JP2005247728A - 医薬組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】神経変性疾患の予防および／または治療に有効な医薬組成物の提供。
【解決手段】細胞死誘導、特に小胞体ストレスの抑制活性を有する、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する医薬組成物。
【選択図】なし

Description

本発明は、神経変性疾患の予防および／または治療に有用なジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを含有する医薬組成物に関する。

近年の高齢化社会において、神経変性疾患患者数の割合は増加傾向にあり、近い将来、より深刻な社会問題になることが予想される。これら神経変性疾患としては、例えば、アルツハイマー病およびパーキンソン病が知られている。アルツハイマー病等の神経変性疾患は潜伏期間が長く、本人の気付かないうちに症状が進行することもあり、また発症後完治することは現在の医学ではほとんど不可能である。つまり、進行する以前から習慣的に何らかの方法で予防していく道を探ることが、神経変性疾患の場合に特に重要であると考えられる。

アルツハイマー病、パーキンソン病等の神経変性疾患は、小胞体ストレスにより神経細胞死が引き起こされることによって発症するものと考えられており、この小胞体ストレスは、これら一部の神経変性疾患において共通のメカニズムと考えられている。これらと同様のアミロイド沈着神経変性疾患の、狂牛病を含むプリオン病の一種であると考えられているクロイツフェルトヤコブ病も、小胞体ストレス由来細胞死に起因する疾患である可能性が示唆されている。しかしながら、現在までに小胞体ストレス由来細胞死に起因する神経変性疾患に対する有効な予防および／または治療法は確立されていない。

一方、ホスファチジルエタノールアミンは、生体膜の主要成分の１つであるリン脂質であり、ホスファチジルセリン等とともに健康食品として市販されている。また、脂肪酸としてアラキドン酸またはリノレン酸とステアリン酸とを含むホスファチジルエタノールアミンは、抗高血圧作用を有することが報告されている（例えば、特許文献１および非特許文献１参照）。しかしながら、ホスファチジルエタノールアミンが細胞死誘導活性を有するという報告はない。
特開昭４９−１２６６２４号公報 ＰＲＯＣＥＥＤＩＮＧＳ ＯＦ ＴＨＥ ＳＯＣＩＥＴＹ ＦＯＲ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＥＤＩＣＩＮＥ １５５：４６８−４７３，１９７７

本発明の目的は、神経変性疾患の予防および／または治療を可能にし得る小胞体ストレス抑制活性を有する医薬組成物を提供することにある。

本発明者は、上記目的を達成するために鋭意研究を行った結果、ホスファチジルエタノールアミンの中で、下記の構造：

を有するジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン（脂肪酸として２つのリノール酸を含む）が、細胞死誘導抑制活性、特に小胞体ストレス抑制活性を有することを見出し、医薬用途、特に神経変性疾患の予防および／または治療のために使用され得ることを見出して本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、
（１）ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する医薬組成物、
（２）神経変性疾患の予防および／または治療に用いられる、上記（１）記載の医薬組成物、
（３）神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病およびクロイツフェルトヤコブ病からなる群から選択される、上記（２）記載の医薬組成物、
（４）ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する細胞死誘導抑制性組成物、および
（５）ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する小胞体ストレス抑制性組成物等に関する。

ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンは、すぐれた細胞死誘導抑制活性、特に小胞体ストレス抑制活性を有することから、細胞死に起因する種々の疾患、特に神経変性疾患の予防および／または治療に有用である。

本明細書中で用いられる用語「神経変性疾患」とは、神経細胞がアポトーシス（神経細胞死）を起こし、正常な神経伝達機能が脱落した疾患をいう。「神経変性疾患」としては、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルトヤコブ病、ハンチントン舞踏病、ピック病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、筋萎縮性側索硬化症、およびその他の各種痴呆疾患（例えば、ビンスバンガー病、脳血管性痴呆、正常圧水頭症、脳外傷後痴呆、慢性硬膜下血腫、脳腫瘍）が挙げられるが、好ましくは、アルツハイマー病、パーキンソン病およびクロイツフェルトヤコブ病である。

本明細書中で用いられる用語「細胞死誘導」とは、細胞外部からの物理的または化学的刺激により細胞内部に情報が伝わり、細胞死が誘導されることをいう。

本明細書中で用いられる用語「小胞体ストレス」とは、細胞表面または細胞外タンパク質の翻訳の場である粗面小胞体における機能異常により、異常構造を持ったタンパク質などが蓄積することにより起こるストレスをいう。

本明細書中で用いられる用語「細胞死誘導抑制活性」および「小胞体ストレス抑制活性」とは、上述した細胞死誘導および小胞体ストレスをそれぞれ抑制し得る能力をいう。従って、「細胞死誘導抑制活性」または「小胞体ストレス抑制活性」を有する成分は、細胞死誘導または小胞体ストレスにより引き起こされる種々の疾患を予防および／または治療するために使用され得る。

本明細書中で用いられる用語「組成物」とは、特定の物質を有効成分として含有するものであって、例えば、「神経変性疾患の予防および／または治療用医薬組成物」は、有効成分としてジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを含有し、神経変性疾患の予防および／または治療効果を奏する。このような医薬組成物は、有効成分としてのジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを、経口または非経口適用に適した有機または無機の担体または賦形剤との混合物として含有する固体、半固体または液体形態の医薬製剤の形で使用できる。該有効成分は、例えば、散剤、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、坐剤、液剤、乳濁液、懸濁液、エアロゾル剤、スプレー剤、その他の使用に適した形態用の、通常の、無毒性で、医薬上許容される担体と混ぜ合わせることができる。さらに、必要ならば、助剤、安定剤、増粘剤等を使用してもよい。これらの担体または賦形剤は、必要に応じて無菌化処理を施したものを使用してもよく、また製剤化した後に無菌化処理を行うこともできる。有効成分であるジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの治療上有効な用量は、処置すべき個々の患者の年齢、体重、疾患の種類、重篤度等によっても相違し、またそれらに依存して決定されるが、成人に経口投与する場合、通常１回量として２０ｍｇ／ｋｇ体重〜２００ｍｇ／ｋｇ体重であり、この量を１日１回〜３回投与するのが望ましい。

以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は、以下の特定の実施例に限定されるものではない。

（実施例１：ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンのアミロイドβ_１−４０誘導細胞死抑制活性の測定）
ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの細胞死誘導抑制活性を決定するために、生細胞定量法として一般的に用いられているＭＴＴ（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド）アッセイを用いて、細胞の生存率を定量した（Liu Y, Peterson DA, Kimura H, Schubert D. Mechanism of cellular 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction. J. Neurochem. 1997; 69: 581-593参照）。小胞体ストレスによる細胞死を誘導するためにアミロイドβ_１−４０を使用した。アミロイドβ_１−４０は、アルツハイマー病患者の脳に見られる老人斑を構成する主なペプチドであり、神経細胞に細胞死を誘導することが確認されている。
神経系細胞のモデルとして、マウス褐色細胞腫細胞株のＰＣ−１２細胞（理研細胞銀行）を使用した。培養培地として、１０％ウマ血清、５％ウシ胎児血清、ペニシリン（最終濃度：１００ＩＵ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（最終濃度：０．１ｍｇ／ｍｌ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地を使用し、ＣＯ_２濃度は５％であった。
まず、ＰＣ−１２細胞を５μＭアミロイドβ_１−４０の存在下、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン（フナコシ（株）製）の濃度を０μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ、３０μＭ、１００μＭまたは３００μＭと変えて、３７℃で４８時間培養した。その後、細胞を、ＭＴＴ（２５０μｇ／ｍｌ）を含む血清を加えた１００μｌの培養培地で、３７℃で３時間培養した。２０％（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム水溶液および５０％（ｖ／ｖ）ジメチルホルムアミド水溶液を加えて反応を停止させ、反応混合物を室温で２４時間放置した。次いで、マイクロプレートリーダー（ＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ ＰＬＵＳ３８４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，ＵＳＡ）を用いて５７０ｎｍでの吸光度を測定し、ＭＴＴ反応性細胞を定量した。コントロールとしては、ＰＣ−１２細胞をアミロイドβ_１−４０およびジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの非存在下で培養したものを使用し、これから得られた値を１００％として細胞生存率を比較した。結果を図１に示す。アミロイドβ（−）はアミロイドβ非添加時（コントロール）、アミロイドβ（＋）はアミロイドβ添加時の結果を示している。各点は、コントロールの細胞生存率に対するパーセント細胞生存率（±標準偏差）を表す（Ｎ＝６）。統計は対応のないｔ検定を用いて行った。
図１の結果から、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンが、アミロイドβ_１−４０による細胞死誘導を濃度依存的に抑制することが示された。

（実施例２：ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンのタプシガルギン誘導細胞死抑制活性の測定）
小胞体ストレス誘導物質として、小胞体ストレス誘導細胞死の薬剤として一般的に使用されているタプシガルギンを使用した。実施例１と同様に培養したＰＣ−１２細胞を１００ｎＭタプシガルギン（和光純薬工業（株）製）の存在下、３０μＭジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの存在下または非存在下で、３７℃で２４時間培養し、実施例１と同様にＭＭＴアッセイによって細胞の生存率を測定した。なお、コントロールとしては、ＰＣ−１２細胞をタプシガルギンおよびジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの非存在下で培養したものを使用し、これから得られた値を１００％として細胞生存率を比較した。結果を図２に示す。棒グラフの値は、コントロールの細胞生存率に対するパーセント細胞生存率（±標準偏差）を表す（Ｎ＝６）。統計は対応のないｔ検定を用いて行った。
図２の結果から、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンがタプシガルギンによる細胞死誘導を抑制することが示された。

アミロイドβ_１−４０誘導ＰＣ−１２細胞死に対するジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの効果を示す図である。 タプシガルギン誘導ＰＣ−１２細胞死に対するジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンの効果を示す図である。

Claims (5)

1. ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する医薬組成物。
2. 神経変性疾患の予防および／または治療に用いられる、請求項１記載の医薬組成物。
3. 神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病およびクロイツフェルトヤコブ病からなる群から選択される、請求項２記載の医薬組成物。
4. ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する細胞死誘導抑制性組成物。
5. ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミンを有効成分として含有する小胞体ストレス抑制性組成物。
   

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