JP2005521391A - 細菌起源の酵素による発酵乳製品の新規生産方法 - Google Patents
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Abstract
Description
Gassem および Franck、1991年、「Physical properties of yogurt made from milk treated with proteolytic enzymes」、J. Dairy Sci. 74:1503-1511。 Cousin および Marth、1977年、「Cottage Cheese and Yoghurt Manufactured from Milks Precultured with Psychotrophic Bacteria」 Cultured Dairy Products Journal、1977年5月、15-18および30頁。 Tamine & Robinson、1985年、「Yoghurt - Science and Technology」、Ed. Woodhead Publishing Ltd. 1999年、参照17頁。 Stephaniak & Sorhaug、1995年、Thermal denaturation of bacterial enzymes in milk. International dairy federation bulletin「Heat induced changes in milk」、349-363頁)。 「Science du lait - Principes des techniques laitieres」、 (Milk science - principles of dairy techniques)、第4版、1984年by C. Alais (publisher SEPAIC)、195-196頁。 Standard 176:1996 of the International Dairy Federation、41、square Vergote、B-1040 Brussels。 Robin C. Mc Kelar、1989年、「Enzymes of psychrotrophs in raw food」、出版社:CRC Press。 Robert K. Scopes、1987年、Springer-Verlag発行、「Protein purification. Principles and Practice」、第2版。 「Current Protocols in Molecular Biology」、J. Wiley およびSons、1994年、発行人:Frederick M. Ausubel、Roger Brent、Robert E. Kingston、David D. Moore、J.G. Seidman、Kevin Struhl)。 Recioら、1997年、「Application of electrophoresis to the study of proteolysis of caseins」、J. Dairy Res. 64:221-230。 「Yoghurt science and Technology」、A.Y. Tamine およびR.K. Robinson著、発行者:Woodhead Publishing Ltd. 1999年)。 C.E. Fajardo-LiraおよびS.S. Nielsen、1998年 (「Effect of psychrotrophic microorganisms on the plasmin system in milk」、J. Dairy Sci. 81:901-908) Kohlmann K.L.、Nielsen S.S.、Steenson L.R.およびLadisch M.R.、1991.「Production of proteases by psychrotrophic microorganisms」、J. Dairy Sci. 74:3275-3283。 「Determination de 1a teneur en matieres grasses: methode dextraction ethero-chlorhydrique」、[Determination of fat content: method of etherohydrochloric extraction] NF V04215 - Official Journal of Sept. 1969年。
-タンパク質含有量が、ゼロではなくて6%以下であるミルク基質を、乳酸発酵の終わりに、20%以上、好ましくは30%以上、より好ましくは40%以上、さらにより好ましくは50%以上のκ-カゼイン分解度が得られるように乳酸発酵およびκ-カゼイン分解に供するという工程を含み、
-またここで、この基質を乳酸発酵およびκ-カゼイン分解酵処理の後に撹拌することを特徴とする。
-採取後、ミルクを通常75℃で10〜30秒間、前低温殺菌し、脱脂して、使用時まで冷蔵貯蔵庫により貯蔵し、
-脱脂したミルクは、当分野で既知の方法によりタンパク質について標準化し、具体的には、粉末脱脂粉乳、粉末乳タンパク質(カゼイン塩またはWPC)を添加して標準化し、また場合によっては、脂肪(例えばクリーム)について標準化し、所望の組成を得るようにし、
-これらの粉末を30分〜1時間撹拌することで再水和した後、こうして得られたミルク混合物を92〜95℃の温度で5〜10分間の低温殺菌熱処理に供し、「下降フェーズ(descending phase)」と呼ばれる加圧下での均質化に供す。この均質化は、あるいは熱処理の前に行ってもよい。これは「上昇フェーズ(ascending phase)」と呼ばれる。
-次に、ミルク混合物を発酵温度よりも1または2℃高い温度まで冷却し、乳酸発酵体を接種し、発酵を従来手順に従って行い、pHを4〜5、好ましくは4.5〜4.7にして発酵を停止させる。
-好気性/微好気性グラム陰性菌、シュードモナス族の菌などで、例えば、シュードモナスクロロラフィス(Pseudomonas chlororaphis)(例えばATCC 13985)、シュードモナスフルロレッセンス(Pseudomonas fluorescens)、シュードモナスフラジ(Pseudomonas fragi)(例えば、ATCC 4973)などのシュードモナス属;アセトバクター属(Acetobacter genus)の菌、フララボバクテリウム属(Flavobacterium genus)の菌、サイトファーガ属(Cytophaga genus)の菌、アルカリジーン属(Alcaligenes genus)の菌、アクロモバクター属(Achromobacter genus)の菌など、
-通性嫌気性グラム陰性菌、エンテロバクテリア(Enterobacteriacae)族の菌などで、例えば、エンテロバクター属(Enterobacter genus)およびセラチア属(Serratia genus)、ならびにアエロモナス属(Aeromonas genus)、
-非胞子形成性グラム陽性菌、例えば、ストレプトコッカス属、ラクトバチルス属、ミクロコッカス属、スタフィロコッカス属、コリネバクテリア属、ミクロバクテリア属)、
-内胞子形成性グラム陽性菌(バチルス属、クロストリジウム属)である。
κ-カゼイン分解度(%)=
(1-((aκe*aβlgc/aβlge)/aκc))*100
式中、
aκe=ヨーグルトサンプルのκ-カゼインピークの面積
aκc=対照ミルクのκ-カゼインピークの面積
aβlge=ヨーグルトサンプルの基準化合物のピーク(βラクトグロブリンのピーク)の面積
aβlgc=対照のミルクの基準化合物のピーク(βラクトグロブリンのピーク)の面積
生産者から直接採取したバルク混合ミルクを低温殺菌し、脱脂してから、タンパク質分解性抽出物を様々な投与量で接種する。このタンパク質分解性抽出物は、シュードモナスクロロラフィスATCC13985の培養培地からタンパク質を沈殿させて得る。このタンパク質分解活性は、ml当たり200単位である。この活性は、アゾカゼインテストによって得られる(Kohlmann K.L.、Nielsen S.S.、Steenson L.R.、およびLadisch M.R.、1991. 「Production of proteases by psychrotrophic microorganisms」、J. Dairy Sci. 74:3275-3283)。一単位が、インキュベーション時間当たり366nmでの吸光度で、0.01の増加を示す。
バルク混合ミルクを低温殺菌し、脱脂してから、シュードモナスフラジATCC4973を接種し、4℃で7日間貯蔵した。ml当たり2×104個の細菌を接種したミルクは、7日間の貯蔵後には、ml当たり6×109の低温菌の菌数を有する。これらのミルクのβ-およびκ-カゼインのタンパク質分解の進み具合を、キャピラリー電気泳動によって測定した。κ-カゼインのピークの表面積は25%だけ減少し、β-カゼインのピークの表面積の合計は35%減少した。β―カゼインのタンパク質分解の一部は、おそらくプラスミンに起因するものであろう。
この実施例では、前もって低温殺菌され、脱脂されたバルク混合ミルクを貯蔵も行わず、タンパク質分解性低温菌株を加えなかった。撹拌ヨーグルトを実施例1と同様の方法によって調製した。乳酸発酵体の接種時に、低温菌由来のプロテアーゼを少量ミルク基質に添加した(下記表3参照)。調製法で他の工程は変更していない。
低脂肪撹拌ヨーグルトを、シュードモナスフラジATCC4973のタンパク質分解性抽出物を接種したバルク混合型低温殺菌脱脂ミルクおよび同じミルクで無接種のもので調製する。シュードモナスフラジのタンパク質分解性抽出物を、実施例1のシュードモナスクロロラフィスの抽出物と同様に得る。この抽出物は、ml当たり400単位のタンパク質分解活性を有する。
発酵乳およびヨーグルトに関する法令
NOR:ECOC8800150D
首相殿
国務大臣、経済問題・財政・予算大臣、大法官、法務大臣、農林大臣、および連帯・保健・社会福祉大臣の報告に関して、政府報道官は
製品またはサービスに関する詐欺行為および不当表示についての1905年8月1日付法律、具体的にはその第11条とともに、当該法令を適用した1919年1月22日付修正法令に関し、
乳製品保護に関する1934年6月29日付法律に関し、
乳業市場の組織化および改善のために立案された1935年7月2日付法律に関し、
食品に関して1905年8月1日付けの上記記載の法律を適用する1912年4月15日付修正法令に関し、
ミルクおよび乳製品に関する1905年8月1日付法律を適用した1924年3月25日付修正法令に関し、
食品のラベル付けおよびプレゼンテーションに関する1905年8月1日付け上記法律を適用した1984年の12月7日の法令第84-1147号に関して、政府法律顧問(財政省)を有す。
「発酵乳」という名称は、少なくとも低温殺菌と同等の熱処理に供し、各製品に特徴的である種に属する1種または複数種の微生物を接種してある脱脂または未脱脂ミルク、あるいは脱脂または未脱脂、濃縮または粉末のミルク成分を高配合または非高配合ミルク調製した乳製品用に当てられる。
「ヨーグルト」という名称は、ラクトバチルスブルガリカスおよびストレプトコッカスサーモフィラスと呼ばれる特定の耐熱性乳酸菌のみの生育によって、公正かつ伝統的な慣習に従って得られた発酵乳に当てられる。これらの菌は、同時に接種され、最終製品中に、ミルク含有部分に関して表記すると、グラム当たり少なくとも1千万の菌数の率で生存していなければならない。
発酵乳中には、下記製品:風味抽出物、天然の風味剤および、最終製品の30重量%を限度として、特定の風味を付与する砂糖および他の食品が補充されていてもよい。
(法令97-298によって1997年3月27日付で修正。1997年4月3日付フランス共和国官報、条項2)
発酵乳のラベル表示には、上記の消費者コードの条項R.112-6〜R.112-31によって提供された情報に加えて、下記が含まれる。
-商標名に加え、ミルクが牛乳でない場合は、搾乳した動物の種についての情報
-注釈「・・・で保存」として、温度に関する情報を明記すること、
-ミルク含有部分について計算した製品の脂肪含有量が、重量で1%未満であれば商標の後に「低脂肪」と銘記、
-場合によるが、もし発酵乳が甘味付けか風味付けをしてあれば、「甘くしてある」とかまたは風味剤の名称を銘記、
-条項3に提供された1種または複数種の成分を添加する場合、これを言及した注記またはこうした成分に言及した注記を商標に添付しなくてはならない。
「ヨーグルト」の名称は、対象の製品が上記条項2に付与された定義に従う「ヨーグルト」を含有しているならば、食品のラベル上に表すだけでよい。
現行の法令に規定された製品がその特定の性質を保持する期間は、農業、保健、および消費者関連担当大臣の合同命令によって、適宜策定される。
法令97-298によって1997年3月27日付で修正。1997年4月3日付フランス共和国官報、条項2)
消費者コードの条項R.215-1〜R.215-15を適用に際し、不正行為を調査し確定可能とするために提供される手段とは無関係に、発酵乳の微生物学的特徴およびこれらの特徴をチェックする方法が、農業、保健、および消費者関連担当大臣の合同命令によって、設定されている。
[条項修正中]
国務大臣、経済問題・財政・予算大臣、大法官、法務大臣、農林大臣、連帯・保健・社会福祉大臣、政府報道官、および国務に関する省庁の業務担当別大臣、経済問題・財政・予算大臣は、消費者問題にかかわり、各々、彼らに適用される場合は、フランス共和国の官報に公表されることになる現行法令の履行に責任がある。
Claims (17)
- タンパク質含有量がゼロではないが6%以下であるミルク基質を、少なくとも低温殺菌と同等な熱処理、乳酸発酵、およびミルクを凝結させる性質を有する細菌起源のκ-カゼイン分解酵素の群から選択される少なくとも1種の酵素によるκ-カゼイン分解に供して、乳酸発酵の終了時で20%以上のκ-カゼイン分解度が得られるようにし、前記κ-カゼイン分解は、ミルクの採取と乳酸発酵の終了時との間に開始され、但し、それが熱処理の前に開始される場合は、この熱処理の間に沈殿が引き起こされないように注意を払うこと;および、
前記基質は乳酸発酵およびκ-カゼイン分解処理の後に撹拌されること;
を特徴とする、発酵乳およびヨーグルトからなる群から選択される乳製品の製造方法。 - 前記ミルク基質のタンパク質含有量が3から5%(境界値を含む)であることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記κ-カゼイン分解度が30%以上であることを特徴とする請求項1または2に記載の方法。
- 前記κ-カゼイン分解度が40%以上、好ましくは50%以上であることを特徴とする請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、不純物を含まないまたは部分的に精製された形態、微生物学的培養培地のタンパク質抽出物または生物学的な抽出物の形態、あるいは、このような酵素を産生する微生物の形態で提供されることを特徴とする請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、タンパク質分解性乳酸菌およびタンパク質分解性低温菌からなる群から選択される細菌によって産生されるまたは産生されたことを特徴とする請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、シュードモナス属から選択されるタンパク質分解性低温菌によって産生されるまたは産生されたことを特徴とする請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、シュードモナスクロロラフィス(Pseudomonas chlororaphis)、シュードモナスフルロレッセンス(Pseudomonas fluroescens)およびシュードモナスフラジ(Pseudomonas fragi)の種からなる群から選択されるタンパク質分解性低温菌によって産生されるまたは産生されたことを特徴とする請求項7に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、ストレプトコッカスおよびラクトバチルス属の細菌からなる群から選択されるタンパク質分解性乳酸菌によって産生されるまたは産生されたことを特徴とする請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、95℃で少なくとも5分の熱処理を受けた後で検出可能なκ-カゼイン分解活性を保持する性質を有することを特徴とする請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、前記熱処理の前に導入されることを特徴とする請求項10に記載の方法。
- 前記熱処置の前に、κ-カゼイン分解度が70%未満であり、α-およびβ-カゼイン分解度がそれぞれ70%以下であることを特徴とする請求項10または11に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、この酵素を産生する細菌の形態で、ミルクを冷蔵貯蔵する工程前または工程中に、ミルク基質に導入されることを特徴とする請求項10から12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素が、不純物を含まない酵素の形態、または、微生物培養培地のタンパク質抽出物または生物学的抽出物の形態で、ミルクの標準化工程時にミルク基質に導入されることを特徴とする請求項10から12のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも低温殺菌と同等の熱処理、乳酸発酵、およびκ-カゼイン分解によって、発酵乳およびヨーグルトからなる群から選択される撹拌型乳製品を製造するための使用であって、前記κ-カゼイン分解はミルクの採取から乳酸発酵の終了との間に開始され、それが熱処理の前に開始される場合は、この熱処理の間に沈殿が引き起こされないように注意を払う、ミルクを凝結する性質を有する細菌起源の凝結性κ-カゼイン分解酵素の群から選択される酵素の使用。
- 生乳と比較してκ-カゼイン分解度が20%以上であり、かつ細菌起源のκ-カゼイン分解酵素を含むことを特徴とする、発酵乳およびヨーグルトからなる群から選択される撹拌乳製品。
- 請求項1から14のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、発酵乳およびヨーグルトからなる群から選択される撹拌乳製品。
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