JP2004147535A - ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 - Google Patents
ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004147535A JP2004147535A JP2002315091A JP2002315091A JP2004147535A JP 2004147535 A JP2004147535 A JP 2004147535A JP 2002315091 A JP2002315091 A JP 2002315091A JP 2002315091 A JP2002315091 A JP 2002315091A JP 2004147535 A JP2004147535 A JP 2004147535A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- guillain
- human animal
- barre syndrome
- syndrome
- gq1b
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 95
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 70
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 24
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 18
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 15
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 claims description 14
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims description 13
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 11
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 6
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 5
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 4
- 208000010886 Peripheral nerve injury Diseases 0.000 claims description 2
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 abstract description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract description 6
- QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N ganglioside GM1 Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 QPJBWNIQKHGLAU-IQZHVAEDSA-N 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 33
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 4
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 2
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003164 Diplopia Diseases 0.000 description 2
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000004929 Facial Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 206010040026 Sensory disturbance Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000036826 VIIth nerve paralysis Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 2
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 2
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 2
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 2
- 208000018904 loss of tendon reflex Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 208000022084 motor paralysis Diseases 0.000 description 2
- 206010030875 ophthalmoplegia Diseases 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- WFZFMHDDZRBTFH-CZEFNJPISA-N 2-[(e)-2-(5-carbamimidoyl-1-benzofuran-2-yl)ethenyl]-1-benzofuran-5-carboximidamide;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C1=CC=C2OC(/C=C/C=3OC4=CC=C(C=C4C=3)C(=N)N)=CC2=C1 WFZFMHDDZRBTFH-CZEFNJPISA-N 0.000 description 1
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 1
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 206010049119 Emotional distress Diseases 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 108010021470 Fc gamma receptor IIC Proteins 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102100029206 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000002532 anti-gammaglobulin Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- WPIHMWBQRSAMDE-YCZTVTEBSA-N beta-D-galactosyl-(1->4)-beta-D-galactosyl-N-(pentacosanoyl)sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC WPIHMWBQRSAMDE-YCZTVTEBSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000027905 limb weakness Diseases 0.000 description 1
- 231100000861 limb weakness Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001769 paralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0276—Knock-out vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
- A01K2267/0318—Animal model for neurodegenerative disease, e.g. non- Alzheimer's
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物にガングリオシドＧＱ１ｂを免疫することにより得ることのできるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物や、該モデル非ヒト動物を用いたギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法を提供すること。
【解決手段】ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスを用い、ガングリオシドＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ及びＧＱ１ｂを３週間毎に計４回フロイント・アジュバントとともに免疫し、ギラン・バレー症候群発症モデルマウスを作製する。
【解決手段】ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスを用い、ガングリオシドＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ及びＧＱ１ｂを３週間毎に計４回フロイント・アジュバントとともに免疫し、ギラン・バレー症候群発症モデルマウスを作製する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）を呈するモデル非ヒト動物に関する。特に、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物（ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物）にガングリオシドＧＱ１ｂを免疫することにより得ることのできるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物、及び、該モデル非ヒト動物を用いた、ギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＧＢＳ）は、感冒様症状を呈した後、１〜２週間後に発症し、急速に進行する弛緩性の運動麻痺（四肢の筋力低下）、深部腱反射消失、嚥下障害、構音傷害、深部感覚障害、自律神経症状（不整脈、血圧の変動）を特徴とする、末梢神経における炎症性脱髄疾患である。ギラン・バレー症候群は年間人口１０万人に対し２人の割合で発症し、日本全国で毎年約２０００人〜２５００人が新たに罹患しているといわれている。しかし、これを完治し得る治療薬は未だ開発されていないばかりか、発症原因やメカニズムも明確には明らかにされておらず、いわゆる難病の類に分類され、特定疾患に指定されている。近年になって、本症候群に対する治療法として、血漿交換療法（プラズマフェレーシス）や抗ガンマグロブリン大量静注法が有効であることが報告され、また、本症候群の病因として、患者血清中に末梢神経に発現しているガングリオシドに対する自己抗体（抗糖鎖抗体）が検出され、病勢と関連することから、その発症機序にはガングリオシドと自己免疫反応が密接に関与していることが指摘されている。ガングリオシドはその分子構造からＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂ、ＧＴ１ａ、ＧＱ１ｂ等に分けられ、該疾患において、患者血清中にはそれぞれに対する自己抗体が検出されている。特に、該ギラン・バレー症候群においては、血清中に抗ガングリオシド抗体として抗ＧＭ１抗体及び抗ＧＤ１ａ抗体が出現することが知られている。また、抗ＧＱ１ｂ抗体は、眼筋麻痺を伴うギラン・バレー症候群の急性期血清中や、フィッシャー症候群においてほぼ全例に特異的に上昇が認められている。
【０００３】
最近、ギラン・バレー症候群の原因として食中毒の原因菌の一つであるカンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）との関連が指摘されている。これは、カンピロバクターの糖鎖構造とガングリオシドとの間に分子相同性があり、これが自己反応性のＴ細胞やＢ細胞の出現につながると考えられている。しかし、現在まで自己抗体を含め、自己反応性Ｔ細胞やＢ細胞が実際の生体の病態につながるかどうかは証明されていない。動物実験レベルでは、ウサギにＧＤ１ｂを免疫し、末梢神経障害を誘導した報告があるが、これまでマウスに各種ガングリオシドを免疫しても病態を発症することはなく、適切なギラン・バレー症候群の疾患モデルマウスは存在していなかった。また、上記のようにウサギに該疾患を誘導したものや、ラットに誘導したものは発症率が低く、また症状も軽いため、モデルとして不適切であった。更に、適切なモデル動物が存在しないため、治療薬や治療方法は開発されなかった。
【０００４】
同様に、ギラン・バレー症候群の亜型として、フィッシャー症候群（Ｆｉｓｈｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）が知られている。該フィッシャー症候群はギラン・バレー症候群の約５％が該当するといわれており、上気道感染などを先行感染として発症するもので、外眼筋麻痺、複視、運動失調、腱反射消失、顔面神経麻痺を生ずる。上記ギラン・バレー症候群と同様の症状を呈するが、ヒトにおいて四肢の麻痺は生じない。また、フィッシャー症候群については、ガングリオシドＧＱ１ｂに対する血中ＩｇＧ抗体価の上昇が報告されているが、上記ギラン・バレー症候群と同様、その発症機序は解明されておらず、また、治療薬も開発されていない。
【０００５】
これらの病勢は罹病後１ヶ月位をピークに、数ヶ月から１年程で徐々に回復し、予後は比較的良好であるが、後遺症を残すことも少なくない。また、１年近くもの間、患者は精神的苦痛と入院・通院を余儀なくされるため、かかる疾患の治療薬、治療方法の開発は患者とその家族、医師達をはじめとする医療界から熱望されている。
【０００６】
他方、免疫系などの細胞の表面上には、ＩｇのＦｃ部分を認識して結合するレセプター（以下「ＦｃＲ」という）が存在し、その中でも体液中のＩｇＧのγ鎖に特異的に結合する受容体蛋白質であるＦｃγレセプター（以下「ＦｃγＲ」という）は遺伝子構造の類似性に基づいてタイプＩ（ＣＤ６４抗原）、タイプＩＩ（ＣＤ３２抗原）、タイプＩＩＩ（ＣＤ１６抗原）の３種に大きく分類されている。これらのうち、ＦｃγＲＩＩは、他のＦｃＲとは異なりモノマーのＩｇＧに対して低親和性であり、免疫複合体となった多価ＩｇＧと結合し、単球、マクロファージ、多形核白血球（ＰＭＮ）、マスト細胞、血小板、いくつかのＴ細胞リンパ球及びいくつかのＢ細胞リンパ球を含む造血幹細胞に広く発現する。また、ＦｃγＲＩＩには遺伝子配列が異なるＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ及びＦｃγＲＩＩＣの３種類の受容体が存在しており、いずれの染色体も１ｑ２３に位置していることが知られている。
【０００７】
上記ＦｃγＲＩＩＢは、他のＦｃＲとは異なり、γ鎖と会合することなく、細胞内領域に抑制性シグナルを伝達するアミノ酸配列（Ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｍｏｔｉｆ；ＩＴＩＭ）を有している（例えば、非特許文献１参照。）。このようなＦｃγＲＩＩＢの生理的機能を解明するために、本発明者らはＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスを既に作出し（例えば、非特許文献２参照。）、ＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスをタイプＩＩコラーゲンで免疫することによる関節炎モデルマウス（例えば、非特許文献３参照。）や、自己免疫疾患モデル動物を作製した（例えば、特許文献１参照。）。
【０００８】
【特許文献１】
特開平０８−２８９６９９号公報
【非特許文献１】
Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ． １２５， ４９−７６， １９９２、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６， １８０８−１８１２， １９９２
【非特許文献２】
Ｎａｔｕｒｅ ３７９， ３４６−３４９， １９９６
【非特許文献３】
Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８９， １８７−１９４， １９９９
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
これまで炎症性脱髄疾患であるギラン・バレー症候群の発症メカニズムを検討する際に適切なモデル動物がいなかった。本発明の課題は、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）を呈するモデル非ヒト動物を提供することにある。より詳しくは、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物にガングリオシドＧＱ１ｂを免疫することにより得ることのできるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物や、該モデル非ヒト動物を用いたギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスを用い、ガングリオシドＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ及びＧＱ１ｂを３週間毎に計４回フロイント・アジュバントとともに免疫し、ギラン・バレー症候群モデルマウスの作製を試みた。その結果、これらガングリオシド抗原を免疫したもののうち、ＧＱ１ｂを免疫したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスにおいて尾及び後肢が麻痺する末梢神経障害を認めた。このマウスではＧＱ１ｂに対する抗体価が上昇することから、通常、ヒトで認められるＧＱ１ｂに対する自己抗体が認められるギラン・バレー症候群の亜型であるフィッシャー症候群（Ｆｉｓｈｅｒ ｓｙｎｄｏｒｏｍｅ）に矛盾しない症状と考えられ、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）の新規疾患モデルマウスが得られることを見い出し、本発明を完成するに至った。また、本発明に基づき、該症候群に対する有効な治療薬のスクリーニング方法を構築した。
【００１１】
すなわち本発明は、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物をガングリオシドＧＱ１ｂで免疫することにより得られ、ギラン・バレー症候群を呈することを特徴とするギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項１）や、ギラン・バレー症候群がフィッシャー症候群であることを特徴とする請求項１記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項２）や、尾及び後肢が麻痺する末梢神経傷害であることを特徴とする請求項１又は２記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項３）や、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物が、げっ歯類動物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項４）や、げっ歯類動物が、マウスであることを特徴とする請求項５記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項５）に関する。
【００１２】
また本発明は、請求項１〜５のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に、被検物質を投与し、該発症モデル非ヒト動物におけるギラン・バレー症候群の症状の程度を観察・評価することを特徴とするギラン・バレー症候群の治療薬のスクリーニング方法（請求項６）や、請求項１〜５のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に、被検物質を投与し、抗ＧＱ１ｂ抗体の出現の程度を測定・評価することを特徴とするギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群治療薬のスクリーニング方法（請求項７）や、請求項６又は７記載のギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法によって得られる治療薬（請求項８）に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物としては、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物をガングリオシドＧＱ１ｂで免疫することにより得られ、ギラン・バレー症候群を呈する非ヒト動物であれば特に制限されるものではない。ここでギラン・バレー症候群とは、非遺伝性の疾患であって、感冒様症状を呈した後、１〜２週間後に引き起こされ、急速に進行する弛緩性の運動麻痺（四肢の筋力低下）、深部腱反射消失、嚥下障害、構音傷害、深部感覚障害、自律神経症状（不整脈、血圧の変動）を特徴とする疾患やそれらに類似した疾患である。かかるギラン・バレー症候群を発症した場合、ガングリオシドＧＱ１ｂに対する血清中の抗体価が上昇し、より具体的には、外眼筋麻痺、複視、運動失調、腱反射消失、顔面神経麻痺、尾や後肢等の末梢神経障害等を生じる。また、上記ギラン・バレー症候群と同様の症状を呈するが、ヒトにおいて四肢の麻痺を生じないフィッシャー症候群もギラン・バレー症候群の一つである。
【００１４】
本発明のＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物としては、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したモデル動物であればどのようなものでもよいが、マウスやラット等のげっ歯類、特に、該ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損したマウスを好適に挙げることができ、該ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損したマウスは、本発明者らの前掲の文献（非特許文献２）に記載する方法等によって作製することができる。具体的には、マウス遺伝子ライブラリーからＰＣＲ等の方法により得られた遺伝子断片を用い、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子をスクリーニングし、スクリーニングされたＦｃγＲＩＩＢ遺伝子を、ウイルスベクター等を用いてサブクローンし、ＤＮＡシーケンシングすることにより特定する。このクローンのＳ２エキソン及びＥＣ１エキソンを含むフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット等に置換することによって、ターゲットベクターを調製する。この線状化されたベクターをエレクトロポレーション（電気穿孔）法等によってＥＳ細胞に導入し、相同的組換えを行い、その相同的組換え体の中から、Ｇ４１８等に抵抗性を示すＥＳ細胞を選択し、その細胞のクローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェクションし、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメラマウスを作製する。このキメラマウスを野生型のマウスとインタークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得ることができ、また、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせることによって、ＦｃγＲＩＩＢノックアウトマウスを得ることができる。
【００１５】
本発明におけるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物の作製方法としては、ギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物を得ることのできる方法であればどのような方法でも良く、特に限定されるものではないが、前記のＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物に、抗原としてガングリオシドＧＱ１ｂを免疫する方法を好適に例示することができる。また、免疫する方法としては、特に限定されるものではないが、初回免疫時にＧＱ１ｂ抗原をコンプリート・フロイント・アジュバントとともに免疫し、以後３週間毎にインコンプリート・フロイント・アジュバントとともに免疫する方法を好適に例示することができる。また、合計３〜６回免疫するのが望ましいが、特に合計４回免疫するのが好ましい。
【００１６】
本発明において用いられるガングリオシドＧＱ１ｂは、ラクトシルセラミド（Ｃｅｒ）からｂ経路合成系で産生されるスフィンゴ糖脂質であって、シアル酸（Ｓｉａ）を４つ有し、Ｇａｌβ１→３（３←２αＳｉａ３←２αＳｉａ）ＧａｌＮＡｃβ１→４Ｇａｌβ１→４（３←２αＳｉａ３←２αＳｉａ）Ｇｌｃβ１→１’Ｃｅｒの構造を有するスフィンゴ糖脂質をいう。これらのうち、該ＧＱ１ｂの特性は、特有の糖鎖である３←２αＳｉａの結合形式によって特徴づけられている。また、各ガングリオシドには特異的な抗体が得られている。各ガングリオシドを認識する抗体は、上記の糖鎖３←２αＳｉａの結合形式の相違を認識していることから、該抗ＧＱ１ｂ（モノクローナル）抗体も、４つの３←２αＳｉａの結合形式を特異的に認識していると考えられる。
【００１７】
本発明のギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法としては、本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物を用い、該治療薬の薬理的効果を確認し、選別することのできるスクリーニング方法であれば特に限定されるものではないが、例えば、本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に被検物質を経口的又は非経口的に投与し、病状をスコアー化して経時的に症状の程度（軽減の度合い）を観察・評価する方法や、本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に被検物質を投与し、該モデル非ヒト動物の血中に出現している抗ＧＱ１ｂ抗体の出現程度を測定・評価する方法を具体的に挙げることができる。上記血中に出現している抗ＧＱ１ｂ抗体の出現程度を測定する方法としては、２次抗体を用いたＥＬＩＳＡ分析を具体的に例示することができる。
【００１８】
本発明の上記スクリーニング方法により得られるギラン・バレー症候群治療薬は、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）を発症した患者の治療に用いることができる。本発明のギラン・バレー症候群治療薬は、経口的あるいは非経口的に投与することができる。経口投与剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができる。また、非経口投与剤として注射剤、経皮製剤あるいは座薬等とすることができる。これらの製剤は活性成分に薬理学的、製剤学的に認容される助剤を加えることにより常法に従って製造することができる。また、投与量は、対象疾患の種類、患者の年齢、性別、体重、症状、投与形態に応じて適宜決定することができる。
【００１９】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
参考例（ＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスの作製）
１２９／Ｓｖ／Ｊ（Ｈ−２ｂ）マウスのゲノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子のゲノムＤＮＡのクローンを単離した。ターゲットベクターは、このクローンのＳ２及びＥＣ１の２つの独立したエキソンを含む２．６５ＫｂのフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット（東洋紡社製）に、置換することによって作製した。この線状化したベクターをエレクトロポレーションによってＥＳ細胞（Ｊ１）に導入し、相同的組換えを行った。
【００２０】
上記の相同的組換えを起こしたＥＳ細胞からＥＳクローンを単離し、Ｇ４１８及びＧＡＮＣ（ガンシクロビア）に対してネオマイシン耐性ＥＳクローンをスクリーニングし、サザンブロット法によって相同的組換え体を同定した。その同定された相同的組換え体からゲノムＤＮＡを単離して、ＨｉｎｄＩＩＩでダイジェストし、ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセットを含むターゲティングされた対立遺伝子を含んでいることを確認した。かかる確認されたＥＳクローンを胚盤胞中にマイクロインジェクションし、キメラマウスを作製し、作製されたマウスを野生型のＣ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）マウスとインタークロスさせることによってヘテロ接合体マウスを得て、また、ホモ接合体マウスを得るために、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせて、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損したマウス及びその野生型マウスを作製した。
【００２１】
実施例１（ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスへの免疫）
ガングリオシドとして、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂ及びＧＱ１ｂ（いずれもＡＬＥＸＩＳ社製）を用いた。各ガングリオシド１ｍｇ／ｍｌを含むガングリオシド溶液１ｍｌと、流動パラフィン、界面活性剤及び結核死菌からなる完全フロイントアジュバンド（ＣＦＡ）３ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合し、また各ガングリオシド１ｍｇ／ｍｌを含むガングリオシド溶液１ｍｌと、流動パラフィンと界面活性剤とからなる不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）３ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合して、２種類のエマルジョンを作製した。
【００２２】
上記参考例記載の方法により作製したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウス（８週齢：雌雄差なし）（ｎ＝５）をエーテルで麻酔し尾背部を剃毛し、各ガングリオシドとＣＦＡとをそれぞれ５０μｇと１００μｇとを含むエマルジョン１５０μｌをマウスの皮内に注射して一次免疫を行い、その一次免疫後、３週間毎に３回、各ガングリオシドとＩＦＡとをそれぞれ５０μｇと１００μｇとを含むエマルジョン１５０μｌを皮内に注射し、ギラン・バレー症候群発症マウスの作製を試みた。また、対照としては野生型マウス（ｎ＝５）を用いた。その結果、ＧＱ１ｂを免疫したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスにおいて、後肢と尾部に麻痺が生じる末梢神経障害を認めた。このマウスは後肢が開き、歩行することができず、また尾は垂れ下がっていた（図１；ＲＩＩＢ−／−）。一方、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂを免疫したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスやコントロールである野生型マウス（図１；ＷＴ）においては、麻痺症状などが認められなかった。
【００２３】
実施例２（麻痺症状スコアー）
ＧＱ１ｂ免疫を行った野生型マウス及びＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスについて、その症状によって点数化し、０点：無症状、１点：尾の麻痺、２点：尾及び両側後肢の麻痺、３点：尾及び四肢麻痺、４点：死亡の５段階に分けて評価した。結果を図２に示す。なお、図２中、野生型マウスの点数は黒塗りの四角で表し、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスの点数は白抜きの四角で表した。その結果、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスにＧＱ１ｂ免疫を行ったマウスは、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）の発症を認めた（図２）。
【００２４】
実施例３（ＧＱ１ｂに対する血清抗体価）
また、一次免疫後、３週、６週、９週及び１２週後に採血を行い、ＧＱ１ｂ免疫を行った野生型マウス及びＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスの眼窩より採血を行ない、文献（Ｃｅｌｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４５， ２９９−３１０， １９９２）記載のＥＬＩＳＡ分析に改良を加えた次の方法により、ＧＱ１ｂに対する抗体価を検査した。５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム溶液（ｐＨ＝８．５）１ｍｌに５μｇのＧＱ１ｂを溶解させ、この溶解液を１ウェル当たり５０μｌの割合で用い、正に帯電した９６ウェルマイクロプレート（ＮＵＮＣ社製）を４℃にて一晩コーティングした後、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０と０．１％のＢＳＡを含むＰＢＳで１回洗浄し、１ウェル当たり２５０μｌの０．５％のＢＳＡを含むＰＢＳで４℃にて一晩ブロックした。次に上記血液から得られた血清を５００に希釈し、その希釈した血清を１ウェル当たり５０μｌの割合で上記９６ウェルマイクロプレートに加え、４℃にて一晩反応させた。反応後、９６ウェルマイクロプレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで３回洗浄し、ペルオキシダーゼ（シグマ社製）が結合したヤギ抗マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ又はＩｇＧ２ｂを５００倍に希釈したものを５０μｌ加えて、４℃にて２時間インキュベートした。インキュベート後、再び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで３回洗浄し、５０μｌのＴｕｒｅＢｌｕｅ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ社製）と共に３０分間室温で酵素反応を行った。その後、ミクロプレートリーダー（Ｂｉｏｌｕｍｉｎ ９６０；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ社製）でＯＤ４５０を測定した。結果を図３に示す。なお、図３中、野生型マウスの吸光度は黒塗りの四角で表し、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスの吸光度は白抜きの四角で表した。これらの結果から、ＦｃγＲＩＩＢノックアウトマウス（ＩＩＢ−ＫＯ）は、野生型マウス（Ｗｉｌｄ）に比べて、ＧＱ１ｂに対する抗体価（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ）の上昇が認められ、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）の所見と矛盾していないことから、グッドパスチャー症候群発症モデルマウスが作製できたことがわかった。
【００２５】
【発明の効果】
本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物は、尾及び後肢に麻痺症状を呈し、ガングリオシドに対する抗体価が高いことから、ヒトにおけるギラン・バレー症候群及び該症候群の亜型であるフィッシャー症候群に合致する症状を発症しているとみなすことができ、これら症状の治療方法や治療薬の開発に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物の尾及び後肢が麻痺している様子（上図；ＲＩＩＢ−／−）及びコントロールとしての野生型マウス（下図；ＷＴ）を表す図である。
【図２】本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物及びコントロールとしての野生型マウスの麻痺症状スコアーを示す図である。
【図３】本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物及びコントロールとしての野生型マウスの血清抗ＧＱ１ｂ抗体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂの抗体価を示す図である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）を呈するモデル非ヒト動物に関する。特に、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物（ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物）にガングリオシドＧＱ１ｂを免疫することにより得ることのできるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物、及び、該モデル非ヒト動物を用いた、ギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＧＢＳ）は、感冒様症状を呈した後、１〜２週間後に発症し、急速に進行する弛緩性の運動麻痺（四肢の筋力低下）、深部腱反射消失、嚥下障害、構音傷害、深部感覚障害、自律神経症状（不整脈、血圧の変動）を特徴とする、末梢神経における炎症性脱髄疾患である。ギラン・バレー症候群は年間人口１０万人に対し２人の割合で発症し、日本全国で毎年約２０００人〜２５００人が新たに罹患しているといわれている。しかし、これを完治し得る治療薬は未だ開発されていないばかりか、発症原因やメカニズムも明確には明らかにされておらず、いわゆる難病の類に分類され、特定疾患に指定されている。近年になって、本症候群に対する治療法として、血漿交換療法（プラズマフェレーシス）や抗ガンマグロブリン大量静注法が有効であることが報告され、また、本症候群の病因として、患者血清中に末梢神経に発現しているガングリオシドに対する自己抗体（抗糖鎖抗体）が検出され、病勢と関連することから、その発症機序にはガングリオシドと自己免疫反応が密接に関与していることが指摘されている。ガングリオシドはその分子構造からＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂ、ＧＴ１ａ、ＧＱ１ｂ等に分けられ、該疾患において、患者血清中にはそれぞれに対する自己抗体が検出されている。特に、該ギラン・バレー症候群においては、血清中に抗ガングリオシド抗体として抗ＧＭ１抗体及び抗ＧＤ１ａ抗体が出現することが知られている。また、抗ＧＱ１ｂ抗体は、眼筋麻痺を伴うギラン・バレー症候群の急性期血清中や、フィッシャー症候群においてほぼ全例に特異的に上昇が認められている。
【０００３】
最近、ギラン・バレー症候群の原因として食中毒の原因菌の一つであるカンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）との関連が指摘されている。これは、カンピロバクターの糖鎖構造とガングリオシドとの間に分子相同性があり、これが自己反応性のＴ細胞やＢ細胞の出現につながると考えられている。しかし、現在まで自己抗体を含め、自己反応性Ｔ細胞やＢ細胞が実際の生体の病態につながるかどうかは証明されていない。動物実験レベルでは、ウサギにＧＤ１ｂを免疫し、末梢神経障害を誘導した報告があるが、これまでマウスに各種ガングリオシドを免疫しても病態を発症することはなく、適切なギラン・バレー症候群の疾患モデルマウスは存在していなかった。また、上記のようにウサギに該疾患を誘導したものや、ラットに誘導したものは発症率が低く、また症状も軽いため、モデルとして不適切であった。更に、適切なモデル動物が存在しないため、治療薬や治療方法は開発されなかった。
【０００４】
同様に、ギラン・バレー症候群の亜型として、フィッシャー症候群（Ｆｉｓｈｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）が知られている。該フィッシャー症候群はギラン・バレー症候群の約５％が該当するといわれており、上気道感染などを先行感染として発症するもので、外眼筋麻痺、複視、運動失調、腱反射消失、顔面神経麻痺を生ずる。上記ギラン・バレー症候群と同様の症状を呈するが、ヒトにおいて四肢の麻痺は生じない。また、フィッシャー症候群については、ガングリオシドＧＱ１ｂに対する血中ＩｇＧ抗体価の上昇が報告されているが、上記ギラン・バレー症候群と同様、その発症機序は解明されておらず、また、治療薬も開発されていない。
【０００５】
これらの病勢は罹病後１ヶ月位をピークに、数ヶ月から１年程で徐々に回復し、予後は比較的良好であるが、後遺症を残すことも少なくない。また、１年近くもの間、患者は精神的苦痛と入院・通院を余儀なくされるため、かかる疾患の治療薬、治療方法の開発は患者とその家族、医師達をはじめとする医療界から熱望されている。
【０００６】
他方、免疫系などの細胞の表面上には、ＩｇのＦｃ部分を認識して結合するレセプター（以下「ＦｃＲ」という）が存在し、その中でも体液中のＩｇＧのγ鎖に特異的に結合する受容体蛋白質であるＦｃγレセプター（以下「ＦｃγＲ」という）は遺伝子構造の類似性に基づいてタイプＩ（ＣＤ６４抗原）、タイプＩＩ（ＣＤ３２抗原）、タイプＩＩＩ（ＣＤ１６抗原）の３種に大きく分類されている。これらのうち、ＦｃγＲＩＩは、他のＦｃＲとは異なりモノマーのＩｇＧに対して低親和性であり、免疫複合体となった多価ＩｇＧと結合し、単球、マクロファージ、多形核白血球（ＰＭＮ）、マスト細胞、血小板、いくつかのＴ細胞リンパ球及びいくつかのＢ細胞リンパ球を含む造血幹細胞に広く発現する。また、ＦｃγＲＩＩには遺伝子配列が異なるＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ及びＦｃγＲＩＩＣの３種類の受容体が存在しており、いずれの染色体も１ｑ２３に位置していることが知られている。
【０００７】
上記ＦｃγＲＩＩＢは、他のＦｃＲとは異なり、γ鎖と会合することなく、細胞内領域に抑制性シグナルを伝達するアミノ酸配列（Ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｍｏｔｉｆ；ＩＴＩＭ）を有している（例えば、非特許文献１参照。）。このようなＦｃγＲＩＩＢの生理的機能を解明するために、本発明者らはＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスを既に作出し（例えば、非特許文献２参照。）、ＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスをタイプＩＩコラーゲンで免疫することによる関節炎モデルマウス（例えば、非特許文献３参照。）や、自己免疫疾患モデル動物を作製した（例えば、特許文献１参照。）。
【０００８】
【特許文献１】
特開平０８−２８９６９９号公報
【非特許文献１】
Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ． １２５， ４９−７６， １９９２、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６， １８０８−１８１２， １９９２
【非特許文献２】
Ｎａｔｕｒｅ ３７９， ３４６−３４９， １９９６
【非特許文献３】
Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８９， １８７−１９４， １９９９
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
これまで炎症性脱髄疾患であるギラン・バレー症候群の発症メカニズムを検討する際に適切なモデル動物がいなかった。本発明の課題は、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）を呈するモデル非ヒト動物を提供することにある。より詳しくは、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物にガングリオシドＧＱ１ｂを免疫することにより得ることのできるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物や、該モデル非ヒト動物を用いたギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスを用い、ガングリオシドＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ及びＧＱ１ｂを３週間毎に計４回フロイント・アジュバントとともに免疫し、ギラン・バレー症候群モデルマウスの作製を試みた。その結果、これらガングリオシド抗原を免疫したもののうち、ＧＱ１ｂを免疫したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスにおいて尾及び後肢が麻痺する末梢神経障害を認めた。このマウスではＧＱ１ｂに対する抗体価が上昇することから、通常、ヒトで認められるＧＱ１ｂに対する自己抗体が認められるギラン・バレー症候群の亜型であるフィッシャー症候群（Ｆｉｓｈｅｒ ｓｙｎｄｏｒｏｍｅ）に矛盾しない症状と考えられ、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）の新規疾患モデルマウスが得られることを見い出し、本発明を完成するに至った。また、本発明に基づき、該症候群に対する有効な治療薬のスクリーニング方法を構築した。
【００１１】
すなわち本発明は、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物をガングリオシドＧＱ１ｂで免疫することにより得られ、ギラン・バレー症候群を呈することを特徴とするギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項１）や、ギラン・バレー症候群がフィッシャー症候群であることを特徴とする請求項１記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項２）や、尾及び後肢が麻痺する末梢神経傷害であることを特徴とする請求項１又は２記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項３）や、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物が、げっ歯類動物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項４）や、げっ歯類動物が、マウスであることを特徴とする請求項５記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物（請求項５）に関する。
【００１２】
また本発明は、請求項１〜５のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に、被検物質を投与し、該発症モデル非ヒト動物におけるギラン・バレー症候群の症状の程度を観察・評価することを特徴とするギラン・バレー症候群の治療薬のスクリーニング方法（請求項６）や、請求項１〜５のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に、被検物質を投与し、抗ＧＱ１ｂ抗体の出現の程度を測定・評価することを特徴とするギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群治療薬のスクリーニング方法（請求項７）や、請求項６又は７記載のギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法によって得られる治療薬（請求項８）に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物としては、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物をガングリオシドＧＱ１ｂで免疫することにより得られ、ギラン・バレー症候群を呈する非ヒト動物であれば特に制限されるものではない。ここでギラン・バレー症候群とは、非遺伝性の疾患であって、感冒様症状を呈した後、１〜２週間後に引き起こされ、急速に進行する弛緩性の運動麻痺（四肢の筋力低下）、深部腱反射消失、嚥下障害、構音傷害、深部感覚障害、自律神経症状（不整脈、血圧の変動）を特徴とする疾患やそれらに類似した疾患である。かかるギラン・バレー症候群を発症した場合、ガングリオシドＧＱ１ｂに対する血清中の抗体価が上昇し、より具体的には、外眼筋麻痺、複視、運動失調、腱反射消失、顔面神経麻痺、尾や後肢等の末梢神経障害等を生じる。また、上記ギラン・バレー症候群と同様の症状を呈するが、ヒトにおいて四肢の麻痺を生じないフィッシャー症候群もギラン・バレー症候群の一つである。
【００１４】
本発明のＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物としては、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子機能が染色体上で欠損したモデル動物であればどのようなものでもよいが、マウスやラット等のげっ歯類、特に、該ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損したマウスを好適に挙げることができ、該ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損したマウスは、本発明者らの前掲の文献（非特許文献２）に記載する方法等によって作製することができる。具体的には、マウス遺伝子ライブラリーからＰＣＲ等の方法により得られた遺伝子断片を用い、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子をスクリーニングし、スクリーニングされたＦｃγＲＩＩＢ遺伝子を、ウイルスベクター等を用いてサブクローンし、ＤＮＡシーケンシングすることにより特定する。このクローンのＳ２エキソン及びＥＣ１エキソンを含むフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット等に置換することによって、ターゲットベクターを調製する。この線状化されたベクターをエレクトロポレーション（電気穿孔）法等によってＥＳ細胞に導入し、相同的組換えを行い、その相同的組換え体の中から、Ｇ４１８等に抵抗性を示すＥＳ細胞を選択し、その細胞のクローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェクションし、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメラマウスを作製する。このキメラマウスを野生型のマウスとインタークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得ることができ、また、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせることによって、ＦｃγＲＩＩＢノックアウトマウスを得ることができる。
【００１５】
本発明におけるギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物の作製方法としては、ギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物を得ることのできる方法であればどのような方法でも良く、特に限定されるものではないが、前記のＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物に、抗原としてガングリオシドＧＱ１ｂを免疫する方法を好適に例示することができる。また、免疫する方法としては、特に限定されるものではないが、初回免疫時にＧＱ１ｂ抗原をコンプリート・フロイント・アジュバントとともに免疫し、以後３週間毎にインコンプリート・フロイント・アジュバントとともに免疫する方法を好適に例示することができる。また、合計３〜６回免疫するのが望ましいが、特に合計４回免疫するのが好ましい。
【００１６】
本発明において用いられるガングリオシドＧＱ１ｂは、ラクトシルセラミド（Ｃｅｒ）からｂ経路合成系で産生されるスフィンゴ糖脂質であって、シアル酸（Ｓｉａ）を４つ有し、Ｇａｌβ１→３（３←２αＳｉａ３←２αＳｉａ）ＧａｌＮＡｃβ１→４Ｇａｌβ１→４（３←２αＳｉａ３←２αＳｉａ）Ｇｌｃβ１→１’Ｃｅｒの構造を有するスフィンゴ糖脂質をいう。これらのうち、該ＧＱ１ｂの特性は、特有の糖鎖である３←２αＳｉａの結合形式によって特徴づけられている。また、各ガングリオシドには特異的な抗体が得られている。各ガングリオシドを認識する抗体は、上記の糖鎖３←２αＳｉａの結合形式の相違を認識していることから、該抗ＧＱ１ｂ（モノクローナル）抗体も、４つの３←２αＳｉａの結合形式を特異的に認識していると考えられる。
【００１７】
本発明のギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法としては、本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物を用い、該治療薬の薬理的効果を確認し、選別することのできるスクリーニング方法であれば特に限定されるものではないが、例えば、本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に被検物質を経口的又は非経口的に投与し、病状をスコアー化して経時的に症状の程度（軽減の度合い）を観察・評価する方法や、本発明のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に被検物質を投与し、該モデル非ヒト動物の血中に出現している抗ＧＱ１ｂ抗体の出現程度を測定・評価する方法を具体的に挙げることができる。上記血中に出現している抗ＧＱ１ｂ抗体の出現程度を測定する方法としては、２次抗体を用いたＥＬＩＳＡ分析を具体的に例示することができる。
【００１８】
本発明の上記スクリーニング方法により得られるギラン・バレー症候群治療薬は、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）を発症した患者の治療に用いることができる。本発明のギラン・バレー症候群治療薬は、経口的あるいは非経口的に投与することができる。経口投与剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができる。また、非経口投与剤として注射剤、経皮製剤あるいは座薬等とすることができる。これらの製剤は活性成分に薬理学的、製剤学的に認容される助剤を加えることにより常法に従って製造することができる。また、投与量は、対象疾患の種類、患者の年齢、性別、体重、症状、投与形態に応じて適宜決定することができる。
【００１９】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
参考例（ＦｃγＲＩＩＢ欠損マウスの作製）
１２９／Ｓｖ／Ｊ（Ｈ−２ｂ）マウスのゲノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子のゲノムＤＮＡのクローンを単離した。ターゲットベクターは、このクローンのＳ２及びＥＣ１の２つの独立したエキソンを含む２．６５ＫｂのフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット（東洋紡社製）に、置換することによって作製した。この線状化したベクターをエレクトロポレーションによってＥＳ細胞（Ｊ１）に導入し、相同的組換えを行った。
【００２０】
上記の相同的組換えを起こしたＥＳ細胞からＥＳクローンを単離し、Ｇ４１８及びＧＡＮＣ（ガンシクロビア）に対してネオマイシン耐性ＥＳクローンをスクリーニングし、サザンブロット法によって相同的組換え体を同定した。その同定された相同的組換え体からゲノムＤＮＡを単離して、ＨｉｎｄＩＩＩでダイジェストし、ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセットを含むターゲティングされた対立遺伝子を含んでいることを確認した。かかる確認されたＥＳクローンを胚盤胞中にマイクロインジェクションし、キメラマウスを作製し、作製されたマウスを野生型のＣ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ）マウスとインタークロスさせることによってヘテロ接合体マウスを得て、また、ホモ接合体マウスを得るために、このヘテロ接合体マウスをインタークロスさせて、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損したマウス及びその野生型マウスを作製した。
【００２１】
実施例１（ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスへの免疫）
ガングリオシドとして、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂ及びＧＱ１ｂ（いずれもＡＬＥＸＩＳ社製）を用いた。各ガングリオシド１ｍｇ／ｍｌを含むガングリオシド溶液１ｍｌと、流動パラフィン、界面活性剤及び結核死菌からなる完全フロイントアジュバンド（ＣＦＡ）３ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合し、また各ガングリオシド１ｍｇ／ｍｌを含むガングリオシド溶液１ｍｌと、流動パラフィンと界面活性剤とからなる不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）３ｍｇ／ｍｌとを連結シリンジ中で混合して、２種類のエマルジョンを作製した。
【００２２】
上記参考例記載の方法により作製したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウス（８週齢：雌雄差なし）（ｎ＝５）をエーテルで麻酔し尾背部を剃毛し、各ガングリオシドとＣＦＡとをそれぞれ５０μｇと１００μｇとを含むエマルジョン１５０μｌをマウスの皮内に注射して一次免疫を行い、その一次免疫後、３週間毎に３回、各ガングリオシドとＩＦＡとをそれぞれ５０μｇと１００μｇとを含むエマルジョン１５０μｌを皮内に注射し、ギラン・バレー症候群発症マウスの作製を試みた。また、対照としては野生型マウス（ｎ＝５）を用いた。その結果、ＧＱ１ｂを免疫したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスにおいて、後肢と尾部に麻痺が生じる末梢神経障害を認めた。このマウスは後肢が開き、歩行することができず、また尾は垂れ下がっていた（図１；ＲＩＩＢ−／−）。一方、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＤ１ａ、ＧＤ１ｂを免疫したＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスやコントロールである野生型マウス（図１；ＷＴ）においては、麻痺症状などが認められなかった。
【００２３】
実施例２（麻痺症状スコアー）
ＧＱ１ｂ免疫を行った野生型マウス及びＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスについて、その症状によって点数化し、０点：無症状、１点：尾の麻痺、２点：尾及び両側後肢の麻痺、３点：尾及び四肢麻痺、４点：死亡の５段階に分けて評価した。結果を図２に示す。なお、図２中、野生型マウスの点数は黒塗りの四角で表し、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスの点数は白抜きの四角で表した。その結果、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスにＧＱ１ｂ免疫を行ったマウスは、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）の発症を認めた（図２）。
【００２４】
実施例３（ＧＱ１ｂに対する血清抗体価）
また、一次免疫後、３週、６週、９週及び１２週後に採血を行い、ＧＱ１ｂ免疫を行った野生型マウス及びＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスの眼窩より採血を行ない、文献（Ｃｅｌｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４５， ２９９−３１０， １９９２）記載のＥＬＩＳＡ分析に改良を加えた次の方法により、ＧＱ１ｂに対する抗体価を検査した。５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム溶液（ｐＨ＝８．５）１ｍｌに５μｇのＧＱ１ｂを溶解させ、この溶解液を１ウェル当たり５０μｌの割合で用い、正に帯電した９６ウェルマイクロプレート（ＮＵＮＣ社製）を４℃にて一晩コーティングした後、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０と０．１％のＢＳＡを含むＰＢＳで１回洗浄し、１ウェル当たり２５０μｌの０．５％のＢＳＡを含むＰＢＳで４℃にて一晩ブロックした。次に上記血液から得られた血清を５００に希釈し、その希釈した血清を１ウェル当たり５０μｌの割合で上記９６ウェルマイクロプレートに加え、４℃にて一晩反応させた。反応後、９６ウェルマイクロプレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで３回洗浄し、ペルオキシダーゼ（シグマ社製）が結合したヤギ抗マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ又はＩｇＧ２ｂを５００倍に希釈したものを５０μｌ加えて、４℃にて２時間インキュベートした。インキュベート後、再び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで３回洗浄し、５０μｌのＴｕｒｅＢｌｕｅ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｓ社製）と共に３０分間室温で酵素反応を行った。その後、ミクロプレートリーダー（Ｂｉｏｌｕｍｉｎ ９６０；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ社製）でＯＤ４５０を測定した。結果を図３に示す。なお、図３中、野生型マウスの吸光度は黒塗りの四角で表し、ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損マウスの吸光度は白抜きの四角で表した。これらの結果から、ＦｃγＲＩＩＢノックアウトマウス（ＩＩＢ−ＫＯ）は、野生型マウス（Ｗｉｌｄ）に比べて、ＧＱ１ｂに対する抗体価（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ）の上昇が認められ、ギラン・バレー症候群（フィッシャー症候群）の所見と矛盾していないことから、グッドパスチャー症候群発症モデルマウスが作製できたことがわかった。
【００２５】
【発明の効果】
本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物は、尾及び後肢に麻痺症状を呈し、ガングリオシドに対する抗体価が高いことから、ヒトにおけるギラン・バレー症候群及び該症候群の亜型であるフィッシャー症候群に合致する症状を発症しているとみなすことができ、これら症状の治療方法や治療薬の開発に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物の尾及び後肢が麻痺している様子（上図；ＲＩＩＢ−／−）及びコントロールとしての野生型マウス（下図；ＷＴ）を表す図である。
【図２】本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物及びコントロールとしての野生型マウスの麻痺症状スコアーを示す図である。
【図３】本発明のギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物及びコントロールとしての野生型マウスの血清抗ＧＱ１ｂ抗体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂの抗体価を示す図である。
Claims (8)
- ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子の機能が染色体上で欠損した非ヒト動物をガングリオシドＧＱ１ｂで免疫することにより得られ、ギラン・バレー症候群を呈することを特徴とするギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物。
- ギラン・バレー症候群がフィッシャー症候群であることを特徴とする請求項１記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物。
- 尾及び後肢が麻痺する末梢神経傷害であることを特徴とする請求項１又は２記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物。
- ＦｃγＲＩＩＢ遺伝子欠損非ヒト動物が、げっ歯類動物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物。
- げっ歯類動物が、マウスであることを特徴とする請求項５記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物。
- 請求項１〜５のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に、被検物質を投与し、該発症モデル非ヒト動物におけるギラン・バレー症候群の症状の程度を観察・評価することを特徴とするギラン・バレー症候群の治療薬のスクリーニング方法。
- 請求項１〜５のいずれか記載のギラン・バレー症候群発症モデル非ヒト動物に、被検物質を投与し、抗ＧＱ１ｂ抗体の出現の程度を測定・評価することを特徴とするギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群治療薬のスクリーニング方法。
- 請求項６又は７記載のギラン・バレー症候群治療薬のスクリーニング方法によって得られる治療薬。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002315091A JP2004147535A (ja) | 2002-10-29 | 2002-10-29 | ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 |
| PCT/JP2003/013958 WO2004039149A1 (ja) | 2002-10-29 | 2003-10-29 | ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 |
| EP03770050A EP1563729A4 (en) | 2002-10-29 | 2003-10-29 | NON-MUSHROOM MODEL animal with GUILLAIN-BARRE SYNDROME AND / OR FISHER SYNDROME |
| US10/533,700 US7309810B2 (en) | 2002-10-29 | 2003-10-29 | Nonhuman model animal suffering from Guillain-Barré syndrome and/or fisher syndrome |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002315091A JP2004147535A (ja) | 2002-10-29 | 2002-10-29 | ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004147535A true JP2004147535A (ja) | 2004-05-27 |
| JP2004147535A5 JP2004147535A5 (ja) | 2005-07-21 |
Family
ID=32211640
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002315091A Pending JP2004147535A (ja) | 2002-10-29 | 2002-10-29 | ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7309810B2 (ja) |
| EP (1) | EP1563729A4 (ja) |
| JP (1) | JP2004147535A (ja) |
| WO (1) | WO2004039149A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0129260D0 (en) * | 2001-12-06 | 2002-01-23 | Eisai London Res Lab Ltd | Pharmaceutical compositions and their uses |
| TWI489994B (zh) | 2008-03-17 | 2015-07-01 | Baxter Healthcare Sa | 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法 |
| BR112012005890B1 (pt) | 2009-09-17 | 2023-01-17 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Co-formulação estável de hialuronidase e imunoglobulina e métodos de utilização da mesma |
| US8883496B2 (en) | 2009-12-21 | 2014-11-11 | Regeneron Phamaceuticals, Inc. | Humanized FcgR mice |
| SG10201408415PA (en) | 2009-12-21 | 2015-01-29 | Regeneron Pharma | HUMANIZED FCγ R MICE |
| SI3129400T1 (sl) | 2014-04-08 | 2020-07-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Živali, ki niso človek in imajo humanizirane receptorje FC-gama |
| JP7328243B2 (ja) | 2018-03-26 | 2023-08-16 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 治療薬を試験するためのヒト化げっ歯類 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3570674B2 (ja) * | 1999-12-28 | 2004-09-29 | 独立行政法人 科学技術振興機構 | リウマチ関節炎好発モデル動物 |
-
2002
- 2002-10-29 JP JP2002315091A patent/JP2004147535A/ja active Pending
-
2003
- 2003-10-29 WO PCT/JP2003/013958 patent/WO2004039149A1/ja active Application Filing
- 2003-10-29 US US10/533,700 patent/US7309810B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-10-29 EP EP03770050A patent/EP1563729A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1563729A1 (en) | 2005-08-17 |
| WO2004039149A1 (ja) | 2004-05-13 |
| US20070016966A1 (en) | 2007-01-18 |
| EP1563729A4 (en) | 2008-05-14 |
| US7309810B2 (en) | 2007-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6992234B2 (en) | FcRn-based therapeutics for the treatment of auto-immune disorders | |
| Kontoyiannis et al. | Accelerated autoimmunity and lupus nephritis in NZB mice with an engineered heterozygous deficiency in tumor necrosis factor | |
| TWI464178B (zh) | 細胞凋亡抗-ｉｇｅ抗體 | |
| Heusser et al. | Therapeutic potential of anti-IgE antibodies | |
| Bogen et al. | Clonal deletion of specific thymocytes by an immunoglobulin idiotype. | |
| EP2367849A1 (en) | Method for the treatment of neurodegenerative diseases | |
| CA2226911A1 (en) | Methods of treatment of neurological diseases by interferon antagonists | |
| JP2004147535A (ja) | ギラン・バレー症候群及び／又はフィッシャー症候群発症モデル非ヒト動物 | |
| JP3570674B2 (ja) | リウマチ関節炎好発モデル動物 | |
| WO2015072544A1 (ja) | 自己免疫疾患の治療薬及び治療方法 | |
| AU2003233246B2 (en) | FcyRIIa transgenic animal model for autoimmune disease | |
| Eisenberg | Mechanisms of autoimmunity | |
| WO2004040969A1 (ja) | Ｇａｎｐ導入トランスジェニック哺乳動物及びその利用 | |
| JP4550530B2 (ja) | シナプス成熟障害モデル動物 | |
| WO2020079246A1 (en) | Non human mammal models for non-alcoholic fatty liver disease | |
| JP2001008576A (ja) | グッドパスチャー症候群モデルマウス | |
| WO2004042004A2 (en) | Mouse model for autoimmune disorders | |
| JP2002065110A (ja) | Ｉｉｉ型アレルギー炎症モデル動物 | |
| CN116829950A (zh) | 用于减少母体自身抗体的方法 | |
| Sytwu | T cell activation, apoptosis, and autoimmune disease | |
| JP2001133448A (ja) | Ｆｃ受容体を介する寄生虫感染症治療薬のスクリーニング方法 | |
| Huseby | Helper and cytotoxic T cell responses specific for myelin basic protein | |
| Salagean et al. | IgE and Anti-IgE Therapy in Allergic Asthma and Rhinitis | |
| Kita et al. | Eosinophil IgE receptors | |
| WO2007083611A1 (ja) | 肺高血圧症自然発症モデル動物及びその作製方法、並びに、肺高血圧症に対する医薬組成物及び治療方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20040129 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20041027 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041027 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20041110 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071120 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080313 |