JP2007084508A - 新規血管内皮増殖因子発現阻害剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明はムクロジエキス(Mukurossi Peel Extract)及びヘーゼルナッツエキス(Hazelnut Extract)から成る群から選ばれる1又は2種の生薬を含有することを特徴とする、抗老化剤、血管新生阻害剤又は血管内皮増殖因子発現阻害剤を提供する。
【選択図】 図1
Description
ヘーゼルナッツエキス:ヘーゼルナッツ(Guevina avellana Mol (Proteaceae)の種子から抽出したエキス。この実からは料理に使われる食用オイルが採取されるが、このオイルは同時に肌の乾燥を防ぐ働きがあるとして、石鹸、パック、マッサージオイルに利用されている。
VEGF発現阻害剤活性を有する生薬のスクリーニング
VEGFプロモーターの下流にルシフェラーゼコード遺伝子をレポーター遺伝子として結合させたDNA構築体をHaCaT細胞に安定的に導入した細胞株を用いた。上記細胞株をDMEM(Invitrogen社)(10%のFBS(ICN社)及び400μg/mlのG418(Promega社)含有)培地に懸濁し、24穴プレートに1穴あたり4×104細胞となるように播種し、5%CO2、37℃培養した。約24時間後、候補薬剤としての各種植物抽出物乾燥物をDMSO(和光純薬工業)中に溶解させたものを、培養液に対する終濃度として10-4、10-3、10-2%を加えて24時間培養した。培養上清液を除去後、細胞をPBSで洗浄し、Luciferase Assay System(Promega社)を用いてルシフェラーゼ活性測定を行なった。
尚、細胞のルシフェラーゼ活性を測定するために終濃度10μg/mlのHoechst 33342((Sigma社)を用いてウェル当たりのDNA量を測定した。これをウェル当たりの細胞数の指標とし、細胞当たりのルシフェラーゼ活性を求めた。
その結果、実験した各種植物抽出物のうち、ムクロジエキス及びヘーゼルナッツエキス(丸善製薬)がVEGFの発現を濃度依存式に阻害することが示された。その結果を図1に示す。コントロールは、候補薬剤の代わりにDMSOのみを作用させたものである。
正常細胞におけるVEGFタンパク質定量
実験1のルシフェラーゼアッセイによりプロモーター活性の抑制効果の認められた生薬ムクロジエキス及びヘーゼルナッツエキスについて、正常細胞における実際のVEGFタンパク質発現阻害効果の有無を確認した。
正常ヒトケラチノサイト(クラボウ)をKGM培地(クラボウ)に懸濁し、24穴プレートに1穴あたり4×104細胞となるように播種し、5%CO2、37℃培養した。約24時間後、シナノキエキス乾燥物をDMSO(和光純薬工業)中に溶解させたものを、培養液に対する終濃度として10-3、3.3×10-3、10-2%を加えて24時間培養した。培養上清液中のVEGFタンパク質をELISA(R&D Systems社)を用いて測定した。
その結果、ムクロジエキス及びヘーゼルナッツエキスがVEGFの発現を濃度依存式に阻害することが確認された。その結果を図2に示す。コントロールは、候補薬剤の代わりにDMSOのみを作用させたものである。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)ステアリン酸 5.0
(2)ステアリルアルコール 4.0
(3)イソプロピルミリステート 18.0
(4)グリセリンモノステアリン酸エステル 3.0
(5)プロピレングリコール 10.0
(6)ムクロジエキス 0.01
(7)苛性カリ 0.2
(8)亜硫酸水素ナトリウム 0.01
(9)防腐剤 適 量
(10)香料 適 量
(11)イオン交換水 残 余
(製法)(11)に(5)〜(7)を加え溶解し、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(4)、(8)〜(10)を混合し加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち、反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)ステアリン酸 2.0
(2)ステアリルアルコール 7.0
(3)水添ラノリン 2.0
(4)スクワラン 5.0
(5)2−オクチルドデシルアルコール 6.0
(6)ポリオキシエチレン(25モル)セチルアルコールエーテル 3.0
(7)グリセリンモノステアリン酸エステル 2.0
(8)プロピレングリコール 5.0
(9)ヘーゼルナッツエキス 0.05
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.03
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)(13)に(8)を加え、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(7)、(9)〜(12)を混合し、加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)固形パラフィン 5.0
(2)ミツロウ 10.0
(3)ワセリン 15.0
(4)流動パラフィン 41.0
(5)グリセリンモノステアリン酸エステル 2.0
(6)ポリオキシエチレン(20モル)ソルビタンモノラウリル酸エステル 2.0
(7)石鹸粉末 0.1
(8)硼砂 0.2
(9)ムクロジエキス 0.05
(10)ヘーゼルナッツエキス 0.05
(11)亜硫酸水素ナトリウム 0.03
(12)エチルパラベン 0.3
(13)香料 適 量
(14)イオン交換水 残 余
(製法)(14)に(7)、(8)を加え、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(6)、(9)〜(14)を混合し加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相をかき混ぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)ステアリン酸 2.5
(2)セチルアルコール 1.5
(3)ワセリン 5.0
(4)流動パラフィン 10.0
(5)ポリオキシエチレン(10モル)モノオレイン酸エステル 2.0
(6)ポリエチレングリコール1500 3.0
(7)トリエタノールアミン 1.0
(8)カルボキシビニルポリマー 0.05
(「カーボポール941」、B.F.Goodrich社)
(9)ムクロジエキス 0.01
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.01
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)少量の(13)に(8)を溶解する(A相)。一方、残りの(13)に(6)、(7)を加え、加熱溶解して70℃に保つ(水相)。(1)〜(5)、(9)〜(12)を混合し、加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相を加え、予備乳化を行い、A相を加えホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)マイクロクリスタリンワックス 1.0
(2)ミツロウ 2.0
(3)ラノリン 20.0
(4)流動パラフィン 10.0
(5)スクワラン 5.0
(6)ソルビタンセスキオレイン酸エステル 4.0
(7)ポリオキシエチレン(20モル)ソルビタンモノオレイン酸エステル 1.0
(8)プロピレングリコール 7.0
(9)ヘーゼルナッツエキス 1.0
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.01
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)(13)に(8)を加え、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(7)、(9)〜(12)を混合し、加熱融解して70℃に保つ(油相)。油相をかき混ぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後、よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)95%エチルアルコール 10.0
(2)ジプロピレングリコール 15.0
(3)ポリオキシエチレン(50モル)オレイルアルコールエーテル 2.0
(4)カルボキシビニルポリマー 1.0
(「カーボポール940」、B.F.Goodrich社)
(5)苛性ソーダ 0.15
(6)L−アルギニン 0.1
(7)ムクロジエキス 7.0
(8)2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム 0.05
(9)エチレンジアミンテトラアセテート・3Na・2水 0.05
(10)メチルパラベン 0.2
(11)香料 適 量
(12)イオン交換水 残 余
(製法)(12)に(4)を均一に溶解する(水相)。一方、(1)に(7)、(3)を溶解し、これを水相に添加する。次いでここに(2)、(8)〜(11)を加えた後、(5)、(6)で中和させ増粘する。
(配 合 成 分) (質量%)
(A相)
エチルアルコール(95%) 10.0
ポリオキシエチレン(20モル)オクチルドデカノール 1.0
パントテニールエチルエーテル 0.1
ヘーゼルナッツエキス 1.5
メチルパラベン 0.15
(B相)
水酸化カリウム 0.1
(C相)
グリセリン 5.0
ジプロピレングリコール 10.0
亜硫酸水素ナトリウム 0.03
カルボキシビニルポリマー 0.2
(「カーボポール940」、B.F.Goodrich社)
精製水 残 余
(製法)A相、C相をそれぞれ均一に溶解し、C相にA相を加えて可溶化する。次いでB相を加えた後、容器に充填する。
(配 合 成 分) (質量%)
(A相)
ジプロピレングリコール 5.0
ポリオキシエチレン(60モル)硬化ヒマシ油 5.0
(B相)
ムクロジエキス 0.01
オリーブ油 5.0
酢酸トコフェロール 0.2
エチルパラベン 0.2
香料 0.2
(C相)
亜硫酸水素ナトリウム 0.03
ポリビニルアルコール(ケン化度90、重合度2,000) 13.0
エタノール 7.0
精製水 残 余
(製法)A相、B相、C相をそれぞれ均一に溶解し、A相にB相を加えて可溶化する。次いでこれをC相に加えた後、容器に充填する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)タルク 43.1
(2)カオリン 15.0
(3)セリサイト 10.0
(4)亜鉛華 7.0
(5)二酸化チタン 3.8
(6)黄色酸化鉄 2.9
(7)黒色酸化鉄 0.2
(8)スクワラン 8.0
(9)イソステアリン酸 4.0
(10)モノオレイン酸POEソルビタン 3.0
(11)オクタン酸イソセチル 2.0
(12)ヘーゼルナッツエキス 1.0
(13)防腐剤 適 量
(14)香料 適 量
(製法)(1)〜(7)の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これに(8)〜(11)の油性成分、(12)、(13)、(14)を加えよく混練した後、容器に充填、成型する。
(配 合 成 分) (質量%)
(粉体部)
二酸化チタン 10.3
セリサイト 5.4
カオリン 3.0
黄色酸化鉄 0.8
ベンガラ 0.3
黒色酸化鉄 0.2
(油相)
デカメチルシクロペンタシロキサン 11.5
流動パラフィン 4.5
ポリオキシエチレン変性ジメチルポリシロキサン 4.0
(水相)
精製水 51.0
1,3−ブチレングリコール 4.5
ムクロジエキス 1.5
ソルビタンセスキオレイン酸エステル 3.0
防腐剤 適 量
香料 適 量
(製法)水相を加熱攪拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。さらに加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、攪拌しながら香料を添加し、室温まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)ステアリン酸 5.0
(2)ステアリルアルコール 4.0
(3)イソプロピルミリステート 18.0
(4)グリセリンモノステアリン酸エステル 3.0
(5)プロピレングリコール 10.0
(6)ヘーゼルナッツエキス 0.01
(7)苛性カリ 0.2
(8)亜硫酸水素ナトリウム 0.01
(9)防腐剤 適 量
(10)香料 適 量
(11)イオン交換水 残 余
(製法)(11)に(5)〜(7)を加え溶解し、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(4)、(8)〜(10)を混合し加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち、反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)ステアリン酸 2.0
(2)ステアリルアルコール 7.0
(3)水添ラノリン 2.0
(4)スクワラン 5.0
(5)2−オクチルドデシルアルコール 6.0
(6)ポリオキシエチレン(25モル)セチルアルコールエーテル 3.0
(7)グリセリンモノステアリン酸エステル 2.0
(8)プロピレングリコール 5.0
(9)ムクロジエキス 0.05
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.03
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)(13)に(8)を加え、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(7)、(9)〜(12)を混合し、加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)固形パラフィン 5.0
(2)ミツロウ 10.0
(3)ワセリン 15.0
(4)流動パラフィン 41.0
(5)グリセリンモノステアリン酸エステル 2.0
(6)ポリオキシエチレン(20モル)ソルビタンモノラウリル酸エステル 2.0
(7)石鹸粉末 0.1
(8)硼砂 0.2
(9)ヘーゼルナッツエキス 0.05
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.03
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)(13)に(7)、(8)を加え、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(6)、(9)〜(13)を混合し加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相をかき混ぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)ステアリン酸 2.5
(2)セチルアルコール 1.5
(3)ワセリン 5.0
(4)流動パラフィン 10.0
(5)ポリオキシエチレン(10モル)モノオレイン酸エステル 2.0
(6)ポリエチレングリコール1500 3.0
(7)トリエタノールアミン 1.0
(8)カルボキシビニルポリマー 0.05
(「カーボポール941」、B.F.Goodrich社)
(9)ムクロジエキス 0.01
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.01
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)少量の(13)に(8)を溶解する(A相)。一方、残りの(13)に(6)、(7)を加え、加熱溶解して70℃に保つ(水相)。(1)〜(5)、(9)〜(12)を混合し、加熱融解して70℃に保つ(油相)。水相に油相を加え、予備乳化を行い、A相を加えホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)マイクロクリスタリンワックス 1.0
(2)ミツロウ 2.0
(3)ラノリン 20.0
(4)流動パラフィン 10.0
(5)スクワラン 5.0
(6)ソルビタンセスキオレイン酸エステル 4.0
(7)ポリオキシエチレン(20モル)ソルビタンモノオレイン酸エステル 1.0
(8)プロピレングリコール 7.0
(9)ヘーゼルナッツエキス 1.0
(10)亜硫酸水素ナトリウム 0.01
(11)エチルパラベン 0.3
(12)香料 適 量
(13)イオン交換水 残 余
(製法)(13)に(8)を加え、加熱して70℃に保つ(水相)。一方、(1)〜(7)、(9)〜(12)を混合し、加熱融解して70℃に保つ(油相)。油相をかき混ぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後、よくかき混ぜながら30℃まで冷却する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)95%エチルアルコール 10.0
(2)ジプロピレングリコール 15.0
(3)ポリオキシエチレン(50モル)オレイルアルコールエーテル 2.0
(4)カルボキシビニルポリマー 1.0
(「カーボポール940」、B.F.Goodrich社)
(5)苛性ソーダ 0.15
(6)L−アルギニン 0.1
(7)ムクロジエキス 7.0
(8)2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム 0.05
(9)エチレンジアミンテトラアセテート・3Na・2水 0.05
(10)メチルパラベン 0.2
(11)香料 適 量
(12)イオン交換水 残 余
(製法)(12)に(4)を均一に溶解する(水相)。一方、(1)に(7)、(3)を溶解し、これを水相に添加する。次いでここに(2)、(8)〜(11)を加えた後、(5)、(6)で中和させ増粘する。
(配 合 成 分) (質量%)
(A相)
エチルアルコール(95%) 10.0
ポリオキシエチレン(20モル)オクチルドデカノール 1.0
パントテニールエチルエーテル 0.1
ヘーゼルナッツエキス 1.5
メチルパラベン 0.15
(B相)
水酸化カリウム 0.1
(C相)
グリセリン 5.0
ジプロピレングリコール 10.0
亜硫酸水素ナトリウム 0.03
カルボキシビニルポリマー 0.2
(「カーボポール940」、B.F.Goodrich社)
精製水 残 余
(製法)A相、C相をそれぞれ均一に溶解し、C相にA相を加えて可溶化する。次いでB相を加えた後、容器に充填する。
(配 合 成 分) (質量%)
(A相)
ジプロピレングリコール 5.0
ポリオキシエチレン(60モル)硬化ヒマシ油 5.0
(B相)
ムクロジエキス 0.01
オリーブ油 5.0
酢酸トコフェロール 0.2
エチルパラベン 0.2
香料 0.2
(C相)
亜硫酸水素ナトリウム 0.03
ポリビニルアルコール(ケン化度90、重合度2,000) 13.0
エタノール 7.0
精製水 残 余
(製法)A相、B相、C相をそれぞれ均一に溶解し、A相にB相を加えて可溶化する。次いでこれをC相に加えた後、容器に充填する。
(配 合 成 分) (質量%)
(1)タルク 43.1
(2)カオリン 15.0
(3)セリサイト 10.0
(4)亜鉛華 7.0
(5)二酸化チタン 3.8
(6)黄色酸化鉄 2.9
(7)黒色酸化鉄 0.2
(8)スクワラン 8.0
(9)イソステアリン酸 4.0
(10)モノオレイン酸POEソルビタン 3.0
(11)オクタン酸イソセチル 2.0
(12)ヘーゼルナッツエキス 1.0
(13)防腐剤 適 量
(14)香料 適 量
(製法)(1)〜(7)の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これに(8)〜(11)の油性成分、(12)、(13)、(14)を加えよく混練した後、容器に充填、成型する。
(配 合 成 分) (質量%)
(粉体部)
二酸化チタン 10.3
セリサイト 5.4
カオリン 3.0
黄色酸化鉄 0.8
ベンガラ 0.3
黒色酸化鉄 0.2
(油相)
デカメチルシクロペンタシロキサン 11.5
流動パラフィン 4.5
ポリオキシエチレン変性ジメチルポリシロキサン 4.0
(水相)
精製水 51.0
1,3−ブチレングリコール 4.5
ムクロジエキス 1.5
ソルビタンセスキオレイン酸エステル 3.0
防腐剤 適 量
香料 適 量
(製法)水相を加熱攪拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。さらに加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、攪拌しながら香料を添加し、室温まで冷却する。
ムクロジエキス 100mg
マルトシル−β−シクロデキストリン 726mg
水酸化ナトリウム 33.3μg
注射用蒸留水 全量 5.0ml
マルトシル−β−シクロデキストリン726mgを溶解させた注射用蒸留水にムクロジエキス100mgを加えた。そこに水酸化ナトリウム(33.3μg)の水溶液を加えて全量を5mlになるように調製した後、濾過した。これをバイアルに充填した後、凍結乾燥して注射剤を得た。
ヘーゼルナッツエキス 1g
ポリエチレングリコール6000 10g
ラウリル硫酸ナトリウム 1.5g
トウモロコシデンプン 3g
乳糖 25g
ステアリン酸マグネシウム 0.5g
(製法)上記成分を秤量する。ポリエチレングリコール6000を70〜80℃に加熱し、そこにヘーゼルナッツエキス、ラウリル硫酸ナトリウム、トウモロコシデンプンおよび乳糖を混合した後、冷却する。固化した混合物を粉砕器にかけ造粒し、顆粒を得る。顆粒をステアリン酸マグネシウムと混合後、圧縮打錠して重量250mgの錠剤とする。
ムクロジエキス 3g
乳糖 55g
ジャガイモデンプン 12g
ポリビニルアルコール 1.5g
ステアリン酸マグネシウム 1.5g
(製法)上記の成分を秤量する。ムクロジエキス、乳糖、ジャガイモデンプンを均一に混合する。混合物にポリビニルアルコールの水溶液を加え、湿式顆粒造粒法により顆粒を調製する。顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウムを混合後、圧縮打錠して重量200mgの錠剤とする。
ヘーゼルナッツエキス 1g
乳糖 25g
トウモロコシデンプン 5g
微結晶セルロース 9.5g
ステアリン酸マグネシウム 0.5g
(製法)上記の成分を秤量する。ステアリン酸マグネシウム以外の4成分を均一に混合する。ステアリン酸マグネシウムを加えた後、さらに数分間混合する。混合物をハードカプセルに200mgずつ充填し、カプセル剤とする。
ムクロジエキス 2g
乳糖 79g
ステアリン酸マグネシウム 1g
(製法)上記成分を秤量する。すべての成分を均一に混合して散剤とする。
ヘーゼルナッツエキス 1g
ポリエチレングリコール1500 18g
ポリエチレングリコール4000 72g
(製法)熔融法によって1gの直腸坐剤とする。
ヘーゼルナッツエキス 0.1g
塩化ナトリウム 0.9g
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 100mL
(製法)上記成分を秤量する。3成分を注射用水に溶解、ろ過滅菌後、10mLアンプルに5mLずつ分注し、熔封して注射剤とする。
Claims (4)
- ムクロジエキス(Mukurossi Peel Extract)及びヘーゼルナッツエキス(Hazelnut Extract)から成る群から選ばれる1又は2種の生薬を含有する、抗老化剤。
- ムクロジエキス及びヘーゼルナッツエキスから成る群から選ばれる1又は2種の生薬を含有する、血管新生阻害剤。
- ムクロジエキス及びヘーゼルナッツエキスから成る群から選ばれる1又は2種の生薬を含有する、血管内皮増殖因子(VEGF)発現阻害剤。
- 老化を抑制するための方法であって、請求項1記載の抗老化剤を皮膚に塗布すること含んで成る美容方法。
Priority Applications (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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