JP2005516935A

JP2005516935A - アルツハイマー病を造影するための化合物

Info

Publication number: JP2005516935A
Application number: JP2003552743A
Authority: JP
Inventors: デニ・レイモン・クリストフ・ブヴェ; ハリー・ジョン・ワズワース
Original assignee: Amersham PLC
Current assignee: GE Healthcare Ltd
Priority date: 2001-12-19
Filing date: 2002-12-12
Publication date: 2005-06-09
Anticipated expiration: 2022-12-12
Also published as: US7173061B2; EP1463721B1; GB0130305D0; ES2254763T3; AU2002350950A1; DE60207612T2; DE60207612D1; WO2003051859A1; US20050080130A1; ATE310736T1; EP1463721A1; JP4418237B2

Abstract

本発明は、式(Ｉ)：
【化１】

の化合物、またはその塩、その放射性ラベルされた形態、およびアミロイド関連疾患、例えばアルツハイマー病のinvivoでの診断または造影における使用を提供する。

Description

発明の詳細な説明

本発明は、アルツハイマー病の診断的造影の分野に関し、該診断的造影において有用な化合物、およびその製造方法およびその使用を提供する。

アルツハイマー病は、西側の世界で、心臓疾患、癌、および卒中に続いて、４番目に最も一般的な死亡原因である。米国において、アルツハイマー病に罹患しているヒトは、約４００万人であり、年間１０００億ドルの費用がかかっている。従って、米国における一人当たりの費用は１年当たり２５,０００ドルである。現在全世界で痴呆に罹患しているヒトは２０００万人である。これは、６５歳のヒトの数が現在の３億９０００万人から８億人まで倍増するため、２０２５年までには、４０００万人まで倍増することとなる。この４０００万人のうち、約５６％(２２２０万人)がアルツハイマー病に罹患するであろう。

現在用いられている in vivo での造影方法は、全ての場合において、アルツハイマー病の診断を痴呆の別の形態と区別するわけではない。患者の区別された診断は、より多くの処置が利用可能となることから、その重要性が増大している。造影剤はまた、より初期段階のアルツハイマー病を造影し予防処置を可能とすることが求められ、そして疾患の進行をモニターすることが求められる。

現在、アルツハイマー病のための唯一の確定試験は、特有の病態生理所見の確認のための死体解剖での脳の試験である。最も広く知られているこれらの病態生理所見の１つは、脳組織中の老年性プラークの存在である。老年性プラークは、β−アミロイドタンパク質と呼ばれる４０−４３アミノ酸からなるタンパク質の堆積物である。これらは、疾患の初期に必ず現れる現象であり、β−アミロイドの堆積が、臨床的な症候の発現前に起こっている場合もあると考えられている。

アミロイド特異的放射性トレーサーは、アルツハイマー病のための可能性のある造影剤として提案されている。Congo Red は、有効なβ−アミロイド結合剤であることが示されているが、血液脳関門(ＢＢＢ)をうまく通過しない (Klunk et al 1994 Neurobiology of Aging Vol. 15 pp. 691-698)。アルツハイマー病において、ＢＢＢ中の異常が確かに存在するという、信じられる機能的証拠はない(Kalaria 1992, Cerebrovascular and Brain Metabolism Reviews, Vol 4, p 226)。従って、アルツハイマー病の in vivo での造影剤の重要な性質は、ＢＢＢを通過することである。

米国特許第 3,947,470 号、および米国特許第 4,024,273 号は、冠状動脈血管拡張活性を有する特定のベンゾフラン化合物を記載している。Howlett et al (Biochem J. (1999), 340, 283-9) は、β−アミロイド・ペプチドにおける原繊維形成の阻害剤であるベンゾフラン誘導体のシリーズを記載している。

本発明の目的は、アルツハイマー病を in vivo で造影するための新規の^９９ｍＴｃでラベルされた薬剤の提供である。アルツハイマー病を in vivo でうまく造影することを可能にするために、薬剤は、β−アミロイドに結合し、かつＢＢＢを通過可能でなければならない。

化合物の^９９ｍＴｃでのラベリングは、適切な^９９ｍＴｃキレート剤と結合する化合物を必要とする。適切な^９９ｍＴｃキレート剤は、比較的嵩高い分子であることが当業界で知られており、このことは、アミロイド結合剤の分子量を増大させ、そして該薬剤がＢＢＢを通過する機会を減少させるよう作用する。同様に、適切な^９９ｍＴｃキレート剤のアミロイド結合剤への結合は、アミロイド結合剤の結合性を妨げると予測される。従って、我々が、キレート化された^９９ｍＴｃを含むがＢＢＢを通過し得、かつβ−アミロイドと結合し得る化合物を見出したことは、驚くべきことである。

第１の態様において、本発明は、式(Ｉ)：

[式中、
(ｉ)Ｒは、水素であり；そして
Ｒ^２は、−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］
｛ここで、Ｒ^４とＲ^５は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択され、
［Ａ］はキレートであり、そして
［Ｂ］は結合基であり、好ましくはＣ(Ｏ)ＮＲ^６
(ここで、Ｒ^６は、水素またはＣ_１−６アルキルである)である｝であるか；または
(ii)Ｒは、

の基であり；そして
Ｒ^１とＲ^２の一方が、上記で定義した通りの−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］であり；そして
他方が、−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、ｎは、０または１であり、そして
Ｒ^７とＲ^８は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択される｝であり；そして
Ｒ^３はハロであり、好ましくはクロロである］
の化合物、またはその塩を提供する。

本発明の１つの態様において、式(Ｉ)の化合物におけるＲは水素であり、従って、式(Ia)：

[式中、
Ｒ^２は、−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］
｛ここで、Ｒ^４とＲ^５は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択され、
［Ａ］はキレートであり、そして
［Ｂ］は結合基であり、好ましくはＣ(Ｏ)ＮＲ^６
(ここで、Ｒ^６は、水素またはＣ_１−６アルキルである)である｝であり；そして
Ｒ^３はハロであり、好ましくはクロロである]
の化合物、またはその塩が提供される。

本発明のさらなる態様において、式(Ib)：

[式中、
Ｒ^１とＲ^２の一方が、式(Ｉ)における−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］と同じであり；そして
他方が、式(Ｉ)における−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８と同じであり；そして
Ｒ^３はハロであり、好ましくはクロロである]
の化合物、またはその塩が提供される。

式(Ｉ)の望ましい化合物は、式(Ic)：

[式中、
Ｒ^１とＲ^２の一方が、−ＯＣＨ_２Ｃ(Ｏ)ＮＨ−［Ａ］
｛ここで、［Ａ］はキレートである｝であり；
他方が、−Ｏ−(ＣＨ_２)_２，３−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、Ｒ^７とＲ^８は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択される｝である]
の化合物、またはその塩を含む。

特に興味深い式(Ｉ)の化合物は、実施例１(vii)、２(vii)、および８(iii)に記載された化合物であり、特に Pn216 コンジュゲートである。

“キレート”という用語は、４座金属錯体形成剤(tetradentate metal complexing agent)として、本発明中で定義され、好ましくはテクネチウムの錯体形成に適切なものである。テクネチウムのキレートは、section B of “Technetium: chemistry and radiopharmaceutical applications”, Klaus Schwochau, 2000, pp.373-423, published by Wiley-Vch Verlag GmbH において論じられている。

適切な本発明のキレートは、
(ｉ)式(Ａ)：

[式中、
Ｒ^Ａ１−Ｒ^Ａ６は、それぞれ独立に、水素、Ｃ_１−６アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアミノアルキルから選択され；
そして−(Ｑ^Ａ)_ｎ−は、架橋基であり、
ここで、ｎは、３、４、または５であり、そして
それぞれのＱ^Ａは、独立に、−Ｏ−、−ＮＲ−、および−ＣＲ_２−(ここで、Ｒは、水素、Ｃ_１−６アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、またはアミノアルキルである)から選択され、
ただし、−Ｏ−または−ＮＲ−から選択されるＱ^Ａ基は１個が上限である]
のジアミンジオキシム；

(ii)式(Ｂ)：

[式中、Ｒ^Ｂ１とＲ^Ｂ２は、独立に、水素、Ｃ_１−６アルキル、所望によりアミノアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアミノアルキルによって置換されているアリールアルキルから選択される]
のマクロサイクリックＮ_４配位子；

(iii)式(Ｃ)：

[式中、Ｑ^Ｃは、Ｃ(Ｒ^Ｃ２)またはＮの何れかであり；
Ｒ^Ｃ１とＲ^Ｃ２は、独立に、水素、Ｃ_１−１０アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアミノアルキルから選択され；そして
ｍは、ｎと等しく、共に、１、２、３、および４から適切に選択される整数である]
のジアミンジフェノール；

(iv)式(Ｄ)：

[式中、Ｐ^Ｄ１とＰ^Ｄ２は、水素、またはラベリング段階の前またはラベリング段階で切断され得る保護基、例えばベンゾイル、アセチル、またはエトキシエチルであり；そして
Ｒ^Ｄ１からＲ^Ｄ８は、独立に、水素、Ｃ_１−１０アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアミノアルキルから選択され；
そしてＲ^Ｄ１／Ｒ^Ｄ２、Ｒ^Ｄ３／Ｒ^Ｄ４、Ｒ^Ｄ５／Ｒ^Ｄ６、Ｒ^Ｄ７／Ｒ^Ｄ８の１個以上のペアが、それらが結合している炭素原子と共に、Ｃ＝Ｏを表し、そして
−(Ｑ^Ｄ)_ｎ−は、架橋基であり、
ここで、ｎは、２、３、４、または５であり；そして
それぞれのＱ^Ｄは、独立に、−Ｏ−、−ＮＲ−、および−ＣＲ_２−(ここで、Ｒは、水素、Ｃ_１−６アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアミノアルキルである)から選択され、
ただし、−Ｏ−または−ＮＲ−から選択されるＱ^Ｄ基は１個が上限である]
のＮ_２Ｓ_２配位子；

(ｖ)式(Ｅ)：

[ここで、テクネチウムは、式(Ｅｉ)から(Ｅｖ)：

｛ここで、Ｒ^Ｅ１は、水素、ベンジル、およびＣ_１−６アルキル(適切にはメチル)から選択され；そして
Ｒ^Ｅ２は、水素および−ＣＨ_２ＣＯＯＨから選択される｝から選択される共配位子(co-ligand)と共に、配位されている]
のヒドラジノニコチンアミド配位子；
から選択され得る。

望ましい式(Ａ)のジアミンジオキシムは、Ｃ_１−３アルキル、アルキルアリール、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、またはアミノアルキルから独立に選択される、Ｒ^Ａ１からＲ^Ａ６を有する。最も望ましいジアミンジオキシムにおいて、Ｒ^Ａ１からＲ^Ａ６は、全てＣＨ_３である。本発明の望ましいキレート剤は、Ｒ^Ａ１からＲ^Ａ６が全てＣＨ_３であり、かつ−(Ｑ^Ａ)_ｎ−が−ＮＨ(ＣＨ_２)_２Ｎ(ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２)(ＣＨ_２)_２ＮＨ−である式(Ａ)のジアミンジオキシムである。本発明の別の望ましいキレート剤は、Ｒ^Ａ１からＲ^Ａ６が全てＣＨ_３であり、かつ−(Ｑ^Ａ)_ｎ−が−ＣＨ_２Ｃ(ＣＨ_３)(ＣＨ_２ＮＨ_２)ＣＨ_２−である、式(Ａ)のジアミンジオキシムである。本発明のアミロイド結合剤は、何れかの官能基で、キレートと適切に結合し得る。本発明のアミロイド結合剤は、好ましくは、(Ｑ^Ａ)_ｎ中の官能基を介して結合し、最も好ましくは、(Ｑ^Ａ)_ｎ中のアミン基を介して結合し、［Ｂ］リンカー基：−Ｃ(Ｏ)ＮＲ^６−を形成する。

望ましい式(Ｂ)のマクロサイクリックＮ_４配位子は、ＨとしてＲ^Ｂ１を、アミノアルキルアリールアルキル(適切にはアミノメチルベンジル、最も適切には４−アミノメチルベンジル)としてＲ^Ｂ２を有する。本発明のアミロイド結合剤は、何れかの官能基を介して、好ましくはＲ^Ｂ１またはＲ^Ｂ２の官能基を介して、キレートに結合し得る。本発明のアミロイド結合剤は、最も好ましくは、Ｒ^Ｂ２の末端のＮＨ_２を介してキレートに結合し、［Ｂ］リンカー：−Ｃ(Ｏ)ＮＲ^６−を形成し得る。

望ましい式(Ｃ)のジアミンジフェノールは、Ｃ(Ｒ^Ｃ２)としてＱ^Ｃを、そしてＲ^Ｃ１およびＲ^Ｃ２の一方をアミノアルキルとして、他方を水素またはＣ_１−６アルキルとして有する。最も望ましい具体的態様において、Ｑ^ＣがＣ(Ｒ^Ｃ２)であり、Ｒ^Ｃ１がＣＨ_３であり、そしてＲ^Ｃ２がＣＨ_２ＮＨ_２である。本発明のアミロイド結合剤は、キレートの何れかの官能基に適切に結合し、好ましくはＲ^Ｃ１またはＲ^Ｃ２の何れかに結合する。本発明のアミロイド結合剤は、最も好ましくは、Ｒ^Ｃ２の末端のＮＨ_２を介して結合し、［Ｂ］リンカー：−Ｃ(Ｏ)ＮＲ^６−を形成する。

望ましい式(Ｄ)のＮ_２Ｓ_２配位子において、Ｒ^Ｄ１、Ｒ^Ｄ２、およびＲ^Ｄ７は水素であり、そしてＲ^Ｄ３／Ｒ^Ｄ４およびＲ^Ｄ５／Ｒ^Ｄ６のペアは、それらが結合している炭素原子と共にＣ＝Ｏであり、そしてＲ^Ｄ８はアミノアルキルである。本発明の最も望ましいＮ_２Ｓ_２配位子において、Ｒ^Ｄ１、Ｒ^Ｄ２、Ｒ^Ｄ７、およびＲ^Ｄ８はメチルであり、Ｒ^Ｄ３、Ｒ^Ｄ４、Ｒ^Ｄ５、Ｒ^Ｄ６は水素であり、そして−(Ｑ^Ｄ)_ｎ−は−ＣＨ_２ＣＨ(ＣＨ_２ＮＨ_２)−または−ＣＨ_２Ｃ(ＣＨ_３)(ＣＨ_２ＮＨ_２)ＣＨ_２−である。本発明のアミロイド結合剤は、キレートの何れかの官能基に適切に結合し、好ましくはＱ^Ｄの何れかの官能基に、最も好ましくはＱ^Ｄの末端のＮＨ_２に結合し、［Ｂ］リンカー：−Ｃ(Ｏ)ＮＲ^６−を形成し得る。

これらのキレート化合物の合成は、当業界で周知である。式(Ａ)のジアミンジオキシム配位子は、Jurisson et al によって記載された方法(Inorg. Chem. 1986, Vol. 25, pp. 543-549) によって製造される。式(Ｂ)のマクロサイクリックＮ_４配位子は、Int. J. Nuc. Med. Biol., 1984, Vol. 2(2), pp. 113-119 に記載の方法によって製造される。式(Ｃ)のジアミンジフェノール配位子は、Pillai et al によって記載された方法 (Nucl. Med. Biol. 1993, Vol. 20(2), pp. 211-216) に従って合成され得る。式(Ｄ)のＮ_２Ｓ_２配位子は、Sun et al の方法(J. Med. Chem. 1996, Vol. 39, pp. 458-470)によって合成される。式(Ｅ)のヒドラジノニコチンアミド配位子は、米国特許第 5206370 号に記載された方法に従って合成される。

式(Ｉ)の化合物の“塩”は、酸の１個以上の水素イオンを、別の陽イオン、例えばアルカリ金属イオン(適切にはＮａ^＋またはＫ^＋)で置換することによって形成される、式(Ｉ)の化合物のイオン性の形態として定義される。

単独で、または別の基(例えばアリールアルキル、ヒドロキシアルキル)の一部として用いられる“アルキル”は、本明細書中で、何れかの直鎖もしくは分枝のＣ_ｎＨ_２ｎ＋１として定義される。ここで、特記しない限り、ｎは１から１０であり、好ましくはｎは１から６である。
“ハロ”という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードから選択される基を意味する。

上記のように、in vivo での造影の目的のために、本発明の化合物は、放射性ラベルされる。従って、本発明のさらなる態様において、本発明の化合物の放射性ラベルされた形態が提供される。放射性ラベルされた本発明の化合物は、適切には、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法 (ＳＰＥＣＴ)に有用なγ線放出放射性同位体でラベルされている。最も望ましい造影部分は、γ線放出放射性金属、特に^９９ｍＴｃである。^９９ｍＴｃの場合において、ラベリングは、本発明の化合物のキレート部分による、^９９ｍＴｃとの錯体形成によって達成される。放射性医薬適用における^９９ｍＴｃの使用は、section B of “Technetium: chemistry and radiopharmaceutical applications”, Klaus Schwochau, 2000, pp.373-423, published by Wiley-Vch Verlag GmbH において論じられている。

式(Ｉ)の化合物は、アミロイド関連疾患の in vivo での造影もしくは診断のための医薬の製造において使用され得る。該医薬は、好ましくは放射性ラベルされており、最も好ましくは^９９ｍＴｃラベルされている。該医薬が^９９ｍＴｃラベルされている際には、滅菌処理された^９９ｍＴｃの過テクネチウム酸イオン(ＴｃＯ_４ ⁻)は、^９９ｍＴｃラジオアイソトープ・ジェネレーターから、滅菌処理された食塩水で溶出することによって得られる。ジェネレーターから生成される^９９ｍＴｃＯ_４ ⁻は、比較的反応性がなく、放射性医薬として使用する前により低い酸化状態に還元しなければならない。最も一般的に用いられる還元剤は、塩化スズである。放射性ラベリングは、本発明の化合物、ＴｃＯ_４ ⁻、および適切な還元剤を含む混合物中で、当業界で既知の方法によって行われる (section B of “Technetium: chemistry and radiopharmaceutical applications”, Klaus Schwochau, 2000, pp.373-423, published by Wiley-Vch Verlag GmbH を参照のこと)。

それゆえに、本発明のさらなる態様は、治療方法および診断方法における、例えばアミロイド関連疾患の in vivo での造影および診断における、Ｔｃ放射性ラベルされた本発明の化合物の使用である。“アミロイド関連疾患”は、アルツハイマー病、家族性アルツハイマー病、タイプ II 糖尿病、ダウン症、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体、リウマチ性関節炎、全身性アミロイド症(原発性および続発性)、および出血性卒中(haemorrhagic stroke)を含む。好ましくは、本発明の化合物は、アルツハイマー病を造影するために用いられ得る。

あるいは、放射性ラベルされた本発明の化合物の投与を含む、対象におけるアミロイド関連疾患の in vivo での造影および診断のための方法が提供される。“アミロイド関連疾患”は、アルツハイマー病、家族性アルツハイマー病、タイプ II 糖尿病、ダウン症、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体、リウマチ性関節炎、全身性アミロイド症(原発性および続発性)、および出血性卒中を含む。本方法は、特に好ましくは、アルツハイマー病の in vivo での造影および診断のための方法である。

放射性ラベルされた本発明による化合物は、好ましくは、本発明の化合物を含む放射性医薬製剤として投与される。“放射性医薬製剤”は、本発明において、本発明の放射性ラベルされた化合物、好ましくはＴｃラベルされた化合物を含む、ヒトに投与するのに適切な形態の製剤として定義される。投与は、好ましくは水溶液としての製剤の注射によって行われる。該製剤は、所望により、さらなる成分、例えば、緩衝剤；薬学的に許容される可溶化剤(例えばシクロデキストリン、または例えば Pluronic、Tween、またはリン脂質などの界面活性剤)；薬学的に許容される安定剤、または抗酸化剤(例えばアスコルビン酸、ゲンチジン酸、またはｐ−アミノ安息香酸)、または凍結乾燥のための増量剤(bulking agent)(例えば塩化ナトリウムまたはマンニトール)などを含み得る。放射性医薬製剤は、信頼性のあるイメージが得られる量で投与され、例えばＴｃラベルされた化合物においては、０.１から５０ｍＣｉの量で、投与時で約０.５から５.０mlで投与される。

便宜的には、本発明のさらなる具体的態様において、アミロイド関連疾患の造影および診断のための^９９ｍＴｃラベルされた化合物を製造するためのキットを提供する。本発明によって定義される“キット”は、例えば血流への注射を介したヒトへの投与に適切な、滅菌処理された、パイロジェンを含まない放射性医薬製品を与えるよう設計された本発明の具体的態様である。放射性金属が^９９ｍＴｃである場合、キットは、薬学的に許容される還元剤、例えばナトリウムジチオナイト、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズ・イオン、Ｆｅ(II)、またはＣｕ(I)、好ましくは塩化スズまたは酒石酸スズなどのスズ塩と共に、本発明の化合物−キレート・コンジュゲートを含むバイアルを含む。使用において、^９９ｍＴｃのソースをバイアルに加えて、放射性ラベルされた化合物を得る。

Ｒが

である、式(Ｉ)の化合物は、対応する式(II)：

[式中、
Ｒ^９およびＲ^１０の一方が−ＯＣＲ^４Ｒ^５Ｃ(Ｏ)ＯＨ
｛ここで、Ｒ^４とＲ^５は、式(Ｉ)の化合物において定義した通りである｝であり；
他方は、−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、ｎ、Ｒ^７、およびＲ^８は、式(Ｉ)の化合物において定義した通りである｝であり；そして
Ｒ^３は、式(Ｉ)の化合物において定義した通りである]の化合物、またはその保護された誘導体から、式：
Ｈ_２Ｎ−［Ａ］
｛ここで、［Ａ］は、式(Ｉ)の化合物において定義した通りである｝
のキレートとカップリングすることによって、製造され得る。

Ｒ^６がＣ_１−６アルキルである式(Ｉ)の化合物は、Ｒ^６が水素である対応する式(Ｉ)の化合物をアルキル化することによって製造され得る。
このカップリング反応は、アミド結合形成の標準的な方法を用いて行われ得る。例えば、該反応は、非プロトン性溶媒中、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中で、有機塩基、例えばＮ−メチルモルホリン(ＮＭＭ)および２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート(ＴＢＴＵ)の存在下、非極限温度で、例えば１０から４０℃で、好ましくは環境温度で行われ得る。

式(II)の化合物は、式(Ｉ)の化合物の製造における、有用な中間体であり、従って、本発明のさらなる態様を表す。

式(II)の化合物は、便宜的には、対応するエステル、適切にはＣ_１−６アルキルエステル、好ましくはメチルエステルの加水分解によって製造され得る。加水分解は、慣用の方法を用いて、適切にはアルカリ加水分解もしくは酸加水分解を用いて、例えば水性の水酸化ナトリウムを用いて行われ得る。

式(II)のエステル化された化合物は、対応する式(III)：

[式中、
Ｒ^１１およびＲ^１２の一方がヒドロキシであり；そして
他方が、−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、ｎ、Ｒ^７、およびＲ^８は、式(II)の望ましい化合物において定義した通りであり；そして
Ｒ^３は、式(II)の化合物において定義した通りである｝である]
の化合物から、
式：ＢｒＣＲ^４Ｒ^５Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ_３
[ここで、Ｒ^４とＲ^５は、式(II)の化合物において定義した通りであり、好ましくは共に水素である]
のブロモアセテートとの反応によって製造され得る。

式(III)の化合物は、文献(例えば Howlett et al, 上記参照のこと)に記載された方法と類似の方法によって、または下記の実施例で記載された方法を用いて製造され得る。

Ｒが水素である式(Ｉ)の化合物は、対応する式(IV)：

[式中、Ｒ^１０は、式(II)で定義した通りの−ＯＣＲ^４Ｒ^５Ｃ(Ｏ)ＯＨであり；そして
Ｒ^３は、式(Ｉ)の化合物において定義した通りである]
の化合物またはその保護された誘導体から、式：
Ｈ_２Ｎ−［Ａ］
[ここで、［Ａ］は、式(Ｉ)において定義した通りである]
のキレートとカップリングすることによって製造され得る。

式(IV)の化合物とキレートとのカップリングは、式(II)の化合物とキレートとのカップリングにおいて上記のように達成され得る。
式(IV)の化合物は、式(II)の化合物において上で記載された方法、および下記に例示されている方法と類似の方法によって、製造され得る。
本発明は、以下の非限定的な実施例によって説明され得る。

実施例
中間体１Ａ

段階(ｉ)

アセトン(５０ml)中の、４−クロロフェノール(Aldrich)(２.１３４ｇ, １６.６mmol, １当量)と、４−メトキシブロモアセトフェノン(Aldrich)(４.１８３ｇ, １８.２６mmol, １.１当量)の溶液に、炭酸カリウム(３.５１６ｇ, １.５３当量, ２５.４８mmol)を加えた。混合物を撹拌し、５時間還流温度で加熱した。次に反応物を室温まで冷却し、濾過した。ろ液を蒸発乾固し、次に酢酸エチル(５０ml)に溶解した。次に有機層を２Ｍ(ＮａＯＨ)で２回、そして水で、そして飽和ＮａＣｌ溶液で、連続して洗浄した。次に有機層を乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、蒸発乾固し、黄色の固体を得た。これを酢酸エチル(ＥｔＯＡｃ)／石油を用いて結晶化し、灰白色の結晶として望ましい生成物を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 3.86 (s, 3H, OCH₃), 5.18 (s, 2H, CH₂), 6.82 (d, 2H, aromatic), 6.96 (d, 2H, aromatic), 7.21 (d, 2H, aromatic), 7.96 (d, 2H, aromatic).

段階(ii)

段階(ｉ)の化合物(３.２４４ｇ, １１.７２mmol)(３０)を、ポリリン酸(５０ｇ)とキシレン(５０ml)の混合物に加え、オーバーヘッド・スターラーを用いて撹拌した。得られた混合物を、１４０℃で、完了するまで(薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)によってモニターする)加熱した。反応混合物を室温(ＲＴ)まで冷却し、酢酸エチル(１００ml)を加えた。上層の有機層をデカンテーションして取った。ポリリン酸を水(１００ml)で処理し、フラスコから除いた。さらに２００mlの水を加え、水相を３×１００mlのＥｔＯＡｃで抽出した。次に合わせた有機層を塩水(１００ml)で洗浄し、乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、蒸発させ、粗製の固体を得た。これを、酢酸エチルを用いて再結晶することによって精製した。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 3.84 (s, 3H, OCH₃), 6.80 (s,1H, aromatic), 6.95 (d, 2H, aromatic), 7.18 (d, 1H, aromatic), 7.39 (d, 2H, aromatic), 7.49 (d, 1H, aromatic), 7.77 (d, 2H, aromatic).

中間体１

窒素下で、ジクロロメタン(ＤＣＭ)(７ml)中の中間体１Ａ(１００mg, ０.３８mmol)(２１)の溶液を、氷浴中で冷却した。三臭化ホウ素溶液(ＤＣＭ中１Ｍ, ３.８ml, ３.８mmol, １０当量)をゆっくりと加えた。暗褐色の反応混合物をＮ_２下で撹拌し、室温までゆっくりと温めた。４時間後、ＴＬＣが、反応が完了したことを示した(溶出剤５：１石油エーテル：酢酸エチル)。反応を、２０mlの１０％ＨＣｌ溶液を添加することによってクエンチし、ＤＣＭで希釈した。有機層を分離して取り、水相を酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、蒸発乾固し、くすんだ褐色／黒色の固体を得た。これをフラッシュ・カラム・クロマトグラフィー(溶出剤５：１石油：酢酸エチル)によって精製し、明褐色の固体を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 6.79 (s,1H, aromatic), 6.87 (d, 2H, aromatic), 7.18 (d, 1H, aromatic), 7.37 (d, 1H, aromatic), 7.49 (d, 1H, aromatic), 7.73 (d, 2H, aromatic).

中間体２：ジエチル(３−クロロプロピル)アミン

ＤＣＭ中の３−ジエチルアミノ−１−プロパノール(Aldrich)(１０ｇ, ７６mmol)の溶液を、０℃で撹拌した。次に塩化チオニルの溶液(ＤＣＭ３０ml)を、反応温度を０℃に保ったまま滴下した。添加完了後、反応物を１時間還流した。反応物を冷却し、過剰のＤＣＭと塩化チオニルを真空下で除去した。残渣を、２ＮＮａＯＨを用いて塩基性(ｐＨ８〜９)にし、水性の混合物をＤＣＭ(３×１００ml)で抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(ＭｇＳＯ_４)、蒸発させ、褐色の油状物を得た。油状物を蒸留し(１６０〜１６５℃)、生成物を透明な油状物として得た(４.２ｇ, ３６.９％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.02 (6H, 2xCH₃), 1.89 (2H, CH₂), 2.53 (6H, 3xCH₂), 3.59 (2H, CH₂).
m/z 150/151 M+H.

中間体３：ジエチル−クロロエチルアミン

ＤＣＭ中の２−ジエチルアミノエタノール(Lancaster)(１０ｇ, ８５mmol)の溶液を、０℃で撹拌した。塩化チオニルの溶液(３０ml, ＤＣＭ)を、反応物の温度を０℃に保ったまま加えた。添加完了後、反応物を１時間還流した。反応物を冷却し、過剰のＤＣＭと塩化チオニルを真空下で除去した。残渣を２ＮＮａＯＨを用いて塩基性(ｐＨ８〜９)にし、水性の混合物をＤＣＭ(３×１００ml)で抽出した。有機抽出物を合わせて、乾燥し(ＭｇＳＯ_４)、蒸発させ、褐色の油状物を得た。油状物を蒸留し(１６５〜１６９℃)、透明な油状物として、生成物を得た(６.７ｇ, ５８％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.02 (6H, 2xCH₃), 2.58 (4H, 2xCH₂), 2.78 (2H, CH₂) 3.52 (2H, CH₂).
m/z 136/137 M+H.

実施例１
実施例１(ｉ)：４−(ジエチルアミノエチルオキシ)安息香酸エチル

表題化合物を、４−ヒドロキシ安息香酸エチルをジエチルクロロエチルアミンでアルキル化することによって、実施例２(ｉ)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.07 (6H, 2xCH₃), 1.38 (3H, CH₃), 2.63 (4H), 2.89 (2H, CH₂), 4.1 (2H, OCH₂) 4.35 (2H, OCH₂), 6.91 (2H), 7.97 (2H).

実施例１(ii)：４−(３−ジエチルアミノエチルオキシ)安息香酸

表題化合物を、実施例１(ｉ)の化合物から、実施例２(ii)に記載された方法と類似の方法を用いて製造し、予測された生成物５.２ｇを得た。収率：９１％.
¹H NMR (d⁶-DMSO) δH ppm 1.22 (6H, 2xCH₃), 3.18 (4H), 3.49 (2H, CH₂), 4.46 (2H, OCH₂), 7.05 (2H), 7.89 (2H).

実施例１(iii)：塩化４−(２−ジエチルアミノエチルオキシ)ベンゾイル

表題化合物を、実施例１(ii)の化合物から、実施例２(iii)の方法と類似の方法を用いて製造し、５.４ｇを得た。収率：１００％.
¹H NMR (d⁶-DMSO) δH ppm 1.27 (6H, 2xCH₃), 3.17 (4H), 3.49 (2H) 4.47 (2H, OCH₂), 7.07 (2H), 7.9 (2H).

実施例１(iv)：５−クロロ−２−(４−メトキシフェニル)−３−［４−(２−ジエチルアミノエチルオキシ)ベンゾイル］ベンゾフラン

実施例２(iv)の方法を用いて中間体１Ａを実施例１(iii)の化合物にカップリングさせ、予測された生成物を得た(１.２１ｇ, ６８％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.28 (6H, 2xCH₃), 2.99 (4H), 3.22 (2H), 3.81 (3H, CH₃), 4.38 (2H, OCH₂), 6.84 (4H), 7.27 (1H), 7.46 (2H), 7.63 (2H), 7.83 (2H).

実施例１(ｖ)：５−クロロ−２−(４−ヒドロキシフェニル)−３−［４−(３−ジエチルアミノエチルオキシ)ベンゾイル］ベンゾフラン

表題化合物を、実施例１(iv)の化合物から、実施例２(ｖ)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
¹H NMR (DMSO) δH ppm 0.91 (6H, 2xCH₃), 2.5 (4H), 2.27 (2H), 4.03 (2H, OCH₂), 6.96 (2H), 6.87 (2H), 7.35 (4H), 7.68 (3H).

実施例１(vi)

表題化合物を、実施例１(ｖ)の化合物から、実施例４(iv)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
¹H NMR (DMSO) δH ppm 0.91 (6H, 2xCH₃), 2.6 (4H), 2.88 (2H), 3.8 (3H), 4.03 (2H, OCH₂), 4.67 (2H), 6.84 (4H), 7.4 (1H), 7.49 (2H), 7.61 (2H), 7.84 (2H).

実施例１(vii)

表題生成物を、メチルエステルから、下記の経路を用いて製造した。
メタノール中の実施例１(vi)の化合物の溶液を、室温で撹拌した。２ＮＮａＯＨ(等体積)を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物をＨ_２Ｏで希釈し、ｐＨ４まで酸性にした。水相をＤＣＭ(３ｘ)で抽出し、有機抽出物を合わせて乾燥し、蒸発させ、表題化合物を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.36 (6H, 2xCH₃), 3.25 (6H), 4.4 (2H, OCH₂), 4.5 (2H), 6.62 (2H), 6.68 (2H), 7.14 (2H), 7.34 (1H), 7.46 (1H), 7.53 (2H), 8.1 (1H).
m/z 522.26/524.49。

実施例１(viii)：キレートへのカップリング
実施例１(vii)のベンゾフラン(１当量)と、キレート(遊離の第１級アミン)(１当量)を、ジメチルホルムアミドに溶解する。次に、ＴＢＴＵ(２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート)(１.２当量)と、Ｎ−メチルモルホリン(１.２当量)を加える。反応物を室温で１２時間撹拌する。最終生成物を、さらに処理することなく分取ＨＰＬＣ(ＰＲＰカラム)によって精製する。

Pn44 コンジュゲート(実施例１(vii)より)

M/S : ES+ : m/z 819.3, 410.6 ; M+H, (M+2)/2.

Pn216 コンジュゲート(実施例１(vii)より)

M/S : ES+ : m/z 848.2, 425.1 ; M+H, (M+2)/2.

cPn216 コンジュゲート(実施例１(vii)より)

M/S : ES+ : m/z 847.3, 424.6 ; M+H, (M+2)/2.

実施例２
実施例２(ｉ)：４−(ジエチルアミノプロピルオキシ)安息香酸エチル

ＤＭＦ中の４−ヒドロキシ安息香酸エチル(１０ｇ, ６mmol)と、中間体２(１０ｇ, ６.７mmol)と、炭酸カリウム(１６.６ｇ, １２mmol)の溶液を、１００℃で４８時間加熱した。完了した際に、反応物を２００mlの氷水に注ぎ、混合物を酢酸エチル(３×１００ml)を用いて抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物(７.６ｇ, ６１％)を、薄橙色の油状物として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.07 (6H, 2xCH₃), 1.35 (3H, CH₃), 1.92 (2H, CH₂), 2.56 (6H), 4.06 (2H, OCH₂) 4.35 (2H, OCH₂), 6.91 (2H), 7.97 (2H).

実施例２(ii)：４−(３−ジエチルアミノプロピルオキシ)安息香酸

Ｈ_２Ｏ(５０ml)中の実施例２(ｉ)(８ｇ, ２９mmol)の化合物の溶液を、室温で撹拌した。濃ＨＣｌ(５０ml)を加え、反応物を１８時間還流した。反応物を冷却し、蒸発乾固させた。固体を熱エタノールに溶解し、石油エーテルを加え、予測された生成物を白色の小板として得た(７２ｇ, ８８％)。
¹H NMR (d⁶-DMSO) δH ppm 1.19 (6H, 2xCH₃), 2.17 (2H), 3.12 (6H, CH₂), 4.14 (2H, OCH₂), 7.02 (2H), 7.88 (2H).

実施例２(iii)：塩化４−(ジエチルアミノプロピルオキシ)ベンゾイル

ＤＣＭ中の実施例２(ii)の化合物(６ｇ, ２４mmol)の溶液を、０℃で撹拌した。塩化チオニルを滴下し、反応物を２４時間還流した。反応物を冷却し、溶媒を真空下で除去し、刺激性の粗製の固体として予測された化合物を得た(５.９ｇ, １００％)。固体をさらに精製することなく用いた。
¹H NMR (d⁶-DMSO) δH ppm 1.19 (6H, 2xCH₃), 2.16 (2H), 3.12 (6H) 4.12 (2H, OCH₂), 7.03 (2H), 7.89 (2H).

実施例２(iv)：５−クロロ−２−(４−メトキシフェニル)−３−［４−(３−ジエチルアミノプロピルオキシ)ベンゾイル］ベンゾフラン

ＤＣＭ(１００ml)中の５−クロロ−２−(４−メトキシフェニル)ベンゾフラン(１ｇ, ３.９mmol)の溶液を、０℃で窒素下で撹拌した。実施例２(iii)の化合物(１.６８ｇ, ６.９mmol)を加え、塩化スズ(IV)の溶液(１ＭＤＣＭ, １１.６mmol)を滴下した。その色が深赤色になり、反応物を室温で３時間撹拌した。得られた懸濁液を氷水(２５０ml)に注ぎ、有機部分を分離した。水層をＤＣＭで抽出し、有機部分を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を黄色のタール状物質として得た(１.３４ｇ, ７２％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.38 (6H, 2xCH₃), 2.36 (2H), 3.12 (4H), 3.81 (3H, CH₃), 4.12 (2H, OCH₂), 6.83, (4H), 7.29 (1H), 7.46 (2H), 7.65 (2H), 7.82 (2H).

実施例２(ｖ)：５−クロロ−３−［４−(３−ジエチルアミノプロピルオキシ)ベンゾイル］−２−(４−ヒドロキシフェニル)ベンゾフラン

ジクロロエタン(１００ml)中の実施例２(iv)の化合物(４.３ｇ, ８.７mmol)の溶液を、１０℃に冷却した。塩化アルミニウム(５０mmol)を加え、次に２−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチルチオフェノール(１７.４mmol)を加え、反応物を４０℃で４時間加熱した。メタノール(２０ml)を加え、次にＨ_２Ｏ(１５０ml)を加えた。有機相を分離し、真空下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、予測された化合物を明黄色の油状物として得た(１.９ｇ, 収率４６％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.34 (6H, 2xCH₃), 2.18 (2H), 3.08 (6H), 4.05 (2H, OCH₂), 6.66 (2H), 6.79 (2H), 7.25 (3H), 7.43 (1H), 7.60 (2H), 7.75 (1H).

実施例２(vi)

表題化合物を、実施例２(ｖ)の化合物から、実施例４(iv)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 0.18 (6H, 2xCH₃), 2.1 (2H), 2.8 (6H), 3.8 (3H) 4.07 (2H), 4.63 (2H, OCH₂), 6.84 (4H), 7.26 (2H), 7.45 (1H), 7.64 (2H), 7.83 (2H).

実施例２(vii)

表題化合物を、実施例１(vii)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
δH ppm 1.12 (6H, 2xCH₃), 2.07 (2H), 6.76 (6H), 4.22 (2H, OCH₂), 4.5 (2H), 6.85 (2H), 6.94 (2H), 7.5 (3H), 7.65 (1H), 7.76 (2H), 7.82 (1H).
m/z 536.34/538.37。

実施例２(viii)
実施例２(vii)のベンゾフランを、実施例１(viii)に記載された方法と類似の方法を用いて、様々なキレートとカップリングした。
Pn44 コンジュゲート (実施例２(vii)より)

M/S : ES+ : m/z 833.3, 417.5, M+H, (M+2)/2.

Pn216 コンジュゲート (実施例２(vii)より)

M/S : ES+ : m/z 862.3, 432.1, M+H, (M+2)/2.

cPn216 コンジュゲート (実施例２(vii)より)

M/S : ES+ : m/z 861.3, 431.7, M+H, (M+2)/2.

実施例３
実施例３(ｉ)：５−クロロ−２−[４−(２−ジエチルアミノエチルオキシ)フェニル]ベンゾフラン

ＤＭＦ中の中間体１(５ｇ, ２０mmol)の溶液を、室温で撹拌した。中間体３(２２mmol)を加え、次に炭酸カリウムを加えた。反応物を９０℃で２時間加熱した。反応物を冷却し、次に氷水に注いだ。得られた固体を濾過によって集め、乾燥し、表題化合物を、白色の固体として得た(４.５ｇ, ６５.５％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.08 (6H, 2xCH₃), 2.65 (2H, 2xCH₂), 2.91 (4H, 2xCH₂), 4.09 (2H, OCH₂) 6.8 (1H), 6.97 (2H), 7.18 (1H), 7.38 (1H), 7.49 (1H), 7.76 (2H).
m/z 342/344 M+H.

実施例３(ii)

乾燥ＤＣＭ中の実施例３(ｉ)の化合物(３.５ｇ, １０mmol)と、塩化ｐ−アニソイル(１８mmol)の溶液を、０℃で窒素下で撹拌した。ＳｎＣｌ_４(１ＭＤＣＭ, ３０mmol)の溶液を滴下し、撹拌を、室温で、窒素下で、２時間続けた。反応混合物を１００mlの氷水に注意深く加え、水相を酢酸エチル(３×１００ml)で抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させ、明黄色の油状物を得た。これを、フラッシュクロマトグラフィー(シリカフラッシュ)によって精製し、表題化合物を白色の固体として得た(２.１ｇ, ４５％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.45 (6H, 2xCH₃), 3.24 (4H, 2xCH₂), 3.43 (2H, CH₂), 3.87 (3H, CH₃), 4.55 (2H, OCH₂) 6.85 (4H), 7.3 (1H), 7.44 (2H), 7.67 (2H), 7.86 (2H).
m/z 477/479 M+H.

実施例３(iii)

ピリジン塩酸塩(１０ｇ)を１７０℃に加熱した。実施例３(ii)の固体の生成物を加え、反応物を１７０℃でさらに２時間加熱した。反応物を冷却し、氷水(１００ml)を加え、水性の混合物をＤＣＭ(３×１００ml)を用いて抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させ、油性残渣を得た。これを、フラッシュクロマトグラフィー(ＳｉＯ_２)によって精製し、表題化合物を薄黄色の泡沫として得た(０.８ｇ, ６３％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 0.91 (6H, 2xCH₃), 2.5 (4H, 2xCH₂), 2.75 (2H, CH₂), 4.03 (2H, OCH₂) 6.71 (2H), 6.88 (2H), 7.37 (4H), 7.69 (2H).
m/z 451/453 M+H.

実施例３(iv)

表題化合物を、実施例３(iii)の化合物から、実施例４(iv)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。生成物(０.２１ｇ, ３７％)を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.06 (6H, 2xCH₃), 2.62 (4H, 2xCH₂), 2.84 (2H, CH₂), 3.8 (3H, CH₃), 4.04 (2H, OCH₂) 4.6 (2H, OCH₂), 6.83 (4H), 7.29 (1H), 7.47 (2H), 7.61 (2H), 7.83 (2H).

実施例３(ｖ)

表題化合物を、実施例１(vii)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
¹H NMR (DMSO) δH ppm 1.14 (6H, 2xCH₃), 3.04 (4H), 3.3 (2H), 4.3 (2H, OCH₂), 4.6 (2H), 6.76 (2H), 6.90 (2H), 7.4 (3H), 7.6 (3H), 7.7 (1H).
m/z 522.28/524.47。

実施例３(vi)
実施例３(ｖ)の化合物を、実施例(viii)に記載された方法と類似の方法を用いて、様々なキレートにコンジュゲートした。

Pn44 コンジュゲート(実施例３(ｖ)より)

M/S : ES+ : m/z 819.3, 410.2 ; M+H, (M+2)/2.

Pn216 コンジュゲート(実施例３(ｖ)より)

M/S : ES+ : m/z 848.3, 424.7 ; M+H, (M+2)/2.

cPn216 コンジュゲート(実施例３(ｖ)より)

M/S : ES+ : m/z 847.3, 424.5 ; M+H, (M+2)/2.

実施例４
実施例４(ｉ)：５−クロロ−２−[４−(３−ジエチルアミノプロピルオキシ)フェニル]ベンゾフラン

ＤＭＦ中の中間体１(４ｇ, １６mmol)の溶液を、室温で撹拌した。中間体２(１８mmol)を加え、次に炭酸カリウムを加えた。反応物を９０℃で２時間加熱した。反応物を冷却し、次に氷水に注いだ。得られた固体を濾過によって集め、乾燥し、表題化合物を白色の固体として得た(４.２ｇ, ７６.４％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.04 (6H, 2xCH₃), 1.94 (2H, CH₂), 2.58 (6H, 3xCH₂), 4.07 (2H, OCH₂) 6.79 (1H), 6.95 (2H), 7.17 (1H), 7.38 (1H), 7.49 (1H), 7.74 (2H).
m/z 357/359 M+H.

実施例４(ii)：５−クロロ−２−［４−(３−ジエチルアミノプロピルオキシ)フェニル］−３−(４−メトキシベンゾイル)ベンゾフラン

乾燥ＤＣＭ中の実施例４(ｉ)の生成物(１ｇ, ２.８mmol)の溶液を、０℃で窒素下で撹拌した。塩化アニソイル(４.９mmol)を加え、次にＳｎＣｌ_４の溶液(１ＭＤＣＭ, ４.９mmol)を加えた。直ちに赤色となり、撹拌を２時間続けた。反応混合物を１００mlの氷水に注意深く加え、水相を酢酸エチル(３×１００ml)で抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させ、明黄色の油状物を得た。これを、フラッシュクロマトグラフィー(シリカフラッシュ)によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た(０.８ｇ, ５８％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.42 (6H, 2xCH₃), 2.37 (2H, CH₂), 3.17 (6H, 3xCH₂), 3.89 (3H, CH₃), 4.08 (2H, OCH₂), 6.82 (4H), 7.26 (1H), 7.45 (2H), 7.63 (2H), 7.84 (2H).
m/z 491/493 M+H.

実施例４(iii)：５−クロロ−２−［４−(３−ジエチルアミノプロピルオキシ)フェニル］−３−(４−ヒドロキシベンゾイル)ベンゾフラン

ピリジン塩酸塩(１０ｇ)を１７０℃に加熱した。実施例４(ii)の固体の生成物を加え、反応物を１７０℃でさらに２時間加熱した。反応物を冷却し、氷水(１００ml)を加え、水性の混合物をＤＣＭ(３×１００ml)を用いて抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させ、油性残渣を得た。これを、フラッシュクロマトグラフィー(ＳｉＯ_２)によって精製し、表題化合物を薄黄色の固体として得た(１.２ｇ, ６１.４％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.11 (6H, 2xCH₃), 2.01 (2H, CH₂), 2.94 (4H, 2xCH₂), 3.31 (2H, CH₂), 4.08 (2H, OCH₂), 6.76 (2H), 6.96 (2H), 7.4 (2H), 7.56 (2H), 7.68 (2H), 7.75 (1H).
m/z 477/479 M+H.

実施例４(iv)

乾燥ＤＭＦ中の実施例４(iii)の生成物(０.８ｇ, １.８mmol)の溶液を、室温で撹拌した。炭酸カリウムを加え、反応物を９０℃で２時間加熱した。反応混合物を氷水に注いで、水相をＤＣＭ(３×１００ml)を用いて抽出した。有機抽出物を合わせて乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、蒸発させ、黄色の残渣を得た。これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、表題化合物を橙色のタール状物質として得た(０.１３ｇ, ２１％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 1.18 (6H, 2xCH₃), 2.22 (2H, CH₂), 2.79 (6H, 3xCH₂), 3.8 (3H, CH₃), 4.08 (2H, OCH₂), 4.67 (2H, CH₂), 6.83 (4H), 7.27 (1H), 7.45 (2H), 7.65 (2H), 7.83 (2H).
m/z 549/551 M+H.

実施例４(ｖ)

表題化合物を、実施例１(vii)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。
¹H NMR (DMSO) δH ppm 1.26 (6H, 2xCH₃), 2.15 (2H), 3.22 (6H), 3.38 (2H), 4.16 (2H, OCH₂), 4.79 (2H), 6.9 (2H), 7.0 (2H), 7.5 (2H), 7.66 (2H), 7.84 (3H).
m/z 536.32/538.43。

実施例４(vi)
実施例４(ｖ)のベンゾフランを、実施例１(viii)に記載された方法と類似の方法を用いて、様々なキレートにコンジュゲートした。

Pn44 コンジュゲート(実施例４(ｖ)より)

M/S : ES+ : m/z 833.3, 417.6, M+H, (M+2)/2.

Pn216 ベンゾフラン３コンジュゲート(実施例４(ｖ)より)

M/S : ES+ : m/z 862.3, 432.1, M+H, (M+2)/2.

cPn216 ベンゾフラン３コンジュゲート(実施例４(ｖ)より)

M/S : ES+ : m/z 861.3, 431.4, M+H, (M+2)/2.

実施例５：本発明の式(Ｉ)の化合物の ^９９ｍＴｃラベリング
メタノールまたはＨ_２Ｏに溶解した本発明の化合物の１mg/ml溶液の０.１mlのアリコートを、脱酸素した食塩水(０.９％(w/v), １ml)と、０.０３５mlの水性のＮａＯＨ(０.１Ｍ)と共に、窒素充填した１０mlガラスバイアルへ移した。この溶液に、テクネチウム・ジェネレーター溶出液(１ml, 約０.４ＧＢｑ)を加え、次に塩化スズ水溶液(０.１ml, 約１０μｇ)を加えた。ラベリングのｐＨは、９.０〜１０.０である。バイアルは、環境温度(１５〜２５℃)で３０分間インキュベートし、ラベリングを行う。ＨＰＬＣ精製を行い、試験前にラベルされていない出発物質と放射活性不純物をを除去する。精製後、有機溶媒を真空下で除去し、試料を約５mlの０.１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７.４に再度溶解し、使用濃度(working concentration)を６〜９ＭＢｑ／mlとする。放射化学純度は、使用前に、以下に記載した薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)によって評価する。
ｉ)ITLC SG 2cm×20cm, ０.９％(w/v)食塩水で溶出；
ii)Whatman No.1 2cm×20cm, ５０：５０(v/v) アセトニトリル：Ｈ_２Ｏで溶出.

ラベルされた支持体を、ＴＬＣ溶媒系(ｉ)もしくはそれに近い溶媒系で保ち、そして溶媒混合比を系(ii)に近づけた。適切な検出装置によって分析された場合、放射化学的純度は、典型的には８５％以上のラベルされた化合物である。

実施例６：本発明の化合物(II)の化合物の ^９９ｍＴｃラベリング
グルコン酸ナトリウム(１mg)と、重炭酸ナトリウム(２mg)と、塩化スズ(１５μｇ)を含むグルコン酸キットを、テクネチウム・ジェネレーター溶出液(５ml, ２ＧＢｑ)で再構成し、室温で１５分間インキュベートし、ラベリングを行う。新しくメタノールに溶解させた本発明の化合物(５mg/ml)のアリコート(０.１ml)を、０．０２５mlの水性のＮａＯＨ(０.１Ｍ)と２mlの^９９ｍＴｃ−グルコネート溶液と共に、窒素充填した１０ml ガラスバイアルに移す。ラベリングのｐＨは９.０である。バイアルは、室温で３０分間インキュベートし、ラベリングを行う。精製と放射化学的純度の評価は、実施例５のように行う。

実施例７：本発明の化合物(III)の ^９９ｍＴｃラベリング
０.１mlのメタノールに溶解させた本発明の化合物(１mg/ml)のアリコートを、水に溶解させたトリシン(０.５ml, ３７.５mg)と、水に溶解させたホスフィンジントリス(ベンゼンスルホン酸)三ナトリウム塩(０.１ml, １mg)と共に、窒素充填した１０ml ガラスバイアルに移す。この溶液に、テクネチウム・ジェネレーター溶出液(１ml, 約０.４ＧＢｑ)を加え、０.１ＭのＨＣｌ中の塩化スズの溶液(０.０２ml, 約２μｇ)を加える。ラベリングのｐＨは４.５〜５.５である。バイアルを６０℃で３０分間インキュベートし、ラベリングを行う。精製および放射化学的純度の評価を、実施例５のように行う。

実施例８：３−Ｈ化合物の製造
実施例８(ｉ)

中間体１(２００mg, ８.１７×１０^−４mol)と、ブロモ酢酸メチル(０.３８ml, ４.０９×１０^−３mol, ５当量)と、炭酸カリウム(１.１２９ｇ, ８.１７×１０^−３mol, １０当量)を、アセトン(３０ml)中で撹拌し、還流温度まで加熱した。混合物を５時間還流した。反応混合物を蒸発乾固し、残渣を水と酢酸エチルの層間に分配した。層を分離し、有機相を水でさらに２回洗浄した。有機相を乾燥し(Ｎａ_２ＳＯ_４)、濾過し、蒸発させた。残渣を酢酸エチルから再結晶することによって精製し、白色の結晶として生成物を得た(３６)(１２５mg, ４８％)。
¹H NMR (CDCl₃) δH ppm 3.83 (3H, OCH₃), 4.7 (2H, OCH₂) 6.84 (1H), 7.0 (d, 2H), 7.2 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.80 (d, 2H).

実施例８(ii)

表題化合物は、実施例１(vii)に記載された方法と類似の方法を用いて製造した。

実施例８(iii)
下記のキレート化合物は、実施例８(ii)の化合物から、実施例１(viii)で記載された方法と類似の方法を用いて製造した。実施例５から７に記載された方法を用いて^９９ｍＴｃでラベルされた場合、これらの化合物はまた、アルツハイマー病を造影するのに有用であり得る、従って、これらは本発明のさらなる態様を表す。

Pn44 コンジュゲート

M/S : ES+ : m/z: 600.2；
¹H NMR (DMSO) : δ 0.718 (s, 3H); 1.09 (s, 12H), 1.67 (s, 6H), 2.0 (m, 4H); 3.09 (m, 2H); 4.59 (s, 2H); 7.08 (d, 2H); 7.27 (s, 1H); 7.31 (m, 1H); 7.63 (d, 1H); 7.69 (m, 1H); 7.87 (d, 2H); 8.21 (bt, 1H); 10.36 (bs, 1H).

Pn216 コンジュゲート

M/S : ES+ : m/z: 629.2；
¹H NMR (DMSO) : 1.010 (s, 12H), 1.69 (s, 6H), 2.26 (m, 4H); 2.42 (m, 2H); 3.18 (m, 2H) ; 4.85 (s, 2H); 7.08 (d, 2H); 7.26 (s, 1H); 7.30 (m, 1H); 7.63 (d, 1H); 7.67 (m, 1H); 7.87 (d, 2H); 8.01 (bt, 1H); 10.38 (bs, 1H).

cPn216 コンジュゲート

M/S : ES+ : m/z 628.2；
¹H NMR (DMSO) : 1.07 (s, 12H), 1.315 (m, 7H) ; 1.90 (s, 6H), 2.14 (m, 4H); 3.09 (m, 2H) ; 4.48 (s, 2H); 7.03 (d, 2H); 7.20 (s, 1H); 7.26 (dd, 1H); 7.54 (d, 1H); 7.61 (d, 1H); 7.80 (d, 2H); 8.12 (bt, 1H); 10.38 (bs, 1H).

DADP コンジュゲート

M/S : ES+ : m/z 614.1；
¹H NMR : (DMSO) : 0.79 (s, 3H), 2.33 (m, 4H); 3.11 (m, 2H) ; 3.70 (s, 4H); 4.61 (s, 2H); 4.86 (s, 1H); 6.70 (m, 4H); 7.05 (m, 6H); 7.27 (m, 2H); 7.62 (d, 1H); 7.68 (d, 1H); 7.90 (d, 2H); 8.20 (bt, 1H), 7.94 (s, 1H).

生物学的データ
アミロイド結合の測定
化合物の結合を、^１２５Ｉ−β−アミロイドタンパク質１−４０(¹²⁵I-BAP 1-40, Amersham Biosciences IM294)がアミロイド１−４０原繊維(filbrils)に結合する能力と比較して測定した。アミロイド結合は基本的に以下のように行った。
３つの新しい緩衝液ストックを試験のために調製した：
緩衝液１：５０mM ＨＥＰＥＳ／０.１％ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ), ｐＨ７.５；
緩衝液２：５０mM ＨＥＰＥＳ／０.１％ＢＳＡ／４００μＭＺｎＣｌ_２, ｐＨ７.５；
緩衝液３：５０mM ＨＥＰＥＳ／０.１％ＢＳＡ／１００μＭＺｎＣｌ_２, ｐＨ７.５.

ストレプトアビジンでコートされたシンチレーション・プロキシミティー・アッセイ・ビーズ(scintillation proximity assay beads) (SA-SPA beads, Amersham Biosciences)を用いて、原繊維状β−アミロイドタンパク質 (ＢＡＰ１−４０)を固定化した。アミロイドでコートされたビーズ(ＳＰＡ−ＢＡＰ)を、２５０μｌの SA-SPA beads (１００mg/ml)を、２５０μｌの緩衝液２、４２５μｌの緩衝液１、５０μｌのビオチン化されたＢＡＰ１−４０(０.５mg/ml, Biosource 03-243)、２５μｌのＢＡＰ１−４０(１０mg/ml, Biosource 03-138)と共にインキュベートすることによって製造した。非特異的結合ＳＰＡビーズ(ＳＰＡ−ＮＳＢ)を製造し、ＢＡＰ１−４０原繊維を伴わないＳＰＡビーズへの化合物の結合を下記のインキュベーションにおいて評価した [２５０μｌＳＡ−ＳＰＡビーズ(１００mg/ml), ２５０μｌ緩衝液２, ５００μｌ緩衝液１]。

ＳＰＡ−ＢＡＰとＳＰＡ−ＮＳＢのインキュベーションは、２４時間室温で行い、次に１.５mlのチューブ(eppendorf, Merk, 306/0421/12)で、２分間１０００×Ｇで回転させた。上清を除去し、ビーズを１mlの緩衝液３中で再度懸濁し、その後２分間１０００×Ｇで遠心分離した。最後に、洗浄したＳＰＡ−ＢＡＰとＳＰＡ−ＮＳＢビーズを１mlの緩衝液３で再度懸濁した。

^１２５Ｉ−ＢＡＰ１−４０と試験化合物のアミロイド結合は、０.５mlのチューブ(eppendorf, Merk, 306/0421/02)中で、５０μｌのＳＰＡ−ＢＡＰビーズを、２５μｌの緩衝液２と、２５μｌのラベルされた化合物(^１２５Ｉ−ＢＡＰ１−４０もしくは試験化合物)に加えることによって、３回行った。次にチューブを１８０分間室温で振盪しながらインキュベートし、その後２分間１０００×Ｇで遠心分離した。上清を除去し、ＳＰＡ−ＢＡＰペレットを、１％の TWEEN-20 (Sigma, P7949)を含む３００μｌの緩衝液３で、２回洗浄した。ラベルされた化合物のＳＰＡビーズへの非特異的な結合は、ＳＰＡ−ＢＡＰビーズをＳＰＡ−ＮＳＢビーズに置き換える以外は上記の通りのインキュベーションを用いて測定した。次に、洗浄されたＳＰＡビーズのペレットの放射活性を測定した。

ラベルされた化合物の原繊維ＢＡＰ１−４０に対する親和性は、ＳＰＡ−ＢＡＰに関係するカウントから、ＳＰＡ−ＮＳＢに関係するカウントを引くことによって見積もられる。次に、ラベルされた化合物の結合を^１２５Ｉ−ＢＡＰ結合(１００％とみなす)と比較した。
これらの試験において、^１２５Ｉ−ＢＡＰまたは試験化合物は等モル量で加えられた。

結果と考察
ＢＡＰ１−４０は、容易に自己凝集する。このアッセイにおいて、^１２５Ｉ−ＢＡＰ１−４０の、ＳＰＡビーズ上に固定された固定量のアミロイド原繊維への結合は、他の化合物に対する対照として用いられた。表１は、他のアミロイド結合剤と非結合剤を、^１２５Ｉ−ＢＡＰ１−４０の結合と比較して示している。試験化合物は、アミロイド原繊維に、^１２５Ｉ−ＢＡＰ１−４０の４０％、１５％、および２３％の親和性で結合しており、これは、^１２５Ｉ−ラベルされたＢＡＰ１５−２１(Amersham Biosciences)(２１％)および^９９ｍＴｃ−ラベルされたＢＡＰ１５−２１(９％)と比較して、望ましい化合物である。ＢＡＰ１５−２１は、アミロイド原繊維の形成時における、ＢＡＰのそれ自身への結合に関与している。

Claims

式(Ｉ)：

[式中、
(iii)Ｒは水素であり；そして
Ｒ^２は−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］
｛ここで、Ｒ^４とＲ^５は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択され、
［Ａ］はキレートであり、そして
［Ｂ］は結合基であり、好ましくは−Ｃ(Ｏ)ＮＲ^６−
(ここで、Ｒ^６は、水素またはＣ_１−６アルキルである)である｝であるか；または
(iv)Ｒは、

の基であり；そして
Ｒ^１とＲ^２の一方が、上記で定義した通りの−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］であり；そして
他方が、−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、ｎは、０または１であり、そして
Ｒ^７とＲ^８は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択される｝であるかの何れかであり；そして
Ｒ^３はハロであり、好ましくはクロロである]
の化合物、またはその塩。
式(Ia)：

[式中、
Ｒ^２は、−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］
｛ここで、Ｒ^４とＲ^５は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択され、
［Ａ］は、キレートであり、そして
［Ｂ］は、結合基であり、好ましくは−Ｃ(Ｏ)ＮＲ^６−
(ここで、Ｒ^６は、水素またはＣ_１−６アルキルである)である｝であり；そして
Ｒ^３はハロであり、好ましくはクロロである]
の請求項１に記載の化合物、またはその塩。
式(Ib)：

Ｒ^１とＲ^２の一方は、請求項１で定義した通りの−ＯＣＲ^４Ｒ^５［Ｂ］−［Ａ］であり；
他方は、請求項１で定義した通りの−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８であり；そして
Ｒ^３はハロであり、好ましくはクロロである]
の請求項１に記載の化合物、またはその塩。
式(Ic)：

[式中、
Ｒ^１およびＲ^２の一方が、−ＯＣＨ_２Ｃ(Ｏ)ＮＨ−［Ａ］
｛ここで、［Ａ］はキレートである｝であり；
他方が、−Ｏ−(ＣＨ_２)_２，３−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、Ｒ^７とＲ^８は、独立に、水素およびＣ_１−６アルキルから選択される｝である]
の請求項３に記載の化合物、またはその塩。
^９９ｍＴｃでラベルされた、請求項１から４の何れか１項に記載の式(Ｉ)、(Ia)、(Ib)、または(Ic)の化合物を含む、放射性ラベルされた化合物。
請求項５に記載の化合物と、１個以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、放射性医薬製剤。
請求項１から４の何れか１項に記載の式(Ｉ)、(Ia)、(Ib)、または(Ic)の化合物を含む放射性医薬を製造するためのキット。
治療方法または診断方法に使用するための請求項１から５の何れか１項に記載の化合物。
アルツハイマー病、家族性アルツハイマー病、タイプ II 糖尿病、ダウン症、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体、リウマチ性関節炎、全身性アミロイド症(原発性および続発性)、および出血性卒中の、in vivo での造影または診断に使用するための、請求項１から５の何れか１項に記載の化合物。
アルツハイマー病、家族性アルツハイマー病、タイプ II 糖尿病、ダウン症、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体、リウマチ性関節炎、全身性アミロイド症(原発性および続発性)、および出血性卒中の in vivo での造影または診断のための医薬の製造における、請求項１から５の何れか１項に記載の化合物の使用。
アルツハイマー病、家族性アルツハイマー病、タイプ II 糖尿病、ダウン症、アポリポタンパク質Ｅ４対立遺伝子のホモ接合体、リウマチ性関節炎、全身性アミロイド症(原発性および続発性)、および出血性卒中の、in vivo での造影方法または診断方法であって、請求項５に記載の化合物の投与を含む方法。
式(II)：

[式中、
Ｒ^９とＲ^１０の一方が−ＯＣＲ^４Ｒ^５Ｃ(Ｏ)ＯＨ
｛ここで、Ｒ^４とＲ^５は、請求項１で定義した通りである｝であり；そして
他方が、−(Ｏ)_ｎ−Ｃ_１−６アルキル−ＮＲ^７Ｒ^８
｛ここで、ｎ、Ｒ^７、およびＲ^８は、請求項１で定義した通りである｝であり；そして
Ｒ^３は、請求項１で定義した通りである]
の化合物、またはその保護された誘導体。