探索行動を示した。再発性発作はピロカルピン投与後約１５〜２０分で始まった。頭部および両側前肢ミオクローヌスのエピソードを立ち上がりおよび転倒と関連づけるこれらの発作は、以前に記述されているように（Ｔｕｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ ９：３１５−３３５）、ピロカルピン後約３５〜４０分でＳＥに進行した。 The total number of Sprague-Dawley rats weighing lithium-pilocarpine intussusception and EEG traits weighing 250-330 g were subjected to SE induced by L-pilo. The behavioral characteristics of SE were the same in both pilo-saline and pilo-test compound groups. Within 5 minutes after pilocarpine infusion, rats developed diarrhea, napped and other signs of cholinergic stimulation. During the following 15-20 minutes, the rats exhibited head up and down movements, scratching, biting and exploratory behavior. Recurrent seizures began approximately 15-20 minutes after pilocarpine administration. These seizures that correlate episodes of head and bilateral forelimb myoclonus with rising and falling are as previously described (Turski et al., 1983, Behav Brain Res 9: 315-335), about 35 to 35 after pilocarpine. Progressed to SE in 40 minutes.

ＳＥ中のＥＥＧパターン
ＳＥの最初の１時間の間に、薬理学的処置がない場合、ＥＥＧの振幅は次第に増加し、一方、周波数は減少した。ピロカルピンの注入後５分以内に、正常なバックグラウンドＥＥＧ活動は皮質において低電位速波で置換され、一方、シータ波（５〜７Ｈｚ）が海馬において現れた。１５〜２０分までに、海馬シータ波上に重複する高電位速波および単離された高電位棘波が海馬においてのみ記録され、一方、皮質の活動は実質的に変化しなかった。 EEG pattern in SE During the first hour of SE, in the absence of pharmacological treatment, the EEG amplitude gradually increased while the frequency decreased. Within 5 minutes after pilocarpine injection, normal background EEG activity was replaced by low potential fast waves in the cortex, while theta waves (5-7 Hz) appeared in the hippocampus. By 15-20 minutes, high potential fast waves and isolated high potential spikes on the hippocampal theta waves were recorded only in the hippocampus, while cortical activity did not change substantially.

ピロカルピン注入後３５〜４０分までに、動物は海馬および皮質の両方に存在する高電位速波を有する典型的な電位図発作を発症し、それは発作に先立つ活動の突発として最初に起こり、そしてその後にＤＺＰもしくは試験化合物の投与まで続く連続する一連の高電位棘波および多棘波が続いた。約３〜４ｈのＳＥで、海馬ＥＥＧは海馬および皮質の両方でｐｉｌｏ−ＤＺＰにおいてそしてｐｉｌｏ−１０群において周期性電位図放電（ＰＥＤ、約１回／秒）を特徴とした。ＥＥＧバックグラウンド活動の振幅は、ｐｉｌｏ−ＴＣ６０動物において低かった。６〜７ｈのＳＥまでに、棘波活動はＤＺＰおよびＴＣ１０処置ラットにおいて皮質および海馬にまだ存在し、一方、ＥＥＧの振幅はＴＣ３０ラットの海馬においてそしてＴＣ６０処置ラットの両方の構造において減少し、そしてベースラインレベルに戻った。ＴＣ１０、ＴＣ３０およびＴＣ６０群間で違いはなかった。９ｈのＳＥまでに、単離された棘波は試験化合物処置ラットの海馬においてまだそして皮質において時折記録された。両方の構造において、バックグランド活動はその時点で非常に低い振幅のものであった。   By 35-40 minutes after pilocarpine injection, the animal develops a typical electrogram seizure with high potential fast waves present in both the hippocampus and cortex, which first occurs as an outbreak of activity prior to the seizure, and thereafter Followed by a continuous series of high-potential and polyspinous waves that continued until administration of DZP or test compound. With an SE of about 3-4 h, hippocampal EEG was characterized by periodic electrogram discharge (PED, about 1 time / second) in pilo-DZP and in pilo-10 group in both hippocampus and cortex. The amplitude of EEG background activity was low in pilo-TC60 animals. By 6-7 h SE, spinal wave activity is still present in the cortex and hippocampus in DZP and TC10 treated rats, while the amplitude of EEG decreases in the hippocampus of TC30 rats and in the structure of both TC60 treated rats, and Returned to baseline level. There was no difference between the TC10, TC30 and TC60 groups. By 9 h SE, isolated spike waves were still recorded in the hippocampus of test compound-treated rats and occasionally in the cortex. In both structures, background activity was of very low amplitude at that time.

ＳＥにより誘導される死亡率
ＳＥ後の最初の４８ｈの間に、死亡率の程度はｐｉｌｏ−ＤＺＰラット（２３％、５／２２）、ｐｉｌｏ−ＴＣ１０ラット（２６％、６／２３）およびｐｉｌｏ−ＴＣ３０ラット（２０％、５／２５）において同様であった。死亡率はｐｉｌｏ−ＴＣ６０ラットにおいて大いに減少され、ここで、それは４％（１／２３）に達しただけであった。この差は統計的に有意であった（ｐ＜０．０１）。 Mortality induced by SE During the first 48 h after SE, the extent of mortality was pilo-DZP rats (23%, 5/22), pilo-TC10 rats (26%, 6/23) and pilo- Similar in TC30 rats (20%, 5/25). Mortality was greatly reduced in pilo-TC60 rats, where it only reached 4% (1/23). This difference was statistically significant (p <0.01).

サイレント期のＥＥＧ特性および自発性再発性発作の発生
サイレント期間中のＥＥＧパターンは、ｐｉｌｏ−ＤＺＰおよびｐｉｌｏ−ＴＣ１０、３０もしくは６０ラットにおいて同様であった。ＳＥ後２４および４８ｈで、ベースラインＥＥＧは、その上に大波もしくは棘波を重ね合わせることができるＰＥＤの発生をまだ特徴とした。試験化合物の注入もしくは賦形剤注入後１〜８ｈの間に、ｐｉｌｏ−ＤＺＰもしくはｐｉｌｏ−ＴＣ１０群において変化はなかった。ＴＣ３０およびＴＣ６０ラットにおいて、ＰＥＤの周波数および振幅は注入後１０分するやいなや減少し、そしてＴＣ３０群において大きい振幅のそしてＴＣ６０群において低い振幅の棘波により置換された。注入後４ｈまでにＥＥＧは２つの後者の群においてベースラインレベルに戻っていた。ＳＥ後６日までに、ＥＥＧはまだピロカルピン注入前より低い振幅のものであり、そして棘波は大部分の群において、時折ｐｉｌｏ−ＤＺＰ、−ＴＣ１０および−ＴＣ３０ラットにおいてまだ記録することができた。ｐｉｌｏ−ＴＣ６０ラットにおいて、大きい振幅の棘波の周波数は全ての他の群におけるより高かった。 EEG characteristics during the silent phase and the development of spontaneous recurrent seizures The EEG pattern during the silent period was similar in pilo-DZP and pilo-TC10, 30 or 60 rats. At 24 and 48 h after SE, the baseline EEG was still characterized by the occurrence of PED on which large or spike waves could be superimposed. There was no change in pilo-DZP or pilo-TC10 groups between 1-8 h after test compound injection or vehicle injection. In TC30 and TC60 rats, the frequency and amplitude of PED decreased as soon as 10 minutes post-injection and were replaced by high amplitude spikes in the TC30 group and low amplitude spikes in the TC60 group. By 4 h after injection, EEG had returned to baseline levels in the two latter groups. By 6 days after SE, EEG was still of lower amplitude than before pilocarpine injection, and spikes could still be recorded in occasional pilo-DZP, -TC10 and -TC30 rats in most groups . In pilo-TC60 rats, the frequency of large amplitude spikes was higher than in all other groups.

試験化合物もしくは賦形剤注入後に、ＥＥＧ記録はｐｉｌｏ−ＤＺＰおよびｐｉｌｏ−ＴＣ１０群において注入により影響されなかった。ｐｉｌｏ−ＴＣ３０ラットにおいて、注入は海馬および皮質の両方のＥＥＧ上の徐波の発生ならびにｐｉｌｏ−ＴＣ６０ラットにおける棘波の減少した周波数を誘導した。   After test compound or vehicle injection, EEG recordings were not affected by injection in the pilo-DZP and pilo-TC10 groups. In pilo-TC30 rats, injection induced the development of slow waves on both hippocampal and cortical EEG as well as the reduced frequency of spikes in pilo-TC60 rats.

ＤＺＰ、ＴＣ１０およびＴＣ３０にさらしそして慢性期まで調べたラットは全て、同様
の潜伏時間で自発性再発性発作（ＳＲＳ）を発症した。潜伏時間は、ｐｉｌｏ−ＤＺＰラットにおいて１８．２±６．９日（ｎ＝９）、ｐｉｌｏ−ＴＣ１０ラットにおいて１５．４±５．１日（ｎ＝７）、ｐｉｌｏ−ＴＣ３０ラットにおいて１８．９±９．０日（ｎ＝１０）であった。ＴＣ６０に供したラットの群において、ラットの亜群は他の群のものと同様の潜伏時間で癲癇になり、すなわち、１７．６±８．７日（ｎ＝７）、一方、ラットの別の群はＳＥ後１０９〜１９１日（１４９．８±３６．０日、ｎ＝４）の間のはるかに長い遅延を有して癲癇になり、そして１匹のラットはＳＥ後９ヶ月の遅延において癲癇にならなかった。ｐｉｌｏ−ＤＺＰ、ｐｉｌｏ−ＴＣ１０、ｐｉｌｏ−ＴＣ３０およびｐｉｌｏ−ＴＰＭ６０ラットの第一の亜群間のＳＲＳまでの潜伏時間の差は、統計的に有意ではなかった。食塩水−食塩水ラット（ｎ＝５）はいずれもＳＲＳを発症しなかった。 All rats exposed to DZP, TC10, and TC30 and examined until the chronic phase developed spontaneous recurrent seizures (SRS) with similar latency. Latency times were 18.2 ± 6.9 days (n = 9) in pilo-DZP rats, 15.4 ± 5.1 days (n = 7) in pilo-TC10 rats, and 18.9 in pilo-TC30 rats. It was ± 9.0 days (n = 10). In the group of rats subjected to TC60, the sub-group of rats became addicted with a latency similar to that of the other groups, ie 17.6 ± 8.7 days (n = 7), while The group of mice became pupae with a much longer delay between 109-191 days after SE (149.8 ± 36.0 days, n = 4), and one rat was delayed 9 months after SE Did not become a habit. The difference in latency to SRS between the first subgroup of pilo-DZP, pilo-TC10, pilo-TC30 and pilo-TPM60 rats was not statistically significant. None of the saline-saline rats (n = 5) developed SRS.

ピロカルピンにさらしたラットにおける自発性再発性発作（ＳＲＳ）の頻度を計算するために、発作の重症度ならびに顕著なＩＩＩ期（顔面の筋肉および前肢の慢性発作）およびＩＶ〜Ｖ期発作（立ち上がりおよび転倒）を測定した。ｐｉｌｏ−ＤＺＰおよびｐｉｌｏ−試験化合物ラットにおける週当たりのＩＩＩ期ＳＲＳの頻度は、群間で様々であった。それは最初の３週の間ｐｉｌｏ−ＤＺＰおよびｐｉｌｏ−ＴＣ６０（早期ＳＲＳ発症を有する）群において低く、一定であり、そしてｐｉｌｏ−ＤＺＰ群において第４週の間に消失していた。ｐｉｌｏ−ＴＣ１０群においてＩＩＩ期ＳＲＳの頻度はより高く、ここで、それは３および４週目の間にｐｉｌｏ−ＤＺＰ値を超えて有意に増加された。より重度のＩＶ〜Ｖ期ＳＲＳの頻度は、ｐｉｌｏ−ＴＣ３０および後期発作発症を有するＴＣ６０（ここで、ＳＲＳ頻度はＴＣ３０群において全４週にわたって、そして第２週の後に発作が記録されなかったＩＶ〜Ｖ期発作のない後期ＳＲＳ発症を有するｐｉｌｏ−ＴＣ６０群において最初の２週にわたって一定であった）を除いて、大部分の群において第１週の間に最も高かった。ＩＶ〜Ｖ期ＳＲＳの頻度は、第１週の間にｐｉｌｏ−ＤＺＰ群（週当たり１１．３回のＳＲＳ）と比較してＴＣ１０、ＴＣ３０およびＴＣ６０（早期ＳＲＳ発症を有する）群（週当たり２．３〜６．１回のＳＲＳ）において有意に減少された。ＳＲＳの頻度が３．３〜５．８の間であるｐｉｌｏ−ＤＺＰ群と比較して発作の頻度が週当たり０．６〜０．９回の発作まで有意に減少された早期ＳＲＳ発症を有するｐｉｌｏ−ＴＣ６０群においてを除いて、２〜４週の間に、ＩＶ〜Ｖ期ＳＲＳの頻度は週当たり２〜６回の発作の第１週到達値と比較して全ての群において減少された。   To calculate the frequency of spontaneous recurrent seizures (SRS) in rats exposed to pilocarpine, seizure severity and significant stage III (facial muscle and forelimb chronic seizures) and stage IV-V seizures (rising and (Falling) was measured. The frequency of stage III SRS per week in pilo-DZP and pilo-test compound rats varied between groups. It was low and constant in the pilo-DZP and pilo-TC60 (with early SRS onset) group during the first 3 weeks and disappeared during the 4th week in the pilo-DZP group. The frequency of stage III SRS was higher in the pilo-TC10 group, where it was significantly increased above the pilo-DZP value during weeks 3 and 4. The frequency of more severe IV-V SRS was pi60-TC30 and TC60 with late-onset seizures (where the SRS frequency was IV for all 4 weeks in the TC30 group and no seizures were recorded after the second week) It was highest during the first week in most groups, except in the pilo-TC60 group with late SRS onset without ~ V-phase seizures, which was constant over the first two weeks). The frequency of stage IV-V SRS was observed during the first week in the TC10, TC30 and TC60 (with early SRS onset) group (2 per week) compared to the pilo-DZP group (11.3 SRS per week). .3 to 6.1 SRS) was significantly reduced. Has early SRS onset with a significantly reduced seizure frequency from 0.6 to 0.9 seizures per week compared to the pilo-DZP group with SRS frequency between 3.3 and 5.8 Except in the pilo-TC60 group, between 2 and 4 weeks, the frequency of IV-V SRS was reduced in all groups compared to the first week reach of 2-6 seizures per week. .

海馬、視床および皮質における細胞密度
食塩水−食塩水ラットと比較してｐｉｌｏ−ＤＺＰラットにおいて、細胞の数は海馬のＣＡ１領域において大量に減少され（錐体細胞層における７０％の細胞喪失）、一方、ＣＡＳ領域はそれほど大規模に損傷を受けなかった（ＣＡ３ａにおいて５４％の細胞喪失およびＣＡ３ｂにおいて３１％）。歯状回において、ｐｉｌｏ−ＤＺＰラットは門における大規模な細胞喪失を経験し（７３％）、一方、顆粒細胞層は眼に見える損傷を示さなかった。同様の損傷は腹側海馬において認められたが、細胞計数はこの領域において行われなかった。大規模な損傷はまた視床外側核においても記録され（９１％の細胞喪失）、一方、視床背内側核はより中程度に損傷を受けた（５６％）。梨状皮質において、ｐｉｌｏ−ＤＺＰラットで細胞喪失はＩＩＩ〜ＩＶ層において全てであり、それはもはや眼に見えず、そしてＩＩ層において５３％に達した。背側内嗅皮質において、ＩＩおよびＩＩＩ〜ＩＶ層はわずかな損傷を受けた（それぞれ、９および１５％）。腹側内嗅皮質のＩＩ層は完全に維持され、一方、ＩＩＩ〜ＩＶ層は４４％の細胞喪失を受けた。 Cell density in the hippocampus, thalamus and cortex In pilo-DZP rats compared to saline-saline rats, the number of cells is greatly reduced in the CA1 region of the hippocampus (70% cell loss in the pyramidal cell layer), On the other hand, the CAS region was not significantly damaged (54% cell loss in CA3a and 31% in CA3b). In the dentate gyrus, pilo-DZP rats experienced extensive cell loss in the portal (73%), while the granule cell layer showed no visible damage. Similar damage was observed in the ventral hippocampus, but cell counting was not performed in this area. Large scale damage was also recorded in the lateral thalamic nucleus (91% cell loss), while the dorsolateral nucleus of the thalamus was more moderately damaged (56%). In piriform cortex, in pilo-DZP rats, cell loss was all in the III-IV layer, which was no longer visible and reached 53% in the II layer. In the dorsal entorhinal cortex, layers II and III-IV were slightly damaged (9 and 15%, respectively). The layer II of the ventral entorhinal cortex was fully maintained, while layers III-IV suffered 44% cell loss.

ｐｉｌｏ−試験化合物動物の海馬において、細胞喪失はＣＡ１錐体層においてｐｉｌｏ−ＤＺＰラットと比較して減少され、ここで、細胞喪失はｐｉｌｏ−ＤＺＰにおいて７５％に、そしてｐｉｌｏ−ＴＣ３０もしくはｐｉｌｏ−ＴＣ６０動物においてそれぞれ３５および１６％に達した。この差は、２つの試験化合物用量で統計的に有意であった。ＣＡＳ錐体層において、試験化合物はＣＡ３ａ領域におけるいかなる保護も与えず、一方、６
０ｍｇ／ｋｇの試験化合物用量はＣＡ３ｂにおいて有意に神経を保護した。歯状回において、門における細胞喪失はｐｉｌｏ−試験化合物（６９〜７２％）およびｐｉｌｏ−ＤＺＰ動物（７３％）において同様であった。２つの視床核において、６０ｍｇ／ｋｇの用量はまた、外側および背内側核においてそれぞれ６５および４２％ニューロン損傷を減少することにおいても保護した。大脳皮質において、試験化合物での処置は最も高い用量、６０ｍｇ／ｋｇでのみＤＺＰと比較してニューロン保護を与えた。２つの最も低い用量、１０および３０ｍｇ／ｋｇで、梨状皮質のＩＩＩ〜ＩＶ層において認められる細胞の全喪失および組織崩壊は、ｐｉｌｏ−ＤＺＰラットおよびｐｉｌｏ−試験化合物ラットにおいて同一であり、そしてこれらの群のいずれかにおける計数を可能にしなかった。梨状皮質のＩＩおよびＩＩＩ〜ＩＶ層において、ＴＣ６０処置はｐｉｌｏ−ＤＺＰラットにおいて記録されるニューロン損傷をそれぞれ４１および４４％減少した。腹側内嗅皮質において、神経保護はＩＩＩ〜ＩＶ層においてＴＣ６０投与により誘導され、そしてｐｉｌｏ−ＤＺＰラットと比較して３１％に達した。内嗅皮質では、背側内嗅皮質のＩＩＩ〜ＩＶ層（２８％より多い損傷）および腹側内嗅皮質のＩＩＩ〜ＩＶ層（３５％より多い損傷）においてｐｉｌｏ−ＤＺＰラットと比較してｐｉｌｏ−ＴＣ１０ラットにおいて細胞喪失のわずかな悪化があった。試験化合物の他の用量で、内嗅皮質における細胞喪失はｐｉｌｏ−ＤＺＰラットにおいて記録されるものと同様であった。 In the hippocampus of pilo-test compound animals, cell loss is reduced in the CA1 pyramidal layer compared to pilo-DZP rats, where cell loss is 75% in pilo-DZP and pilo-TC30 or pilo-TC60. Reached 35 and 16% in animals, respectively. This difference was statistically significant at the two test compound doses. In the CAS cone layer, the test compound does not provide any protection in the CA3a region, while 6
A test compound dose of 0 mg / kg significantly protected the nerve in CA3b. In the dentate gyrus, cell loss in the portal was similar in pilo-test compounds (69-72%) and pilo-DZP animals (73%). In the two thalamic nuclei, the 60 mg / kg dose also protected in reducing 65 and 42% neuronal damage in the lateral and dorsal medial nuclei, respectively. In the cerebral cortex, treatment with the test compound provided neuronal protection compared to DZP only at the highest dose, 60 mg / kg. At the two lowest doses, 10 and 30 mg / kg, the total cell loss and tissue disruption observed in the III-IV layers of the piriform cortex are identical in pilo-DZP and pilo-test compound rats, and these Did not allow counting in any of the groups. In layers II and III-IV of the piriform cortex, TC60 treatment reduced the neuronal damage recorded in pilo-DZP rats by 41 and 44%, respectively. In the ventral entorhinal cortex, neuroprotection was induced by TC60 administration in layers III-IV and reached 31% compared to pilo-DZP rats. In the entorhinal cortex, pilo compared to pilo-DZP rats in the dorsal entorhinal cortex III-IV (more than 28% damage) and ventral entorhinal cortex III-IV (more than 35% damage). -There was a slight exacerbation of cell loss in TC10 rats. At other doses of test compound, cell loss in the entorhinal cortex was similar to that recorded in pilo-DZP rats.

海馬における苔状線維発芽
ｐｉｌｏ−ＤＺＰおよびｐｉｌｏ−ＴＰＭ群においてＳＲＳを示す全てのラットは、歯状回の内側分子層において同様の強さのティム染色を示した（スコア２〜４）。ティム染色は、歯状回の上側および下側ブレード（ｕｐｐｅｒ ａｎｄ ｌｏｗｅｒ ｂｌａｄｅｓ）上の両方に存在した。上側ブレードにおけるティムスコアの平均値は、ｐｉｌｏ−ＤＺＰラット（ｎ＝９）において２．８±０．８、ｐｉｌｏ−ＴＣ１０ラット（ｎ＝７）において１．５±０．６、ｐｉｌｏ−ＴＣ３０ラット（ｎ＝１０）において２．６±１．０、そしてｐｉｌｏ−ＴＣ６０ラット（ｎ＝１１）の全群において１．５±０．７に達した。６０ｍｇ／ｋｇのｐｉｌｏ−試験化合物群をＳＲＳまでの潜伏時間に従ってさらに分割した場合、早期ＳＲＳ発生を有する亜群は１．８±０．６（ｎ＝６）のティムスコアを示し、そしてＳＲＳの後期発生もしくは欠如を有するラットの亜群は１．２±０．６（ｎ＝５）のティムスコアを有した。ｐｉｌｏ−ＤＺＰラットにおいて記録される値は、ｐｉｌｏ−ＴＣ１０（ｐ＝０．０３２）および後期発作を有するかもしくは発作のないｐｉｌｏ−ＴＣ６０亜群（ｐ＝０．０１６）における値と統計的に有意に異なった。 All rats showing SRS in the mossy fiber sprouting pilo-DZP and pilo-TPM groups in the hippocampus showed similar intensity of Tim staining in the inner molecular layer of the dentate gyrus (score 2-4). Tim staining was present both on the upper and lower blades of the dentate gyrus. The mean value of the Tim score in the upper blade is 2.8 ± 0.8 in pilo-DZP rats (n = 9), 1.5 ± 0.6 in pilo-TC10 rats (n = 7), pilo-TC30 rats It reached 2.6 ± 1.0 at (n = 10) and 1.5 ± 0.7 in all groups of pilo-TC60 rats (n = 11). When the 60 mg / kg pilo-test compound group was further divided according to the latency to SRS, the subgroup with early SRS development showed a Tim score of 1.8 ± 0.6 (n = 6) and the SRS A subgroup of rats with late onset or absence had a Tim score of 1.2 ± 0.6 (n = 5). The values recorded in pilo-DZP rats are statistically significant with those in pilo-TC10 (p = 0.032) and the pilo-TC60 subgroup with or without late seizures (p = 0.016) Different.

説明および結論
本研究の結果は、ＳＥの発症後１ｈで始まる試験化合物での７日の処置がニューロン損傷からある脳領域を（例えば、ＣＡ１およびＣＡ３ｂ領域の錐体細胞層、視床背内側、梨状皮質のＩＩおよびＩＩ ＭＶ層ならびに腹側内嗅皮質のＩＩＩ〜ＩＶ層において）、しかし最も高い用量の試験化合物、すなわち６０ｍｇ／ｋｇでのみ保護できることを示す。試験化合物の後者の用量はまた、少なくとも動物の亜群（それらは動物の他の群におけるより約９倍長い平均遅延を有して癲癇になり、そして１匹の動物はＳＥ後９ヶ月の遅延において癲癇にならなかった）においてＳＲＳの発生を遅らせることもできる。 Explanation and Conclusions The results of this study show that brain areas in which 7 days of treatment with test compounds beginning 1 h after the onset of SE have resulted from neuronal damage (eg, pyramidal cell layers of CA1 and CA3b areas, thalamic dorsum, pear (In the II and II MV layers of the cortex and the III-IV layers of the ventral entorhinal cortex), but only the highest dose of the test compound, ie 60 mg / kg, shows protection. The latter dose of test compound was also culled with at least a subgroup of animals (they had a mean delay of about 9 times longer than in other groups of animals, and one animal was delayed 9 months after SE The occurrence of SRS can also be delayed.

これらの結果は、大部分の抗癲癇販売薬の古典的な特性である、抗発作特性を有するある化合物がまた癲癇発生を遅らせる、すなわち抗癲癇発生性であることもできることを示す。本研究のデータはまた、試験化合物処置が、主に発生の第１週の間にそして６０ｍｇ／ｋｇの試験化合物処置で４週の観察の全期間の間、ＩＶ〜Ｖ期発作の数を減少するので、それは使用する用量が何であれ、癲癇の重症度を減少することも示す。さらに、ＴＣ１０群において、ｐｉｌｏ−ＤＺＰ群におけるより多数である重症度の低いＩＩＩ期発作の発生の増加へのシフトがある。   These results indicate that certain compounds with anti-seizure properties, which are the classic properties of most anti-epileptic drugs, can also delay the occurrence of epilepsy, ie, are anti-epileptic. The data in this study also show that test compound treatment reduced the number of IV-V seizures, primarily during the first week of development and during the entire 4-week observation period at 60 mg / kg test compound treatment. So it also shows that whatever the dose used, it reduces the severity of sputum. In addition, there is a shift in the TC10 group to an increased incidence of less severe stage III seizures, which is greater than in the pilo-DZP group.

研究のこの拡張部分の目的は、側頭葉癲癇のリチウム−ピロカルピン（Ｌｉ−Ｐｉｌｏ）モデルにおける同じ試験化合物（ＴＣ）の潜在的神経保護および抗癲癇発生特性について上記の実施例１において報告される研究を続行することであった。第一の研究において、ＴＣは海馬のＣＡ１およびＣＡ３領域、梨状および腹側内嗅皮質をＬｉ−Ｐｉｌｏ癲癇重積持続状態（ＳＥ）により誘導されるニューロン損傷から保護できることが示された。これらの神経保護特性の大部分は調べた最も高い用量、６０ｍｇ／ｋｇで生じ、そして該処置はラットの３６％（１１匹のうち４匹）において自発性発作の発生を遅らせることができた。本実施例において、ニューロン損傷および癲癇発生へのＴＣのより高い用量による処置の結果を調べる。   The purpose of this extension of the study is reported in Example 1 above for the potential neuroprotective and anti-epileptic properties of the same test compound (TC) in the Lithium-Pilocarpine (Li-Pilo) model of temporal lobe It was to continue the research. In the first study, TC was shown to be able to protect the hippocampal CA1 and CA3 regions, piriform and ventral entorhinal cortex from neuronal damage induced by Li-Pilo epilepticus (SE). Most of these neuroprotective properties occurred at the highest dose examined, 60 mg / kg, and the treatment was able to delay the development of spontaneous seizures in 36% of rats (4 of 11). In this example, the results of treatment with higher doses of TC to neuronal damage and epilepsy development are examined.

リチウムと関連するピロカルピン（Ｌｉ−Ｐｉｌｏ）によりラットにおいて誘導される癲癇のモデルは、ヒト側頭葉癲癇の臨床的および神経生理学的特徴の大部分を再現する（Ｔｕｒｓｋｉ Ｌ，Ｉｋｏｎｏｍｉｄｏｕ Ｃ，Ｔｕｒｓｋｉ ＷＡ，Ｂｏｒｔｏｌｏｔｔｏ ＺＡ，Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ ＥＡ（１９８９）Ｒｅｖｉｅｗ：Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｅｐｉｌｅｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ：ａ ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ，Ｓｙｎａｐｓｅ ３：１５４−１７１；Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ ＥＡ（１９９５）Ｔｈｅ ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｐｉｌｅｐｓｙ．Ｉｔａｌ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ １６：３３−３７を参照）。   The model of epilepsy induced in rats by pilocarpine associated with lithium (Li-Pilo) reproduces most of the clinical and neurophysiological features of human temporal lobe epilepsy (Turski L, Ikonomidou C, Turski WA, Bortolotto ZA, Cavalheiro EA (1989) Review: Cholinergic mechanisms and epileptogenesis.The seizures induced by pilocarpine: a novel experimental model of intractable epilepsy, Synapse 3: 154-171; Cavalheiro EA (1995) The pilocarpine model o f epilepsy.Ital J Neuro Sci 16: 33-37).

成体ラットにおいて、ピロカルピンの全身投与は、２４ｈまでにわたって持続し得るＳＥをもたらす。致死率は、１日目の間に３０〜５０％に達する。生存する動物において、ニューロン損傷は海馬体、梨状および内嗅皮質、視床、扁桃体、新皮質および黒質内で際立っている。この急性発作期間の後に１４〜２５日の平均期間にわたって続く「サイレント」無発作期が続き、その後に全ての動物は週に２〜５回の通常の頻度で自発性再発性痙攣発作を示す（Ｔｕｒｓｋｉ Ｌ，Ｉｋｏｎｏｍｉｄｏｕ Ｃ，Ｔｕｒｓｋｉ ＷＡ，Ｂｏｒｔｏｌｏｔｔｏ ＺＡ，Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ ＥＡ（１９８９）Ｒｅｖｉｅｗ：Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｅｐｉｌｅｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｔｈｅ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ：ａ ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｓｙｎａｐｓｅ ３：１５４−１７１；Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ ＥＡ（１９９５）Ｔｈｅ ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｐｉｌｅｐｓｙ．Ｉｔａｌ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ １６：３３−３７；Ｄｕｂe Ｃ，Ｂｏｙｅｔ Ｓ，Ｍａｒｅｓｃａｕｘ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ（２００１）Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｌｏｓｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｉｃｔａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍａｔｕｒｅ ａｎｄ ａｄｕｌｔ ｒａｔ．Ｅｘｐ
Ｎｅｕｒｏｌ １６７：２２７−２４１を参照）。 In adult rats, systemic administration of pilocarpine results in an SE that can last up to 24 h. The fatality rate reaches 30-50% during the first day. In surviving animals, neuronal damage is prominent in the hippocampus, piriform and entorhinal cortex, thalamus, amygdala, neocortex and substantia nigra. This acute seizure period is followed by a “silent” seizure period that lasts for an average period of 14-25 days, after which all animals show spontaneous recurrent seizures with a normal frequency of 2-5 times per week ( Turski L, Ikonomidou C, Turski WA, Bortolotto ZA, Cavalheiro EA (1989) Review: Cholinergic mechanisms and epileptogenesis, The seizures induced by pilocarpine: a novel experimental model of intractable epilepsy Synapse 3: 154-171; Cavalheiro EA (1995) The pilocarpine model of epile Psy.Ital J Neuro Sci 16: 33-37; Dube C, Boyet S, Marescuux C, Nehlig A (2001) Relationship.
between neuronal loss and interactive glucose metabolism, the chronic phase of the lithium-pilocarpine model of epilepsy in the immunity and the imprint. Exp
Neurol 167: 227-241).

現在の抗癲癇薬（ＡＥＤ）は癲癇発生を防がず、そして再発性発作に対して一時的に有効なだけである。   Current antiepileptic drugs (AEDs) do not prevent epilepsy and are only temporarily effective against recurrent seizures.

我々の前の研究において、我々は単剤治療において与える試験化合物（ＴＣ）の増加する用量の潜在的な神経保護および抗癲癇発生効果を研究し、そして高い死亡率を防ぐために主に与えられる我々の標準的なジアゼパム（ＤＺＰ）処置と比較した。これらのデータは、ＳＥの発症後１ｈで開始する１０、３０もしくは６０ｍｇ／ｋｇのＴＣでの７日の処置が、ある脳領域をニューロン損傷から保護できることを示す。この効果は、ＣＡ１およ
びＣＡ３ｂ領域の錐体細胞層、視床背内側、梨状皮質のＩＩおよびＩＩＩ〜ＩＶ層ならびに腹側内嗅皮質のＩＩＩ〜ＩＶ層において、しかしＴＣの最も高い用量、すなわち６０ｍｇ／ｋｇでのみ、統計的に有意である。さらに、ＴＣの後者の用量はまた、少なくとも動物の亜群（それらは動物の他の群におけるより約９倍長い平均遅延を有して癲癇になり、そして１匹の動物はＳＥ後９ヶ月の遅延において癲癇にならなかった）において自発性再発性発作（ＳＲＳ）の発生を遅らせることができる唯一のものでもあるように見える。 In our previous study we studied the potential neuroprotective and anti-epileptic effects of increasing doses of test compound (TC) given in monotherapy and given primarily to prevent high mortality Compared to standard diazepam (DZP) treatment. These data indicate that 7 days treatment with 10, 30 or 60 mg / kg TC starting 1 h after the onset of SE can protect certain brain regions from neuronal damage. This effect is seen in the pyramidal cell layer of the CA1 and CA3b regions, dorsal thalamus, layers II and III-IV of the piriform cortex and layers III-IV of the ventral entorhinal cortex, but the highest dose of TC, ie 60 mg Only at / kg is statistically significant. In addition, the latter dose of TC was also culled with at least a subgroup of animals (they had a mean delay of about 9 times longer than in other groups of animals, and one animal was 9 months after SE It appears to be the only one that can delay the onset of spontaneous recurrent seizures (SRS).

本研究において、試験化合物（ＴＣ）の異なる用量、すなわち、３０、６０、９０および１２０ｍｇ／ｋｇ（ＴＣ３０、ＴＣ６０、ＴＣ９０およびＴＣ１２０）の効果を前の研究におけるのと同じ設計を用いて試験した。処置をＳＥの発症後１時間で開始し、そして動物を薬剤の同じ用量の第二の注入で処置した。ＳＥのこの早期処置の後に６日のＴＣ処置を続けた。この報告は、ＳＥ後１４日で海馬、海馬傍皮質、視床および扁桃において評価したニューロン損傷へのそして自発性癲癇性発作までの潜伏時間およびその頻度へのＴＣの４つの異なる用量の効果に関する。   In this study, the effects of different doses of test compound (TC), namely 30, 60, 90 and 120 mg / kg (TC30, TC60, TC90 and TC120) were tested using the same design as in the previous study. Treatment started 1 hour after the onset of SE and the animals were treated with a second infusion of the same dose of drug. This early treatment of SE was followed by 6 days of TC treatment. This report relates to the effect of four different doses of TC on neuronal damage assessed in the hippocampus, parahippocampal cortex, thalamus and tonsils 14 days after SE and on the latency and frequency to spontaneous epileptic seizures.

方法
動物
Ｊａｎｖｉｅｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｌｅ Ｇｅｎｅｓｔ−Ｓｔ−Ｉｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）により提供される成体オススプラーグ−ドーリーラットを２０〜２２℃で制御された、込み合っていない標準的条件下（明暗サイクル、７．００ａ．ｍ．〜７．００ｐ．ｍ．明かりをつける）で飼育し、餌および水は自由に入手可能であった。全ての動物実験は、１９８６年１１月２４日の欧州共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）およびフランス農務省（ライセンスＮ°６７−９７）の規則に従って行った。 Method Animals Adult male Sprague-Dawley rats provided by Janvier Breeding Center (Le Genest-St-Isle, France) were controlled at 20-22 ° C. under non-congested standard conditions (light-dark cycle, 7.00 a. m. to 7.00 pm (lights up) and food and water were freely available. All animal experiments were performed in accordance with the rules of the European Community Council Directive (86/609 / EEC) of November 24, 1986 and the French Ministry of Agriculture (License N ° 67-97).

癲癇重積持続状態誘導、試験化合物（ＴＣ）処置およびＳＲＳの発生
全てのラットに塩化リチウム（３ｍｅｑ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）を与え、そして約２０ｈ後に、全ての動物に痙攣誘発薬の末梢効果を限定するために投与される臭化メチルスコポラミン（１ｍｇ／ｋｇ，ｓ．ｃ．，Ｓｉｇｍａ）も与えた。メチルスコポラミンの３０分後にピロカルピン塩酸塩（２５ｍｇ／ｋｇ，ｓ．ｃ．，Ｓｉｇｍａ）を注入することによりＳＥを誘導した。ＴＣの増加する用量の効果を５群のラットにおいて調べた。動物にＳＥの発症後１ｈで２．５ｍｇ／ｋｇのＤＺＰ、ｉ．ｍ．、または３０、６０、９０もしくは１２０ｍｇ／ｋｇのＴＣ（ＴＣ３０、ＴＣ６０、ＴＣ９０、ＴＣ１２０）、ｉ．ｐ．のいずれかを与えた。コントロール群には、ピロカルピンおよびＴＣの代わりに賦形剤を与えた、次に、ＳＥを生き延びるラットに第１のＴＣ注入後約１０ｈでＤＺＰ群には１．２５ｍｇ／ｋｇのＤＺＰのもしくは午前中と同じ用量のＴＣの第二のｉ．ｐ．注射を注入し、そしてさらに６日間毎日２回のＴＣ処置（ｓ．ｃ．）下で維持し、一方、ＤＺＰラットには賦形剤注入を与えた。 Intussusception induction, test compound (TC) treatment and development of SRS All rats were given lithium chloride (3 meq / kg, ip, Sigma, St Louis, Mo, USA) And about 20 h later, all animals were also given methylscopolamine bromide (1 mg / kg, sc, Sigma) administered to limit the peripheral effects of convulsants. SE was induced by injecting pilocarpine hydrochloride (25 mg / kg, sc, Sigma) 30 minutes after methyl scopolamine. The effect of increasing doses of TC was investigated in 5 groups of rats. The animals received 2.5 mg / kg DZP 1 h after the onset of SE, i. m. Or 30, 60, 90 or 120 mg / kg TC (TC30, TC60, TC90, TC120), i. p. Gave one of them. The control group was given vehicle instead of pilocarpine and TC, then about 10 h after the first TC injection to rats surviving SE, the DZP group had 1.25 mg / kg DZP or in the morning A second i. Of the same dose of TC. p. Injections were infused and maintained under TC treatment (sc) twice daily for an additional 6 days, while DZP rats were given vehicle infusion.

癲癇発生へのＤＺＰおよびＴＣの４用量の効果を１日当たり１０時間の動物の毎日のビデオ記録により調べた。ビデオ記録は４週間行われ、その間に第一の発作の発生ならびに全期間にわたる発作の総数が書き留められる。次に、動物をビデオ記録システムから取り除き、そして我々の動物施設においてさらに４週間飼育し、その後にそれらを全部で８週の癲癇期間の後に殺した。発作を示さなかったラットは、５ヶ月のビデオ記録の後に殺した。   The effect of 4 doses of DZP and TC on epileptic development was examined by daily video recording of animals for 10 hours per day. Video recording takes place for 4 weeks, during which time the first seizure occurs as well as the total number of seizures over the entire period. The animals were then removed from the video recording system and kept in our animal facility for an additional 4 weeks, after which they were killed after a total 8 week drought period. Rats that did not show seizures were killed after 5 months of video recording.

細胞密度の定量化
細胞密度の定量化をＳＥ後に２つの時点で行い：第１の群はＳＥ後１４日で調べ、そして７匹のＤＺＰ、８匹のＴＣ３０、１１匹のＴＣ６０、１０匹のＴＣ９０、８匹のＴＣ１２０およびＳＥに供されなかった８匹のコントロールラットによって構成された。ＳＲＳまでの潜伏時間の研究に使用した第二の群は、第一のＳＲＳの後８週でもしくはＳＲＳを
その遅延において認めることができない場合には５ヶ月で殺し、そして１４匹のＤＺＰ、８匹のＴＣ３０、１０匹のＴＣ６０、１１匹のＴＣ９０、９匹のＴＣ１２０ラットからなった。現在、ニューロン計数は癲癇発生について研究する動物の第二の群においてまだ進行中であり、そして長期の計数および研究のその部分に関するデータは本報告に含まれない。 Quantification of cell density Quantification of cell density was performed at two time points after SE: the first group was examined 14 days after SE and 7 DZP, 8 TC30, 11 TC60, 10 Consists of TC90, 8 TC120 and 8 control rats not subjected to SE. The second group used to study latency to SRS was killed 8 weeks after the first SRS or 5 months if SRS could not be observed in that delay, and 14 DZP, 8 It consisted of 1 TC30, 10 TC60, 11 TC90, 9 TC120 rats. Currently, neuronal counts are still ongoing in a second group of animals studying epilepsy, and long-term counts and data relating to that part of the study are not included in this report.

ニューロン計数のために、動物を１．８ｇ／ｋｇのペントバルビタール（Ｄｏｌｅｔｈａｌ(R)、Ｖeｔｏｑｕｉｎｏｌ，Ｌｕｒｅ，Ｆｒａｎｃｅ）で深く麻酔した。次に脳を取り除き、そして凍結させた。連続２０μｍ切片を低温槽において切断し、チオニン染色の前に数日間風乾させた。細胞密度の定量化は、ラット脳地図の定位座標に従って冠状切片上で１０ｘ１０ボックスの１ｃｍ２顕微鏡グリッドで行った（Ｐａｘｉｎｏｓ Ｇ，Ｗａｔｓｏｎ Ｃ（１９８６）Ｔｈｅ Ｒａｔ Ｂｒａｉｎ ｉｎ Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ
Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏを参照）。計数のグリッドを興味のある脳構造の明確な領域上に置き、そして各単一の脳構造について特定される２００もしくは４００倍の顕微鏡の拡大で計数を実施した。細胞計数は、動物の処置を知らない単一の観察者により各領域について３つの隣接する切片のそれぞれの側で２回行われた。各脳構造における１２の計数した視野で得られる細胞の数を平均した。細胞数の過大評価をもたらす二重計数に起因し得る潜在的誤りを最小化するためにこの方法を用いた。グリッドの下および右端に接するニューロンは計数しなかった。計数は、１０μｍより大きい細胞体を有するニューロンのみを含んだ。小さい細胞体を有する細胞はグリア細胞とみなし、そして計数しなかった。 For neuronal counting, pentobarbital animals 1.8g / kg (Dolethal (R) , Vetoquinol, Lure, France) were deeply anesthetized with. The brain was then removed and frozen. Serial 20 μm sections were cut in a cryostat and allowed to air dry for several days prior to thionine staining. Quantification of cell density was performed on a coronal section according to the stereotaxic coordinates of a rat brain map with a 10 × 10 box 1 cm 2 microscope grid (Paxinos G, Watson C (1986) The Rat Brain in Stereotaxic.
Coordinates, 2nd ed. (See Academic Press, San Diego). Count grids were placed on well-defined areas of the brain structure of interest, and counts were performed with a 200 or 400-fold microscope magnification specified for each single brain structure. Cell counts were performed twice on each side of three adjacent sections for each region by a single observer unaware of the animal's treatment. The number of cells obtained in 12 counted fields in each brain structure was averaged. This method was used to minimize potential errors that could be attributed to double counting leading to overestimation of cell number. Neurons touching the bottom and right edge of the grid were not counted. Counts included only neurons with cell bodies larger than 10 μm. Cells with small cell bodies were considered glial cells and were not counted.

データ分析
ニューロン損傷および癲癇発生について、群間の統計分析を一元配置分散分析、続いて事後ダネットもしくはフィッシャー検定を用いてＳｔａｔｉｓｔｉｃａソフトウェアを使用して行った。 Data analysis For neuronal damage and wrinkle development, statistical analysis between groups was performed using one-way analysis of variance followed by Statistica software using post hoc Dunnett or Fisher test.

結果
リチウム−ピロカルピン癲癇重積持続状態の行動特性
２５０〜３３０ｇの重さの１４３匹のスプラーグ−ドーリーラットの総数をリチウム−ピロカルピン（Ｌ−ｐｉｌｏ）に誘導されるＳＥに供した。この数において１０匹はＳＥを発症せず、一方、１３３匹のラットは完全な特徴的Ｌｉ−ｐｉｌｏ ＳＥを発症した。ＳＥの行動特性は、ｌｉ−ｐｉｌｏ−ＤＺＰおよびｌｉ−ｐｉｌｏ−ＴＣ群の両方において同一であった。ピロカルピン注入後５分以内に、ラットは下痢、立毛およびコリン作動性刺激の他の徴候を発症した。その後の１５〜２０分の間に、ラットは頭部上下運動、引っかくこと、かむことおよび探索行動を示した。再発性発作は、ピロカルピン投与後約１５〜２０分で始まった。頭部および両側前肢ミオクローヌスのエピソードを立ち上がりおよび転倒と関連づけるこれらの発作は、以前に記述されているように（Ｔｕｒｓｋｉ Ｌ，Ｉｋｏｎｏｍｉｄｏｕ Ｃ，Ｔｕｒｓｋｉ ＷＡ，Ｂｏｒｔｏｌｏｔｔｏ ＺＡ，Ｃａｖａｌｈｅｉｒｏ ＥＡ（１９８９）Ｒｅｖｉｅｗ：Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｅｐｉｌｅｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ：ａ ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ．Ｓｙｎａｐｓｅ ３：１５４−１７１；Ｄｕｂe Ｃ，Ｂｏｙｅｔ Ｓ，Ｍａｒｅｓｃａｕｘ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ（２００１）Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｌｏｓｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｉｃｔａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍａｔｕｒｅ ａｎｄ ａｄｕｌｔ ｒａｔ．Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １６７：２２７−２４１；Ａｎｄｒe Ｖ，Ｒｉｇｏｕｌｏｔ ＭＡ，Ｋｏｎｉｎｇ Ｅ，Ｆｅｒｒａｎ
ｄｏｎ Ａ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ（２００３）Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｂａｓａｌ ｃｏｒｔｉｃｅｓ ａｎｄ ｄｅｌａｙｓ ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｉｎ
ｔｈｅ ｒａｔ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４４：８９３−９０３）、ピロカルピン後約３５〜４０分でＳＥに進行した。ＳＥに供されずそしてリチウムおよび食塩水を与えるコントロール群は、２０匹のラットからなった。 Results Behavioral Characteristics of Lithium-Pilocarpine Suspension Sustained State A total of 143 Sprague-Dawley rats weighing 250-330 g were subjected to SE induced by lithium-pilocarpine (L-pilo). In this number, 10 animals did not develop SE, while 133 rats developed fully characteristic Li-pilo SE. The behavioral characteristics of SE were the same in both li-pilo-DZP and li-pilo-TC groups. Within 5 minutes after pilocarpine infusion, rats developed diarrhea, napped and other signs of cholinergic stimulation. During the following 15-20 minutes, the rats exhibited head up and down movements, scratching, biting and exploratory behavior. Recurrent seizures began approximately 15-20 minutes after pilocarpine administration. These seizures that correlate episodes of head and bilateral forelimb myoclonus with rise and fall are as previously described (Turski L, Ikonomidou C, Turki WA, Bautrotto ZA, Cavallero EA (1989) Review: Choline: Choline epithelogenesis. The seizures induced by pilocarpine: a novel experimental model of intactable epilepile epsilon. Cnap3: 154-171; loss and interictal glucose metabolism during the chronic phase of the lithium-pilocarpine model of epilepsy in the immature and adult rat.Exp Neurol 167: 227-241; Andre V, Rigoulot MA, Koning E, Ferran
don A, Nehlig A (2003) Long-term pregabalin
treatment protections basal cortices and delays the occurrence of spontaneous strains in the lithium-pilocarpine model in
the rat. Epilesia 44: 893-903), progressed to SE about 35-40 minutes after pilocarpine. The control group not subjected to SE and given lithium and saline consisted of 20 rats.

ＳＥ後１４日で細胞計数に供された５７匹の動物の群において、総数１３匹のラットはＳＥ後最初の４８ｈにわたって死亡した。死亡率の程度は処置によって異なり：ＤＺＰラットの３６％（４／１１）、ＴＣ３０ラットの３３％（４／１２）、ＴＣ６０ラットの８％（１／１２）、ＴＣ９０ラットの０％（０／１０）およびＴＣ１２０ラットの３３％（４／１２）が死亡した。ＤＺＰ群において、４匹のラットはＳＥ後最初の２４ｈのうちに死亡した。ＴＣ３０ラットの群において、１匹はＳＥの当日に死亡し、１匹のラットはＳＥ後２４ｈまでに、そして２匹のラットは４８ｈまでに死亡した。ＴＣ６０ラットの群において、１匹のラットはＳＥ後４８ｈで死亡した。ＴＣ１２０ラットの群において、２匹のラットはＳＥ後２４ｈまでに、そして２匹は４８ｈまでに死亡した。   In a group of 57 animals subjected to cell counts 14 days after SE, a total of 13 rats died over the first 48 h after SE. The degree of mortality varies from treatment to treatment: 36% (4/11) in DZP rats, 33% (4/12) in TC30 rats, 8% (1/12) in TC60 rats, 0% (0/0) in TC90 rats. 10) and 33% (4/12) of TC120 rats died. In the DZP group, 4 rats died within the first 24 h after SE. In the group of TC30 rats, one died on the day of SE, one rat died by 24h after SE, and two rats died by 48h. In the group of TC60 rats, one rat died 48 h after SE. In the group of TC120 rats, 2 rats died by 24 h after SE and 2 died by 48 h.

ＳＲＳまでの潜伏時間および後期細胞計数の研究に供した５５匹の動物の群において、ＳＥ後最初の４８ｈにわたる死亡率の程度は以下のとおりであった：ＤＺＰラットの７％（１／１４）、ＴＣ３０ラットの２７％（３／１１）、ＴＣ６０ラットの０％（０／１０）、ＴＣ９０ラットの０％（０／１１）およびＴＣ１２０ラットの０％（０／９）が死亡した。ＤＺＰラットの群において、１匹のラットはＳＥ後最初の２４ｈの間に死亡した。ＴＣ３０の群において、２匹のラットはＳＥ後２４ｈまでにそして１匹は４８ｈまでに死亡した。   In the group of 55 animals subjected to latency to SRS and late cell count studies, the degree of mortality over the first 48 h after SE was as follows: 7% (1/14) of DZP rats 27% (3/11) of TC30 rats, 0% (0/10) of TC60 rats, 0% (0/11) of TC90 rats and 0% (0/9) of TC120 rats died. In the group of DZP rats, one rat died during the first 24 h after SE. In the TC30 group, two rats died by 24h after SE and one by 48h.

早期（ＳＥ後１４日）での海馬および皮質における細胞密度
コントロールラットと比較したＤＺＰラットにおいて、ニューロの数は海馬のＣＡ１領域において大量に減少され（錐体細胞層における８５％の脱落）、一方、ＣＡ３領域はあまり大規模に損傷を受けなかった（４０％の喪失）（表１および図１）。歯状回において、ＤＺＰラットは門における大規模なニューロン喪失を経験し（６５％）、一方、顆粒細胞層は明白な損傷を示さなかった。損傷の同じ分布は腹側海馬において認められたが、細胞計数はこの領域において行われなかった。 Cell density in the hippocampus and cortex at an early stage (14 days after SE) In DZP rats compared to control rats, the number of neurons is greatly reduced in the CA1 region of the hippocampus (85% loss in the pyramidal cell layer), whereas The CA3 region was not significantly damaged (40% loss) (Table 1 and FIG. 1). In the dentate gyrus, DZP rats experienced massive neuronal loss in the portal (65%), while the granule cell layer showed no obvious damage. The same distribution of injury was observed in the ventral hippocampus, but cell counting was not performed in this area.

視床において、ニューロン喪失は背内側中心および外側、背外側内側背側（ｄｏｒｓｏｌａｔｅｒａｌ ｍｅｄｉａｌ ｄｏｒｓａｌ）においてそして内側中心核において中程度であり（それぞれ、１８、２４、４０および３４％の脱落）、背内側核においてより顕著であり（４９％）、そして背外側核の腹側外側部分において際立った（９０％）（表１および図２）。扁桃において、ニューロン喪失は内側腹側後核において中程度であり（３８％）、そして基底外側および内側背側前核においてより顕著であった（それぞれ、７３および５３％の脱落）。中心核においてニューロン損傷はなかった（表１および図３）。   In the thalamus, neuronal loss is moderate in the dorsal medial and lateral, dorsolateral medial dorsal and in the medial central nucleus (18, 24, 40, and 34% dropout, respectively) and the dorsal medial nucleus In the ventral lateral part of the dorsolateral nucleus (90%) (Table 1 and Figure 2). In tonsils, neuronal loss was moderate in the medial ventral posterior nucleus (38%) and more prominent in the basolateral and medial dorsal pronuclei (73 and 53% dropout, respectively). There was no neuronal damage in the central nucleus (Table 1 and FIG. 3).

梨状皮質において、ニューロン喪失はＩＩＩ層においてほとんど全てであり（９４％）、それはもはや実際に眼に見えず、そしてコントロールの食塩水処置ラットと比較してＤＺＰラットにおける背側および腹側ＩＩ層それぞれにおいて６６および８９％に達した。背側内嗅皮質において、ＩＩおよびＩＩＩ〜ＩＶ層はわずかな損傷を受け（それぞれ、１８および１２４％）、そして腹側ＩＩおよびＩＩＩ／ＩＶ層において、損傷はそれぞれ２２および７４％に達した（以下の表１および図４）。   In piriform cortex, neuronal loss is almost all in layer III (94%), which is no longer actually visible, and dorsal and ventral layer II in DZP rats compared to control saline-treated rats. Reached 66 and 89% in each. In the dorsal entorhinal cortex, layers II and III-IV were slightly damaged (18 and 124%, respectively), and in the ventral II and III / IV layers, the damage reached 22 and 74%, respectively ( Table 1 below and FIG. 4).

Figure 2008516961
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ＴＣ処置動物の海馬において、細胞喪失はＣＡ１錐体細胞層においてＤＺＰラットと比較して有意に減少された。この減少はＴＣ３０、６０もしくは９０ラットにおいて著しく（３６〜４７％の細胞喪失）、そしてＴＣ１２０群において顕著であった（１２％の細胞喪失）。これらの差は、全てのＴＣ用量で統計的に有意であった（表１および図１）。ＣＡ３錐体層において、１２０ｍｇ／ｋｇの用量でのみ、試験化合物により誘導されるわずかな神経保護への傾向があったが、ＤＺＰ群との差は有意でなかった。歯状回において、
門における細胞喪失はＤＺＰならびにＴＣ３０、６０および９０群において同様であり（６１〜６６％の脱落）、そしてＤＺＰ動物（６６％の脱落）と比較してＴＣ１２０群（５３％のニューロン喪失）において減少した損傷へのわずかな傾向があった。これらの差はいずれも統計的に有意でなかった。 In the hippocampus of TC-treated animals, cell loss was significantly reduced in the CA1 pyramidal cell layer compared to DZP rats. This reduction was significant in TC30, 60 or 90 rats (36-47% cell loss) and significant in the TC120 group (12% cell loss). These differences were statistically significant at all TC doses (Table 1 and FIG. 1). In the CA3 pyramidal layer, only a dose of 120 mg / kg tended to have a slight neuroprotection induced by the test compound, but the difference from the DZP group was not significant. In the dentate gyrus,
Cell loss in the portal is similar in DZP and TC30, 60 and 90 groups (61-66% loss) and reduced in TC120 group (53% neuronal loss) compared to DZP animals (66% loss) There was a slight tendency to damage. None of these differences were statistically significant.

視床において、ニューロン喪失はＤＺＰならびにＴＣ３０およびＴＣ６０ラットにおいて同様であった。差はＴＣ９０ラットの背内側中心および内側中心核において有意性に到達しなかったが、ＴＣは背外側内側背側核において６０ｍｇ／ｋｇの用量で、そして全ての視床核において２つの最も高い用量、９０および１２０ｍｇ／ｋｇで有意に保護した。ＴＣ１２０ラットにおいて、ニューロン脱落はＤＺＰラットと比較してかなり減少された。それは４〜１９％の間であり、そしてニューロンの数は、背外側内側背側核においてを除いて、コントロール動物からもはや有意に異ならなかった（表１および図２）。扁桃において、ＴＣは３０ｍｇ／ｋｇの用量で基底外側核において、そして６０ｍｇの用量で、内側背側前核においても有意に保護した。最も高い用量で、ＴＣはおおむね神経を保護し；ニューロンの数はコントロールレベルからもはや有意に異ならず、そして全ての扁桃核においてコントロールレベルの８６〜９９％に達した（表１および図３）。   In the thalamus, neuronal loss was similar in DZP and TC30 and TC60 rats. The difference did not reach significance in the dorsal medial and medial central nuclei of TC90 rats, but TC was at a dose of 60 mg / kg in the dorsolateral medial dorsal nucleus and the two highest doses in all thalamic nuclei, Significant protection was obtained at 90 and 120 mg / kg. In TC120 rats, neuronal loss was significantly reduced compared to DZP rats. It was between 4-19% and the number of neurons was no longer significantly different from the control animals except in the dorsolateral medial dorsal nucleus (Table 1 and FIG. 2). In the tonsils, TC also significantly protected in the basolateral nucleus at a dose of 30 mg / kg and also in the medial dorsal pronucleus at a dose of 60 mg. At the highest dose, TC generally protected nerves; the number of neurons was no longer significantly different from the control level and reached 86-99% of the control level in all amygdala (Table 1 and FIG. 3).

大脳皮質において、ＴＣでの処置は、３０ｍｇ／ｋｇの用量でＤＺＰ処置と比較していかなる皮質領域も有意に保護しなかった。６０ｍｇ／ｋｇで、ＴＣは背側梨状皮質のＩＩ層においてのみニューロン喪失を有意に減少した（ＤＺＰ群における６６％と比較して２５％の脱落）。９０および１２０ｍｇ／ｋｇで、ＴＣはＤＺＰ処置と比較して梨状皮質の３つの領域全てを有意に保護し、そしてＴＣの最も高い用量、１２０ｍｇ／ｋｇで、ニューロン密度は、ＤＺＰ群においてニューロン集団がほとんど完全に枯渇していた梨状皮質、背側ＩＩ層およびＩＩＩ層においてさえ、コントロールレベルの７８〜９６％に達した。背側および腹側内嗅皮質の全ての層において、ＴＣの２つの最も低い用量、３０および６０ｍｇ／ｋｇは、いかなる神経保護も与えなかった。ＴＣの９０ｍｇ／ｋｇの用量は、腹側内嗅皮質のＩＩおよびＩＩＩ／ＩＶ層を有意に保護した（ＤＺＰ群における１９および７３％と比較して背側部分のＩＩおよびＩＩ／ＩＶ層にそして腹側部分のＩＩ層に残る４および１７％の損傷）。ＴＣの最も高い用量、１２０ｍｇ／ｋｇで、背側および腹側の両方の内嗅皮質の全ての部分は保護され、そしてこれらの領域におけるニューロンの数はコントロールにおけるレベルともはや有意に異ならなかった（ＤＺＰ群における２７〜８１％と比較して生存する８５〜９４％のニューロン）。   In the cerebral cortex, treatment with TC did not significantly protect any cortical area compared to DZP treatment at a dose of 30 mg / kg. At 60 mg / kg, TC significantly reduced neuronal loss only in layer II of the dorsal piriform cortex (25% loss compared to 66% in the DZP group). At 90 and 120 mg / kg, TC significantly protected all three areas of the piriform cortex compared to DZP treatment, and at the highest dose of TC, 120 mg / kg, neuron density was the neuronal population in the DZP group. Even in the piriform cortex, dorsal layer II and layer III, which were almost completely depleted, 78-96% of the control level was reached. In all layers of the dorsal and ventral entorhinal cortex, the two lowest doses of TC, 30 and 60 mg / kg, did not give any neuroprotection. The 90 mg / kg dose of TC significantly protected the II and III / IV layers of the ventral entorhinal cortex (in the dorsal II and II / IV layers compared to 19 and 73% in the DZP group and 4 and 17% injury remaining in layer II of ventral part). At the highest dose of TC, 120 mg / kg, all parts of both the dorsal and ventral entorhinal cortex were protected, and the number of neurons in these areas was no longer significantly different from levels in controls ( 85-94% neurons surviving compared to 27-81% in the DZP group).

自発性発作までの潜伏時間は、ＤＺＰ群（１４匹のラット）において１５．５±２．３日の平均値に達し、そしてＴＣ３０群（８匹のラット）において同様であった（１１．６±２．５日）。ＴＣのより高い濃度で、動物を短いおよび長い潜伏時間を有する亜群にさらに分割することができた。短い潜伏時間は、ＳＥ後４０日より短い任意の期間と考えられた。あるラットは、ＤＺＰおよびＴＣ群において記録されるものと同様である第１の自発性発作までの潜伏時間を示したが、この短い潜伏時間値を示すラットの数は、ＴＣ濃度の増加とともに次第に減少した。従って、３０ｍｇ／ｋｇで、ラットの７０％（７／１０）は発作までの短い潜伏時間を有し、一方、９０および１２０ｍｇ／ｋｇで、このパーセンテージはそれぞれ３６％（４／１１）および１１％（１／９）に達した（以下の表２および図５）。   Latency to spontaneous seizures reached a mean value of 15.5 ± 2.3 days in the DZP group (14 rats) and was similar in the TC30 group (8 rats) (11.6 ± 2.5 days). At higher concentrations of TC, the animals could be further divided into subgroups with short and long latency times. A short incubation time was considered as any period shorter than 40 days after SE. One rat showed latency to the first spontaneous seizure similar to that recorded in the DZP and TC groups, but the number of rats showing this short latency value gradually increased with increasing TC concentration. Diminished. Thus, at 30 mg / kg, 70% (7/10) of the rats have a short latency to seizure, whereas at 90 and 120 mg / kg, this percentage is 36% (4/11) and 11%, respectively. (1/9) was reached (Table 2 below and FIG. 5).

Figure 2008516961
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ＴＣ６０、９０および１２０群において、長い潜伏時間を有するラットの平均値は同様であり、そして５２〜８５日の間であった。最後に、ＴＣの２つの最も高い用量で、ＳＥ後１５０日の期間にわたっていかなる発作も発症しない一定の割合のラットを同定することができた。非癲癇性ラットのパーセンテージは、ＴＣの両方の用量で４５％に達した。   In the TC60, 90 and 120 groups, the mean values for rats with long incubation times were similar and between 52 and 85 days. Finally, with the two highest doses of TC, it was possible to identify a certain percentage of rats that did not develop any seizures over a period of 150 days after SE. The percentage of non-fertile rats reached 45% at both doses of TC.

自発性発作の頻度は、４週の記録にわたって同様であった。それはＤＺＰおよびＴＣ３０群においてより高い傾向を示し、一方、それはＴＣ６０、９０および１２０群においてより低かった(図６)。これらの差は、各個々の毎週の頻度のレベルで統計的優位性に達しなかったが、４週にわたる発作の総数もしくは平均数について優位性に達した。   The frequency of spontaneous seizures was similar across the 4 week record. It showed a higher trend in the DZP and TC30 groups, while it was lower in the TC60, 90 and 120 groups (FIG. 6). These differences did not reach a statistical advantage at the level of each individual weekly frequency, but reached an advantage over the total or average number of seizures over 4 weeks.

発作の数はまた、第１の自発性発作までの潜伏時間の期間に従ってプロットもした。短い潜伏時間を有する動物は、長い潜伏期を有するラットより４週の記録にわたって２〜３倍多い発作を表示する傾向を示した。おそらくはＴＣ１２０動物の短い潜伏時間亜群には１匹の動物しか存在しないという理由で（図７）、ＡＮＯＶＡはいかなる有意性も示さなかったので、統計分析を行うことはできなかった。しかしながら、全ての潜伏時間値を発作の数に対してプロットした場合、−０．４の相関係数を有する直線をもたらす有意な逆相関があった（図８）。   The number of seizures was also plotted according to the duration of latency to the first spontaneous seizure. Animals with a short incubation time tended to display 2-3 times more seizures over the 4-week recording than rats with a long incubation period. Statistical analysis could not be performed because ANOVA did not show any significance, probably because there was only one animal in the short latency subgroup of TC120 animals (FIG. 7). However, when all latency values were plotted against the number of seizures, there was a significant inverse correlation that resulted in a straight line with a correlation coefficient of −0.4 (FIG. 8).

この分析をまとめるために、もう２つの測定を行う。第１のものは、脳損傷の程度および位置と自発性発作の発生および／もしくはそれまでの潜伏時間との間の潜在的相関関係を調べるためにビデオ記録しそして第１の自発性発作後２ヶ月間追跡するかもしくは５ヶ月で殺した動物での細胞計数である。第二のものは、我々が５ヶ月で「非癲癇性」を示す動物が依然として無発作であるかどうかを調べるために１群のラットにおいて発作発生の１年のフォローアップを行うことである。   To summarize this analysis, two more measurements are made. The first was video-recorded to investigate the potential correlation between the extent and location of brain damage and the occurrence and / or latency to date of spontaneous seizures and 2 after the first spontaneous seizure. Cell counts in animals followed for months or killed at 5 months. The second is that we conduct a 1-year follow-up of seizures in a group of rats to see if animals that are “non-fertile” at 5 months are still seizures.

本研究の結果は、Ｌｉ−ｐｉｌｏで誘導されるＳＥの発症後１ｈで開始するＴＣでの処置が海馬のＣＡ１錐体細胞層において、そして腹側および背側梨状および内嗅皮質の全ての層において神経保護特性を有することを示す。ＴＣははまた、視床および扁桃核も保護する。しかしながら、ＴＣは、ＣＡ１、１つの視床核および１つの扁桃核においてを除いて、３０ｍｇ／ｋｇの用量で保護しない。６０ｍｇ／ｋｇの用量で、背側梨状皮質のＩＩ層および第二の扁桃核もまた保護される。９０および１２０ｍｇ／ｋｇで、該薬剤は、研究した大部分の脳領域を海馬ＣＡ３および歯状回の門を除いて保護する。後者の２つの構造に加えて背外側腹側背側視床核は、１２０ｍｇ／ｋｇのＴＣの用量でニューロンの数がコントロールから有意に異なったままである唯一の領域である。これらのデータから、ＴＣの非常に強力な神経保護特性が明らかに表示される。該分子は、Ｌｉ−ｐｉｌｏにより誘導される辺縁系癲癇の回路に属する大部分の領域、すなわち、海馬、視床、扁桃および海馬傍皮質においてニューロン死を防ぐようである。これらは全て、我々がＬｉ−ｐｉｌｏ処置ラットにおける癲癇発生の過程でＭＲＩシグナルを検出している領域である（Ｒｏｃｈ Ｃ，Ｌｅｒｏｙ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ，Ｎａｍｅｒ ＩＪ（２００２ａ）Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｌｏｂｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｉｎ ａｄｕｌｔ
ｒａｔｓ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４３：３２５−３３５）。ＴＣにより効率よく保護されない唯一の２領域は、ＣＡ３錐体細胞層および歯状回の門である。後者の領域は、迅速なそして大量の細胞損傷を受け（Ａｎｄｒe Ｖ，Ｍａｒｅｓｃａｕｘ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ，Ｆｒｉｔｓｃｈｙ ＪＭ（２００１）Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ＧＡＢＡｅｒｇｉｃ ｓｙｓｔｅｍ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｌｏｂｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ １１：４５２−４６８．；Ｒｏｃｈ Ｃ，Ｌｅｒｏｙ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ，Ｎａｍｅｒ ＩＪ（２００２ａ）Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｌｏｂｅ
ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４３：３２５−３３５）、そして前の研究において我々が使用した神経保護のいずれもこの構造を保護することができていない。我々はまた、以前の研究に基づいてＬｉ−ｐｉｌｏモデルにおける癲癇発作の開始および維持における重要な領域としてこの構造を同定している（Ｄｕｂe Ｃ，Ｍａｒｅｓｃａｕｘ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ（２０００）Ａ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ
ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆ ｐｌａｓｔｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍａｔｕｒｅ ａｎｄ ａｄｕｌｔ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｄｕｒｉｎｇ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｌｅｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４１（Ｓｕｐｐｌ ６）：Ｓ３６−Ｓ４３）。 The results of this study show that treatment with TC starting 1 h after the onset of Li-pilo induced SE in the hippocampal CA1 pyramidal cell layer and all of the ventral and dorsal piriform and entorhinal cortex Indicates that it has neuroprotective properties in the layer. TC also protects the thalamus and amygdala. However, TC does not protect at a dose of 30 mg / kg except in CA1, one thalamic nucleus and one amygdala. At a dose of 60 mg / kg, dorsal piriform cortex layer II and the second amygdala are also protected. At 90 and 120 mg / kg, the drug protects most of the brain regions studied except for hippocampal CA3 and dentate gyrus. In addition to the latter two structures, the dorsolateral ventral dorsal thalamic nucleus is the only area where the number of neurons remains significantly different from the control at a dose of 120 mg / kg TC. From these data, the very strong neuroprotective properties of TC are clearly displayed. The molecule appears to prevent neuronal death in most areas belonging to the circuit of the limbic fistula induced by Li-pilo, namely the hippocampus, thalamus, tonsils and hippocampal cortex. These are all areas where we detect MRI signals during the course of epilepsy in Li-pilo-treated rats (Roch C, Leroy C, Nehlig A, Namer IJ (2002a) Tribulation of magnetic resonance imaging to the test. of the lithium-pilocarpine model of temporal lobe epilepsy in adult
rats. Epilesia 43: 325-335). The only two regions that are not efficiently protected by TC are the CA3 pyramidal cell layer and the dentate gyrus. The latter area, rapid and received a large amount of cell damage (Andre V, Marescaux C, Nehlig A, Fritschy JM (2001) Alterations of the hippocampal GABAergic system contribute to the development of spontaneous recurrent seizures in the lithium-pilocarpine model of temporal lobe epilepsy.Hippocampus 11: 452-468.; Roch C, Leroy C, Nehlig A, Namer IJ (2002a) Contribution of magnetic resonance tomato. of the lithium-pilocarpine model of temporal lobe
epilepsy in adult rats. Epilesia 43: 325-335), and none of the neuroprotection we used in previous studies has been able to protect this structure. We have also identified this structure as an important region in the initiation and maintenance of epileptic seizures in the Li-pilo model based on previous studies (Dube C, Marescuux C, Nehrig A (2000) A metabolic and neuropathological approach). to the
understanding of plastic changes occurring in the immediate and adult brain braining lithium-pilocarpine induced epitogenesis. Epilesia 41 (Suppl 6): S36-S43).

明らかに、本データは、たとえ損傷がこの領域において全く顕著なままであっても癲癇発生を防止できることを示す。ビデオ記録している動物の群での長期の細胞計数は、この領域における損傷の程度がこのモデルにおける癲癇発生にとって重要であるかどうかを示すことができる。   Obviously, the data show that wrinkling can be prevented even if the damage remains quite noticeable in this area. Long-term cell counts in the group of animals recording video can indicate whether the extent of damage in this area is important for wrinkle development in this model.

処置は、３０ｍｇ／ｋｇの用量で第１の自発性発作までの潜伏時間に影響を与えなかった。３つのより高い用量で、一定の割合の動物はＤＺＰもしくはＴＣ３０ラットと同じぐらい早く癲癇を発症したが、この亜群の相対的重要性は使用したＴＣの用量に逆相関した
。サイズが一定である別の亜群（群当たり２〜４匹の動物）は４〜６倍長い潜伏時間の後に癲癇を発症し、一方、薬剤の２つの最も高い用量で、４〜５匹のラットは５ヶ月後（すなわち、短い潜伏時間の期間の約１０倍、そして長い潜伏期間のものの２〜３倍）に癲癇になっていなかった。癲癇の発生におけるこの遅延は、動物の基底皮質において保護されるニューロンの数と相関するかもしれない。この仮定は、我々がＳＥ後１４日で短期ニューロン計数に供した動物の基底皮質における神経保護の程度のいくらかの不均一性に気付いたことに基づく。しかしながら、現在、我々は癲癇発生の研究に使用した動物においてニューロン計数を行っておらず、従って、基底皮質において生存するニューロンの数と癲癇発生の割合もしくはその発生さえとの間の潜在的関係について結論を引き出すことはできない。 Treatment did not affect the latency to first spontaneous attack at a dose of 30 mg / kg. At the three higher doses, a certain percentage of animals developed epilepsy as early as DZP or TC30 rats, but the relative importance of this subgroup was inversely related to the dose of TC used. Another subgroup of constant size (2-4 animals per group) developed epilepsy after a 4-6 fold longer incubation time, while at the two highest doses of the drug, 4-5 Rats were not trapped after 5 months (ie, about 10 times the duration of the short incubation period and 2-3 times that of the long incubation period). This delay in wrinkle development may correlate with the number of neurons protected in the animal's basal cortex. This assumption is based on the fact that we noticed some heterogeneity in the degree of neuroprotection in the basal cortex of animals that were subjected to short-term neuronal counts 14 days after SE. However, currently we do not perform neuron counting in the animals used for the study of epilepsy, and therefore there is a potential relationship between the number of neurons surviving in the basal cortex and the rate or even the occurrence of epilepsy. No conclusion can be drawn.

本研究において得られるデータは、６０ｍｇ／ｋｇ用量の試験化合物（ＴＣ）が海馬および基底皮質をニューロン損傷から保護しそして再発性発作の発生を遅らせたことを報告するこのグループからの前の研究と一致する（実施例１を参照）。それらは、基底皮質の保護が癲癇のリチウム−ピロカルピンモデルで疾患改変効果を誘導することにおいて重要な因子であり得ることを裏付ける。癲癇プロセスのイニシエーターとしての基底皮質の重要な役割は、リチウム−ピロカルピンモデルにおいて我々のグループにより以前に示された（Ａｎｄｒe Ｖ，Ｒｉｇｏｕｌｏｔ ＭＡ，Ｋｏｎｉｎｇ Ｅ，Ｆｅｒｒａｎｄｏｎ
Ａ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ（２００３）Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｐｒｅｇａｂａｌｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｂａｓａｌ ｃｏｒｔｉｃｅｓ ａｎｄ ｄｅｌａｙｓ ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｓｅｉｚｕｒｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４４：８９３−９０３；Ｒｏｃｈ Ｃ，Ｌｅｒｏｙ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ，Ｎａｍｅｒ ＩＪ（２００２ａ）Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｌｏｂｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４３：３２５−３３５；Ｒｏｃｈ Ｃ，Ｌｅｒｏｙ Ｃ，Ｎｅｈｌｉｇ Ａ，Ｎａｍｅｒ ＩＪ（２００２ｂ）Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｌｏｂｅ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｉｎ Ｐ２１−ｄａｙ−ｏｌｄ ｒａｔｓ：ａ ＭＲＩ ａｐｐｒｏａｃｈ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｔｈｉｕｍ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ ４３：１１２９−１１３６）。 The data obtained in this study is consistent with previous studies from this group reporting that a 60 mg / kg dose of test compound (TC) protected the hippocampus and basal cortex from neuronal damage and delayed the occurrence of recurrent seizures. Match (see Example 1). They support that protection of the basal cortex can be an important factor in inducing disease modifying effects in the lithium-pilocarpine model of epilepsy. The critical role of the basal cortex as an acupuncture process initiator was previously shown by our group in the lithium-pilocarpine model (Andre V, Rigulot MA, Konning E, Ferrandon
A, Nehrig A (2003) Long-term pregabalin treatment protections basal cortices and delays the occultence of the stenoids in the intiminepile. Epissia 44: 893-903; Roch C, Leroy C, Nehlig A, Name IJ (2002a) Contribution of magnetic resorpment of the energy of the symposium. Epilepsia 43: 325-335; Roch C, Leroy C, Nehlig A, Namer IJ (2002b) Predictive value of cortical injury for the development of temporal lobe epilepsy in P21-day-old rats: a MRI approach using the lithium-pilocarpine model . Epilepsia 43: 1129-1136).

実施例２の参考文献
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ＰＣ１２細胞血清枯渇モデル
血清枯渇は、培養した細胞系においてならびに神経細胞を包含する様々な組織由来の一次細胞において細胞死をもたらす細胞傷害性環境挑戦である。特に、褐色細胞腫（ＰＣ）１２細胞は、多種多様な神経変性および細胞死関連障害のインビトロニューロン細胞モデルとして広く用いられている（Ｍｕｒｉｅｌ，ｅｔ ａｌ，Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ
ｆｒｅｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｌｅｖｅｌｓ（Ｒｈｏｄ−２ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｄｕｒｉｎｇ ｃｅｒａｍｉｄｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２０００，４２６（２），２９７−３１５；Ｄｅｒｍｉｔｚａｋｉ，ｅｔ ａｌ，Ｏｐｉｏｉｄｓ ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ ｐｒｅｖｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ｏｆ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｓｈｏｒｔ
ｐｅｒｉｏｄｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ，Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，２０００，７４（３），９６０−９６９；Ｃａｒｌｉｌｅ，ｅｔ ａｌ，Ｒｅｄｕ
ｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ：ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｔｅｔｒａｍｅｒｉｃ ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｔｏ ａ ｄｉｍｅｒ，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２０００，５７（１），２−１２）。ＰＣ１２細胞を１０％の熱不活性化ウマ血清および５％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足した無菌培地（ＲＰＭＩ １６４０）において培養した。培養培地はまた、ペニシリン−ストレプトマイシン−ネオマイシン抗生物質（それぞれ、５０．ｍｕ．ｇ、５０．ｍｕ．ｇ、１００．ｍｕ．ｇ）も含有した。培地を一日おきに交換し、そして細胞を融合近くで対数期において継代した。 PC12 cell serum depletion model serum depletion is a cytotoxic environmental challenge that results in cell death in cultured cell lines as well as in primary cells from a variety of tissues, including neurons. In particular, pheochromocytoma (PC) 12 cells are widely used as an in vitro neuronal cell model for a wide variety of neurodegenerative and cell death related disorders (Muriel, et al, Mitochondrial).
free calcium levels (Rhod-2 fluorescens) and ultrastructural alterations in newly differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death. Comp. Neurol. , 2000, 426 (2), 297-315; Dermitzaki, et al, Opioids transient prevent activation.
of apoptotic mechanisms following shorting
periods of serum withdrawal, J. et al. Neurochem. , 2000, 74 (3), 960-969; Carlele, et al, Redu.
ced apoptosis after nerve growth factor and serum withdrawal: conversion of tetrameric glyceraldehyde-3, phosphate dehydrogenaseol dimermer. 2000, 57 (1), 2-12). PC12 cells were cultured in sterile medium (RPMI 1640) supplemented with 10% heat-inactivated horse serum and 5% fetal bovine serum (FBS). The culture medium also contained penicillin-streptomycin-neomycin antibiotics (50.mu.g, 50.mu.g, 100.mu.g, respectively). The medium was changed every other day and the cells were passaged in log phase near the fusion.

コントロール細胞は、いかなる処置もなしに通常の培地において培養した。式７もしくは式８の鏡像異性体（１０．ｍｕ．Ｍ）を培地においてよく混合し、そして次に細胞に適用した。２日のアッセイでは、式７もしくは式８の鏡像異性体（１０．ｍｕ．Ｍ）を血清枯渇の時点で1回細胞に適用しただけであった。７日のアッセイでは、式７もしくは式８の鏡像異性体（１０．ｍｕ．Ｍ）を血清枯渇の時点で、そして細胞を新鮮な新しい無血清培地で交換する場合にその後４８ｈｒごとに細胞に適用した。血清枯渇群において、式７もしくは式８の追加の鏡像異性体を有さない無血清培地において細胞を培養した。細胞生存は、血清枯渇後２もしくは７日で３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシ− −メトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム内塩（ＭＴＳ）アッセイにより決定した。   Control cells were cultured in normal media without any treatment. The enantiomer of formula 7 or formula 8 (10.mu.M) was mixed well in the medium and then applied to the cells. In the 2-day assay, the enantiomer of formula 7 or formula 8 (10.mu.M) was only applied to the cells once at the time of serum deprivation. In the 7 day assay, the enantiomer of formula 7 or formula 8 (10.mu.M) is applied to the cells at the time of serum depletion and every 48 hr thereafter when the cells are replaced with fresh fresh serum-free medium. did. In the serum-depleted group, cells were cultured in serum-free medium without the additional enantiomer of Formula 7 or Formula 8. Cell survival was observed at 3- or 7-days after serum deprivation by 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -5- (3-carboxy-methoxyphenyl) -2- (4-sulfophenyl) -2H- Determined by tetrazolium inner salt (MTS) assay.

実験の終わりに、細胞を新鮮培地で洗浄し、そして５％ＣＯ２を有する加湿した３７℃インキュベーターにおいてＭＴＳ溶液と１．５ｈｒインキュベーションした。インキュベーション期間の後に、細胞をＳｏｆｔｍａｘプログラム（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いてすぐに分析した。ＭＴＳアッセイは、既定の実験設定における生存細胞の数を決定するための熱量測定法である。アッセイは、組織培養培地に可溶性でありそして９６ウェルアッセイプレートにおいて４９０ｎｍで直接測定されるホルマザンへのテトラゾリウム塩、ＭＴＳの細胞内転化に基づく。吸光度は、培養下の生細胞の数に直接比例する。コントロール細胞における任意の吸光度読み取りは、１００％の生存率として表される。   At the end of the experiment, cells were washed with fresh media and incubated with MTS solution for 1.5 hr in a humidified 37 ° C. incubator with 5% CO 2. After the incubation period, the cells were analyzed immediately using the Softmax program (Molecular Devices). The MTS assay is a calorimetric method for determining the number of viable cells in a given experimental setting. The assay is based on the intracellular conversion of tetrazolium salt, MTS to formazan, which is soluble in tissue culture medium and measured directly at 490 nm in a 96-well assay plate. Absorbance is directly proportional to the number of living cells in culture. Any absorbance reading in control cells is expressed as 100% viability.

表３は、ＰＣ１２細胞血清枯渇モデルにおける式７および式８の経口投与した鏡像異性体の細胞生存率への効果を示すデータを記載する。   Table 3 lists data showing the effect on cell viability of orally administered enantiomers of Formula 7 and Formula 8 in the PC12 cell serum depletion model.

Figure 2008516961
Figure 2008516961

一過性脳虚血ラットモデル
式７の鏡像異性体（試験化合物）を一過性脳虚血中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットモデルにおいて１０および１００ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）でオスウィスターラットを用いて調べた（Ｎａｇａｓａｗａ Ｈ．ａｎｄ Ｋｏｇｕｒｅ Ｋ．，Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９
，２０，１０３７；およびＺｅａ Ｌｏｎｇａ Ｅ．，Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ Ｐ．Ｒ．，Ｃａｒｌｓｏｎ Ｓ．ａｎｄ Ｃｕｍｍｉｎｓ Ｒ．，Ｓｔｒｏｋｅ，１９８９，２０，８４に記載のとおり）。ＭＫ８０１（マレイン酸ジゾシルピン；ＣＡＳ登録番号７７０８６−２２−７、市販されている神経保護化合物）を陽性コントロールとして用いた（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）。 Transient cerebral ischemic rat model Formula 7 enantiomer (test compound) at 10 and 100 mg / kg (iv) in the transient cerebral ischemic middle cerebral artery occlusion (MCAO) rat model (Nagazawa H. and Kogure K., Stroke, 1989
, 20, 1037; and Zea Longa E .; , Weinstein P .; R. , Carlson S. and Cummins R.M. , Stroke, 1989, 20, 84). MK801 (dizocilpine maleate; CAS registry number 77086-22-7, commercially available neuroprotective compound) was used as a positive control (3 mg / kg, ip).

ラット（ｎ＝１２）を４つの実験群の１つに無作為に割り当て、そして麻酔した。内頚動脈、前大脳動脈および後大脳動脈から中大脳動脈への血流をこの方法により遮断した。遮断後１時間で、動物を１時間の期間にわたって賦形剤（１時間の期間にわたってｉ．ｖ．投与する）、コントロール（１時間の期間の開始時に単回ｉ．ｐ．用量として投与する）および２用量の式７の鏡像異性体（１時間の期間にわたってｉ．ｖ．投与する）で処置した。遮断後２時間で、再かん流を行った。動物を殺し、そして各脳の２０ｍｍの厚さの冠状切片を調製した。前〜後頭皮質の４０切片ごと（すなわち、８００ｎＭごと）に１つを用いて脳病変の程度を定量化した。クレシルバイオレットで（ニッスル法に従って）染色した切片を用いてスライドガラスを調製し、そして光学顕微鏡下で調べた。   Rats (n = 12) were randomly assigned to one of four experimental groups and anesthetized. Blood flow from the internal carotid artery, the anterior cerebral artery and the posterior cerebral artery to the middle cerebral artery was blocked by this method. At 1 hour after block, animals are given vehicle (administered iv over 1 hour period), control (administered as a single ip dose at the beginning of the 1 hour period). And 2 doses of the enantiomer of Formula 7 (administered iv over a 1 hour period). Reperfusion was performed 2 hours after blocking. The animals were sacrificed and 20 mm thick coronal sections of each brain were prepared. The extent of brain lesions was quantified using one for every 40 sections of the pre-occipital cortex (ie every 800 nM). Glass slides were prepared using sections stained with cresyl violet (according to the Nissl method) and examined under a light microscope.

個々のラットの冠状切片における局所虚血表面積を形態学的変化を有する細胞の存在に従って決定した。ニューロン損傷もしくは梗塞の面積を測定し、そして次に加えた。皮質および線条体容積を各動物について計算した（総虚血表面積ｘ０．８ｍｍ（厚さ））。   The local ischemic surface area in coronal sections of individual rats was determined according to the presence of cells with morphological changes. The area of neuronal injury or infarct was measured and then added. Cortical and striatum volumes were calculated for each animal (total ischemic surface area x 0.8 mm (thickness)).

ＭＣＡＯモデル分析
４つの実験群に無作為に割り当てられた各動物の平均容積（．＋−．Ｓ．Ｅ．Ｍ．）を１元配置ＡＮＯＶＡ（１元配置ＡＮＯＶＡは、３つもしくはそれ以上の一致しない群を比較する統計的方法である）、続いてダネットt検定を用いて比較した（両方の方法は、Ｓｔａｔｖｉｅｗ ５１２＋ソフトウェア，ＢａｒｉｎＰｏｗｅｒ，Ｃａｌａｂａｓａｓ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡに組み込まれる）。 MCAO model analysis The mean volume (. +-. SEM) of each animal randomly assigned to the four experimental groups is one-way ANOVA (one-way ANOVA is 3 or more matches) This is a statistical method of comparing non-groups) followed by comparison using Dunnett's t-test (both methods are incorporated into Statview 512+ software, BarinPower, Calabasas, Calif., USA).

以下の表４に示されるように、ｐ値が賦形剤群と比較して＜０．０５であった場合に結果は統計的に有意であるとみなした（１ｐ＜０．０１；２ｐ＜０．０５）。 As shown in Table 4 below, the results were considered statistically significant when the p-value was <0.05 compared to the vehicle group ( 1 p <0.01; 2 p <0.05).

Figure 2008516961
Figure 2008516961

以下の実施例において言及される試験化合物（ＴＣ）は、式７の化合物ならびに上記の他の実施例１および２と同じ化合物である。   The test compound (TC) referred to in the following examples is the same compound as the compound of formula 7 and the other examples 1 and 2 above.

本研究の目的は、臨床的に関連する用量で成人健常者における単回および反復経口投与後の試験化合物（ＴＣ）の薬物動態学（ＰＫ）を評価することであった。   The purpose of this study was to evaluate the pharmacokinetics (PK) of test compound (TC) after single and repeated oral administration in healthy adults at clinically relevant doses.

方法：
２つの単一施設、プラセボ対照、二重盲検、漸増用量研究を＞１８および＜４５歳の健常人において行った。研究１（Ｎ＝７０）において、被験体を試験化合物（ＴＣ）もしくはプラセボの単回投与に無作為に割り当てた。増量する用量は、１００、２５０、４００、７５０、１０００、１２５０および１５００ｍｇとして与えた。ＰＫパラメーターは、投与後３日まで集めた血漿および尿サンプルから概算した。研究２（Ｎ＝５３）は、４つの投与群（１００、２５０、５００もしくは７５０ｍｇ）における試験化合物（ＴＣ）の反復投与のＰＫを評価した。各群内で、１２人の被験体を１ｗｋにわたる薬剤もしくはプラセボでのｑ１２ｈ処置に割り当て、そして１４日のウォッシュアウト期間の後に交差した。ＰＫパラメーターを１および７日目に血漿および尿サンプルから概算した。 Method:
Two single center, placebo-controlled, double-blind, incremental dose studies were performed in > 18 and < 45 year old healthy individuals. In Study 1 (N = 70), subjects were randomly assigned to a single dose of test compound (TC) or placebo. Increasing doses were given as 100, 250, 400, 750, 1000, 1250 and 1500 mg. PK parameters were estimated from plasma and urine samples collected up to 3 days after dosing. Study 2 (N = 53) evaluated the repeated dose PK of the test compound (TC) in four dose groups (100, 250, 500 or 750 mg). Within each group, 12 subjects were assigned q12h treatment with 1 wk of drug or placebo and crossed after a 14 day washout period. PK parameters were estimated from plasma and urine samples on days 1 and 7.

結果：
単回投与：試験化合物（ＴＣ）は、経口投与後に迅速に吸収された。ＣｍａｘおよびＡＵＣ０〜∞は、１００〜１５００ｍｇの範囲にわたって用量に比例して増加した。平均ｔｍａｘは、１．３〜２．７ｈの間であった。平均ｔ１／２（１１．５〜１３．９ｈ）、ＣＬ／Ｆ（２．８７〜３．６７Ｌ／ｈ）およびＶｄ／Ｆ（５２．１〜６６．３Ｌ／ｈ）値は、全ての７投与群について同様であった。 result:
Single dose: Test compound (TC) was rapidly absorbed after oral administration. C max and AUC 0-∞ increased proportionally over the range of 100-1500 mg. The average t max was between 1.3 and 2.7 h. Mean t 1/2 (11.5 to 13.9 h), CL / F (2.87 to 3.67 L / h) and Vd / F (52.1 to 66.3 L / h) values for all 7 The same was true for the administration group.

反復投与：試験化合物の（ＴＣ）の血漿濃度は、その単回投与半減期から予測されるように３〜４日後に定常状態に到達した。平均ｔｍａｘは、投与後１．３〜１．８ｈで起こった。定常状態での平均ｔ１／２（１１．９〜１２．８ｈ）およびＣＬ／Ｆ（３．４０〜３．７８Ｌ／ｈ）値は、１日目のそして研究１における単回用量投与後のＰＫパラメーターに匹敵した。定常状態ＣｍａｘおよびＡＵＣ０〜１２は、用量に比例して増加した。 Repeated administration: The plasma concentration of the test compound (TC) reached steady state after 3-4 days as predicted by its single dose half-life. Mean t max occurred 1.3-1.8 h after dosing. Mean t 1/2 (11.9 to 12.8 h) and CL / F (3.40 to 3.78 L / h) values at steady state were observed on day 1 and after single dose administration in Study 1. Comparable to PK parameters. Steady state C max and AUC 0-12 increased in proportion to dose.

予想されるように、中程度の試験化合物（ＴＣ）蓄積があり；ＣｍａｘおよびＡＵＣ０〜１２は、１日目に対して７日目に約２倍高かった（Ｐ＜０．００１）。試験化合物（ＴＣ）の平均ＣＬＲ概算は平均経口クリアランスの＜５％であり、試験化合物（ＴＣ）除去の主要機序として非腎クリアランスを示唆する。 As expected, there was moderate test compound (TC) accumulation; C max and AUC 0-12 were about twice as high on day 7 as compared to day 1 (P <0.001). The average CL R approximate test compound (TC) is <5% of the average oral clearance, suggesting non renal clearance as the primary mechanism of the test compound (TC) elimination.

結論：
試験化合物（ＴＣ）は、単回（１００〜１５００ｍｇ）および反復（１００〜７５０ｍｇ ｂｉｄ）投与後に直線状ＰＫを示した。それは迅速に吸収され、そして１１．５〜１３．９ｈの平均排除半減期を有し、ｂｉｄ投薬を可能にする。ｑ１２ｈ投与後に、試験化合物（ＴＣ）は２倍蓄積し、そして非腎経路により主に取り除かれた。 Conclusion:
The test compound (TC) showed linear PK after single (100-1500 mg) and repeated (100-750 mg bid) administration. It is rapidly absorbed and has an average elimination half-life of 11.5 to 13.9 h, allowing bid dosing. After q12h administration, the test compound (TC) accumulated twice and was largely removed by non-renal route.

引用する参考文献
本明細書に引用する全ての引用文献は、各個々の公開もしくは特許もしくは特許出願が全ての目的のためにその全部が引用することにより組み込まれると特にそして個々に示されるように同程度にそれらの全部がそしてすべての目的のために引用することにより本明細書に組み込まれる。 All references cited herein are specifically and individually indicated when each individual publication or patent or patent application is incorporated by reference in its entirety for all purposes. To the same extent, all of them are incorporated herein by reference for all purposes.

本明細書における参考文献の説明は、それらの著者により行われる主張を単に要約するものとし、そして任意の参考文献が先行技術を構成することは認められない。出願者は、引用する参考文献の正確さおよび適切性に異議を申し立てる権利を留保する。   The discussion of references herein is merely a summary of the claims made by their authors, and no admission is made that any reference constitutes prior art. Applicant reserves the right to challenge the accuracy and appropriateness of the cited references.

本発明は本願に記載される特定の態様に関して限定されず、それらは本発明の個々の態様の１つの説明として意図される。当業者に明らかであるように、本発明の多数の改変およびバリエーションをその精神および範囲からそれることなしに行うことができる。本明細書に列挙されるものに加えて、本発明の範囲内の機能的に同等な方法および装置は、先の記述および添付の図面から当業者に明らかである。そのような改変およびバリエーショ
ンは、添付の請求項の範囲内に入るものとする。本発明は、そのような請求項が権利を有する同等物の全範囲と一緒に、添付の請求項に関してのみ限定される。 The present invention is not limited with respect to the particular embodiments described herein, which are intended as an illustration of individual embodiments of the invention. Many modifications and variations of this invention can be made without departing from its spirit and scope, as will be apparent to those skilled in the art. In addition to those enumerated herein, functionally equivalent methods and apparatus within the scope of the invention will be apparent to those skilled in the art from the foregoing description and accompanying drawings. Such modifications and variations are intended to fall within the scope of the appended claims. The invention is limited only with reference to the appended claims, along with the full scope of equivalents to which such claims are entitled.

ｌｉ−ｐｉｌｏ ＳＥ後１４日で計数した海馬の異なる領域におけるニューロンの数へのＴＣの増加する用量の効果を示すグラフである。値は、興味のある各領域におけるニューロン細胞体の数±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。FIG. 5 is a graph showing the effect of increasing doses of TC on the number of neurons in different regions of the hippocampus counted 14 days after li-pilo SE. Values are the number of neuronal cell bodies in each region of interest ± S. E. M.M. Represented as: ｌｉ−ｐｉｌｏ ＳＥ後１４日で計数した扁桃の異なる核におけるニューロンの数へのＴＣの増加する用量の効果を示すグラフである。値は、興味のある各領域におけるニューロン細胞体の数±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。FIG. 5 is a graph showing the effect of increasing doses of TC on the number of neurons in different nuclei of tonsils counted 14 days after li-pilo SE. Values are the number of neuronal cell bodies in each region of interest ± S. E. M.M. Represented as: ｌｉ−ｐｉｌｏ ＳＥ後１４日で計数した視床の異なる核におけるニューロンの数へのＴＣの増加する用量の効果を示すグラフである。値は、興味のある各領域におけるニューロン細胞体の数±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。FIG. 6 is a graph showing the effect of increasing doses of TC on the number of neurons in different nuclei of the thalamus counted 14 days after li-pilo SE. Values are the number of neuronal cell bodies in each region of interest ± S. E. M.M. Represented as: ｌｉ−ｐｉｌｏ ＳＥ後１４日で計数した皮質の異なる領域におけるニューロンの数へのＴＣの増加する用量の効果を示すグラフである。値は、興味のある各領域におけるニューロン細胞体の数±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。FIG. 6 is a graph showing the effect of increasing doses of TC on the number of neurons in different areas of the cortex counted 14 days after li-pilo SE. Values are the number of neuronal cell bodies in each region of interest ± S. E. M.M. Represented as: 第１の自発性発作までの潜伏時間へのＴＣの増加する用量の効果を示すグラフである。値は、各群の日単位の平均潜伏時間±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。FIG. 3 is a graph showing the effect of increasing doses of TC on latency to first spontaneous seizure. Values are the daily mean latency of each group ± S. E. M.M. Represented as: ４週の期間にわたってビデオで記録した自発性発作の頻度へのＴＣの増加する用量の効果を示すグラフである。値は、発作の平均数±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。合計は４週のビデオ記録の間に認められた発作の総数を表し、そして平均は週当たりの発作の平均数を表す。Ａｎｏｖａ検定は、発作の総数（ｐ＝０．０４５）および週当たりの発作の平均数（ｐ＝０．０４５）への処置の効果を示した。FIG. 4 is a graph showing the effect of increasing doses of TC on the frequency of spontaneous seizures recorded video over a 4 week period. Values are mean number of seizures ± S. E. M.M. Represented as: The total represents the total number of seizures observed during the 4 week video recording, and the average represents the average number of seizures per week. The Anova test showed the effect of treatment on the total number of seizures (p = 0.045) and the average number of seizures per week (p = 0.045). 第１の自発性発作までの潜伏時間に従ってプロットした４週にわたってビデオで記録した発作の総数を示す（ＳＬ＝短い潜伏時間、ＬＬ＝長い潜伏時間）。値は、各亜群の発作の平均数±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。ＡＮＯＶＡ検定は、処置のいかなる有意な効果も示さなかった。The total number of seizures recorded video over 4 weeks plotted according to latency to first spontaneous seizure is shown (SL = short latency, LL = long latency). Values are mean number of seizures in each subgroup ± SEM E. M.M. Represented as: The ANOVA test did not show any significant effect of treatment. 第１の自発性発作までの潜伏時間とその後の４週の間に認められる発作の総数との間の相関関係を示す。Figure 2 shows the correlation between the latency to first spontaneous seizure and the total number of seizures observed during the subsequent 4 weeks.

Claims (46)

式（Ｉ）および式（ＩＩ）：
Figure 2008516961
 ［式中、
フェニルはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素よりなる群から選択される１〜５個のハロゲン原子でＸにおいて置換され；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルよりなる群から独立して選択され；ここで、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは場合によりフェニルで置換されていてもよい（ここで、フェニルは場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロおよびシアノよりなる群から独立して選択される置換基で置換されていてもよい）］
よりなる群から選択される化合物またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルの治療的に有効な量を神経保護薬（ＮＰＤ）での処置を必要とする患者に投与することを含んでなる神経保護を与える方法。 Formula (I) and Formula (II):
Figure 2008516961
 [Where:
Phenyl is substituted at X with 1 to 5 halogen atoms selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine and iodine; and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are hydrogen and Independently selected from the group consisting of C 1 -C 4 alkyl; wherein C 1 -C 4 alkyl is optionally substituted with phenyl, where phenyl is optionally halogen, C 1 -C And optionally substituted with a substituent independently selected from the group consisting of 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro and cyano)]
Administering to a patient in need of treatment with a neuroprotective drug (NPD) a therapeutically effective amount of a compound selected from the group consisting of or a pharmaceutically acceptable salt or ester thereof. How to give neuroprotection. Ｘが塩素である請求項１の方法。   The method of claim 1, wherein X is chlorine. Ｘがフェニル環のオルト位で置換される請求項１の方法。   The method of claim 1, wherein X is substituted at the ortho position of the phenyl ring. Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素から選択される請求項１の方法。 The method of claim 1, wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are selected from hydrogen. 式（Ｉ）および式（ＩＩ）：
Figure 2008516961
 ［式中、
フェニルはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素よりなる群から選択される１〜５個のハロゲン原子でＸにおいて置換され；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルよりなる群から独立して選択され；ここで、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは場合によりフェニルで置換されていてもよい（ここで、フェニルは場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロおよびシアノよりなる群から独立して選択される置換基で置換されていてもよい）］
よりなる群から選択される鏡像異性体またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルあるいは式（Ｉ）および式（ＩＩ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が優位である鏡像異性体混合物の治療的に有効な量を神経保護薬（ＮＰＤ）での処置を必要とする患者に投与することを含んでなる神経保護を与える方法。 Formula (I) and Formula (II):
Figure 2008516961
 [Where:
Phenyl is substituted at X with 1 to 5 halogen atoms selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine and iodine; and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are hydrogen and Independently selected from the group consisting of C 1 -C 4 alkyl; wherein C 1 -C 4 alkyl is optionally substituted with phenyl, where phenyl is optionally halogen, C 1 -C And optionally substituted with a substituent independently selected from the group consisting of 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro and cyano)]
Enantiomers selected from the group consisting of or pharmaceutically acceptable salts or esters thereof or one enantiomer selected from the group consisting of formulas (I) and (II) A method of providing neuroprotection comprising administering to a patient in need of treatment with a neuroprotective drug (NPD) a therapeutically effective amount of a body mixture. Ｘが塩素である請求項５の方法。   The method of claim 5, wherein X is chlorine. Ｘがフェニル環のオルト位で置換される請求項５の方法。   6. The method of claim 5, wherein X is substituted at the ortho position of the phenyl ring. Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素から選択される請求項５の方法。 R 1, R 2, R 3 , R 4, The method of claim 5 wherein R 5 and R 6 are selected from hydrogen. 式（Ｉ）および式（ＩＩ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が約９０％もしくはそれ以上の程度まで優位である請求項５の方法。   6. The method of claim 5, wherein one enantiomer selected from the group consisting of formula (I) and formula (II) is predominant to the extent of about 90% or more. 式（Ｉ）および式（ＩＩ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が約９８％もしくはそれ以上の程度まで優位である請求項５の方法。   6. The method of claim 5, wherein one enantiomer selected from the group consisting of formula (I) and formula (II) predominates to a degree of about 98% or more. 式（Ｉ）および式（ＩＩ）よりなる群から選択される鏡像異性体が式（Ｉａ）および式（ＩＩａ）：
Figure 2008516961
 ［式中、
フェニルはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素よりなる群から選択される１〜５個のハロゲン原子でＸにおいて置換され；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルよりなる群から独立して選択され；ここで、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは場合によりフェニルで置換されていてもよい（ここで、フェニルは場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロおよびシアノよりなる群から独立して選択される置換基で置換されていてもよい）］
よりなる群から選択される鏡像異性体である請求項５の方法。 Enantiomers selected from the group consisting of Formula (I) and Formula (II) are Formula (Ia) and Formula (IIa):
Figure 2008516961
 [Where:
Phenyl is substituted at X with 1 to 5 halogen atoms selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine and iodine; and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are hydrogen and Independently selected from the group consisting of C 1 -C 4 alkyl; wherein C 1 -C 4 alkyl is optionally substituted with phenyl, where phenyl is optionally halogen, C 1 -C And optionally substituted with a substituent independently selected from the group consisting of 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro and cyano)]
6. The method of claim 5, which is an enantiomer selected from the group consisting of: Ｘが塩素である請求項１１の方法。   The method of claim 11 wherein X is chlorine. Ｘがフェニル環のオルト位で置換される請求項１１の方法。   12. The method of claim 11, wherein X is substituted at the ortho position of the phenyl ring. Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素から選択される請求項１１の方法。 R 1, R 2, R 3 , R 4, The method of claim 11, wherein R 5 and R 6 are selected from hydrogen. 式（Ｉａ）および式（ＩＩａ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が約９０％もしくはそれ以上の程度まで優位である請求項１１の方法。   12. The method of claim 11, wherein one enantiomer selected from the group consisting of formula (Ia) and formula (IIa) predominates to the extent of about 90% or more. 式（Ｉａ）および式（ＩＩａ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が約９８％もしくはそれ以上の程度まで優位である請求項１１の方法。   12. The method of claim 11, wherein one enantiomer selected from the group consisting of formula (Ia) and formula (IIa) predominates to the extent of about 98% or more. 式（Ｉ）および式（ＩＩ）よりなる群から選択される鏡像異性体が式（Ｉｂ）および式（ＩＩｂ）：
Figure 2008516961
 よりなる群から選択される鏡像異性体である請求項５の方法。 Enantiomers selected from the group consisting of Formula (I) and Formula (II) are Formula (Ib) and Formula (IIb):
Figure 2008516961
 6. The method of claim 5, which is an enantiomer selected from the group consisting of: 式（Ｉｂ）および式（ＩＩｂ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が約９０％もしくはそれ以上の程度まで優位である請求項１７の方法。   18. The method of claim 17, wherein one enantiomer selected from the group consisting of formula (Ib) and formula (IIb) predominates to the extent of about 90% or more. 式（Ｉｂ）および式（ＩＩｂ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が約９８％もしくはそれ以上の程度まで優位である請求項１７の方法。   18. The method of claim 17, wherein one enantiomer selected from the group consisting of formula (Ib) and formula (IIb) predominates to the extent of about 98% or more. 患者が神経保護を必要とする状態にするニューロン損傷の可能な原因（１つもしくは複数）が：外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、鈍的および穿通性頭部外傷を包含するＣＮＳもしくはＰＮＳへの任意の種類の損傷もしくは外傷；ＣＮＳの感染；酸素欠乏症；発作（ＣＶＡ）；ＣＮＳを冒す自己免疫疾患、例えば狼瘡；分娩外傷、例えば周産期仮死；心停止；治療的もしくは診断的血管外科的処置、例えば頸動脈血管内膜切除術もしくは脳血管造影；脊髄損傷；低血圧；塞栓、過かん流もしくは低かん流からのＣＮＳへの損傷；代謝障害、例えば糖尿病、低酸素症；ＮＰＤに反応することが既知である障害に対する既知の遺伝的素因；ＣＮＳの空間占拠性病変；脳腫瘍、例えばグリア芽腫；ＣＮＳにおけるかもしくはその周囲の出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇ）もしくは出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）、例えば脳内出血もしくは硬膜下血腫；脳浮腫；熱性痙攣；高体温；薬物乱用、外傷、発作、虚血、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、プリオン病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性神経障害、オリーブ橋小脳萎縮症、癲癇、発作、低血糖症、手術もしくは他の介入、網膜虚血（糖尿病性かそうでないもの）、緑内障、網膜変性、多発性硬化症、中毒性および虚血性視神経障害、黄斑変性、毒性のもしくは有毒な薬剤へのＣＮＳもしくはＰＮＳの暴露；薬物中毒もしくは離脱症状、例えばコカインもしくはアルコール；神経変性障害もしくは関連症状の家族歴、癲癇重積持続状態の病歴；患者が神経保護薬（ＮＰＤ）での処置を必要とするという代理マーカーもしくはバイオマーカーからの証拠、例えば構造もしくは機能病変を示すＭＲＩスキャン、ニューロン分解産物の上昇した血清レベル、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）の上昇したレベルよりなる群から選択される請求項１もしくは５に記載の方法。   Any possible cause (s) of neuronal damage that makes the patient in need of neuroprotection: any to CNS or PNS, including traumatic brain injury (TBI), blunt and penetrating head trauma Types of injury or trauma; CNS infection; hypoxia; seizures (CVA); autoimmune diseases affecting CNS, eg lupus; labor trauma, eg perinatal asphyxia; cardiac arrest; therapeutic or diagnostic vascular surgical procedures Carotid endarterectomy or cerebral angiography; spinal cord injury; hypotension; damage to the CNS from embolism, hyperperfusion or hypoperfusion; metabolic disorders such as diabetes, hypoxia; responsive to NPD Known genetic predisposition to disorders known to be; spatially-occupying lesions of the CNS; brain tumors such as glioblastoma; bleeding in or around the CNS (bleedin) ) Or hemorrhage, such as intracerebral hemorrhage or subdural hematoma; brain edema; thermal convulsions; hyperthermia; Felt-Jakob disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), diabetic neuropathy, olive bridge cerebellar atrophy, epilepsy, stroke, hypoglycemia, surgery or other intervention, retinal ischemia (diabetic or not ), Glaucoma, retinal degeneration, multiple sclerosis, toxic and ischemic optic neuropathy, macular degeneration, exposure of CNS or PNS to toxic or toxic drugs; drug addiction or withdrawal symptoms such as ***e or alcohol; nerves Family history of degenerative disorder or related symptoms, history of status epilepticus; patients require treatment with neuroprotective drugs (NPD) Evidence from surrogate markers or biomarkers such as MRI scans showing structural or functional lesions, elevated serum levels of neuronal degradation products, elevated levels of ciliary neurotrophic factor (CNTF) The method according to claim 1 or 5. 患者が神経保護を必要とする状態にする素因（１つもしくは複数）が：外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、鈍的、閉鎖性および穿通性頭部外傷；手術、発作もしくは他の脳血管障害（ＣＶＡ）；癲癇重積持続状態ならびにＣＮＳの空間占拠性病変よりなる群から選択される請求項２０の方法。   Predisposition (s) that make a patient in need of neuroprotection are: traumatic brain injury (TBI), blunt, obstructive and penetrating head trauma; surgery, stroke or other cerebrovascular disorders ( 21. The method of claim 20, wherein the method is selected from the group consisting of: CVA); Scum status as well as CNS space-occupying lesions. 該素因（１つもしくは複数）が鈍的、閉鎖性もしくは穿通性頭部外傷を包含する外傷性脳損傷（ＴＢＩ）および外科的介入である請求項２１の方法。   24. The method of claim 21, wherein the predisposition (s) is traumatic brain injury (TBI), including blunt, obstructive or penetrating head trauma and surgical intervention. 該素因（１つもしくは複数）が発作もしくは他の脳血管障害（ＣＶＡ）である請求項２１の方法。   24. The method of claim 21, wherein the predisposition (s) is seizures or other cerebrovascular disorders (CVA). 該素因が神経変性疾患である請求項２３の方法。   24. The method of claim 23, wherein the predisposition is a neurodegenerative disease. 該化合物（もしくは鏡像異性体）またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルが１種もしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬との組み合わせ投与において投与される請求項１もしくは５の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein said compound (or enantiomer) or pharmaceutically acceptable salt or ester thereof is administered in combination with one or more other compounds or therapeutic agents. 該１つもしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬が、神経保護効果が患者に与えられるように、以下の特性：抗酸化活性；ＮＭＤＡ受容体拮抗作用；内因性ＧＡＢＡ抑制を増大する能力；ＮＯシンターゼインヒビター活性；鉄結合能力、例えば鉄キレート剤；カルシウム結合能力、例えばＣａ（ＩＩ）キレート剤；亜鉛結合能力、例えばＺｎ（ＩＩ）キレート剤；ナトリウムもしくはカルシウムイオンチャンネルを遮断する能力；カリウムもしくは塩化物イオンチャンネルを開く能力の１つもしくはそれ以上を有する化合物よりなる群から選択される請求項２５の方法。   The one or more other compounds or therapeutic agents have the following properties so that a neuroprotective effect is conferred on the patient: antioxidant activity; NMDA receptor antagonism; ability to increase endogenous GABA inhibition; NO Synthase inhibitor activity; iron binding capacity, eg iron chelator; calcium binding capacity, eg Ca (II) chelator; zinc binding capacity, eg Zn (II) chelator; ability to block sodium or calcium ion channels; potassium or chloride 26. The method of claim 25, selected from the group consisting of compounds having one or more of the ability to open physical ion channels. 該１つもしくはそれ以上の化合物が、さらに、抗癲癇薬（ＡＥＤ）よりなる群から選択されることができる請求項２６の方法。   27. The method of claim 26, wherein the one or more compounds can be further selected from the group consisting of an antidepressant (AED). 該抗癲癇薬（ＡＥＤ）が；カルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、エトスクシミド、フェルバメート、ガバペンチン、ラモトリジン（ｌａｍｏｔｉｇｉｎｅ）、レベチラセタム、オキシカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、プリミドン、レチガビン、タラムパネル（ｔａｌａｍｐａｎｅｌ）、チアガビン、トピラメート、バルプロエート、ビガバトリン、ゾニサミド、ベンゾジアゼピン、バルビツレートもしくは催眠鎮静薬よりなる群から選択される請求項２７の方法。   The antidepressant (AED) is: carbamazepine, clobazam, clonazepam, ethosuximide, felbamate, gabapentin, lamotrigine, levetiracetam, oxcarbazepine, phenobarbital, phenytoin, pregabalin, primidone, retigabine, talgampan 28. The method of claim 27, selected from the group consisting of:, topiramate, valproate, vigabatrin, zonisamide, benzodiazepine, barbiturate or a hypnotic sedative. 式（Ｉ）および式（ＩＩ）：
Figure 2008516961
 ［式中、
フェニルはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素よりなる群から選択される１〜５個のハロゲン原子でＸにおいて置換され；そして
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルよりなる群から独立して選択され；ここで、Ｃ１〜Ｃ４アルキルは場合によりフェニルで置換されていてもよい（ここで、フェニルは場合によりハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノ、ニトロおよびシアノよりなる群から独立して選択される置換基で置換されていてもよい）］
よりなる群から選択される鏡像異性体またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルあるいは式（Ｉ）および式（ＩＩ）よりなる群から選択される１つの鏡像異性体が優位である鏡像異性体混合物の製薬学的に有効な量ならびに製薬学的に許容しうる担体もしく
は賦形剤を含んでなる神経保護を与えるための製薬学的組成物。 Formula (I) and Formula (II):
Figure 2008516961
 [Where:
Phenyl is substituted at X with 1 to 5 halogen atoms selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine and iodine; and R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are hydrogen and Independently selected from the group consisting of C 1 -C 4 alkyl; wherein C 1 -C 4 alkyl is optionally substituted with phenyl, where phenyl is optionally halogen, C 1 -C And optionally substituted with a substituent independently selected from the group consisting of 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, amino, nitro and cyano)]
Enantiomers selected from the group consisting of or pharmaceutically acceptable salts or esters thereof or one enantiomer selected from the group consisting of formulas (I) and (II) A pharmaceutical composition for providing neuroprotection comprising a pharmaceutically effective amount of a body mixture and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. 神経保護を必要とする患者に神経保護を与えるために、その適切な使用のための情報もしくは説明書と一緒に、適切なパッケージもしくは容器に請求項２９に記載の製薬学的組成物の治療的に有効な投与形態物を含んでなるキット。   30. Therapeutic of the pharmaceutical composition of claim 29 in a suitable package or container, along with information or instructions for its proper use, to provide neuroprotection to a patient in need thereof. A kit comprising an effective dosage form. 治療的に有効な量が約１．０ｍｇ／Ｋｇ／日〜約１５０ｍｇ／Ｋｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 1.0 mg / Kg / day to about 150 mg / Kg / day. 該患者が該投与の時点でニューロン損傷もしくは機能障害の臨床的徴候もしくは症状を発症していない請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method according to claim 1 or 5, wherein the patient has not developed clinical signs or symptoms of neuronal damage or dysfunction at the time of administration. 該患者が該投与の時点でニューロン損傷もしくは機能障害を発症する危険がある請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method according to claim 1 or 5, wherein the patient is at risk of developing neuronal damage or dysfunction at the time of administration. 該患者が該投与の時点で神経変性障害もしくはニューロン損傷の臨床的証拠を発症している請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the patient has developed clinical evidence of neurodegenerative disorder or neuronal damage at the time of administration. 治療的に有効な量が約１．４ｍｇ／Ｋｇ／日〜約４３．０ｍｇ／Ｋｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 1.4 mg / Kg / day to about 43.0 mg / Kg / day. 治療的に有効な量が約２．９ｍｇ／Ｋｇ／日〜約３５．７ｍｇ／Ｋｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 2.9 mg / Kg / day to about 35.7 mg / Kg / day. 治療的に有効な量が約３．６ｍｇ／Ｋｇ／日〜約２８．６ｍｇ／Ｋｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 3.6 mg / Kg / day to about 28.6 mg / Kg / day. 治療的に有効な量が約４．３ｍｇ／Ｋｇ／日〜約２１．４ｍｇ／Ｋｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 4.3 mg / Kg / day to about 21.4 mg / Kg / day. 治療的に有効な量が約５．０ｍｇ／Ｋｇ／日〜約１７．１ｍｇ／Ｋｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 5.0 mg / Kg / day to about 17.1 mg / Kg / day. 治療的に有効な量が約１００ｍｇ／日〜約３０００ｍｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 100 mg / day to about 3000 mg / day. 治療的に有効な量が約２００ｍｇ／日〜約２５００ｍｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 200 mg / day to about 2500 mg / day. 治療的に有効な量が約２５０ｍｇ／日〜約２０００ｍｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 250 mg / day to about 2000 mg / day. 治療的に有効な量が約３００ｍｇ／日〜約１５００ｍｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 300 mg / day to about 1500 mg / day. 治療的に有効な量が約３５０ｍｇ／日〜約１２００ｍｇ／日である請求項１もしくは５に記載の方法。   6. The method of claim 1 or 5, wherein the therapeutically effective amount is from about 350 mg / day to about 1200 mg / day. 該治療量が時間とともに次第に減少される請求項１もしくは５に記載の方法。   6. A method according to claim 1 or 5, wherein the therapeutic amount is gradually reduced over time. 該化合物（もしくは鏡像異性体）またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはエステルと組み合わせて投与される該１種もしくはそれ以上の他の化合物もしくは治療薬の量が時間とともに次第に減少される請求項２５、２６、２７もしくは２８に記載の方法。   The amount of the one or more other compounds or therapeutics administered in combination with the compound (or enantiomer) or pharmaceutically acceptable salt or ester thereof is gradually reduced over time. The method according to 25, 26, 27 or 28.
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