JP2008229024A

JP2008229024A - 蛍光観察装置

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Publication number: JP2008229024A
Application number: JP2007073391A
Authority: JP
Inventors: Wataru Ono; 渉大野
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2007-03-20
Filing date: 2007-03-20
Publication date: 2008-10-02
Also published as: EP2127593A1; EP2127593A4; CN101636102A; WO2008114748A1; US8188446B2; US20100084563A1; CN101636102B

Abstract

【課題】生体内に存在する吸収物質の分布にかかわらず、観察対象における病変部等の異常組織の分布を精度よく検出する。
【解決手段】複数の波長の励起光を観察対象に照射する励起光照射部２と、該励起光照射部２から照射された励起光に対して観察対象から発生する蛍光のうち、特定の波長帯域の蛍光を透過するフィルタ１４と、該フィルタ１４を透過した蛍光を検出する光検出部１５と、該光検出部１５により検出された複数の波長の励起光に対する同一波長帯域の蛍光光量の比を演算する演算部１８とを備える蛍光観察装置１を提供する。
【選択図】図１

Description

本発明は、蛍光観察装置に関するものである。

内視鏡システムを用いた生体の内視鏡観察において、生体の状態を精度よく観察するためには、分光特性の異なる複数種の光を用いた観察方法を行うことが好ましい。
分光特性の異なる複数種の光を用いた観察が可能な内視鏡としては、特許文献１および特許文献２に開示されているものがある。

特許文献１に開示されている内視鏡は、分光特性の異なる複数種の光を用いた複数種の画像を同一の内視鏡において取得するために、撮影対象からの光をダイクロイックミラーによって分光する。ダイクロイックミラーは、内視鏡の挿入部の先端に内蔵することが困難であるため、体外に配置し、挿入部の先端において受光された撮影対象からの光をファイババンドルによって体外のダイクロイックミラーまで伝送する必要がある。

また、特許文献２に開示されている内視鏡は、ダイクロイックミラーのような分光手段を用いることなく、複数種の光を用いた観察を可能とするために、複数の撮像光学系を内視鏡の挿入部の先端に配置している。

さらに、市販されている傾向薬剤から生体内の物質と結合して発光する蛍光プローブを作成することが可能であり、病変と相関性のある物質と結合する蛍光プローブを生体に投与して、その蛍光を観察することにより、病変に関する情報を得ることができる。この場合に、薬剤蛍光と自家蛍光あるいは複数の薬剤蛍光を観察することで、より精度よく生体の状態を観察することができる。

特許第３６８３２７１号明細書特開２００１ー１９０４８９号公報

そして、生体組織内に本来的に存在している自家蛍光物質からの自家蛍光を観察する際には、単一の励起光で複数波長帯域の蛍光が励起されることがある。この場合には、これを分離検出することにより生体の状態をより精度よく観察することができる。
しかしながら、生体組織内には、蛍光を発する物質の他に、光を吸収する物質が存在するため、この吸収物質の分布により蛍光物質の分布を精度よく検出することができないという不都合がある。

本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、生体内に存在する吸収物質の分布にかかわらず、観察対象における病変部等の異常組織の分布を精度よく検出することができる蛍光観察装置を提供することを目的としている。

上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、複数の波長の励起光を観察対象に照射する励起光照射部と、該励起光照射部から照射された励起光に対して観察対象から発生する蛍光のうち、特定の波長帯域の蛍光を透過するフィルタと、該フィルタを透過した蛍光を検出する光検出部と、該光検出部により検出された複数の波長の励起光に対する同一波長帯域の蛍光光量の比を演算する演算部とを備える蛍光観察装置を提供する。

上記発明においては、前記フィルタが複数の波長帯域の蛍光を透過し、前記演算部が、各波長帯域毎に、蛍光光量の比を演算することとしてもよい。
また、上記発明においては、前記フィルタが、蛍光を透過する波長帯域を変更可能な可変分光素子からなることとしてもよい。

上記発明においては、前記複数の波長の励起光のうちの少なくとも一つの励起光の波長が、当該励起光によって励起される第１の物質の最大励起波長（最大の蛍光量を得るときの励起光の波長）と、当該第１の物質とは異なる第２の物質の最大励起波長と、の間の波長帯域に含まれることとしてもよい。

また、上記発明においては、前記第１の物質がコラーゲン、またはＮＡＤＨ、前記第２の物質がＦＡＤであることとしてもよい。
また、上記発明においては、前記複数の波長の励起光のうちの少なくとも一つの励起光の波長は、当該励起光によって励起される第１の物質の最大励起波長（最大の蛍光量を得るときの励起光の波長）と、当該第１の物質とは異なる第２の物質の最大励起波長と、の中間値の波長を含むこととしてもよい。

また、上記発明においては、前記特定の波長帯域の蛍光を透過するフィルタの通過帯域は、前記複数の波長の励起光による前記コラーゲン、ＮＡＤＨ、ＦＡＤ、またはポルフィリンの蛍光光量が最大となる波長を含むこととしてもよい。

さらに、上記発明においては、前記可変分光素子が、蛍光を検出する波長帯域よりも幅の狭い透過帯域を一方向に移動させ、前記演算部が、前記透過帯域の移動の各位置において前記光検出部により検出された蛍光光量の積分値を用いて比を演算することとしてもよい。

また、上記発明においては、前記演算部が、次式に従い蛍光光量の比を演算することとしてもよい。
（ＥＭ１ｅｘ１／ＥＭ１ｅｘ２）／（ＥＭ２ｅｘ３／ＥＭ２ｅｘ２）
ここで、ＥＭ１ｅｘ１：第１の波長帯域における第１の励起光に対する蛍光光量、ＥＭ１ｅｘ２：第１の波長帯域における第２の励起光に対する蛍光光量、ＥＭ２ｅｘ２：第２の波長帯域における第２の励起光に対する蛍光光量、ＥＭ２ｅｘ３：第２の波長帯域における第３の励起光に対する蛍光光量である。

また、上記発明においては、前記観察対象の各部からの蛍光に基づく前記演算部による演算結果の分布を表示する表示部を備えることとしてもよい。
また、上記発明においては、前記表示部が、前記演算部による演算結果の変化を明示するように表示することとしてもよい。

本発明によれば、生体内に存在する吸収物質の分布にかかわらず、観察対象における病変部等の異常組織の分布を精度よく検出することができるという効果を奏する。

以下、本発明の第１の実施形態に係る蛍光観察装置１について、図１および図２を参照して説明する。
本実施形態に係る蛍光観察装置１は、２つの波長の励起光と白色光とを切り替えて射出可能な光源ユニット２と、体腔内に挿入される細長い挿入部３と、挿入部３に備えられた撮像ユニット４と、該撮像ユニット４により検出された蛍光画像情報を処理する信号処理部５と、該信号処理部５の出力信号を表示する表示ユニット６とを備えている。

前記光源ユニット２は、波長λ１＝３８０ｎｍの第１の励起光を射出する第１のレーザ光源７と、波長λ２＝４３０ｎｍの第２の励起光を射出する第２のレーザ光源８と、白色光を射出する白色光源９と、これらの同一の光路に合流するためのミラー１０およびダイクロイックミラー１１を備えている。

前記挿入部３は、生体の体腔に挿入できる極めて細い外形寸法を有し、その内部に、前記撮像ユニット４および前記光源ユニット２からの光を先端３ａまで伝播するライトガイド１２を備えている。
前記撮像ユニット４は、観察対象から入射される光を集光する対物レンズ１３と、該対物レンズ１３により集光された光の内、特定の波長帯域の蛍光を通過させる蛍光フィルタ１４と、該蛍光フィルタ１４を透過した蛍光を撮影して電気信号に変換する撮像素子１５とを備えている。
前記蛍光フィルタ１４の透過波長帯域は、図２に示されるように、４５０〜５００ｎｍに設定されている。

前記信号処理部５は、撮像ユニット４から入力された観察対象の各部からの反射光光量情報および２つの励起光に対する蛍光光量情報に基づいて、１つの反射光画像と２つの蛍光画像とを生成するビデオ信号処理部１６と、該ビデオ信号処理部１６において生成された画像情報を記憶する第１のフレームメモリ１７と、該第１のフレームメモリ１７に記憶された２つの蛍光画像を用いて除算処理する演算部１８と、該演算部１８により除算処理された蛍光画像情報と、反射光画像とをそれぞれ記憶する第２のフレームメモリ１９と、該第２のフレームメモリ１９に記憶された反射光画像をホワイトバランス処理するとともに、反射光画像と蛍光画像とを重ね合わせ処理する表示処理部２０と、重ね合わせられた画像情報をエンコードして表示ユニット６に出力するエンコーダ２１とを備えている。

前記演算部１８においては、第１のレーザ光源から射出された第１の励起光が照射されることにより観察対象から発せられる蛍光のうち、蛍光フィルタ１４を透過した蛍光の光量ＥＭ１ｅｘ１と、第２のレーザ光源から出射された第２の励起光が照射されることにより観察対象から発せられる蛍光のうち、蛍光フィルタ１４を透過した蛍光の光量ＥＭ１ｅｘ２との比（ＥＭ１ｅｘ１／ＥＭ１ｅｘ２）が演算されるようになっている。

このように構成された本実施形態に係る蛍光観察装置１の作用について以下に説明する。
本実施形態に係る蛍光観察装置１を用いて生体組織を観察するには、まず、光源ユニット２内の白色光源９を作動させ、挿入部２を体腔内に挿入して、反射光画像を確認しながら、挿入部２の先端２ａを体腔内の観察対象部位に対向させる。この状態で、光源ユニット２から第１の励起光および第２の励起光を順次を射出させ、ライトガイド１２を介して伝播された第１，第２の励起光を体腔内の観察対象部位に照射する。

生体組織内には、生来含有されている自家蛍光物質である還元型ニコチンアミドヌクレオチド（ＮＡＤＨ）や、フラビンアデニンヌクレオチド（ＦＡＤ）、コラーゲンなどが存在し、これらはおよそ３００ｎｍ〜５００ｎｍの励起光によって蛍光を発する。また、還元型ニコチンアミドヌクレオチド（ＮＡＤＨ）およびコラーゲンは概ね３４０ｎｍ、フラビンアデニンヌクレオチド（ＦＡＤ）は概ね４５０ｎｍの励起光により最大の蛍光量となる。すなわち、還元型ニコチンアミドヌクレオチド（ＮＡＤＨ）およびコラーゲンの最大励起波長は概ね３４０ｎｍ、フラビンアデニンヌクレオチド（ＦＡＤ）の最大励起波長は４５０ｎｍである。

したがって、第１の励起光が照射されることにより、主として還元型ニコチンアミドヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、コラーゲンなどが励起され、第２の励起光が照射されることにより、主としてフラビンアデニンヌクレオチド（ＦＡＤ）などが励起されてそれぞれ蛍光が発生する。図２に、励起光および蛍光の波長特性と、蛍光フィルタ１４の透過率特性を示す。

図２に示されるように、発生する蛍光は、広帯域にわたる蛍光スペクトルを有するが、蛍光フィルタ１４が設けられているので、その内の４５０〜５００ｎｍの波長帯域の蛍光のみが撮像素子によりそれぞれ撮影される。すなわち、各励起光に対して観察対象において発生した蛍光はビデオ信号処理部１６に入力されて、各画素毎に蛍光光量情報を有する２次元的な蛍光画像情報として構築され、第１のフレームメモリ１７に記憶される。

そして、第１のフレームメモリ１７に記憶された波長の異なる励起光に対する同一波長帯域の２つの蛍光画像情報は、演算部１８において演算処理されることにより、各画素毎に蛍光光量の比が算出される。また、第１のフレームメモリ１７に記憶された反射光画像はそのまま第２のフレームメモリ１９に送られる。

除算処理された蛍光画像情報および反射光画像は、第２のフレームメモリ１９に記憶される。そして、第２のフレームメモリ１９に記憶された反射光画像は、表示処理部２０によりホワイトバランス処理され、第２のフレームメモリ１９に記憶されている蛍光画像と重ね合わせ処理された後に、エンコーダ２１によりエンコードされて表示ユニット６に出力され、表示される。

本実施形態に係る蛍光観察装置１によれば、図２に示されるように、２つの異なる波長の励起光に対して観察対象から発生する、蛍光フィルタ１４の透過波長帯域における２種類の蛍光の光量は異なっているが、観察対象の同一箇所の同一の波長帯域の蛍光については、同一の励起光の照明条件であるため観察対象内に存在している吸収物質により同様に吸収されている。

したがって、これら２つの蛍光画像情報を用いて各画素毎に蛍光光量の比を演算することにより、吸収物質による吸収の影響を除去することができる。
すなわち、単一の励起光による蛍光画像では、本来明るい蛍光光量が得られるべき病変部において、吸収物質の影響により蛍光光量が低減しているために、病変部か正常部かの判別が困難であったが、本実施形態に係る蛍光観察装置１によれば、吸収物質の影響を除去して、病変部と正常部とを明確に区別することが可能となる。これにより、診断能を向上することができるという利点がある。
なお、蛍光を励起する光源としては、レーザ光源以外にも、ＬＥＤや、白色光源とバンドパスフィルタを組み合わせたものでも良い。

次に、本発明の第２の実施形態に係る蛍光観察装置３０について、図３〜図８を参照して説明する。
本実施形態の説明において、上述した第１の実施形態に係る蛍光観察装置１と構成を共通とする箇所に同一符号を付して説明を省略する。

本実施形態に係る蛍光観察装置３０は、図３に示されるように、光源ユニット３１が、第１〜第３のレーザ光源３２〜３４を有する点、蛍光フィルタ１４に代えて、図４に示されるエタロン型の可変分光素子３５を採用している点、および信号処理部５に可変分光素子３５の間隔信号処理部３６および制御部３７が設けられている点において、第１の実施形態に係る蛍光観察装置１と相違している。

第１のレーザ光源３２は、波長λ１＝３８０ｎｍの第１の励起光を射出するようになっている。第２のレーザ光源３３は、波長λ２＝４００ｎｍの第２の励起光を射出するようになっている。また、第３のレーザ光源３４は、波長λ３＝４３０ｎｍの第３の励起光を射出するようになっている。
なお、波長λ２は、ＮＡＤＨまたはコラーゲンの最大励起波長とＦＡＤの最大励起波長との間の波長帯域に含まれるように設定されている。本実施の形態においては、特に好ましい例として、これら二つの最大励起波長の概ね中間の波長である４００ｎｍが第２のレーザ光源３３から照射される第２の励起光の波長として選択されている。

前記可変分光素子３５は、図４に示されるように、間隔をあけて対向し対向面に反射膜３５ａを備えた２枚の光学基板３５ｂと、これら光学基板３５ｂの間隔を変化させるアクチュエータ３５ｃと、光学基板３５ｂの対向面に設けられたセンサ３８とを備えている。アクチュエータ３５ｃは、例えば、圧電素子により構成され、光学基板３５ｂの周方向に間隔をあけて複数設けられている。また、センサ３８は、例えば、各光学基板３５ｂに周方向に間隔をあけて複数設けられ、相互に対向するセンサ電極３８ａを備え、センサ電極３８ａ間に形成される静電容量の変化を検出することにより光学基板３５ｂの間隔を検出するようになっている。

また、可変分光素子３５は、図５〜図７に示されるように、固定透過帯域と可変透過帯域とを有する波長特性を有している。固定透過帯域は、波長帯域４５０〜５００ｎｍに設定され、この波長帯域の蛍光を常に通過させるようになっている。可変透過帯域は、例えば、波長帯域５００〜６５０ｎｍに設定され、前記アクチュエータ３５ｃの作動により光学基板３５ｂの間隔を変化させることで、当該全波長帯域に対して十分に狭い幅の透過帯域を移動させることができるようになっている。

また、前記信号処理部５に設けられた間隔信号処理部３６は、センサ電極３８ａから受信した検出信号を増幅し、ノイズ除去処理し、Ａ／Ｄ変換するようになっている。また、制御部３７は、間隔信号処理部３６から入力された信号に基づいて、光学基板３５ｂの間隔寸法を取得し、所望の間隔寸法となるように、アクチュエータ３５ｃに対して指令信号を出力するようになっている。周方向に複数設けられたセンサ３８による検出信号に基づいて、同じく周方向に複数設けられたアクチュエータ３５ｃを制御することにより、光学基板３５ｂどうしを精度よく平行に維持しつつ間隔を調節することができるようになっている。

そして、制御部３７は、アクチュエータ３５ｃに対して指令信号を出力することにより、光学基板３５ｂの間隔を漸次変化させ、可変透過帯域における透過帯域を漸次移動させるようになっている。
また、ビデオ信号処理部１６は、第１の波長帯域４５０〜５００ｎｍについては、第１〜第３の励起光をそれぞれ照射して得られた蛍光光量をそのまま蛍光画像情報ＥＭ１ｅｘ１，ＥＭ１ｅｘ２，ＥＭ１ｅｘ３として、第１のフレームメモリ１７に記憶するようになっている。

また、例えば、第２の波長帯域５００〜６００ｎｍについては、第１〜第３の励起光をそれぞれ照射しつつ、該第２の波長帯域において透過帯域を移動させる間に取得された蛍光光量を画素毎に積分することにより得られた値を、前記蛍光画像情報ＥＭ１ｅｘ１，ＥＭ１ｅｘ２，ＥＭ１ｅｘ３との差分をとることにより、５００〜６００ｎｍの波長帯域の蛍光画像情報ＥＭ２ｅｘ１，ＥＭ２ｅｘ２，ＥＭ２ｅｘ３として、第１のフレームメモリ１７に記憶するようになっている。

また、例えば、第３の波長帯域６００〜６５０ｎｍについては、第１〜第３の励起光をそれぞれ照射しつつ、該第３の波長帯域において透過帯域を移動させる間に取得された蛍光光量を画素毎に積分することにより得られた値を、前記蛍光画像情報ＥＭ１ｅｘ１，ＥＭ１ｅｘ２，ＥＭ１ｅｘ３との差分をとることにより、６００〜６５０ｎｍの波長帯域の蛍光画像情報ＥＭ３ｅｘ１，ＥＭ３ｅｘ２，ＥＭ３ｅｘ３として、第１のフレームメモリ１７に記憶するようになっている。

そして、演算部１８においては、これらの蛍光画像情報の比、例えば、Ｐ＝（ＥＭ１ｅｘ１／ＥＭ１ｅｘ３）、Ｑ＝（ＥＭ２ｅｘ３／ＥＭ２ｅｘ１）あるいはＲ＝（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ１）×（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ３）を演算するようになっている。

演算部１８において演算された蛍光画像情報の比は、第２のフレームメモリ１９に記憶され、表示処理部２０により重ね合わせ処理されて、エンコーダ２１から表示ユニット６により表示される。表示方法としては、例えば、図８に示されるように、各蛍光画像情報の比の領域が明確になるように、各領域の輪郭線を描いたり、色を変えたりすることが好ましい。

このように構成された本実施形態に係る蛍光観察装置３０によれば、複数の波長帯域において、各波長帯域毎に、異なる波長の励起光により励起したときに発生する蛍光光量の比が算出され、それぞれの波長帯域毎に、画像内の各位置ごとに吸収物質による吸収の影響を除去した蛍光画像を取得することができる。これにより、さらに精度よく、正常部と病変部とを判別することができる。

なお、本実施形態においては、蛍光画像情報の比（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ１）×（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ３）を演算して表示することとした。これにより、病変部を強調することとしたが、これに代えて、（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ１）または（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ３）のいずれかを演算して表示することにしてもよい。

また、蛍光画像情報の比としては、
（ＥＭ１ｅｘ１／ＥＭ１ｅｘ２）／（ＥＭ２ｅｘ３／ＥＭ２ｅｘ２）、および、
（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ１）＞１かつ（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ３）＞１
を演算子表示することとしてもよい。
また、蛍光を励起する光源としては、レーザ光源以外にも、ＬＥＤや、白色光源とバンドパスフィルタを組み合わせたものでも良く、蛍光透過帯域は、複数のバンドパスフィルタを用いても良い。

図９（ａ）は第１〜第３の励起光を照射したときの正常部からの蛍光の波長特性であり、図９（ｂ）は第１〜第３の励起光を照射したときの病変部からの蛍光の波長特性である。
この図９に示されるように、第１の波長帯域４００〜４５０ｎｍにおいては、第１の励起光と第２の励起光を照射したときに蛍光の差（符号Ｄ_１，ｄ_１）に、病変部および正常部において大きな差異Ｄ_１−ｄ_１がある。また、第２の波長帯域５００〜６００ｎｍにおいては、第２の励起光と第３の励起光を照射したときに蛍光の差（符号Ｄ_２，ｄ_２）に、病変部および正常部において大きな差異Ｄ_２−ｄ_２がある。

したがって、病変部と正常部との分光光学特性における特徴的な差異を示す演算値であるところの（ＥＭ１ｅｘ１／ＥＭ１ｅｘ２）／（ＥＭ２ｅｘ３／ＥＭ２ｅｘ２）を表示することにより、病変部をさらに際立たせて表示することができる。
また、第３の波長帯域６００〜６５０ｎｍにおいては、励起光が異なっても正常部から発生する蛍光に差異がないので、（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ１）＞１かつ（ＥＭ３ｅｘ２／ＥＭ３ｅｘ３）＞１を表示することにより、病変部を際ただせて表示することができる。

本発明の第１の実施形態に係る蛍光観察装置の全体構成を示す図である。図１の蛍光観察装置におけるバンドパスフィルタの透過率特性、励起光および蛍光の波長特性の一例を示す図である。本発明の第２の実施形態に係る蛍光観察装置の全体構成を示す図である。図３の蛍光観察装置に備えられた可変分光素子を示す縦断面図である。図４の可変分光素子の透過率特性、第１の励起光とそれに対する蛍光の波長特性の一例を示す図である。図４の可変分光素子の透過率特性、第２の励起光とそれに対する蛍光の波長特性の一例を示す図である。図４の可変分光素子の透過率特性、第３の励起光とそれに対する蛍光の波長特性の一例を示す図である。図３の蛍光観察装置により表示される蛍光画像の一例を示す図である。図３の蛍光観察装置の変形例を説明するための（ａ）可変分光素子の透過率特性と第１〜第３の励起光に対する正常部からの蛍光の波長特性の一例、（ｂ）可変分光素子の透過率特性と第１〜第３の励起光に対する病変部からの蛍光の波長特性の一例を示す図である。

符号の説明

１，３０蛍光観察装置
２光源ユニット（励起光照射部）
１２ライトガイド（励起光照射部）
１４バンドパスフィルタ（フィルタ）
１５撮像素子（光検出部）
１８演算部
３５可変分光素子（フィルタ）

Claims

複数の波長の励起光を観察対象に照射する励起光照射部と、
該励起光照射部から照射された励起光に対して観察対象から発生する蛍光のうち、特定の波長帯域の蛍光を透過するフィルタと、
該フィルタを透過した蛍光を検出する光検出部と、
該光検出部により検出された複数の波長の励起光に対する同一波長帯域の蛍光光量の比を演算する演算部と
を備える蛍光観察装置。
前記フィルタが複数の波長帯域の蛍光を透過し、
前記演算部が、各波長帯域毎に、蛍光光量の比を演算する請求項１に記載の蛍光観察装置。
前記フィルタが、蛍光を透過する波長帯域を変更可能な可変分光素子からなる請求項２に記載の蛍光観察装置。
前記複数の波長の励起光のうちの少なくとも一つの励起光の波長が、当該励起光によって励起される第１の物質の最大励起波長と、当該第１の物質とは異なる第２の物質の最大励起波長との間の波長帯域に含まれる請求項１に記載の蛍光観察装置。
前記第１の物質がコラーゲンまたはＮＡＤＨ、前記第２の物質がＦＡＤである請求項４に記載の蛍光観察装置。
前記複数の波長の励起光のうちの少なくとも一つの励起光の波長は、当該励起光によって励起される第１の物質の最大励起波長と、当該第１の物質とは異なる第２の物質の最大励起波長との中間値の波長を含む請求項４に記載の蛍光観察装置。
前記特定の波長帯域の蛍光を透過するフィルタの通過帯域が、前記複数の波長の励起光による前記コラーゲン、ＮＡＤＨ、ＦＡＤ、またはポルフィリンの蛍光光量が最大となる波長を含む請求項５の蛍光観察装置。
前記可変分光素子が、蛍光を検出する波長帯域よりも幅の狭い透過帯域を一方向に移動させ、前記演算部が、前記透過帯域の移動の各位置において前記光検出部により検出された蛍光光量の積分値を用いて比を演算する請求項３に記載の蛍光観察装置。
前記演算部が、次式に従い蛍光光量の比を演算する請求項１に記載の蛍光観察装置。
（ＥＭ１ｅｘ１／ＥＭ１ｅｘ２）／（ＥＭ２ｅｘ３／ＥＭ２ｅｘ２）
ここで、
ＥＭ１ｅｘ１：前記フィルタを通過する前記特定の波長帯域の一部である第１の波長帯域における第１の励起光に対する蛍光光量、
ＥＭ１ｅｘ２：前記フィルタを通過する前記特定の波長帯域の一部である第１の波長帯域における第２の励起光に対する蛍光光量、
ＥＭ２ｅｘ２：前記フィルタを通過する前記特定の波長帯域の一部である第２の波長帯域における第２の励起光に対する蛍光光量、
ＥＭ２ｅｘ３：前記フィルタを通過する前記特定の波長帯域の一部である第２の波長帯域における第３の励起光に対する蛍光光量
であり、かつ、
第１の励起光の波長＜第２の励起光の波長＜第３の励起光の波長
である。
前記観察対象の各部からの蛍光に基づく前記演算部による演算結果の分布を表示する表示部を備える請求項１に記載の蛍光観察装置。
前記表示部が、前記演算部による演算結果の変化を明示するように表示する請求項１０に記載の蛍光観察装置。