JP2006508662A - ポリヌクレオチドの多重増幅 - Google Patents
ポリヌクレオチドの多重増幅 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006508662A JP2006508662A JP2004557332A JP2004557332A JP2006508662A JP 2006508662 A JP2006508662 A JP 2006508662A JP 2004557332 A JP2004557332 A JP 2004557332A JP 2004557332 A JP2004557332 A JP 2004557332A JP 2006508662 A JP2006508662 A JP 2006508662A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amplification
- multiplex
- primer
- reaction
- pcr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Description
本出願は、米国特許法第119条(e)の下、出願番号第60/431,156号(2002年12月4日出願)および出願番号_____(「MULTIPLEX AMPLIFICATION OF POLYNUCLEOTIDES」と題され、2003年11月25日出願)(代理人整理番号P−71902−1)についての優先権の利益を主張し、これらの開示は、本明細書中に参考として援用される。
本発明は、分子生物学の分野に関連し、そして特に多重様式で目的のポリヌクレオチド配列を増幅するための方法、試薬およびキットを提供する。一旦増幅されると、この多重増幅産物は、さらなる精製または操作を伴わず下流の分析に使用され得る。
ポリメラーゼ連鎖反応を使用する核酸の増幅のための一般的な原則および条件は、当該分野において周知である(例えば、米国特許第4,683,195号;同第4,683,202号;および同第4,965,188号)。組織サンプル由来の核酸の増幅は、疾患の状態を診断および予後の決定の両方についての貴重な情報供給源、ならびに遺伝的な障害(一塩基多型(SNP)、異常遺伝子の発現、染色体および遺伝子の再配列、転座および/または選択的スプライシング、ならびに染色体の重複/除去を含む)と関連付ける能力を示す。しかし、従来のポリメラーゼ連鎖反応の方法は、PCR反応(例えば、一重PCR)ごとに単一のDNA標的種のみの増幅を可能とする。例えば、目的の10,000個の標的配列の増幅は、代表的に従来のPCR手順に基づいて10,000個の別々のポリメラーゼ連鎖反応を必要とする。この従来のアプローチは、時間を消費することおよび費用がかかることが判明している。従って、サンプルに由来する標的配列を増幅する改善された方法に対する必要性が当該分野において存在し、ここで任意の複数の標的配列は、多重様式において同一の反応条件の下で同時に増幅され得る。
種々の実施形態において、本発明は、多重様式における目的のポリヌクレオチド配列を増幅するための方法、試薬およびキットを提供する。本発明の方法の一つの実施形態によると、一以上のポリヌクレオチドは、複数の増幅プライマー対またはセットを使用して増幅され(例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(「PCR」)または逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(「RT−PCR」により)、これら複数の増幅プライマー対またはセットの各々は、別々の目的のポリヌクレオチド配列を増幅するのに適し、または作用する。増幅プライマーの一対またはセットを用いて実施され、そのため単一の増幅された配列(「アンプリコン」)を産生する従来の増幅反応とは異なり、本発明の多重増幅方法は、複数の増幅プライマーの対またはセットを利用する利点により、単一の反応において複数の別々の目的の配列の同時増幅を可能とする。
特定の実施形態において、本発明は、目的のポリヌクレオチド配列を多重様式で増幅するための方法、試薬およびキットを提供する。多重増幅は、周知の原理、およびポリメラーゼ連鎖反応(「PCR」)または逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(「RT−PCR」)それぞれによるDNAポリヌクレオチドまたはRNAポリヌクレオチドの増幅のための試薬を、一つの重要な相違を伴なって使用する。多重増幅は、単一のセットまたは一対の増幅プライマーを使用するのではなく、複数の異なる増幅プライマー対またはセットを単一の反応で使用し、単一の反応で複数のポリヌクレオチド配列の同時増幅を可能にする。従って、多重増幅は、単一増幅産物すなわち「アンプリコン」を生成するのではなく、単一の反応で、複数の異なるアンプリコンを生成する。以下でより詳細に記載するように、多重様式で増幅され得るポリヌクレオチドは、2’−デオキシリボ核酸(DNA)およびリボ核酸(RNA)の両方を含む。増幅されるべきポリヌクレオチド(「標的ポリヌクレオチド」)がRNAである場合、RNAは最初に逆転写されcDNAを生成し、それは次いで、多重様式で増幅され得る。あるいは、標的RNAは、RT−PCRの原理を用いて複数の増幅プライマー対の存在下で直接多重増幅され得る。従って、多重増幅の文脈で使用される場合、「ポリメラーゼ連鎖反応」は、多重PCRおよび多重RT−PCRの両方を含むことを意味する。
http://www.ucl.ac.uk/wibr/2/services/reldocs/taqmanpr.pdf;
http://www.ukl.uni−freiburg.de/core−facility/taqman/taqindex.html;
http://www.operon.com/oligos/toolkit.php;http://www−genome.wi.mit.edu/cgi−bin/primer/primer3_www.cgi;
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/;および
http://www.biotech.uiuc.edu/primer.htm
を参照のこと(これらは、特定のプライマー対がどのように設計され得るかを示す例を提供する)。
観察された効率%=100×(Ctコントロール値−Ctアッセイ値)/N。
平均効率%=100×(平均Ctコントロール値−平均Ctアッセイ値)/N。
本発明者らは、驚くべきことに、特定の実施形態においては、多重増幅は、おそらく高い増幅効率に起因してコピー数比を実質的に維持し、その結果、元のサンプルのコピー数または発現レベルは、多重増幅されたサンプルから確認され得ることを、発見した。従って、いくつかの実施形態において、元のサンプルからのコピー数は決定され得、例えば、種々の下流適用(例えば、遺伝子発現研究)において使用され得る。
2−ΔΔCt
によって与えられることが示され得、ここで、ΔΔCt=ΔCt処理−ΔCt未処理である。ΔΔCt値は、標的配列の発現レベルにおける処理の効果の分析において使用され得る。
(7.1 実施例1:多重増幅効率は、DNAポリメラーゼの濃度を増加させることによって増加する)
多重増幅を行うためのDNAポリメラーゼの最適量を決定するために、95重(95−plex)増幅をDNAポリメラーゼ濃度の関数として行った。95重増幅用の増幅プライマーミックスを、ランダムに選択した95個の異なる20X Assays−on−DemandTM遺伝子発現産物(Applied Biosystems、Applera Corporationの事業、カタログ番号
多重増幅の無数の利点のうちの2つは、非常に低いプライマー濃度を用い、かつプライマーの濃度を個々に最適化する必要がなく、1回において複数の配列を効率的に増幅する能力である。これらの点を実証するため、100ng cDNAを、6U/20μL DNAポリメラーゼを用いて、実施例1に記載されるように、95重(95−plex)増幅において0サイクルまたは10サイクル多重増幅した。各多重増幅物を分割し、そして95の個々の一重(single−plex)反応を、実施例1に記載のように実施した。各一重反応についてのΔCt値(Ct0サイクル−Ct10サイクル)を得、そして視覚的比較のため棒グラフにプロットした(図4)。実施例1についてのように、特定の反応についての最適ΔCtは、10である。図4から見られ得るように、95アッセイのうちの90アッセイは、無作為選択多重増幅においてうまく実施された。
多重増幅の別の重要な利点は、多重増幅の間にも、多重増幅産物について行われる下流増幅の間に有意な干渉なしに、オリゴヌクレオチドプローブ存在下で反応を実行する能力である。この前者の利点は、実施例2(前出)から明白である。実施例2において、多重増幅工程において効率的な増幅が達成され、これは、反応物中のTaqMan(登録商標)MGBオリゴヌクレオチドプローブを含め、Assays−On−DemandTM試薬を利用して、多重プライマープールを作製したおかげである。
多重増幅が、所望の型および/または数の分析のために、他の方法では少なすぎる量のサンプルの下流分析を可能にすることを実証するため、多重増幅を、種々の濃度(100ng〜100pgの範囲(5細胞のサンプルサイズとほぼ等価))のサンプルcDNAを用いて実行した。各濃度のcDNAを95重増幅に供し、その後、95の個々の実時間増幅分析を、実施例1に記載のように実施した。サンプルcDNA濃度の関数としての95重増幅の平均Ct値を、図6に提供する。図6に図示されるように、サンプルcDNA濃度と平均Ct値との間に線形相関が存在し、これは、大きな百分率(約97%)の標的配列を、これらが多重様式で同時に増幅されてもなお、効率よく増幅したことを実証する。達成した感度のレベルは、僅か1〜2細胞からのサンプルを、多重増幅後の実時間PCRによって分析し得ることを実証する。その上、多重増幅は、多数の下流実時間PCRアッセイのために十分な量の、増幅サンプルを生じる。
多重増幅が非常に高いレベルの複雑さで実行され得ることを実証するため、186重、369重、738重および1013重の増幅を、4つの個々の多重増幅反応において実行した。各増幅についての増幅プライマー混合物を、等容量の186、369、738または1013の異なった無作為に選択した20×Assays−on−DemandTM遺伝子発現産物を、4つの別々の微小遠心チューブにプールすることにより、それぞれ調製した。4本のチューブの各々について、プールした溶液を、SpeedVac(登録商標)濃縮機(Thermo Savant,Holbrook,NY)を用いて乾燥させた。残渣を、1×作業増幅プライマー濃度(45nM)に対し、多重増幅プライマーが4×ストック濃度(各180nMプライマー)になるように、脱イオン水中に再懸濁した。1013重プール混合物について、合わせたプライマーは、45.6μMの濃度にて再懸濁物中に存在し、そしてFAM標識TaqMan MGBプローブは、10.1μMで存在した。186重増幅について、2つのプレート(IAPおよびIAOと名付けられる)の各々からの92プライマーセットを、2つの参照遺伝子(グリセルアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)およびシクロフィリン)についての等容量のプライマーセットと共にプールした。この実施例において記載される実験を設定する上で、便宜上、液体移動において、上記の無作為選択した20×Assays−on−Demand遺伝子発現産物のそれぞれを、一連の96ウェルプレート(アルファベット順にプレートIAA〜IAOと名付けた)に分配した。各20×Assays−on−Demand遺伝子発現産物は、2種の未標識増幅プライマー(各プライマーにつき18μM)および1種のFAM標識化TaqMan(登録商標)MGBプローブ(5μM)を含んだ。
PCRにおける「持ち越し」夾雑を防ぐ方法としては、PCR混合物中でdTTPの代わりにdUTPを使用し、その後、全ての生じたPCR混合物をウラシルNグリコシラーゼ(UNG)で処理することが挙げられる(米国特許第5,035,996号)。この実施例におけるこの実験を、多重増幅の効率に対するUNGの存在の影響を評価するために実施した。
実施例5において、多重増幅を、10サイクル行った。本実施例において、多重増幅を、10サイクル、12サイクルおよび14サイクル行った。より高いサイクル数は、増幅産物の濃度を増加させ得、これは、より多数の下流アッセイ(例えば、より多数の一重増幅)を行うことを可能にする。
血漿中を循環するRNAの検出は、癌、冠状動脈不全および自己免疫機能不全のような疾患状態の早期検出を可能にし得、そしてまた、その後の遺伝子発現による投薬処置レジメンの成功を、モニタするためにも使用され得る。
Claims (43)
- サンプル内の目的の標的遺伝子配列の発現を定量するための方法であって、該方法は、以下:
(i)目的の標的遺伝子配列を増幅するのに適した複数の増幅プライマーセットの存在下において、および増幅した標的遺伝子配列の領域に相補的な少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブの存在下において、ポリメラーゼ連鎖反応によるサンプルに由来する一以上のcDNA分子を増幅する工程であって、該少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブは、必要に応じて時間の関数として該増幅反応をモニタするのに適した標識系により標識される工程、ならびに
(ii)工程(i)において増幅された該標的遺伝子配列を定量する工程、
を包含する、方法。 - 請求項1に記載の方法であって、前記工程(i)の増幅はさらに、前記ポリメラーゼ連鎖反応が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応であるように、逆転写酵素の存在下において実施され、そして前記一以上のcDNA分子は、前記サンプルに由来するmRNAから得られる、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記一以上のcDNA分子は、cDNAライブラリーを含む、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記定量する工程は、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応増幅法、DNAマイクロアレイハイブリダイゼーション分析法、電気泳動法およびクロマトグラフィー法からなる群の少なくとも一つより選択される方法による分析を包含する、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記工程(i)のポリメラーゼ連鎖反応は、前記増幅が、直線的な範囲にあり続けるように複数のサイクルで実施される、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記工程(i)における増幅は、熱安定性DNAポリメラーゼにより達成される、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブは、検出可能なシグナルを産生することが可能な部分により標識される、方法。
- 請求項7に記載の方法であって、前記標識は、フルオロフォアである、方法。
- 請求項7に記載の方法であって、前記少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブは、5’−エキソヌクレアーゼプローブ、ステム−ループ状ビーコンプローブおよびステムレス状ビーコンプローブからなる群より選択される、方法。
- 請求項1に記載の方法であって、前記少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブは、複数のオリゴヌクレオチドプローブを含み、該複数のオリゴヌクレオチドプローブの各々は、別々の増幅された目的の標的遺伝子配列の領域に相補的である、方法。
- 請求項10に記載の方法であって、前記工程(i)の生成物は、複数のアリコートに分配され、そして前記工程(ii)における定量する工程は、該アリコートで実施される、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記アリコートの数は、多重増幅に使用されるプライマー対の数と等しい、方法。
- 請求項12に記載の方法であって、工程(ii)は、複数の前記標的配列の一つを増幅するのに適した増幅プライマーセットの存在下においてポリメラーゼ連鎖反応により各アリコートにおける前記生成物を増幅する工程を包含する、方法。
- 請求項13に記載の方法であって、前記工程(ii)における増幅工程はさらに、異なる増幅された目的の標的遺伝子配列の領域に相補的なオリゴヌクレオチドプローブの存在下において実施され、ここで工程(ii)における各プローブは、工程(i)における一つの該オリゴヌクレオチドプローブを含む、方法。
- 請求項12に記載の方法であって、前記工程(i)の増幅プライマーセットの前記配列は、前記工程(ii)の増幅プライマーセットの前記配列と同一である、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記工程(ii)における増幅工程はさらに、分子の存在下において実施され、該分子は、二本鎖ポリヌクレオチドに結合する場合、時間の関数として前記増幅反応をモニタするのに適した検出可能なシグナルを産生する、方法。
- 請求項16に記載の方法であって、前記分子は、インターカレートする色素および小さい方の溝に結合する色素からなる群より選択される、方法。
- 請求項17に記載の方法であって、前記分子は、SYBR(登録商標)グリーンIおよびエチジウムブロマイドからなる群より選択される、方法。
- サンプル内の遺伝子発現のプロフィールを決定するための方法であって、該方法は、以下:
(i)該サンプルに由来する一以上のcDNA分子を、目的の標的遺伝子配列を増幅するのに適した複数の増幅プライマーセットの存在下においてポリメラーゼ連鎖反応により増幅させる工程;
(ii)選択したレベルよりも大きな観察された増幅効率を有する増幅した標的遺伝子配列を同定;および
(iii)遺伝子発現プロフィールを得るために、工程(ii)において同定された該標的遺伝子配列を定量する工程、
の工程を包含する、方法。 - 請求項19に記載の方法であって、前記工程(i)の増幅はさらに、前記ポリメラーゼ連鎖反応が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応であるように、逆転写酵素の存在下において実施され、そしてここで前記一以上のcDNA分子は、前記サンプルに由来するmRNAから得られる、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記一以上のcDNA分子は、cDNAライブラリーを含む、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記選択したレベルは、70%である、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記選択したレベルは、90%である、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記定量する工程は、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応増幅法、DNAマイクロアレイハイブリダイゼーション分析法、電気泳動法およびクロマトグラフィー法からなる群の少なくとも一つより選択される方法による分析法を包含する、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記工程(i)における増幅工程はさらに、増幅した目的の標的遺伝子配列の領域に相補的なオリゴヌクレオチドプローブの存在下において実施され、該プローブは、時間の関数として工程(i)における該増幅反応をモニタするのに適切な標識系により標識される、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記工程(i)の生成物は、複数のアリコートに分配され、そして前記工程(ii)における定量工程は、該アリコートで実施される、方法。
- 請求項26に記載の方法であって、工程(ii)は、複数の前記標的配列の一つを増幅するのに適した増幅プライマーセットの存在下において、ポリメラーゼ連鎖反応により一以上に分けたアリコートにおいて前記生成物を増幅する工程を包含する、方法。
- 請求項27に記載の方法であって、前記工程(i)の増幅プライマーセットの配列は、前記工程(ii)の増幅プライマーセットの配列と同一である、方法。
- 請求項27に記載の方法であって、前記工程(ii)における増幅する工程はさらに、分子の存在下において実施され、該分子は、二本鎖ポリヌクレオチドに結合する場合、時間の関数として前記増幅反応をモニタするのに適した検出可能なシグナルを産生する、方法。
- 請求項29に記載の方法であって、前記分子は、インターカレートする色素および小さい方の溝に結合する色素からなる群より選択される、方法。
- 請求項30に記載の方法であって、前記分子は、SYBR(登録商標)グリーンIおよびエチジウムブロマイドからなる群より選択される、方法。
- 請求項27に記載の方法であって、前記工程(i)のポリメラーゼ連鎖反応は、前記増幅が、直線的な範囲にあり続けるように複数のサイクルで実施される、方法。
- 目的の複数の標的配列を生成する方法であって、該方法は、以下:
目的の標的配列を増幅するのに適した複数の増幅プライマーの存在下において、および増幅した目的の標的配列の領域に相補的な少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブの存在下において、一以上の標的ポリヌクレオチドをポリメラーゼ連鎖反応により増幅する工程であって、該オリゴヌクレオチドプローブは必要に応じて、時間の関数として増幅反応をモニタするのに適した標識系により必要に応じて標識される、工程
を包含する、方法。 - 請求項33に記載の方法であって、前記少なくとも一つのオリゴヌクレオチドプローブは、複数のオリゴヌクレオチドプローブを含み、該複数のオリゴヌクレオチドプローブの各々は、増幅した目的の標的配列の領域に相補的である、方法。
- 請求項33に記載の方法であって、前記増幅の生成物はさらに、単一のポリヌクレオチドの多形成分析、遺伝子型分析、遺伝子発現分析、フィンガープリント分析、遺伝子診断のための遺伝子変異の分析、細胞において稀に発現される遺伝子の分析、核酸の配列決定、核酸のミニ配列決定、および遺伝子発現分析からなる群より選択される少なくとも一つのアッセイに供される、方法。
- 請求項33に記載の方法であって、前記増幅の生成物はさらに、クロマトグラフィー法、電気泳動法および色素またはハイブリダイゼーションプローブを用いた染色法からなる群より選択される少なくとも一つのアッセイに供される、方法。
- 請求項33に記載の方法であって、前記増幅の前記生成物は、複数のアリコートへ分配される、方法。
- 請求項35に記載の方法であって、前記増幅の前記生成物は、複数のアリコートへ分配され、そしてここで前記少なくとも一つのアッセイは、少なくとも一つの該アリコートで実施される、方法。
- 請求項38に記載の方法であって、前記アリコートの数は、前記増幅する工程において使用されるプライマー対の数と等しい、方法。
- 目的の複数の異なる標的配列を産生する方法であって、該方法は、以下:
目的の標的配列を増幅するのに適した複数の増幅プライマーの存在下において、および二重鎖ポリヌクレオチドに結合した場合、検出可能なシグナルを産生する分子の存在下において、一以上の標的ポリヌクレオチドをポリメラーゼ連鎖反応により増幅する工程であって、該分子は、時間の関数として該増幅反応をモニタするのに適し、それによって複数の標的配列を生成する、工程を包含する、方法。 - 請求項40に記載の方法であって、前記分子は、インターカレートする色素および小さい方の溝に結合する色素からなる群より選択される、方法。
- 請求項41に記載の方法であって、前記分子は、SYBR(登録商標)グリーンIおよびエチジウムブロマイドからなる群より選択される、方法。
- 請求項1、19、33および40のいずれか一項に記載の方法であって、前記増幅は、ウラシルN−グリコシラーゼの存在下において実施される、方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US43115602P | 2002-12-04 | 2002-12-04 | |
US52528403P | 2003-11-25 | 2003-11-25 | |
PCT/US2003/037808 WO2004051218A2 (en) | 2002-12-04 | 2003-11-26 | Multiplex amplification of polynucleotides |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009231041A Division JP2010000092A (ja) | 2002-12-04 | 2009-10-02 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006508662A true JP2006508662A (ja) | 2006-03-16 |
Family
ID=32474630
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004557332A Pending JP2006508662A (ja) | 2002-12-04 | 2003-11-26 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2009231041A Withdrawn JP2010000092A (ja) | 2002-12-04 | 2009-10-02 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2012244298A Pending JP2013039138A (ja) | 2002-12-04 | 2012-11-06 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2013271165A Expired - Lifetime JP5931045B2 (ja) | 2002-12-04 | 2013-12-27 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2015134353A Withdrawn JP2015165828A (ja) | 2002-12-04 | 2015-07-03 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009231041A Withdrawn JP2010000092A (ja) | 2002-12-04 | 2009-10-02 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2012244298A Pending JP2013039138A (ja) | 2002-12-04 | 2012-11-06 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2013271165A Expired - Lifetime JP5931045B2 (ja) | 2002-12-04 | 2013-12-27 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
JP2015134353A Withdrawn JP2015165828A (ja) | 2002-12-04 | 2015-07-03 | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8323897B2 (ja) |
EP (4) | EP1594975A4 (ja) |
JP (5) | JP2006508662A (ja) |
AU (1) | AU2003298706A1 (ja) |
WO (1) | WO2004051218A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012523821A (ja) * | 2009-03-27 | 2012-10-11 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 対立遺伝子変種を検出するための方法、組成物、およびキット |
US9534255B2 (en) | 2008-12-17 | 2017-01-03 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
Families Citing this family (91)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080085515A1 (en) * | 2000-03-24 | 2008-04-10 | Eppendorf Array Technologies Sa (Eat) | Identification of multiple biological (micro) organisms by detection of their nucleotide sequences on arrays |
US20070298423A1 (en) * | 2000-03-24 | 2007-12-27 | Eppendorf Array Technologies Sa (Eat) | Identification of multiple biological (micro) organisms by specific amplification and detection of their nucleotide sequences on arrays |
US7087414B2 (en) | 2000-06-06 | 2006-08-08 | Applera Corporation | Methods and devices for multiplexing amplification reactions |
CA2474482A1 (en) | 2002-01-25 | 2003-08-07 | Applera Corporation | Methods for placing, accepting, and filling orders for products and services |
JP2006508662A (ja) | 2002-12-04 | 2006-03-16 | アプレラ コーポレイション | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
WO2004068110A2 (en) | 2003-01-24 | 2004-08-12 | University Of Utah | Methods of predicting mortality risk by determining telomere length |
US7332280B2 (en) | 2003-10-14 | 2008-02-19 | Ronald Levy | Classification of patients having diffuse large B-cell lymphoma based upon gene expression |
AU2004284434A1 (en) * | 2003-10-16 | 2005-05-06 | Genomic Health, Inc. | qRT-PCR assay system for gene expression profiling |
US20050095600A1 (en) * | 2003-10-31 | 2005-05-05 | Xiang Yu | Methods of generating gene-specific probes for nucleic acid array detection |
US20050112591A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-05-26 | Applera Corporation | Novel method for isolating single stranded product |
KR20070085275A (ko) * | 2004-09-20 | 2007-08-27 | 유니버시티 오브 피츠버그 오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 | 멀티플 모드에 의한 멀티플렉스 반응 억제 방법 |
WO2006050062A2 (en) * | 2004-10-28 | 2006-05-11 | Rensselaer Polytechnic Institute | Polymerase-based protocols for the introduction of deletions and insertions |
EP1666150B1 (en) | 2004-11-20 | 2015-01-07 | Roche Diagnostics GmbH | Nucleic acid preparation |
US20060216737A1 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-28 | John Bodeau | Methods for multiplex amplification |
US20060269934A1 (en) * | 2005-03-16 | 2006-11-30 | Applera Corporation | Compositions and methods for clonal amplification and analysis of polynucleotides |
US7604940B1 (en) | 2005-03-16 | 2009-10-20 | Applied Biosystems, Llc | Compositions and methods for analyzing isolated polynucleotides |
US20060286558A1 (en) * | 2005-06-15 | 2006-12-21 | Natalia Novoradovskaya | Normalization of samples for amplification reactions |
ATE489473T1 (de) | 2005-07-15 | 2010-12-15 | Life Technologies Corp | Analyse von boten-rna und mikro-rna im gleichen reaktionsansatz |
WO2007011867A2 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Applera Corporation | Fluid processing device and method |
US20070128620A1 (en) | 2005-07-15 | 2007-06-07 | Applera Corporation | Hot start reverse transcription by primer design |
US11111544B2 (en) * | 2005-07-29 | 2021-09-07 | Natera, Inc. | System and method for cleaning noisy genetic data and determining chromosome copy number |
US9424392B2 (en) | 2005-11-26 | 2016-08-23 | Natera, Inc. | System and method for cleaning noisy genetic data from target individuals using genetic data from genetically related individuals |
WO2007024798A2 (en) | 2005-08-22 | 2007-03-01 | Applera Corporation | Apparatus, system, and method using immiscible-fluid-discrete-volumes |
JP5438320B2 (ja) | 2005-10-03 | 2014-03-12 | アプライド バイオシステムズ リミテッド ライアビリティー カンパニー | 核酸を増幅するための組成物、方法およびキット |
US20090305238A1 (en) * | 2006-01-23 | 2009-12-10 | Applera Corporation | Microarray Microcard |
WO2007087239A2 (en) * | 2006-01-23 | 2007-08-02 | Applera Corporation | Microarray microcard |
ES2345954T3 (es) * | 2006-05-12 | 2010-10-06 | Cepheid | Deteccion de la union de recombinacion de adn. |
US8119352B2 (en) * | 2006-06-20 | 2012-02-21 | Cepheld | Multi-stage amplification reactions by control of sequence replication times |
EP2484781B1 (en) | 2006-08-01 | 2017-08-23 | Applied Biosystems, LLC | Detection of analytes and nucleic acids |
US20080050724A1 (en) * | 2006-08-24 | 2008-02-28 | Microfluidic Systems, Inc. | Method of detecting one or more limited copy targets |
US20080161197A1 (en) * | 2006-12-12 | 2008-07-03 | Kai Qin Lao | Method for amplifying monomorphic-tailed nucleic acids |
US8198027B2 (en) | 2006-12-21 | 2012-06-12 | Gen-Probe Incorporated | Methods and compositions for nucleic acid amplification |
US20090023190A1 (en) | 2007-06-20 | 2009-01-22 | Kai Qin Lao | Sequence amplification with loopable primers |
US8008010B1 (en) | 2007-06-27 | 2011-08-30 | Applied Biosystems, Llc | Chimeric oligonucleotides for ligation-enhanced nucleic acid detection, methods and compositions therefor |
US20090291475A1 (en) * | 2008-04-23 | 2009-11-26 | Kai Qin Lao | Sequence amplification with linear primers |
US8697363B2 (en) | 2008-08-26 | 2014-04-15 | Fluidigm Corporation | Methods for detecting multiple target nucleic acids in multiple samples by use nucleotide tags |
JP5840950B2 (ja) * | 2008-12-22 | 2016-01-06 | ユニバーシティ・オブ・ユタ・リサーチ・ファウンデイション | 単色マルチプレックス定量pcr |
US8945842B2 (en) | 2009-01-14 | 2015-02-03 | Becton, Dickinson And Company | Assay for Trichomonas vaginalis by amplification and detection of Trichomonas vaginalis AP65-1 gene |
EP2411539B1 (en) | 2009-03-25 | 2018-10-03 | Life Technologies Corporation | Discriminatory positive/extraction control dna |
DK2414547T3 (da) | 2009-04-02 | 2014-06-16 | Fluidigm Corp | Multiprimer-amplifikationsmetode til stregkodning af målnukleinsyrer |
WO2011003020A1 (en) | 2009-07-01 | 2011-01-06 | Gen-Probe Incorporated | Methods and compositions for nucleic acid amplification |
EP2525909A1 (en) * | 2010-01-21 | 2012-11-28 | Promega Corporation | Consumable analytical plasticware comprising high-solubility plastics |
US20190010543A1 (en) | 2010-05-18 | 2019-01-10 | Natera, Inc. | Methods for simultaneous amplification of target loci |
US10316362B2 (en) | 2010-05-18 | 2019-06-11 | Natera, Inc. | Methods for simultaneous amplification of target loci |
US11322224B2 (en) | 2010-05-18 | 2022-05-03 | Natera, Inc. | Methods for non-invasive prenatal ploidy calling |
US11326208B2 (en) | 2010-05-18 | 2022-05-10 | Natera, Inc. | Methods for nested PCR amplification of cell-free DNA |
US11339429B2 (en) | 2010-05-18 | 2022-05-24 | Natera, Inc. | Methods for non-invasive prenatal ploidy calling |
US11939634B2 (en) | 2010-05-18 | 2024-03-26 | Natera, Inc. | Methods for simultaneous amplification of target loci |
US9677118B2 (en) | 2014-04-21 | 2017-06-13 | Natera, Inc. | Methods for simultaneous amplification of target loci |
US11332785B2 (en) | 2010-05-18 | 2022-05-17 | Natera, Inc. | Methods for non-invasive prenatal ploidy calling |
EP2854057B1 (en) | 2010-05-18 | 2018-03-07 | Natera, Inc. | Methods for non-invasive pre-natal ploidy calling |
US11408031B2 (en) | 2010-05-18 | 2022-08-09 | Natera, Inc. | Methods for non-invasive prenatal paternity testing |
US11332793B2 (en) | 2010-05-18 | 2022-05-17 | Natera, Inc. | Methods for simultaneous amplification of target loci |
WO2011158306A1 (ja) | 2010-06-18 | 2011-12-22 | 本田技研工業株式会社 | 路面反射率分類のためのシステム |
US20140170653A1 (en) | 2011-04-15 | 2014-06-19 | Life Technologies Corporation | Chemical ligation |
WO2013081755A1 (en) | 2011-11-29 | 2013-06-06 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for multiplex pcr |
US20130059738A1 (en) | 2011-04-28 | 2013-03-07 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for multiplex pcr |
US20130059762A1 (en) | 2011-04-28 | 2013-03-07 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for multiplex pcr |
US9957558B2 (en) | 2011-04-28 | 2018-05-01 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for multiplex PCR |
CN103635594B (zh) | 2011-05-09 | 2018-02-13 | 富鲁达公司 | 基于探针的核酸检测 |
WO2012162267A2 (en) | 2011-05-20 | 2012-11-29 | Fluidigm Corporation | Nucleic acid encoding reactions |
WO2013081864A1 (en) | 2011-11-29 | 2013-06-06 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions for multiplex pcr |
CA2874343C (en) | 2012-05-21 | 2021-11-09 | Fluidigm Corporation | Single-particle analysis of particle populations |
KR20210072137A (ko) | 2012-06-14 | 2021-06-16 | 라이프 테크놀로지스 코포레이션 | 폴리머라제 연쇄 반응 (pcr)을 위한 신규 조성물, 방법 및 키트 |
CN104619863A (zh) | 2012-07-13 | 2015-05-13 | 生命技术公司 | 采用一组snp的人身份识别 |
WO2014071322A1 (en) | 2012-11-02 | 2014-05-08 | Life Technologies Corporation | Small RNA Capture, Detection and Quantification |
JP6288404B2 (ja) | 2013-02-28 | 2018-03-07 | パナソニックIpマネジメント株式会社 | メイクアップ支援装置、メイクアップ支援方法、およびメイクアップ支援プログラム |
WO2014165210A2 (en) | 2013-03-12 | 2014-10-09 | Life Technologies Corporation | Universal reporter-based genotyping methods and materials |
JP6546158B2 (ja) | 2013-05-22 | 2019-07-17 | テロメア ダイアグノスティクス インコーポレイテッド | 短いテロメアの存在量の測定 |
CN113774132A (zh) | 2014-04-21 | 2021-12-10 | 纳特拉公司 | 检测染色体片段中的突变和倍性 |
US10077469B2 (en) | 2014-05-02 | 2018-09-18 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Pre-amplification assay |
US10240146B2 (en) * | 2014-07-30 | 2019-03-26 | President And Fellows Of Harvard College | Probe library construction |
GB201418980D0 (en) * | 2014-10-24 | 2014-12-10 | Univ Portsmouth | Cell assay kit and method |
WO2016108954A1 (en) | 2014-12-30 | 2016-07-07 | Telomere Diagnostics, Inc. | Multiplex quantitative pcr |
US11655510B2 (en) | 2015-04-20 | 2023-05-23 | Cellecta, Inc. | Experimentally validated sets of gene specific primers for use in multiplex applications |
US10975440B2 (en) | 2015-04-20 | 2021-04-13 | Cellecta, Inc. | Experimentally validated sets of gene specific primers for use in multiplex applications |
WO2016183106A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-11-17 | Natera, Inc. | Methods and compositions for determining ploidy |
WO2017075061A1 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Exact Sciences Corporation | Multiplex amplification detection assay and isolation and detection of dna from plasma |
WO2017106777A1 (en) | 2015-12-16 | 2017-06-22 | Fluidigm Corporation | High-level multiplex amplification |
CA3022911A1 (en) | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Exact Sciences Development Company, Llc | Detection of lung neoplasia by analysis of methylated dna |
US11485996B2 (en) | 2016-10-04 | 2022-11-01 | Natera, Inc. | Methods for characterizing copy number variation using proximity-litigation sequencing |
US10011870B2 (en) | 2016-12-07 | 2018-07-03 | Natera, Inc. | Compositions and methods for identifying nucleic acid molecules |
US11788123B2 (en) | 2017-05-26 | 2023-10-17 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for high-throughput image-based screening |
WO2019062614A1 (en) * | 2017-09-26 | 2019-04-04 | Phocus Technology ( Shanghai) Co. Ltd | METHOD FOR AMPLIFYING TARGET NUCLEIC ACID |
US10648025B2 (en) | 2017-12-13 | 2020-05-12 | Exact Sciences Development Company, Llc | Multiplex amplification detection assay II |
JP2021516985A (ja) | 2018-03-26 | 2021-07-15 | バックマン ラボラトリーズ インターナショナル,インコーポレイティド | 物質におけるバイオバーデンの定量方法 |
US11525159B2 (en) | 2018-07-03 | 2022-12-13 | Natera, Inc. | Methods for detection of donor-derived cell-free DNA |
EP3837380A4 (en) | 2018-08-17 | 2022-05-11 | Cellecta, Inc. | MULTIPLEX PREPARATION OF BARCODE GENE-SPECIFIC DNA FRAGMENTS |
CN110724731A (zh) * | 2019-11-22 | 2020-01-24 | 上海冰缘医疗科技有限公司 | 一种在多重pcr体系内加入内参定量核酸拷贝数的方法 |
CN112410406A (zh) * | 2020-11-23 | 2021-02-26 | 深圳基因家科技有限公司 | 一种确定文库扩增循环数的方法 |
WO2024081596A1 (en) * | 2022-10-10 | 2024-04-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Identification and characterization of gene fusions by crispr-targeted nanopore sequencing |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001094634A2 (en) * | 2000-06-06 | 2001-12-13 | Xtrana, Inc. | Methods and devices for multiplexing amplification reactions |
JP2002539769A (ja) * | 1999-01-29 | 2002-11-26 | ババリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 多重リアルタイムpcr |
Family Cites Families (117)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
JPS58158581A (ja) | 1982-03-16 | 1983-09-20 | Seiko Instr & Electronics Ltd | 電子時計用論理緩急回路 |
US4965188A (en) | 1986-08-22 | 1990-10-23 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4800159A (en) | 1986-02-07 | 1989-01-24 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences |
US5405774A (en) | 1986-08-22 | 1995-04-11 | Hoffmann-La Roche Inc. | DNA encoding a mutated thermostable nucleic acid polymerase enzyme from thermus species sps17 |
US5693517A (en) | 1987-06-17 | 1997-12-02 | Roche Molecular Systems, Inc. | Reagents and methods for coupled high temperature reverse transcription and polymerase chain reactions |
US5310652A (en) | 1986-08-22 | 1994-05-10 | Hoffman-La Roche Inc. | Reverse transcription with thermostable DNA polymerase-high temperature reverse transcription |
US5561058A (en) | 1986-08-22 | 1996-10-01 | Hoffmann-La Roche Inc. | Methods for coupled high temperatures reverse transcription and polymerase chain reactions |
US5750338A (en) | 1986-10-23 | 1998-05-12 | Amoco Corporation | Target and background capture methods with amplification for affinity assays |
AU622426B2 (en) | 1987-12-11 | 1992-04-09 | Abbott Laboratories | Assay using template-dependent nucleic acid probe reorganization |
US5130238A (en) | 1988-06-24 | 1992-07-14 | Cangene Corporation | Enhanced nucleic acid amplification process |
CA1339731C (en) | 1988-10-12 | 1998-03-17 | Charles T. Caskey | Multiplex genomic dna amplification for deletion detection |
US5035996A (en) | 1989-06-01 | 1991-07-30 | Life Technologies, Inc. | Process for controlling contamination of nucleic acid amplification reactions |
US6040138A (en) | 1995-09-15 | 2000-03-21 | Affymetrix, Inc. | Expression monitoring by hybridization to high density oligonucleotide arrays |
US6309822B1 (en) | 1989-06-07 | 2001-10-30 | Affymetrix, Inc. | Method for comparing copy number of nucleic acid sequences |
CA2033718A1 (en) | 1990-01-19 | 1991-07-20 | Ronald M. Atlas | Process for detection of water-borne microbial pathogens and indicators of human fecal contamination in water samples and kits therefor |
US5427930A (en) | 1990-01-26 | 1995-06-27 | Abbott Laboratories | Amplification of target nucleic acids using gap filling ligase chain reaction |
US5210015A (en) | 1990-08-06 | 1993-05-11 | Hoffman-La Roche Inc. | Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase |
DE69132765T2 (de) | 1990-12-24 | 2002-02-21 | Enzo Diagnostics Inc | Verfahren zum Nachweis eines Zielpolynukleotids in einer Probe unter Verwendung eines Reagenz, das den Hintergrund verringert, und eine dieses Reagenz enthaltende Zusammensetzung und Kit. |
US5455166A (en) | 1991-01-31 | 1995-10-03 | Becton, Dickinson And Company | Strand displacement amplification |
US5994056A (en) | 1991-05-02 | 1999-11-30 | Roche Molecular Systems, Inc. | Homogeneous methods for nucleic acid amplification and detection |
US5437976A (en) | 1991-08-08 | 1995-08-01 | Arizona Board Of Regents, The University Of Arizona | Multi-domain DNA ligands bound to a solid matrix for protein and nucleic acid affinity chromatography and processing of solid-phase DNA |
WO1994003624A1 (en) | 1992-08-04 | 1994-02-17 | Auerbach Jeffrey I | Methods for the isothermal amplification of nucleic acid molecules |
US5338671A (en) | 1992-10-07 | 1994-08-16 | Eastman Kodak Company | DNA amplification with thermostable DNA polymerase and polymerase inhibiting antibody |
US5340728A (en) | 1992-12-09 | 1994-08-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for amplification of targeted segments of nucleic acid using nested polymerase chain reaction |
US5436149A (en) | 1993-02-19 | 1995-07-25 | Barnes; Wayne M. | Thermostable DNA polymerase with enhanced thermostability and enhanced length and efficiency of primer extension |
US5876978A (en) | 1993-04-06 | 1999-03-02 | Medical College Of Ohio | Method for quantitative measurement of gene expression using multiplex competitive reverse transcriptase-polymerase chain reaction |
US5767259A (en) | 1994-12-27 | 1998-06-16 | Naxcor | Oligonucleotides containing base-free linking groups with photoactivatable side chains |
US5422252A (en) | 1993-06-04 | 1995-06-06 | Becton, Dickinson And Company | Simultaneous amplification of multiple targets |
US5470723A (en) | 1993-05-05 | 1995-11-28 | Becton, Dickinson And Company | Detection of mycobacteria by multiplex nucleic acid amplification |
CA2122203C (en) * | 1993-05-11 | 2001-12-18 | Melinda S. Fraiser | Decontamination of nucleic acid amplification reactions |
US5512430A (en) | 1993-07-13 | 1996-04-30 | Hri Research, Inc. | Diagnostic array for virus infection |
US5925517A (en) | 1993-11-12 | 1999-07-20 | The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. | Detectably labeled dual conformation oligonucleotide probes, assays and kits |
US5538848A (en) | 1994-11-16 | 1996-07-23 | Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. | Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe |
US5512462A (en) | 1994-02-25 | 1996-04-30 | Hoffmann-La Roche Inc. | Methods and reagents for the polymerase chain reaction amplification of long DNA sequences |
US6403303B1 (en) | 1996-05-14 | 2002-06-11 | Visible Genetics Inc. | Method and reagents for testing for mutations in the BRCA1 gene |
CA2195562A1 (en) | 1994-08-19 | 1996-02-29 | Pe Corporation (Ny) | Coupled amplification and ligation method |
US5707799A (en) | 1994-09-30 | 1998-01-13 | Abbott Laboratories | Devices and methods utilizing arrays of structures for analyte capture |
US5843660A (en) | 1994-09-30 | 1998-12-01 | Promega Corporation | Multiplex amplification of short tandem repeat loci |
US5585069A (en) | 1994-11-10 | 1996-12-17 | David Sarnoff Research Center, Inc. | Partitioned microelectronic and fluidic device array for clinical diagnostics and chemical synthesis |
CA2219891C (en) | 1995-05-05 | 2002-01-29 | The Perkin-Elmer Corporation | Methods and reagents for combined pcr amplification and hybridization probing assay |
DE69632324T2 (de) | 1995-06-07 | 2005-06-16 | PerSeptive Biosystems, Inc., Framingham | Pna-dna-chimäre und pna-synthone zu deren herstellung |
US5882856A (en) | 1995-06-07 | 1999-03-16 | Genzyme Corporation | Universal primer sequence for multiplex DNA amplification |
US5776682A (en) * | 1995-06-07 | 1998-07-07 | Promega Corporation | Male infertility y-deletion detection battery |
US5728526A (en) | 1995-06-07 | 1998-03-17 | Oncor, Inc. | Method for analyzing a nucleotide sequence |
US5705365A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-06 | Gen-Probe Incorporated | Kits for determining pre-amplification levels of a nucleic acid target sequence from post-amplification levels of product |
US6153425A (en) | 1995-07-13 | 2000-11-28 | Xtrana, Inc. | Self-contained device integrating nucleic acid extraction, amplification and detection |
US5981180A (en) | 1995-10-11 | 1999-11-09 | Luminex Corporation | Multiplexed analysis of clinical specimens apparatus and methods |
NO954667D0 (no) | 1995-11-17 | 1995-11-17 | Dagfinn Oegreid | Fremgangsmåte til deteksjon av Ki-ras mutasjoner |
US6001571A (en) | 1995-11-30 | 1999-12-14 | Mandecki; Wlodek | Multiplex assay for nucleic acids employing transponders |
US5888736A (en) | 1995-12-22 | 1999-03-30 | Visible Genetics, Inc. | Method, compositions and kit for detection and identification of microorganisms |
US5612473A (en) | 1996-01-16 | 1997-03-18 | Gull Laboratories | Methods, kits and solutions for preparing sample material for nucleic acid amplification |
US5716784A (en) | 1996-02-05 | 1998-02-10 | The Perkin-Elmer Corporation | Fluorescence detection assay for homogeneous PCR hybridization systems |
US6013440A (en) | 1996-03-11 | 2000-01-11 | Affymetrix, Inc. | Nucleic acid affinity columns |
CA2250212C (en) | 1996-04-03 | 2010-02-09 | The Perkin-Elmer Corporation | Device and method for multiple analyte detection |
JP3898228B2 (ja) | 1996-04-12 | 2007-03-28 | ザ パブリック ヘルス リサーチ インスティチュート オブ ザ シティー オブ ニューヨーク インク | 検出プローブ、キット及びアッセイ |
US5955268A (en) | 1996-04-26 | 1999-09-21 | Abbott Laboratories | Method and reagent for detecting multiple nucleic acid sequences in a test sample |
GB9609441D0 (en) | 1996-05-04 | 1996-07-10 | Zeneca Ltd | Process |
CA2255774C (en) | 1996-05-29 | 2008-03-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | Detection of nucleic acid sequence differences using coupled ligase detection and polymerase chain reactions |
US5858673A (en) * | 1996-06-24 | 1999-01-12 | Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Method for detecting prostate cells |
CA2274315A1 (en) * | 1996-12-06 | 1998-06-11 | Niels Pallisgaard | Detection of chromosomal abnormalities |
US6197557B1 (en) * | 1997-03-05 | 2001-03-06 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for analysis of nucleic acids |
US6183997B1 (en) | 1997-03-21 | 2001-02-06 | Stratagene | Polymerase enhancing factor (PEF) extracts PEF protein complexes isolated PEF proteins and methods for purifying and identifying same |
US6087098A (en) | 1997-04-15 | 2000-07-11 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Enhanced reverse transcriptase polymerase chain assay to detect MN in patients with renal cell carcinoma |
ATE347615T1 (de) | 1997-04-16 | 2006-12-15 | Applera Corp | Nukleinsäuresammlung |
DE19736062A1 (de) * | 1997-08-20 | 1999-02-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reduktion von Kreuzkontaminationen bei Nukleinsäureamplifikationen |
PT1012348E (pt) | 1997-09-16 | 2002-11-29 | Innogenetics Nv | Deteccao do virus do papiloma humano por pcr e hibridacao reversa tipo-especifica |
US6090558A (en) | 1997-09-19 | 2000-07-18 | Genetrace Systems, Inc. | DNA typing by mass spectrometry with polymorphic DNA repeat markers |
US6485944B1 (en) | 1997-10-10 | 2002-11-26 | President And Fellows Of Harvard College | Replica amplification of nucleic acid arrays |
US6485901B1 (en) | 1997-10-27 | 2002-11-26 | Boston Probes, Inc. | Methods, kits and compositions pertaining to linear beacons |
AU1366299A (en) | 1997-10-27 | 1999-05-17 | Boston Probes, Inc. | Methods, kits and compositions pertaining to pna molecular beacons |
EP1027456B1 (en) | 1997-10-31 | 2005-03-16 | Affymetrix, Inc. (a Delaware Corporation) | Expression profiles in adult and fetal organs |
IL123256A0 (en) | 1998-02-10 | 1998-09-24 | Yeda Res & Dev | Methods for dna amplification and sequencing |
US6037129A (en) | 1998-05-28 | 2000-03-14 | Medical University Of South Carolina | Multi-marker RT-PCR panel for detecting metastatic breast cancer |
GB9812674D0 (en) | 1998-06-12 | 1998-08-12 | Central Manchester Healthcare | Nucleic acids |
US6821724B1 (en) | 1998-09-17 | 2004-11-23 | Affymetrix, Inc. | Methods of genetic analysis using nucleic acid arrays |
US6406891B1 (en) | 1998-09-28 | 2002-06-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Dual RT procedure for cDNA synthesis |
US6140054A (en) | 1998-09-30 | 2000-10-31 | University Of Utah Research Foundation | Multiplex genotyping using fluorescent hybridization probes |
KR100506124B1 (ko) | 1998-11-27 | 2005-08-05 | 다카라 바이오 가부시키가이샤 | cDNA 합성 방법 |
CA2297352A1 (en) | 1999-02-05 | 2000-08-05 | Robert J. Lipshutz | Multiplex genotyping of populations of individuals |
US6410231B1 (en) | 1999-02-26 | 2002-06-25 | Incyte Genomics, Inc. | SNP detection |
WO2000055368A2 (en) | 1999-03-15 | 2000-09-21 | Pe Corporation (Ny) | Probe/mobility modifier complexes for multiplex nucleic acid detection |
US6383752B1 (en) | 1999-03-31 | 2002-05-07 | Hybridon, Inc. | Pseudo-cyclic oligonucleobases |
US6472156B1 (en) * | 1999-08-30 | 2002-10-29 | The University Of Utah | Homogeneous multiplex hybridization analysis by color and Tm |
US6300073B1 (en) | 1999-10-01 | 2001-10-09 | Clontech Laboratories, Inc. | One step RT-PCR methods, enzyme mixes and kits for use in practicing the same |
US6528254B1 (en) | 1999-10-29 | 2003-03-04 | Stratagene | Methods for detection of a target nucleic acid sequence |
AU1118801A (en) | 1999-11-03 | 2001-05-14 | Tvw Telethon Institute For Child Health Research | Method of detecting the presence or absence of specific genes |
AU2001234608A1 (en) | 2000-01-28 | 2001-08-07 | Genetrace Systems, Inc. | Methods for analysis of gene expression |
EP1130113A1 (en) | 2000-02-15 | 2001-09-05 | Johannes Petrus Schouten | Multiplex ligation dependent amplification assay |
FI20000333A0 (fi) * | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Jussi Nurmi | Homogeeninen menetelmä polynukleotidin havaitsemiseksi |
US6436677B1 (en) | 2000-03-02 | 2002-08-20 | Promega Corporation | Method of reverse transcription |
US6596488B2 (en) | 2000-03-30 | 2003-07-22 | City Of Hope | Tumor suppressor gene |
US7087414B2 (en) | 2000-06-06 | 2006-08-08 | Applera Corporation | Methods and devices for multiplexing amplification reactions |
KR20020000280A (ko) * | 2000-06-22 | 2002-01-05 | 김상종 | 환경수에서 바이러스 오염 검출방법 |
US6596490B2 (en) | 2000-07-14 | 2003-07-22 | Applied Gene Technologies, Inc. | Nucleic acid hairpin probes and uses thereof |
US6350580B1 (en) | 2000-10-11 | 2002-02-26 | Stratagene | Methods for detection of a target nucleic acid using a probe comprising secondary structure |
US6479242B1 (en) | 2000-10-26 | 2002-11-12 | Cleveland State University | Method for genotyping of single nucleotide polymorphism |
US20020182622A1 (en) | 2001-02-01 | 2002-12-05 | Yusuke Nakamura | Method for SNP (single nucleotide polymorphism) typing |
WO2002070751A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-12 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Pcr method |
EP1381673B1 (en) * | 2001-03-27 | 2009-05-13 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Compositions and methods useful for hcv infection |
US7262030B2 (en) * | 2001-05-09 | 2007-08-28 | Virginia Commonwealth University | Multiple sequencible and ligatible structures for genomic analysis |
CA2348042A1 (en) * | 2001-06-04 | 2002-12-04 | Ann Huletsky | Sequences for detection and identification of methicillin-resistant staphylococcus aureus |
WO2003019143A2 (en) * | 2001-08-23 | 2003-03-06 | Merck & Co., Inc. | Fluorescent multiplex hpv pcr assays using multiple fluorophores |
US6593091B2 (en) | 2001-09-24 | 2003-07-15 | Beckman Coulter, Inc. | Oligonucleotide probes for detecting nucleic acids through changes in flourescence resonance energy transfer |
CA2467587A1 (en) * | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Fluidigm Corporation | Microfluidic device and methods of using same |
US20030186246A1 (en) * | 2002-03-28 | 2003-10-02 | Willey James C. | Multiplex standardized reverse transcriptase-polymerase chain reacton method for assessment of gene expression in small biological samples |
KR100475309B1 (ko) * | 2002-11-05 | 2005-03-11 | 한국전자통신연구원 | Pcr 파라미터의 주기적 변화를 수반한 다중 pcr수행 방법 |
JP2006508662A (ja) * | 2002-12-04 | 2006-03-16 | アプレラ コーポレイション | ポリヌクレオチドの多重増幅 |
US7619522B2 (en) * | 2004-11-17 | 2009-11-17 | Destron Fearing Corporation | Radio frequency animal tracking system |
-
2003
- 2003-11-26 JP JP2004557332A patent/JP2006508662A/ja active Pending
- 2003-11-26 EP EP03796461A patent/EP1594975A4/en not_active Withdrawn
- 2003-11-26 WO PCT/US2003/037808 patent/WO2004051218A2/en active Application Filing
- 2003-11-26 US US10/723,520 patent/US8323897B2/en active Active
- 2003-11-26 EP EP09016059.9A patent/EP2194147B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-26 EP EP15177617.6A patent/EP3000899A1/en not_active Withdrawn
- 2003-11-26 EP EP08020322.7A patent/EP2031070B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-26 AU AU2003298706A patent/AU2003298706A1/en not_active Abandoned
-
2009
- 2009-10-02 JP JP2009231041A patent/JP2010000092A/ja not_active Withdrawn
-
2012
- 2012-10-04 US US13/645,264 patent/US20130096014A1/en not_active Abandoned
- 2012-11-06 JP JP2012244298A patent/JP2013039138A/ja active Pending
-
2013
- 2013-12-27 JP JP2013271165A patent/JP5931045B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2015
- 2015-06-26 US US14/752,396 patent/US9822405B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2015-07-03 JP JP2015134353A patent/JP2015165828A/ja not_active Withdrawn
-
2017
- 2017-10-17 US US15/785,693 patent/US10689695B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2020
- 2020-05-11 US US16/871,260 patent/US11667964B2/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002539769A (ja) * | 1999-01-29 | 2002-11-26 | ババリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 多重リアルタイムpcr |
WO2001094634A2 (en) * | 2000-06-06 | 2001-12-13 | Xtrana, Inc. | Methods and devices for multiplexing amplification reactions |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9512473B2 (en) | 2008-12-17 | 2016-12-06 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
US9534255B2 (en) | 2008-12-17 | 2017-01-03 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
US10081833B2 (en) | 2008-12-17 | 2018-09-25 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
US10570459B2 (en) | 2008-12-17 | 2020-02-25 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
US10689694B2 (en) | 2008-12-17 | 2020-06-23 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
US11530450B2 (en) | 2008-12-17 | 2022-12-20 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
US11572585B2 (en) | 2008-12-17 | 2023-02-07 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
JP2012523821A (ja) * | 2009-03-27 | 2012-10-11 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 対立遺伝子変種を検出するための方法、組成物、およびキット |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20040175733A1 (en) | 2004-09-09 |
AU2003298706A1 (en) | 2004-06-23 |
US20130096014A1 (en) | 2013-04-18 |
US10689695B2 (en) | 2020-06-23 |
US20180135104A1 (en) | 2018-05-17 |
WO2004051218A3 (en) | 2005-02-17 |
AU2003298706A8 (en) | 2004-06-23 |
US20200340039A1 (en) | 2020-10-29 |
JP2015165828A (ja) | 2015-09-24 |
EP2031070A1 (en) | 2009-03-04 |
JP5931045B2 (ja) | 2016-06-08 |
JP2010000092A (ja) | 2010-01-07 |
EP1594975A2 (en) | 2005-11-16 |
US20150292002A1 (en) | 2015-10-15 |
US11667964B2 (en) | 2023-06-06 |
EP2194147A1 (en) | 2010-06-09 |
EP2194147B1 (en) | 2015-07-22 |
EP2031070B1 (en) | 2013-07-17 |
EP3000899A1 (en) | 2016-03-30 |
WO2004051218A2 (en) | 2004-06-17 |
JP2014061008A (ja) | 2014-04-10 |
US8323897B2 (en) | 2012-12-04 |
US9822405B2 (en) | 2017-11-21 |
EP1594975A4 (en) | 2006-08-02 |
WO2004051218A8 (en) | 2004-09-10 |
JP2013039138A (ja) | 2013-02-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11667964B2 (en) | Multiplex amplification of polynucleotides | |
US20220073909A1 (en) | Methods and compositions for rapid nucleic library preparation | |
US9938570B2 (en) | Methods and compositions for universal detection of nucleic acids | |
US9909179B2 (en) | Single-cell nucleic acid analysis | |
US10501784B2 (en) | Sequence amplification with linear primers | |
US20120064530A1 (en) | Sequence amplification with loopable primers | |
US8349563B2 (en) | Sequence amplification with target primers | |
JP2007530026A (ja) | 核酸配列決定 | |
US20120142059A1 (en) | Sequence amplification with target primers | |
WO2012032510A1 (en) | Primers for amplifying dna and methods of selecting same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071211 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080310 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080317 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080411 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080512 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090604 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20090618 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090903 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090910 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091002 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20091002 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100818 |