JP2002507119A - ヒト受容体型チロシンキナーゼkdr - Google Patents
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- 【特許請求の範囲】 1. ヌクレオチド配列 (配列番号1)より実質的になる、ヒトKDRタンパク質をコードする精製された核 酸分子であって、該核酸分子が、ヒトKDRタンパク質またはその生物学的に活性 な形態をコードしており、該タンパク質中に、少なくとも、848位のVal、498位 のGlu、772位のAla、787位のArg、835位のLysおよび1347位のSerよりなる群から 選ばれるアミノ酸残基が存在することを特徴とする核酸分子。 2. ヒトKDRをコードする精製されたDNA分子であって、該DNA分子が、アミノ 酸配列(配列番号2においては3文字の略語で記載されている)より実質的になるタン パク質をコードしており、該タンパク質が、848位のVal、498位のGlu、772位のA la、787位のArg、835位のLysおよび1347位のSerよりなる群から選ばれるアミノ 酸残基を含有することを特徴とするDNA分子。 3. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための発現ベクター であって、請求項1に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクター。 4. 真核発現ベクターである、請求項3に記載の発現ベクター。 5. 原核発現ベクターである、請求項3に記載の発現ベクター。 6. 組換えヒトKDRタンパク質を発現する宿主細胞であって、請求項3に記載 の発現ベクターを含有することを特徴とする宿主細胞。 7. 組換えヒトKDRタンパク質を発現する宿主細胞であって、請求項4に記載 の発現ベクターを含有することを特徴とする宿主細胞。 8. 組換えヒトKDRタンパク質を発現する宿主細胞であって、請求項5に記載 の発現ベクターを含有することを特徴とする宿主細胞。 9. 該ヒトKDRタンパク質が該発現ベクターから過剰発現される、請求項6に 記載の宿主細胞。 10. 該ヒトKDRタンパク質が該発現ベクターから過剰発現される、請求項7に 記載の宿主細胞。 11. 該ヒトKDRタンパク質が該発現ベクターから過剰発現される、請求項8に 記載の宿主細胞。 12. 組換えヒトKDRタンパク質を含有することを特徴とする、請求項9に記載 の宿主細胞から得た細胞下(subcellular)膜画分。 13. 組換えヒトKDRタンパク質を含有することを特徴とする、請求項10に記載 の宿主細胞から得た細胞下(subcellular)膜画分。 14. 組換えヒトKDRタンパク質を含有することを特徴とする、請求項11に記載 の宿主細胞から得た細胞下(subcellular)膜画分。 15. ヌクレオチド配列 (配列番号1として開示されている)よりなる精製されたDNA分子。 16. アミノ酸配列 (配列番号2においては3文字の略語で記載されている)よりなる精製されたヒ トKDRタンパク質であって、848位のVal、498位のGlu、772位のAla、787位のArg 、835位のLysおよび1347位のSerよりなる群から選ばれるアミノ酸残基を含有す ることを特徴とするヒトKDRタンパク質。 17. 配列番号2に記載されている、請求項16に記載の精製されたヒトKDRタン パク質。 18. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための方法であって 、 (a)請求項3に記載の発現ベクターを適当な宿主細胞中にトランスフェクシ ョン形質導入し、 (b)該発現ベクターからのヒトKDRタンパク質の発現を許容する条件下で工程 (a)の宿主細胞を培養することを含んでなる方法。 19. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のた めの発現ベクターであって、請求項15に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクタ ー。 20. 配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸約1356(848位はバリン残 基である)を含むヒトKDRタンパク質の細胞内部分をコードする精製された核酸 分子。 21. 配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸約1356(772位はアラニン 残基であり、787位はアルギニン残基であり、835位はリシン残基であり、848位 はバリン残基であり、1347位はセリン残基である)を含むヒトKDRタンパク質の 細胞内部分をコードする、請求項20に記載の精製された核酸分子。 22. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための発現ベクター であって、請求項20に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクター。 23. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための発現ベクター であって、請求項21に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクター。 24. 配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸約1356(848位はバリン残 基である)を含むヒトKDRタンパク質の細胞内部分である精製されたタンパク質 断片。 25. 配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸約1356(772位はアラニン 残基であり、787位はアルギニン残基であり、835位はリシン残基であり、848位 はバリン残基であり、1347位はセリン残基である)を含む、請求項24に記載の精 製されたタンパク質断片。 26. 配列番号2に記載のヒトKDRのアミノ酸約790からアミノ酸約1356(848位は バリン残基である)を含む可溶性KDR融合タンパク質をコードする精製された核酸 分子。 27. 該KDR融合タンパク質が、配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸 約1356(772位はアラニン残基であり、787位はアルギニン残基であり、835位はリ シン残基であり、848位はバリン残基であり、1347位はセリン残基である)を含む 、請求項26に記載の精製された核酸分子。 28. GST-KDRをコードする、請求項27に記載の精製された核酸分子。 29. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための発現ベクター であって、請求項26に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクター。 30. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のた めの発現ベクターであって、請求項27に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクタ ー。 31. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための発現ベクター であって、請求項28に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクター。 32. 配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸約1356(848位はバリン残 基である)を含む、ヒトKDRタンパク質の細胞内部分により特徴づけられる精製 されたKDR融合タンパク質。 33. 配列番号2に記載のアミノ酸約790からアミノ酸約1356(772位はアラニン 残基であり、787位はアルギニン残基であり、835位はリシン残基であり、848位 はバリン残基であり、1347位はセリン残基である)を含む、請求項32に記載の精 製されたKDR融合タンパク質。 34. GST-KDRである、請求項33に記載の精製されたKDR融合タンパク質。 35.配列番号2に記載のアミノ酸約1からアミノ酸約644(498位はグルタミン酸 残基である)を含むヒトKDRタンパク質の細胞外部分をコードする精製された核酸 分子。 36. 組換え宿主細胞におけるヒトKDRタンパク質の発現のための発現ベクター であって、請求項36に記載のDNA分子を含んでなる発現ベクター。 37.配列番号2に記載のアミノ酸約1からアミノ酸約790(498位はグルタミン酸 残基であり、772位はアラニン残基であり、787位はアルギニン残基である)を含 む、ヒトKDRタンパク質の細胞外部分である精製されたタンパク質断片。 38. 該KDRオープンリーディングフレームがTyr 1175またはその付近で終結す るように終結コドンが挿入されている、請求項20に記載の単離された核酸分子。 39. DNAベクターpBlueBacHis2B内に含有されている、請求項38に記載の単離さ れた核酸。 40. pBBH-KDR-1である、請求項39に記載のDNAベクター。 41. KDRタンパク質またはタンパク質断片および基質と共に試験化合物を加え る生物学的アッセイを含んでなる、ヒトKDRに拮抗する化合物を選択する方法で あって、該基質が、野生型KDR内の関心のあるドメインにおける測定可能な相互 作用に関与し、それにより、アンタゴニスト化合物が、該KDRタンパク質と相互 作用して、KDR:基質活性における測定可能な減少をも たらすことを特徴とする方法。 42. 該KDRタンパク質がGST/KDR-1である、請求項41に記載の方法。 43. 該基質がpEYである、請求項42に記載の方法。 44. KDRタンパク質またはタンパク質断片および基質と共に試験化合物を加え る生物学的アッセイを含んでなる、ヒトKDRのアゴニストである化合物を選択す る方法であって、該基質が、野生型KDR内の関心のあるドメインにおける測定可 能な相互作用に関与し、それにより、アンタゴニスト化合物が、該KDRタンパク 質と相互作用して、KDR:基質活性における測定可能な増加をもたらすことを特徴 とする方法。 45. 該KDRタンパク質がGST/KDR-1である、請求項44に記載の方法。 46. 該基質がpEYである、請求項45に記載の方法。
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