JP2002502039A

JP2002502039A - 予後アレルギー試験または予後炎症試験

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Publication number: JP2002502039A
Application number: JP2000529614A
Authority: JP
Inventors: ヒューエイ．サンプソン，
Original assignee: ヒューエイ．サンプソン，
Priority date: 1998-01-30
Filing date: 1999-01-28
Publication date: 2002-01-22
Anticipated expiration: 2019-01-28
Also published as: CA2319317C; ATE550665T1; ATE426170T1; EP1051626A1; EP1939628A1; HK1032262A1; AU741635B2; HK1120865A1; AU2347899A; JP4292262B2; CA2319317A1; ES2229673T3; DE69919327D1; DE69919327T2; WO1999039211A1; EP1051626B1; EP1939628B1; ES2383002T3; US6238925B1

Abstract

(57)【要約】小児がアレルギー、特に食物アレルギーを失う可能性を、高次構造エピトープと免疫反応性のＩｇＥ抗体と比較して直鎖状エピトープと免疫反応性のＩｇＥ抗体についてスクリーニングすることにより予測し得る。小児は、最初に、標準的な技術を用いてスクリーニングされて、どの抗原が小児に対してアレルギー性であるかを決定される。次いで、患者由来のサンプル中の免疫グロブリンは、天然から精製された抗原、組換え抗原、還元およびアルキル化された抗原、この抗原のタンパク質分解フラグメント、または長さが４と４０との間のアミノ酸の合成ペプチド（これらは、迅速かつ正確なスクリーニングのために固定化され得る）のいずれかを用いて特徴付けられる。患者由来の抗体は、タンパク質またはペプチドと反応させられて、どのペプチドがこの抗体によって結合されるかが決定される。次いで、これらの抗体は、特徴付けられて、これらの抗体が結合するエピトープが直鎖状であるか、または高次構造であるかが決定される。高次構造エピトープと主に反応する抗体を有する患者は、代表的に、アレルギーを失う。ＩｇＧ抗体の評価に関する類似の方法を用いて、特定の炎症性障害の予後を予測し得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の背景）アメリカ合衆国政府は、ＮＩＡＩＤからの助成金ＡＩ２４４３９およびＤＲＲ
、国立衛生研究所からのＲＲ０００５２によって本発明において一定の権利を有
する。

【０００２】本出願は、１９９８年１月３０日に出願された米国特許出願第６０／０７３，
１７１号に対する優先権を主張する。

【０００３】食物に対する過敏性反応は、生涯の最初の数年間において６％までの小児に影
響を与え（Ｂｏｃｋ，Ｓ．Ａ．１９８７．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ７９：６８３
−６８８）、乳、卵、およびピーナッツが、証明されたアレルギー応答の大部分
の原因である（ＪａｍｅｓＪＭおよびＳａｍｐｓｏｎＨＡ．１９９２．Ｐｅ
ｄｉａｔｒＡｌｌｅｒｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ３：６７−７８）。大部分
の乳アレルギー小児は、生涯の最初の年において牛乳過敏症を発症させ、次いで
、３歳までには約８０％がその反応性を「失う（ｏｕｔｇｒｏｗ）」（すなわち
、臨床的に耐性になる）（Ｈｏｓｔ，Ａ．１９９４．ＰｅｄｉａｔｒＡｌｌｅ
ｒｇｙＩｍｍｕｎｏｌ５：５−３６）。鶏卵およびピーナッツに対する過敏
症は、生涯の２年目においてさらに頻繁に認識される。卵アレルギーは、牛乳ア
レルギーよりも長く持続するようであり、一方、ピーナッツアレルギーは非常に
稀にしか「失われる」ことがない（Ｂｏｃｋ，Ｓ．Ａ．１９８２．ＪＡｌｌｅ
ｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ６９：１７３−１７；Ｓａｍｐｓｏｎ，Ｈ
．Ａ．およびＳ．Ｍ．Ｓｃａｎｌｏｎ．１９８９．ＪＰｅｄｉａｔｒ１１５
：２３−２７；Ｂｏｃｋ，Ｓ．Ａ．およびＦ．Ｍ．Ａｔｋｉｎｓ．１９８９．Ｊ
ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ８３：９００−９０４）。異な
る食物アレルゲンに対する臨床的過敏症の持続性におけるこれらの相違の基礎は
未知である。

【０００４】卵アレルギーは、アトピー性皮膚炎を有する小児のほぼ３分の２に存在する（
Ｓａｍｐｓｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｊ．１９９７Ｒｏｙ．Ｓｏｃ．Ｍｅｄ．９０（別冊
３０）：３−９）。卵タンパク質が全くない食餌が卵アレルギー小児に与えられ
る場合、卵に対するＩｇＥ抗体（例えば、陽性有棘皮膚試験）が数年間持続する
（Ｓａｍｐｓｏｎ１９８９）とはいえ、約３分の１が、２年以内に卵に対する
臨床的耐性を発達させる。オボムコイド（Ｇａｌｄ１）は、鶏卵における優
勢なアレルゲンであり、そして持続性の卵アレルギーを有する小児は、反応性を
「失う」小児よりも有意に高い濃度のＩｇＥ抗オボムコイド抗体を有する（Ｂｅ
ｒｎｈｉｓｅｌ−Ｂｒｏａｄｂｅｎｔ，Ｊ．ら，１９９４．ＪＡｌｌｅｒｇｙ
ＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ９３：１０４７−１０５９）。オボムコイドは、
９つのドメイン内ジスルフィド結合および５つの炭化水素側鎖を含む３つのタン
デムなドメインに配置された１８６アミノ酸から構成される糖タンパク質である
。（Ｋａｔｏら，１９８７．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６：１９３−２０１
）。

【０００５】本発明の目的は、小児がアレルギー、特に食物アレルギーを失う可能性を予測
するための方法および試薬を含むアッセイを提供することである。

【０００６】本発明のさらなる目的は、患者のサンプル中の高次構造エピトープに対する直
鎖状エピトープに対する抗体の存在についてスクリーニングする方法および試薬
を提供することである。

【０００７】本発明のなお別の目的は、炎症性腸疾患を有する患者をスクリーニングして、
この患者がより進行性の難治性の経過を有する可能性を決定する方法および試薬
を提供することである。

【０００８】（発明の要旨）高次構造エピトープと比較した、直鎖状エピトープとのＩｇＥ抗体の免疫反応
性についてスクリーニングすることにより、小児がアレルギー、特に食物アレル
ギーを失う可能性を予測する際に使用される方法および試薬が提供される。この
小児は、最初に標準的な技術を用いてスクリーニングされて、どの抗原がこの小
児にアレルギー性であるかを決定される。次いで、この患者由来のサンプル中の
免疫グロブリンは、迅速かつ正確なスクリーニングのための固定化され得る、天
然から精製した抗原、組換え抗原、還元およびアルキル化された抗原、この抗原
のタンパク質分解フラグメント、または長さが４と４０との間のアミノ酸、好ま
しくは６〜１０アミノ酸の合成ペプチドのいずれかを用いて特徴付けられる。患
者由来、代表的には血清サンプルまたは血漿サンプル中に存在する抗体は、この
タンパク質またはペプチドと反応させられて、どのペプチドがこの抗体によって
結合されるかが決定される。次いで、これらの抗体は、抗体が結合するエピトー
プが直鎖状であるかまたは高次構造をとっているかを決定するために特徴付けら
れる。高次構造エピトープと主に反応性の（すなわち、還元およびアルキル化さ
れたタンパク質または合成直鎖状ペプチドと比較して、天然のタンパク質または
タンパク質分解フラグメントと反応性の）抗体を有する患者は、代表的に、アレ
ルギーを失う。直鎖状エピトープと主に反応性である患者は、反応性を脱しない
かもしれず、そして耐性を誘導するように処置される必要があり得る。

【０００９】スクリーニング方法は、卵アレルギー患者由来のプールした血清およびオボム
コイド配列由来の重複合成デカペプチドを利用する例において実証される。オボ
ムコイドは、５つのアレルギー性ＩｇＥ結合エピトープを保有することが見出さ
れた。個々の患者血清を用いてアレルギー性エピトープを評価することにより、
３パターンのエピトープ結合を明らかにした：３つ全てのオボムコイドドメイン
におけるデカペプチドに対する広範なＩｇＥ結合、第１ドメインにおけるペプチ
ドに対する優先的なＩｇＥ結合、およびいずれの合成ペプチドに対しても実質的
にＩｇＥ結合が存在しない。このことは、後者のグループの大部分のＩｇＥ抗体
が高次構造エピトープを認識したことを示す。全ての患者は、直鎖状合成ペプチ
ドに対する広範なＩｇＧ抗体結合を有しており、一方、全ての非卵アレルギーコ
ントロールは高次構造エピトープのみを認識した。直鎖状デカペプチドに対する
広範なＩｇＥ結合を有するグループの患者は、より年長であって、かつ卵摂食後
に、合成ペプチドに対するＩｇＥ抗体をほとんど有さない患者グループよりも重
篤な、全身性のアレルギー症状を有する傾向があった。これらの知見は、示差的
な抗原プロセシングおよび抗体−エピトープ構造認識が、アレルゲン感受性の臨
床的経過に役割を果たすことを示す。

【００１０】ＩｇＧ抗体またはＩｇＡ抗体の評価のための類似の方法を用いて、特定の炎症
性障害、特に胃腸管を含む炎症性障害（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、お
よびセリアック病）の予後を予測し得る。

【００１１】（発明の詳細な説明）ＩｇＥ特異的抗体の作製において、Ｂ細胞は、天然のタンパク質上で曝露され
たオリゴペプチドへの表面ＩｇＭの結合に続いて活性化される。結果的に生成さ
れたＩｇＥ抗体は、８〜２０の連続的な（一連の）アミノ酸を示す直鎖状のエピ
トープまたはアレルゲンの異なる領域由来のアミノ酸残基を包含する高次構造エ
ピトープで指向され得る。直鎖状（例えば、Ｐｈｌｐ１；オオアワガエリ（
Ｂａｌｌら、１９９４．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２８２３２−２８
２４２））および高次構造的（ＢｅｔｖＩ；カバノキ花粉（Ｌａｆｆｅｒら
、１９９６．ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５７：４９５３−４９６２））の両方の
Ｂ細胞エピトープは、吸入されるエアロアレルゲンとして定義されているが、後
者が優性であると推定されている。食事性アレルゲンは、腸関連リンパ系組織の
細胞への吸収および取り込みに先立って、広範な化学的およびタンパク分解性消
化を受けるので、食事アレルゲン性のエピトープは、現実には優先的に直鎖状と
なることが推測される。しかし、卵アレルギー患者由来のプールされた血清を利
用する以前の研究において、５ＩｇＥ抗体および７ＩｇＧ抗体結合部位が、オ
ボムコイドを含む１８６アミノ酸残基の間に同定された（ＣｏｏｋｅおよびＳ
ａｍｐｓｏｎＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７１５９、２０２６−２０３２）
。還元およびアルキル化（すなわち「直鎖化」）されたオボムコイドの評価は、
全ての患者が、直鎖状エピトープを認識する抗オボムコイド抗体を有するわけで
はないこと、およびいくらかの患者が、主に高次構造エピトープ抗体を有するこ
とを示唆する。

【００１２】以下の実施例において、重複する直鎖状デカペプチドおよび直鎖化された（還
元およびアルキル化された）全てのオボムコイドを利用し、直鎖状オボムコイド
エピトープを認識する個々の患者のＩｇＥ抗体を比較した。血清は、オボムコイ
ドエピトープをスクリーニングするために、相対的に高レベルの卵特異的ＩｇＥ
抗体（３５ｋＵ_A／Ｌ以上）を有する１７人の卵アレルギーの小児から選択された。合成されたデカペプチドへのＩｇＥの結合を比較した場合、３つの異なる抗
体結合のパターンが存在することが明らかとなった。図３ａ〜３ｃに示したよう
に、ある患者グループのＩｇＥ抗体は、以前に同定されていたほとんどのオボム
コイドアレルゲン性エピトープ（ＣｏｏｋｅおよびＳａｍｐｓｏｎ１９９７）
を認識し、そしてあるグループのＩｇＥは、主に第１のオボムコイドドメインに
おいてアレルゲン性エピトープを認識し、そして第３のグループは、合成された
デカペプチドのいずれに対しても実質的にＩｇＥ結合を有さなかった。研究され
た卵アレルギー患者において、合成デカペプチドに対するオボムコイド特異的Ｉ
ｇＥ結合の３つのパターンが見られた。メジアン累積ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌ
ｄＩＯＤスコアに反映されるように、患者のあるグループ（グループ１；
図３ａ）は、３つ全てのオボムコイドドメインにおけるエピトープに対するＩｇ
Ｅ抗体を有し、あるグループは、主に第１のオボムコイドドメインにおけるエピ
トープに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体を有し（グループ２；図３ｂ）、
そしてあるグループは、いかなる合成デカペプチドに対しても極わずかなＩｇＥ
抗体を有した（グループ３；図３ｃ）。

【００１３】卵特異的ＩｇＥ抗体の量は、３つのグループで類似していたので、このことは
、患者の第３のグループが、主に高次構造エピトープを認識するオボムコイド特
異的ＩｇＥ抗体を保有することを示唆した。この仮定は、「天然の」オボムコイ
ドおよび「直鎖化された」（還元およびアルキル化された）オボムコイドに対す
る患者のオボムコイド特異的ＩｇＥ結合の比較の知見により支持された（図５ａ
）。天然のオボムコイドに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体の結合は、第３
の患者グループと類似しているが、第３の患者グループのオボムコイド特異的Ｉ
ｇＥの約２２％のみが、天然の形態と比較して、直鎖化されたオボムコイドと結
合した。一方、第１のグループの５０％より多くのオボムコイド特異的ＩｇＥが
、オボムコイドの直鎖化形態と結合した。

【００１４】これらの研究は、アレルギー（特に、食物アレルギー）が「増殖する（ｏｕｔ
ｇｒｏｗ）」可能性のある任意の特定の個体を決定するための方法およびアッセ
イキットの開発を導いた。

【００１５】（アレルギー増殖の可能性を決定するためのアッセイ）（方法）この方法は、小児が、直鎖状エピトープと比較して高次構造エピトープに対し
て、寛容なまたは「増殖する」アレルギーによりなりやすいようであるという発
見に基づいている。従って、試験は、代表的に血液または血清サンプル、最も好
ましくは小児からのサンプルを用いて行なわれるが、任意の年齢の個体が試験さ
れ得る。これらの個体は、まず標準的な試験（例えば、皮膚のプリックテストま
たは個体が抗原に対してアレルギーである場合、および個体がアレルギーである
範囲において、異なる力価で１つ以上の抗原を注入することにより決定する）を
用いるアレルギーのスクリーニングにより同定される。抗体は、代表的には、患
者の血液サンプルを取りだし、次いで赤血球を除き、そして残る血清または血漿
を試験することにより得られる。サンプルは、抗原（ＣｏｏｋｅおよびＳａｍｐ
ｓｏｎ１９９７）によって示される定義されたエピトープを有するＩｇＥの反
応性について直接的にスクリーニングされ得るか、または当業者に公知の方法を
用いて他の抗体からＩｇＥ抗体を分離し、そして反応性についてスクリーニング
され得る。必要に応じて、サンプルはまた、エピトープとのＩｇＧ抗体の反応性
についてもスクリーニングされ得る。

【００１６】本実施例に記載した研究における１７人の卵アレルギー患者すべてが、生後２
年のうちに自身の卵感受性を発現したが、第１の患者グループは、より年長であ
り、そして第３の患者グループよりも卵の摂取に続くアレルギー反応が、より著
しかった。第１の患者グループの多数の直鎖状アレルゲン性エピトープに対する
広範なオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体結合は、主なピーナッツ抗原であるＡｒａ
ｈ１およびＡｒａｈ２に対するピーナッツアレルギー患者において見られる
ものと類似している（Ｓｔａｎｌｅｙら、１９９７Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．＆Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ．３４２、２４４−２５３）。ピーナッツアレルギーを
有する患者が、「遅延性の」（生涯にわたる）ピーナッツに対する反応性を有す
る傾向である（ＢｏｃｋおよびＡｔｋｉｎｓ１９８９）ことは、「遅延性の」
食事過敏性が、直鎖状エピトープに対するＩｇＥ抗体の有意な量の増加に関連す
る可能性を示唆する。卵に対するアナフィラキシー反応を繰り返し試験された３
２歳の卵アレルギー個体（もともとの１７人の試験された個体の一部ではない）
は、この研究の第１の患者のグループにおいて見られたように、直鎖状デカペプ
チドに対して広範に結合するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体を有することに注目
するべきである。

【００１７】実施例は、エピトープ構造に対するＩｇＥ結合（すなわち、直鎖状対高次構造
）と「遅延性の」食事過敏性の増大との間の関連を支持する。乳児は、消化過程
の発達における二次的な成熟の遅延（例えば、胃の酸性度、タンパク質分解酵素
の活性、ムチン組成物など、ならびに抗原取りこみの上昇）のためであると推定
される、食事に続く血液循環における食物タンパク質のレベルの増加を示す（Ｈ
ｙｍａｎら、１９８５．ＪＰｅｄｉｔａｒ１０６：４６７−４７１；Ｌｅｂ
ｅｎｔｈａｌ，Ｅ．およびＰ．Ｃ．Ｌｅｅ．１９８０．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ
６６：５５６−５６０；Ｓｈｕｂら、１９８３．ＢｉｏｃｈｅｍＪ２１５：
４０５−４１１；Ｂｒｅｓｓｏｎら、１９８４．ＰｅｄｉａｔｒＲｅｓ１８
：９８４−９８７）。「漏出性の」乳児の腸は、有意な量の高次構造的に無傷の
食物タンパク質が局部的なＢ細胞（活性化の際に、遺伝的に（ｇｅｎｅｔｉｃａ
ｌｌｙ）前もって処理された宿主においてオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体を生成
する）と接近することを可能にする。胃腸管の成熟を伴う、高次構造的に無傷な
より少ないタンパク質は、リンパ系組織およびＩｇＥ産生組織マスト細胞に関連
した腸の活性化に接近可能であり、臨床的な反応性の低下およびアレルゲン特異
的ＩｇＥ抗体合成の最終的な損失を生じる。完全な卵タンパク質の食事性の排除
は、さらに臨床的反応性の低下を促進するが、微量な卵タンパク質に対する連続
した曝露は、直鎖状オボムコイドエピトープおよび遅延性の反応性に対するＩｇ
Ｅ抗体の増大を生じる。成熟した腸において、微量な免疫学的に無傷なタンパク
質（おそらく、直鎖状エピトープ）は、胃腸バリアを透過する（Ｈｏｓｔ１９
９４；Ｂｒｕｎｎｅｒ、Ｍ．およびＷａｌｚｅｒＭ．１９２８．ＡｒｃｈＩ
ｎｔｅｒｎＭｅｄ４２：１７３−１７９；ＷｉｌｓｏｎＳＪおよびＷａｌ
ｚｅｒＭ．１９３５．ＡｍＪＤｉｓＣｈｉｌｄ５０：４９−５４；
Ｈｕｓｂｙら、１９８５．ＳｃａｎｄＪＩｍｍｕｎｏｌ２２：８３−９２
）。高次構造的に無傷なタンパク質は、おそらく排除される。これは、臨床的な
応答性の低下の可能性が、診断の時点での患者の年齢、原因となるアレルゲンの
除去の程度、および問題のアレルゲン（ピーナッツ、木の堅果および海産食物ア
レルギーは、まれに「増大」する）に関連しているという観察と一致する。より
若年の小児は、高次構造ＩｇＥを産生する。食事過敏症となった時点でより若い
患者は、診断され、そして／またはより厳密にアレルゲンが除去され、患者は、
彼／彼女の食物アレルギーをより増大させるようである（Ｂｏｃｋ１９８２；
ＳａｍｐｓｏｎおよびＳｃａｎｌｏｎ１９８９；Ｐａｓｔｏｒｅｌｌｏら、１
９８９．ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ８４：４７５−４８
３）。

【００１８】（アレルゲン）任意の抗原が、本明細書に記述のようにスクリーニングに用いられ得る。最も
典型的な抗原は、卵、木の堅果、ピーナッツおよび牛乳のような食事アレルゲン
である。他の一般的なアレルゲンは、花粉、カビ、およびチリダニならびに昆虫
、家畜（イヌ、ネコ、トリ）および植物を含む。アレルゲンは、ＩｇＥ応答を提
供する抗原である。

【００１９】高次構造エピトープとの反応性を試験するために、アレルゲンは、無傷なタン
パク質、組換えタンパク質、またはタンパク質分解性フラグメントとして利用さ
れ得る。アレルゲンの特性は、発現宿主の選択によって改変され得る（例えば、
細菌発現系は、代表的にはタンパク質をグリコシル化しない、酵母およびバキュ
ロウイルス／昆虫系は、改変されたグリコシル化を産生し、そしてさらに真核生
物発現系においては、グリコシル化におよびリン酸化おいて改変され得、反応性
変化し、そしてさらにエピトープを特徴づける）。

【００２０】直鎖状エピトープは、短いタンパク質分解性フラグメントあるいは組換えＤＮ
Ａの発現または標準的な技術を用いることにより合成的に作製されるペプチドで
あり得る。ペプチドは、代表的には４〜４０アミノ酸長であり、より好ましくは
６〜２０、最も好ましくは８アミノ酸長である。これらは、公知のアミノ酸配列
に基づいて設計され、通常はＧｅｎＢａｎｋのような公的な供給源から入手可能
である。ペプチドは、好ましい実施態様において１〜９アミノ酸残基２〜１０ア
ミノ酸残基などから始まってタンパク質に合成される。

【００２１】結合について試験されるアレルゲンまたはそれらの一部は、好ましくは、固定
され（例えば、９６ウェルプレート中に、またはクロマトグラフィーペーパーの
切片上に）、次いで実施例に記載されたように結合について試験される。アレル
ゲンは、液層試験またはＥＬＩＳＡもしくは蛍光定量的な技術を用いる試験のた
めに粒子または他の公知の手段に結合され得る。

【００２２】（キット）この方法は、好ましくは、患者の予後を特徴付けるのに十分な直線状エピトー
プおよび高次構造エピトープと反応性の患者のサンプルにおいてＩｇＥ抗体を同
定するための試薬を含むキットを使用して、実施される。代表的なキットは、１
以上のアレルゲンに対する直線状または高次構造のいずれかのエピトープをその
中で固定化している多ウエルデバイスを含む。このキットもまた、ＩｇＧからの
ＩｇＥの検出または分離のための試薬（例えば、ＩｇＥに特異的な蛍光標識イム
ノグロブリンおよび非結合物質を洗浄除去するための緩衝液）を含む。このキッ
トは、異なる力価で１以上の直線状エピトープおよび１以上の高次構造エピトー
プに対する反応性を評価し、次いでこれらの相対的な比率を決定することにより
、高次構造抗体に対する直線状抗体へのＩｇＥの相対量を決定するために使用さ
れ得る。

【００２３】この試験の結果は、代表的には、ネガティブコントロールまたはポジティブコ
ントロールに対する対照のない、高次構造エピトープに対する直線状エピトープ
との反応性のＩｇＥの比率であるが、この試験キット試薬およびアッセイ条件の
整合性を保証するために、直線状エピトープまたは高次構造エピトープのいずれ
かと反応性のポジティブおよびネガティブなＩｇＥサンプルを含むことが望まれ
得る。

【００２４】（アレルギー、特に食物アレルギーの処置の方法）高次構造エピトープと反応性の主要なＩｇＥを有するこれらの個体は、直線状
エピトープとの反応性によって主に特徴付けられる個体よりアレルギーをより増
加するようである。このことはさらに、実施例によって実証される。アトピーに
対して素因化している乳児において、直線状エピトープに対する高次構造エピト
ープへのＩｇＥ抗体の発生は、胃腸管、腸の未成熟性およびアレルゲンの曝露に
よる抗原プロセス化における成熟遅延および／または分子的な相違を一部、反映
し得る。アトピーを発生させる「高い危険性」を有する乳児におけるアレルギー
の予防に関する研究は、生後少なくとも初年の間の牛乳（主要な食物アレルゲン
）の完全な回避によって、食物制限のない乳児と比較してミルクアレルギーの少
ない結果を得ることを示している（Ｚｅｉｇｅｒら、１９８９．ＪＡｌｌｅｒ
ｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ８４：７２−８９；Ｈａｌｋｅｎら、１９９
２．Ａｌｌｅｒｇｙ４７：５４５−５５３）。

【００２５】上記の情報に基づいて、患者がアレルギー患者における耐性を誘導するために
免疫療法様式を受けるべきか否かを決定する場合の補助のための一般化したスク
リーニング方法およびスクリーニングのための処方物を開発し得る。このスクリ
ーニングの結果に基づいて、処方され得る免疫療法様式は、このアレルゲン（例
えば、患者のＩｇＥと反応性のエピトープを含む食物）の完全な回避、または脱
感作療法を含む。

【００２６】（炎症障害における予後を評価するための方法）食物タンパク質に対するＩｇＧ抗体は、食物抗原に曝露した個体全てにおいて
、実質的に検出され得るが（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、ＡｎｎＡｌｌｅｒｇｙ
５３：６６５−６７２；Ｓａｖｉｌｈａｔｉら、１９８７．ＡｃｔａＰａｅｄ
ｉａｔｒＳｃａｎｄ７６：１−６）、ＩｇＧ食物特異的抗体のレベルは、年
齢と共に減少する傾向にある（Ｋｌｅｔｔｅｒら、１９７１ＩｎｔＡｒｃｈ
ＡｌｌｅｒｇｙＡｐｐｌＩｍｍｕｎｏｌ４０：６５６−６６６）。食物
アレルギーまたは炎症性腸疾患（例えば、セリアック病、炎症性腸疾患など）を
有する患者は、顕著に上昇したレベルの食物特異的ＩｇＧを有する傾向である（
Ｍａｙら、１９７７．ＣｌｉｎＡｌｌｅｒｇｙ７：５８３−５９５）。同じ
ことがＩｇＡ抗体の場合において予期され、これは、胃腸管の管壁において主に
見出される。

【００２７】この実施例は、遅延性の卵アレルギーを有する患者が直線状オボムコイドエピ
トープと結合する多量のＩｇＥ抗体を有するが、一方、より若い患者は、高次構
造エピトープと結合する主要なＩｇＥ抗体を有することを実証する。さらに、卵
アレルギーの患者は、直線状および高次構造エピトープに対する、有意な量のオ
ボムコイド特異的ＩｇＧ抗体を発生させるが、一方、非卵アレルギー個体は、高
次構造エピトープに対してほぼ排他的にオボムコイド特異的ＩｇＧを発生させる
。

【００２８】上記のように、上昇したレベルの食物特異的ＩｇＧ抗体はまた、胃腸管の炎症
により特徴付けられる障害、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病
などにおいてみられる（Ｓａｍｐｓｏｎ、Ｈ．Ａ．：１９９５１１（６）、５
４８〜５５３）。食物特異的抗体の上昇は二次的にこれらの障害において腸の浸
透性を上昇させ、そして病原性でないと考えられている。合併症のない炎症性腸
障害において、これらの食物特異的ＩｇＧ抗体は、高次構造エピトープで指向さ
れるようである。しかし、進行性で難治性の腸疾患において、食物特異的ＩｇＧ
抗体は、直鎖状エピトープで指向されると考えられており、これは、異常な免疫
応答および好ましくない予後を示す。

【００２９】実施例によって示されるように、直鎖状デカペプチドに対するオボムコイド特
異的ＩｇＧ抗体結合が評価される場合、卵アレルギー患者群とコントロールとの
間に有意差がみられた。直鎖状デカペプチドに対する最大量のオボムコイド特異
的ＩｇＥを有する第１の患者群は、第２および第３の患者群よりもオボムコイド
デカペプチドに対するオボムコイド特異的ＩｇＧ抗体結合が有意に少ない（図４
ａ〜４ｃ）。累積的ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ１ＯＤスコアのメジアン
において反映されるように、卵アレルギー患者（図４ａ〜４ｃ）は、全ての３つ
のオボムコイドドメインにおけるエピトープに対する大量のＩｇＧ結合、および
非卵アレルギーのコントロール（卵アレルギーのないアトピー性皮膚炎患者（図
４ｄ）および非アレルギーの正常コントロール（図４ｅ））よりも有意に多くの
ＳＰＯＴデカペプチドに対するオボムコイド特異的ＩｇＧ抗体を有していた。卵
アレルギー患者の第２群（図４ｂ）および第３群（図４ｃ）は、第１の群（図４
ａ）よりも有意に多くの合成ペプチドに対するＩｇＧ抗体結合を有していた。し
かし、天然型と比較して「直鎖化された」オボムコイドに対するオボムコイド特
異的ＩｇＧ結合のパーセンテージには有意な差はなかった（図５ｂ）。卵に対し
てアレルギーでないアトピー性皮膚炎患者および非アレルギー性の正常コントロ
ールからなるコントロール群は、天然のオボムコイドに対して有意なＩｇＧ抗体
を有するが、直鎖状デカペプチドに対するオボムコイド特異的ＩｇＧ抗体は実質
的には有さない（図４ｄ〜４ｅ）。これらの結果は、接食したアレルゲンに対す
る免疫応答における食物アレルギー個体と非アレルギー個体との間の抗原プロセ
シングのレベルでの質的な差を示唆する。

【００３０】従って、合併症のない炎症性腸障害と比較した場合、進行性の難治性腸疾患に
より特徴付けらるようである炎症性障害を有する個体についてのスクリーニング
が可能である。この方法および試薬は、高次構造エピトープと免疫反応性のＩｇ
Ｅに対する直鎖状エピトープに免疫反応性のＩｇＥの相対比率に基づき個体がア
レルギーを失う可能性を決定するためのものと同様であるが、高次構造エピトー
プに対するＩｇＧの免疫応答性に対して、直鎖状エピトープに対するＩｇＧの免
疫応答性を調べる。

【００３１】本発明は、以下の非制限的な実施例に対する参考により、さらに理解される。

【００３２】（実施例：抗卵ＩｇＥおよび抗卵ＩｇＧの免疫反応性を特徴付けるための患者
サンプルのスクリーニング）（方法および材料）略号：ＰＢＳ−リン酸緩衝化生理食塩水ＳＤＳ−ＰＡＧＥ＝ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動

【００３３】（患者集団）アトピー性皮膚炎の評価を示す小児１７名（年齢のメジアン：４歳、範囲１〜
１５歳；男児１０名、女児１０名）を、Ｓａｍｐｓｏｎ、Ｈ．Ａ．およびＣ．Ｃ
．ＭｃＣａｓｋｉｌｌ．１９８５．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ１０７：６９９〜６７
５；およびＳａｍｐｓｏｎ、Ｈ．Ａ．１９９２．ＡｃｔａＤｅｒｍＶｅｎｅ
ｏｒｏｌ（Ｓｔｏｃｋｈ）Ｓｕｐｐｌ．１７６：３４〜３７に記載のように、二
重盲検プラシーボコントロールされた卵チャレンジによる卵過敏症について診断
した。静脈穿刺により血液を得、そして血清を分離し、この研究で用いるまで−
２０℃で凍結保存した。血清の卵特異的ＩｇＥ濃度は、ＣＡＰ−ＲＡＳＴＦＥ
ＩＡ ^TM系（ＰｈａｒｍａｃｉａＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｕｐｐｓａｌａ、
Ｓｗｅｄｅｎ）を利用して決定した。

【００３４】（還元およびアルキル化されたオボムコイドの調製）オボムコイドを、ＣｏｏｋｅおよびＳａｍｐｓｏｎ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
９９７に記載のように、全オボムコイドを５０ｍｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳに溶解
して還元およびアルキル化した。

【００３５】（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）タンパク質を以前に公開された（Ｂｅｒｎｈｉｓｅｌ−Ｂｒｏａｄｂｅｎｔら
、１９８９．Ｊ．ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ８４：７０１〜
７０９）ようなＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離した。タンパク質サンプルの濃度を
、アミドブラックにより染色し、そしてレーザーデンシトメトリーにより分析し
た場合、等価のシグナルを与えるように最適化した。引き続き、分離したタンパ
ク質をニトロセルロースに転写し、次いでアミドブラックで染色して総タンパク
質転写を見るか、または患者の血清を調査するために０．５％のブタのゼラチン
を用いてＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎでブロックした。

【００３６】（患者の血清でのイムノブロットの調査）患者の血清をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（ゼラチン添加）に１：１０で希釈し、室温
で穏やかに撹拌しながら２時間イムノブロットとともにインキュベートし、そし
て以前に記載（ＣｏｏｋｅおよびＳａｍｐｓｏｎ１９９７）のようにＩｇＥ抗
体およびＩｇＧ抗体について発色させた。イムノブロットは、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ
（ＳｉｇｍａＦＡＳＴ；ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍ
Ｏ）で発色させ、そしてレーザーデンシトメーター（ＵｌｔｒａｓｃａｎＳＬ
；ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ、ＰｉｓｃａｔａｗａｙＮＪ）でスキ
ャンし、オボムコイド特異的抗体結合の量を決定した。

【００３７】（ＩｇＥエピトープおよびＩｇＧエピトープについてのスクリーニング）本研究において、誘導体化されたセルロース膜であるＳＰＯＴｓ^TM膜（Ｇｅｎ
ｏｓｙｓＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；ＴｈｅＷｏｏｄｌａｎｄｓ、ＴＸ）を用い
て、８×１２の行列の小さい円形のスポット状にデカペプチドを作製した。この
方法を用いて、Ｇａｌｄ１の全配列をあらわす８９のデカペプチドを作製し
た；８アミノ酸が重複したペプチド、例えば、ペプチド＃１＝Ｇａｌｄ１ア
ミノ酸１〜１０、ペプチド＃２＝Ｇａｌｄ１アミノ酸３〜１２、ペプチド＃
３＝Ｇａｌｄ１アミノ酸５〜１４など。

【００３８】患者血清を用いた重複Ｇａｌｄ１ペプチドのスクリーニングの前に、ＳＰ
ＯＴ膜を０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、０．５％のブタのゼラチンおよび１％の
ヒト血清（卵タンパク質に対する検出可能ＩｇＥを有さないドナー由来）を含有
するＰＢＳ（ｐＨ７．２）でブロックした。個々の患者血清を０．０１％のＴｗ
ｅｅｎ２０および０．５％のブタのゼラチンを有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅ
ｎ＋ゲル）で１：１２に希釈し、２時間、室温でロッキングプラットフォーム上
でインキュベートし、そして以前に記載（ＣｏｏｋｅおよびＳａｍｐｓｏｎ１
９９７）のように、ＩｇＥ抗体について発色させた。患者のＩｇＧ抗体を検出す
るために、患者の血清をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋ｇｅｌに１：１０に希釈した。イ
ンキュベーション時間および洗浄は、ＩｇＥ抗体に関してと同様であった。用い
られた検出抗体は、ウサギの抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ結合体（ＤａｋｏＣｏｒｐ
、ＳａｎｔａＢａｒｂａｒａ，ＣＡ）であった。この膜は、ＥＣＬの化学発光
ＨＲＰ検出キット（ＡｍｅｒｓｈａｍＡｒｌｉｎｇｔｏｎＨｅｉｇｈｔｓ，
ＩＬ）を用いて染色させた。

【００３９】Ｘ線フィルムの現像後、それぞれの個々のペプチドスポットの光学密度（ＯＤ
）を、反射デンシトメーター（ＴｈｅＡｎｓｗｅｒＩＩＭａｃＢｅｔｈ，
Ｎｅｗｂｕｒｇｈ，ＮＹ）を用いて測定した。それぞれのペプチドスポットのＯ
Ｄを、実際のペプチドスポットのＯＤとバックグラウンドのフィルムのＯＤとの
間の差として記録した。８９のデカペプチドのそれぞれに、「累積的なＳＰＯＴ
」ＩｇＥおよびＩｇＧＧａｌｄ１ＯＤスコアを割り当てた。これは研究
した１７例の患者についての８９のＧａｌｄ１ＳＰＯＴペプチドのそれぞ
れについてのＯＤの合計を示す。それぞれの患者は、「累積的な患者」ＩｇＥお
よびＩｇＧＧａｌｄ１ＯＤスコアを受け取った。これは、その患者につ
いての８９のＧａｌｄ１ＳＰＯＴペプチドのすべてのＯＤの合計を示す。

【００４０】ＳＰＯＴ膜は、再生されそして８〜１０回、再調査され得る。この膜を脱イオ
ン化蒸留水中で徹底的に洗浄した後、これを３５ＭｍのＳＤＳおよび０．１％の
ＢＭＥを含有する８Ｍ尿素中で、１０分間、３回洗浄し、それぞれの回にＩｇＥ
を剥離するかまたは３０分間でＩｇＧを剥離した。次いで、この膜を５０％エタ
ノール中で３回（１０分洗浄）および、メタノール中の１０％酢酸で２回（１０
分洗浄）し、次いで再調査のために再ブロックした。患者の血清の非存在下での
剥離手順の後、二次抗体単独（抗ヒトＩｇＥまたは抗ヒトＩｇＧ）での膜のイン
キュベーションは、非特異的結合を示さなかった。これは剥離手順がＳＰＯＴ膜
を成功裏に再生したことを示す。

【００４１】（統計的な解析）データの解析はすべて、非パラメトリック検定、−対２サンプル符号検定およ
びマン−ホイットニー検定で実行した。

【００４２】（結果）二重盲検プラシーボ制御の食物チャレンジにより確認した卵アレルギーを有す
る１７人の小児由来の血清を、この試験において用いた。すべて、血清の卵特異
ＩｇＥが著明に上昇していた；メジアン＝８３Ｋｕ_a／Ｌ；範囲＝３５〜１００ｋＵ_A／Ｌを超えるまで。個々の患者の血清を、ＩｇＥペプチド特異的およびＩｇＧペプチド特異的抗体についてＳＰＯＴ膜を探査するために用いた。図１は、
８９の合成ペプチドの各々について累積的ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌｄ１
Ｏ．Ｄ．スコアを示す。ペプチド＃１、＃５、＃６、＃２４、＃２５および＃５
７は、５０％より多くの患者からのＩｇＥ抗体により結合された。これは、これ
らのペプチドが「主要なアレルギー性エピトープ」を表すことを示す。これらの
主要なアレルギー性エピトープは、Ｇａｌｄ１アミノ酸１〜１０（ペプチド
１、ＡＥＶＤＣＳＲＦＰＮ）、９〜２０（ペプチド５および６、ＰＮＡＴＤＫＥ
ＧＫＤＶＬ）、４７〜５８（ペプチド２４および２５、ＳＩＥＦＧＴＮＩＳＫＥ
Ｈ）および１１３〜１２２（ペプチド５７、ＶＥＱＧＡＳＶＤＫＲ）を示す。有
意なＩｇＥＧａｌｄ１ＳＰＯＴＯＤスコアを有する他の合成ペプチド
としては、ペプチド２（アミノ酸３〜１２、ＶＤＣＳＲＦＰＮＡＴ）、ペプチド
４（アミノ酸７〜１６、ＲＦＰＮＡＴＤＫＥＧ）、ペプチド２１（アミノ酸４１
〜５０、ＣＬＬＣＡＹＳＩＥＦ）、ペプチド３８および３９（アミノ酸７５〜８
６、ＮＴＴＳＥＤＧＫＶＭＶＬ）、ペプチド５３（アミノ酸１０５〜１１４、Ｅ
ＣＬＬＣＡＨＫＶＥ）および８９（アミノ酸１７７〜１８６、ＴＬＴＬＳＨＦＧ
ＫＣ）が挙げられた。これらのペプチドのほとんどは、６名以上の患者からのＩ
ｇＥ抗体により結合された。図２は、８９の合成デカペプチドのそれぞれについ
て累積的ＩｇＧＧａｌｄ１ＳＰＯＴＯ．Ｄ．スコアを示す。ＩｇＥ結
合と比較してより大量のＧａｌｄ１合成ペプチドに対するＩｇＧ抗体の結合
が存在した。

【００４３】ＳＰＯＴ膜へのＩｇＥ抗体結合；それぞれの患者についてのデカペプチドを比
較する場合、３つの異なるパターンのペプチド結合がみられた：１群−２つ以上
のＧａｌｄ１ドメインにおけるＩｇＥ抗体結合エピトープ、２群−主に第１
のＧａｌｄ１ドメインにおけるペプチドに対して特異的なＩｇＥ抗体、およ
び３群−ＳＰＯＴ膜上の任意のデカペプチドに対する無視し得るＩｇＥ結合。３
つの患者群（１群（ｎ＝５）−８０ｋＵ_A／Ｌ、群２（ｎ＝５）−９２ｋＵ_A／Ｌ
、および３群（ｎ＝７）−７３ｋＵ_A／Ｌ）の間に血清の卵特異的ＩｇＥ濃度について有意差（ｐ＞０．４）は、存在しないが、３つの患者群についてのメジア
ン累積的ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌｄ１ＯＤスコアは、有意に異なってい
た。１群の患者は、２群（メジアン累積ＯＤ＝７．０；ｐ＜０．０５）または
３群（メジアン累積ＯＤ＝２．７；ｐ＜０．０１）のいずれよりも有意に多い合
成Ｇａｌｄ１デカペプチドに対するＩｇＥ結合（メジアン累積ＯＤ＝２７．
９）を有し、そして２群は、３群よりも有意に多いＧａｌｄ１ペプチドに対
するＩｇＥ結合を有する（ｐ＜０．０５）。それぞれの患者群についての個々の
デカペプチドに対するＩｇＥ結合のメジアンを、図３に示す。興味深いことに、
１群および２群の患者は、３群の患者と比べてより長く持続する卵アレルギーを
有し、より高年齢である傾向があった；年齢のメジアンは、それぞれ１０および
６歳であり、全ての患者は、生後２年のうちに診断されている。

【００４４】図４ａ〜４ｅは、３つの患者群およびコントロールの２つのセットのそれぞれ
についての個々のデカペプチドに対するＩｇＧ結合のメジアンを示す。累積的患
者ＩｇＧＧａｌｄ１ＯＤスコアのメジアンにおける有意差が、３つの患者
群およびコントロールの間でみられた：１群−５２．４、２群−７０．６、３群
−６９．８、非食物アレルギーのアトピー性皮膚炎コントロール（ｎ＝５）−９
．６、非アレルギー性コントロール（ｎ＝５）−１１．６。１群の患者は、２群
および３群よりも有意に少ないＧａｌｄ１デカペプチドに対するＩｇＧ抗体
結合２を有しており（ｐ＜０．０１）、一方、２群と３群との間には、有意差は
なかった（ｐ＝０．４）。３つの卵アレルギー患者群は、２つの非卵アレルギー
コントロール群よりも、有意に多い、オボムコイドデカペプチドに対するＩｇＧ
結合を有していた（ｐ＜０．０１）。非卵アレルギーのアトピー性皮膚炎患者コ
ントロールおよび非アトピー性のコントロールは、８９個のＳＰＯＴデカペプチ
ドに対する、類似の（ｐ＝０．４）、最小のＩｇＧ抗体結合を示した。

【００４５】３群の卵アレルギー患者による合成ペプチドに対するＩｇＥ結合の欠如は、そ
れらのオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体の大部分が高次構造エピトープを認識した
ことを示唆した。これを試験するため、天然オボムコイドに対するＩｇＥ抗体結
合ならびに還元およびアルキル化された（直鎖化）オボムコイドに対するＩｇＥ
抗体結合を、３つの患者群で比較した。図５ａ〜ｂは、天然オボムコイドに対す
るＩｇＥ抗体結合と比較した還元およびアルキル化されたオボムコイドに対する
ＩｇＥ抗体結合（ＯＤ）の比を示す。天然オボムコイドおよび「直線化」（還元
およびアルキル化）オボムコイドに対するオボムコイド特異的ＩｇＥおよびＩｇ
Ｇ抗体の比を、それぞれの卵アレルギー患者群について比較した。天然のオボム
コイドに対するＩｇＥ抗体の濃度は、すべての群について匹敵するが、１群の患
者（長期の卵アレルギーを有し、より高年齢）は、３群（より若年）の患者より
も有意に多い直鎖化されたオボムコイドに対するＩｇＥ抗体を有した（図５ａ）
。（図５ａ−メジアン：１群および３群について、それぞれ５２％対２２％、ｐ
＜０．０５）。直鎖化された天然オボムコイドに対するＩｇＧ抗体の比における
有意差は、卵アレルギー性患者群の間ではみられなかった（図５ｂ）。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＳＰＯＴ膜上で作製した８９個の重複合成デカペプチドの各々についての累積
ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌｄ１ＯＤスコア。スコアは、研究した１７人の
卵アレルギー患者の総結合を反映する。

【図２】ＳＰＯＴ膜上で作製した８９個の重複合成デカペプチドの各々についての累積
ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ１ＯＤスコア。スコアは、研究した１７人の
卵アレルギー患者の総結合を反映する。

【図３Ａ】メジアン累積ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌｄ１ＯＤスコアとして示した、
合成デカペプチドに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ結合のパターン：グループ
１（図３ａ）は３つ全てのオボムコイドドメイン中のエピトープに対するＩｇＥ
抗体を保有した、グループ２（図３ｂ）は主に第１のオボムコイドドメイン中の
エピトープに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体を有した、およびグループ３
（図３ｃ）は全ての合成デカペプチドに対して無視してよいＩｇＥ抗体を有した
。

【図３Ｂ】メジアン累積ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌｄ１ＯＤスコアとして示した、
合成デカペプチドに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ結合のパターン：グループ
１（図３ａ）は３つ全てのオボムコイドドメイン中のエピトープに対するＩｇＥ
抗体を保有した、グループ２（図３ｂ）は主に第１のオボムコイドドメイン中の
エピトープに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体を有した、およびグループ３
（図３ｃ）は全ての合成デカペプチドに対して無視してよいＩｇＥ抗体を有した
。

【図３Ｃ】メジアン累積ＳＰＯＴＩｇＥＧａｌｄ１ＯＤスコアとして示した、
合成デカペプチドに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ結合のパターン：グループ
１（図３ａ）は３つ全てのオボムコイドドメイン中のエピトープに対するＩｇＥ
抗体を保有した、グループ２（図３ｂ）は主に第１のオボムコイドドメイン中の
エピトープに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体を有した、およびグループ３
（図３ｃ）は全ての合成デカペプチドに対して無視してよいＩｇＥ抗体を有した
。

【図４Ａ】卵アレルギー患者（図４ａ〜４ｃ）および非卵アレルギーコントロール：卵ア
レルギーを有さないアトピー性皮膚炎患者（図４ｄ）および非アレルギー性正常
コントロール（図４ｅ）についてのメジアン累積ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ
１ＯＤスコア。

【図４Ｂ】卵アレルギー患者（図４ａ〜４ｃ）および非卵アレルギーコントロール：卵ア
レルギーを有さないアトピー性皮膚炎患者（図４ｄ）および非アレルギー性正常
コントロール（図４ｅ）についてのメジアン累積ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ
１ＯＤスコア。

【図４Ｃ】卵アレルギー患者（図４ａ〜４ｃ）および非卵アレルギーコントロール：卵ア
レルギーを有さないアトピー性皮膚炎患者（図４ｄ）および非アレルギー性正常
コントロール（図４ｅ）についてのメジアン累積ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ
１ＯＤスコア。

【図４Ｄ】卵アレルギー患者（図４ａ〜４ｃ）および非卵アレルギーコントロール：卵ア
レルギーを有さないアトピー性皮膚炎患者（図４ｄ）および非アレルギー性正常
コントロール（図４ｅ）についてのメジアン累積ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ
１ＯＤスコア。

【図４Ｅ】卵アレルギー患者（図４ａ〜４ｃ）および非卵アレルギーコントロール：卵ア
レルギーを有さないアトピー性皮膚炎患者（図４ｄ）および非アレルギー性正常
コントロール（図４ｅ）についてのメジアン累積ＳＰＯＴＩｇＧＧａｌｄ
１ＯＤスコア。

【図５】図５ａ〜ｂ。天然のオボムコイドおよび「直鎖化」（還元およびアルキル化さ
れた）オボムコイドに対するオボムコイド特異的ＩｇＥ抗体（図５ａ）およびオ
ボムコイド特異的ＩｇＧ抗体（図５ｂ）の比を、各卵アレルギー患者群について
比較した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷＦターム(参考） 2G045 AA25 AA39 AA40 CA26 CB17 CB19 CB20 CB21 CB30 DA36 DA80 FB03 FB05 FB06 FB09 FB12 FB13 GC11 GC15 JA01 JA06 JA20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アレルギーまたは炎症性障害の予後を予測する方法であって
、直鎖状エピトープおよび高次構造エピトープのライブラリーを調製する工程
、個体から抗体サンプルを得る工程、該抗体を高次構造エピトープとの免疫反応性と比較して直鎖状エピトープとの
免疫反応性についてスクリーニングする工程、ならびに高次構造エピトープと反応性のＩｇＥ、ＩｇＡ、またはＩｇＧ抗体に対する、
直鎖状エピトープと反応性のＩｇＥ、ＩｇＡ、またはＩｇＧ抗体の百分率を、該
障害の長期予後と相関させる工程、を包含する、方法。
【請求項２】前記ライブラリー中の前記エピトープが、天然から精製した
抗原、組換え抗原、還元およびアルキル化された抗原、該抗原のタンパク質分解
フラグメント、および長さが４と４０との間のアミノ酸の合成ペプチドからなる
群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】前記ライブラリー中の前記エピトープが、スクリーニングの
ために固定化される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】最初にスクリーニングして、どの抗原に対して前記個体がア
レルギー性であるかを決定する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】ＩｇＥ抗体を含むサンプルを、アレルギーを有する個体から
得る工程、該サンプルを、１以上の直鎖状エピトープおよび１以上の高次構造エピトープ
とのＩｇＥ抗体の反応性についてスクリーニングする工程、ならびに該ＩｇＥが
、天然のタンパク質および天然のタンパク質のタンパク質分解フラグメントから
なる群より選択される高次構造エピトープである前記ライブラリー中のエピトー
プと主に反応性であるか否かを決定する工程であって、ここで、該個体が、該Ｉ
ｇＥと反応性の該エピトープに対する該アレルギーを失うと予測される、工程、
または該ＩｇＥが、還元およびアルキル化されたタンパク質ならびに合成直鎖状
エピトープからなる群より選択される直鎖状エピトープである前記ライブラリー
中のエピトープと主に反応性である工程であって、ここで、該個体が、該ＩｇＥ
と反応性の該エピトープに対するアレルギーを失わないと予測される、工程を包含する、個体がアレルギーを失う可能性を決定するための、請求項１に記載
の方法。
【請求項６】前記エピトープが、食物のタンパク質、花粉のタンパク質、
塵のタンパク質、カビのタンパク質、昆虫のタンパク質、動物のタンパク質およ
び植物のタンパク質からなる群より選択される抗原に由来する、請求項５に記載
の方法。
【請求項７】前記抗原が、食物に由来する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】前記エピトープが、ピーナッツ、卵、木の堅果、乳、魚、な
らびに貝および甲殻類動物からなる群より選択される抗原に由来する、請求項７
に記載の方法。
【請求項９】ＩｇＧ抗体またはＩｇＡ抗体を含むサンプルを、炎症性障害
を有する個体から得る工程、該サンプルを、１以上の直鎖状エピトープおよび１以上の高次構造エピトープ
とのＩｇＧ抗体またはＩｇＡ抗体の反応性についてスクリーニングする工程、な
らびに該ＩｇＧまたはＩｇＡが、天然のタンパク質および天然のタンパク質のタ
ンパク質分解フラグメントからなる群より選択される高次構造エピトープである
前記ライブラリー中のエピトープと主に反応性であるか否かを決定する工程であ
って、ここで、該炎症性障害が、おそらく進行性および難治性でない、工程、ま
たは該ＩｇＧまたはＩｇＡＥが、還元およびアルキル化されたタンパク質ならび
に合成直鎖状エピトープからなる群より選択される直鎖状エピトープである前記
ライブラリー中のエピトープと主に反応性である工程であって、ここで、該炎症
性障害が、おそらく進行性および難治性である、工程を包含する、炎症性障害が進行性および難治性である可能性を決定するための、
請求項１に記載の方法。
【請求項１０】前記炎症性障害が、胃腸管の炎症性障害である、請求項９
に記載の方法。
【請求項１１】前記炎症性障害が、クローン病、潰瘍性大腸炎、およびセ
リアック病からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】前記抗体が、ＩｇＡ抗体である、請求項１１に記載の方法
。
【請求項１３】キットであって、天然から精製した抗原、組換え抗原、還元およびアルキル化された抗原、該抗
原のタンパク質分解フラグメント、ならびに該抗原中のアミノ酸配列に基づく、
長さが４と４０との間のアミノ酸の合成ペプチドからなる群より選択される抗原
に由来する直鎖状エピトープおよび高次構造エピトープのライブラリー、ならび
にＩｇＥ抗体またはＩｇＧ抗体の検出のための試薬、を備える、キット。
【請求項１４】前記ライブラリー中の抗原が、スクリーニングのためのマ
ルチウェルデバイスに固定化されている、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】キットの一部として、ＩｇＥ抗体、ＩｇＡ抗体、またはＩ
ｇＧ抗体の検出のための試薬をさらに備える、請求項１３に記載のキット。
【請求項１６】前記キットが、アレルギーを有する患者の評価のためであ
り、そして前記試薬がＩｇＥを検出する、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】前記キットが、炎症性障害を有する患者の評価のためであ
り、そして前記試薬がＩｇＧを検出する、請求項１５に記載のキット。
【請求項１８】前記キットが、炎症性腸疾患を有する患者の評価のためで
あり、そして前記試薬がＩｇＡを検出する、請求項１５に記載のキット。
【請求項１９】前記抗原が、食物のタンパク質、花粉のタンパク質、塵の
タンパク質、カビのタンパク質、昆虫のタンパク質、動物のタンパク質、および
植物のタンパク質からなる群より選択される、請求項１３に記載のキット。
【請求項２０】前記抗原が、食物タンパク質である、請求項１９に記載の
キット。
【請求項２１】前記食物が、ピーナッツ、卵、木の堅果、乳、魚、ならび
に貝および甲殻類動物からなる群より選択される、請求項２０に記載のキット。