JP2007175021A - 大腸がんのリンパ節転移マーカー - Google Patents

大腸がんのリンパ節転移マーカー Download PDF

Info

Publication number
JP2007175021A
JP2007175021A JP2005379718A JP2005379718A JP2007175021A JP 2007175021 A JP2007175021 A JP 2007175021A JP 2005379718 A JP2005379718 A JP 2005379718A JP 2005379718 A JP2005379718 A JP 2005379718A JP 2007175021 A JP2007175021 A JP 2007175021A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
marker
metastasis
lymph node
sample
lymph nodes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2005379718A
Other languages
English (en)
Inventor
Motonari Daito
元就 大東
Takayuki Takahata
隆之 高畑
Masako Sonoda
理子 薗田
Yasuhiro Otomo
泰裕 大友
Kazuki Nakabayashi
一樹 中林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sysmex Corp
Original Assignee
Sysmex Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sysmex Corp filed Critical Sysmex Corp
Priority to JP2005379718A priority Critical patent/JP2007175021A/ja
Priority to US11/643,759 priority patent/US20070172857A1/en
Publication of JP2007175021A publication Critical patent/JP2007175021A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Abstract

【課題】本発明は、大腸がんのリンパ節転移を正確に診断できる新規なマーカーを提供することを課題とする。
【解決手段】PIGR、CLDN3、LGALS4、AGR2、TACSTD1、GPX2、RAI3、TSPAN1、CKB、ELF3、FXYD3、CDH1、REG4、GDF 15、CLDN4、OLFM 4、CD9、CDH17、SELENBP、LCN2、TMPRSS4、CFTR、TM4SF3、ID1、CYP2S1、TFF3、EHF、FAT、KLF5、SLC9A3R2、HOXB9、ATP1B1、PCK1、FCGBPからなる群より選択される少なくとも1つのタンパク質をコードする遺伝子のｍＲＮＡまたはその断片を含む、大腸がんに由来のがん細胞のリンパ節転移の有無を判定するために用いられるリンパ節転移マーカーにより、上記の課題を解決する。
【選択図】なし

Description

本発明は、大腸がんのリンパ節転移を判定するためのマーカー、該マーカーに由来するｃＤＮＡを増幅するためのプライマおよび該マーカーを検出することによる大腸がんのリンパ節への転移の検出方法に関する。
大腸がんの診断において、リンパ節中のがん細胞を検出すること（リンパ節転移診断）は、手術範囲の決定や術後の化学療法の決定に有益な情報となる。現在、リンパ節転移診断は病理医により、リンパ節組織の凍結切片またはパラフィン切片を用いた組織診（例えば、ＨＥ（ヘマトキシリン−エオジン）染色、ＩＨＣ(免疫組織化学)法など）が行われている。しかし、それら診断結果は、病理医の経験により診断結果が異なり、ときとしてがん細胞を見落としてしまうことがある。
このような現状を受けて、現在、ＬＡＭＰ（loop-mediated isothermal amplification method）法やＰＣＲ（polymerase chain reaction）法などを用いたがんの分子診断の研究が盛んに行われるようになっている。分子診断は、分子マーカー（例えば、がん細胞に特異的に発現するタンパク質、このタンパク質をコードする遺伝子、この遺伝子のｍＲＮＡなど）を検出することにより行うことができる。大腸がんのリンパ節転移を判定するための分子マーカー（以下、単にマーカーともいう）としては、サイトケラチン２０（ＣＫ２０）やヒト胎児性抗原（ＣＥＡ）が報告されている。
本発明の目的は、大腸がんのリンパ節転移診断に用いられる新規なマーカーを提供することである。
本発明は、大腸がん由来のがん細胞のリンパ節転移を検出するためのマーカーであって、
ポリメリックイムノグロブリンレセプター(Polymeric immunoglobulin receptor：PIGR)；
クラウジン３(Claudin 3：CLDN3)；
ガレクチン４(Galectin 4：LGALS4)；
アンテリアグラジエント２(Anterior gradient 2：AGR2)；
腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１(Tumor-associated calcium signal transducer 1：TACSTD1)；
グルタチオンペルオキシダーゼ２(Glutathione peroxidase 2：GPX2)；
レチノイン酸インデュースド３(Retinoic acid induced 3：RAI3)；
テトラスパン１(Tetraspan 1：TSPAN1)；
クレアチンキナーゼ−ブレイン(Creatin kinase-brain：CKB)；
Ｅ７４様ファクター３(E74-like factor 3：ELF3)；
ＦＸＹＤドメイン含有イオン輸送レギュレータ３(FXYD domain containing ion transport regulator 3：FXYD3)；
カドヘリン１(Cadherin 1：CDH1)；
膵島再生遺伝子ファミリーメンバー４(Regenerating islet-derived family member 4：REG4)；
グロースディファレンシエーションファクター１５(Growth differentiation factor 15：GDF 15)；
クラウジン４(Claudin 4：CLDN4)；
オルファクトメジン(Olfactomedin 4：OLFM 4)；
ＣＤ９抗原(CD9 antigen：CD9)；
カドヘリン１７(Cadherin 17：CDH17)；
セレン結合タンパク質１(Selenium binding protein 1：SELENBP)；
リポカリン２(Lipocalin 2：LCN2)；
トランスメンブレンプロテアーゼセリン４(Transmembrane protease serin 4：TMPRSS4)；
嚢胞性線維症トランスメンブレンコンダクタンスレギュレータＡＴＰ結合カセット(Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator ATP binding cassette：CFTR)；
トランスメンブレン４スーパーファミリーメンバー３(Transmembrane 4 superfamily member 3：TM4SF3)；
ＤＮＡ結合インヒビター１、ドミナントネガティブヘリックス-ループ-ヘリックスタンパク質(Inhibitor of DNA binding 1, dominant negative helix-loop-helix protein：ID1)；
シトクロムＰ４５０、ファミリー２、サブファミリーＳ、ポリペプチド１(Cytochrome P450, family 2, subfamily S, polypeptide 1：CYP2S1)；
トレフォイルファクター３(Trefoil factor 3：TFF3)；
Ｅｔｓホモログファクター(Ets homologous factor：EHF)；
ＦＡＴ腫瘍サプレッサーホモログ１(FAT tumor suppressor homolog 1：FAT)；
クルッペル様ファクター５(Kruppel-like factor 5：KLF5)；
溶質キャリアファミリー９(ナトリウム／水素交換体)、イソフォーム３レギュレータ２(Solute carrier family 9 (sodium/hydrogen exchanger), isoform 3 regulator 2：SLC9A3R2)；
ホメオボックスタンパク質Ｂ９(Homeobox protein B9：HOXB9)；
ＡＴＰアーゼ、Ｎａ+／Ｋ+輸送、β１ポリペプチド(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 1 polypeptide：ATP1B1)；
ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ１(Phosphoenolpyruvate carboxykinase 1：PCK1)；および
ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃフラグメント(Fc fragment of IgG binding protein：FCGBP)
からなる群より選択される少なくとも1つのタンパク質をコードする遺伝子のｍＲＮＡまたはその断片を含むマーカーである。
また、本発明は、（ａ）配列番号３９〜１０６のいずれかに記載の配列を有するポリヌクレオチド；または
（ｂ）前記（ａ）のポリヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが置換、欠失、挿入または付加された配列を有するポリヌクレオチドであって、上記のマーカーに対応するｃＤＮＡにハイブリタイズすることができかつ上記のマーカーに対応するｃＤＮＡを核酸増幅法で増幅することができるポリヌクレオチド
からなる核酸増幅用プライマでもある。
本発明は、生体から切除されたリンパ節から検出用試料を調製し、
前記検出用試料に含まれる、上記のマーカーの少なくとも１種を検出し、
検出結果に基づいて、大腸がん由来のがん細胞の前記リンパ節への転移を検出する
工程を含む大腸がんのリンパ節への転移を検出する方法でもある。
本発明によると、大腸がんのリンパ節転移診断に用いられる新規なマーカーが提供される。
本実施形態のマーカーは、大腸がん由来のがん細胞で発現するタンパク質をコードする遺伝子のｍＲＮＡまたはこのｍＲＮＡの一部である。このマーカーを検出することにより、リンパ節中のがん細胞が検出される。なお、本明細書では、「検出する」とは、存否を判定することだけでなく、定量することをも含む。「ｍＲＮＡ」とは、成熟したｍＲＮＡだけでなく、ｍＲＮＡの前駆体（転写後のスプライシングやポリアデニル修飾前のｍＲＮＡなど）も含む。
マーカーとしては、正常な細胞よりもがん細胞に多量に存在するものが好ましい。
マーカーを検出するためには、先ず検出用試料が調製される。検出用試料としては、後述の核酸増幅反応の鋳型となるポリヌクレオチドが含まれている試料であれば特に限定されないが、生体から採取されたリンパ節の細胞を可溶化したものを用いることが好ましい。リンパ節の細胞を含む試料としては、リンパ節の細胞を含む試料であれば特に限定されない。例えば、手術により摘出されたリンパ節の細胞を含む細胞塊、生検により採取されたリンパ節の細胞を含む試料などが挙げられる。
検出用試料の調製は、例えば以下のようにして行うことができる。先ず、リンパ節の細胞に可溶化のための試薬（以下、「可溶化液」とする）を添加する。可溶化液中の細胞をホモジナイズなどにより破砕して細胞膜内の分子を溶液中に遊離させる。さらに遠心分離して上清を採取し、これを検出用試料とすることができる。なお、遠心分離前および／または遠心分離後に核酸精製や核酸抽出などの処理を行ってもよい。
得られた検出用試料に、マーカーを検出するためのプライマ、逆転写活性を有する酵素、ＤＮＡポリメラーゼを添加して反応液を調製し、核酸増幅を行う。核酸増幅法としては、特に限定されないが、例えばＰＣＲ法、ＬＡＭＰ法、ＬＣＲ法など、公知の方法を用いることができる。マーカーはＲＮＡであるため、核酸増幅反応の前に逆転写反応を含む核酸増幅法（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ法やＲＴ−ＬＡＭＰ法など）を用いることができる。このような核酸増幅法を用いることによってマーカーのｍＲＮＡを鋳型としてｃＤＮＡが増幅される。
逆転写反応および核酸増幅反応は、鋳型である本発明のマーカーに対応するｃＤＮＡの配列およびプライマの配列に応じて適宜条件を変更することができる。逆転写反応および核酸増幅反応の条件は、例えばSambrook, J. et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, New Yorkに記載されたものを用いることができる。
マーカーを検出するためのプライマとしては、マーカーに対応するｃＤＮＡを増幅することができるポリヌクレオチドであれば、その配列は特に限定されない。プライマの長さは５〜５０ヌクレオチドが好ましく、１０〜４０ヌクレオチドがより好ましい。プライマは、当該技術において公知の核酸合成方法により製造することができる。
上記のプライマは、プライマ機能を有していれば一つ以上のヌクレオチドの変異（置換、欠失、挿入、付加など）を有していてもよい。「プライマ機能」とは、マーカーに対応するｃＤＮＡ（マーカーから逆転写されたｃＤＮＡ又はこのｃＤＮＡの相補鎖）にハイブリダイズし、核酸増幅における伸長反応の基点となる機能のことである。変異を有するポリヌクレオチドは、マーカーから転写されたｃＤＮＡ配列中のポリヌクレオチドがハイブリダイズする領域に対して、６０％以上の相補性を有することが好ましく、８０％以上の相補性を有することがより好ましい。また、このポリヌクレオチドがプライマとして機能するために、ポリヌクレオチドの３’末端側の３塩基が完全に相補的であることが好ましく、３’末端側の５塩基が完全に相補的であることがより好ましい。
また、上記のプライマは、本発明のマーカーに対応するｃＤＮＡを核酸増幅法で増幅することができる第一プライマと第二プライマ（フォワードプライマとリバースプライマ）の組み合わせからなるプライマセットとして用いることもできる。
上記のプライマは、当該技術において通常用いられる技術により修飾されていてもよい。上記プライマの標識は、放射活性元素または非放射活性分子を用いて行うことができる。用いられる放射活性同位体としては、32P、33P、35S、3Hまたは125Iを挙げることができる。非放射活性物質は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたはジゴキシゲニンのようなリガンド、ハプテン、色素および放射線発光性、化学発光性、生物発光性、蛍光またはリン光性の試薬のような発光性試薬から選択される。
逆転写活性を有する酵素およびＤＮＡポリメラーゼは、当該技術においてよく知られたものを用いることができる。逆転写活性を有する酵素としては、AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 逆転写酵素、M-MLV (Molony Murine Leukemia Virus) 逆転写酵素などが挙げられる。また、ＤＮＡポリメラーゼとしては、Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ、Ｐｆｕ ＤＮＡポリメラーゼ、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼ、Ｂｓｔ ＤＮＡポリメラーゼなどを用いることができる。
増幅されたｃＤＮＡの検出は、反応液とエチジウムブロマイド、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎなどの蛍光インターカレーターとを混合して反応液中のｃＤＮＡを蛍光染色し、反応液の蛍光強度を測定することにより行うことができる。また、反応液に予め上記のような蛍光インターカレーターを加えておき、反応液の蛍光強度をリアルタイムで測定することにより、マーカーを定量することができる。
また、ｃＤＮＡの増幅に伴い副産物としてピロリン酸マグネシウムが生成される場合、これを検出することによりｃＤＮＡを検出してもよい。このピロリン酸マグネシウムは不溶性であるため、ピロリン酸マグネシウムの増加に伴って反応液が白濁する。よって、反応液を光学的に測定（例えば、濁度測定、吸光度測定など）することによってｃＤＮＡを検出することもできる。また、リアルタイムで光学的測定を行うことにより、マーカーを定量することができる。
本実施形態のマーカーのなかには、がん細胞だけでなく正常な細胞でも少量の存在が認められるものも含まれている。このような場合、マーカーを定量し、その結果と所定の閾値とを比較することにより、リンパ節転移を検出することが好ましい。
例えばＲＴ−ＰＣＲを用いてリアルタイムでマーカーを定量する場合、所定の蛍光強度や濁度に達するまでのＰＣＲサイクル数を、対応する閾値と比較することにより、リンパ節転移を検出することもできる。また、所定のサイクル数における蛍光強度や濁度を、対応する閾値と比較することにより、リンパ節転移を検出することもできる。
例えばＲＴ−ＬＡＭＰを用いてリアルタイムでマーカーを定量する場合、所定の蛍光強度や濁度に達するまでの時間を、対応する閾値と比較することにより、リンパ節転移を検出することもできる。また、所定の時間が経過した時点での蛍光強度や濁度を、対応する閾値と比較することにより、リンパ節転移を検出することもできる。また、複数の閾値を設定することにより、例えば「強陽性」、「陽性」、「陰性」など多段階にがん細胞のリンパ節転移を検出することも可能である。
閾値は、がん細胞が含まれることが確認された生体試料（陽性試料）に含まれるマーカー量以下であり、且つがん細胞が含まれないことが確認された生体試料（陰性試料）に含まれるマーカー量よりも高い値に設定することができる。閾値は、複数の陽性試料のマーカー量と、複数の陰性試料のマーカー量とを測定し、最も高確率に陽性試料と陰性試料とを区別できる値とすることが好ましい。
また、上記のマーカーを検出するためにマイクロアレイ技術を用いることもできる。具体的には、先ず固相にマーカーに対応するｃＤＮＡに相補的なポリヌクレオチドプローブ（以下、単にプローブともいう）を固定する。この固相に前記ｃＤＮＡを含む試料を添加して、プローブにｃＤＮＡを捕捉させる。ここに蛍光インターカレーターを添加してプローブとｃＤＮＡとのハイブリッドを蛍光染色し、蛍光強度を検出する。蛍光強度の検出結果から、マーカーの定量や存否の判定を行うことができる。プローブがｃＤＮＡよりも短い場合は、プローブがハイブリダイズしていないｃＤＮＡの領域にハイブリダイズするプローブを添加することにより、蛍光シグナルを増強することができる。
なお、固相にマーカーに対応するプローブを固定し、マーカーとプローブとのハイブリッドを形成させて、このハイブリッドを検出することによりマーカーを検出してもよい。
該プローブは、上記のプライマについて説明したのと同様の方法により設計および製造することができる。該プローブとしては、上記のプライマと同様の配列を有するものを用いることができる。
本実施形態のマーカーを検出するために必要な試薬等を試薬キットとして提供することができる。該キットは、少なくとも上述のプライマ、逆転写活性を有する酵素、ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮＴＰｓを含む。また、このキットは、酵素反応に好適な条件を与える緩衝剤を含むことが好ましい。
なお、本明細書において「マーカーを検出する」とは、マーカーであるｍＲＮＡの全領域を検出することだけでなく、一部の領域を検出することをも含む。本実施形態では、マーカーの一部の領域に対応するｃＤＮＡを増幅し、これを検出することが好ましい。この場合、検出されるｃＤＮＡの領域の長さは、プライマの長さよりも１〜５００ヌクレオチド長いことが好ましく、５０〜５００ヌクレオチド長いことがより好ましい。また、上記のプライマセットを用いる場合、増幅されるｃＤＮＡの領域の長さは、第一プライマの長さと第二プライマの長さとの和よりも１〜５００ヌクレオチド長いことが好ましく、５０〜５００ヌクレオチド長いことがより好ましい。
本発明者らは、大腸がんのリンパ節への転移を検出できるマーカーを探索した。まず、公共データベースに登録されているヒト遺伝子発現ライブラリから大腸関連の遺伝子発現ライブラリを選択し、このデータベースから、大腸での発現量が高く、リンパ節での発現量が低い遺伝子を、大腸での発現量の高い順に上位から９８種選択した。これらの遺伝子に対応するタンパク質を以下の表１に示す。次いで、これら９８種のタンパク質をコードする遺伝子のｍＲＮＡ（以下、これら９８種のｍＲＮＡをマーカー候補と呼ぶ）を検出できるプライマを９８組設計した。
上記の９８組のプライマを用い、組織学的にリンパ節への転移が認められたリンパ節５個と、組織学的にリンパ節への転移が認められないリンパ節５個から抽出したＲＮＡを用いてＲＴ−ＰＣＲを行なった。
まず、各リンパ節(約１００〜３００ｍｇ／個)に可溶化液(２００ｍＭグリシン−ＨＣｌ、５％ Ｂｒｉｊ３５(ポリオキシエチレン(３５)ラウリルエーテル)、２０％ ＤＭＳＯ、および０．０５％ ＫＳ−５３８ (信越化学工業) を含む）４ｍＬを添加し、ブレンダーでホモジナイズした。得られたホモジネートを10,000×ｇ、室温で１分間遠心分離し、上清４００μＬからRNeasy Miniキット(キアゲン社製、カタログ番号74014)を用いてＲＮＡを抽出・精製してＲＮＡ溶液を得た。このＲＮＡ溶液の吸光度(λ＝２８０ｎｍ)を測定して濃度を確認した後、それぞれ１０ｎｇ／μＬの濃度に調整した。得られたＲＮＡ溶液を、陽性５検体について混合した試料(以下、「陽性検体」という)、および陰性５検体について混合した試料(以下、「陰性検体」という)を得た。
上記のようにして得られた陽性検体および陰性検体と、上記の９８組のプライマを用いて、ＡＢＩリアルタイムＰＣＲ装置（Prism 7000）を用いてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを行ない、９８種のｍＲＮＡの検出を行なった。
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲキットであるQuanti Tect SYBR Green ＲＴ−ＰＣＲキット(キアゲン社製、カタログ番号204245)を用い、その使用説明書に従って行なった。反応液の組成および反応条件は、以下のとおりである。
反応液：
ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ Ｈ2Ｏ ２２．００μＬ
２×Ｍｉｘ ２５．００μＬ
１００ｎＭフォワードプライマ(最終濃度５００μＭ) ０．２５μＬ
１００ｎＭリバースプライマ(最終濃度５００μＭ) ０．２５μＬ
Quanti Tect RTミックス ０．５０μＬ
陽性検体または陰性検体 ２．００μＬ
合計 ５０．００μＬ
反応条件
５０℃、３０分
９５℃、１５分
ＰＣＲ：以下の工程を４０サイクル；
９４℃、１５秒、
５３℃、３０秒、
７２℃、３０秒。
上記の条件でＲＴ−ＰＣＲを行ない、陰性検体を用いてある特定の蛍光強度に到達するまでのＰＣＲサイクル数(陰性検体ＰＣＲサイクル数)と、陽性検体を用いてある特定の蛍光強度に到達するまでのＰＣＲサイクル数(陽性検体ＰＣＲサイクル数)とを測定し、これらの差((陰性検体ＰＣＲサイクル数)−(陽性検体ＰＣＲサイクル数))を算出した。このＰＣＲサイクル数の差が大きいほど、その遺伝子が陰性検体中での発現量が少なく、陽性検体中での発現量が多い、すなわちその遺伝子が、転移が起こったリンパ節で特異的に発現量が多いことを意味する。
この結果を、以下の表１ならびに図１および２に示す。表１は、陽性検体に含まれるマーカー候補９８種のそれぞれに対応するｃＤＮＡを増幅させてある特定の蛍光強度に到達するまでのＰＣＲサイクル数（Ａ）と、陰性検体に含まれるマーカー候補９８種のそれぞれに対応するｃＤＮＡが増幅してある特定の蛍光強度に到達するまでのＰＣＲサイクル数（Ｂ）と、これらの差（Ｂ−Ａ）の値とを示した表である。図１および２は、Ｂ−Ａを縦軸にとり、Ｂを横軸にとったグラフである。縦軸の値が大きいほど、陰性検体での存在量が少なく、陽性検体の存在量が多いことを示し、即ち、特異性が高いことを示す。横軸のサイクル数が大きいほど、その遺伝子は、大腸がんが転移していないリンパ節で発現量が少ないことを意味する。
したがって、このＰＣＲサイクル数の差が大きいマーカー候補は、大腸がんのリンパ節への転移を検出するためのマーカーとして有用であるということができる。
なお、対照として用いたβ−アクチン(ＡＣＴＢ)は、ハウスキーピング遺伝子のタンパク質として知られており、多くの細胞において多量に発現しているものである。よって、陰性ＲＮＡ試料でのサイクル数と陽性ＲＮＡ試料でのサイクル数とに差が見られない。
また、従来からリンパ節転移マーカーとして知られていたＣＫ２０やＣＥＡのｍＲＮＡは、上記のＰＣＲサイクル数の差が比較的大きく、リンパ節転移が起こった組織で特異的に発現量が多いことがわかる。
以上の結果から、以下の表２に示す３４種のタンパク質をコードする遺伝子のｍＲＮＡが、リンパ節転移マーカーとして新たに同定された。表２において、「配列番号」の列には、３４種のタンパク質をそれぞれコードする遺伝子のｍＲＮＡの配列番号を示す。これらのｍＲＮＡの配列は、配列番号１〜３８に示すとおりである。配列番号１〜３８の配列は、ｍＲＮＡ配列中のＵ（ウラシル）をＴ（チミン）に置換して表記したものである。これらの配列は、Genbank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/index.html)からも以下のアクセッション番号で入手できる。なお、本明細書における「リンパ節転移マーカー」とは、配列番号１〜３８に示すｍＲＮＡの全長配列を有するポリヌクレオチドまたはその部分配列を有するポリヌクレオチドである。
上記のマーカーを検出した際に用いたプライマおよび対応する配列番号を以下の表３に記載する。これらのプライマは、左から右に５′→３′の方向で記載している。
６人の患者から採取した組織学的にリンパ節への転移が認められたリンパ節から抽出したＲＮＡ溶液(検体番号８、１０、２１、２９、３７および５９：陽性試料)および２４人の患者から採取した組織学的にリンパ節への転移が認められないリンパ節から抽出したＲＮＡ溶液（検体番号１，３，４，５，６，１２，１３，１５，１６，１８，１９，２０，２２，２３，２４，２６，２７，２８，２９，３０，３２，３４，３５および３８：陰性試料）を用いて、それぞれリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを行ない、以下の表４に示す１２種の本実施形態のマーカー（ＰＩＧＲ，ＣＬＤＮ３，ＬＧＡＬＳ４，ＡＧＲ２，ＴＳＰＡＮ−１，ＦＸＹＤ３，ＣＬＤＮ４，ＯＬＦＭ４，ＣＤＨ１７，ＬＣＮ２，ＴＭＰＲＳＳ４，およびＣＦＴＲ）と、ＣＫ２０のｍＲＮＡと、ＡＣＴＢのｍＲＮＡとを検出した。ＲＮＡ溶液の調製方法およびＲＴ−ＰＣＲの条件については、実施例１と同様である。なお、ＲＮＡを含む検体ではなく、純水を混合した反応液をネガティブコントロール（ＮＴＣ）として上記と同様にＲＴ−ＰＣＲを行った。また、上記の実験を２回行った。ＲＴ−ＰＣＲに用いたプライマは、下記表４の通りである。
このリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにおいて、ある特定の蛍光強度に到達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を測定した結果を、図３〜１６に示す。図３は、いずれの組織でも発現しているβ−アクチン(ＡＣＴＢ)、図４は従来のマーカーであるＣＫ２０についてそれぞれＲＴ−ＰＣＲを行なった結果を示す。図５〜１６は、本発明のリンパ節転移マーカーについての検出結果を示す。
ＡＣＴＢのｍＲＮＡの検出実験では、ＮＴＣ以外の全ての検体において、ｍＲＮＡから転写されたｃＤＮＡがある一定量まで増幅されるのに必要なサイクル数が少なく、よってｍＲＮＡが多量に検出されたことがわかる。
ＣＫ２０のｍＲＮＡおよび１２種類の本実施形態のマーカーの検出実験では、リンパ節への転移が組織学的に確認されている試料において少ないサイクル数で増幅され、リンパ節への転移が確認されない試料では増幅に必要なサイクル数が多かった。したがって、本実施形態のリンパ節転移マーカーは、がん細胞のリンパ節への転移を検出するのに好適に用いることができる
また、これらの結果より、ＰＩＧＲのｍＲＮＡの検出の際に、サイクル数２９を閾値として設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＣＬＤＮ３のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２４〜２６の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＬＧＡＬＳ４のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２６を閾値として設定することにより、本実施例で用いた陽性試料のうち高確率で陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＡＧＲ２のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２５〜２８の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＴＳＰＡＮ−１のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数３０〜３１の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＦＸＹＤ３のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２５〜２７の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＣＬＤＮ４のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２５〜２６の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＯＬＦＭ４のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数３２を閾値として設定することにより、本実施例で用いた陽性試料のうち高確率で陽性試料を陽性と判定することができ、高確率での陰性試料を陰性と判定することができる。
ＣＤＨ１７のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２７〜２８の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＬＣＮ２のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２８〜３０の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＴＭＰＲＳＳ４のｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２８〜３０の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、全ての陰性試料を陰性と判定することができる。
ＣＦＴＲのｍＲＮＡの検出の際には、サイクル数２７〜３０の範囲で閾値を設定することにより、本実施例で用いた全ての陽性試料を陽性と判定することができ、高確率で陰性試料を陰性と判定することができる。
また、上記の１２種類のマーカーの検出結果のうち２つ以上を組み合わせることにより、より精度の高いリンパ節転移検出を行うことも可能である。
表１に示す結果のグラフである。 表１に示す結果のグラフである。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてβ−アクチンのｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＣＫ２０のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＰＩＧＲのｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＣＬＤＮ３のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＬＧＡＬＳ４のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＡＧＲ２のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＴＳＰＡＮ−１のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＦＸＹＤ３のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＣＬＤＮ４のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＯＬＦＭ４のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＣＤＨ１７のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＬＣＮ２のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＴＭＰＲＳＳ４のｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。 リンパ節への転移が確認された患者のリンパ節からの試料および転移が認められない患者のリンパ節からの試料においてＣＦＴＲのｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲにより増幅させたときに、ある特定の蛍光強度に達するまでのＰＣＲのサイクル数(Ｃｔ)を示す。

Claims (6)

  1. 大腸がん由来のがん細胞のリンパ節転移を検出するためのマーカーであって、
    ポリメリックイムノグロブリンレセプター(Polymeric immunoglobulin receptor：PIGR)；
    クラウジン３(Claudin 3：CLDN3)；
    ガレクチン４(Galectin 4：LGALS4)；
    アンテリアグラジエント２(Anterior gradient 2：AGR2)；
    腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１(Tumor-associated calcium signal transducer 1：TACSTD1)；
    グルタチオンペルオキシダーゼ２(Glutathione peroxidase 2：GPX2)；
    レチノイン酸インデュースド３(Retinoic acid induced 3：RAI3)；
    テトラスパン１(Tetraspan 1：TSPAN1)；
    クレアチンキナーゼ−ブレイン(Creatin kinase-brain：CKB)；
    Ｅ７４様ファクター３(E74-like factor 3：ELF3)；
    ＦＸＹＤドメイン含有イオン輸送レギュレータ３(FXYD domain containing ion transport regulator 3：FXYD3)；
    カドヘリン１(Cadherin 1：CDH1)；
    膵島再生遺伝子ファミリーメンバー４(Regenerating islet-derived family member 4：REG4)；
    グロースディファレンシエーションファクター１５(Growth differentiation factor 15：GDF 15)；
    クラウジン４(Claudin 4：CLDN4)；
    オルファクトメジン(Olfactomedin 4：OLFM 4)；
    ＣＤ９抗原(CD9 antigen：CD9)；
    カドヘリン１７(Cadherin 17：CDH17)；
    セレン結合タンパク質１(Selenium binding protein 1：SELENBP)；
    リポカリン２(Lipocalin 2：LCN2)；
    トランスメンブレンプロテアーゼセリン４(Transmembrane protease serin 4：TMPRSS4)；
    嚢胞性線維症トランスメンブレンコンダクタンスレギュレータＡＴＰ結合カセット(Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator ATP binding cassette：CFTR)；
    トランスメンブレン４スーパーファミリーメンバー３(Transmembrane 4 superfamily member 3：TM4SF3)；
    ＤＮＡ結合インヒビター１、ドミナントネガティブヘリックス-ループ-ヘリックスタンパク質(Inhibitor of DNA binding 1, dominant negative helix-loop-helix protein：ID1)；
    シトクロムＰ４５０、ファミリー２、サブファミリーＳ、ポリペプチド１(Cytochrome P450, family 2, subfamily S, polypeptide 1：CYP2S1)；
    トレフォイルファクター３(Trefoil factor 3：TFF3)；
    Ｅｔｓホモログファクター(Ets homologous factor：EHF)；
    ＦＡＴ腫瘍サプレッサーホモログ１(FAT tumor suppressor homolog 1：FAT)；
    クルッペル様ファクター５(Kruppel-like factor 5：KLF5)；
    溶質キャリアファミリー９(ナトリウム／水素交換体)、イソフォーム３レギュレータ２(Solute carrier family 9 (sodium/hydrogen exchanger), isoform 3 regulator 2：SLC9A3R2)；
    ホメオボックスタンパク質Ｂ９(Homeobox protein B9：HOXB9)；
    ＡＴＰアーゼ、Ｎａ+／Ｋ+輸送、β１ポリペプチド(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 1 polypeptide：ATP1B1)；
    ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ１(Phosphoenolpyruvate carboxykinase 1：PCK1)；および
    ＩｇＧ結合タンパク質のＦｃフラグメント(Fc fragment of IgG binding protein：FCGBP)
    からなる群より選択される少なくとも1つのタンパク質をコードする遺伝子のｍＲＮＡまたはその断片を含むマーカー。
  2. （ａ）配列番号３９〜１０６のいずれかに記載の配列を有するポリヌクレオチド；または
    （ｂ）前記（ａ）のポリヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが置換、欠失、挿入または付加された配列を有するポリヌクレオチドであって、請求項１に記載のマーカーに対応するｃＤＮＡにハイブリダイズすることができかつ請求項１記載のマーカーに対応するｃＤＮＡを核酸増幅法で増幅することができるポリヌクレオチド
    からなる核酸増幅用プライマ。
  3. 生体から切除されたリンパ節から検出用試料を調製し、
    前記検出用試料に含まれる、請求項１に記載のマーカーの少なくとも１種を検出し、
    検出結果に基づいて、大腸がん由来のがん細胞の前記リンパ節への転移を検出する
    工程を含む大腸がんのリンパ節への転移を検出する方法。
  4. 前記検出工程において、前記検出用試料と、逆転写活性を有する酵素と、ＤＮＡポリメラーゼと、請求項２に記載のプライマとを用いて逆転写反応および核酸増幅反応を行い、増幅されたｃＤＮＡを検出する請求項３に記載の方法。
  5. 前記検出結果とこれに対応する閾値とを比較して、大腸がん由来のがん細胞の前記リンパ節への転移を検出する請求項３または４に記載の方法。
  6. 前記検出結果とこれに対応する閾値とを比較して、大腸がんに由来するがん細胞の前記リンパ節での存在の有無を判定する請求項３または４に記載の方法。
JP2005379718A 2005-12-28 2005-12-28 大腸がんのリンパ節転移マーカー Pending JP2007175021A (ja)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005379718A JP2007175021A (ja) 2005-12-28 2005-12-28 大腸がんのリンパ節転移マーカー
US11/643,759 US20070172857A1 (en) 2005-12-28 2006-12-22 Primer and method for detecting lymph node metastasis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005379718A JP2007175021A (ja) 2005-12-28 2005-12-28 大腸がんのリンパ節転移マーカー

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2007175021A true JP2007175021A (ja) 2007-07-12

Family

ID=38285988

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2005379718A Pending JP2007175021A (ja) 2005-12-28 2005-12-28 大腸がんのリンパ節転移マーカー

Country Status (2)

Country Link
US (1) US20070172857A1 (ja)
JP (1) JP2007175021A (ja)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009168526A (ja) * 2008-01-11 2009-07-30 Hiroshima Univ 消化器癌検出用血清腫瘍マーカー、消化器癌検出キット、および消化器癌検出方法
WO2010137671A1 (ja) 2009-05-27 2010-12-02 国立大学法人秋田大学 ガンのリンパ節転移またはそのリスクを判定する方法及びそのための迅速判定キット
US9207242B2 (en) 2008-10-09 2015-12-08 The University Of Hong Kong Cadherin-17 as diagnostic marker and therapeutic target for liver cancer
JP5904939B2 (ja) * 2010-05-25 2016-04-20 株式会社島津製作所 大腸がんマーカーガレクチン、採血試料中のガレクチン濃度の分析方法及び大腸がんマーカーガレクチン検出キット
WO2016176446A3 (en) * 2015-04-29 2017-01-12 Geneoscopy, Llc Colorectal cancer screening method and device
US11479820B2 (en) 2016-10-27 2022-10-25 Geneoscopy, Inc. Detection method using eukaryotic cells
US11479824B2 (en) 2018-06-01 2022-10-25 Geneoscopy, Inc. Detection method for cancer using RNA biomarkers

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100113299A1 (en) * 2008-10-14 2010-05-06 Von Hoff Daniel D Gene and gene expressed protein targets depicting biomarker patterns and signature sets by tumor type
US8768629B2 (en) * 2009-02-11 2014-07-01 Caris Mpi, Inc. Molecular profiling of tumors
MX2008014608A (es) 2006-05-18 2009-03-31 Molecular Profiling Inst Inc Sistema y metodo para determinar la intervencion medica individualizada para un estado de enfermedad.
JP2008017832A (ja) * 2006-06-13 2008-01-31 Sysmex Corp がんの転移の判定方法及び判定装置
JP2008194028A (ja) * 2007-01-15 2008-08-28 Sysmex Corp 胃がんのリンパ節転移判定方法
JP5303132B2 (ja) * 2007-09-20 2013-10-02 シスメックス株式会社 がん細胞の存否を判定する方法及び装置
ES2332167B1 (es) 2007-12-04 2010-10-25 Universidad Autonoma De Madrid Empleo de trefoil factor-family 3 (tff3) en el pronostico de sujetos diagnosticados con cancer colorectal.
KR20100120657A (ko) * 2008-01-22 2010-11-16 베리덱스, 엘엘씨 Ⅱ기 및 ⅲ기 결장암의 분자적 병기 및 예후
CN107254538A (zh) 2008-11-12 2017-10-17 卡里斯生命科学瑞士控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和***
AU2011223789A1 (en) 2010-03-01 2012-09-20 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Biomarkers for theranostics
CA2795776A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers for disease
US9896730B2 (en) 2011-04-25 2018-02-20 OSI Pharmaceuticals, LLC Use of EMT gene signatures in cancer drug discovery, diagnostics, and treatment
CN102841200A (zh) * 2011-06-24 2012-12-26 中国科学院上海药物研究所 pIgR作为肿瘤早期复发和/或转移的分子标志物和抗肿瘤转移的药物干预靶点的用途

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2763958A1 (fr) * 1997-05-29 1998-12-04 Transgene Sa Produit de combinaison associant un acide nucleique a une substance desorganisant la matrice extracellulaire pour la therapie genique
US7700341B2 (en) * 2000-02-03 2010-04-20 Dendreon Corporation Nucleic acid molecules encoding transmembrane serine proteases, the encoded proteins and methods based thereon
WO2005055804A2 (en) * 2003-12-02 2005-06-23 Musc Foundation For Research Development Methods and compositions for diagnosing epithelial cell cancer

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009168526A (ja) * 2008-01-11 2009-07-30 Hiroshima Univ 消化器癌検出用血清腫瘍マーカー、消化器癌検出キット、および消化器癌検出方法
US9207242B2 (en) 2008-10-09 2015-12-08 The University Of Hong Kong Cadherin-17 as diagnostic marker and therapeutic target for liver cancer
WO2010137671A1 (ja) 2009-05-27 2010-12-02 国立大学法人秋田大学 ガンのリンパ節転移またはそのリスクを判定する方法及びそのための迅速判定キット
JP5904939B2 (ja) * 2010-05-25 2016-04-20 株式会社島津製作所 大腸がんマーカーガレクチン、採血試料中のガレクチン濃度の分析方法及び大腸がんマーカーガレクチン検出キット
WO2016176446A3 (en) * 2015-04-29 2017-01-12 Geneoscopy, Llc Colorectal cancer screening method and device
US11479820B2 (en) 2016-10-27 2022-10-25 Geneoscopy, Inc. Detection method using eukaryotic cells
US11479824B2 (en) 2018-06-01 2022-10-25 Geneoscopy, Inc. Detection method for cancer using RNA biomarkers

Also Published As

Publication number Publication date
US20070172857A1 (en) 2007-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2007175021A (ja) 大腸がんのリンパ節転移マーカー
US20230287511A1 (en) Neuroendocrine tumors
Sorber et al. Circulating cell-free nucleic acids and platelets as a liquid biopsy in the provision of personalized therapy for lung cancer patients
KR102648965B1 (ko) 간세포 암종 검출
EP3094747B1 (en) Gene expression panel for prognosis of prostate cancer recurrence
US20090291438A1 (en) Methods for Analysis of Extracelluar RNA Species
US8080378B2 (en) Method of detecting colon cancer marker
BRPI0708534A2 (pt) ensaio molecular para prognosticar a recorrência de cáncer do cólon dukes b
EP2268838A1 (en) Methods, agents and kits for the detection of cancer
JP2004505611A (ja) 乳癌の検出およびモニタリングのための方法、組成物、およびキット
US11697853B2 (en) Detecting prostate cancer
US20230028856A1 (en) Detecting gastrointestinal neoplasms
KR20190026769A (ko) 유전자 발현 프로파일을 사용하여 폐암을 진단하기 위한 조성물 및 방법
JP5379350B2 (ja) 胃がんのリンパ節転移の判定を補助する方法。
US7217515B2 (en) HURP gene as a molecular marker for bladder cancer
CN107326092B (zh) 大肠癌相关的miRNA作为生物标志物的应用及大肠癌检测试剂盒
CA3085464A1 (en) Compositions and methods for diagnosing lung cancers using gene expression profiles
JP2007267692A (ja) 乳がんのリンパ節転移マーカー、プライマ及びこのマーカーを用いた乳がんのリンパ節転移判定方法
Ahmed Development of novel diagnostic and prognostic molecular markers for sporadic colon cancer
US20120095301A1 (en) Method of determining lymph node metastasis in cervical cancer, device for determining the same, and computer program
JP4207187B2 (ja) 膀胱癌に対する分子マーカーとしてのｈｕｒｐ遺伝子
Zehentner Breast Cancer Patients Before, During or After Treatment: Circulating Tumor Cells in Peripheral Blood Detected by Multigene Real-Time Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20081017

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20110524

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20111025