JP2005536231A - アデノウイルスに細胞選択的複製をもたらすための、スプライセオソーム媒介型ｒｎａトランススプライシングの使用 - Google Patents
アデノウイルスに細胞選択的複製をもたらすための、スプライセオソーム媒介型ｒｎａトランススプライシングの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005536231A JP2005536231A JP2004557094A JP2004557094A JP2005536231A JP 2005536231 A JP2005536231 A JP 2005536231A JP 2004557094 A JP2004557094 A JP 2004557094A JP 2004557094 A JP2004557094 A JP 2004557094A JP 2005536231 A JP2005536231 A JP 2005536231A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- target
- mrna
- pretrans
- splice
- adenovirus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims abstract description 171
- 230000010076 replication Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title description 104
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title description 10
- 210000001324 spliceosome Anatomy 0.000 title description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 180
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 96
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 78
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 58
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims abstract description 56
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 55
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 36
- 108091092236 Chimeric RNA Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 140
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 claims description 70
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 53
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 53
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 43
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 37
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 34
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 32
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 32
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 31
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 28
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 28
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 27
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 19
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 17
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 claims description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims 66
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 17
- 230000030833 cell death Effects 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 abstract description 12
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 11
- 239000002243 precursor Substances 0.000 abstract description 9
- 230000002950 deficient Effects 0.000 abstract description 8
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 abstract description 5
- 206010060931 Adenovirus infection Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000011589 adenoviridae infectious disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 9
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 8
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 5
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 4
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 101000721757 Homo sapiens Olfactory receptor 51E2 Proteins 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 2
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 2
- 102100025128 Olfactory receptor 51E2 Human genes 0.000 description 2
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000015097 RNA Splicing Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039259 RNA Splicing Factors Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical group O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 1
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 1
- 108010024878 Adenovirus E1A Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 230000003682 DNA packaging effect Effects 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101150029662 E1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150082674 E2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066038 E4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000701135 Human adenovirus D9 Species 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 208000009869 Neu-Laxova syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 241001068295 Replication defective viruses Species 0.000 description 1
- -1 Sambrook et al. Chemical class 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 1
- 241000223105 Trypanosoma brucei Species 0.000 description 1
- 102000006986 U2 Small Nuclear Ribonucleoprotein Human genes 0.000 description 1
- 108010072724 U2 Small Nuclear Ribonucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 108010084938 adenovirus receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008684 selective degradation Effects 0.000 description 1
- 229920000260 silastic Polymers 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000000717 tumor promoter Substances 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10345—Special targeting system for viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/44—Vectors comprising a special translation-regulating system being a specific part of the splice mechanism, e.g. donor, acceptor
- C12N2840/445—Vectors comprising a special translation-regulating system being a specific part of the splice mechanism, e.g. donor, acceptor for trans-splicing, e.g. polypyrimidine tract, branch point splicing
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本発明は特定の標的前駆体メッセンジャーRNA分子（癌細胞選択的標的プレmRNA）を発現する癌細胞に腫瘍選択的細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。本発明の組成物は、1以上の癌細胞標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果としてアデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された1以上のプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された条件的複製アデノウイルスを含む。アデノウイルス特異的タンパク質は欠陥型アデノウイルスの複製に必要な必須の活性を相補するタンパク質を含む。本発明の方法および組成物は癌細胞に対して溶菌性アデノウイルス感染をターゲティングし、それにより、癌細胞を選択的に破壊する方法を提供するためにも用い得る。さらに本発明のアデノウイルスは、細胞内で感染性因子によりコードされた標的プレmRNAと相互作用し、それにより、そのような因子に感染した細胞の選択的破壊をターゲティングするよう設計されたPTMをコードするよう操作してもよい。
Description
１． 緒論
本発明は特定の標的前駆体メッセンジャーRNA（選択的標的プレmRNA）を発現する細胞に選択的アデノウイルス媒介性細胞死を付与するための方法および組成物を提供する。1以上の選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果としてアデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された1以上のプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された、条件的複製アデノウイルスを、本発明の組成物は含んでいる。アデノウイルス特異的タンパク質は条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性を相補するそのようなタンパク質を含む。標的プレmRNAとPTMとの間のトランススプライシングが上手くいけば、このアデノウイルスペプチドが発現され、それにより条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性の相補がもたらされる。このようなウイルス複製は細胞溶解をもたらし、それにより感染細胞の選択的破壊がターゲティングされる。
本発明は特定の標的前駆体メッセンジャーRNA（選択的標的プレmRNA）を発現する細胞に選択的アデノウイルス媒介性細胞死を付与するための方法および組成物を提供する。1以上の選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果としてアデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された1以上のプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された、条件的複製アデノウイルスを、本発明の組成物は含んでいる。アデノウイルス特異的タンパク質は条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性を相補するそのようなタンパク質を含む。標的プレmRNAとPTMとの間のトランススプライシングが上手くいけば、このアデノウイルスペプチドが発現され、それにより条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性の相補がもたらされる。このようなウイルス複製は細胞溶解をもたらし、それにより感染細胞の選択的破壊がターゲティングされる。
本発明の方法および組成物は特定の細胞種の選択的破壊を目的とする様々な異なる疾病を治療するために用いうる。例えば、本発明は、特定の標的前駆体メッセンジャーRNA分子（癌細胞選択的標的プレmRNA）を発現する癌細胞に選択的細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。1以上の癌細胞選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果としてアデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された1以上のプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された条件的複製アデノウイルスを、このような組成物は含む。あるいは、本発明は、病原性微生物に感染した細胞に選択的細胞死をもたらすために利用し得る。このような例では、条件的複製アデノウイルスは病原性微生物によってコードされている1以上の標的プレmRNAと、または病原性微生物に感染した細胞内で誘導された標的プレmRNAと相互作用するように設計されたPTMをコードし、かつ、アデノウイルスポリペプチドをコードするように遺伝子工学的に作製されている。標的プレmRNAとPTMとの間のトランススプライシングが上手くいけば、このアデノウイルスペプチドが発現され、それにより条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性の相補がもたらされる。
2. 発明の背景
2.1 トランススプライシング
染色体中のDNA配列は、コード領域(エキソン)を含み、通常、介在する非コード領域(イントロン)も含んだプレmRNAへと転写される。イントロンはスプライシングと呼ばれる精密なプロセスでプレmRNAから除去される。ほとんどの場合、スプライシング反応は同じプレmRNA分子内で起こり、これはシススプライシングと呼ばれる。独立して転写された2つのプレmRNAの間のスプライシングをトランススプライシングと呼ぶ。トランススプライシングはトリパノソーマで初めて発見され(Sutton & Boothroyd, 1986, Cell 47: 527; Murphyら, 1986, Cell 47:517)、続いて線虫(Krause & Hirsh, 1987, Cell 49:753);扁形動物(Rajkovicら, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:8879; Davisら, 1995, J. Biol. Chem. 270: 21813)および植物のミトコンドリア(Malekら, 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:553)で発見された。寄生虫Trypanosoma bruceiでは、全てのmRNAがトランススプライシングによりその5’末端にスプライスリーダー(SL)RNAを獲得する。線虫Caenorhabditis elegansでも、いくつかの遺伝子で5’リーダー配列がトランススプライシングされる。この機構は多くの異なる転写物に単一の共通配列を付加するのに好適である。
2.1 トランススプライシング
染色体中のDNA配列は、コード領域(エキソン)を含み、通常、介在する非コード領域(イントロン)も含んだプレmRNAへと転写される。イントロンはスプライシングと呼ばれる精密なプロセスでプレmRNAから除去される。ほとんどの場合、スプライシング反応は同じプレmRNA分子内で起こり、これはシススプライシングと呼ばれる。独立して転写された2つのプレmRNAの間のスプライシングをトランススプライシングと呼ぶ。トランススプライシングはトリパノソーマで初めて発見され(Sutton & Boothroyd, 1986, Cell 47: 527; Murphyら, 1986, Cell 47:517)、続いて線虫(Krause & Hirsh, 1987, Cell 49:753);扁形動物(Rajkovicら, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:8879; Davisら, 1995, J. Biol. Chem. 270: 21813)および植物のミトコンドリア(Malekら, 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:553)で発見された。寄生虫Trypanosoma bruceiでは、全てのmRNAがトランススプライシングによりその5’末端にスプライスリーダー(SL)RNAを獲得する。線虫Caenorhabditis elegansでも、いくつかの遺伝子で5’リーダー配列がトランススプライシングされる。この機構は多くの異なる転写物に単一の共通配列を付加するのに好適である。
米国特許第6,083,702号、同第6,013,487号および同第6,280,978号は、プレトランススプライシング分子(PTM)を用い、標的前駆体mRNAと接触させることによりトランススプライシング反応を媒介して新規なキメラRNAを生成することを記載している。結果として生じたRNAは、細胞もしくは宿主生物に対する治療価値のあるタンパク質、特定の細胞の死滅を引き起こすジフテリア毒素サブユニットAなどの毒素、または細胞には通常存在しない新規なタンパク質、をはじめとする任意の遺伝子産物をコードし得る。このようなPTMはまた、エキソンタギング法を用いてプレmRNA分子のエキソン／イントロン境界を同定するため、また、特定の細胞種で発現されるタンパク質を精製および同定するために使用可能なペプチドアフィニティー精製タグをコードするものをはじめとするキメラタンパク質を生成するために、作製することもできる。
2.2. アデノウイルスに基づく遺伝子療法
最近、宿主細胞の一部または全てに遺伝情報を送達するための方法として遺伝子療法が開発された。遺伝情報は、あるタンパク質をコードし得るcDNAのような遺伝子または遺伝子の誘導体の形態であり得る。遺伝子療法の適用には、宿主細胞に存在しないかまたは宿主細胞では変異しているタンパク質を提供することによる遺伝疾患の治療、そして腫瘍またはその他の後天的疾病の治療が含まれる。
最近、宿主細胞の一部または全てに遺伝情報を送達するための方法として遺伝子療法が開発された。遺伝情報は、あるタンパク質をコードし得るcDNAのような遺伝子または遺伝子の誘導体の形態であり得る。遺伝子療法の適用には、宿主細胞に存在しないかまたは宿主細胞では変異しているタンパク質を提供することによる遺伝疾患の治療、そして腫瘍またはその他の後天的疾病の治療が含まれる。
遺伝子療法の目的では、標的細胞に遺伝情報を首尾よく送達することが、困難な点の１つである。例えば、癌の遺伝子療法の分野において主に困難な点は、治療上の利益を得るのに十分な数の癌細胞に複製欠陥ベクターを送達することができないことである。最近開発された一つの方法として、目的の遺伝情報を発現するよう操作されたウイルスベクターの使用がある。アデノウイルス由来の遺伝子送達ベクターは、それらを遺伝子療法に特に有用なものとするいくつかの特徴を有する。例えば、アデノウイルスは広範に研究されているが、重篤な病理に関連しているとは知られておらず、またゲノムには組み込まれない。このウイルスは、非増殖細胞で複製することができ、また幅広い宿主域を持つ。このウイルスはそのウイルスの1以上の初期領域遺伝子を欠失させることにより複製欠陥とすることができる。1以上の初期領域遺伝子を欠失させて目的の遺伝子で置き換えたアデノウイルス由来のベクターが、臨床および前臨床段階にある遺伝子療法実験にこれまでに用いられている。このような組換えウイルスはウイルスゲノムの一部の欠失によって欠陥型となっている。しかしながら、このような場合、失ったアデノウイルス遺伝子産物をトランスで提供することにより、すなわち相補により、複製欠陥ウイルスのレスキューが達成できる。
アデノウイルスの初期遺伝子プロモーターを置き換えるには腫瘍選択的プロモーターが用いられており、これらのアデノウイルスは癌細胞で選択的に複製し、癌細胞を死滅させることが示されている(米国特許第5,998,205号; Kirnら, 2001, Nat. Med. 7:781-787)。初期遺伝子の発現およびアデノウイルスの複製の腫瘍選択性の程度は、用いる腫瘍プロモーターの選択によって異なる。多くの場合、このプロモーターは十分厳格な制御を提供するわけではなく、よって、正常な細胞においてアデノウイルス複製に由来する毒性が生じる。このようなベクターの使用に関連するもう一つの問題は、アデノウイルスゲノムに挿入できる腫瘍選択的プロモーターの大きさおよび数に物理的制約があることである。野生型アデノウイルスのゲノムは36キロベース(kb)であり、約38kbより大きなゲノムは十分パッケージングできない。
本発明は、特定の標的前駆体メッセンジャーRNA分子を発現している細胞に選択的細胞死をもたらす方法および組成物を提供する。具体的には本発明は、1以上の細胞選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果としてアデノウイルスタンパク質をコードし得るキメラRNA分子を生成するよう設計されたPTM分子を発現するように作製された条件的複製アデノウイルスを提供する。アデノウイルスタンパク質の発現により、条件的複製アデノウイルスの複製が可能となり、それにより、選択された細胞の溶解がもたらされる。本発明は、腫瘍特異的プロモーターの使用に頼らない癌細胞破壊をターゲティングするための系を提供する。さらに、本発明は、病原性微生物に感染した細胞に対する選択的細胞死、または特定の細胞種の活性が疾病につながる場合の細胞死をターゲティングするための系を提供する。
3. 発明の概要
本発明は特定の標的前駆体メッセンジャーRNA（選択的標的プレmRNA）を発現する細胞に選択的アデノウイルス媒介性細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。1以上の選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果、アデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された、1以上のプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された条件的複製アデノウイルスを、本発明の組成物は含む。アデノウイルス特異的タンパク質は条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性を相補するタンパク質を含む。標的プレmRNAとPTMとの間のトランススプライシングが上手くいくと、このアデノウイルスタンパク質が発現され、それにより条件的複製アデノウイルスの複製に必要な活性の必須の相補がもたらされる。このようなウイルス複製は細胞溶解をもたらし、それにより感染細胞の選択的破壊がターゲティングされる。
本発明は特定の標的前駆体メッセンジャーRNA（選択的標的プレmRNA）を発現する細胞に選択的アデノウイルス媒介性細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。1以上の選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果、アデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された、1以上のプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された条件的複製アデノウイルスを、本発明の組成物は含む。アデノウイルス特異的タンパク質は条件的複製アデノウイルスの複製に必要な必須の活性を相補するタンパク質を含む。標的プレmRNAとPTMとの間のトランススプライシングが上手くいくと、このアデノウイルスタンパク質が発現され、それにより条件的複製アデノウイルスの複製に必要な活性の必須の相補がもたらされる。このようなウイルス複製は細胞溶解をもたらし、それにより感染細胞の選択的破壊がターゲティングされる。
本発明は特定の標的前駆体メッセンジャーRNA分子（癌細胞選択的標的プレmRNA）を発現する癌細胞に腫瘍選択的細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。本発明の組成物は、1以上の癌細胞選択的標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果、アデノウイルス特異的タンパク質をコードし得る新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するよう設計された、プレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された条件的複製アデノウイルスを含む。PTMへとトランススプライスされる標的プレmRNAの一部はキメラRNA分子の翻訳の開始に必要なシグナル配列を提供する。標的プレmRNAへとトランススプライスされるPTMの部分は、条件的複製アデノウイルスの相補に必要な必須の活性をもたらすアデノウイルス特異的タンパク質をコードする配列を提供する。
本発明の方法および組成物は、腫瘍中に拡散することができ、それにより、腫瘍内の癌細胞の選択的破壊のための方法を提供する自己増幅細胞傷害因子、例えばアデノウイルスを生成する手段を提供する。よって、本発明は、限定されるものではないが、乳癌、前立腺癌、膀胱癌、膵臓癌または肝臓癌をはじめとする種々の異なる癌を治療するための方法および組成物を提供する。
さらに本発明は、病原性感染因子によって生産されるmRNAを発現する細胞に選択的細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。このような場合、PTMは病原性感染因子によって生産される1以上の標的プレmRNAと相互作用するように設計される。病原体により生産され、PTMへとトランススプライスされる標的プレmRNAの一部は、キメラ分子の翻訳の開始に必要なシグナル配列を提供する。標的プレmRNAへとトランススプライスされるPTMの一部は、条件的複製アデノウイルスの相補に必要な必須の活性をもたらすアデノウイルス特異的タンパク質をコードする配列を提供する。本発明の方法および組成物は感染細胞の選択的破壊に利用し得る。
本発明のさらにもう一つの実施形態では、その細胞の活性が疾患または障害、例えば免疫障害またはホルモン障害につながる場合に、細胞死をもたらすために組換えアデノウイルスを用い得る。
さらに本発明は、選択的プレmRNAを発現する細胞に治療用または診断用ポリペプチドを発現する能力をもたらすための方法および組成物を提供する。例えば、条件的複製ウイルスを、選択的プレmRNAへとトランススプライスされた際に治療用または診断用ポリペプチドをコードし得るPTMを発現するように作製し得る。この診断または治療用ポリペプチドは独立に発現させてもよいし、あるいはアデノウイルス融合タンパク質として発現させてもよい。治療用ポリペプチドを発現するアデノウイルスは、特定の細胞種または組織に対する治療をターゲティングするために使用できるが、一方、診断用ポリペプチドを発現するアデノウイルスは標的プレmRNAを発現する細胞を、例えばイメージングによって検出するために使用できる。
4. 図面の簡単な説明
（図面の簡単な説明については後述）
（図面の簡単な説明については後述）
5. 発明の詳細な説明
本発明は、特定の標的前駆体メッセンジャーRNA分子を発現する細胞に、アデノウイルスにより媒介される細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。この標的前駆体メッセンジャーRNA分子は癌細胞で選択的に発現されるものでもよく、あるいはそのRNA分子は細菌、寄生虫、真菌またはウイルスなどの感染因子によってコードされているものでもよい。標的プレmRNAはまた、細菌、寄生虫、真菌またはウイルス感染の際に誘導される細胞プレmRNA、またはそのプレmRNAの発現が特定の疾病または疾患に関連するプレmRNAを含む。本発明の組成物は、例えば1以上の癌細胞選択的標的プレmRNA、または感染性因子によりコードされている標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果、条件的複製アデノウイルスを生じ得るアデノウイルス特異的タンパク質をコードする新規なキメラRNA分子(キメラRNA)を形成するよう設計されたプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された組換えアデノウイルスを含む。特に、本発明のPTMは、条件的複製アデノウイルスの複製に必要なアデノウイルス特異的タンパク質をコードし、それにより、該アデノウイルスの相補をもたらすよう設計されている。本発明の方法および組成物は、癌細胞または病原性因子に感染した細胞に対する溶菌性アデノウイルス感染をターゲティングし、それにより、癌細胞または感染性因子に感染した細胞を選択的に破壊する方法を提供するために用い得る。さらにこの組換えアデノウイルスは診断用または治療用ポリペプチドをコードするPTM分子を発現するよう設計してもよい。これらのポリペプチドは独立に発現させてもよいし、あるいはアデノウイルス融合タンパク質として発現させてもよい。このような条件的複製組換えアデノウイルスは選択的プレmRNAを発現する細胞に対する治療用または診断用ポリペプチドのターゲティングを可能とする。
本発明は、特定の標的前駆体メッセンジャーRNA分子を発現する細胞に、アデノウイルスにより媒介される細胞死をもたらすための方法および組成物を提供する。この標的前駆体メッセンジャーRNA分子は癌細胞で選択的に発現されるものでもよく、あるいはそのRNA分子は細菌、寄生虫、真菌またはウイルスなどの感染因子によってコードされているものでもよい。標的プレmRNAはまた、細菌、寄生虫、真菌またはウイルス感染の際に誘導される細胞プレmRNA、またはそのプレmRNAの発現が特定の疾病または疾患に関連するプレmRNAを含む。本発明の組成物は、例えば1以上の癌細胞選択的標的プレmRNA、または感染性因子によりコードされている標的プレmRNAと相互作用し、トランススプライシング反応を媒介し、その結果、条件的複製アデノウイルスを生じ得るアデノウイルス特異的タンパク質をコードする新規なキメラRNA分子(キメラRNA)を形成するよう設計されたプレトランススプライシング分子(PTM)を発現するように遺伝子操作された組換えアデノウイルスを含む。特に、本発明のPTMは、条件的複製アデノウイルスの複製に必要なアデノウイルス特異的タンパク質をコードし、それにより、該アデノウイルスの相補をもたらすよう設計されている。本発明の方法および組成物は、癌細胞または病原性因子に感染した細胞に対する溶菌性アデノウイルス感染をターゲティングし、それにより、癌細胞または感染性因子に感染した細胞を選択的に破壊する方法を提供するために用い得る。さらにこの組換えアデノウイルスは診断用または治療用ポリペプチドをコードするPTM分子を発現するよう設計してもよい。これらのポリペプチドは独立に発現させてもよいし、あるいはアデノウイルス融合タンパク質として発現させてもよい。このような条件的複製組換えアデノウイルスは選択的プレmRNAを発現する細胞に対する治療用または診断用ポリペプチドのターゲティングを可能とする。
5.1 プレ-トランススプライシング分子の構造
本発明の組成物は、例えば癌細胞選択的標的プレmRNA、感染性因子によりコードされている標的プレmRNA分子、感染性微生物により誘導される標的細胞プレmRNA、またはそのプレmRNAの発現が疾患または障害に関連する標的プレmRNAなどの、1以上の選択的標的プレmRNA分子と相互作用するよう設計された、1以上のPTMを発現するように遺伝子操作された条件的複製組換えアデノウイルスを含む。このようなRNAはトランストランススプライシング反応を媒介し、その結果、新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するように設計される。この新規なキメラRNAは、条件的複製アデノウイルスの欠陥をレスキューし得る相補性アデノウイルスタンパク質をコードするように設計される。こうしたレスキューにより、溶菌性アデノウイルスが感染し、その結果、細胞溶解が起こる。本発明の組成物は、特定の標的プレmRNAを発現する細胞に選択的アデノウイルス媒介性細胞死をもたらす手段を提供する。本発明の条件的複製アデノウイルスは、(i)特定のプレmRNA標的に対するPTMの結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメイン、(ii)3'スプライスアクセプター部位および／または5'スプライスドナー部位を含む3’スプライス領域、ならびに(iii)アデノウイルスの複製に必要な少なくとも1つのアデノウイルスタンパク質をコードし得るヌクレオチド配列、を含んでなる。アデノウイルスタンパク質の他、PTMは診断または治療用ポリペプチドをコードし得る配列を含んでもよい。このようなポリペプチドはアデノウイルス融合タンパク質として発現されてもよく、この場合、融合タンパク質のアデノウイルス部分は相補活性を提供する能力を保持しているものである。あるいは、PTMは診断または治療用ポリペプチドを独立に発現するように作製してもよい。
本発明の組成物は、例えば癌細胞選択的標的プレmRNA、感染性因子によりコードされている標的プレmRNA分子、感染性微生物により誘導される標的細胞プレmRNA、またはそのプレmRNAの発現が疾患または障害に関連する標的プレmRNAなどの、1以上の選択的標的プレmRNA分子と相互作用するよう設計された、1以上のPTMを発現するように遺伝子操作された条件的複製組換えアデノウイルスを含む。このようなRNAはトランストランススプライシング反応を媒介し、その結果、新規なキメラRNA分子（キメラRNA）を生成するように設計される。この新規なキメラRNAは、条件的複製アデノウイルスの欠陥をレスキューし得る相補性アデノウイルスタンパク質をコードするように設計される。こうしたレスキューにより、溶菌性アデノウイルスが感染し、その結果、細胞溶解が起こる。本発明の組成物は、特定の標的プレmRNAを発現する細胞に選択的アデノウイルス媒介性細胞死をもたらす手段を提供する。本発明の条件的複製アデノウイルスは、(i)特定のプレmRNA標的に対するPTMの結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメイン、(ii)3'スプライスアクセプター部位および／または5'スプライスドナー部位を含む3’スプライス領域、ならびに(iii)アデノウイルスの複製に必要な少なくとも1つのアデノウイルスタンパク質をコードし得るヌクレオチド配列、を含んでなる。アデノウイルスタンパク質の他、PTMは診断または治療用ポリペプチドをコードし得る配列を含んでもよい。このようなポリペプチドはアデノウイルス融合タンパク質として発現されてもよく、この場合、融合タンパク質のアデノウイルス部分は相補活性を提供する能力を保持しているものである。あるいは、PTMは診断または治療用ポリペプチドを独立に発現するように作製してもよい。
ある場合には、本発明のPTMは、標的結合ドメインとRNAスプライス領域を隔てる1以上のスペーサー領域および／または安全装置配列(safety sequence)をさらに含んでもよい。PTMの構造は特許第6,013,487号、第6,083,702号、第6,280,978号、および同時係属中の米国特許出願第09/756,095号、同第09/756,096号、同第09/756,097号（これらの開示は参照により本明細書に組み入れる）に詳細に記載されている。
PTMの標的結合ドメインは、標的特異的プレmRNA、例えば癌特異的プレmRNAまたは病原性微生物によりコードされているプレmRNAの標的領域に相補的であり、かつ、その標的領域に対してアンチセンス配向である複数の結合ドメインを含んでもよい。本明細書において標的結合ドメインは、核のスプライセオソームプロセシング装置がPTMの一部をプレmRANの一部へとトランススプライスすることが可能となるような結合特異性を付与し、空間上近接してプレmRNAを固定する任意の配列として定義される。標的結合ドメインは、数千までのヌクレオチドを含み得る。本発明の好ましい実施形態では、これらの結合ドメインは少なくとも10〜30個、最大数百個までのヌクレオチドを含み得る。PTMの特異性は標的結合ドメインの長さを増すことにより著しく高めることができる。さらに、この標的結合ドメインは「直鎖状」であってもよいが、このRNAは、結合ドメインがその標的と遭遇し、それによりスプライシングの効率が高まるまでPTMスプライス部位の活性化を妨げることによって複合体を安定化させ得る二次構造を形成するよう折りたたまれていてもよいものと理解される。癌細胞選択的プレmRNAとの絶対的な相補性は、好ましいが、必ずしも必要ではない。本明細書で言及する、RNAの一部に対する配列の「相補性」とは、当該RNAとハイブリダイズして安定な二重らせんを形成し得るに十分な相補性を有する配列を意味する。ハイブリダイズの可能性は相補性の程度と核酸の長さの双方に依存する(例えば、Sambrookら, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York参照)。一般に、ハイブリダイズする核酸が長いほど、それが含み得るRNAとの塩基の誤対合は多くなるが、なお、安定した二重らせんを形成する。当業者ならば、ハイブリダイズした複合体の安定性を求める標準的な手法を用いて二重らせんの誤対合の許容度または長さを確認することができる。
本発明の一実施形態では、その目的が癌細胞に対して溶菌性アデノウイルス感染をターゲティングし、それにより癌細胞の破壊をターゲティングすることである場合、PTMの標的結合ドメインは、癌細胞選択的標的プレmRNA分子と相補的であり、かつ、それとアンチセンス配向にある配列を含む。例えば、PTM結合部位は、標的プレmRNAの発現が増殖性障害または疾患に関連している限り、そのようないずれの標的プレmRNAと結合するように作製してもよい。このような標的プレmRNAは、癌細胞では発現するが、その正常な細胞対応物では存在しないかまたは低レベルでしか発現しないプレmRNAであると特徴づけられる。このような標的プレmRNAとしては、例えば、β-絨毛性ゴナドトロピン6プレmRNA、上皮増殖因子受容体プレmRNA、E2F-1プレmRNA、またはテロメラーゼプレmRNA（これらは各々腫瘍細胞で過剰発現することが知られている）、および前立腺癌で過剰発現することが知られている前立腺特異的Gタンパク質共役受容体(PSGR)プレmRNAが挙げられる。
本発明の方法および組成物は、癌細胞で示差的に発現し、正常細胞では発現しないことが知られている任意のプレmRNAをターゲティングするよう設計することができる。さらに、当業者に周知の技術を用いて、癌細胞で示差的に発現し、正常な対応物では発現しない新規な遺伝子を同定してもよい。このような技術としては、例えば、癌細胞において示差的に発現される遺伝子を同定するためのcDNAマイクロアレイの使用が含まれる。(Ausebelら, 2003, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., Chapter 25参照)。
本発明のさらにもう1つの実施形態では、その目的が感染性因子に感染した細胞に対して溶菌性アデノウイルス感染をターゲティングし、それにより感染細胞の破壊をターゲティングすることである場合、PTMの標的結合ドメインは、感染性因子によりコードされている特定の標的プレmRNA分子と相補的であり、かつ、それに対してアンチセンス配向にある配列を含む。例えば、PTM結合部位は、標的プレmRNAの発現が例えばウイルス、細菌、真菌または寄生虫疾患に関連している限り、そのいずれの標的プレmRNAと結合するように作製してもよい。
結合はまた、例えば三重らせんの形成、またはタンパク質／核酸相互作用(PTMが特定のRNA結合タンパク質、例えば、特定の標的プレmRNAと結合しているタンパク質を認識するように作製されている場合の相互作用など)による他の機構によって達成してもよい。あるいは、本発明のPTMは、例えばRNA分子内のヌクレオチド間の分子内塩基対合から生じるヘアピン構造などの二次構造を認識するように設計してもよい。
上記に示すように、本発明のPTM分子はまた、分岐点、ピリミジン領域および3'スプライスアクセプターAG部位を含む3'スプライス領域、および／または5'スプライスドナー部位も含むよう設計される。RNAスプライシングに用いる5' スプライスドナー部位と3'スプライス領域のコンセンサス配列は当技術分野で周知である(Mooreら, 1993, The RNA World, Cold Spring Harbor Laboratory Press, p. 303-358参照)。さらに、5'ドナースプライス部位および3'スプライス領域として機能する能力を維持する改変型コンセンサス配列を本発明の実施に用いてもよい。簡単に説明すると、5'スプライス部位コンセンサス配列はAG/GURAGU(ここで、A=アデノシン、U=ウラシル、G=グアニン、C=シトシン、R=プリン、そして /=スプライス部位)である。3'スプライス部位は、分岐点または分岐部位、ポリピリミジン領域および3'コンセンサス配列(YAG)の別個の3つの配列エレメントからなる。哺乳類における分岐点コンセンサス配列はYNYURAC(Y=ピリミジン)である。下線のAは分岐形成部位である。ポリピリミジン領域は分岐点とスプライス部位アクセプターの間にあり、効率的な分岐点の利用および3'スプライス部位の認識に重要である。
最近、ジヌクレオチドAUではじまり、ジヌクレオチドACで終わるプレメッセンジャーRNAイントロンが同定され、U12イントロンと呼ばれている。U12イントロン配列、ならびにスプライスアクセプター/ドナー配列として機能する任意の配列もPTMにおいて使用し得る。
PTMには、RNAスプライス部位を標的結合ドメインから隔てるためのスペーサー領域も含んでよい。このスペーサー領域は、標的プレmRNAへのトランススプライシングを促進する配列などのさらなる特徴を有するものであり得る。本発明の特定の実施形態では、スプライスされていないRNAの選択的分解をターゲティングし、それにより、核から細胞質へのスプライスされていないRNAの翻訳および発現を妨げる機構として、本発明のPTMに開始コドンおよび未成熟停止コドンを組み込んでもよい。(Kimら, 2001 Science 293:1832-1836参照)
本発明の好ましい実施形態では、非特異的トランススプライシングを防ぐための「安全装置(safety)」もスペーサー、結合ドメインまたはPTMのその他のどこかに組み込まれる。これは、PTMの3'および／または5'スプライス部位のエレメント群を比較的弱い相補性により覆って、非特異的トランススプライシングを防ぐPTMの一領域である。このPTMは、PTMの結合／ターゲティング部分がハイブリダイズした際には3'および／または5'スプライス部位が覆われなくなり、完全に活性型となるように設計される。
本発明の好ましい実施形態では、非特異的トランススプライシングを防ぐための「安全装置(safety)」もスペーサー、結合ドメインまたはPTMのその他のどこかに組み込まれる。これは、PTMの3'および／または5'スプライス部位のエレメント群を比較的弱い相補性により覆って、非特異的トランススプライシングを防ぐPTMの一領域である。このPTMは、PTMの結合／ターゲティング部分がハイブリダイズした際には3'および／または5'スプライス部位が覆われなくなり、完全に活性型となるように設計される。
この「安全装置」は、PTM分岐点、ピリミジン領域、3'スプライス部位および／または5'スプライス部位(スプライシングエレメント)の片側または両側に弱く結合するか、またはそれ自体スプライシングエレメントの一部と結合し得るシス配列の、1以上の相補的ストレッチ（あるいは、第2の別個の核酸鎖であってもよい）からなる。この「安全装置」の結合は、スプライシングエレメントが活性型とならないようにする（例えば、U2 snRNPまたはその他のスプライシング因子がPTMスプライス部位認識エレメントに結合しないようにする)。この「安全装置」の結合は、PTMの標的結合領域が標的プレmRNAへ結合することにより妨害され、それによりPTMスプライシングエレメントを露出させて活性化する（その結果、それは、標的プレmRNA中へトランススプライスするのに利用可能となる）。
本発明のPTMは、本発明の条件的複製アデノウイルスを相補し得るアデノウイルスポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含んでなる。このようなアデノウイルスポリペプチドは好ましくはアデノウイルス初期領域によりコードされているものを含む。このような3つの領域E1、E2、E4はウイルス複製に不可欠である。よって、本発明のPTMは例えばアデノウイルスE1A、E1B、E2A、E2BまたはE4ポリペプチドをコードするように設計される。本発明の好ましい実施形態では、アデノウイルスタンパク質は例えばアデノウイルス2、5、9または35型に由来するものである。このようなアデノウイルスポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は公的に入手でき、当業者に周知である。翻訳の開始に必要なシグナル配列を提供する標的プレmRNAの一部が、アデノウイルスタンパク質をコードする配列を含むPTMの一部へとトランススプライスされると、相補活性を有するアデノウイルスタンパク質をコードし得る機能的キメラRNAが形成される。
このPTM分子には、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列の後ろまたは前のいずれかにさらなる特徴を付加することができる。このような特徴としては、ポリアデニル化シグナル、スプライシングを促進し得る5’スプライス配列、付加的結合領域、または付加的スプライス部位が挙げられる。スプライスされていないプレmRNAの発現を防ぐために結合ドメインとスプライス部位の間の領域に停止コドンまたはその他のエレメントを付加してもよい。本発明のもう1つの実施形態では、3'標的イントロンまたはエキソンへの結合を促進し、固定的な真のシス-5'スプライス部位(U5および／またはU1結合部位)を遮断するように、翻訳可能なタンパク質をコードするヌクレオチド配列の下流に第2のアンチセンス結合ドメインを有するPTMを作製し得る。3'ヘアピン構造、環状化RNA、核局在およびスプライセオソーム組み込み、および安定性を促進または容易にする配列などのさらなるエレメントを組み込むこともできる。
合成PTMの構造中にエキソン性スプライシングエンハンサーと呼ばれる配列を含んでもよい。トランス作用スプライシング因子、すなわちセリン／アルギニン-リッチ(SR)タンパク質は、このようなエキソン性スプライシングエンハンサーと相互作用し、スプライシングをモジュレートすることが示されている(Tackeら, 1999, Curr. Opin. Cell Biol. 11:358-362; Tianら, 2001, J. Biological Chemistry 276:33833-33839; Fu, 1995, RNA 1:663-680参照)。このPTM分子中には核局在シグナルもまた含んでよい(DingwellおよびLaskey, 1986, Ann. Rev. Cell Biol. 2:367-390; DingwellおよびLaskey, 1991, Trends in Biochem. Sci. 16:478-481)。このような核局在シグナルは合成PTMの核(ここでトランススプライシングが起こる)への輸送を促進するために用いることができる。さらに、細胞核におけるPTMの保持を促進する配列を用いてもよい(Boelansら, 1995 RNA 1:273-83; Goodら, 1997 Gene Ther. 4:45-54)。
PTMはまた、選択される細胞種で治療用または診断用ポリペプチドを発現するよう作製してもよい。このような診断用ポリペプチドとしては、例えば、生物発光分子または蛍光分子、酵素およびタンパク質／ペプチドタグが挙げられる。治療用ポリペプチドとしては、例えば、いくつか挙げると、増殖因子、既知のリガンド分子、シグナル伝達レギュレーターまたは酵素がある。このようなPTMは選択された標的細胞に対して診断または治療用ポリペプチドの選択的発現をターゲティングするために使用できる。PTMはまた、アデノウイルス融合タンパク質として治療用または診断用ポリペプチドを発現するよう作製してもよい。あるいは、PTMはアデノウイルスタンパク質と治療用または診断用タンパク質の双方をコードするように設計してもよい。このようなPTMとしては、キメラRNAの第2の部位で翻訳開始を助ける内部リボソーム進入セグメント(IRES)(Ghattasら, Mol. Cell Biol. 11:5848-5859)を含む。
5.2. 組換えアデノウイルスの生産
本発明は選択的細胞死をターゲティングするのに利用し得る条件的複製組換えアデノウイルスを提供する。本発明の組換えアデノウイルスは、特定の標的プレmRNAとのトランススプライシング反応を媒介し得るPTM分子をコードするように作製される。このような組換えアデノウイルスは、Adenoviral Vectors for Gene Therapy, CurielおよびDouglas編2002, Academic PressおよびAusubelら(編), 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY; およびKriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NYに記載のものをはじめ、当業者に公知の種々の異なるクローニング方法を用いて作製し得る。本発明の好ましい実施形態では、アデノウイルスは2、5、9または35型アデノウイルスである。
本発明は選択的細胞死をターゲティングするのに利用し得る条件的複製組換えアデノウイルスを提供する。本発明の組換えアデノウイルスは、特定の標的プレmRNAとのトランススプライシング反応を媒介し得るPTM分子をコードするように作製される。このような組換えアデノウイルスは、Adenoviral Vectors for Gene Therapy, CurielおよびDouglas編2002, Academic PressおよびAusubelら(編), 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY; およびKriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NYに記載のものをはじめ、当業者に公知の種々の異なるクローニング方法を用いて作製し得る。本発明の好ましい実施形態では、アデノウイルスは2、5、9または35型アデノウイルスである。
本発明は、複製欠陥型であるがPTM分子を発現し得る条件的複製組換えアデノウイルスに関する。本発明の意味の範囲内で、発現「条件的複製アデノウイルス」とは、ウイルス欠陥がトランスで相補されない限り、宿主細胞内で自律複製できない欠陥型アデノウイルスを指す。本発明は、本発明のアデノウイルスが、ウイルスにより発現されたPTMと標的プレmRNAの間で首尾よくトランススプライシングが起こった際に相補活性をもたらすことができることに基づくものである。
本発明は、少なくとも1つのアデノウイルス遺伝子が欠失している組換えアデノウイルスを提供する。本発明の好ましい実施形態では、アデノウイルス初期領域E1、E2またはE4遺伝子が欠失し、目的のPTMをコードする核酸配列で置き換えられている。本発明の組換えアデノウイルスはまた、複数の欠失を有し、1以上のPTMコード配列が挿入されているウイルスを含む。このようなアデノウイルスは条件によって複製するので、まずこれらのウイルスを、アデノウイルスの欠失した領域を相補する細胞、すなわち、「相補細胞系」で増殖させる。本発明の意味の範囲内で「相補細胞系」とは、欠陥型アデノウイルスの複製に必要な遺伝子産物を提供する細胞系をさす。このような細胞としては、ヘルパーウイルスに感染させたものが挙げられる。
本発明のある特定の実施形態では、初期領域1(E1)が欠失し、目的のPTMをコードする核酸配列で置き換えられており、このウイルスが293(Grahamら, 1977, J. Gen. Virol. 36:59-72)などのE1-トランス-相補細胞系で、またはプレmRNA標的を発現する細胞系で増殖させる。別の実施形態では、条件的複製アデノウイルスは、特定の標的プレmRNAを天然に発現する、または特定の標的プレmRNAを発現するように操作された細胞系においてin vitroで増殖させ得る。
E1欠失ベクターなどの、このような欠失アデノウイルスベクターを作製する標準的な方法としては、in vitroライゲーション法または相同組換え法を含み得る(Adenoviral Vectors for Gene Therpy, CurielおよびDouglas編 2002, Academic Press)。以下の節では、E1領域が目的のPTMをコードする核酸分子で置き換えられているE1欠失アデノウイルスの作製方法を記載するが、このような方法はまた、ウイルスの他の領域において欠失およびPTMコード核酸の挿入を有するアデノウイルスの作製にも使用できる。このようなウイルスを生産する際に用いられる相補細胞系は、例えばE1、E2またはE4など欠失のタイプによって異なり、当業者ならばそれを決定することができる。
in vitroライゲーション法は、(i)ウイルスE1領域から下流、すなわちゲノムの右末端のユニークな制限部位においてDNAを酵素消化することにより得られるアデノウイルスゲノムの断片、および(ii)右側逆方向末端リピート(ITR)、パッケージングシグナル、E1Aエンハンサー配列(マップユニット; 0〜1.3)および目的のPTMをコードする核酸分子を含むアデノウイルスゲノムの左末端を含むDNA断片、を用いる。この2つの断片を１つに連結することにより、PTMをコードする核酸分子がE1領域に挿入された組換えアデノウイルスが得られる。本発明のある好ましい実施形態では、ウイルスゲノム中のユニークなClaI部位(マップユニット; 2.6)を用いて、このウイルスE1領域の一部を、目的のPTMをコードする核酸分子で置き換える。いったん連結すれば、次にこのDNAを293細胞などのE1トランス相補細胞系に直接導入して、目的のPTMを発現し得る組換えアデノウイルスを作製する。あるいは、このDNAを、標的プレmRNAを発現する細胞へトランスフェクトしてもよく、これによりPTMにコードされた相補性アデノウイルスポリペプチドの発現がもたらされる。
相同組換え法では、in vivoで組換えるように設計されている重複配列を有する2つのDNA断片を用いる。本発明の一実施形態では、DNAの断片は組換えベクター配列、例えばプラスミド断片を含み得る。第1の断片はDNAパッケージングおよびE1領域が欠失した全Adゲノムを含み得る。第2の断片は右側ITR、パッケージングシグナルおよび第1のプラスミドと重複する配列を含み得る。この第2の断片はまた、目的のPTMをコードする核酸配列を含むよう作製される。相同組換え法では、この2つの断片を、E1領域を相補し得る細胞、例えば293細胞へ同時感染させる。
in vitroまたは相同組換えの両方で、相補細胞に核酸分子を送達するのに用い得るトランスフェクション法としては、エレクトロポレーション、リポフェクションまたはリン酸カルシウム媒介トランスフェクションなどの方法が挙げられる。次に、プラーク精製により組換えアデノウイルスを精製すればよい。
さらに、酵母人工染色体または細菌を用いた2つのプラスミドの相同組換えに基づくアデノウイルス製造法はまた、本発明の組換えアデノウイルスを作製するためにも使用できる。組換えアデノウイルスの製造を開示する米国特許としては、米国特許第5,962,313号; 同第5,962,311号;同第5,952,221号;同第5,932,210号;同第5,928,944号;同第5,922,576号;同第5,919,676号;同第5,891,690号;同第5,885,808号;同第5,880,102号;同第5,877,011号;同第5,871,982号;同第5,869,037号;同第5,858,351号;同第5,851,806号;同第5,843,742号;同第5,837,484号;同第5,820,868号;同第5,789,390号;同第5,756,283号;同第5,747,072号;同第5,731,172号;同第5,700,470号;同第5,670,488号;同第5,616,326号;同第5,589,377号;同第5,585,362号;および同第5,354,678号が挙げられる。対象となる他の参照文献としては、Berknerら (1983, Nucleic Acids Res. 11, 6003-6020); Bettら(1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 8802-6); Chartierら (1996, J Virol. 70, 4805-4810); Crouzら (1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 1414-1419); Gilardiら (1990, FEBS Lett. 267, 60-2); Heら (1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 2509-2514); Ketnerら (1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 6186-6190; Miyakeら (1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 1320-1324);およびRosenfeldら (1991, Science. 252, 431-4)が挙げられ、これらの開示は参照によりその全体を本明細書に組み入れる。
本発明のさらにもう1つの実施形態では、本発明の条件的複製アデノウイルスはウイルス／細胞感染の機構を変更し、それにより、目的の特定の細胞種、すなわち、癌細胞または感染細胞に対する選択的アデノウイルス感染をターゲティングするようさらに操作してもよい。例えば、ウイルスキャプシドなどのアデノウイルス受容体結合成分の構造を、操作されたキャプシドと標的細胞で発現される標的細胞表面分子と間の特異的相互作用を促進するように遺伝子操作してもよい。例えば、受容体結合リガンドをキャプシド遺伝子の遺伝的操作によってキャプシドタンパク質に結合させることができる。あるいは、生物特異的化学コンジュゲートをアデノウイルス粒子に結合させることもできる。(Adenoviral Vectors for Gene Therpy, Curiel and Douglas, eds. 2002, Academic Press参照)
5.3. トランススプライシング分子の使用および投与
本発明の組成物および方法は癌細胞または感染性因子に感染した細胞に対してアデノウイルス媒介性細胞溶解をターゲティングすることを含む種々の異なる用途を有する。さらに、本発明は、選択された細胞種に対して治療用または診断用ポリペプチドの発現をターゲティングするための方法および組成物を提供する。特定の実施形態では、本発明の組換えアデノウイルスは、それが標的細胞に感染し、発現して目的のPTMを産生する場合は、直接in vivo投与する。これは標的細胞にアデノウイルスを直接感染させることで達成することができる。
5.3. トランススプライシング分子の使用および投与
本発明の組成物および方法は癌細胞または感染性因子に感染した細胞に対してアデノウイルス媒介性細胞溶解をターゲティングすることを含む種々の異なる用途を有する。さらに、本発明は、選択された細胞種に対して治療用または診断用ポリペプチドの発現をターゲティングするための方法および組成物を提供する。特定の実施形態では、本発明の組換えアデノウイルスは、それが標的細胞に感染し、発現して目的のPTMを産生する場合は、直接in vivo投与する。これは標的細胞にアデノウイルスを直接感染させることで達成することができる。
標的細胞に組換えアデノウイルスを感染させれば、PTM分子が発現される。標的プレmRNA分子の存在下では、PTMと標的プレmRNA分子の間でトランススプライシング反応が起こり、その結果、キメラmRNA分子が形成される。キメラmRNA分子は欠陥型アデノウイルスの相補に必要なアデノウイルスタンパク質を発現するように作製される。従って、正確なトランススプライシング反応の存在下では、欠陥型アデノウイルスが複製し、それにより新たに複製されたウイルスによって細胞が溶解し、周囲の細胞が感染する。こうして本発明は、標的プレmRNA分子を発現する細胞に対してのみ、アデノウイルス媒介性細胞溶解をターゲティングする方法および組成物を提供する。
本発明はまた、PTMをコードする有効量の組換えアデノウイルスと製薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、「製薬上許容される」とは、連邦政府もしくは州政府の規制当局が認可した、または米国薬局方に列挙されているか、または動物および特にヒトにおける使用に関して一般に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。「担体」とは、治療薬と一緒に投与する希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルをさす。好適な医薬担体の例は、E.W. Martinによる"Remington's Pharmaceutical sciences"に記載されている。
特定の実施形態では、医薬組成物は(1)癌選択的標的プレmRNAの発現を伴う疾患または障害、例えば腫瘍細胞；(2)細胞が感染性因子に感染し、その感染性因子によってコードされている標的プレmRNAを発現するような疾患または障害；あるいは(3)特定の細胞種の活性から生じる疾患または障害において、投与する。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、治療の必要な領域、例えば腫瘍部位に局所投与するのが望ましい。これは例えば、限定するものではないが、吸入、手術中の局所注入、局所適用、例えば手術後の創傷の包帯と組み合わせて、注射により、カテーテルを用いて、坐剤を用いて、またはインプラント(このインプラントはシラスティック膜のような膜または繊維をはじめとする、多孔性、無孔性またはゼラチン質の材料である)を用いて、達成できる。ナノ粒子、徐放性ポリマーのようなマトリックス、ヒドロゲルなどのその他の徐放性薬物送達系がある。
本発明の組換えアデノウイルスは標的細胞において所望の効果、例えばアデノウイルス媒介性細胞溶解をもたらすのに有効な量で投与される。アデノウイルスの有効用量は、生体半減期、バイオアベラビリティーおよび毒性などのパラメーターを取り扱う当業者に周知の手順により決定することができる。
本発明の組成物の量は治療する疾患または障害の性質によって異なり、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらにまた、所望により、最適な用量範囲を特定する助けとするためにin vitroアッセイを用いてもよい。
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態に範囲を限定されるものではない。実際に、以上の説明および添付の図面から当業者には本明細書に記載したものの他に本発明の種々の変形が明らかである。このような変形も付属の特許請求の範囲の技術的範囲に含まれるものとする。本明細書には種々の参照文献が挙げられているが、これらの開示は参照により本明細書にそのまま組み入れられる。
Claims (81)
- トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項１に記載のアデノウイルス。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域(pyrimidine tract)をさらに含んでなる、請求項１に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項１、２または３に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項１、２または３に記載のアデノウイルス。
- 標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列が、アデノウイルスポリペプチドをコードする、請求項１に記載のアデノウイルス。
- 前記ポリペプチドがE1、E2またはE4初期領域ポリペプチドからなる群から選択される、請求項８に記載のアデノウイルス。
- アデノウイルスポリペプチドがE1ポリペプチドである、請求項８に記載のアデノウイルス。
- 標的プレmRNAが、癌細胞で発現されるが、正常細胞では検出されないものである、請求項１に記載のアデノウイルス。
- トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、ヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - 前記核酸分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項１２に記載の細胞。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項１２に記載の細胞。
- 前記核酸分子が、3’スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項１２、１３または１４に記載の細胞。
- 癌細胞を選択的に破壊する方法であって、癌細胞を、トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスと接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされてアデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、癌細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - 癌細胞を選択的に破壊する方法であって、癌細胞を、トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスと接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、ヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、癌細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - 癌細胞を選択的に破壊する方法であって、癌細胞を、トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスと接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)癌細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、癌細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項１８に記載のアデノウイルス。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項１８に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項１８、１９または２０に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項１８、１９または２０に記載のアデノウイルス。
- トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項２５に記載のアデノウイルス。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項２５に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項２５、２６または２７に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項２５、２６または２７に記載のアデノウイルス。
- 病原性微生物がウイルス、真菌、細菌または寄生虫である、請求項２５に記載のアデノウイルス。
- トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - 前記核酸分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項３３に記載の細胞。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項３３に記載の細胞。
- 前記核酸分子が3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項３３、３４または３５に記載の細胞。
- 病原性微生物に感染した細胞を選択的に破壊する方法であって、該細胞と、トランスジーンを含んでなる条件的複製アデノウイルスを接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、癌細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - 病原性微生物に感染した細胞を選択的に破壊する方法であって、該細胞と、トランスジーンを含んでなる条件的複製アデノウイルスを接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、癌細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - 病原性微生物に感染した細胞を選択的に破壊する方法であって、該細胞と、トランスジーンを含んでなる条件的複製アデノウイルスを接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする1以上の標的結合ドメインであって、該標的プレmRNAは(i)病原性微生物から発現されるか、または(ii)病原性微生物に感染した被験体の細胞内で誘導されるものである、該標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、癌細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項３９に記載のアデノウイルス。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項３９に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項３９、４０または４１に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項３９、４０または４１に記載のアデノウイルス。
- トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる、条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項４６に記載のアデノウイルス。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項４６に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項４６、４７または４８に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項４６、４７または４８に記載のアデノウイルス。
- 標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列が治療用または診断用ポリペプチドをコードする、請求項４６に記載のアデノウイルス。
- 診断用ポリペプチドが生物発光または化学発光ポリペプチドからなる群から選択される、請求項５３に記載のアデノウイルス。
- アデノウイルス治療用ポリペプチドが増殖因子、リガンド、シグナル伝達のレギュレーターまたは酵素である、請求項５３に記載のアデノウイルス。
- トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - トランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列。 - 前記核酸分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項５６に記載の細胞。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項５６に記載の細胞。
- 前記核酸分子が、3’スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項５６、５７または５８に記載の細胞。
- 疾患関連細胞を選択的に破壊する方法であって、該疾患関連細胞と、トランスジーンを含んでなる条件的複製アデノウイルスを接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、疾患関連細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - 疾患関連細胞を選択的に破壊する方法であって、該疾患関連細胞と、トランスジーンを含んでなる条件的複製アデノウイルスを接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、疾患関連細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - 疾患関連細胞を選択的に破壊する方法であって、該疾患関連細胞と、トランスジーンを含んでなる条件的複製アデノウイルスを接触させることを含んでなり、該トランスジーンが下記a)〜d)：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされる、アデノウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列；
を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードし、
かつ、前記接触を、核酸分子の一部が標的プレmRNAの一部へとトランススプライスされて、アデノウイルスタンパク質をコードするキメラRNAが形成される条件下で行い、そして該アデノウイルスタンパク質の発現がウイルス複製をもたらし、その結果、疾患関連細胞の破壊をもたらす、前記方法。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項６２に記載の方法。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項６２に記載の方法。
- プレトランススプライシング分子が5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項６２、６３または６４に記載の方法。
- プレトランススプライシング分子が3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項６２、６３または６４に記載の方法。
- 1以上のトランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - 1以上のトランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - 1以上のトランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスであって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記アデノウイルス：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - プレトランススプライシング分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項６９に記載のアデノウイルス。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項６９に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、5’スプライス部位の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置配列をさらに含んでなる、請求項６９、７０または７１に記載のアデノウイルス。
- プレトランススプライシング分子が、3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項６９、７０または７１に記載のアデノウイルス。
- 1以上のトランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)分岐点および3'スプライスアクセプター部位を含む、3'スプライス領域；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - 1以上のトランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)3'スプライスアクセプター部位；
c)標的結合ドメインと3’スプライス領域を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - 1以上のトランスジーンを含んでなる条件的複製組換えアデノウイルスを含んでなる細胞であって、該トランスジーンが下記a)〜d)を含んでなるプレトランススプライシング分子をコードする、前記細胞：
a)疾患関連細胞内で発現した標的プレmRNAへのプレトランススプライシング分子の結合をターゲティングする、1以上の標的結合ドメイン；
b)5'スプライス部位；
c)標的結合ドメインと5’スプライス部位を隔てるスペーサー領域；および
d)標的プレmRNAへとトランススプライスされるヌクレオチド配列。 - 前記核酸分子が5'ドナー部位をさらに含んでなる、請求項７６に記載の細胞。
- 3’スプライス領域がピリミジン領域をさらに含んでなる、請求項７６に記載の細胞。
- 前記核酸分子が、3'スプライス領域の片側または両側に結合する1以上の相補配列を含む安全装置ヌクレオチド配列をさらに含んでなる、請求項７６、７７または７８に記載の細胞。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US37869002P | 2002-05-08 | 2002-05-08 | |
| PCT/US2003/014804 WO2004050680A2 (en) | 2002-05-08 | 2003-05-08 | Use of spliceosome mediated rna trans-splicing to confer cell selective replication to adenoviruses |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005536231A true JP2005536231A (ja) | 2005-12-02 |
Family
ID=32469135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004557094A Pending JP2005536231A (ja) | 2002-05-08 | 2003-05-08 | アデノウイルスに細胞選択的複製をもたらすための、スプライセオソーム媒介型ｒｎａトランススプライシングの使用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7094399B2 (ja) |
| EP (1) | EP1504016A4 (ja) |
| JP (1) | JP2005536231A (ja) |
| AU (1) | AU2003302216A1 (ja) |
| CA (1) | CA2485341A1 (ja) |
| WO (1) | WO2004050680A2 (ja) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7399753B2 (en) * | 2002-02-25 | 2008-07-15 | Virxsys Corporation | Trans-splicing mediated photodynamic therapy |
| US7968334B2 (en) * | 2004-01-23 | 2011-06-28 | Virxsys Corporation | Expression of apoAI and variants thereof using spliceosome mediated RNA trans-splicing |
| JP2007518423A (ja) * | 2004-01-23 | 2007-07-12 | イントロン、インコーポレイテッド | スプライセオソーム仲介型ｒｎａトランススプライシングを使用するアポａ−１及びその変異体の発現 |
| US8053232B2 (en) * | 2004-01-23 | 2011-11-08 | Virxsys Corporation | Correction of alpha-1-antitrypsin genetic defects using spliceosome mediated RNA trans splicing |
| US20060094110A1 (en) * | 2004-07-30 | 2006-05-04 | Mcgarrity Gerard J | Use of spliceosome mediated RNA trans-splicing for immunotherapy |
| US20060134658A1 (en) * | 2004-08-09 | 2006-06-22 | Garcia-Blanco Mariano A | Use of RNA trans-splicing for generation of interfering RNA molecules |
| JP5053850B2 (ja) * | 2004-10-08 | 2012-10-24 | バークシス コーポレーション | 抗体遺伝子導入および抗体ポリペプチド産生のためのｒｎａトランススプライシングの使用 |
| US7871795B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-01-18 | Virxsys Corporation | Targeted trans-splicing of highly abundant transcripts for in vivo production of recombinant proteins |
| ES2578993T3 (es) * | 2009-10-08 | 2016-08-03 | Association Institut De Myologie | Moléculas de ácido nucleico y métodos para intercambiar uno o más exones mediante corte y empalme en trans |
| WO2012056441A1 (en) * | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Nanodoc Ltd. | Compositions and methods for specific cleavage of exogenous rna in a cell |
| AU2014236207B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-05-23 | Salk Institute For Biological Studies | Oncolytic adenovirus compositions |
| CN117384961A (zh) | 2016-02-23 | 2024-01-12 | 萨克生物研究学院 | 对病毒动力学影响最小的治疗性腺病毒中的外源基因表达 |
| CA3013637A1 (en) | 2016-02-23 | 2017-08-31 | Salk Institute For Biological Studies | High throughput assay for measuring adenovirus replication kinetics |
| WO2018111767A1 (en) | 2016-12-12 | 2018-06-21 | Salk Institute For Biological Studies | Tumor-targeting synthetic adenoviruses and uses thereof |
| US20190315808A1 (en) * | 2019-05-07 | 2019-10-17 | Kuopio Center for Gene and Cell Therapy Oy | Adenoviral Polypeptide IX Increases Adenoviral Gene Therapy Vector Productivity and Infectivity |
| WO2023140792A2 (en) * | 2022-01-18 | 2023-07-27 | National University Of Singapore | TRANS-SPLICING RNA (tsRNA) |
Family Cites Families (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US205A (en) | 1837-05-30 | Stove-radiator | ||
| US5998A (en) | 1849-01-02 | Improvement in combined plows | ||
| US4980286A (en) | 1985-07-05 | 1990-12-25 | Whitehead Institute For Biomedical Research | In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells |
| US5585362A (en) | 1989-08-22 | 1996-12-17 | The Regents Of The University Of Michigan | Adenovirus vectors for gene therapy |
| US5616326A (en) | 1990-01-25 | 1997-04-01 | The University Court Of The University Of Glasgow | Recombinant canine adenovirus 2 (CAV-2) |
| US5670488A (en) | 1992-12-03 | 1997-09-23 | Genzyme Corporation | Adenovirus vector for gene therapy |
| US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
| GB9223084D0 (en) | 1992-11-04 | 1992-12-16 | Imp Cancer Res Tech | Compounds to target cells |
| US5919676A (en) | 1993-06-24 | 1999-07-06 | Advec, Inc. | Adenoviral vector system comprising Cre-loxP recombination |
| US5747072A (en) | 1993-07-30 | 1998-05-05 | University Of Michigan | Adenoviral-mediated gene transfer to synovial cells in vivo |
| TW442569B (en) | 1993-10-25 | 2001-06-23 | Canji Inc | Recombinant adenoviral vector |
| EP0728214B1 (en) | 1993-11-09 | 2004-07-28 | Medical College Of Ohio | Stable cell lines capable of expressing the adeno-associated virus replication gene |
| US5820868A (en) | 1993-12-09 | 1998-10-13 | Veterinary Infectious Disease Organization | Recombinant protein production in bovine adenovirus expression vector system |
| FR2716682B1 (fr) | 1994-01-28 | 1996-04-26 | Centre Nat Rech Scient | Procédé de préparation de virus adéno-associés (AAV) recombinants et utilisations. |
| US5928944A (en) | 1994-02-04 | 1999-07-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of adenoviral-medicated cell transfection |
| CA2117668C (en) | 1994-03-09 | 2005-08-09 | Izumu Saito | Recombinant adenovirus and process for producing the same |
| US5851806A (en) | 1994-06-10 | 1998-12-22 | Genvec, Inc. | Complementary adenoviral systems and cell lines |
| US5962311A (en) | 1994-09-08 | 1999-10-05 | Genvec, Inc. | Short-shafted adenoviral fiber and its use |
| US5856152A (en) | 1994-10-28 | 1999-01-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor |
| US5998205A (en) | 1994-11-28 | 1999-12-07 | Genetic Therapy, Inc. | Vectors for tissue-specific replication |
| US5843742A (en) | 1994-12-16 | 1998-12-01 | Avigen Incorporated | Adeno-associated derived vector systems for gene delivery and integration into target cells |
| JP3770333B2 (ja) | 1995-03-15 | 2006-04-26 | 大日本住友製薬株式会社 | 組換えｄｎａウイルスおよびその製造方法 |
| US5756283A (en) | 1995-06-05 | 1998-05-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for improved production of recombinant adeno-associated viruses for gene therapy |
| US6280978B1 (en) | 1995-12-15 | 2001-08-28 | Intronn Holdings, Llc | Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing |
| US20020115207A1 (en) | 1995-12-15 | 2002-08-22 | Mitchell Lloyd G. | Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing |
| US6083702A (en) * | 1995-12-15 | 2000-07-04 | Intronn Holdings Llc | Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing |
| JP4321877B2 (ja) * | 1995-12-15 | 2009-08-26 | バークシス コーポレイション | トランス―スプライスにより生成される治療用分子 |
| US5858351A (en) | 1996-01-18 | 1999-01-12 | Avigen, Inc. | Methods for delivering DNA to muscle cells using recombinant adeno-associated virus vectors |
| US5962313A (en) | 1996-01-18 | 1999-10-05 | Avigen, Inc. | Adeno-associated virus vectors comprising a gene encoding a lyosomal enzyme |
| US5952221A (en) | 1996-03-06 | 1999-09-14 | Avigen, Inc. | Adeno-associated virus vectors comprising a first and second nucleic acid sequence |
| US5891690A (en) | 1996-04-26 | 1999-04-06 | Massie; Bernard | Adenovirus E1-complementing cell lines |
| US5869037A (en) | 1996-06-26 | 1999-02-09 | Cornell Research Foundation, Inc. | Adenoviral-mediated gene transfer to adipocytes |
| US5877011A (en) | 1996-11-20 | 1999-03-02 | Genzyme Corporation | Chimeric adenoviral vectors |
| US5922576A (en) | 1998-02-27 | 1999-07-13 | The John Hopkins University | Simplified system for generating recombinant adenoviruses |
| US6627190B2 (en) * | 1999-07-12 | 2003-09-30 | Saint Louis University | Recombinant adenovirus vectors that are replication-competent in tert-expressing cells |
-
2003
- 2003-05-08 EP EP03810034A patent/EP1504016A4/en not_active Withdrawn
- 2003-05-08 AU AU2003302216A patent/AU2003302216A1/en not_active Abandoned
- 2003-05-08 US US10/434,727 patent/US7094399B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-05-08 JP JP2004557094A patent/JP2005536231A/ja active Pending
- 2003-05-08 WO PCT/US2003/014804 patent/WO2004050680A2/en active Application Filing
- 2003-05-08 CA CA002485341A patent/CA2485341A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2004050680A2 (en) | 2004-06-17 |
| AU2003302216A1 (en) | 2004-06-23 |
| US7094399B2 (en) | 2006-08-22 |
| EP1504016A4 (en) | 2006-11-22 |
| WO2004050680A3 (en) | 2004-08-12 |
| US20040038403A1 (en) | 2004-02-26 |
| EP1504016A2 (en) | 2005-02-09 |
| CA2485341A1 (en) | 2004-06-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5880102A (en) | Adenoviral vector system | |
| FI118538B (fi) | Menetelmä geeniterapiassa käytettävien adenoviraalisten eläinperäisten vektoreiden valmistamiseksi | |
| US7094399B2 (en) | Use of spliceosome mediated RNA trans-splicing to confer cell selective replication to adenoviruses | |
| JP4733795B2 (ja) | ヒツジアデノウイルスベクターを用いた遺伝子治療 | |
| FI120046B (fi) | Menetelmä yhdistelmä-DNA-adenovirusgenomin valmistamiseksi | |
| US20090156796A1 (en) | Metastatic colon cancer specific promoter and uses thereof | |
| JP2013509168A (ja) | 心臓特異的核酸調節因子ならびにこの方法および使用 | |
| WO1996025506A9 (fr) | Procede de preparation de genome d'adenovirus recombinants | |
| JP2003504004A (ja) | アデノウイルスベクター及び相同組換えイベントの低減方法 | |
| Balicki et al. | Gene therapy of human disease | |
| JP6014029B2 (ja) | Ｒｅｉｃ発現アデノウイルスベクター | |
| JP2002543792A (ja) | ベクターによるトランスポゾン配列の供給及び組込み | |
| JP2022548320A (ja) | アポリポタンパク質ｂ（ａｐｏｂ）遺伝子発現をモジュレートするための組成物および方法 | |
| WO2014050927A1 (ja) | Ｖａ遺伝子破壊アデノウイルスベクターおよびそれを調製するための前駆体ベクター | |
| JP7385742B2 (ja) | ヘルパープラスミドベースのガットレスアデノウイルス生産システム | |
| US5863794A (en) | SV40 viral vectors for targeted integration into cells | |
| Nakahara et al. | Construction and Stability of All-in-One Adenovirus Vectors Simultaneously Expressing Four and Eight Multiplex Guide RNAs and Cas9 Nickase | |
| WO2022234051A1 (en) | Split prime editing enzyme | |
| Satyanarayana | Gene therapy | |
| EP1218523A1 (en) | Targeted gene therapy | |
| Vonka | Gene Therapy: Hopes and Problems | |
| JP2008061582A (ja) | アデノウイルスベクターおよびその作製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051219 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20080910 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090210 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090401 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090408 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090615 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090622 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090807 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20091117 |