JP2003000197A - 酵母由来多糖類含有組成物及びその製造方法 - Google Patents
酵母由来多糖類含有組成物及びその製造方法Info
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- JP2003000197A JP2003000197A JP2001189679A JP2001189679A JP2003000197A JP 2003000197 A JP2003000197 A JP 2003000197A JP 2001189679 A JP2001189679 A JP 2001189679A JP 2001189679 A JP2001189679 A JP 2001189679A JP 2003000197 A JP2003000197 A JP 2003000197A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 生理活性の高いインタクトな状態のβ−グル
カンを多く含む酵母由来多糖類含有組成物及びその製造
方法を提供する。 【解決手段】 酵母に蛋白質分解酵素を含む酵素剤を作
用させて酵母を溶菌させ、酵母由来多糖類を含有する組
成物を得る。なお、前記酵素剤のグルカナーゼ活性総量
が原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉｔ／ｇ以下である
ことが好ましい。また、前記多糖類がβ−グルカンを６
質量％以上含むことが好ましい。
カンを多く含む酵母由来多糖類含有組成物及びその製造
方法を提供する。 【解決手段】 酵母に蛋白質分解酵素を含む酵素剤を作
用させて酵母を溶菌させ、酵母由来多糖類を含有する組
成物を得る。なお、前記酵素剤のグルカナーゼ活性総量
が原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉｔ／ｇ以下である
ことが好ましい。また、前記多糖類がβ−グルカンを６
質量％以上含むことが好ましい。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、インタクトな状態
のβ−グルカンの含量の高い酵母由来多糖類を含有する
組成物及びその製造方法に関する。
のβ−グルカンの含量の高い酵母由来多糖類を含有する
組成物及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】酵母の細胞壁は複雑な構造を有してお
り、グルカン及びソンナンを主体とする多糖類や蛋白
質、脂質等から構成されている。
り、グルカン及びソンナンを主体とする多糖類や蛋白
質、脂質等から構成されている。
【０００３】グルカン等の多糖類は食物繊維としての生
理効果が注目されており、特に、水不溶性のβ−１，３
グルカン及びβ−１，６グルカンは抗菌性や免疫向上機
能を有することが知られている。このようなβ−グルカ
ンの生理活性は、β−グルカン分子が他の成分と結合し
ていない状態、即ちフリーの状態で、かつその分子量が
大きい方が強いといわれている（Yakugaku Zasshi. 120
(5) 413-431 (2000)）。
理効果が注目されており、特に、水不溶性のβ−１，３
グルカン及びβ−１，６グルカンは抗菌性や免疫向上機
能を有することが知られている。このようなβ−グルカ
ンの生理活性は、β−グルカン分子が他の成分と結合し
ていない状態、即ちフリーの状態で、かつその分子量が
大きい方が強いといわれている（Yakugaku Zasshi. 120
(5) 413-431 (2000)）。
【０００４】酵母細胞壁に含まれる多糖類は、食塩や糖
質、酢酸エチル等を用いた自己消化やセルラーゼ、ヘミ
セルラーゼ、ペクチン分解酵素、グルカナーゼ等の細胞
壁溶解酵素を用いて酵母を溶菌し、その可溶性画分（酵
母エキス）を回収した後の残渣（酵母エキス以外の不溶
性画分）に含まれ、従来あまり活用されていなかった。
質、酢酸エチル等を用いた自己消化やセルラーゼ、ヘミ
セルラーゼ、ペクチン分解酵素、グルカナーゼ等の細胞
壁溶解酵素を用いて酵母を溶菌し、その可溶性画分（酵
母エキス）を回収した後の残渣（酵母エキス以外の不溶
性画分）に含まれ、従来あまり活用されていなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記のような酵母エキ
ス製造時の残渣に含まれるグルカン等の多糖類の純度を
上げる方法として、アルカリなどで処理する方法がある
が、上記の酵母エキスの製造方法においては、原料酵母
から酵母エキスを抽出することに主眼がおかれているこ
と、及び一般的に使用される細胞壁溶解酵素にはグルカ
ナーゼ活性があり、残渣自体に含まれるβ−グルカンの
量が低く（通常５％弱）、さらに、分解によってβ−グ
ルカンの分子量が小さくなり、充分な生理活性効果が期
待できなかった。
ス製造時の残渣に含まれるグルカン等の多糖類の純度を
上げる方法として、アルカリなどで処理する方法がある
が、上記の酵母エキスの製造方法においては、原料酵母
から酵母エキスを抽出することに主眼がおかれているこ
と、及び一般的に使用される細胞壁溶解酵素にはグルカ
ナーゼ活性があり、残渣自体に含まれるβ−グルカンの
量が低く（通常５％弱）、さらに、分解によってβ−グ
ルカンの分子量が小さくなり、充分な生理活性効果が期
待できなかった。
【０００６】したがって、本発明の目的は、生理活性の
高いインタクトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母由
来多糖類含有組成物及びその製造方法を提供することに
ある。
高いインタクトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母由
来多糖類含有組成物及びその製造方法を提供することに
ある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明の一つは、酵母に蛋白質分解酵素を含む酵素
剤を作用させることにより、酵母を溶菌させて得られる
多糖類を含有することを特徴とする酵母由来多糖類含有
組成物である。
め、本発明の一つは、酵母に蛋白質分解酵素を含む酵素
剤を作用させることにより、酵母を溶菌させて得られる
多糖類を含有することを特徴とする酵母由来多糖類含有
組成物である。
【０００８】上記発明によれば、生理活性の高いインタ
クトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖類を
含有する組成物を提供できる。
クトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖類を
含有する組成物を提供できる。
【０００９】上記発明においては、前記酵素剤のグルカ
ナーゼ活性総量が、原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉ
ｔ／ｇ以下であることが好ましい。この態様によれば、
より分子量の高いβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖
類を含有する組成物を提供できる。
ナーゼ活性総量が、原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉ
ｔ／ｇ以下であることが好ましい。この態様によれば、
より分子量の高いβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖
類を含有する組成物を提供できる。
【００１０】また、前記多糖類がβ−グルカンを６質量
％以上含むものであることが好ましい。この態様によれ
ば、該組成物を飲食品、医薬品、医薬部外品等に配合し
て摂取、投与することにより、β−グルカンの有する生
理活性が期待できる。
％以上含むものであることが好ましい。この態様によれ
ば、該組成物を飲食品、医薬品、医薬部外品等に配合し
て摂取、投与することにより、β−グルカンの有する生
理活性が期待できる。
【００１１】本発明のもう一つは、酵母を、蛋白質分解
酵素を含む酵素剤を用いて溶菌させることを特徴とする
酵母由来多糖類含有組成物の製造方法である。
酵素を含む酵素剤を用いて溶菌させることを特徴とする
酵母由来多糖類含有組成物の製造方法である。
【００１２】上記発明によれば、生理活性の高いインタ
クトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖類を
含有する組成物を収率よく得ることができる。
クトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖類を
含有する組成物を収率よく得ることができる。
【００１３】上記発明においては、前記酵素剤のグルカ
ナーゼ活性総量が、原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉ
ｔ／ｇ以下であることが好ましい。この態様によれば、
より分子量の高いβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖
類を含有する組成物を収率よく得ることができる。
ナーゼ活性総量が、原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉ
ｔ／ｇ以下であることが好ましい。この態様によれば、
より分子量の高いβ−グルカンを多く含む酵母由来多糖
類を含有する組成物を収率よく得ることができる。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明で用いられる酵母として
は、一般に食すことが可能な酵母であれば特に制限はな
く、例えばパン酵母、ビール酵母、ワイン酵母等として
用いられているサッカロミセス・セルビシエ、サッカロ
ミセス・ウバウム、サッカロミセス・エクシギューズに
代表されるサッカロミセス属、トルラスポラ属、キャン
ディダ属等に属する酵母が挙げられる。上記酵母の培養
条件は特に制限はなく、それぞれの酵母に適した通常の
培養条件で培養すればよい。すなわち、例えばパン酵母
の場合、一般的な糖蜜を主原料として窒素源、リン源な
どの副原料を用いて培養すればよく、ビール酵母の場合
は一般のビール生産条件で培養することができる。ま
た、市販の生イーストやドライイースト等を用いること
もできる。
は、一般に食すことが可能な酵母であれば特に制限はな
く、例えばパン酵母、ビール酵母、ワイン酵母等として
用いられているサッカロミセス・セルビシエ、サッカロ
ミセス・ウバウム、サッカロミセス・エクシギューズに
代表されるサッカロミセス属、トルラスポラ属、キャン
ディダ属等に属する酵母が挙げられる。上記酵母の培養
条件は特に制限はなく、それぞれの酵母に適した通常の
培養条件で培養すればよい。すなわち、例えばパン酵母
の場合、一般的な糖蜜を主原料として窒素源、リン源な
どの副原料を用いて培養すればよく、ビール酵母の場合
は一般のビール生産条件で培養することができる。ま
た、市販の生イーストやドライイースト等を用いること
もできる。
【００１５】本発明で用いられる酵素剤は蛋白質分解酵
素を含み、その他の酵素として、例えばグルカナーゼ、
マンナーゼ、セルラーゼ等を含むことができる。
素を含み、その他の酵素として、例えばグルカナーゼ、
マンナーゼ、セルラーゼ等を含むことができる。
【００１６】上記蛋白質分解酵素としては、エンドプロ
テアーゼ、エキソプロテアーゼ等が挙げられる。具体的
には、例えば市販品では、「サモアーゼＰＣ」（商品
名、大和化成（株）製）、「プロチンＡ」（商品名、大
和化成（株）製）、「ＹＬ−ＮＬ」（商品名、天野製薬
（株）製）等が挙げられるが、これらに限定されるもの
ではない。
テアーゼ、エキソプロテアーゼ等が挙げられる。具体的
には、例えば市販品では、「サモアーゼＰＣ」（商品
名、大和化成（株）製）、「プロチンＡ」（商品名、大
和化成（株）製）、「ＹＬ−ＮＬ」（商品名、天野製薬
（株）製）等が挙げられるが、これらに限定されるもの
ではない。
【００１７】本発明における溶菌とは、上記のような蛋
白質分解酵素を含む酵素剤を用いて酵母の細胞壁の一部
あるいは全てを分解することを言う。上記のような蛋白
質分解酵素を含む酵素剤を用いることにより、生理活性
の高いインタクトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母
由来多糖類を得ることができる。
白質分解酵素を含む酵素剤を用いて酵母の細胞壁の一部
あるいは全てを分解することを言う。上記のような蛋白
質分解酵素を含む酵素剤を用いることにより、生理活性
の高いインタクトな状態のβ−グルカンを多く含む酵母
由来多糖類を得ることができる。
【００１８】上記酵素剤の使用量は、反応条件等により
適宜選択できるが、蛋白質分解酵素及び併用する他の酵
素のグルカナーゼ活性総量を原料酵母の乾燥質量当たり
３０ｕｎｉｔ／ｇ以下にすることが好ましい。原料酵母
の乾燥質量当たりのグルカナーゼ活性総量が３０ｕｎｉ
ｔ／ｇを超えると、得られる酵母細胞壁由来のβ−グル
カンが必要以上に分解されてインタクトな状態が損われ
ると共に、酵母由来多糖類の収率が低下するため好まし
くない。
適宜選択できるが、蛋白質分解酵素及び併用する他の酵
素のグルカナーゼ活性総量を原料酵母の乾燥質量当たり
３０ｕｎｉｔ／ｇ以下にすることが好ましい。原料酵母
の乾燥質量当たりのグルカナーゼ活性総量が３０ｕｎｉ
ｔ／ｇを超えると、得られる酵母細胞壁由来のβ−グル
カンが必要以上に分解されてインタクトな状態が損われ
ると共に、酵母由来多糖類の収率が低下するため好まし
くない。
【００１９】なお、本発明でいうグルカナーゼ活性と
は、酵素をSaccharomyces cerevisiae（IFO 0309）の凍
結乾燥菌体１ｍｇに３５℃で作用させたときに、反応液
の濁度（具体的には波長６６０ｎｍにおける吸光度）を
１分間当たり１％低下させる酵素量を１ｕｎｉｔとして
定義する。
は、酵素をSaccharomyces cerevisiae（IFO 0309）の凍
結乾燥菌体１ｍｇに３５℃で作用させたときに、反応液
の濁度（具体的には波長６６０ｎｍにおける吸光度）を
１分間当たり１％低下させる酵素量を１ｕｎｉｔとして
定義する。
【００２０】本発明の酵母由来多糖類含有組成物は、例
えば以下のようにして調製することができる。
えば以下のようにして調製することができる。
【００２１】酵母を培養した培養液のまま、あるいは培
養液から回収した酵母を水に懸濁し、酵母の乾燥質量に
対して０．０１質量％以上、好ましくは０．０５質量％
以上の酵素剤を添加して、２０〜７０℃で１〜３６時間
反応させた後、加熱処理等により酵素を失活させる。こ
の反応液をそのまま、又は遠心分離等の分離操作を行な
い不溶画分を回収して必要に応じて水洗した後、適宜濃
縮、乾燥することにより、本発明の酵母由来多糖類含有
組成物を得ることができる。
養液から回収した酵母を水に懸濁し、酵母の乾燥質量に
対して０．０１質量％以上、好ましくは０．０５質量％
以上の酵素剤を添加して、２０〜７０℃で１〜３６時間
反応させた後、加熱処理等により酵素を失活させる。こ
の反応液をそのまま、又は遠心分離等の分離操作を行な
い不溶画分を回収して必要に応じて水洗した後、適宜濃
縮、乾燥することにより、本発明の酵母由来多糖類含有
組成物を得ることができる。
【００２２】本発明の酵母由来多糖類含有組成物は、β
−グルカンを６質量％以上含むことが好ましく、１５質
量％以上含むことがより好ましい。β−グルカン含量が
上記範囲に満たない場合、充分な生理活性効果が得られ
ない場合がある。なお、β−グルカンとは、グルコース
から構成される多糖類のうち、グルコースがβ型の構造
で結合したものをいい、具体的にはβ−１，４グルカン
（セルロース）、β−１，３グルカン、β−１，６グル
カン等が挙げられる。ただ、酵母中のセルロース含有量
は少ないため、本発明においては、主としてβ−１，３
及びβ−１，６グルカンを指す。
−グルカンを６質量％以上含むことが好ましく、１５質
量％以上含むことがより好ましい。β−グルカン含量が
上記範囲に満たない場合、充分な生理活性効果が得られ
ない場合がある。なお、β−グルカンとは、グルコース
から構成される多糖類のうち、グルコースがβ型の構造
で結合したものをいい、具体的にはβ−１，４グルカン
（セルロース）、β−１，３グルカン、β−１，６グル
カン等が挙げられる。ただ、酵母中のセルロース含有量
は少ないため、本発明においては、主としてβ−１，３
及びβ−１，６グルカンを指す。
【００２３】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。
なお、各実施例、比較例で使用した酵素のグルカナーゼ
活性（ｕｎｉｔ／ｇ）及びグルカナーゼ活性総量（ｕｎ
ｉｔ／ｇ原料乾燥酵母）を表１に示す。
するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。
なお、各実施例、比較例で使用した酵素のグルカナーゼ
活性（ｕｎｉｔ／ｇ）及びグルカナーゼ活性総量（ｕｎ
ｉｔ／ｇ原料乾燥酵母）を表１に示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】実施例１
原料酵母としてサッカロミセス属に属するパン酵母（商
品名「カネカレッドイースト」、鐘淵化学工業（株）
製）３０ｇ（乾物量として１０ｇ）を、水７０ｍｌに懸
濁して、９０℃、６０分間の加熱処理を行ない菌体内の
酵素を失活させた。
品名「カネカレッドイースト」、鐘淵化学工業（株）
製）３０ｇ（乾物量として１０ｇ）を、水７０ｍｌに懸
濁して、９０℃、６０分間の加熱処理を行ない菌体内の
酵素を失活させた。
【００２６】この懸濁液を５０℃に冷却して、乾燥菌体
に対して、蛋白質分解酵素（０．２質量％の「ＹＬ−Ｎ
Ｌ」（商品名、天野製薬（株）製）及び０．５質量％の
「プロチンＡＹ−１０」（商品名、大和化成（株）
製））を添加して、５０℃で２４時間撹拌しながら酵素
反応を行なった後、９５℃で３０分間加熱して酵素を失
活させた。
に対して、蛋白質分解酵素（０．２質量％の「ＹＬ−Ｎ
Ｌ」（商品名、天野製薬（株）製）及び０．５質量％の
「プロチンＡＹ−１０」（商品名、大和化成（株）
製））を添加して、５０℃で２４時間撹拌しながら酵素
反応を行なった後、９５℃で３０分間加熱して酵素を失
活させた。
【００２７】この反応液を遠心分離して、不溶性画分を
回収し、水に分散した後、スプレー乾燥して酵母由来多
糖類含有組成物（以下、サンプルＡという）４．２ｇを
得た。
回収し、水に分散した後、スプレー乾燥して酵母由来多
糖類含有組成物（以下、サンプルＡという）４．２ｇを
得た。
【００２８】また、上記と同様にして酵素反応を行なっ
た後、酵素を失活させた反応液を、遠心分離せずに、濃
縮した後、スプレー乾燥して酵母由来多糖類含有組成物
（以下、サンプルＢという）９．３ｇを得た。
た後、酵素を失活させた反応液を、遠心分離せずに、濃
縮した後、スプレー乾燥して酵母由来多糖類含有組成物
（以下、サンプルＢという）９．３ｇを得た。
【００２９】実施例２
実施例１において、蛋白質分解酵素「ＹＬ−ＮＬ」の代
わりに、グルカナーゼ（商品名「ツニカーゼＦｎ」、天
野製薬（株）製）を０．５質量％用いた以外は、実施例
１と同様にして酵素反応を行ない、酵素を失活させた。
そして、この反応液を、遠心分離せずに、濃縮した後、
スプレー乾燥して酵母由来多糖類含有組成物（以下、サ
ンプルＣという）９．１ｇを得た。
わりに、グルカナーゼ（商品名「ツニカーゼＦｎ」、天
野製薬（株）製）を０．５質量％用いた以外は、実施例
１と同様にして酵素反応を行ない、酵素を失活させた。
そして、この反応液を、遠心分離せずに、濃縮した後、
スプレー乾燥して酵母由来多糖類含有組成物（以下、サ
ンプルＣという）９．１ｇを得た。
【００３０】実施例３
実施例１において、蛋白質分解酵素「ＹＬ−ＮＬ」の代
わりに、よりグルカナーゼ活性の高い蛋白質分解酵素
「ＹＬ−１５」（商品名、大和化成（株）製）を０．５
質量％用いた以外は、実施例１と同様にして酵素反応を
行ない、酵素を失活させた。そして、この反応液を、遠
心分離せずに、濃縮した後、スプレー乾燥して酵母由来
多糖類含有組成物（以下、サンプルＤという）９．０ｇ
を得た。
わりに、よりグルカナーゼ活性の高い蛋白質分解酵素
「ＹＬ−１５」（商品名、大和化成（株）製）を０．５
質量％用いた以外は、実施例１と同様にして酵素反応を
行ない、酵素を失活させた。そして、この反応液を、遠
心分離せずに、濃縮した後、スプレー乾燥して酵母由来
多糖類含有組成物（以下、サンプルＤという）９．０ｇ
を得た。
【００３１】比較例
酵素としてグルカナーゼ（商品名「ツニカーゼＦｎ」、
大和化成（株）製）のみを０．５質量％用いた以外は実
施例１と同様にして酵素反応を行ない、酵素を失活させ
た。そして、この反応液を、遠心分離せずに、濃縮した
後、スプレー乾燥して酵母由来多糖類含有組成物（以
下、サンプルＥという）９．２ｇを得た。
大和化成（株）製）のみを０．５質量％用いた以外は実
施例１と同様にして酵素反応を行ない、酵素を失活させ
た。そして、この反応液を、遠心分離せずに、濃縮した
後、スプレー乾燥して酵母由来多糖類含有組成物（以
下、サンプルＥという）９．２ｇを得た。
【００３２】そして、上記各例で得られたサンプル中の
β−グルカン量、窒素含量、グルコース含量（使用した
酵素のグルカナーゼ活性により、原料酵母中のβ−グル
カンが分解された程度を示す。）を以下の方法で測定し
た。その結果を表２に示す。
β−グルカン量、窒素含量、グルコース含量（使用した
酵素のグルカナーゼ活性により、原料酵母中のβ−グル
カンが分解された程度を示す。）を以下の方法で測定し
た。その結果を表２に示す。
【００３３】β−グルカン量：サンプル中の炭水化物を
アミラーゼで可溶化し、８０（ｖ／ｖ）％エタノールで
多糖類を沈澱させ、水溶性の単糖、オリゴ糖類を分離除
去した後、得られた沈澱を塩酸で加水分解し、グルコー
スを比色法で定量し、総グルコース量の９０％をβ−グ
ルカン量とした。 窒素含量：ケールダール法で測定した。
アミラーゼで可溶化し、８０（ｖ／ｖ）％エタノールで
多糖類を沈澱させ、水溶性の単糖、オリゴ糖類を分離除
去した後、得られた沈澱を塩酸で加水分解し、グルコー
スを比色法で定量し、総グルコース量の９０％をβ−グ
ルカン量とした。 窒素含量：ケールダール法で測定した。
【００３４】グルコース含量：CarboPak PA1（４ｍｍφ
×２５０ｍｍ）（商品名、ダイオネックス社製）を用
い、イオンクロマトグラフ法で測定した。
×２５０ｍｍ）（商品名、ダイオネックス社製）を用
い、イオンクロマトグラフ法で測定した。
【００３５】
【表２】
【００３６】表２から、蛋白質分解酵素を含む酵素剤を
用いた実施例の各サンプルは、グルカナーゼのみを用い
た比較例のサンプルに比べてβ−グルカン量及びβ−グ
ルカン収率が高いことが分かる。また、実施例の各サン
プルは、比較例のサンプルに比べてグルコース含量が低
いことからβ−グルカンがほとんど分解されていないこ
とが分かる。
用いた実施例の各サンプルは、グルカナーゼのみを用い
た比較例のサンプルに比べてβ−グルカン量及びβ−グ
ルカン収率が高いことが分かる。また、実施例の各サン
プルは、比較例のサンプルに比べてグルコース含量が低
いことからβ−グルカンがほとんど分解されていないこ
とが分かる。
【００３７】試験例
上記のサンプルＡ、Ｃ、及び実施例１において、酵素反
応終了後、加熱処理して酵素を失活させた後、遠心分離
を行なって回収した可溶性画分を乾燥したもの（以下、
可溶性画分という）１ｇをそれぞれ精製水に懸濁して１
０ｍｌとした後、オートクレーブ滅菌したもの、大腸菌
を水に懸濁した後オートクレーブした大腸菌粉末（Lyop
hilized cells of St. K-12、シグマ社製）を用いて、
以下の方法で生理活性向上効果について調べた。なお、
生理活性向上効果は、抗菌ペプチドの１種であるヒトβ
ディフェンシン２（以下、hBD-2という）の発現を誘導
及び／又は増強するかどうかで判断した。
応終了後、加熱処理して酵素を失活させた後、遠心分離
を行なって回収した可溶性画分を乾燥したもの（以下、
可溶性画分という）１ｇをそれぞれ精製水に懸濁して１
０ｍｌとした後、オートクレーブ滅菌したもの、大腸菌
を水に懸濁した後オートクレーブした大腸菌粉末（Lyop
hilized cells of St. K-12、シグマ社製）を用いて、
以下の方法で生理活性向上効果について調べた。なお、
生理活性向上効果は、抗菌ペプチドの１種であるヒトβ
ディフェンシン２（以下、hBD-2という）の発現を誘導
及び／又は増強するかどうかで判断した。
【００３８】６ウエルマルチプレート（ファルコン社
製）でコンフルエントにまで培養したヒト表皮角化細胞
（日水製薬株式会社製）に、上記のサンプルＡ、Ｃ、及
び可溶性画分をそれぞれ終濃度で０．５及び５ｍｇ／ｍ
ｌ、大腸菌粉末を終濃度で０．７５ｍｇ／ｍｌとなるよ
うに添加し、３７℃、５％ＣＯ2雰囲気下で培養した。
なお、ＰＢＳを添加したものをコントロールとした。
製）でコンフルエントにまで培養したヒト表皮角化細胞
（日水製薬株式会社製）に、上記のサンプルＡ、Ｃ、及
び可溶性画分をそれぞれ終濃度で０．５及び５ｍｇ／ｍ
ｌ、大腸菌粉末を終濃度で０．７５ｍｇ／ｍｌとなるよ
うに添加し、３７℃、５％ＣＯ2雰囲気下で培養した。
なお、ＰＢＳを添加したものをコントロールとした。
【００３９】約１６時間後、培地を除いてＰＢＳで洗浄
した後、ＲＮｅａｓｙ（商品名、Qiagen社製）を用い
て、回収した培養細胞から総ＲＮＡを抽出し、各ＲＮＡ
を鋳型として、定量ＲＴ−ＰＣＲを行ない、目的（hBD-
2）のｍＲＮＡを増幅した。
した後、ＲＮｅａｓｙ（商品名、Qiagen社製）を用い
て、回収した培養細胞から総ＲＮＡを抽出し、各ＲＮＡ
を鋳型として、定量ＲＴ−ＰＣＲを行ない、目的（hBD-
2）のｍＲＮＡを増幅した。
【００４０】定量ＲＴ−ＰＣＲ法は、hBD-2のｃＤＮＡ
の配列（Accession No. Z71389）をもとに、配列番号１
に示すプライマー（qRThBD2f）、配列番号２に示すプラ
イマー（qRThBD2r）、更に、ABIPRISM TaqManTMプロー
ブ（株式会社パーキンエルマージャパン製）として配列
番号３に示すプローブ（hBD2probe）を作製して用い
た。なお、上記ABIPRISM TaqManTMプローブとは、５’
末端にリポーター蛍光色素、３’末端にクエンチャー蛍
光色素が結合したプローブであり、反応前はリポーター
蛍光色素とクエンチャー蛍光色素が近接しているため蛍
光を発しないが、ＰＣＲ反応の伸長サイクル中に、ＤＮ
Ａポリメラーゼの5'-3'エキソヌクレアーゼ活性により
リポーター蛍光色素が遊離して蛍光を発するので、蛍光
強度をモニターすることによりＰＣＲ産物の蓄積を確認
することができるものである。
の配列（Accession No. Z71389）をもとに、配列番号１
に示すプライマー（qRThBD2f）、配列番号２に示すプラ
イマー（qRThBD2r）、更に、ABIPRISM TaqManTMプロー
ブ（株式会社パーキンエルマージャパン製）として配列
番号３に示すプローブ（hBD2probe）を作製して用い
た。なお、上記ABIPRISM TaqManTMプローブとは、５’
末端にリポーター蛍光色素、３’末端にクエンチャー蛍
光色素が結合したプローブであり、反応前はリポーター
蛍光色素とクエンチャー蛍光色素が近接しているため蛍
光を発しないが、ＰＣＲ反応の伸長サイクル中に、ＤＮ
Ａポリメラーゼの5'-3'エキソヌクレアーゼ活性により
リポーター蛍光色素が遊離して蛍光を発するので、蛍光
強度をモニターすることによりＰＣＲ産物の蓄積を確認
することができるものである。
【００４１】定量ＲＴ−ＰＣＲ法の条件は、TaqMan EZ
RT-PCR Kit（株式会社パーキンエルマージャパン製）を
用いて、逆転写反応（６０℃：３０分、９５℃：５分）
を４０サイクル、ＰＣＲ反応（９４℃：２０秒、６０
℃：１分）を４５サイクル行ない、ABIPRISM 7700 sequ
ence detector（株式会社パーキンエルマージャパン
製）でＰＣＲ産物の検出を行なった。そして、解析ソフ
ト（Sequence Detector v1.6.3、株式会社パーキンエル
マージャパン製）を用いて、hBD-2のｍＲＮＡの発現量
を求めた。なお、鋳型のｍＲＮＡ量の内部標準として、
ＧＡＰＤＨ（gleceraldehyde-3-phosphate dehydrogena
se）遺伝子のｍＲＮＡをTaqManTM GAPDH Contorol Rege
nts（株式会社パーキンエルマージャパン製）を用いて
同時に測定した。そして、コントロールの発現量を１０
０％として相対発現量を求めた。その結果を図１に示
す。
RT-PCR Kit（株式会社パーキンエルマージャパン製）を
用いて、逆転写反応（６０℃：３０分、９５℃：５分）
を４０サイクル、ＰＣＲ反応（９４℃：２０秒、６０
℃：１分）を４５サイクル行ない、ABIPRISM 7700 sequ
ence detector（株式会社パーキンエルマージャパン
製）でＰＣＲ産物の検出を行なった。そして、解析ソフ
ト（Sequence Detector v1.6.3、株式会社パーキンエル
マージャパン製）を用いて、hBD-2のｍＲＮＡの発現量
を求めた。なお、鋳型のｍＲＮＡ量の内部標準として、
ＧＡＰＤＨ（gleceraldehyde-3-phosphate dehydrogena
se）遺伝子のｍＲＮＡをTaqManTM GAPDH Contorol Rege
nts（株式会社パーキンエルマージャパン製）を用いて
同時に測定した。そして、コントロールの発現量を１０
０％として相対発現量を求めた。その結果を図１に示
す。
【００４２】図１から、サンプルＡ、Ｃを添加すること
によりhBD-2のｍＲＮＡの誘導及び／又は増強効果が認
められた。
によりhBD-2のｍＲＮＡの誘導及び／又は増強効果が認
められた。
【００４３】一方、可溶性画分のサンプルではhBD-2の
ｍＲＮＡの誘導及び／又は増強効果が認められなかっ
た。
ｍＲＮＡの誘導及び／又は増強効果が認められなかっ
た。
【００４４】
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
蛋白質分解酵素を含む酵素剤を用いて酵母を溶菌させる
ことにより、生理活性の高いインタクトな状態のβ−グ
ルカンを多く含む酵母由来多糖類含有組成物を提供でき
る。
蛋白質分解酵素を含む酵素剤を用いて酵母を溶菌させる
ことにより、生理活性の高いインタクトな状態のβ−グ
ルカンを多く含む酵母由来多糖類含有組成物を提供でき
る。
【００４５】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> 森永製菓株式会社 Morinaga seika Kabusiki kaisya
鐘淵化学工業株式会社 Kanegabuti kagaku kougyou Kabusiki kaisya
<120> ほ乳類抗菌ペプチドの発現誘導及び／又は増強組成物、該組成物を含有す
る飲食品、医薬品及び医薬部外品
<130> MP-１３２２
<140>
<141>
<160> 3
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hBD-2のcDNAの塩基配列に基づいて合成したヌクレオチド。
<400> 1
cttccaggtg tttttggtgg ta 22
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hBD-2のcDNAの塩基配列に基づいて合成したヌクレオチド。
<400> 2
ggagccatat gtcatccagt c 21
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hBD-2のcDNAの塩基配列に基づいて合成したヌクレオチド。
<400> 3
aggcgatcct gttacctgcc ttaagag 27
【図１】 酵母由来多糖類含有組成物のhBD-2のｍＲＮ
Ａの発現誘導及び／又は増強試験の結果を示す図表であ
る。
Ａの発現誘導及び／又は増強試験の結果を示す図表であ
る。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
Ｆターム(参考） 4B018 MD33 MD81 MD90 MF12
4B064 AF12 CA06 CA21 CB07 DA01
DA10
Claims (5)
- 【請求項１】 酵母に蛋白質分解酵素を含む酵素剤を作
用させることにより、酵母を溶菌させて得られる多糖類
を含有することを特徴とする酵母由来多糖類含有組成
物。 - 【請求項２】 前記酵素剤のグルカナーゼ活性総量が、
原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉｔ／ｇ以下である、
請求項１に記載の酵母由来多糖類含有組成物。 - 【請求項３】 前記多糖類がβ−グルカンを６質量％以
上含むものである、請求項１又は２に記載の酵母由来多
糖類含有組成物。 - 【請求項４】 酵母を、蛋白質分解酵素を含む酵素剤を
用いて溶菌させることを特徴とする酵母由来多糖類含有
組成物の製造方法。 - 【請求項５】 前記酵素剤のグルカナーゼ活性総量が、
原料酵母乾燥質量当たり３０ｕｎｉｔ／ｇ以下である、
請求項４に記載の酵母由来多糖類含有組成物の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001189679A JP2003000197A (ja) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | 酵母由来多糖類含有組成物及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001189679A JP2003000197A (ja) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | 酵母由来多糖類含有組成物及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003000197A true JP2003000197A (ja) | 2003-01-07 |
Family
ID=19028569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001189679A Pending JP2003000197A (ja) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | 酵母由来多糖類含有組成物及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003000197A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003000262A (ja) * | 2001-06-22 | 2003-01-07 | Morinaga & Co Ltd | ほ乳類抗菌ペプチドの発現誘導及び／又は増強組成物、該組成物を含有する飲食品、医薬品及び医薬部外品 |
| WO2005078114A1 (ja) * | 2004-02-13 | 2005-08-25 | Alpron Co., Ltd. | 酵母由来グルカンの製造方法 |
| JP2008541700A (ja) * | 2005-05-05 | 2008-11-27 | センシエント フレイバーズ インコーポレーテッド | βグルカン及びマンナンの製造 |
| JP2010529980A (ja) * | 2007-06-13 | 2010-09-02 | グリコス フィンランド オイ | 栄養組成物 |
| WO2012150683A1 (ja) * | 2011-05-02 | 2012-11-08 | 株式会社 興人 | 酵母エキス抽出残渣の利用法 |
| JP2015093852A (ja) * | 2013-11-12 | 2015-05-18 | 株式会社ファンケル | 抗菌性ペプチドの分泌促進剤 |
| WO2016080490A1 (ja) * | 2014-11-19 | 2016-05-26 | テーブルマーク株式会社 | 酵母細胞の風味改善方法及び食品品質改良剤 |
-
2001
- 2001-06-22 JP JP2001189679A patent/JP2003000197A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003000262A (ja) * | 2001-06-22 | 2003-01-07 | Morinaga & Co Ltd | ほ乳類抗菌ペプチドの発現誘導及び／又は増強組成物、該組成物を含有する飲食品、医薬品及び医薬部外品 |
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| US7745181B2 (en) | 2004-02-13 | 2010-06-29 | Alpron Co., Ltd. | Process for producing yeast-derived glucan |
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| CN103338659A (zh) * | 2011-05-02 | 2013-10-02 | 兴人生命科学株式会社 | 酵母抽提物的提取残渣的利用方法 |
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| WO2016080490A1 (ja) * | 2014-11-19 | 2016-05-26 | テーブルマーク株式会社 | 酵母細胞の風味改善方法及び食品品質改良剤 |
| CN106998773A (zh) * | 2014-11-19 | 2017-08-01 | 泰宝美客株式会社 | 酵母细胞的风味改善方法及食品品质改良剂 |
| US11089806B2 (en) | 2014-11-19 | 2021-08-17 | Tablemark Co., Ltd. | Flavor improvement method for yeast cells and food quality improving agent |
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