JP2002323490A - 藻類の生死判定試薬及び判定方法 - Google Patents
藻類の生死判定試薬及び判定方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アオコ等の有害な藍藻類の生死判定を簡便、
迅速、かつ正確に実施する試薬及び方法を提供する。 【解決手段】 フルオレッセイン二酢酸をアセトンに溶
解した溶液、ヨウ化プロピジウムを緩衝液に溶解した溶
液及び緩衝液からなる藻類の生死判定試薬、及び藻類を
含有する被検水に、フルオレッセイン二酢酸アセトン溶
液を緩衝液で希釈した溶液及び緩衝液に溶解したヨウ化
プロピジウム溶液を添加し、室温に放置し、のち冷却
し、藻類を染色し、染色状態から藻類の生細胞及び死細
胞を判別することを特徴とする藻類の生死判定方法とす
る。
迅速、かつ正確に実施する試薬及び方法を提供する。 【解決手段】 フルオレッセイン二酢酸をアセトンに溶
解した溶液、ヨウ化プロピジウムを緩衝液に溶解した溶
液及び緩衝液からなる藻類の生死判定試薬、及び藻類を
含有する被検水に、フルオレッセイン二酢酸アセトン溶
液を緩衝液で希釈した溶液及び緩衝液に溶解したヨウ化
プロピジウム溶液を添加し、室温に放置し、のち冷却
し、藻類を染色し、染色状態から藻類の生細胞及び死細
胞を判別することを特徴とする藻類の生死判定方法とす
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この出願の発明は、藻類を含
有する被検水中の藻類の生死判定試薬及び判定方法に関
するものである。更に詳しくは、この出願の発明は、藻
類を染色してその染色状態から藻類の生細胞及び死細胞
を簡易に判別することを可能とする、藻類の生死判定の
ための新しい試薬とこれを用いた方法に関するものであ
る。
有する被検水中の藻類の生死判定試薬及び判定方法に関
するものである。更に詳しくは、この出願の発明は、藻
類を染色してその染色状態から藻類の生細胞及び死細胞
を簡易に判別することを可能とする、藻類の生死判定の
ための新しい試薬とこれを用いた方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術と発明の課題】アオコ等の環境に悪影響を
与える藍藻類が増殖した湖沼では水質の浄化のため種々
の方法により藻類を処理しているが、処理後藻類の死滅
を確認することが重要な課題になっている。そこで、こ
の出願の発明は、短時間で、簡便、迅速、かつ正確にア
オコ等の有害な藍藻類の生死判別を行うための新しい試
薬と、これを用いた有害な藍藻類の生死判別を行うため
の方法を提供することを課題としている。
与える藍藻類が増殖した湖沼では水質の浄化のため種々
の方法により藻類を処理しているが、処理後藻類の死滅
を確認することが重要な課題になっている。そこで、こ
の出願の発明は、短時間で、簡便、迅速、かつ正確にア
オコ等の有害な藍藻類の生死判別を行うための新しい試
薬と、これを用いた有害な藍藻類の生死判別を行うため
の方法を提供することを課題としている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するもの
として、この出願の第１の発明は、フルオレッセイン二
酢酸をアセトンに溶解した溶液もしくはその緩衝液希釈
液と、ヨウ化プロピジウムを緩衝液に溶解した溶液とか
らなる藻類の生死判定試薬であり、第２の発明は、フル
オレッセイン二酢酸の濃度が、０．０００５重量％から
０．０１重量％（以下、特に断りのない限り同じ。）の
範囲であること、第３の発明は、ヨウ化プロピジウムの
濃度が、０．０００５％から０．０１％の範囲であるこ
と、第４の発明は、緩衝液が、塩化ナトリウム(ＮａＣ
ｌ)，リン酸１水素２ナトリウム(Ｎａ2ＨＰＯ4)並びに
リン酸２水素カリウム(ＫＨ2ＰＯ4)の組成を有している
ことを特徴としている。
として、この出願の第１の発明は、フルオレッセイン二
酢酸をアセトンに溶解した溶液もしくはその緩衝液希釈
液と、ヨウ化プロピジウムを緩衝液に溶解した溶液とか
らなる藻類の生死判定試薬であり、第２の発明は、フル
オレッセイン二酢酸の濃度が、０．０００５重量％から
０．０１重量％（以下、特に断りのない限り同じ。）の
範囲であること、第３の発明は、ヨウ化プロピジウムの
濃度が、０．０００５％から０．０１％の範囲であるこ
と、第４の発明は、緩衝液が、塩化ナトリウム(ＮａＣ
ｌ)，リン酸１水素２ナトリウム(Ｎａ2ＨＰＯ4)並びに
リン酸２水素カリウム(ＫＨ2ＰＯ4)の組成を有している
ことを特徴としている。
【０００４】そして、前記課題を解決するこの出願の第
５の発明は、藻類を含有する被検水に、フルオレッセイ
ン二酢酸アセトン溶液もしくはこれを緩衝液で希釈した
溶液と、緩衝液に溶解したヨウ化プロピジウム溶液を添
加して藻類を染色し、染色状態から藻類の生細胞及び死
細胞を判別することを特徴とする藻類の生死判定方法で
あり、第６の発明は、染色状態が、緑色の場合藻類の生
細胞と判別すること、第７の発明は、染色状態が、赤色
の場合藻類の死細胞と判別することを特徴としている。
５の発明は、藻類を含有する被検水に、フルオレッセイ
ン二酢酸アセトン溶液もしくはこれを緩衝液で希釈した
溶液と、緩衝液に溶解したヨウ化プロピジウム溶液を添
加して藻類を染色し、染色状態から藻類の生細胞及び死
細胞を判別することを特徴とする藻類の生死判定方法で
あり、第６の発明は、染色状態が、緑色の場合藻類の生
細胞と判別すること、第７の発明は、染色状態が、赤色
の場合藻類の死細胞と判別することを特徴としている。
【０００５】次に本発明について詳細に記載する。
【０００６】
【発明の実施の形態】まず、この出願の発明の藻類の生
死判定試薬は、フルオレッセイン二酢酸をアセトンに溶
解した溶液もしくはその緩衝液希釈溶液（以下、試薬Ａ
と記載する。）と、ヨウ化プロピジウムを緩衝液に溶解
した溶液（以下、試薬Ｂと記載する。）により基本的に
構成されている。
死判定試薬は、フルオレッセイン二酢酸をアセトンに溶
解した溶液もしくはその緩衝液希釈溶液（以下、試薬Ａ
と記載する。）と、ヨウ化プロピジウムを緩衝液に溶解
した溶液（以下、試薬Ｂと記載する。）により基本的に
構成されている。
【０００７】この場合はフルオレッセイン二酢酸、アセ
トン及びヨウ化プロプジウムは、いずれも市販されてい
るものであり、特別な薬品ではない。また、緩衝液につ
いては、たとえば重量％で、ＮａＣｌ：０．５〜１．
２、Ｎａ2ＨＰＯ4:０．１〜０．２，ＫＨ2ＰＯ4：０．
０１〜０．０３のような組成を有するものとし、市販の
ものとして使用することができる。これらの薬品を溶解
する水は、蒸留水、脱イオン水等であり、実験室で日常
的に化学実験に使用しているものである。
トン及びヨウ化プロプジウムは、いずれも市販されてい
るものであり、特別な薬品ではない。また、緩衝液につ
いては、たとえば重量％で、ＮａＣｌ：０．５〜１．
２、Ｎａ2ＨＰＯ4:０．１〜０．２，ＫＨ2ＰＯ4：０．
０１〜０．０３のような組成を有するものとし、市販の
ものとして使用することができる。これらの薬品を溶解
する水は、蒸留水、脱イオン水等であり、実験室で日常
的に化学実験に使用しているものである。
【０００８】前記試薬Ａは、フルオレッセイン二酢酸を
前記アセトンに０．００４〜０．０１％、望ましくは
０．００４〜０．００６％、の濃度で溶解し、調製す
る。この試薬Ａは、使用時に緩衝液により０．００１％
〜０．００３％のフルオレッセイン二酢酸濃度に希釈調
整することができる。使用時には、フルオレッセイン二
酢酸の濃度は低濃度であることが望ましい。
前記アセトンに０．００４〜０．０１％、望ましくは
０．００４〜０．００６％、の濃度で溶解し、調製す
る。この試薬Ａは、使用時に緩衝液により０．００１％
〜０．００３％のフルオレッセイン二酢酸濃度に希釈調
整することができる。使用時には、フルオレッセイン二
酢酸の濃度は低濃度であることが望ましい。
【０００９】試薬Ｂは、前記ヨウ化プロピジウムを前記
緩衝液に０．００１〜０．００５％、望ましくは０．０
０１％〜０．００３％の濃度で溶解したものであり、そ
のまま使用することができる。
緩衝液に０．００１〜０．００５％、望ましくは０．０
０１％〜０．００３％の濃度で溶解したものであり、そ
のまま使用することができる。
【００１０】たとえば以上のとおりのこの出願の発明の
試薬は、室温で保存が可能であり、かつ１回に使用する
量が少ないので小型であり、更に後記試験例に示すとお
り加熱等の手段が不要なので極めて便利に藻類の生死を
判別することができる。
試薬は、室温で保存が可能であり、かつ１回に使用する
量が少ないので小型であり、更に後記試験例に示すとお
り加熱等の手段が不要なので極めて便利に藻類の生死を
判別することができる。
【００１１】この出願の発明の藻類の生死判別方法は、
前記の試薬を使用して次のとおり実施することができ
る。有害な藻類を含有する被検水に、フルオレッセイン
二酢酸アセトン濃度を０．００４〜０．０１％、望まし
くは０．００４〜０．００６％試薬Ａと試薬Ｂを添加
し、攪拌して均一な溶液となし、室温に放置し、のち冷
却し、藻類を染色し、染色状態から藻類の生細胞及び死
細胞を判別する。
前記の試薬を使用して次のとおり実施することができ
る。有害な藻類を含有する被検水に、フルオレッセイン
二酢酸アセトン濃度を０．００４〜０．０１％、望まし
くは０．００４〜０．００６％試薬Ａと試薬Ｂを添加
し、攪拌して均一な溶液となし、室温に放置し、のち冷
却し、藻類を染色し、染色状態から藻類の生細胞及び死
細胞を判別する。
【００１２】より具体的には、有害な藻類を含有する被
検水０．１〜０．３ｍｌ、望ましくは０．１〜０．２ｍ
ｌに対し、前記試薬Ａを緩衝液により０．００１〜０．
００３％、望ましくは０．００１〜０．００２％のフル
オレッセイン二酢酸濃度に希釈した溶液０．０５〜０．
２ｍｌ、望ましくは０．０５〜０．１ｍｌと、緩衝液に
溶解した０．００１〜０．００５％、望ましくは０．０
０１〜０．００３％のヨウ化プロピジウム濃度の試薬Ｂ
０．０１〜０．０３ｍｌ、望ましくは０．０１５〜０．
０３ｍｌをそれぞれ添加し、室温において、１〜５分
間、望ましくは２〜３分間放置し、後に例えば氷水等で
３〜１５分間、望ましくは５〜１０分間冷却し、藻類を
染色する。
検水０．１〜０．３ｍｌ、望ましくは０．１〜０．２ｍ
ｌに対し、前記試薬Ａを緩衝液により０．００１〜０．
００３％、望ましくは０．００１〜０．００２％のフル
オレッセイン二酢酸濃度に希釈した溶液０．０５〜０．
２ｍｌ、望ましくは０．０５〜０．１ｍｌと、緩衝液に
溶解した０．００１〜０．００５％、望ましくは０．０
０１〜０．００３％のヨウ化プロピジウム濃度の試薬Ｂ
０．０１〜０．０３ｍｌ、望ましくは０．０１５〜０．
０３ｍｌをそれぞれ添加し、室温において、１〜５分
間、望ましくは２〜３分間放置し、後に例えば氷水等で
３〜１５分間、望ましくは５〜１０分間冷却し、藻類を
染色する。
【００１３】なお、添加後の温度は室温でなくともよ
い。３５℃程度まで加温した場合には、放置時間は１〜
３分間程度でよく、５℃程度まで低い温度では、放置時
間は１０〜１５分間程度とすることができる。
い。３５℃程度まで加温した場合には、放置時間は１〜
３分間程度でよく、５℃程度まで低い温度では、放置時
間は１０〜１５分間程度とすることができる。
【００１４】また、冷却も、氷水を用いることは必須で
はない。自然冷却でもよいし、冷媒を用いてもよい。染
色終了後、被検水を通常の蛍光顕微鏡、励起光源を有す
る蛍光検出器、色彩を区別して計数する装置等により、
緑色に染色された細胞数及び赤色に染色された細胞数を
計数する。
はない。自然冷却でもよいし、冷媒を用いてもよい。染
色終了後、被検水を通常の蛍光顕微鏡、励起光源を有す
る蛍光検出器、色彩を区別して計数する装置等により、
緑色に染色された細胞数及び赤色に染色された細胞数を
計数する。
【００１５】後記実施例から明らかなとおり、前記染色
により緑色により緑色に染色された細胞は生細胞であ
り、赤色に染色された細胞は死細胞なので、この染色状
態から藻類の生細胞及び死細胞を判別する。
により緑色により緑色に染色された細胞は生細胞であ
り、赤色に染色された細胞は死細胞なので、この染色状
態から藻類の生細胞及び死細胞を判別する。
【００１６】以上のとおり判別方法は少量の被検水で、
短時間に、簡便に、かつ正確に藻類細胞の生死を判別す
ることが可能であり、環境保護に極めて有用である。次
に実施例を示してこの出願の発明を詳細に説明する。
短時間に、簡便に、かつ正確に藻類細胞の生死を判別す
ることが可能であり、環境保護に極めて有用である。次
に実施例を示してこの出願の発明を詳細に説明する。
【００１７】
【実施例】＜実施例１＞ （１）試料の調製 Microcytis aeruginosa NIES87（以下、M.aeruginosaと
記載する。）、Microcytis viridis NIES102（以下、M.
viridis と記載する。）、Anabaena spirodesNIES263
（以下、A.spirodesと記載する。）、Anabaena cylindr
ica M1（以下、A.cylindricaと記載する。）及びOscill
atoria agardhii NIES204 （以下、O.agardhiiと記載す
る。）を使用し、次のとおり試料を調製した。
記載する。）、Microcytis viridis NIES102（以下、M.
viridis と記載する。）、Anabaena spirodesNIES263
（以下、A.spirodesと記載する。）、Anabaena cylindr
ica M1（以下、A.cylindricaと記載する。）及びOscill
atoria agardhii NIES204 （以下、O.agardhiiと記載す
る。）を使用し、次のとおり試料を調製した。
【００１８】各藻類を次の表１の組成のＭＡ培地に懸濁
し、３，０００ｌｕｘの光線を照射し、１４時間の明暗
周期により３０℃で７日間培養し、生細胞試料とした。
培養終了後、各試料の一部を採取し、７０℃で５分間加
熱し、死細胞試料とした。尚、各試料については試験方
法の項に示す方法により、細胞の生死を確認した。
し、３，０００ｌｕｘの光線を照射し、１４時間の明暗
周期により３０℃で７日間培養し、生細胞試料とした。
培養終了後、各試料の一部を採取し、７０℃で５分間加
熱し、死細胞試料とした。尚、各試料については試験方
法の項に示す方法により、細胞の生死を確認した。
【００１９】
【表１】
【００２０】（２）試験方法 １）各試料中の細胞生死の試験 各試料から５０ｍｌを三角フラスコに採取し、３０℃で
８日間培養し、培養前、１〜４日、６日及び８日に各４
ｍｌを試験管に採取し、試験管ミキサーにより攪拌し、
トーマの血球計算盤により細胞数を測定し、細胞の生死
を試験した。 ２）染色による細胞生死判定試験 各試料０．２ｍｌを試験管に採取し、０．００２％のフ
ルオレッセイン二酢酸濃度に希釈した試薬Ａを０．１ｍ
ｌ及び試薬Ｂ０．０３ｍｌを添加し、室温に３分間放置
し、のち氷水に試験管を１０分間浸漬し、染色した。
８日間培養し、培養前、１〜４日、６日及び８日に各４
ｍｌを試験管に採取し、試験管ミキサーにより攪拌し、
トーマの血球計算盤により細胞数を測定し、細胞の生死
を試験した。 ２）染色による細胞生死判定試験 各試料０．２ｍｌを試験管に採取し、０．００２％のフ
ルオレッセイン二酢酸濃度に希釈した試薬Ａを０．１ｍ
ｌ及び試薬Ｂ０．０３ｍｌを添加し、室温に３分間放置
し、のち氷水に試験管を１０分間浸漬し、染色した。
【００２１】各試料を蛍光顕微鏡により肉眼で各試料中
の細胞が緑色に染色されているか、又は赤色に染色され
ているかを観測した。 （３）試験結果 １）各試料中の細胞生死の試験結果 この試験の結果の一例は図１に示すとおりである。図１
は、M.aeruginosaを使用した培養日数と細胞濃度との関
係を示す。図中黒丸及び黒四角は、それぞれ加熱処理し
た死細胞試料及び生細胞試料を示す。
の細胞が緑色に染色されているか、又は赤色に染色され
ているかを観測した。 （３）試験結果 １）各試料中の細胞生死の試験結果 この試験の結果の一例は図１に示すとおりである。図１
は、M.aeruginosaを使用した培養日数と細胞濃度との関
係を示す。図中黒丸及び黒四角は、それぞれ加熱処理し
た死細胞試料及び生細胞試料を示す。
【００２２】死細胞試料では８日間の培養によっても細
胞数の増加が認められないのに対して生細胞試料では８
日間の培養により細胞数が５倍強に増加していることが
認められた。このことは他の藻類の試料でも同様であ
り、加熱により死滅していることが確認され、次の染色
の試験において死細胞資料として使用できることが判明
した。 ２）染色による細胞生死判定試験結果 この試験の結果の例は図２に示すとおりである。この図
２は、M.aeruginosa、M.viridis 及びA.spirodesの試験
結果を示している。実際にはカラー表示であるが、この
図２では白黒の表示となっている。そして、これらの藻
類のいずれにおいても生細胞は緑色に、死細胞は赤色に
染色されていることが認められた。このことは他の藻類
の試料でも同様であり、この発明の試薬を使用し、この
発明の方法により藻類の細胞の生死を判定し得ることが
判明した。 ＜実施例２＞ （１）試料の調製 実施例１と同一の各種藻類について、実施例１と同一の
方法により生細胞試料及び死細胞試料を調製した。実施
例１と同一の各種藻類について、生細胞試料及び死細胞
試料を次に比率で混合し、生細胞と死細胞の混合比率を
変更した４種類の試料を調製した。
胞数の増加が認められないのに対して生細胞試料では８
日間の培養により細胞数が５倍強に増加していることが
認められた。このことは他の藻類の試料でも同様であ
り、加熱により死滅していることが確認され、次の染色
の試験において死細胞資料として使用できることが判明
した。 ２）染色による細胞生死判定試験結果 この試験の結果の例は図２に示すとおりである。この図
２は、M.aeruginosa、M.viridis 及びA.spirodesの試験
結果を示している。実際にはカラー表示であるが、この
図２では白黒の表示となっている。そして、これらの藻
類のいずれにおいても生細胞は緑色に、死細胞は赤色に
染色されていることが認められた。このことは他の藻類
の試料でも同様であり、この発明の試薬を使用し、この
発明の方法により藻類の細胞の生死を判定し得ることが
判明した。 ＜実施例２＞ （１）試料の調製 実施例１と同一の各種藻類について、実施例１と同一の
方法により生細胞試料及び死細胞試料を調製した。実施
例１と同一の各種藻類について、生細胞試料及び死細胞
試料を次に比率で混合し、生細胞と死細胞の混合比率を
変更した４種類の試料を調製した。
【００２３】試料１：生細胞試料１００％ 試料２：生細胞試料７５％、死細胞試料２５％ 試料３：生細胞試料５０％、死細胞試料５０％ 試料４：生細胞試料２５％、死細胞試料７５％ （２）試験方法 各種藻類の試料１乃至試料４を、実施例１と同一の方法
により、生細胞数及び死細胞数を計測し、全細胞数に対
する生細胞数の百分率を算出して試験した。なお、各試
料について蛍光顕微鏡の視野を１０か所変更して計数
し、その平均値を算出し、各種藻類の試料１乃至試料４
から得られた数値の平均値を算出した。 （３）試験結果 この試験の結果は図３に示すとおりである。この図３
は、生細胞と死細胞の混合比率を変更した試料の細胞生
存率を示し、黒色（Ａ）は計算値、網掛け（Ｂ）は実測
地の平均値を示す。図３から明らかなとおり、いずれの
比率においても計算値と実測値とはほぼ一致しており、
この発明の試薬を使用し、この発明の方法により藻類の
細胞の生死を、正確に判定し得ることが判明した。
により、生細胞数及び死細胞数を計測し、全細胞数に対
する生細胞数の百分率を算出して試験した。なお、各試
料について蛍光顕微鏡の視野を１０か所変更して計数
し、その平均値を算出し、各種藻類の試料１乃至試料４
から得られた数値の平均値を算出した。 （３）試験結果 この試験の結果は図３に示すとおりである。この図３
は、生細胞と死細胞の混合比率を変更した試料の細胞生
存率を示し、黒色（Ａ）は計算値、網掛け（Ｂ）は実測
地の平均値を示す。図３から明らかなとおり、いずれの
比率においても計算値と実測値とはほぼ一致しており、
この発明の試薬を使用し、この発明の方法により藻類の
細胞の生死を、正確に判定し得ることが判明した。
【００２４】次に実施例により本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００２５】
【実施例】＜実施例３＞市販のフルオレッセイン二酢酸
（Lambda Probes & Diagnostics社製。特級）０．０８
ｇを市販のアセトン（和光純薬社製。特級）２ｌに溶解
し、フルオレッセイン二酢酸濃度０．００４％の試薬Ａ
約２ｌを調製した。
（Lambda Probes & Diagnostics社製。特級）０．０８
ｇを市販のアセトン（和光純薬社製。特級）２ｌに溶解
し、フルオレッセイン二酢酸濃度０．００４％の試薬Ａ
約２ｌを調製した。
【００２６】市販のヨウ化プロピジウム（和光純薬社
製。特級）０．０４ｇを緩衝液２ｌに溶解し、ヨウ化プ
ロピジウム濃度０．００２％の試薬Ｂ約２ｌを調製し
た。前記試薬Ａ及び試薬Ｂ１ｍｌを、それぞれ密封可能
な２ｍｌ容の市販の試薬瓶に充填し、密封し、緩衝液５
ｍｌを密封可能な７ｍｌ容の市販の試薬瓶に充填し、密
封し、試薬Ａ、試薬Ｂ及び緩衝液を充填した試薬瓶各１
本を１セットとして厚紙箱で包装し、藻類の生死判定試
薬セット９９０個を製造した。 ＜実施例４＞アオコが発生した霞ヶ浦沼の水を採取し、
前記実施例１と同様の方法により加熱処理した試料及び
未処理の試料を、実施例３の試薬セットを用いて次のと
おり染色し、アオコの生死を判定した。
製。特級）０．０４ｇを緩衝液２ｌに溶解し、ヨウ化プ
ロピジウム濃度０．００２％の試薬Ｂ約２ｌを調製し
た。前記試薬Ａ及び試薬Ｂ１ｍｌを、それぞれ密封可能
な２ｍｌ容の市販の試薬瓶に充填し、密封し、緩衝液５
ｍｌを密封可能な７ｍｌ容の市販の試薬瓶に充填し、密
封し、試薬Ａ、試薬Ｂ及び緩衝液を充填した試薬瓶各１
本を１セットとして厚紙箱で包装し、藻類の生死判定試
薬セット９９０個を製造した。 ＜実施例４＞アオコが発生した霞ヶ浦沼の水を採取し、
前記実施例１と同様の方法により加熱処理した試料及び
未処理の試料を、実施例３の試薬セットを用いて次のと
おり染色し、アオコの生死を判定した。
【００２７】すなわち、試薬Ａ０．２ｍｌに緩衝液０．
２ｍｌを添加して攪拌し、均一な溶液を調製し、前記２
種類の試料０．２ｍｌに各０．１ｍｌを添加し、更に試
薬Ｂを各０．０３ｍｌを添加し、攪拌して均一な溶液を
調製した。各試薬を添加した２種類の試料を３分間室温
に放置し、のち氷水で１０分間冷却し、アオコ細胞を染
色した。
２ｍｌを添加して攪拌し、均一な溶液を調製し、前記２
種類の試料０．２ｍｌに各０．１ｍｌを添加し、更に試
薬Ｂを各０．０３ｍｌを添加し、攪拌して均一な溶液を
調製した。各試薬を添加した２種類の試料を３分間室温
に放置し、のち氷水で１０分間冷却し、アオコ細胞を染
色した。
【００２８】染色した各試料を実施例１と同様の方法に
より顕微鏡で観察した結果、未処理の試料ではアオコ細
胞が緑色に染色され、加熱処理した試料では赤色に染色
され、アオコ細胞の生死を判定することが可能であっ
た。
より顕微鏡で観察した結果、未処理の試料ではアオコ細
胞が緑色に染色され、加熱処理した試料では赤色に染色
され、アオコ細胞の生死を判定することが可能であっ
た。
【００２９】
【発明の効果】以上のとおり、この出願の発明はアオコ
等の有害な藍藻類の生死判定試薬及び方法に関するもの
であり、この発明により奏される効果は次のとおりであ
る。
等の有害な藍藻類の生死判定試薬及び方法に関するもの
であり、この発明により奏される効果は次のとおりであ
る。
【００３０】１）迅速、かつ正確にアオコ等の有害な藍
藻類の生死判別を行うことが可能である。 ２）特殊な装置、複雑な手段を必要とせずアオコ等の有
害な藍藻類の生死判別を行うことが可能である。
藻類の生死判別を行うことが可能である。 ２）特殊な装置、複雑な手段を必要とせずアオコ等の有
害な藍藻類の生死判別を行うことが可能である。
【図１】M.aeruginosaの培養日数と細胞濃度との関係を
示した図である。
示した図である。
【図２】実施例１の試験結果として、死細胞は赤色に、
生細胞は緑色に染色されることを例示した顕微鏡写真で
ある。なおこの図２では、白黒表示しているが、実際に
はカラー表示である。
生細胞は緑色に染色されることを例示した顕微鏡写真で
ある。なおこの図２では、白黒表示しているが、実際に
はカラー表示である。
【図３】生細胞と死細胞の混合比率を変更した試料の細
胞生存率を示した図である。
胞生存率を示した図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 21/78 Ｇ０１Ｎ 1/28 Ｆ Ｆターム(参考） 2G045 BA14 BB20 BB24 BB52 CB21 FA16 FB11 FB13 GC12 GC22 JA04 2G052 AA06 AA36 AC03 DA02 EB11 EB12 EB13 FA09 FB05 GA29 GA31 HA19 HB10 JA04 JA07 JA09 2G054 AA02 AA08 BB08 BB12 BB13 CA20 CE02 EA03 FA09 FA36 GB04 JA02 JA04 4B063 QA01 QQ05 QQ18 QR41 QR66 QX01
Claims (7)
- 【請求項１】 フルオレッセイン二酢酸をアセトンに溶
解した溶液もしくはその緩衝液希釈溶液と、ヨウ化プロ
ピジウムを緩衝液に溶解した溶液とからなる藻類の生死
判定試薬。 - 【請求項２】 フルオレッセイン二酢酸が、０．０００
５重量％から０．０１重量％の範囲のものである請求項
１に記載の藻類の生死判定試薬。 - 【請求項３】 ヨウ化プロピジウムの濃度が、０．００
０５重量％から０．０１重量％の範囲のものである請求
項１に記載の藻類の生死判定試薬。 - 【請求項４】 緩衝液が、塩化ナトリウム(ＮａＣｌ)，
リン酸１水素２ナトリウム(Ｎａ2ＨＰＯ4)並びにリン酸
２水素カリウム(ＫＨ2ＰＯ4)の組成を有する請求項１に
記載の藻類の生死判定試薬。 - 【請求項５】 請求項１ないし４のいずれかに記載のフ
ルオレッセイン二酢酸アセトン溶液もしくはその緩衝液
希釈溶液と、緩衝液に溶解したヨウ化プロピジウム溶液
を、藻類を含有する被検水に添加して藻類を染色し、染
色状態から藻類の生細胞及び死細胞を判別することを特
徴とする藻類の生死判定方法。 - 【請求項６】 染色状態が、緑色の場合藻類の生細胞と
判別する請求項５に記載の藻類の生死判定方法。 - 【請求項７】 染色状態が、赤色の場合藻類の死細胞と
判別する請求項５に記載の藻類の生死判定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001129824A JP2002323490A (ja) | 2001-04-26 | 2001-04-26 | 藻類の生死判定試薬及び判定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001129824A JP2002323490A (ja) | 2001-04-26 | 2001-04-26 | 藻類の生死判定試薬及び判定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002323490A true JP2002323490A (ja) | 2002-11-08 |
Family
ID=18978302
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001129824A Pending JP2002323490A (ja) | 2001-04-26 | 2001-04-26 | 藻類の生死判定試薬及び判定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002323490A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005045425A1 (es) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | Universidad De Barcelona | Método y aparato para la determinación de la viabilidad celular |
-
2001
- 2001-04-26 JP JP2001129824A patent/JP2002323490A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005045425A1 (es) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | Universidad De Barcelona | Método y aparato para la determinación de la viabilidad celular |
| ES2239886A1 (es) * | 2003-11-05 | 2005-10-01 | Universidad De Barcelona | Metodo y aparato para la determinacion de la viabilidad celular. |
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