JP2005208050A - ポリオキシアルキレン誘導体の末端活性化率分析方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】末端に生理活性物質と化学結合する末端活性基を有し、分子量が1000〜100000でポリオキシアルキレン誘導体の末端活性化率を分析する。イオン性官能基を持つラベル化試薬にて末端活性基をラベル化した後、イオン交換カラムを用いた液体クロマトグラフィーで分析を行い、RI検出器で得られるクロマトグラムにおける面積百分率より、末端活性化率を求める。
【選択図】 図1
Description
修飾剤としての用途では、両親媒性高分子であるポリオキシアルキレン誘導体を生理活性物質に化学修飾し、分子量を増大させ、溶解性を向上させることにより、免疫原性や抗原性、毒性の低減、薬剤の安定性増加、体内滞留時間の延長などの効果を得ることが出来る。
しかし、特に低分子薬剤やペプチドを修飾する場合には、ポリオキシアルキレン誘導体と結合させる反応性官能基が少ないため、溶解性の向上などの効果が得られにくいという問題点がある。また、数多くのポリオキシアルキレン誘導体で修飾すると、薬剤やペプチドの活性点を封鎖してしまい、それ自身が持つ機能、薬効を十分に発現できなくなるという問題点がある。そこで近年は、生理活性物質の機能や薬効を低下させずに、最小限の修飾数でも効率的にその効果を得るため、より高分子量のポリオキシアルキレン誘導体が用いられるようになっている。
生分解性ハイドロゲルで用いられるポリオキシアルキレン誘導体の構造は通常、分岐状で各末端に活性基を有しており、他のポリオキシアルキレン誘導体または生体適合性ポリマーの末端官能基と互いに架橋結合することにより網目状構造をとる。この架橋結合が分解することにより、生理活性物質が放出される。分解速度はポリオキシアルキレン誘導体の末端活性基数に依存し、それにより生理活性物質の放出をコントロールすることができる。
生分解性ハイドロゲルなどの用途では、分解速度はポリオキシアルキレン誘導体の末端活性基数によりコントロールすることができる。生理活性物質の放出を正確に制御するために、末端活性化率を正確に求めることが必要とされる。
また、医薬品の生理活性や安全性は、製剤中に含まれる不純物にも依存することから、目的化合物と異なる分子量や異なる活性基数を持つ不純物などの含有量は低いものが要求され、さらにそれらの不純物と分離して目的のポリオキシアルキレン誘導体のみを特異的に定量できることが要求される。
このように、末端活性ポリオキシアルキレン誘導体を用いた製剤を設計する際に、末端活性化率は極めて重要な分析項目の一つであり、正確かつ高い精度、さらに不純物との特異性を有することが重要といえる。
近年は、簡便かつ短時間で分析が可能である1H−NMR法が最も数多くのポリオキシアルキレン末端活性化率の分析手段として用いられている。たとえばポリオキシアルキレン末端マレイミド体の末端活性化率は、マレイミド基の水素ピークの理論積分値に対する実際の積分値から算出している(特許文献1)。
Shmuel Zalipsky, Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 740 F.M.Veronese, et al, Applied Biochemistry and Biotechnology, 11, 141(1985) J. Milton Harris, et al, Polymer Chemistry Edition, 22, 341(1984)
(1) ポリオキシアルキレン誘導体が高分子量であっても正確かつ高精度で測定できる。
(2) ポリオキシアルキレン誘導体中に低分子不純物が存在する場合には、この低分子量不純物による定量の妨害を受けにくい。
(3) ポリオキシアルキレン誘導体中に、目的分子量と異なる分子量の末端活性化体が不純物として含まれる場合、目的分子量の誘導体および不純物をそれぞれを分離定量することができる。
(4) ポリオキシアルキレン誘導体が多官能末端活性基を持つ場合(複数の末端活性化率を有する場合)には、活性化された官能基数ごとの含有率をそれぞれ測定することができる。
本発明の分析対象となるポリオキシアルキレン誘導体のポリオキシアルキレン骨格は、直鎖状でも分岐状でも良い。本発明の分析方法では、従来の1H−NMR法や吸光度法とは違い、特に複数の末端活性基を有するポリオキシアルキレン誘導体において、活性化された官能基数ごとの含有率をそれぞれ求めることができることから、分岐状で2以上の末端活性基を有することが好ましい。末端活性化率数の上限は特にないが、例えば、最大14個の末端活性化率を有する場合でも分析の可能性がある。典型的には、末端活性基数が2、3あるいは4個である。
イオン性官能基はカルボキシル基またはアミノ基が挙げられ、それぞれのラベル化試薬の構造は式(5)または式(6)で表すことができる。なお、式(5)、式(6)においてイオン性官能基は2つ以上有していても良い。
X−Y−COOH (5)
X−Y−NH2 (6)
緩衝液の種類およびそのpHは任意であり、ポリオキシアルキレン誘導体とラベル化試薬の反応性に応じて決定できる。例えば、末端アルデヒド基誘導体で還元的アルキル化反応を用いる場合、使用するラベル化試薬のアミノ基のpKa(解離定数)より低いpH条件下で反応することが好ましい。
緩衝液の塩濃度は任意であるが、通常10〜500mMで用いることができ、好ましくは50〜300mMが望ましい。10mMより低い塩濃度では、ラベル化試薬の使用が過剰の場合、緩衝能が働かない可能性がある。
反応温度、反応時間は任意であり、ラベル化反応に適した条件を決定することができる。
y=a/x (p)
通常逆相カラムや順相カラムなどを用いて分析を行う場合、2種類の溶離液組成を変化させるグラジエント溶出でなければ、分離が困難である。しかし本分析方法では、例えば上記のように緩衝液濃度を設定することにより、あらゆる分子量、構造のポリオキシアルキレン誘導体でも、1種類の溶離液で分離するアイソクラティック溶出が可能となった。
(実施例1)
CH3O−(CH2CH2O)225−CH2CH2CHO (6)
上記ポリオキシアルキレン誘導体(6)(分子量10000)20mgを0.1M酢酸緩衝液(pH4.0)2mLに溶解した。次にp−アミノ安息香酸のメタノール溶液(40mg/mL)を68mL加えて溶解し、さらにシアノ化水素ホウ素ナトリウム水溶液(10mg/mL)を128mL加えて溶解した。室温で2時間撹拌反応させた。HPLC測定で用いる溶離液で平衡化させたゲルろ過カラム(PD−10(アマシャムバイオサイエンス))に反応溶液全量を添加し、さらに溶離液を加え、最初に溶出する高分子量体分画をHPLC測定用バイアルに採取した。HPLC測定を以下の条件で行った。
HPLC装置 Alliance6890((株)Waters)
分離カラム ES−502N(Asahipak)
溶離液 1.5mMギ酸アンモニウム緩衝液(pH8.0)
カラム温度 30℃
流速 1.0mL/分
サンプル濃度 10mg/mL
注入量 20μL
検出器 示差屈折検出器(RI)((株)Waters)
UV(286nm) ((株)Waters)
分析対象となるサンプルがより高分子量の場合に、本分析方法の分析結果および繰り返し再現性への影響を調べた。
CH3O−(CH2CH2O)680−CH2CH2CHO (7)
実施例1で用いたポリオキシアルキレン誘導体(6)(分子量10000)の末端活性化率を1H−NMR分析により求めた。
(1H−NMR測定条件)
機種 JNM−ECP400
(日本電子データム(株)製)(400MHz)
サンプル濃度 20mg/mL
重溶媒 クロロホルム
内部標準 TMS
積算回数 64回
実施例2で用いたポリオキシアルキレン誘導体(7)(分子量30000)の末端活性化率を比較例1と同様の操作により測定した。さらに同様の操作での繰り返し再現精度の結果を表1に示す。
このように、本分析法は1H−NMR法と異なり、分析サンプルの分子量に関わらず測定誤差が極めて小さく、さらに定量性の高い方法といえる。
上記ポリオキシアルキレン誘導体(7−1、7−2)(分子量20000)それぞれ20mgをマレイミドプロピオン酸水溶液(2mg/mL)2mLに溶解した。これを室温で3時間、遮光して撹拌した後、測定試料とした。このHPLC測定を実施例1と同様の条件で行った。ただし、溶離液は1mMギ酸アンモニウム緩衝液(pH8.0)を用いた。
実施例3で用いたポリオキシアルキレン誘導体(7−1、7−2)の末端活性化率を以下の吸光度法により求めた。
ポリオキシアルキレン誘導体(7−1、7−2)を0.1Mリン酸緩衝液(pH8.0)で溶解して、それぞれ正確に0.1mg/mLの濃度に調製した(試験サンプル溶液)。
次にシステイン標準液として、L−システインを0.1Mリン酸緩衝液(pH8.0)で溶解して、正確に0.15mg/mLの濃度に調製した(システイン標準原液)。これを0.1Mリン酸緩衝液(pH8.0)でそれぞれ100倍、50倍、25倍、16.7倍、12.5倍に希釈した(システイン標準溶液希釈系列)。また、0.1Mリン酸緩衝液(pH8.0)をブランクとした。
ブランク、試験サンプル溶液、システイン標準溶液希釈系列それぞれ14.75mLにDTNB溶液0.25mLに加えて10分間静置して誘導体化を行った。誘導体化後の各サンプルを分光光度計(島津(株)製、UV−2500PC)を用いて410nmでの吸光度を測定した。リファレンスには0.1Mリン酸緩衝液(pH8.0)を用いた。
システイン標準溶液希釈系列の濃度に対する各吸光度をプロットして検量線を作成し、この検量線から試験サンプルのシステイン濃度を算出した。これを試験サンプルの分子量で換算することにより、末端活性化率を求めた。その結果を表2に示す。
このように、吸光度法ではサンプル中に残存する低分子のメルカプト体が存在する場合、定量は妨害され、正確に末端活性化率が測定できない。
CH3O−(CH2CH2O)225−COC6H4NO2 (9)
上記ポリオキシアルキレン誘導体(9)(分子量10000)の分子量分布測定を以下のGPC測定条件で行った。
分離カラム PLgel MIXED−D (ポリマー ラボラトリー) 2本
溶離液 DMF
カラム温度 65℃
流速 0.7mL/分
検出器 RI
サンプル濃度 1mg/mL
注入量 100μL
上記ポリオキシアルキレン誘導体(9)(分子量10000)50mgにグリシン10mgを加え、0.1Mリン酸緩衝液(pH8.5)1mLを加え溶解した。これを室温で20時間撹拌した。HPLC測定で用いる溶離液で平衡化させたゲルろ過カラムに、反応溶液を溶離液で5倍に希釈したものを2mL添加した。さらに溶離液を加え、最初に溶出する高分子量体分画をHPLC測定用バイアルに採取した。HPLC測定は実施例1と同様の条件で行った。ただし、溶離液は1.5mMギ酸アンモニウム緩衝液(pH8.0)を用いた。
CH3O−(CH2CH2O)454−CH2CH2CH2NHCO−MAL (10)
(MAL:マレイミド基)
分離カラム TSK−gel SP−5PW(東ソー)
溶離液 1.0mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.5)
カラム温度 40℃
流速 0.5mL/分
検出器 RI
Claims (10)
- 末端に生理活性物質と化学結合する末端活性基を有し、分子量が1000〜100000であるポリオキシアルキレン誘導体の末端活性化率分析方法であって、イオン性官能基を持つラベル化試薬にて前記末端活性基をラベル化した後、イオン交換カラムを用いた液体クロマトグラフィーで分析を行い、RI検出器で得られるクロマトグラムにおける面積百分率より、末端活性化率を求めることを特徴とする、ポリオキシアルキレン誘導体の末端活性化率分析方法。
- 前記ポリオキシアルキレン誘導体がポリオキシエチレン誘導体である、請求項1に記載の分析方法。
- 前記ポリオキシアルキレン誘導体の分子量が5000〜100000である、請求項1または2に記載の分析方法。
- 前記ポリオキシアルキレン誘導体の分子量が10000〜100000である、請求項3記載の分析方法。
- 前記ポリオキシアルキレン誘導体が複数の前記末端活性基を有する、請求項1〜4のいずれか一つの請求項に記載の分析方法。
- 前記ラベル化試薬の前記イオン性官能基がカルボキシル基であり、前記イオン交換カラムが陰イオン交換カラムである、請求項1〜5のいずれか一つの請求項に記載の分析方法。
- 前記ラベル化試薬の前記イオン性官能基がアミノ基であり、前記イオン交換カラムが陽イオン交換カラムである、請求項1〜5のいずれか一つの請求項に記載の分析方法。
- 前記ポリオキシアルキレン誘導体の前記末端活性基が、マレイミド基およびアルデヒド基からなる群より選ばれた一種以上の官能基である、請求項1〜5のいずれか一つの請求項に記載の分析方法。
- 前記イオン交換カラムによる液体クロマトグラフィーでの分析における溶離液の緩衝液濃度(y)が、下記式(p)で表されることを特徴とする、請求項1〜8のいずれか一つの請求項に記載の分析方法。
y=a/x (p)
(式中、yは緩衝液濃度(mM)、xはポリオキシアルキレン誘導体の一活性基あたりの分子量であり、aは3000〜60000を示す。) - 前記式(p)において、aは5000〜15000であることを特徴とする、請求項9に記載の分析方法。
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WO2023286617A1 (ja) * | 2021-07-13 | 2023-01-19 | 日油株式会社 | ポリオキシエチレン誘導体に含まれる反応性低分子化合物の分析方法 |
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01269052A (ja) * | 1988-04-20 | 1989-10-26 | Sumitomo Metal Ind Ltd | ポリオキシアルキレン化合物の分離方法 |
US20010044526A1 (en) * | 2000-02-22 | 2001-11-22 | Shearwater Corporation | N-maleimidyl polymer derivatives |
JP2002048777A (ja) * | 2000-08-07 | 2002-02-15 | Chisso Corp | オルガノポリシロキサンの測定方法 |
JP2004233199A (ja) * | 2003-01-30 | 2004-08-19 | Nof Corp | 官能基導入反応生成物の反応率分析方法 |
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01269052A (ja) * | 1988-04-20 | 1989-10-26 | Sumitomo Metal Ind Ltd | ポリオキシアルキレン化合物の分離方法 |
US20010044526A1 (en) * | 2000-02-22 | 2001-11-22 | Shearwater Corporation | N-maleimidyl polymer derivatives |
JP2002048777A (ja) * | 2000-08-07 | 2002-02-15 | Chisso Corp | オルガノポリシロキサンの測定方法 |
JP2004233199A (ja) * | 2003-01-30 | 2004-08-19 | Nof Corp | 官能基導入反応生成物の反応率分析方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023286617A1 (ja) * | 2021-07-13 | 2023-01-19 | 日油株式会社 | ポリオキシエチレン誘導体に含まれる反応性低分子化合物の分析方法 |
WO2023171608A1 (ja) * | 2022-03-09 | 2023-09-14 | 日油株式会社 | ポリオキシエチレン誘導体の製造方法、ポリオキシエチレン化合物の定量方法及び分析用ラベル化試薬 |
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