JP2002501018A - ミトコンドリア関連疾患を処置するためのミトコンドリア保護剤 - Google Patents

ミトコンドリア関連疾患を処置するためのミトコンドリア保護剤

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スコット ダブリュー． ミラー，
ロバート イー． デイビス，
ウォルター エイチ． ムース，
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マイトコー
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、一般に、ミトコンドリアの機能不全が組織変性をもたらす疾患を処置するためのミトコンドリア保護剤、およびより詳細にはそれに関連する化合物、組成物および方法に関する。本発明の方法は、薬学的有効量のミトコンドリア保護剤を、その必要がある温血動物に投与する工程を含み、そして本発明の組成物は、ミトコンドリア保護剤を薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組合せて含む。本発明によって処置され得るミトコンドリア関連疾患は、アルツハイマー病、真性糖尿病、パーキンソン病、ニューロンおよび心臓の虚血、ハンティングトン病および発作を含む（がこれらに限定されない）。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術の分野） 本発明は、一般的に、ミトコンドリア機能障害が組織の変性を誘導する疾患を
処置するためのミトコンドリア保護剤に関する。そしてより詳細には、このよう
な疾患を処置するための化合物、組成物、および方法に関する。
【０００２】 （発明の背景） ミトコンドリアは、酸化的リン酸化によって、主要なアデノシン三リン酸（Ａ
ＴＰ）を生産する細胞内小器官である。多くの変性疾患は、ミトコンドリア機能
における直接的な変化かもしくは間接的な変化のいずれかによって生じ得るか、
またはそのいずれかと関連し得る。これらは、アルツハイマー病、糖尿病、パー
キンソン病、ニューロンおよび心臓の虚血、ハンティングトン病ならびに他の関
連するポリグルタミン疾患（脊髄延髄（ｓｐｉｎａｌｂｕｌｂａｒ）の筋萎縮、
マチャド−ジョセフ病（ＳＣＡ−３）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰ
ＬＡ）および脊髄小脳性運動失調１、２、および６）、失調症、レーバー遺伝性
視神経萎縮、精神***病、ならびに筋変性障害（例えば、「ミトコンドリア性脳
障害、乳酸アシドーシス、および発作」（ＭＥＬＡＳ）、および「ミオクローヌ
ス転換不完全赤筋線維症候群（ｍｙｏｃｌｏｎｉｃ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｒａｇ
ｇｅｄ ｒｅｄ ｆｉｂｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」（ＭＥＲＲＦ））を含む。
【０００３】 欠損ミトコンドリア活性（これは、電子伝達系（ＥＴＣ）として公知である、
精巧な多重複合ミトコンドリア会合体の任意の段階での不全を含むが、これに限
定されない）は以下を生じ得る：１）ＡＴＰ生産の減少、２）非常に反応性の高
い遊離ラジカル（例えば、スーパーオキシド、ペルオキシニトリトおよびヒドロ
キシルラジカル、ならびに過酸化水素）の生成の増加、３）細胞内カルシウムホ
メオスタシスにおける障害、および／または４）アポトーシス誘導因子（例えば
、シトクロムｃ）の放出。これらの生化学的変化のために、ミトコンドリア機能
障害は、細胞および組織に対して広範囲に損傷を生じる可能性を有する。例えば
、酸素遊離ラジカルで誘導された脂質の過酸化は、多くの変性疾患において、お
よび虚血（すなわち、発作）において見出されるような中枢神経系（ＣＮＳ）の
損傷における十分に確立された病原性機構である。
【０００４】 ミトコンドリア機能障害はまた、種々の細胞型においてアポトーシスに至る事
象のカスケードにおいて重要であると考えられている（Ｋｒｏｅｍｅｒら、ＦＡ
ＳＥＢ Ｊ．９：１２７７〜８７、１９９５）。変化したミトコンドリアの生理
学は、アポトーシスにおける最も初期の事象内にあり得る（Ｚａｍｚａｍｉら、
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：３６７〜７７、１９９５；Ｚａｍｚａｍｉら、Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：１６６１〜７２、１９９５）。ニューロンを含むい
くつかの細胞型において、ミトコンドリア膜電位（ΔΨｍ）の減少は、ミトコン
ドリア機能障害の徴候であり、アポトーシスを達成する核ＤＮＡ分解に先立つ。
細胞を有さない系において、ミトコンドリア富化された画分は、核のアポトーシ
スを誘導する能力を有するが、しかし、核富化画分は有さない（Ｎｅｗｍｅｙｅ
ｒら、Ｃｅｌｌ ７０：３５３〜６４、１９９４）。細胞代謝状態の変化に至る
ミトコンドリアの呼吸活性の摂動は、ミトコンドリア関連疾患において生じ得、
そしてアポトーシスの機構を介して病原性事象をさらに誘導し得る。例えば、変
化したミトコンドリア活性は、細胞内の反応性酸素種（ＲＯＳ）およびそれに続
く細胞内の損傷または細胞死の望ましくない上昇したレベルに至り得る。
【０００５】 ストレスを受けた（例えば、ストレス因子は、特に遊離ラジカル、高い細胞内
カルシウム、ＡＴＰの損失を含んだ）ミトコンドリアは、新規なアポトソーム（
ａｐｏｐｔｏｓｏｍｅ）との相互作用を通じてアポトーシスを開始し得る、前形
成された可溶性因子を放出し得る（Ｍａｒｃｈｅｔｔｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．５６：２０３３〜３８、１９９６；Ｌｉら、Ｃｅｌｌ ９１：４７９〜８９
、１９９７）。シトクロムｃと同様に、ストレスを受けたミトコンドリアによる
、前形成された可溶性因子の放出は、多くの事象の結果として生じ得る。いくつ
かの場合において、アポトーシス分子（アポトーゲン（ａｐｏｐｔｏｇｅｎ））
の放出は、ミトコンドリアが１．５ｋＤａ以下の細胞質ゾルの溶質に対する浸透
性において急激な変化を受ける場合に生じる。このプロセスは、浸透性「転移」
と呼ばれる。他の場合において、浸透性は、より微妙であり得、そしておそらく
ミトコンドリアの限定された領域に、より局在化され得る。なお他の場合におい
て、顕性の浸透性転移は生じ得ないが、アポトーゲンはミトコンドリア異常の結
果として、なお放出され得る。従って、ミトコンドリア生理学における変化は、
アポトーシスの重要なメディエーターであり得る。アポトーシス細胞死が変性疾
患の顕著な特徴である程度まで、ミトコンドリア機能障害は疾患の進行における
重要な因子であり得る。
【０００６】 糖尿病は、先進国において人口の５〜１０％が罹患している一般の変性疾患で
ある。糖尿病を発症する傾向は、報告によれば母系遺伝され、ミトコンドリア遺
伝的関与を示唆する（Ａｌｃｏｌａｄｏら、Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．３０２：１１７
８〜１１８０、１９９１；Ｒｅｎｙ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊ．Ｅｐｉ
ｄｅｍ．２３：８８６〜８９０、１９９４）。糖尿病は、強力な遺伝的成分を有
する異質性障害である；一卵性双生児は高く一致し、そして罹患された個体の第
１親等（ｆｉｒｓｔ ｄｅｇｒｅｅ ｒｅｌａｔｉｖｅｓ）の間で高い疾患発症
率が存在する。
【０００７】 細胞レベルで、遅発性糖尿病の特徴を有し得る変性の表現型は、変化したミト
コンドリア呼吸機能のインジケーター（例えば、インスリン分泌および応答性の
減損、ＡＴＰ合成の減少および反応性酸素種の増加）を含む。研究は、糖尿病は
特定の関連障害に先立たれ得るか、または特定の関連障害と関連し得ることを示
している。例えば、米国において４０００万の個体が、遅発性グルコース寛容減
損（ＩＧＴ）に罹患していると推定される。ＩＧＴ患者は、インスリン分泌の増
加とともに、グルコースに対して応答しなくなる。少ないパーセンテージ（５〜
１０％）のＩＧＴ個体が、毎年、インスリン欠乏性のインスリン非依存性糖尿病
（ＮＩＤＤＭ）に進行する。いくらかのこれらの個体は、さらにインスリン依存
性糖尿病（ＩＤＤＭ）に進行する。糖尿病のこれらの形態、ＮＩＤＤＭおよびＩ
ＤＤＭは、膵臓のβ細胞によってインスリンの減少する放出および／またはイン
スリンに対する減少する終末器応答と関連する。糖尿病に先立つ、または糖尿病
と関連する、糖尿病の他の症状および状態としては、肥満症、血管病理学、末梢
神経障害および感覚神経障害、失明および難聴が挙げられる。
【０００８】 糖尿病の強力な遺伝的成分に起因して、核ゲノムは、原因となる遺伝変異につ
いての調査の主要な焦点となっている。しかし、熱心な試みにも関わらず、糖尿
病と共に分離する核遺伝子は、インスリン遺伝子、インスリンレセプター遺伝子
、アデノシンデアミナーゼ遺伝子およびグルコキナーゼ遺伝子における稀な変異
についてのみ知られている。従って、ミトコンドリア欠損（これは、ミトコンド
リアＤＮＡに存在する、別個の非核ミトコンドリアゲノムに関連する欠損を含み
得るがこれに限定される必要はない）は、糖尿病の病原に対して有意に寄与し得
る。
【０００９】 パーキンソン病（ＰＤ）は、進行性のミトコンドリア関連神経変性障害であり
、脳の黒質の緻密層部においてドーパミン含有ニューロンの損失および／または
萎縮によって特徴付けられる。アルツハイマー病（ＡＤ）と同様に、ＰＤもまた
、高齢者を冒す。これは、運動緩徐（緩徐な動作）、硬直および安静時振せんに
よって特徴付けられる。Ｌ−Ｄｏｐａ処置は、ほとんどの患者において、しばら
くの間振せんを減少させるが、究極的には、この振せんはますます制御できなく
なり、患者は彼ら自身で摂食すること、もしくは彼ら自身の基本的な衛生的要求
に応じることさえ困難または不可能になる。
【００１０】 神経毒、１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン
（ＭＰＴＰ）が、動物およびヒトにおいて、少なくとも部分的にミトコンドリア
に対するその影響を介して、パーキンソン症候群を誘導することが示されている
。ＭＰＴＰは、ドーパミンニューロンにおいてその活性な代謝物質ＭＰＰ+に変 換される。それは、次いで、ミトコンドリア中で濃縮されるようになる。次いで
、このＭＰＰ+はミトコンドリア酵素ＮＡＤＨ：ユビキノンオキシドレダクター ゼ（「複合体Ｉ」）を選択的に阻害し、遊離ラジカルの産生増加、アデノシン三
リン酸の産生減少、および究極的には罹患したドーパミンニューロンの死に至る
。
【００１１】 ミトコンドリア複合体Ｉは、４０〜５０のサブユニットで構成される；ほとん
どは核ゲノムによってコードされ、７つはミトコンドリアゲノムによってコード
される。パーキンソン症候群は、複合体Ｉ活性に影響を及ぼすミトコンドリア毒
素に曝露されることによって誘導され得るので、おそらく、複合体Ｉタンパク質
における欠陥は、複合体Ｉ活性において類似の生化学的欠損を生じることにより
、ＰＤの病原に寄与し得るようである。確かに、ミトコンドリア複合体Ｉ活性に
おける欠陥は、ＰＤ患者の血液および脳において報告されている（Ｐａｒｋｅｒ
ら、Ａｍ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．２６：７１９〜７２３、１９８９）。
【００１２】 同様の理論が、ミトコンドリア欠陥と他の神経学的疾患（アルツハイマー病（
ＡＤ）、レーバー遺伝性視神経萎縮、精神***病、「ミトコンドリア性脳障害、
乳酸アシドーシス、および発作」（ＭＥＬＡＳ）、ならびに「ミオクローヌス癲
癇不完全赤筋線維症候群（ｍｙｏｃｌｏｎｉｃ ｅｉｌｅｐｓｙ ｒａｇｇｅｄ
ｒｅｄ ｆｉｂｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」（ＭＥＲＲＦ）を含む）との間の
類似の関係について唱えられている。
【００１３】 例えば、ＡＤは、脳の別個の領域におけるニューロンの損失および／または萎
縮によって特徴付けられ、そしてβアミロイドの細胞外沈着および神経細線維も
つれの細胞内蓄積によって達成される、進行性の神経変性障害である。これは、
世界中で１３００万人以上が罹患している、独特のヒト疾患である。これはまた
、独特の悲惨な疾患でもある。通常の生産的な生活を営んでいる多くの個体が、
加齢とともに、ゆっくりとＡＤを患い、そしてこの疾患は、徐々に彼らの記憶お
よび他の精神的能力を彼らから奪う。結局、彼らは家族および愛する者を認識し
なくなり、そして彼らはしばしば、最終的な死までの連続的な介護を必要とする
。
【００１４】 ミトコンドリア内の酸化的リン酸化における欠陥が少なくとも一部の散発性Ａ
Ｄの原因であるという証拠がある。酵素シトクロムｃオキシダーゼ（ＣＯＸ）は
、ミトコンドリア電子伝達系（ＥＴＣ）の部分をなし、この酵素は、ＡＤ患者に
おいて通常量で存在する；しかし、ＡＤ患者および解剖でのＡＤ患者の脳におけ
るこの酵素の触媒活性は、異常に低いことが見出されている（Ｐａｒｋｅｒら、
Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４４：１０８６〜１０９０、１９９４）。これは、ＡＤ患
者におけるＣＯＸが欠陥性であり、ある様式においてＡＤの特徴である症状を生
じる、またはＡＤの特徴である症状に寄与する触媒活性の減少に至ることを示唆
する。
【００１５】 ＡＤの１つの顕著な特徴的病状は、脳の別個の領域における選択されたニュー
ロン集団の死である。ＡＤにおける細胞死は、アポトーシス性であると推定され
る。なぜなら、細胞死の兆候は観察されるが、活性なグリオーシスおよび壊死の
指標がないからである（Ｓｍａｌｅら、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇ．１３３：２
２５〜２３０、１９９５；Ｃｏｔｍａｎら、Ｍｏｌｅｃ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．
１０：１９〜４５、１９９５）。ＡＤにおける細胞死の結果（ニューロンおよび
シナプスの喪失）は、ＡＤの臨床診断に密接に関連し、そしてＡＤにおける痴呆
の程度に大いに相関がある（ＤｅＫｏｓｋｙら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ
２７：４５７〜４６４、１９９０）。
【００１６】 確かに、酸化的ストレスにおける増加を伴って、ミトコンドリアでエネルギー
代謝が限局的に欠損することは、ＡＤと関連し得る。エネルギー代謝は、ＡＤの
脳において損なわれることが十分に確立されている（Ｐａｌｍｅｒら、Ｂｒａｉ
ｎ Ｒｅｓ．６４５：３３８〜４２、１９９４；Ｐａｐｐｏｌｌａら、Ａｍ．Ｊ
．Ｐａｔｈｏｌ．１４０：６２１〜２８、１９９２；Ｊｅａｎｄｅｌら、Ｇｅｒ
ｏｎｔｏｌ．３５：２７５、１９８９；Ｂａｌａｚｓら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．
Ｒｅｓ．１９：１１３１〜３７、１９９４；Ｍｅｃｏｃｃｉら、Ａｎｎ．Ｎｅｕ
ｒｏｌ．３６：７４７〜７５１、１９９４；Ｇｓｅｌｌら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈ
ｅｍ．６４：１２１６〜２３、１９９５）。例えば、ＡＤの脳におけるエネルギ
ー代謝の領域特異的な欠損は、多くの陽電子放出断層撮影の研究において報告さ
れている（Ｋｕｈｌら、Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．
７：Ｓ４０６、１９８７；Ｇｒａｄｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｐ
ｓｙｃｈｏｌ．１０：５７６〜９６、１９８８；Ｈａｘｂｙら、Ａｒｃｈ．Ｎｅ
ｕｒｏｌ．４７：７５３〜６０、１９９０；Ａｚａｒｉら、Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂ
ｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１３：４３８〜４７、１９９３）。ＡＤ患者
の側頭頭頂新皮質における代謝欠損は明らかに、数年までの認識低下の前兆とな
る。ＡＤ患者由来の皮膚線維芽細胞は、グルコース利用の減少およびグルコース
の酸化の増加を示し、グリコシル化最終産物の形成に至る（Ｙａｎら、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：７７８７〜９１、１９９４）。死
後のＡＤ脳由来の皮質組織は、ミトコンドリア酵素であるピルビン酸デヒドロゲ
ナーゼ（Ｓｈｅｕら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１７：４４４〜４９、１９８５）
およびα−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ（Ｍａｓｔｒｏｇｉａｃｏｍｏら、
Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６：２００７〜１４、１９９４）の活性の減少を示す
。これらは両方とも、エネルギー代謝において重要な酵素である。機能的な磁気
共鳴分光法の研究は、ＡＤ脳におけるホスホクレアチンに対する無機リン酸のレ
ベルの増加を示し、ミトコンドリアによるＡＴＰ産生の減少から生じる前駆体の
蓄積を示唆する（Ｐｅｔｔｅｇｒｅｗら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｏｆ Ａｇｉｎ
ｇ １５：１１７〜３２、１９９４；Ｐｅｔｔｉｇｒｅｗら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏ
ｌ．Ｏｆ Ａｇｉｎｇ １６：９７３〜７５、１９９５）。
【００１７】 酸化的傷害の兆候もまた、ＡＤ病状の顕著な特徴であり、そして反応性酸素種
（ＲＯＳ）は、ニューロン変性の臨床的メディエーターである。確かに、解剖で
の研究は、タンパク質、ＤＮＡおよび脂質過酸化のマーカーがＡＤ脳において増
加することを示す。これはおそらくミトコンドリア機能障害に対して２次的な、
ＲＯＳ産生の増加の結果として生じる（Ｐａｌｍｅｒら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．
６４５：３３８〜４２、１９９４；Ｐａｐｐｏｌｌａら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏ
ｌ．１４０：６２１〜２８、１９９２；Ｊｅａｎｄｅｌら、Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．
３５：２７５〜８２、１９８９；Ｂａｌａｚｓら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．４
：８６４、１９９４；Ｍｅｃｏｃｃｉら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：７４７
〜５１、１９９４；Ｓｍｉｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ８８：１０５４０〜４３、１９９１）。ＡＤ由来であってコントロール由来
でない海馬組織において、タンパク質の酸化の指標となるカルボニル形成は、ニ
ューロン細胞質ならびにニューロンおよびグリアの核において増加される（Ｓｍ
ｉｔｈら、Ｎａｔｕｒｅ ３８２：１２０〜２１、１９９６）。神経細線維もつ
れはまた、タンパク質の酸化の顕著な部位であるようである（Ｓｃｈｗｅｅｒｓ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：８４６３、１９９５
；Ｂｌａｓｓら、Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．４：８６４、１９９０）。ストレス
条件下および非ストレス条件下で、解剖で採取したＡＤ脳由来の皮質組織のイン
キュベーションは、非ＡＤコントロールに比較して遊離ラジカル産生の増加を示
す。さらに、臨床的抗酸化酵素、特にカタラーゼの活性は、ＡＤにおいて減少さ
れ（Ｇｓｅｌｌら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６４：１２１６〜２３、１９９５
）、ＡＤ脳が、ＲＯＳ産生の増加に対して攻撃されやすいことを示唆する。従っ
て、酸化的ストレスは、ＡＤのようなミトコンドリア関連疾患の病理学（ここで
、ミトコンドリア機能障害および／または上昇するＲＯＳが、存在し得る）に対
して有意に寄与し得る。
【００１８】 従って、種々のミトコンドリア機能障害の結果によって起こる小器官、細胞、
および組織に対する損傷を限定または防止する化合物、組成物および方法につい
て必要性が存在する。特に、ミトコンドリアは代謝エネルギーを生じるために必
要不可欠な小器官であるので、ＲＯＳおよび他の損傷供給源の産生を阻害する薬
剤、ならびに／またはそれらに対してミトコンドリアおよび細胞を保護する薬剤
が、特に有用である。このような薬剤は、ミトコンドリア関連疾患を含む変性疾
患の処置に適切である。本発明は、これらの必要性を満たし、そして他の関連す
る利点を提供する。
【００１９】 （発明の要旨） 手短に述べると、本発明は、ミトコンドリア関連疾患の処置を必要とする温血
動物に、以下の一般構造（Ｉ）〜（ＩＶ）：
【化３】 のうちの１つを有するミトコンドリア保護剤の有効量を投与することによるミト
コンドリア関連疾患の処置に関し、ここで、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ 3 、Ｙ4、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｗ1、Ｗ2、Ｗ3、Ａ1、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4は、 以下の詳細な説明に同定する通りである。
【００２０】 本発明の化合物は、広範囲のミトコンドリア関連疾患（アルツハイマー病、真
性糖尿病、パーキンソン病、ニューロンおよび心臓の虚血、ハンティングトン病
、および他の関連するポリグルタミン疾患（脊髄延髄性筋萎縮（ｓｐｉｎａｌｂ
ｕｌｂａｒ ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）、マチャド−ジョセフ病（Ｓ
ＣＡ−３）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、ならびに脊髄小脳
性運動失調１、２、および６）、失調症、レーバー遺伝性視神経萎縮、精神***
症、ならびに筋変性障害（例えば、「ミトコンドリア性脳障害、乳酸アシドーシ
ス、および発作」（ＭＥＬＡＳ）、ならびに「ミオクローヌス癲癇不完全赤筋線
維症候群（ｍｙｏｃｌｏｎｉｃ ｅｐｉｌｅｐｓｙ ｒａｇｇｅｄ ｒｅｄ ｆ
ｉｂｅｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」（ＭＥＲＲＦ））を含む（がこれらに限定され
ない）に対して活性を有する。
【００２１】 従って、本発明はまた、ミトコンドリア関連疾患の処置を必要とする温血動物
に薬学的有効量のミトコンドリア保護剤を投与することによる、ミトコンドリア
関連疾患を処置する方法、ならびに本発明のミトコンドリア保護剤を薬学的に受
容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて含む薬学的組成物に関する。
【００２２】 本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な記載および添付の図面を参照
することにより明らかになる。このために、本発明の特定の局面をより詳細に記
載する種々の参考文献が本明細書中に示され、そしてその各々が、その全体が参
考として援用される。
【００２３】 （発明の詳細な説明） 本発明は、一般に、化合物（本明細書中では、「ミトコンドリア保護剤」とも
いう）およびこの化合物を含む薬学的組成物、ならびにミトコンドリア関連疾患
を処置するために有用な方法に関する。より詳細には、本発明のミトコンドリア
保護剤は、本明細書中に記載される二酢酸ジクロロフルオレシン（ｄｉｃｈｌｏ
ｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ）（ＤＣＦＣ）アッセイにおいて、５０μｍ以下、代
表的には１μｍ以下、好ましくは２００ｎＭ以下、そしてより好ましくは７０ｎ
Ｍ以下のＩＣ50を有し、そして以下の構造（Ｉ）〜（ＩＶ）：
【化４】 （その立体異性体（ｓｔｅｒｏｉｓｏｍｅｒ）および薬学的に受容可能な塩を含
む）のうちの１つを有する： ここで、構造（Ｉ）において： Ｘ1は、−ＯＨ、−ＯＲa、および−ＯＣＯＣＨ3から選択され； Ｙ1は、−ＯＨ、−ＲaＯＨ、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜l2アルキルから選択
され； Ｚ1は、−Ｈ、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＮＯ2、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜12ア ルキルから選択され；そして 出現する各々のＲaは、Ｃ1〜6アルキルから選択され； ここで、構造（ＩＩ）において： Ｒ1およびＲ2は、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ1〜3アルキル、およびＣ1-3アルキル から独立して選択され； Ｘ2は必要に応じて存在し、そして−Ｃ（Ａ2）（Ａ3）−、−（ＣＨ2）n−、 −Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され； Ｙ2およびＺ2は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲb、−ＮＨＣＮＨＮ
Ｈ2、−ＮＨＲb、および−ＮＲbＲcから独立して選択され； Ａ2およびＡ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； ＲbおよびＲcは、独立してＣ1〜4アルキルであり；そして ｎは２〜９であり； ここで、構造（ＩＩＩ）において： 点線は、単結合または二重結合を表し； Ａ1は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから選択され； Ｙ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−ＣＯＲdから選択され； Ｚ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−（ＣＨ2）mＸ3Ｒdから選択され； それぞれの出現箇所のＸ3は、−Ｓ−、−Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され ； Ｒ3は、−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、および−Ｒdから選択され； Ｒdは、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド抗炎症 薬から選択され；そして ｍは１〜４であり；そして ここで、構造（ＩＶ）において： Ｗ1、Ｗ2、およびＷ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； Ｘ4は、−ＮＨ−、−Ｏ−、および−Ｓ−から必要に応じて選択され； Ｙ4は、−ＨおよびＣ1〜12アルキルから選択され；そして Ｒ4は、−Ｈ、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド 抗炎症薬から選択されるか、またはひとまとまりになったＸ4−Ｒ4は−ＣＨ2Ｏ Ｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、およびＣ1〜3アルキルから選択される。
【００２４】 本明細書中で使用される場合、以下の用語は、以下に示す意味を有する。
【００２５】 「Ｃ1〜12アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を有する、直鎖もしくは分枝 の、飽和もしくは不飽和の炭化水素部分（例えば、メチル、エチル、プロピル、
イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなど、ペンチル、ペンチ
ルアイソマー、ヘキシル、およびヘキシルアイソマー）、ならびに炭素原子１２
個までの高級ホモログ（例えば、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデ
シル、ドデシルなど））である。種々の数の炭素原子を有する炭化水素（例えば
、「Ｃ1〜3アルキル」、「Ｃ1〜4アルキル」、「Ｃ1〜6アルキル」、「Ｃ1〜8ア
ルキル」など）が引用される例では、直鎖もしくは分枝の、飽和もしくは不飽和
の炭化水素部分が意図されるが、示された炭素原子の数を有する。
【００２６】 「グアニジノ部分」および「シクログアニジノ部分」は以下の構造（ａ）およ
び構造（ｂ）をそれぞれ有する：
【化５】 ここで、Ｒ5およびＲ6は、−ＨおよびＣ1〜5アルキルから独立して選択され、そ
してｑは０〜３である。
【００２７】 「非ステロイド抗炎症薬」（ＮＳＡＩＤ）は、カルボン酸部分を有するＮＳＡ
ＩＤである。多数の化学的クラスのＮＳＡＩＤが同定されている。その内容の全
てが本明細書中に参考として援用される、以下の教科書は、種々のＮＳＡＩＤ化
学的クラスについて言及し得る：ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｉｃｏｓ
ａｎｏｉｄｓ：Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｌｉ
ｐｉｄｓ，第ＩＩ巻，Ｄｒｕｇｓ Ａｃｔｉｎｇ Ｖｉａ ｔｈｅ Ｅｉｃｏｓ
ａｎｏｉｄｓ，５９−１３３頁，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，
ＦＬ（１９８９）。それゆえ、ＮＳＡＩＤは、以下を含むがこれらに限定されな
い、種々の化学的クラスから選択され得る：サリチル酸またはアセチルサリチル
酸、フェナム酸（ｆｅｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）（例えば、フルフェナム酸、ニフ
ェナム酸（ｎｉｆｌｕｍｉｃ ａｃｉｄ）およびメフェナム酸）を含むその誘導
体；インドール（例えば、インドメタシン、スリンダク、およびトルメチン；フ
ェニルアルカン酸（ｐｈｅｎｙｌａｌｋａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）（例えば、スプ
ロフェン、ケトロラク、フルルビプロフェン、およびイブプロフェン）；ならび
にフェニル酢酸（例えば、ジクロフェナク）。ＮＳＡＩＤのさらなる例としては
、以下が挙げられる：ロキソプロフェン（ｌｏｘｏｐｒｏｆｅｎ）、ピルプロフ
ェン、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、アセロフェラク（ａｃｅｌｏｆｅｒ
ａｃ）、フレクロジン酸（ｆｌｅｃｌｏｚｉｃ ａｃｉｄ）、ブロムフェナク、
アルクロフェナク（ａｌｃｏｆｅｎａｃ）、ジフルニサル、トルフェナム酸、ク
リダナク、フェンクロラク、カルプロフェン、フェンブフェン、アムフェナク、
ケトプロフェン、オルパノキシン、プラノプロフェン、インドプロフェン、フェ
ノプロフェン、メクロフェナメート、イソフェゾラク、エトドリン酸（ｅｔｏｄ
ｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、エフェナム酸、フェンクロフェナク、ゾモピラク（ｚｏ
ｍｏｐｉｒａｃ）、ザルトプロフェン（ｚａｌｔｏｐｒｏｆｅｎ）および他のＮ
ＳＡＩＤ化合物。好ましい化合物は、ＮＳＡＩＤが、サリチル酸またはそれらの
誘導体（アセチルサリチル酸、ナプロキセン、イブプロフェン、またはアセチル
サリチル酸を含む）のエステルまたはアミド誘導体から選択される化合物である
。
【００２８】 １つの局面では、本発明のミトコンドリア保護剤は、以下の構造（Ｉ）
【化６】 （その立体異性体および薬学的に受容可能な塩を含む）を有する： ここで、 Ｘ1は、−ＯＨ、−ＯＲa、および−ＯＣＯＣＨ3から選択され； Ｙ1は、−ＯＨ、−ＲaＯＨ、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜l2アルキルから選択
され； Ｚ1は、−Ｈ、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＮＯ2、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜12ア ルキルから選択され；そして 出現する各々のＲaは、Ｃ1〜6アルキルから選択される。
【００２９】 明瞭さの目的のために、Ｚ1の位置では、以下の番号付けが参照される：
【化７】
【００３０】 構造（Ｉ）の１つの実施態様では、Ｘ1は−ＯＨであり、Ｚ1は−ＮＨ2であり 、そして本発明の化合物は以下の構造（Ｉ−１）を有する：
【化８】
【００３１】 従って、構造（Ｉ−１）におけるＺ1置換基の位置は、本明細書中で「１−ＮＨ2 」と呼ばれる。
【００３２】 構造（Ｉ−１）の１つの実施態様では、Ｙ1はＣ1〜12アルキルであり、例えば
、以下の構造（Ｉ−２）または（Ｉ−３）を有する：
【化９】
【００３３】 構造（Ｉ）の別の実施態様では、Ｘ1およびＺ1は−ＯＨであり、そして本発明
の化合物は以下の構造（Ｉ−４）を有する：
【化１０】
【００３４】 構造（Ｉ−４）の１つの実施態様では、Ｙ1はＣ1〜12アルキルであり、例えば
、以下の構造（Ｉ−５）または（Ｉ−６）を有する：
【化１１】
【００３５】 構造（Ｉ）のなおさらなる実施態様では、Ｘ1およびＺ1は−ＯＣＯＣＨ3であ り、そして本発明の化合物は以下の構造（Ｉ−７）を有する：
【化１２】
【００３６】 構造（Ｉ−７）の１つの実施態様では、Ｙ1はＣ1〜12アルキルであり、例えば
、以下の構造（Ｉ−８）を有する：
【化１３】
【００３７】 構造（Ｉ）のなお別の実施態様では、Ｘ1およびＹ1は−ＯＨであり、そして本
発明の化合物は以下の構造（Ｉ−９）を有する：
【化１４】
【００３８】 構造（Ｉ−９）の１つの実施態様では、Ｚ1はＣ1〜12アルキルであり、例えば
、以下の構造（Ｉ−１０）を有する：
【化１５】
【００３９】 構造（Ｉ）の代表的な化合物を以下の表１に示す。
【００４０】
【表１】
【００４１】 構造（Ｉ）の化合物は、以下の実施例６に示す技術を含む公知の有機反応技術
によって作製され得る。例えば、以下で反応「ａ」の下で示すように、Ｙ1位に おける代表的なアルキルアナログは、出発物質としての対応するアリル（例えば
、ｎ−プロピルについてはユージノール）から合成され得、そしてアリル結合の
水素添加、続いて三臭化ホウ素を用いるメチルエーテルの脱保護を含み得る。あ
るいは、反応「ｂ」により示すように、対応するアルキル−フェノールアナログ
は、出発物質として用いられ得、続いて、所望のＺ1置換基が添加され得る。例 えば、アルキルフェノール誘導体は、硝酸を用いるニトロ化、必要に応じてそれ
に続く、活性化鉄での還元により作製され得る。なおさらなる改変物では、アル
キルＺ1置換基は、反応「ｂ」を介するアルキルフェノールのフリーデルクラフ ツアルキル化を介して導入され得る。同様に、アルキルフェノールのヒドロキシ
アルキル化は、アルデヒドおよびホウ素含有試薬（例えば、ベンゼンボロン酸（
ｂｅｎｚｅｎｅｂｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ））での処理を介して達成され得る。
【００４２】
【化１６】 さらに、構造（Ｉ）の化合物の合成のための出発物質は多数の供給源から市販
されることが認識されるべきである。
【００４３】 別の局面では、本発明のミトコンドリア保護剤は、以下の構造（ＩＩ）：
【化１７】 （その立体異性体および薬学的に受容可能な塩を含む）を有し、ここで、 Ｒ1およびＲ2は、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ1〜3アルキル、およびＣ1-3アルキル から独立して選択され； Ｘ2は必要に応じて存在し、そして−Ｃ（Ａ2）（Ａ3）−、−（ＣＨ2）n−、 −Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され； Ｙ2およびＺ2は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲb、−ＮＨＣＮＨＮ
Ｈ2、−ＮＨＲb、および−ＮＲbＲcから独立して選択され； Ａ2およびＡ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； ＲbおよびＲcは、独立してＣ1〜4アルキルであり；そして ｎは２〜９である。
【００４４】 明瞭さの目的のために、Ｙ2およびＺ1の位置では、以下の番号付けが参照され
る：
【化１８】
【００４５】 構造（ＩＩ）の１つの実施態様では、Ｒ1およびＲ2は−Ｈであり、Ｙ2および Ｚ2は−ＮＨ2であり、そして本発明の化合物は以下の構造（ＩＩ−１）を有する
：
【化１９】
【００４６】 構造（ＩＩ−１）の１つの実施態様では、Ｘ2は−Ｃ（Ａ2）（Ａ3）−であり 、例えば、以下の構造（ＩＩ−２）を有する：
【化２０】
【００４７】 構造（ＩＩ）の別の実施態様では、Ｒ1およびＲ2は−Ｈであり、Ｙ2は−Ｈで あり、そしてＺ2は−ＮＨ2であり、そして本発明の化合物は以下の構造（ＩＩ−
３）を有する：
【化２１】
【００４８】 構造（ＩＩ−３）の１つの実施態様では、Ｘ2は−Ｃ（Ａ2）（Ａ3）−であり 、例えば、以下の構造（ＩＩ−４）を有する：
【化２２】
【００４９】 構造（ＩＩ）の代表的な化合物を、以下の表２に示す。
【００５０】
【表２】
【００５１】 構造（ＩＩ）の化合物は、以下の実施例７に示す技術を含む公知の有機反応技
術によって作製され得る。例えば、構造（ＩＩ）の代表的化合物は、以下で反応
「ａ」によって示すように、出発物質としての対応するジフェノール（例えば、
４，４−イソプロピリデンジフェノール）から作製され得る。ニトロ化は、シリ
カゲルクロマトグラフィーによって分離され得るモノニトロ誘導体およびジニト
ロ誘導体を提供する。このニトロ基の還元が、対応するアミンを提供する。この
アミンは、パラホルムアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ドナトリウム（ｓｏ
ｄｉｕｍ ｃｙａｎｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）を用いる還元的アミノ化によっ
てさらに修飾され得る。４，４−イソプロピリデンジフェノール（４，４−ｉｓ
ｏｐｒｏｐｙｌｄｅｎｅｄｉｐｈｅｎｏｌ）を、炭酸カリウムの存在下でヨウ化
メチルと反応「ｂ」を介して反応させて、例えば、モノメチルエーテルおよびジ
メチルエーテルを提供し得、これらのエーテルは、シリカゲルクロマトグラフィ
ーにより分離され得る。これらのジアルキルオキシ誘導体は、より厳しいニトロ
化条件を必要とし得、そしてニトロニウムテトラフルオロボレートを利用して、
反応「ｃ」により示されるモノニトロ系およびジニトロ系を与える。このニトロ
官能基の還元は、酢酸水溶液中で鉄を用いて達成され得る。
【００５２】
【化２３】
【００５３】 さらに、構造（ＩＩ）の化合物のいくつか（そのための出発物質を含む）が多
数の供給源から市販されることが認識されるべきである。さらに、種々の参考文
献は、さらなる技術を開示する（例えば、構造（ＩＩ）の化合物の合成について
、Ｈｏｚｕｍｉらに対する公開された日本出願第ＪＰ ０７／２７８０３８ Ａ
２号およびＥｎｄｏらに対する同第ＪＰ ０５／１２５１８０ Ａ２号（これら
は両方とも、本明細書中で参考として援用される））。
【００５４】 別の局面では、本発明のミトコンドリア保護剤は、以下の構造（ＩＩＩ）：
【化２４】 （その立体異性体および薬学的に受容可能な塩を含む）を有し、ここで、 点線は、単結合または二重結合を表し； Ａ1は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから選択され； Ｙ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−ＣＯＲdから選択され； Ｚ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−（ＣＨ2）mＸ3Ｒdから選択され； それぞれの出現箇所のＸ3は、−Ｓ−、−Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され ； Ｒ3は、−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、および−Ｒdから選択され； Ｒdは、グアニジノ部分、シクログアニジノ（ｃｙｌｃｏｇｕａｎｉｄｉｎｏ ）部分、および非ステロイド抗炎症薬から選択され；そして ｍは１〜４である。
【００５５】 構造（ＩＩＩ）の１つの実施態様では、Ｒ3はＲdであり、そしてＲdはグアニ ジノ部分であり、そして本発明の化合物は以下の構造（ＩＩＩ−１）を有する：
【化２５】
【００５６】 構造（ＩＩＩ）の別の実施態様では、Ｒ3はＲdであり、Ｒdはシクログアニジ ノ部分であり、そして本発明の化合物は以下の構造（ＩＩＩ−２）を有する：
【化２６】
【００５７】 構造（ＩＩＩ）のなおさらなる実施態様では、Ｙ3は−ＣＯＲdであり、ここで
Ｒdは非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。このようなＮＳＡＩＤは、 例えば、ＮＳＡＩＤのカルボン酸部分（−ＣＯＯＨ）と構造（ＩＩＩ）の２級ア
ミン（−ＮＨ−）との間の反応によるアミド結合の形成により、Ｙ3位で窒素に 結合され得る。従って、名称「−ＣＯＲd」は、このようなアミド結合の形成を 表すと理解されるべきである。この実施態様の代表的な化合物は、以下の構造（
ＩＩＩ−７）、（ＩＩＩ−８）、および（ＩＩＩ−９）の化合物を含む：
【化２７】
【００５８】 構造（ＩＩＩ）の代表的化合物を以下の表３に示す。
【００５９】
【表３】
【００６０】 構造（ＩＩＩ）の化合物は、以下の実施例８に示す技術を含む公知の有機反応
技術によって作製され得る。例えば、構造（ＩＩＩ）の代表的な化合物は、反応
「ａ」によって、以下に示すようにエトキシキンまたは適切な６−置換２，２，
４−トリメチル，１ ２−ジヒドロキノリンから作製され得る。２級アミンのア
ルキル化は、還元的アミノ化条件を用いて実施され得る。例えば、ＮＳＡＩＤ誘
導体を提供するための２級アミンのアシル化は、対応する酸ハロゲン化物を上昇
した温度で結合させることにより達成され得る。あるいは、構造（ＩＩＩ）の化
合物は、対応するアルコール（またはチオール）から反応「ｂ」、続いて所望の
置換基へのこのアルコールの変換により作製され得る。
【００６１】
【化２８】
【００６２】 さらに、構造（ＩＩＩ）の化合物のいくつか（そのための出発物質を含む）が
多数の供給源から市販されることが認識されるべきである。さらに、種々の参考
文献は、さらなる技術を開示する（例えば、構造（ＩＩＩ）の化合物の合成につ
いて、Ｔａｍａｋｉらに対する公開された日本出願第ＪＰ ６３／０５８４５５
Ａ２号およびドイツ国特許第ＤＥ ２１５６３７１号（これらは両方とも、本
明細書中で参考として援用される））。
【００６３】 別の局面では、本発明のミトコンドリア保護剤は、以下の構造（ＩＶ）：
【化２９】 （その立体異性体および薬学的に受容可能な塩を含む）を有し、ここで、 Ｗ1、Ｗ2、およびＷ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； Ｘ4は、−ＮＨ−、−Ｏ−、および−Ｓ−から必要に応じて選択され； Ｙ4は、−ＨおよびＣ1〜12アルキルから選択され；そして Ｒ4は、−Ｈ、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド 抗炎症薬から選択されるか、またはひとまとまりになったＸ4−Ｒ4は−ＣＨ2Ｏ Ｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、およびＣ1〜3アルキルから選択される。
【００６４】 構造（ＩＶ）の１つの実施態様では、Ｒ4はグアニジノ部分であり、そして本 発明の化合物は以下の構造（ＩＶ−ｌ）を有する：
【化３０】
【００６５】 構造（ＩＶ）の別の実施態様では、Ｒ4はシクログアニジノ部分であり、そし て本発明の化合物は以下の構造（ＩＶ−２）を有する：
【化３１】
【００６６】 構造（ＩＶ）の別の実施態様では、構造（ＩＶ−３）により表されるように、
Ｘ4はＯかつＲ4はＨであるか、または構造（ＩＶ−４）により表されるように、
ひとまとまりになったＸ4およびＲ4はＣ1〜3アルキルである：
【化３２】
【００６７】 構造（ＩＶ）のなおさらなる実施態様では、Ｒ4は非ステロイド抗炎症薬（Ｎ ＳＡＩＤ）である。このようなＮＳＡＩＤは、適切な結合（例えば、アミド、エ
ステル、またはチオエステル結合）の形成により、Ｘ4を介して結合され得る。 従って、Ｘ4が酸素である場合、アミドまたはエステルが形成されて、このＮＳ ＡＩＤを連結し得る。例えば、エステル結合が形成されて、以下の構造（ＩＶ−
６）、（ＩＶ−７）、および（ＩＶ−８）により表されるように、構造（ＩＶ）
の化合物をナプロキセン、アスピリン、およびイブプロフェンに連結し得る：
【化３３】
【００６８】 構造（ＩＶ）の代表的な化合物を、以下の表４に示す。
【００６９】
【表４】
【００７０】 構造（ＩＶ）の化合物は、公知の有機反応技術により生成され得、これらは以
下の実施例９に示される技術を含む。例えば、構造（ＩＶ）の代表的な化合物は
、反応「ａ」により以下に示されるような、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−
テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（Ｔｒｏｌｏｘ）から生成され得る。こ
の酸性基のアルコールへの還元、必要に応じて、それに引き続く種々の異なる部
分（例えば、ＮＳＡＩＤ）とのカップリングは、構造（ＩＶ）のその対応する化
合物を提供する。例えば、アミノグアニジン誘導体は、アミノグアニジンおよび
シアノ水素化ホウ素ナトリウムを使用して、アルデヒドの還元的アミノ化により
調製され得る。アルデヒドは、実施例９の合成において記載されるように、第一
級アルコールのＳｗｅｒｎ酸化により形成され得る（化合物（ＩＶ−９）の合成
手順を参照のこと）。メチルアミン置換基を含むクロマン系は、反応「ｂ」を経
て、Ｔｒｏｌｏｘのアミドの水素化物還元により調製され得る。フェノール性ヒ
ドロキシル基の保護を維持したまま、アミンを反応「ｃ」を経て、種々の部分（
例えば、ＮＳＡＩＤ）に結合し得る。次いで、ヒドロキシル基の脱保護により構
造（ＩＶ）の化合物が提供され、ここで、−Ｘ4−Ｒ4は、例えば、−ＮＨ−ＮＳ
ＡＩＤである。
【００７１】
【化３４】
【００７２】 さらに、構造（ＩＶ）の化合物の合成のための出発物質は、多くの供給源から
市販されていることは認識されるべきである。
【００７３】 本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩は、当該分野で周知の技術によって（
例えば、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、有機溶媒中の水中の化学量
論的な量の適切な塩基または酸と共に反応させることによって）生成され得る。
この場合における適切な塩は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃ
ｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８５（本明細書に参考として援用される）に見
出され得る。
【００７４】 本発明のミトコンドリア保護剤、またはその薬学的に受容可能な塩は、治療有
効量で患者に投与される。治療有効量は、所望の効果を達成するために算出され
た量である。投与経路は、特定の処置に伴い変化し得ることは当業者に明らかで
ある。投与経路は、非侵襲性または侵襲性のいずれかであり得る。非侵襲性の投
与経路としては、経口投与、頬側／舌下投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与（
経皮投与および眼投与を含む）、膣投与、膀胱内投与、および肺投与が挙げられ
る。侵襲性の投与経路としては、動脈内投与、静脈内投与、皮内投与、筋内投与
、皮下投与、腹腔内投与、髄腔内投与、および眼内投与が挙げられる。
【００７５】 必要用量は、特定の処置および投与経路に伴って変化し得る。一般に、ミトコ
ンドリア保護剤についての用量は、１日あたり宿主動物の体重１キログラムあた
り約１〜約５ｍｇの化合物であり；しばしば、１日あたり体重１ｋｇあたり、約
１００μｇと約５ｍｇとの間の化合物であるが、約５０ｍｇの化合物まで変化し
得る。治療的投与は、一般的に医師の指導の下で行われ、そして薬学的組成物は
、薬学的に受容可能なキャリア中にミトコンドリア保護剤を含む。これらのキャ
リアは当該分野で周知であり、そして代表的には非毒性の塩または緩衝液を含む
。このようなキャリアは、生理的緩衝化生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水の
ような緩衝液、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、マン
ニトールまたはデキストラン）、アミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化剤、キ
レート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバントおよび保存剤
を含み得る。受容可能な非毒性の塩は、酸付加塩または金属錯体（例えば、亜鉛
、鉄、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウムなどとの（これらは
、本出願の目的の付加塩と考えられる））を含む。そのような酸付加塩の例は、
塩酸塩、臭化水素塩、硫酸塩、リン酸塩、タンニン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸
塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香
酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などである。活性
成分が錠剤形態で投与されるべき場合、錠剤は、結合剤（例えば、トラガカント
、コーンスターチまたはゼラチン）；崩壊剤（例えば、アルギン酸）；および滑
沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）を含み得る。液体形態での投与が望
ましい場合、甘味料および／または矯味矯臭剤が使用され得、そして等張性生理
食塩水、リン酸緩衝溶液などでの静脈内投与が果たされ得る。
【００７６】 本発明のミトコンドリア保護剤はまた、そのプロドラッグを含む。本明細書で
使用される場合、「プロドラッグ」は、そのようなプロドラッグが動物に投与さ
れる場合、構造（Ｉ）〜（ＩＶ）に従う活性な親薬物をインビボで放出する、共
有結合的に結合された任意のキャリアである。構造（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物の
プロドラッグは、その化合物上に存在する官能基を修飾することにより調製され
、その修飾は、慣用的な操作またはインビボのいずれかにおいて親化合物に切断
されるような方法で行われる。プロドラッグは、ヒドロキシ基、アミン基、また
はスルフヒドリル基が任意の基に結合され、これは、動物に投与された場合、切
断されて、遊離のヒドロキシル基、アミノ基、またはスルフヒドリル基をそれぞ
れ形成する、構造（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物を含むがこれらに限定されない。プ
ロドラッグの代表的な例は、アルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸、およ
び安息香酸誘導体を含むが、これらに限定されない。
【００７７】 ミトコンドリア保護剤としての本発明の化合物の有効性は、種々のアッセイ法
により決定され得る。適切なミトコンドリア保護剤は、ミトコンドリアの構造お
よび機能の完全性の維持についての以下の１以上のアッセイにおいて、またはミ
トコンドリアの構造および機能の完全性の維持を測定する当該分野で公知の任意
の他のアッセイにおいて活性である。従って、本発明の局面は、公知の抗酸化特
性を含んでも含まなくともよい化合物を投与する方法を含む、ミトコンドリア関
連疾患を処置するための方法を提供することである。しかし、本発明のこの局面
に従って、ミトコンドリア保護剤が、非ミトコンドリアアッセイ系における抗酸
化特性の決定に基づいて予期できないミトコンドリア保護活性を示し得るという
、予期しない知見が本明細書で開示される。
【００７８】 （Ａ．ジクロロフルオレセインジアセテートを使用する、反応性酸素種（ＲＯ
Ｓ）の生成の阻害についてのアッセイ） このアッセイに従って、本発明のミトコンドリア保護剤がＲＯＳの生成を細胞
内で阻害する能力は、無細胞環境におけるその抗酸化活性に対して比較され得る
。ＲＯＳの生成は、例えば、例示として、かつ限定されないが、２’，７’−ジ
クロロジヒドロフルオレセインジアセテート（「ジクロロフルオレセインジアセ
テート」またはＤＣＦＣ）という、酸化種の存在の高感度な指示薬を使用してモ
ニターされ得る。非蛍光ＤＣＦＣは、酸化によって、蛍光測定によって定量され
得る発蛍光団に転換される。細胞膜はまた、ＤＣＦＣ透過性であるが、ＤＣＦＣ
の荷電した酢酸基は、細胞内エステラーゼ活性により除去され、指示薬が拡散し
て細胞外に戻り得るのを少なくする。
【００７９】 ＲＯＳの産生を阻害するためのＤＣＦＣアッセイの細胞ベースの局面において
、培養された細胞は、適切な量のＤＣＦＣを用いて事前ロードされ得、次いで、
ミトコンドリア保護剤と接触され得る。適切な間隔の後に、培養細胞におけるフ
リーラジカルの産生は、それらを、鉄（ＩＩＩ）／アスコルビン酸と接触させる
ことにより誘導され得、そしてＤＣＦＣ蛍光の相対的平均は、時間の関数として
モニターされ得る。
【００８０】 ＲＯＳの産生の阻害のためのＤＣＦＣアッセイの無細胞の局面において、ミト
コンドリア保護剤は、保護剤、蛍光指標およびフリーラジカル生成者がすべて細
胞の存在しない溶液中に存在する場合、ＤＣＦＣの鉄／アスコルビン酸誘導性酸
化を直接的に阻害する能力について試験され得る。
【００８１】 ＤＣＦＣアッセイの細胞ベースの局面および無細胞ベースの局面におけるミト
コンドリア保護剤の特性の比較は、ミトコンドリア保護剤によるＲＯＳ産生の阻
害の進行が化学量論的であるか、または触媒的であるかを決定することを可能に
し得る。理論により縛られることは望まないが、フリーラジカルを化学量論的に
（例えば、１対１の分子に基づいて）取り除くミトコンドリア保護剤は、好まし
い薬剤を意味し得ない。なぜなら、このような薬剤の高い細胞内濃度がインビボ
で有効であることがそれらに必要とされ得るからである。一方で、触媒的に作用
するミトコンドリア保護剤は、それらの供給源で酸素ラジカルの産生を緩和し得
、またはこの薬剤そのものは変化されることなくＲＯＳの産生をブロックし得、
あるいは未知の機構によりＲＯＳの反応性を変化し得る。このようなミトコンド
リア保護剤は、それが化学量論的濃度以下でＲＯＳを阻害し得るように「リサイ
クル」し得る。細胞内におけるミトコンドリア保護剤によるＲＯＳ産生のこの型
の触媒的な阻害の決定は、ＲＯＳ産生を減少または予防するために薬剤と協同す
る１つ以上の細胞内成分と薬剤との相互作用を示し得る。このような触媒的な阻
害特徴を有するミトコンドリア保護剤は、本発明の方法に従う使用のための好ま
しい薬剤であり得る。
【００８２】 本発明に従う有用なミトコンドリア保護剤は、この蛍光アッセイにより、また
は同様の原理に基づく他のアッセイにより定量されるように、ＲＯＳ産生を阻害
し得る。当業者は、ミトコンドリア保護剤の有効性を決定するための本方法の本
質から解離することなく、本明細書において記載されるようなアッセイに対して
なされ得る改変および変更に精通しており、そしてこのような改変および変更は
、本開示の範囲内である。
【００８３】 （Ｂ．２−、４−ジメチルアミノスチリル−Ｎ−メチルピリジニウム（ＤＡＳ
ＰＭＩ）を用いたミトコンドリア浸透性遷移（ＭＰＴ）についてのアッセイ） このアッセイに従って、ミトコンドリアの機能不全を伴うミトコンドリア膜電
位を消失することを阻害する本発明のミトコンドリア保護剤の能力を決定し得る
。上記のように、ミトコンドリア膜電位の維持は、ミトコンドリアの機能不全の
結果として弱められ得る。膜電位のこの消失またはミトコンドリアの浸透性遷移
（ＭＰＴ）は、ミトコンドリア選択性蛍光プローブ２−、４−ジメチルアミノス
チリル−Ｎ−メチルピリジニウム（ＤＡＳＰＭＩ）を用いて定量的に測定され得
る。
【００８４】 細胞培養への導入の際、ＤＡＳＰＭＩは、ミトコンドリア膜電位依存的な、そ
してミトコンドリア膜電位に比例した様式でミトコンドリア中に蓄積する。ミト
コンドリアの機能が、膜電位を弱めるような様式で崩壊する場合、蛍光指標化合
物は、検出可能蛍光の同時消失で膜結合オルガネラから漏出する。ミトコンドリ
ア関連ＤＡＳＰＭＩ蛍光の崩壊の速度の蛍光的な測定は、膜電位の消失またはＭ
ＰＴの定量的測定を提供する。ミトコンドリアの機能不全はＲＯＳのような反応
性フリーラジカルの結果であり得るので、ＤＡＳＰＭＩ蛍光の消失速度を遅延さ
せるミトコンドリア保護剤は、本発明の方法に従い、ミトコンドリア関連疾患を
処置するための有効な薬剤であり得る。
【００８５】 （Ｃ．ミトコンドリア保護剤で処理した細胞におけるアポトーシスのアッセイ
） 上記のように、ミトコンドリアの機能不全は、細胞のアポトーシスの誘導シグ
ナルであり得る。このアッセイに従って、アポトーシスの発現を阻害または遅延
する本発明のミトコンドリア保護剤の能力を決定し得る。ミトコンドリアの機能
不全は、公知のまたはミトコンドリア関連疾患を有する被験体に由来し得ること
が疑われる細胞において示され得、またはミトコンドリアの機能不全は、当業者
が精通している１つ以上の種々の生理的なおよび生化学的な刺激により正常細胞
において誘導され得る。
【００８６】 アポトーシスアッセイのひとつの局面において、原形質膜の内葉から外葉への
細胞膜ホスファチジルセリン（ＰＳ）の移行は、ＰＳ特異的タンパク質アネキシ
ンによる外葉結合を測定することにより定量される。（Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１５４５、１９９５；Ｆａｋｏｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４８：２２０７、１９９２）。アポトーシスアッセイの別の局面において
、カスパーゼとして公知のアポトーシス活性化プロテアーゼのファミリーにおけ
る特異的プロテアーゼ活性の誘導は、例えば、特異的に認識されたタンパク質基
質のカスパーゼ媒介切断の決定により測定される。これらの基質としては、例え
ば、ポリ−（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）または他の天然に存
在するペプチドもしくは合成ペプチドおよび当該分野で公知であり得るカスパー
ゼによって切断されたタンパク質が挙げられ得る。（例えば、Ｅｌｌｅｒｂｙら
、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：６１６５〜６１７８、１９９７）。アポトーシ
スアッセイの別の局面において、アポトーシス細胞中のミトコンドリアから漏れ
たミトコンドリアタンパク質チトクロムＣの定量は、容易に決定され得るアポト
ーシスの指標を提供し得る。（Ｌｉｕら、Ｃｅｌｌ ８６：１４７、１９９６）
チトクロムＣのこのような定量は、分光光学的に、免疫化学的に、または特異的
なタンパク質の存在を検出するための十分に樹立された他の方法により実行され
得る。当業者は、アポトーシスを定量するための他の適切な技術があり得ること
、そしてアポトーシスの誘導および動力学へのミトコンドリア保護剤の効果を決
定することの目的のためのこのような技術が、本明細書において開示されたアッ
セイの範囲内であることを容易に理解する。
【００８７】 （Ｄ．単離されたミトコンドリアにおける電子伝達系（ＥＴＣ）活性のアッセ
イ） 上記のように、ミトコンドリア関連疾患は、直接的にまたは間接的にＲＯＳの
ような反応性フリーラジカルの上昇したレベルの結果であり得る損なわれたミト
コンドリアの呼吸活性により特徴付けられ得る。従って、本発明によって提供さ
れる方法における使用のためのミトコンドリア保護剤は、ミトコンドリア関連疾
患を有する個体のミトコンドリアにおいてＥＴＣ活性のさらなる悪化を回復また
は予防し得る。ミトコンドリアのＥＴＣ複合体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶおよびＡ
ＴＰシンセターゼの酵素活性のモニタリングのため、ならびにミトコンドリアに
よる酸素消費をモニタリングするためのアッセイ方法は、当該分野において周知
である。（例えば、Ｐａｒｋｅｒら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４４：１０９０〜９
６、１９９４；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６７：１８９７、１
９９６を参照のこと。）ミトコンドリア機能のこのようなアッセイを用いてミト
コンドリア保護剤を同定することは、本発明により提供される方法の範囲内であ
る。さらに、ミトコンドリア機能は、５４０ｎｍでのミトコンドリアチトクロム
Ｃの酸化状態を測定することによりモニターされ得る。上記のように、ミトコン
ドリア関連疾患において上昇し得る酸化的損傷は、ミトコンドリア成分に対する
損傷を含み得る。その結果、チトクロムＣの酸化状態は（それ自体で、またはミ
トコンドリアの酸素消費を含むがこれに限定されないミトコンドリアの機能の他
のパラメーターと協力して）、ミトコンドリア成分に対する反応性フリーラジカ
ルの損傷の指標であり得る。従って、本発明は、ミトコンドリア保護剤によるこ
のような酸化損傷の阻害を試験するために設計された種々のアッセイを提供する
。このようなアッセイがとり得る種々の形態は、当業者によって理解され得、そ
して実施例を含む、本明細書における開示により制限されることは意図されない
。
【００８８】 例えば、例証のためであり、制限されないが、複合体ＩＶの活性は、過剰のア
スコルビン酸に対する曝露を介して完全に減少される市販のチトクロムＣを用い
て決定され得る。次いで、チトクロムＣの酸化は、撹拌したキュベットを用いて
５４０ｎｍで分光光学的にモニターされ得、ここで緩衝液上の環境酸素はアルゴ
ンに置換される。キュベット中の酸素の減少は、当業者が精通している微小酸素
電極を用いて同時にモニターされ得る。ここでこのような電極は、例えば、密閉
されたゴム栓を通じて、サンプルのアルゴン圧を保持する様式でキュベットに挿
入され得る。この反応は、ゴム栓を通じた注入を介する、細胞ホモジネート、ま
たは好ましくは単離されたミトコンドリアの調製物の添加により開始され得る。
このアッセイまたは類似の原理に基づく他のアッセイは、ミトコンドリアの呼吸
活性と１つ以上のミトコンドリア成分の構造的特徴の相関を可能にする。本明細
書において記載されるアッセイにおいて、例えば、複合体ＩＶの活性における欠
損は、酵素認識部位と相関し得る。
【００８９】 以下の実施例は、例示のために提供され、限定するためではない。
【００９０】 （実施例） （実施例１） （ミトコンドリア保護剤によるＲＯＳ産生の阻害のためのＤＣＦＣアッセイ） ＤＣＦＣアッセイの細胞に基づく局面において、コンフルエンスでまたはその
付近で培養された接着性ＳＨ−ＳＹ５Ｙヒト神経芽細胞腫細胞の単層（Ｂｉｅｄ
ｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３３：２６４３，１９７３）を、リンスし、
そして標準的な方法に従ってトリプシンを使用して回収した。２００μｌの培地
中７．５×１０4細胞を含有する単一の細胞懸濁液を、湿潤化細胞雰囲気下で３ ７℃および５％ＣＯ2で一晩インキュベートするために、９６ウェルプレートに 播種した。翌日、ウェルを、温ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ，Ｇｉｂｃｏ−
ＢＲＬ）で穏やかに１回リンスし、３０μＭ ジクロロフルオレシンジアセテー
ト（ＤＣＦＣ−ＤＡ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ
）の２００μｌを、各ウェルに添加し、そして培養物を２時間３７℃／５％ Ｃ
Ｏ2でインキュベートした。過剰のＤＣＦＣ−ＤＡをニードル吸引により除去し 、そして各ウェルを穏やかに２回、ＨＢＳＳでリンスした。次いで、各ウェルに
８０μｌのＨＢＳＳおよび１０μｌのミトコンドリア保護剤、またはジメチルホ
ルムアミドまたはジメチルスルホキシドのストック溶液からＨＢＳＳへと希釈し
たビヒクルコントロールを加えた。有機溶媒の最終濃度を、細胞と接触させなが
ら、ＨＢＳＳ中、０．１％（ｖ／ｖ）、またはそれ未満に維持した。
【００９１】 細胞を、１５分間、室温で、ミトコンドリア保護剤（またはビヒクルコントロ
ール）とともに平衡化し、次いで１０μｌの新鮮５００μＭ 塩化第二鉄／３０
０μＭ アスコルビン酸溶液を加えて、フリーラジカルの形成を開始させた。９
６ウェルプレート中の各微小培養物の蛍光を、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ蛍光定量プレ
ートリーダー（モデル＃２３５０，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆ
ｏｒｄ，ＭＡ；励起波長＝４８５ｎｍ；発光波長＝５３０ｎｍ）を使用して迅速
に定量し、そしてｔ0蛍光を測定した。９６ウェルプレートを、３０分間３７℃ ／５％ＣＯ2でインキュベートし、そして５３０ｎｍでの蛍光を再び測定した（ ｔ30）。３０分間にわたる相対平均蛍光（ＲＭＦ）における変化を、各ウェルに
ついて計算した。
【００９２】 次いで、その細胞をトリプシン処理により回収し、そして血球計を使用して計
数し、１細胞あたりのΔ（ｔ30−ｔ0）ＲＭＦとしてデータを正規化した。候補 ミトコンドリア保護剤の効力を、ＲＯＳ産生を阻害するその能力を、ビヒクルコ
ントロールに対して比較することによって決定した。
【００９３】 ＤＣＦＣアッセイの細胞を含まない局面において、候補ミトコンドリア保護剤
を、マイクロタイタープレート形式における溶液中でのＤＣＦＣのＲＯＳ酸化を
阻害するそれらの能力について、さらに評価する。ストック化合物溶液を、通常
、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中
に調製し、そしてＨＢＳＳを使用して作用濃度へとさらに希釈する。阻害研究を
、ある濃度範囲において行う。ＨＢＳＳ緩衝液中の、１０μｌの化合物溶液また
はビヒクルコントロール、および１０μｌの３００μＭ ＤＣＦＣ溶液を、６０
μｌのＨＢＳＳ緩衝液に添加する。次いで、１０μｌの新鮮５００μＭ 塩化第
二鉄／３００μＭ アスコルビン酸溶液を添加して、フリーラジカル形成を開始
する。９６ウェルプレートにおける各ウェルの蛍光を、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ蛍光
定量プレートリーダー（モデル＃２３５０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．，
Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ；励起波長＝４８５ｎｍ；発光波長＝５３０ｎｍ）を使用
して迅速に定量し、そしてｔ0蛍光を記録する。次いで、１０μｌの０．５％水 性Ｈ2Ｏ2溶液を添加して、ヒドロキシルラジカル形成をＦｅｎｔｏｎ化学を介し
て開始し、そして第二の蛍光定量的リーディングを１０分後にとる。候補ミトコ
ンドリア保護剤がその最大阻害活性の５０％（ＩＣ50）を発揮する濃度を、イン
ヒビター濃度に対する相対的蛍光単位の２次元プロットから計算する。
【００９４】 上記の細胞に基づくアッセイにおける本発明の代表的なミトコンドリア保護剤
のＩＣ50値を提供するデータを、以下の表６に表す。
【００９５】
【表６】
【００９６】 （実施例２） （ＤＡＳＰＭＩを使用するミトコンドリア透過性転移のためのアッセイ） 蛍光ミトコンドリア選択性色素２−，４−ジメチルアミノスチリル−Ｎ−メチ
ルピリジニウム（ＤＡＳＰＭＩ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．
，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を、ＨＢＳＳ中に１ｍＭで溶解し、そして２５μＭまで
温ＨＢＳＳで希釈する。９６ウェルマイクロ培養プレートにおいて、ミトコンド
リア関連疾患を有することが既知の個体、または有すると疑われる個体由来の培
養ヒト細胞、あるいは正常（コントロール）細胞を、０．５〜１．５時間、２５
μＭ ＤＡＳＰＭＩ中、湿潤化３７℃／５％ＣＯ2インキュベーターにおいてイ ンキュベートし、ミトコンドリアに蛍光色素を取り込ませる。次いで、培養上清
を除去し、そしてＤＭＦまたはＤＭＳＯストックからＨＢＳＳ中に希釈した候補
ミトコンドリア保護剤、またはビヒクルコントロールを、種々の濃度で添加する
。
【００９７】 ９６ウェルプレートにおける各マイクロ培養物の蛍光を、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ
蛍光定量プレートリーダー（モデル＃２３５０，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ
．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ；励起波長＝４８５ｎｍ；発光波長＝５３０ｎｍ）を
使用して迅速に定量し、そしてｔ0蛍光を記録する。その後、蛍光減衰を、時間 の関数としてモニターし、そしてその最大負勾配（Ｖ−ｍａｘ）を分析ソフトウ
ェアを使用してデータのサブセットから計算する。さらに、最初および最後のシ
グナル強度を決定し、そして候補ミトコンドリア保護剤のシグナル減衰の割合に
対する効果を定量する。
【００９８】 （実施例３） （ミトコンドリア保護剤のアポトーシスに対する効果） ９６ウェルマイクロ培養プレートにおいて、ミトコンドリア関連疾患を有する
ことが既知の個体、または有すると疑われる個体由来の培養されたヒト細胞、あ
るいは正常（コントロール）細胞または細胞株を、適切な期間、アポトーシスの
生理学的誘導物質（例えば、Ｆａｓリガンド、ＴＮＦ−α、または当該分野で公
知の他のアポトーシス誘導物質）の存在下または非存在下で、そして候補ミトコ
ンドリア保護剤の存在下または非存在下で培養する。
【００９９】 原形質膜ホスファチジルセリン（ＰＳ）の外面化を、９６ウェルプレートに、
適切な緩衝液に溶解したアネキシン蛍光イソチオシアネート結合体（アネキシン
ＦＩＴＣ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｍｂ
ｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を、最終濃度５μｇ／ウェルで細胞表面に結合させるために
添加することによって評価する。（Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８
２：１５４５，１９９５）。湿潤化３７℃／５％ＣＯ2インキュベーター中での １５〜３０分後、細胞をインサイチュで２％ホルマリンを使用して固定し、洗浄
して、非特異的に結合したＦＩＴＣを除去し、そしてＣｙｔｏｆｌｕｏｒ蛍光定
量プレートリーダー（モデル＃２３５０，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｂ
ｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ；励起波長＝４８５ｎｍ；発光波長＝５３０ｎｍ）を使用し
て読み、細胞表面結合アネキシンＦＩＴＣを、外層リーフレット（ｏｕｔｅｒ
ｌｅａｆｌｅｔ）ＰＳ（アポトーシスの進行している細胞についてのマーカー）
の測定として定量する。
【０１００】 カスパーゼ−３活性を、ＤＭＳＯストック溶液からの蛍光原性ペプチド基質Ａ
ｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＡＭＣ（ＤＥＶＤ−ＡＭＣ）を培養培地へ、最
終濃度２０μＭへと、細胞による取り込みのために希釈することによって評価す
る。基質切断は、蛍光団を放出し、これはＣｙｔｏｆｌｕｏｒ蛍光定量プレート
リーダー（モデル＃２３５０，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒ
ｄ，ＭＡ；励起波長＝４３５５ｎｍ；発光波長＝４６０ｎｍ）を使用して継続的
に測定する。カスパーゼ−１を、カスパーゼ−３についてのプロトコルと同じプ
ロトコルを使用して測定し（カスパーゼ−１特異的蛍光原性基質Ｔｙｒ−Ｖａｌ
−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｚ（Ｚ−ＹＶＡＤ）をＤＥＶＤ−ＡＭＣのかわりに用いるこ
とを除く）、そして蛍光定量を４０５ｎｍ励起波長および５１０ｎｍ発光波長を
使用して行う。
【０１０１】 アポトーシスの進行している細胞のミトコンドリアから放出されるシトクロー
ムｃを、ミトコンドリア後上清から回収し、そしてＣ−１８カラム、勾配溶出（
リン酸緩衝液、ｐＨ７．４中の０〜４５％メタノール）を使用する逆相ＨＰＬＣ
、および２５４ｎｍでのＵＶ吸光度によって定量する。市販の真性シトクローム
ｃを標準として用いる。回収したシトクロームｃをまた、標準的かつ周知の方法
論に従って、電気泳動により分離したアポトーシス細胞由来のミトコンドリア後
上清タンパク質の、シトクロームｃ特異的抗体を使用するイムノブロット分析に
よって免疫化学的に定量する。
【０１０２】 （実施例４） （ミトコンドリア保護剤のイオノマイシン誘導アポトーシスに対する効果） ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽腫細胞（１×１０5細胞）を、１容量の１×ＰＢＳでリ ンスし、次いで１０％胎児ウシ血清（ＦＣＳ）（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を補充したＤＭＥＭ中
の１０μＭのイオノマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃ
Ａ）で１０分間処理し、その後、ＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳ）で２回洗浄する。３
７℃でのＤＭＥＭ（１０％ ＦＣＳ）中の６時間のインキュベーションの後、細
胞を光学顕微鏡によって可視化する（２０×倍率）。およそ８０％のイオノマイ
シン処理細胞は、膜の小疱形成を示し、これはそれらの細胞が、未処理細胞にお
ける無視できるアポトーシス（＜５％）に比較して、アポトーシスの最終段階に
進入したことを示す。細胞が、イオノマイシンおよび２ｍＭのクレアチンで同時
に処理された場合、膜の小疱形成によって示されるアポトーシスの進行する細胞
の割合は、約１０％まで減少する。候補ミトコンドリア保護剤を、それらがクレ
アチンがこのイオノマイシン誘導型アポトーシスアッセイにおいてするのと同じ
大きさの、アポトーシスの誘導からの保護を提供するか否かについて決定するた
めにアッセイする。
【０１０３】 （実施例５） （イオノマイシン誘導アポトーシスに対するミトコンドリア保護剤の効果） ρ0ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽細胞腫細胞を、正常被験体由来のミトコンドリア供 給源血小板と融合させることにより産生したコントロールサイブリッド細胞（Ｍ
ｉｘＣｏｎ）、およびρ0ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、アルツハイマー病患者由来の ミトコンドリア供給源血小板と融合させて産生したサイブリッド細胞株である１
６８５細胞（Ｍｉｌｌｅｒら、１９９６ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６７：１８
９７−１９０７）を、６ウェルプレート（〜３×１０6細胞／ウェル）において 完全なコンフルエンシーまで増殖させる。細胞を、まず１容量の１×ＰＢＳでリ
ンスし、次いで１０％ＦＣＳを補充したＤＭＥＭ中の１０μＭのイオノマイシン
で１００μＭの候補ミトコンドリア保護剤の非存在下または存在下で１分間処理
する。１分で、細胞を５容量の冷１×ＰＢＳ（プロテアーゼインヒビターのカク
テル（２μｇ／ｍｌ ペプスタチン、ロイペプチン、アプロチニン、および０．
１ｍＭ ＰＭＳＦを含有する））で２回リンスする。次いで、細胞を、１ｍｌの
冷細胞質抽出緩衝液（２１０ｍＭ マンニトール、７０ｍＭ マンニトール、各
々５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ＥＧＴＡ、グルタミン酸塩およびマレイン酸塩、１ｍＭ
ＭｇＣｌ2、ならびに上記の濃度のプロテアーゼインヒビターのカクテル）に おいて回収する。ホモジネーションを、Ｂタイプｄｏｕｎｃｅホモジナイザーを
２５×で氷上で使用して行った。細胞を、高速でＥｐｐｅｎｄｏｒｆマイクロヒ
ュージにおいて５分間遠心分離し、インタクトな細胞ならびに細胞膜および細胞
小器官から細胞質を分離する。上清を回収し、そしてアリコートをペレットとと
もに−８０℃で、クエン酸シンターゼおよびタンパク質アッセイのために保存す
る。
【０１０４】 シトクロームｃ抗体を、活性化前表面を含む固体支持体チップ（Ｐｒｏｔｅｉ
ｎＣｈｉｐ，Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）に共有結合させ
る。抗体で処理するべきスポットを、最初に１μｌの５０％ＣＨ3ＣＮで水和し 、そしてその抗体溶液を、ＣＨ3ＣＮが蒸発する前に添加する。その抗体の濃度 は、Ｎａ3ＰＯ4またはＰＢＳ緩衝液（ｐＨ８．０）のいずれか中、約１ｍｇ／ｍ
ｌである。チップを、湿潤チャンバーに置き、そして４℃で一晩保存した。細胞
質抽出物を添加する前に、残余の活性部位を、１．５Ｍ エタノールアミン（ｐ
Ｈ８．０）で３０分間処理することによってブロックする。エタノールアミン溶
液を除去し、そして全チップを１５ｍｌのコニカルチューブ中で１×ＰＢＳ中の
１０ｍｌの０．０５％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で、５分間、穏やかに振盪させな
がら室温で洗浄する。その洗浄緩衝液を除去し、そしてチップを、まず０．１Ｍ
ＮａＯＡｃ（ｐＨ４．５）中の１０ｍｌの０．５Ｍ ＮａＣｌで、次いで０．
１Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）中の０．５Ｍ ＮａＣｌで、連続的に洗浄する。
Ｔｒｉｓ−生理食塩水緩衝液を除去した後、そのチップを１×ＰＢＳでリンスし
、そして抗原の捕捉についての準備が整う。
【０１０５】 新鮮な上清サンプルを、共有結合した抗シトクロームｃ抗体を含有するＣｉｐ
ｈｅｒｇｅｎ ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｉｐ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ，ＣＡ）上にスポットする。最適抗体シトクロームｃ相互作用のために、
１００μｌの上清を使用して、そしてインキュベーションを振盪させながら４℃
で一晩Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎバイオプロセシングユニットにおいて行う。次いで、
その上清を除去し、そしてチップ上のそのスポットをバイオプロセシングユニッ
トにおいて３回、１×ＰＢＳ中の２００μｌの０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００
で、次いで２回、１×ＰＢＳ中の２００μｌの３．０Ｍ 尿素で洗浄する。次い
で、そのチップをバイオプロセッサーから除去し、約１０ｍｌのｄＨ2Ｏで洗浄 する。次いで、そのチップを、ＥＡＭ溶液（例えば、シナピン酸（ｓｉｎａｐｉ
ｎｉｃ ａｃｉｄ）、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）を添加
する前に、室温で乾燥させる。ＥＡＭの懸濁液を、０．５％ ＴＦＡを含有する
５０％ ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ中、２５ｍｇ／ｍｌの濃度で作製する。飽和ＥＡＭ溶
液を、遠心分離によって清澄化し、そしてその上清をＰｒｏｔｅｉｎＣｈｉｐ表
面上にスポットするために使用する。ＥＡＭをチップに添加する前に、ユビキチ
ンの内部標準をＥＡＭ溶液に添加し、最終濃度１ｐｍｏｌ／μｌを提供する。イ
オノマイシン処理の際にミトコンドリアから放出されるシトクロームｃの定量は
、質量分析スペクトルにおいてユビキチンピークに対して正規化すること、およ
び細胞質抽出物のタンパク質含有量に基づく。細胞質抽出物のクエン酸シンター
ゼ活性を、サンプル調製手順の間のミトコンドリア溶解の可能性を排除するため
に、測定する。このアッセイからのデータを、例えば、イオノマイシン誘導型ア
ポトーシスの進行している細胞におけるシトクロームｃ放出、および候補ミトコ
ンドリア保護剤化合物で処理した細胞におけるシトクローム放出の減衰を、イオ
ノマイシンを導入すると同時にグラフ化することによって表し得る。
【０１０６】 （実施例６） （構造（Ｉ）の代表的ミトコンドリア保護剤の合成および特徴付け） この実施例は、本発明の構造（Ｉ）を有する代表的なミトコンドリア保護剤の
合成および特徴付けを例示する。
【０１０７】 （構造（Ｉ−６）：） 還流下、１５ｍｌのジメトキシエタン中の１２３ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌｅ）
の４−アリル−２−メトキシフェノール（オイゲノール）、および１．４グラム
（７．５ｍｍｏｌｅ）のｐ−トルエンスルホンヒドラジドの溶液に、１５ｍｌの
水中の１．７グラムのＮａＯＡｃの溶液を４時間にわたって添加した。この混合
物を、室温まで冷却し、２０ｍｌの水中に注ぎ、そして３回３０ｍｌのＣＨ2Ｃ ｌ2で抽出した。合わせた有機層を、５０ｍｌの水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥さ
せ、そして減圧下で濃縮した。得られる固体を、ヘキサン中で１０％エチルアセ
テートを使用してのシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけ、６０
ｍｇの２−メトキシ−４−プロピルフェノールを４８％の収率で得た。
【０１０８】 ０．４ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中の３８ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌｅ）の２−メトキシ
−４−プロピルフェノールに、−７８℃、アルゴン下で２５４μｌ（０．２５２
ｍｍｏｌｅ）の１Ｍ ＢＢｒ3のＣＨ2Ｃｌ2溶液を添加した。この反応混合物を −７８℃で１時間撹拌し、次いで、０℃に暖めた。この反応を２ｍｌの水を添加
することによってクエンチした。この混合物を５ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2で３回抽出し
、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてロータリーエバポレーターで濃縮した。粗
生成物を、ヘキサン中２５％酢酸エチルを使用して、シリカゲル上でフラッシュ
クロマトグラフィーに供して、３０ｍｇの２−ヒドロキシ−４−プロピルフェノ
ール（構造（Ｉ−６）、収率８６％）を供給した。
【０１０９】 （構造（Ｉ−８）：） ６０ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌｅ）の２−ヒドロキシ−４−プロピルフェノール
に、アルゴン下で０．９ｍｌのピリジンおよび０．７５ｍｌの無水酢酸を添加し
た。この混合物を２３℃で１８時間攪拌した。次いで、反応混合物を、３５ｍｌ
のヘキサン中にとり、１０ｍｌのブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ
、そして濃縮した。生成物をヘキサン中１５％酢酸エチルを用いてシリカゲル上
でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、８７ｍｇの構造物（Ｉ− ８）、収率９３％を得た。
【０１１０】 （構造（Ｉ−２）：） 濃硫酸（２０４μｌ）を０℃の７００μｌの水に注意深く添加した。次いで、
２２３ｍｇ（２．６３ｍｍｏｌｅ）のＮａＮＯ3を添加し、この混合物を、塩が 溶液に入るまで０℃で攪拌した。次いで、４−オクチルフェノール（３０９ｍｇ
；１．５ｍｍｏｌｅ）を２等分で添加した。反応混合物は赤み色を帯びた。反応
を０℃で１０分間進行させ、次いで２３℃で３時間進行させた。混合物を、６０
ｍｌの酢酸エチル中にとり、２０ｍｌのブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾
燥させ、そして濃縮した。ヘキサン中の５％酢酸エチルを用いてフラッシュクロ
マトグラフィーにより精製して、２５７ｍｇの２−ニトロ−４−オクチルフェノ
ールを、収率６８％で得た。
【０１１１】 ２ｍｌの氷酢酸と水の１：１混合物（８５〜９５℃）中の９５．４ｍｇ（０．
３８ｍｍｏｌｅ）の２−ニトロ−４−オクチルフェノールに、１５分間にわたっ
て０．３５ｍｇの活性鉄を三等分で添加した。反応を同じ温度で４５分間進行さ
せた。次いで、反応混合物を５ｍｌの水で希釈し、そして２０ｍｌの酢酸エチル
で抽出した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてロータリーエバポレー
ターで濃縮した。粗生成物をヘキサン中３０％酢酸エチルを使用してシリカゲル
上でフラッシュクロマトグラフィーに供して、５６ｍｇの２−アミノ−４−オク
チルフェノール（構造Ｉ−２）を収率６７％で得た。
【０１１２】 （構造（Ｉ−３）：） 構造（Ｉ−３）の化合物を上記の構造（Ｉ−２）と同じ様式で調製し得るが、
４−オクチルフェノールの代わりに、ｔ−オクチルフェノールを使用する。
【０１１３】 （実施例７：構造（ＩＩ）の代表的なミトコンドリア保護剤の合成および特徴
付け） この実施例は、本発明の構造（ＩＩ）を有する代表的なミトコンドリア保護剤
の合成および特徴付けを例示する。
【０１１４】 （構造（ＩＩ−４）：） 濃硫酸（８１６μｌ）を、８９２ｍｇ（１０．５ｍｍｏｌｅ）のＮａＮＯ3を 添加した後に０℃の水２．８ｍｌに滴下して加え、そして０℃でマグネティック
スターラーで攪拌することによって溶解した。４，４’−イソプロピリデンジフ
ェノール（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｉｄｅｎｅｄｉｐｈｅｎｏｌ）（６８２ｍｇ、３
ｍｍｏｌｅ）を添加し、そして混合物を０℃で１５分間撹拌し、次いで２３℃で
１６時間攪拌した。反応生成物を１２０ｍｌの酢酸エチル中にとり、５０ｍｌの
水で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして濃縮した。粗性原料を、ヘキサ
ン中の１０％酢酸エチルを使用してシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィ
ーに供して、２００ｍｇ（収率２４％）のモノ−ニトロ誘導体および４５７ｍｇ
（収率４８％）のジ−ニトロ化合物を得た。
【０１１５】 ２ｍｌの氷酢酸と水の１：１混合物（８５℃〜９０℃）中の６６ｍｇ（０．２
４ｍｍｏｌｅ）のモノ−ニトロ化合物に、０．３ｍｇの活性化鉄を１５分間にわ
たって３等分して添加した。反応を、撹拌しながら同じ温度で４５分間にわたっ
て進行させた。次いで、反応混合物を５ｍｌの水で洗浄し、２０ｍｌの酢酸エチ
ルで抽出し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして濃縮した。クロロホルム中１０
％メタノールを使用して、粗生成物のシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー
によって、５５．７ｍｇの構造（ＩＩ−４）を収率９６％で得た。
【０１１６】 （構造（ＩＩ−２）：） 構造（ＩＩ−２）を、ジ−ニトロ化合物から同様の手順によって収率４５％で
調製した。
【０１１７】 （構造（ＩＩ−６）：）
【化３５】
【０１１８】 ０．８５ｍｌの酢酸中２５ｍｇのジアミンに３３ｍｇのパラホルムアルデヒド
および７１ｍｇのＮａＣＮＢＨ3を添加した。溶液を、２３℃で１６時間撹拌し 、次いで、２０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ3に注ぎ、次いで、２×２５ｍｌの酢酸エ チルで抽出した。溶液を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、そして残渣を５％
ＣＨ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3溶媒系を用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製
して、１７ｍｇのヘキサメチル−ベンズヒドリル誘導体を収率５４％で得た。（
２，２，４−トリメチル−１，２−ジヒドロ−キノリン−６−オールのＮ−メチ
ルアナログ（構造ＩＩＩ−１１）を同様の様式で調製し得る。） （構造（ＩＩ−９）：）
【化３６】
【０１１９】 ５ｍｌの乾燥ＤＭＥ中１７１ｍｇの４，４−イソプロピリデンジフェノール（
０．７５ｍｍｏｌ）に１．１２ｍｇのＫ2ＣＯ3および３９６μｌのＣＨ3Ｉ（６ ．４ｍｍｏｌ）を添加し、そしてこの混合物を１６時間還流した。この混合物を
濾過し、残渣を酢酸エチルで洗浄し、そして濾液と合わせた。この溶液をエバポ
レートし、そして粗化合物を、ヘキサン中３０％酢酸エチルを用いてフラッシュ
クロマトグラフィーに供して、生成物の１つとして１１８ｍｇのジメトキシ誘導
体を得た（収率６９％）。
【０１２０】 ５６０ｍｌの乾燥スルホラン中７７ｍｇのジメトキシ誘導体に、５９０ｍｌの
０．５Ｍ ニトロニウムテトラフルオロボレートのスルホラン溶液を４℃で添加
した。この混合物を、アルゴン下で１５分間撹拌し、次いで、８０ｍｌの酢酸エ
チルで希釈した。この溶液を２０ｍｌの水で４回洗浄し、無水硫酸マグネシウム
で乾燥させ、そして濃縮した。この生成物をヘキサン中３０％酢酸エチルを用い
て、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーに供して、２９ｍｇのモノ−ニト
ロ化生成物および１５ｍｇのジ−ニトロ誘導体を得た。
【０１２１】 １ｍｌの１：１の氷酢酸／Ｈ2Ｏ中３６ｍｇのモノ−ニトロ誘導体に、１３０ ｍｇの活性鉄を添加し、そしてこの混合物を、８５℃〜９０℃で４５分間還流し
た。次いで、水（５ｍｌ）を添加し、そして生成物を酢酸エチルで抽出し、そし
て減圧下で濃縮した。次いで、生成物を、溶出系として５０％酢酸／ヘキサンを
用いて分取薄層クロマトグラフィーにより精製した。
【０１２２】 （構造（ＩＩ−１０）：）
【化３７】
【０１２３】 アルゴン入り口を取り付けた丸底フラスコに、化合物（ＩＩ−４）（３０ｍｇ
、０．１２３ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２
−メチル−２−チオプソイド尿素（４６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）および乾燥Ｎ
，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６３０μｌ）を入れた。上記の室温で攪拌した溶
液に、トリエチルアミン（５２μｌ、０．３７ｍｍｏｌ）および塩化第二水銀（
３７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で攪拌し、そ
の際に白色沈殿物がすぐに形成された。３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エ
チルで希釈し、そしてセライトのパッドで濾過した。濾液を５％炭酸ナトリウム
水（１×１０ｍｌ）、水（２×１０ｍｌ）、およびブライン（１×１０ｍｌ）で
洗浄した。この溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濃縮して、粗生
成物を得た。２０％酢酸エチル／ヘキサンを用いたフラッシュクロマトグラフィ
ーによる精製によって、４５ｍｇのＢｏｃ保護グアニジン誘導体が得られた。
【０１２４】 Ｂｏｃ基の脱保護を、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた処理によって行っ
た。従って、４５ｍｇのベンズヒドリル−Ｂｏｃ誘導体にアルゴン下で、１ｍｌ
の５０％ＴＦＡ／ＣＨ2Ｃｌ2溶液を添加して、混合物を２３℃で３時間攪拌した
。次いで、溶媒をロータリーエバポレーターによって取り除いて、２７ｍｇの純
粋な構造（ＩＩ−１０）のグアニジン誘導体を得た（１％ＨＯＡｃを含む２０％
ＣＨ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3溶出システムを用いたＴＬＣによる単一スポット）。
【０１２５】 （実施例８：構造（ＩＩＩ）の代表的なミトコンドリア保護剤の合成および特
徴付け） この実施例は、本発明の、構造（ＩＩＩ）を有する代表的なミトコンドリア保
護剤の合成および特徴付けを例示する。
【０１２６】 （ＮＳＡＩＤの６−エトキシ−１，２−ジヒドロ−２，２，４−トリメチルキ
ノリン（エトキシキン）とのカップリング）
【化３８】
【０１２７】 イブプロフェン、（Ｓ）−（＋）−４−イソブチル−α−メチルフェニル酢酸
、およびナプロキセン、（Ｓ）−（＋）−６−メトキシ−α−２−メチル−２−
ナフタレン酢酸を、以下の手順によって、それらの酸塩化物に変換した。アセチ
ルサリチロイルクロリドは、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉ
ｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から市販される。イブプロフェン結合体調製は、代表的
なカップリング手順である。従って、７ｍｌの乾燥ベンゼン中１０３ｍｇ（０．
５ｍｍｏｌ）のイブプロフェンに、迅速な気体蒸発（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）を生
じる５４μｌの塩化オキサリルを添加した。この混合物を、２３℃で３０分間攪
拌し、次いで、溶媒をロータリーエバポレーションによって取り除いた。油性残
渣を７ｍｌの乾燥ＴＨＦ中にとり、そして溶媒を再び蒸発して、残りの塩化オキ
サリルを取り除いた。酸塩化物生成物を、さらに３０分間高減圧下で保持し、そ
して精製することなく次の工程で使用した。１ｍｌの乾燥ベンゼン中、７４μｌ
（約０．３５ｍｍｏｌ）のエトキシキンおよび前の反応物からの酸塩化物の溶液
を、２３℃で７２時間攪拌して、次いで、４時間還流した。溶媒を減圧下で取り
除き、そして生成物を、１３％酢酸エチル／ヘキサン溶媒系を用いてフラッシュ
クロマトグラフィー（ｆｌｅｓｈ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）により精製
して、８２ｍｇのイブプロフェン結合体を５７％の収率で得た。ナプロキセン結
合体およびアセチルサリチル酸結合体を、それぞれ、５７％および１０％の収率
で得た。
【０１２８】 （６−アルキルチオ−１，２−ジヒドロ−２，２，４−トリメチルキノリンの
合成：）
【化３９】
【０１２９】 ６−アルキルチオ−１，２−ジヒドロ−２，２，４−トリメチルキノリンを、
１−アセチル−１，２−ジヒドロ−２，２，４−トリメチルキノリン−６−チオ
ール（１）から２工程の手順で調製した。化合物（２）を、Ｓａｌｏｒカタログ
（Ｓ１３８５７−８）に記載され、そしてＳｉｇｍａおよびＡｌｄｒｉｃｈ Ｃ
ｅｍｉｃａｌｓから注文可能である２，２，４−トリメチル−１，２−ジヒドロ
キノリン−６−オール（１）から、ＰｅａｒｃｅおよびＷｒｉｇｈｔ（米国特許
第５，４１１，９６９号）に記載される手順によって合成した。簡潔には、（２
）を、ジメチルチオカルバモイルクロリドを用いた（１）の処理によって合成し
て、Ｏ−アリールジメチルチオカルバメートを得る。これは、酸触媒としてＰ−
トルエンスルホン酸を使用して、Ｓ−アリールチオカルバメートに再配置（ｒｅ
ａｒｒａｎｇｅ）される。得られた中間体を無水酢酸と反応させて、Ｎ−アセチ
ル誘導体を得、次いで、これをメタノール中のナトリウムメトキシドで処理して
、ジメチルチオカルバメートを脱マスクし、チオール（２）を得る。
【０１３０】 （１，２−ジヒドロ−６−チオメトキシ−２，２，４−トリメチルキノリンの
合成） ３ｍｌの無水アセトニトリル中１５０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）の１−アセチ
ル−１，２−ジヒドロ−２，２，４−トリメチルキノリン−６−チオール（２）
にアルゴン下、１２６ｍｇ（０．９２ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムおよび３８μｌ
（０．６１ｍｍｏｌ）のヨウ化メチルを添加した。この混合物を、室温で２時間
攪拌して、次いで、３０ｍｌの酢酸エチル中にとり、水、次いでブラインで洗浄
した。有機層を無水ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過および濃縮した。１−アセチル −１，２−ジヒドロ−６−チオメトキシ−２，２，４−トリメチルキノリンを、
溶出系として酢酸エチル／ヘキサンを使用して、シリカゲルフラッシュクロマト
グラフィーにより精製した。
【０１３１】 ２ｍｌの乾燥ＴＨＦ中、−１０℃で１−アセチル−１，２−ジヒドロ−２，２
，４−トリメチルキノリン−６−チオール（９０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）に、
アルゴン下で１．７５ｍｌのトリエチルホウ化水素リチウムの１Ｍ ＴＨＦ溶液
を滴下様式で添加した。この混合物を１０分間撹拌し、次いで、２３℃に暖めて
、さらに１６時間攪拌した。過剰なホウ化水素試薬を、飽和ＮＨ4Ｃｌの添加に よってクエンチした。この混合物を水に注ぎ、次いで酢酸エチルで抽出した。次
いで、有機層をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過および濃縮 した。原料を、酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルフラッシュクロマト
グラフィーで精製し、純粋な１，２−ジヒドロ−６−チオメトキシ−２，２，４
−トリメチルキノリンを得た。
【０１３２】 （実施例９：構造（ＩＶ）の代表的なミトコンドリア保護剤の合成および特徴
づけ） （６−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロ
マン−２−カルボン酸ｔ−ブチルジメチルシリルエステル） ２．８ｍｌの無水ＤＭＦ中５００ｍｇ（２ｍｍｏｌｅ）のＴｒｏｌｏｘにアル
ゴン下で、９５２ｍｇ（１４ｍｍｏｌｅ）のイミダゾールおよび１．０６ｇ（７
ｍｍｏｌｅ）の塩化ｔ−ブチルジメチルシリルを添加し、そしてこの混合物を２
３℃で７時間攪拌した。この反応混合物を、２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中にとり、
各々３０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで連続して洗浄した。有機
層を無水ＮａＳＯ4で乾燥させ、次いで、溶媒を減圧下で取り除き、２．０１ｇ の粗反応生成物を得た。このカルボン酸誘導体を、さらに精製することなく、次
の工程に使用した。
【０１３３】 （６−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２，５，７，８−テトラメチル−３
，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾ［１，２−ｂ］ピラン−２イル）メタノール
５１１ｍｇ（１３．８ｍｍｏｌｅ）の水素化アルミニウムリチウム（ｌｉｔｈ
ｉｕｍ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ）(ＬＡＨ)にアルゴン下で、１７ｍ
ｌの無水ＴＨＦを添加し、そしてこの混合物を０℃まで冷却した。前の反応の粗
反応生成物（２．０１ｇ）を２４ｍｌの無水ＴＨＦ中に溶解し、そしてこの溶液
をＬＡＨ懸濁物に滴下して添加した。この反応混合物を、過剰なＬＡＨを飽和硫
酸ナトリウム水溶液の添加によってクエンチした後に、０℃で２時間攪拌した。
得られた凝結物を、焼結ガラス漏斗のセライトの床上に注ぎ、そして約１５０ｍ
ｌの酢酸エチルを使用して、セライトの床を洗浄した。溶媒を、ロータリーエバ
ポレーションによって取り除き、そして所望のシリルエーテル−アルコール誘導
体を、クロロホルムを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによっ
て精製して、５８３ｍｇ（２工程にわたって収率８３％）の単離された材料を得
た。1ＨＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）ｄ ３．６０（ｍ，２Ｈ），２．
１０（ｍ，２Ｈ）２．１０（ｓ，３Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ
，３Ｈ），１．２１（ｓ，３Ｈ）１．０５（ｓ，９Ｈ），０．１１９（ｓ，３Ｈ
），０．１１６（ｓ，３Ｈ）。
【０１３４】 （構造（ＩＶ−６）（クロマノール（ｃｈｏｒｍａｎｏｌ）−ナプロキセン（
ｎｕｐｒｏｘｅｎ）結合体）） １．７ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2中、５７．３ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌｅ）の（６
−ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２，５，７，８−テトラメチル−３，４−
ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾ［１，２−ｂ］ピラン−２イル）メタノールに、３
７．５ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の（＋）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナ
フタレン酢酸（ナプロキセン）、３７ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌｅ）の１，３−ジ
シクロヘキシルカルボジイミドおよび５．７ｍｇの４−ジメチルアミノピリジン
を添加した。この反応混合物を、アルゴン下で５時間にわたって攪拌し、次いで
、尿素副産物を濾過によって取り除いた。カップリング反応の生成物を、１０％
酢酸エチルを使用して、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精
製して、７８．２ｍｇ（８５％）の純粋な材料を得た。
【０１３５】 １ｍｌの無水ＴＨＦ中、３０．７ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌｅ）の上記のシリル
オキシエーテル誘導体の溶液（０℃）にアルゴン下で、１６４μｌ（０．１６４
ｍｍｏｌｅ）のＴＨＦ中の１Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液を添加
した。この反応物を、０℃で１０分間保持し、次いで、２３℃で３０分間維持し
た。この混合物を、３０ｍｌの酢酸エチル中にとり、ブラインで洗浄し、無水Ｎ
ａＳＯ4で乾燥させ、そして濃縮した。このナプロキセン−クロマノール（ｃｈ ｒｏｍａｎｏｌ）結合体を、溶出溶媒としてヘキサン中２０％酢酸エチルを用い
て分取薄相クロマトグラフィーにより精製して、６ｍｇの精製された材料を得た
。
【０１３６】 （構造（ＩＶ−７）（クロマノール−サリチル酸結合体）） 構造（ＩＶ−７）を上記と同じ様式で作製したが、ナプロキセンの代わりにサ
リチル酸を使用した。
【０１３７】 （構造（ＩＶ−８）（クロマノール−イブプロフェン結合体）） 構造（ＩＶ−８）を上記と同じ様式で作製したが、ナプロキセンの代わりにイ
ブプロフェンを使用した。
【０１３８】 （構造（ＩＶ−３）） ２ｍｌの無水ＴＨＦ中、２５１ｍｇ（６．６ｍｍｏｌｅ）のＬＡＨの懸濁物に
、１０ｍｌの無水ＴＨＦ中のｔｒｏｌｏｘ（０．５ｇ、２ｍｍｏｌｅ）の溶液を
滴下して添加した。この溶液を、２時間攪拌し、そして過剰なＬＡＨを飽和硫酸
ナトリウム水溶液の添加によってクエンチした。アルミニウム塩をセライト床を
通過させて濾過することにより取り除き、有機溶液を無水ＮａＳＯ4で乾燥させ 、そして濃縮した。粗混合物を０．５／１／９８．５のメタノール／酢酸／クロ
ロホルム溶出を使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し
て、３２３ｍｇ（６８％）の構造（ＩＶ−３）を得た。
【０１３９】 （構造（ＩＶ−９））
【０１４０】
【化４０】 水素化アルミニウムリチウム（４７３ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの
乾燥ＴＨＦ中に懸濁し、そして１２ｍｌのＴＨＦ中の１ｇのＴｒｏｌｏｘ（４ｍ
ｍｏｌ）を、アルゴン下で添加した。この反応混合物を、２３℃で２時間撹拌し
、次いで、これを氷／水混合物中に注意深く注いで、クエンチした。水層を、１
００ｍｌの酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水Ｎ
ａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして濃縮した。残渣を、１：１：９８のメタノール／酢
酸／ＣＨＣｌ3溶媒系を使用してフラッシュクロマトグラフィーにより精製して 、９３６ｍｇのジオール（収率９４％）を得た。
【０１４１】 第一級アルコールを、Ｓｗｅｒｎ酸化条件を使用してアルデヒドに酸化した。
従って、２ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中の塩化オキサリル（１００μｌ）（−７８℃）に
Ｎ2下で、１００μｌのＤＭＳＯを添加し、そしてこの反応混合物を１０分間攪 拌した。次いで、１ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中の上記ジオール９７ｍｇの溶液を添加し
、そして反応物を１５分間攪拌した。次いで、トリエチルアミン（７５０μｌ）
を添加し、そしてこの混合物を２３℃に暖めた。次いで、水（１．５ｍｌ）を添
加し、この混合物をさらに１０分間攪拌した。粗生成物を、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出し
、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、そしてヘキサン中２５％酢酸エチルを使
用してフラッシュクロマトグラフィーに供して、５６ｍｇのアルデヒドを６７％
の収率で得た。この材料を、次の反応にすぐに使用した。
【０１４２】 ２ｍｌの酢酸中、４６ｍｇのアルデヒド（０．２ｍｍｏｌ）、４３．３ｍｇの
アミノグアニジン（０．４ｍｍｏｌ）、および１２３ｍｇのＮａＣＮＢＨ3の混 合物を、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、反応混合物を、５０ｍｌの飽和Ｎ
ａＨＣＯ3に注ぎ、次いで、２×５０ｍｌの酢酸エチルで抽出した。この溶液を 、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、そして残渣を１：１４：８５のＨＯＡｃ
／ＣＨ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3の溶媒系を使用してフラッシュクロマトグラフィーによ
り精製して、５４ｍｇの構造（ＩＶ−９）を得た。ＭＳ２９３．３（Ｍ＋１）。
【０１４３】 本発明の特定の実施態様が本明細書中に例示のために記載されてきたが、種々
の改変が本発明の思想および範囲から逸脱することなくなされ得ることは、前述
から明らかである。従って、本発明は、添付の請求の範囲を除いて、限定されな
い。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/235 Ａ６１Ｋ 31/235 31/353 31/353 31/47 31/47 47/48 47/48 Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 9/10 9/10 25/00 25/00 25/08 25/08 25/14 25/14 25/16 25/16 25/18 25/18 25/28 25/28 27/00 27/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 215/08 Ｃ０７Ｄ 215/08 215/20 215/20 311/72 １０１ 311/72 １０１ (31)優先権主張番号 ６０／０７２，４８４ (32)優先日 平成10年１月26日(1998．1．26) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０７２，４８７ (32)優先日 平成10年１月26日(1998．1．26) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 デイビス， ロバート イー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 92130， サン ディエゴ， グレンクリフ ウェ イ 13272 (72)発明者 ムース， ウォルター エイチ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94611， オークランド， グリズリー テラス ドライブ （番地なし) Ｆターム(参考） 4C031 AA04 4C062 FF66 4C076 AA12 CC01 CC05 DD22A DD26A DD41A DD51A DD59A EE30A EE38A FF05 FF06 FF09 FF52 4C086 AA02 AA03 BA08 BC28 MA03 MA04 MA52 MA56 MA58 MA59 MA60 MA63 MA66 NA14 ZA03 ZA15 ZA16 ZA18 ZA94 ZC35 4C206 CA19 CA27 CB19 DB15 FA31 HA10 MA03 MA04 MA72 MA76 MA78 MA79 MA80 MA83 MA86 NA14 ZA03 ZA15 ZA16 ZA18 ZA94 ZC35

Claims (40)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ミトコンドリア関連疾患の処置を必要とする温血動物に、以
    下の構造（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）： 【化１】 （それらの立体異性体、プロドラッグ、および薬学的に受容可能な塩を含む）の
    うちの１つを有する化合物の有効量を投与することによってミトコンドリア関連
    疾患を処置するための方法であって、 ここで、構造（Ｉ）において： Ｘ1は、−ＯＨ、−ＯＲa、および−ＯＣＯＣＨ3から選択され； Ｙ1は、−ＯＨ、−ＲaＯＨ、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜l2アルキルから選択
    され； Ｚ1は、−Ｈ、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＮＯ2、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜12ア ルキルから選択され；そして 出現する各々のＲaは、Ｃ1〜6アルキルから選択され； ここで、構造（ＩＩ）において： Ｒ1およびＲ2は、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ1〜3アルキル、およびＣ1-3アルキル から独立して選択され； Ｘ2は必要に応じて存在し、そして−Ｃ（Ａ2）（Ａ3）−、−（ＣＨ2）n−、 −Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され； Ｙ2およびＺ2は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲb、−ＮＨＣＮＨＮ
    Ｈ2、−ＮＨＲb、および−ＮＲbＲcから独立して選択され； Ａ2およびＡ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； ＲbおよびＲcは、独立してＣ1〜4アルキルであり；そして ｎは２〜９であり； ここで、構造（ＩＩＩ）において： 点線は、単結合または二重結合を表し； Ａ1は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから選択され； Ｙ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−ＣＯＲdから選択され； Ｚ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−（ＣＨ2）mＸ3Ｒdから選択され； それぞれの出現箇所のＸ3は、−Ｓ−、−Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され ； Ｒ3は、−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、および−Ｒdから選択され； Ｒdは、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド抗炎症 薬から選択され；そして ｍは１〜４であり；そして ここで、構造（ＩＶ）において： Ｗ1、Ｗ2、およびＷ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； Ｘ4は、−ＮＨ−、−Ｏ−、および−Ｓ−から必要に応じて選択され； Ｙ4は、−ＨおよびＣ1〜12アルキルから選択され；そして Ｒ4は、−Ｈ、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド 抗炎症薬から選択されるか、またはひとまとまりになったＸ4−Ｒ4は−ＣＨ2Ｏ Ｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、およびＣ1〜3アルキルから選択される、 方法。
  2. 【請求項２】 前記ミトコンドリア関連疾患が、アルツハイマー病、真性糖
    尿病、パーキンソン病、神経または心臓の虚血、ハンティングトン病、ポリグル
    タミン疾患、失調症、レーバー遺伝性視神経萎縮、精神***症、筋変性障害、ま
    たはミオクローヌス癲癇不完全赤筋線維症候群である、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記筋変性障害が、ミトコンドリア性脳障害、乳酸アシドー
    シスまたは発作である、請求項２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記ポリグルタミン疾患が、脊髄延髄性筋萎縮、マチャド−
    ジョセフ病（ＳＣＡ−３）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、ま
    たは脊髄小脳性運動失調１、２、もしくは６である、請求項２に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記ミトコンドリア関連疾患が、アルツハイマー病、パーキ
    ンソン病、真性糖尿病、または発作である、請求項１に記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記化合物が、構造（Ｉ）を有する、請求項１に記載の方法
    。
  7. 【請求項７】 Ｘ1が、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、または−ＯＣＯＣＨ3である、 請求項６に記載の方法。
  8. 【請求項８】 Ｚ1が、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣＯＣＨ3、またはＣ1〜8ア ルキルである、請求項６に記載の方法。
  9. 【請求項９】 Ｙ1が、−ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ3、または−Ｃ1〜8アルキルで
    ある、請求項６に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 前記化合物が、構造（ＩＩ）を有する、請求項１に記載の
    方法。
  11. 【請求項１１】 Ｒ1およびＲ2が、−Ｈまたは−ＣＨ3である、請求項１０ に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 Ｘ2が、−Ｃ（ＣＨ3）2−である、請求項１０に記載の方 法。
  13. 【請求項１３】 Ｙ2およびＺ2が、独立して、−Ｈ、−ＮＨ2、または−Ｎ （ＣＨ3）2である、請求項１０に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記化合物が、構造（ＩＩＩ）を有する、請求項１に記載
    の方法。
  15. 【請求項１５】 Ｒ3が、−Ｈ、−ＣＨ3、または−ＣＨ2ＣＨ3である、請求
    項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 Ｘ3が、−Ｏ−である、請求項１４に記載の方法。
  17. 【請求項１７】 Ａ1が、−ＣＨ3である、請求項１４に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 Ｚ3が、−ＣＨ3である、請求項１４に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 Ｙ3が、−Ｈまたは−ＣＨ3である、請求項１４に記載の方
    法。
  20. 【請求項２０】 Ｙ3が、−ＣＯＲdである、請求項１４に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 Ｒdが、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である、請 求項２０に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェン、アスピリン、ナプロ
    キセンである、請求項２１に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 前記化合物が、構造（ＩＶ）を有する、請求項１に記載の
    方法。
  24. 【請求項２４】 Ｗ1、Ｗ2、およびＷ3が、−ＣＨ3である、請求項２３に記
    載の方法。
  25. 【請求項２５】 Ｙ4が、−ＣＨ3である、請求項２３に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 ひとまとまりになったＸ4−Ｒ4が、−Ｏ−ＮＳＡＩＤであ
    る、請求項２３に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェン、アスピリン、または
    ナプロキセンである、請求項２６に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 ひとまとまりになったＸ4−Ｒ4が、−ＯＨ、−ＣＨ3、− ＣＨ2ＯＨ、または−ＯＣＯＣＨ3である、請求項２３に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 Ｘ4が−ＮＨ−であり、そしてＲ4が構造−ＮＨＣ（＝ＮＨ
    ）ＮＨ2を有するグアニジノ部分である、請求項２３に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 以下の構造化合物（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または
    （ＩＶ）： 【化２】 （それらの立体異性体、プロドラッグ、および薬学的に受容可能な塩を含む）の
    うちの１つを有する化合物であって： ここで、構造（Ｉ）において： Ｘ1は、−ＯＨ、−ＯＲa、および−ＯＣＯＣＨ3から選択され； Ｙ1は、−ＯＨ、−ＲaＯＨ、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜l2アルキルから選択
    され； Ｚ1は、−Ｈ、−ＮＨ2、−ＯＨ、−ＮＯ2、−ＯＣＯＣＨ3、およびＣ1〜12ア ルキルから選択され；そして 出現する各々のＲaは、Ｃ1〜6アルキルから選択され； ここで、構造（ＩＩ）において： Ｒ1およびＲ2は、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ1〜3アルキル、およびＣ1-3アルキル から独立して選択され； Ｘ2は必要に応じて存在し、そして−Ｃ（Ａ2）（Ａ3）−、−（ＣＨ2）n−、 −Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され； Ｙ2およびＺ2は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲb、−ＮＨＣＮＨＮ
    Ｈ2、−ＮＨＲb、および−ＮＲbＲcから独立して選択され； Ａ2およびＡ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； ＲbおよびＲcは、独立してＣ1〜4アルキルであり；そして ｎは２〜９であり； ここで、構造（ＩＩＩ）において： 点線は、単結合または二重結合を表し； Ａ1は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから選択され； Ｙ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−ＣＯＲdから選択され； Ｚ3は、−Ｈ、Ｃ1〜3アルキル、および−（ＣＨ2）mＸ3Ｒdから選択され； それぞれの出現箇所のＸ3は、−Ｓ−、−Ｏ−、および−ＮＨ−から選択され ； Ｒ3は、−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、および−Ｒdから選択され； Ｒdは、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド抗炎症 薬から選択され；そして ｍは１〜４であり；そして ここで、構造（ＩＶ）において： Ｗ1、Ｗ2、およびＷ3は、−ＨおよびＣ1〜3アルキルから独立して選択され； Ｘ4は、−ＮＨ−、−Ｏ−、および−Ｓ−から必要に応じて選択され； Ｙ4は、−ＨおよびＣ1〜12アルキルから選択され；そして Ｒ4は、−Ｈ、グアニジノ部分、シクログアニジノ部分、および非ステロイド 抗炎症薬から選択されるか、またはひとまとまりになったＸ4−Ｒ4は−ＣＨ2Ｏ Ｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、およびＣ1〜3アルキルから選択される、 化合物。
  31. 【請求項３１】 構造（Ｉ）を有する、請求項３０に記載の化合物。
  32. 【請求項３２】 構造（ＩＩ）を有する、請求項３０に記載の化合物。
  33. 【請求項３３】 構造（ＩＩＩ）を有する、請求項３０に記載の化合物。
  34. 【請求項３４】 構造（ＩＶ）を有する、請求項３０に記載の化合物。
  35. 【請求項３５】 請求項３０に記載の化合物および薬学的に受容可能なキャ
    リアを含む、薬学的組成物。
  36. 【請求項３６】 活性な治療物質として使用するための、請求項３０に記載
    の化合物。
  37. 【請求項３７】 ミトコンドリア保護剤として使用するための、請求項３０
    に記載の化合物。
  38. 【請求項３８】 ミトコンドリア関連疾患を処置するための医薬の製造のた
    めの、請求項３０に記載の化合物の、使用。
  39. 【請求項３９】 前記ミトコンドリア関連疾患が、アルツハイマー病、真性
    糖尿病、パーキンソン病、神経もしくは心臓の虚血、ハンティングトン病、ポリ
    グルタミン疾患、失調症、レーバー遺伝性視神経萎縮、精神***症、筋変性障害
    、ミオクローヌス癲癇不完全赤筋線維症候群である、請求項３８に記載の使用。
  40. 【請求項４０】 前記ミトコンドリア関連疾患が、アルツハイマー病、パー
    キンソン病、真性糖尿病、または発作である、請求項３８に記載の使用。
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