CN107266522A - 一种通用型总蛋白质提取试剂 - Google Patents

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王文利
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Abstract

本发明属于分子生物学范围，主要涉及一种通用型总蛋白质提取试剂。此通用型总蛋白质提取试剂可以从多种生物样本中(植物、动物、微生物)高效显著的增加蛋白质提取效率并且操作非常简便。不仅大大节省了不同生物样本需要筛选不同提取试剂的工作时间，而且还可以高效提取不同生物样本的总蛋白质。

Description

一种通用型总蛋白质提取试剂
技术领域
本发明涉及一种通用型总蛋白质提取试剂，此通用型总蛋白质提取试剂可以从多种生物样本中显著高效的增加蛋白质提取效率并且操作非常简便。
背景技术
蛋白质组学(proteomics)是指以基因组编码的所有蛋白质为研究对象，从细胞或组织整体水平上研究蛋白质的组成及其变化规律，从而深入认识有机体的各种生理和病理。与传统蛋白质研究比较，蛋白质组学研究体现了全面性、整体性、高通量、大规模的特点。蛋白质组学的研究对于已完成基因组计划的理论预测的蛋白质组进行实证分析具有无法替代的重要作用。蛋白质组学技术较为复杂，包括蛋白质分离、鉴定和信息分析三方面的内容。其中，蛋白质快速高效的分离是蛋白质的核心技术之一。
蛋白质是一种具多相极性的生物大分子，离开其天然的环境，蛋白质分子极不稳定，在细胞中和抽提液中蛋白质的性状也不尽相同。从生物材料中提取蛋白质，首先需要进行细胞的破碎后将处于细胞不同部位的蛋白质释放出来，溶入已知成分的溶液中。该步骤是蛋白质提取和纯化的重要环节，它直接影响蛋白质的产。从正常生物材料中提取各种蛋白质均需要对提取溶液有特定的条件。如果不能满足这一条件，蛋白将很快失去生物学活性。因此，在蛋白质的特性研究中，确定提取条件是一个关键问题。提取条件的确定就是在最大程度的破碎生物材料的细胞后，找到能够使细胞内的总蛋白质充分溶解进入适合保存蛋白质的液体环境的组成及条件，这种能够使细胞内蛋白充分高效溶出的外界液体环境即为蛋白质提取试剂。由于不同生物大分子结构及理化性质的不同，蛋白质提取试剂也不一样。即同一类生物大分子由于选用材料不同，蛋白质提取试剂的差别也很大。因此很难有一个统一标准的提取试剂对提取任何蛋白质均可循用。本发明就是在对不同生物样本体内蛋白质存在环境的研究和总结的基础上，设计出可以针对不同的生物样本(植物、动物、微生物)的通用型高效蛋白提取试剂，不仅大大节省了不同生物样本需要筛选不同提取试剂的工作时间，而且还可以高效提取不同生物样本的总蛋白质。
发明内容
本发明目的之一是提供一种能够适用于不同生物材料的总蛋白质提取试剂；
本发明目的之二是提供一种高效总蛋白质提取试剂，提取效率较其他方法提高3倍以上；
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
缓冲液的选择：缓冲液可以抗衡蛋白质溶液中pH的变化，选择合适的缓冲液对于维持一定pH值下蛋白质的稳定性以及保证实验的重复性十分重要。大多数植物细胞在37℃的生理状况下pH为5.0-7.5，微生物及动物细胞为7.0-8.5。在通常的缓冲液体系中，主要包括阳离子缓冲液体系和阴离子缓冲液体系，阳离子缓冲液体系首选是三羟甲基氨基甲烷(Tris)，阴离子缓冲液体系首选磷酸盐缓冲液。混合缓冲液在一定的离子强度下往往具有更宽的缓冲范围。因此，本发明采用了Tris和磷酸盐的混合缓冲体系，这种缓冲体系具有更宽的缓冲范围，更好的适应于包括了动物、植物、微生物在内的各种生物材料中总蛋白质的稳定存在。当选定一种缓冲液之后，一般使用其最低的浓度以避免非特异性的离子强度的影响，通常Tris缓冲体系以50mmol/L作为实验的起始浓度，因此本发明中最终确定了50mMTris-Cl，10mM Na2HPO4，2mMNaH2PO4，140～150mM NaCl作为混合缓冲体系。
离子强度的选择：通常使用0.1～0.2mol/L KCl或NaCl来模拟生物材料体内的生理状况下的离子强度，本发明中采用了140～150mM NaCl以模拟生物材料体内的生理状况下的离子强度。
螯合剂的选择：为了避免金属离子的干扰，应在总蛋白质提取溶液中加入特异金属离子的螯合剂，最常用的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)，EDTA对大多数金属离子有非特异的亲和性，使用浓度一般为0.1～5mmol/L。
还原剂的选择：在生物材料的细胞中有许多种还原成成分，如谷氨酰胺可防止蛋白质氧化。但是细胞一旦破碎，由于和氧的接触以及稀释作用而引起抗氧化成分的减少，使许多蛋白质被氧化而失去活性。为了有效防止蛋白质的氧化作用，可以选择还原剂以防止蛋白被氧化。常用的还原剂有β-巯基乙醇和二硫苏糖醇(DTT)，在蛋白质制备过程中长期储存时加入1～5mmol/L的DTF。
去垢剂的选择：在蛋白质提取的过程中，需要将生物材料体内许多膜结构组织上的膜蛋白溶解，在去垢剂的帮助下可以溶解膜蛋白。去垢剂为双极性分子，可在水中溶解。去垢剂的种类主要包括离子型去垢剂、非离子型去垢剂及两性去垢剂。目前使用的离子型去垢剂主要有十二烷基硫酸钠(SDS)和脱氧胆酸钠，它们可使蛋白质以单体的形式被分离，提取效率较非离子去垢剂高，但是这一类型去垢剂的缺点是容易使蛋白质高度变性。蛋白质在提取过程中为了抑制生物材料自身体内的某些蛋白酶对目标蛋白的降解，一般都采用低温进行提取，但是由于SDS在低温不能溶解于缓冲液体系而不能充分发挥作用，因此一般选择可在低温溶解而且对蛋白质变性作用较弱的脱氧胆酸钠作为离子型去垢剂使用可以大大提高蛋白质的提取效率，使用浓度一般不能高于2％。非离子型的去垢剂对于分离功能性的蛋白复合物较为有利，与离子型去垢剂相比其对蛋白的变性作用较弱，但是这种去垢剂容易使蛋白发生聚集。目前通常使用的非离子型去垢剂种类有TritonX-100，NP-40，Tween-20，TritonX-100浓度在1％～3％时许多蛋白质活性保持不变，NP-40在蛋白质分离中使用较方便，Tween-20通常用来阻断非特异性蛋白质的相互作用。两性去垢剂带有正、负离子的头部，与非离子去垢剂相比可减少蛋白质和蛋白质间互相作用的干扰及离子型去垢剂使蛋白质变性的作用，但是两性去垢剂的价格普遍较高，对于使用大量生物材料提取蛋白质而言是一个重要的限制因素。
蛋白酶抑制剂的选择：破碎生物材料细胞提取蛋白质的同时可释放出生物材料细胞内的蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。蛋白酶抑制剂的种类主要有五种，为PMSF、EDTA、胃蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白肽酶、胰蛋白酶抑制剂。其中PMSF和亮抑蛋白肽酶及胰蛋白酶抑制剂都可以抑制丝氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶，其中亮抑蛋白肽酶为广谱蛋白酶抑制剂且抑制作用最稳定，胃蛋白酶抑制剂主要可以抑制酸性蛋白酶的活性。除此之外，氟化钠(NaF)和矾酸钠(Na3VO4)属于磷酸酶的抑制剂，加入合适的浓度可以抑制磷酸酶对蛋白的磷酸化修饰作用。因此，在本发明中选择胃蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白肽酶及NaF和Na3VO4作为混合蛋白酶抑制剂来使用。通过对以上这些蛋白质提取试剂的多种组合分析及实验，我们最终确定了适用于多种生物材料、并且可以高效提取其总蛋白质的试剂配方。
附图说明
图1、不同植物的总蛋白质提取后SDS-PAGE检测图
M为蛋白质分子量标准；1-8泳道为分别提取的白菜、玉米、大豆、水稻、小麦、大麦、番茄、鼠尾草叶片组织的全蛋白，蛋白上样量均为5μL，电泳结束后采用考马斯亮蓝染色和脱色后的图片
表1、不同电泳植物的总蛋白质提取后的浓度测定表
图2、不同动物的总蛋白质提取后SDS-PAGE检测图
M为蛋白质分子量标准；1-8泳道为分别提取的牦牛肺、牦牛肝、小鼠肝组织、小鼠肺组织、大鼠胰腺组织、大鼠腮腺、猪肉、羊肉总蛋白，蛋白上样量均为2μL，电泳结束后采用考马斯亮蓝染色和脱色后的图片
图3、不同微生物的总蛋白质提取后SDS-PAGE检测图
图3A、大肠杆菌总蛋白质的提取后SDS-PAGE检测图
M为蛋白质分子量标准；1-8泳道为提取的细菌大肠杆菌的全蛋白，蛋白上样量均为20μg，电泳结束后采用考马斯亮蓝染色和脱色后的图片
图3B、酵母菌总蛋白质的提取后SDS-PAGE检测图
M为蛋白质分子量标准；1-8泳道为提取的酿酒酵母的全蛋白，蛋白上样量均为20μg，电泳结束后采用考马斯亮蓝染色和脱色后的图片
图4、不同提取试剂对相同动物组织总蛋白质提取后的SDS-PAGE检测图
M为蛋白质分子量标准；1-4泳道为其他蛋白提取试剂提取的动物组织全蛋白，5-8泳道为本公司发明的通用型高效总蛋白质提取试剂提取的动物组织全蛋白，蛋白上样量均为2μL，电泳结束后采用考马斯亮蓝染色和脱色后的图片
表2、不同提取试剂对相同动物组织总蛋白质提取后的浓度测定表
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均属于本发明的保护范围内。
1、实验材料：
1.1植物材料：白菜、玉米、大豆、水稻、小麦、大麦、番茄、鼠尾草的叶片组织
1.2动物材料：牦牛肺、牦牛肝、小鼠肝组织、小鼠肺组织、大鼠胰腺组织、大鼠腮腺、猪肉、羊肉
1.3微生物材料：大肠杆菌、酵母菌
2、实验试剂：
Tris盐：北京欣经科生物技术有限责任公司
DTT(二硫苏糖醇)：北京欣经科生物技术有限责任公司
SDS(十二烷基硫酸钠)：MP Biomedicals(Shanghai)Co.，Ltd.
EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)：MP Biomedicals(Shangha)Co.，Ltd.
丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺：国药集团化学试剂北京有限公司
过硫酸铵：北京欣经科生物技术有限责任公司
TEMED(N，N，N’，N’-四甲基乙二胺)：美国MP Biomedicals公司
甘氨酸：国药集团化学试剂北京有限公司
预染标准分子量蛋白：美国Biorad公司
甲醇：国药集团化学试剂北京有限公司
冰醋酸：国药集团化学试剂北京有限公司
氯化钠：国药集团化学试剂北京有限公司
磷酸二氢钾：国药集团化学试剂北京有限公司
磷酸氢二钠：国药集团化学试剂北京有限公司
甘油：国药集团化学试剂北京有限公司
β-巯基乙醇：美国MP Biomedicals公司
Bradford蛋白浓度测定试剂：美国Biorad公司
3、实验仪器：
低温高速离心机：美国Sigma公司
蛋白制胶及电泳***：美国Biorad公司
凝胶成像***：美国Biorad公司
4、主要试剂的配制：
4.1SDS-PAGE电泳
10％APS：称取0.1g过硫酸铵，去离子水溶解并定容至1mL，4℃保存1周内使用。10％SDS：称取10gSDS，加去离水定容至100mL。
1.5MTris-HCl(pH8.8)：称取18.17gTris盐，去离子水溶解后，用浓HCl调节pH值至8.8，最后用去离子水定容至100mL，4℃保存。
0.5MTris-HCl(pH6.8)：称取6.05gTris盐，去离子水溶解后，用浓HCl调节pH至6.8，最后用去离子水定容至100mL，4℃保存。
5×蛋白上样缓冲液：0.2g SDS，0.07571g Tris，5mL甘油，0.05g溴酚蓝，0.01DTT，5mL蒸馏水，混匀后用HCl调pH6.8，定容到10mL，分装成1mL小份，-20℃保存。
电泳缓冲液：称取15g Tris盐、72g甘氨酸、5g SDS，去离子水定容至1000mL。
电泳缓冲液：称取15g Tris盐、72g甘氨酸、5g SDS，去离子水定容至1000mL。
考马斯亮蓝R250染色液：称取1g考马斯亮蓝R250，甲醇450mL，冰醋酸100mL，蒸馏水450mL，充分混匀后定容至1000mL。
考马斯亮蓝R250脱色液：甲醇100mL，冰醋酸100mL，蒸馏水800mL，充分混匀后定容至1000mL。
实施例1通用型高效总蛋白质提取试剂对不同植物种类的总蛋白质的提取效果
1、实验方法
(1)提取植物总蛋白前需将通用型高效总蛋白质提取试剂进行预冷，称量需要提取蛋白的植物组织重量，按照1克植物叶片加入10毫升的比例加入通用型高效总蛋白质提取试剂并匀浆处理(或使用液氮将植物组织材料研磨成粉末后加入通用型高效总蛋白质提取试剂)，若需要浓度较高的蛋白提取物，可适当减少通用型高效总蛋白质提取试剂的使用量；
(2)冰上孵育45分钟；
(3)4℃，13000rpm离心30分钟；
(4)收集的上清即为植物总蛋白提取物，可以进行后续实验操作。
(5)取24μL提取出的蛋白质溶液，加入6μL的5×loading buffer充分混合均匀后，100℃加热煮沸5分钟后放置为室温后4℃，13000rpm离心20分钟并吸取上清备用。
(6)蛋白浓度的测定：采用Bradford方法进行蛋白质浓度的测定。
(7)将清洗过的1.0mm厚的玻璃板固定于灌胶架上。
(8)配制10％的聚丙烯酰胺分离胶混合液，聚丙烯酰胺凝分离胶混合液的组成为30％丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺、1.5M Tris-Cl(pH8.8)、10％SDS、10％过硫酸铵、TEMED。取一定量的上述溶液或试剂混合均匀后全量加样于玻璃板中，并缓慢加入去离子水为封水层，室温下放置30min等待分离胶凝固。
(9)待分离胶凝固后倒掉所封水层，加入2mL聚丙烯酰胺浓缩胶，同时在胶面上插上梳子。
(10)待浓缩胶凝固后，缓慢拔掉梳子，将上述(5)后制备的蛋白质样品吸取10μL加样于上样孔中，80V电压跑电泳，待样品在浓缩胶和分离胶的界面处压成一条线时，调电压至150V。
(11)电泳结束后，分开两块玻璃板，切除浓缩胶。
(12)对蛋白胶进行考马斯亮蓝染色、脱色后照相并保存图片。
2、实验结果
实验结果显示，使用通用型高效总蛋白质提取试剂提取的不同植物种类的总蛋白质通过SDS-PAGE电泳检测图(图1)可以看出，通用型高效总蛋白质提取试剂对于不同生物种类的植物叶片的提取效果佳，蛋白质条带清晰，无杂质及降解现象的出现。通过Bradford方法测定蛋白质浓度，表1中显示出不同的植物种类蛋白质的含量是有较大区别的，但是针对每一种植物用此试剂提取的蛋白总量均达到3mg/mL。由此说明，此通用型高效总蛋白质提取试剂适用于不同植物种类的总蛋白质提取，并且具有很好的提取效果。
实施例2通用型高效总蛋白质提取试剂对不同种类动物的总蛋白质的提取效果
1、实验方法
(1)提取动物总蛋白前需将通用型高效总蛋白质提取试剂进行预冷，称量需要提取蛋白的动物组织重量，按照100mg动物肌肉组织或动物不同组织部位加入1毫升的比例加入通用型高效总蛋白质提取试剂并匀浆处理(或使用液氮将动物组织材料研磨成粉末后加入通用型高效总蛋白质提取试剂)，若需要浓度较高的蛋白提取物，可适当减少通用型高效总蛋白质提取试剂的使用量；
(2)冰上孵育45分钟；
(3)4℃，13000rpm离心30分钟；
(4)收集的上清即为动物总蛋白提取物，可以进行后续实验操作。
(5)取24μL提取出的蛋白质溶液，加入6μL的5×loading buffer充分混合均匀后，100℃加热煮沸5分钟后放置为室温后4℃，13000rpm离心20分钟并吸取上清备用。
(6)蛋白浓度的测定：采用Bradford方法进行蛋白质浓度的测定。
(7)将清洗过的1.0mm厚的玻璃板固定于灌胶架上。
(8)配制10％的聚丙烯酰胺分离胶混合液，聚丙烯酰胺凝分离胶混合液的组成为30％丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺、1.5M Tris-Cl(pH8.8)、10％SDS、10％过硫酸铵、TEMED。取一定量的上述溶液或试剂混合均匀后全量加样于玻璃板中，并缓慢加入去离子水为封水层，室温下放置30min等待分离胶凝固。
(9)待分离胶凝固后倒掉所封水层，加入2mL聚丙烯酰胺浓缩胶，同时在胶面上插上梳子。
(10)待浓缩胶凝固后，缓慢拔掉梳子，将上述(5)后制备的蛋白质样品吸取10μL加样于上样孔中，80V电压跑电泳，待样品在浓缩胶和分离胶的界面处压成一条线时，调电压至150V。
(11)电泳结束后，分开两块玻璃板，切除浓缩胶。
(12)对蛋白胶进行考马斯亮蓝染色、脱色后照相并保存图片。
2、实验结果
实验结果显示，使用通用型高效总蛋白质提取试剂提取的不同动物种类的肌肉组织部位的总蛋白质通过SDS-PAGE电泳检测图(图2)可以看出，通用型高效总蛋白质提取试剂对于不同生物种类的动物肌肉组织及动物不同组织部位的蛋白质提取效果佳，蛋白质条带清晰，无杂质及降解现象的出现。通过Bradford方法测定蛋白质浓度，表2中显示出所提取的不同动物肌肉组织的总蛋白质总量均达到10mg/mL，提取总量大大高于普通蛋白提取试剂提取的蛋白质总量。由此说明，此通用型高效总蛋白质提取试剂适用于不同动物种类的总蛋白质提取，并且具有很好的提取效果。
实施例3通用型高效总蛋白质提取试剂对不同微生物种类的总蛋白质提取效果
实验方法
(1)提取微生物总蛋白前需将通用型高效总蛋白质提取试剂进行预冷，称量需要提取蛋白的微生物重量，按照100mg湿菌体加入1毫升的比例加入通用型高效总蛋白质提取试剂并匀浆处理，若需要浓度较高的蛋白提取物，可适当减少通用型高效总蛋白质提取试剂的使用量；
(2)冰上孵育45分钟；
(3)4℃，13000rpm离心30分钟；
(4)收集的上清即为微生物总蛋白提取物，可以进行后续实验操作。
(5)取24μL提取出的蛋白质溶液，加入6μL的5×loading buffer充分混合均匀后，100℃加热煮沸5分钟后放置为室温后4℃，13000rpm离心20分钟并吸取上清备用。
(6)蛋白浓度的测定：采用Bradford方法进行蛋白质浓度的测定。
(7)将清洗过的1.0mm厚的玻璃板固定于灌胶架上。
(8)配制10％的聚丙烯酰胺分离胶混合液，聚丙烯酰胺凝分离胶混合液的组成为30％丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺、1.5M Tris-Cl(pH8.8)、10％SDS、10％过硫酸铵、TEMED。取一定量的上述溶液或试剂混合均匀后全量加样于玻璃板中，并缓慢加入去离子水为封水层，室温下放置30min等待分离胶凝固。
(9)待分离胶凝固后倒掉所封水层，加入2mL聚丙烯酰胺浓缩胶，同时在胶面上插上梳子。
(10)待浓缩胶凝固后，缓慢拔掉梳子，将上述(5)后制备的蛋白质样品吸取10μL加样于上样孔中，80V电压跑电泳，待样品在浓缩胶和分离胶的界面处压成一条线时，调电压至150V。
(11)电泳结束后，分开两块玻璃板，切除浓缩胶。
(12)对蛋白胶进行考马斯亮蓝染色、脱色后照相并保存图片。
2、实验结果
实验结果显示，使用通用型高效总蛋白质提取试剂提取的不同微生物种类的总蛋白质通过SDS-PAGE电泳检测图(图3)可以看出，通用型高效总蛋白质提取试剂对于不同生物种类的植物叶片的提取效果佳，蛋白质条带清晰，无杂质及降解现象的出现。通过Bradford方法测定蛋白质浓度，表3中显示出所提取的不同微生物种类的蛋白质总量均达到20mg/mL。由此说明，此通用型高效总蛋白质提取试剂适用于不同微生物种类的总蛋白质提取，并且具有很好的提取效果。
实施例4通用型高效总蛋白质提取试剂与普通总蛋白质提取试剂提取效果对比
1、实验方法
(1)提取动物总蛋白前需将通用型高效总蛋白质提取试剂进行预冷，称量羊肉和猪肉样品，按照比例分别加入普通蛋白质提取试剂盒通用型高效总蛋白质提取试剂并匀浆处理；
(2)冰上孵育45分钟；
(3)4℃，13000rpm离心30分钟；
(4)收集的上清即为全蛋白提取物，可以进行后续实验操作。
(5)取24μL提取出的蛋白质溶液，加入6μL的5×loading buffer充分混合均匀后，100℃加热煮沸5分钟后放置为室温后4℃，13000rpm离心20分钟并吸取上清备用。
(6)蛋白浓度的测定：采用Bradford方法进行蛋白质浓度的测定。
(7)将清洗过的1.0mm厚的玻璃板固定于灌胶架上。
(8)配制10％的聚丙烯酰胺分离胶混合液，聚丙烯酰胺凝分离胶混合液的组成为30％丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺、1.5M Tris-Cl(pH8.8)、10％SDS、10％过硫酸铵、TEMED。取一定量的上述溶液或试剂混合均匀后全量加样于玻璃板中，并缓慢加入去离子水为封水层，室温下放置30min等待分离胶凝固。
(9)待分离胶凝固后倒掉所封水层，加入2mL聚丙烯酰胺浓缩胶，同时在胶面上插上梳子。
(10)待浓缩胶凝固后，缓慢拔掉梳子，将上述(5)后制备的蛋白质样品吸取10μL加样于上样孔中，80V电压跑电泳，待样品在浓缩胶和分离胶的界面处压成一条线时，调电压至150V。
(11)电泳结束后，分开两块玻璃板，切除浓缩胶。
(12)对蛋白胶进行考马斯亮蓝染色、脱色后照相并保存图片。
2、实验结果
实验结果显示，使用普通的总蛋白提取试剂和通用型高效总蛋白质提取试剂分别提取羊肉和猪肉的总蛋白质并通过SDS-PAGE电泳检测图(图4)可以看出，通用型高效总蛋白质提取试剂提取的总蛋白比普通的总蛋白提取试剂提取的浓度高约3倍，并且提取效果佳，蛋白质条带清晰而且条带数量多，无杂质及降解现象的出现。通过Bradford方法测定蛋白质浓度，表4中显示出使用普通的总蛋白提取试剂和通用型高效总蛋白质提取试剂分别提取羊肉和猪肉的总蛋白质的浓度。由此说明，此通用型高效总蛋白质提取试剂较普通的总蛋白提取试剂提取效率高，提取的蛋白种类多。
表1、不同电泳植物的总蛋白质提取后的浓度测定表
泳道 样品名称 提取浓度(μg/μL)
1 白菜 3.25
2 玉米 9.34
3 水稻 7.11
4 大豆 7.09
5 小麦 10.12
6 番茄 3.76
7 大麦 6.84
8 野草 4.53
表2、不同动物的总蛋白质提取后的浓度测定表
泳道 样品名称 提取浓度(μg/μL)
1 牦牛肺 11.53
2 牦牛肝 12.49
3 小鼠肺 19.21
4 小鼠肝 20.67
5 大鼠胰腺 10.34
6 大鼠腮腺 9.89
7 猪肉 17.16.
8 羊肉 18.03
表3、不同微生物的总蛋白质提取后的浓度测定表
泳道 样品名称 提取浓度(μg/μL)
1 大肠杆菌1 21.30
2 大肠杆菌2 20.77
3 大肠杆菌3 20.14
4 大肠杆菌4 20.66
5 大肠杆菌5 20.42
6 大肠杆菌6 22.22
7 大肠杆菌7 21.08
8 大肠杆菌8 20.59
1 酵母1 23.04
2 酵母2 22.71
3 酵母3 22.43
4 酵母4 24.65
5 酵母5 23.24
6 酵母6 22.82
7 酵母7 21.79
8 酵母8 22.51
表4表4中显示出使用普通的总蛋白提取试剂和通用型总蛋白质提取试剂分别提取羊肉和猪肉的总蛋白质的浓度
泳道 样品名称 提取浓度(μg/μL)
1 猪肉1 5.77
2 羊肉1 6.12
3 猪肉2 6.01
4 羊肉2 5.93
5 猪肉1 17.16.
6 羊肉1 18.03
7 猪肉2 18.62.
8 羊肉2 18.31

Claims (7)

1.一种通用型总蛋白质提取试剂。
2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的一种通用型总蛋白质提取试剂适用于提取植物、动物以及微生物材料体内的总蛋白质。
3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的一种通用型总蛋白质提取试剂适用于提取不同种类植物叶片的总蛋白质。
4.按照权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的一种通用型总蛋白质提取试剂适用于提取不同种类动物及不同动物组织的总蛋白质。
5.按照权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的一种通用型总蛋白质提取试剂适用于提取细菌及酵母菌的总蛋白质。
6.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的一种通用型高效总蛋白质提取试剂组成成分及浓度分别为：50mmol/L Tris-Cl，10mmol/L Na2HPO4，2mmol/LNaH2PO4，140～150mmol/L NaCl，1mmol/L EDTA-Na2，0.1％(体积比)NonidetP-40，0.05％Tween-20，1％TritonX-100，30～50％甘油，1mmol/L NaF，0.4mmol/L NaVO4，0.5％(w/v)脱氧胆酸钠，1～5mmol/L DTT，1％PVPP，0.7μg/mL胃蛋白酶抑制剂，0.5μg/mL亮抑蛋白肽酶，调节pH为6.8～7.5。
7.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的一种通用型蛋白质提取试剂与提取材料的使用比例(V/W)为2∶1～10∶1。
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