JP2002286642A - 生理活性アミンの分析法 - Google Patents
生理活性アミンの分析法Info
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- JP2002286642A JP2002286642A JP2001089802A JP2001089802A JP2002286642A JP 2002286642 A JP2002286642 A JP 2002286642A JP 2001089802 A JP2001089802 A JP 2001089802A JP 2001089802 A JP2001089802 A JP 2001089802A JP 2002286642 A JP2002286642 A JP 2002286642A
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- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）現象を
利用して生理活性アミン類を高感度及び高精度で分析す
る方法を提供しようとする。 【解決手段】 自然蛍光特性を有するインドールアミン
及びカテコールアミン関連物質等の生理活性アミンに対
して、それらのアミノ基に選択的な蛍光試薬を結合させ
て誘導体化し、この誘導体を前記生理活性アミンの自然
蛍光特性における励起波長で励起することにより、誘導
体内の近接蛍光分子間に蛍光共鳴エネルギー移動を起こ
させて蛍光分析するものである。
利用して生理活性アミン類を高感度及び高精度で分析す
る方法を提供しようとする。 【解決手段】 自然蛍光特性を有するインドールアミン
及びカテコールアミン関連物質等の生理活性アミンに対
して、それらのアミノ基に選択的な蛍光試薬を結合させ
て誘導体化し、この誘導体を前記生理活性アミンの自然
蛍光特性における励起波長で励起することにより、誘導
体内の近接蛍光分子間に蛍光共鳴エネルギー移動を起こ
させて蛍光分析するものである。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、自然蛍光特性を有
するインドールアミン及びカテコールアミン関連物質等
の生理活性アミンの蛍光共鳴エネルギー移動に基づく蛍
光分析の方法に関するものである。
するインドールアミン及びカテコールアミン関連物質等
の生理活性アミンの蛍光共鳴エネルギー移動に基づく蛍
光分析の方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】インドールアミン及びカテコールアミン
関連物質等の生理活性アミン類は、神経科学研究やアレ
ルギー研究等、生理学的又は医学的分野において重要な
意味を持っている。しかしながら、これらの生理活性ア
ミン類を生体中の多種多様な共存物質から選択的に検出
し且つ定量することは、容易ではない。
関連物質等の生理活性アミン類は、神経科学研究やアレ
ルギー研究等、生理学的又は医学的分野において重要な
意味を持っている。しかしながら、これらの生理活性ア
ミン類を生体中の多種多様な共存物質から選択的に検出
し且つ定量することは、容易ではない。
【０００３】即ち、インドールアミンやカテコールアミ
ンなどの分析は、電気化学検出器を用いた高速液体クロ
マトグラフィー法によるのが一般的であるが、電気化学
検出器はこれらの物質に対して非選択的であり、電極の
汚れ等の問題がある。
ンなどの分析は、電気化学検出器を用いた高速液体クロ
マトグラフィー法によるのが一般的であるが、電気化学
検出器はこれらの物質に対して非選択的であり、電極の
汚れ等の問題がある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、上記の
ような問題を解決するために実験・検討した結果、イン
ドールアミン及びカテコールアミン関連物質等の生理活
性アミン類と、オルトフタルアルデヒド等、アミノ基に
対して選択的な蛍光試薬とを反応させれば、その反応生
成物中の蛍光分子間（試料系分子−試薬系分子）におい
て、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ：Ｆｌｕｏｒｅ
ｓｃｅｎｃｅ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｅｎｅｒｇｙ Ｔ
ｒａｎｓｆｅｒ）を起こさせることが可能であるため、
励起波長を適切に設定することにより特異的検出ができ
ること、また、バックグラウンドノイズを減少させるこ
とによりベースラインを安定化し、高感度検出ができる
こと、従って、液体クロマトグラフィーと組み合わせれ
ば、上記生理活性アミン類の測定困難性を解決できるこ
とを見出した。
ような問題を解決するために実験・検討した結果、イン
ドールアミン及びカテコールアミン関連物質等の生理活
性アミン類と、オルトフタルアルデヒド等、アミノ基に
対して選択的な蛍光試薬とを反応させれば、その反応生
成物中の蛍光分子間（試料系分子−試薬系分子）におい
て、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ：Ｆｌｕｏｒｅ
ｓｃｅｎｃｅ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｅｎｅｒｇｙ Ｔ
ｒａｎｓｆｅｒ）を起こさせることが可能であるため、
励起波長を適切に設定することにより特異的検出ができ
ること、また、バックグラウンドノイズを減少させるこ
とによりベースラインを安定化し、高感度検出ができる
こと、従って、液体クロマトグラフィーと組み合わせれ
ば、上記生理活性アミン類の測定困難性を解決できるこ
とを見出した。
【０００５】本発明の目的は、上記ＦＲＥＴ現象を利用
して生理活性アミン類を高感度及び高精度で分析する方
法を提供することにある。
して生理活性アミン類を高感度及び高精度で分析する方
法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
め、本発明は自然蛍光特性を有するインドールアミン及
びカテコールアミン関連物質等の生理活性アミンに対し
て、それらのアミノ基に選択的な蛍光試薬を結合させて
誘導体化し、この誘導体を前記生理活性アミンの自然蛍
光特性における励起波長で励起することにより、誘導体
内の近接蛍光分子間に蛍光共鳴エネルギー移動を起こさ
せて蛍光分析することを特徴とする生理活性アミンの分
析法を構成したものである。
め、本発明は自然蛍光特性を有するインドールアミン及
びカテコールアミン関連物質等の生理活性アミンに対し
て、それらのアミノ基に選択的な蛍光試薬を結合させて
誘導体化し、この誘導体を前記生理活性アミンの自然蛍
光特性における励起波長で励起することにより、誘導体
内の近接蛍光分子間に蛍光共鳴エネルギー移動を起こさ
せて蛍光分析することを特徴とする生理活性アミンの分
析法を構成したものである。
【０００７】上述した本発明の基本構成において、誘導
体化された試料は液体クロマトグラフィーに通して溶離
し、その溶離液を蛍光検出器に通じて前記生理活性アミ
ンの自然蛍光特性における励起波長で励起することによ
り、分離されたクロマトグラフ溶出ピークごとの高精度
な定量が可能となる。
体化された試料は液体クロマトグラフィーに通して溶離
し、その溶離液を蛍光検出器に通じて前記生理活性アミ
ンの自然蛍光特性における励起波長で励起することによ
り、分離されたクロマトグラフ溶出ピークごとの高精度
な定量が可能となる。
【０００８】アミノ基に選択的な蛍光試薬は、芳香族又
は芳香族縮合環と対アミン反応性官能基を含み且つそれ
自体が自然蛍光特性を有する化合物であって、それによ
り誘導体化した試料物質の本体部が励起（自然蛍光励
起）されたとき、当該試薬部がその励起エネルギーを伝
達されて蛍光共鳴するものであることが望ましい。この
場合の芳香族又は芳香族縮合環としては、ベンゼン、ナ
フタレン、アントラセン、ピレン、ベンゾピレン、又は
フェナントレン等があり、対アミン反応性官能基として
は、アルデヒド官能基、カルボン酸ヒドロキシサクシン
イミジルエステル官能基、カルボン酸ハロゲン化物官能
基、ベンゼンスルホン酸ハロゲン化物官能基、又はトリ
アジニル官能基等がある。
は芳香族縮合環と対アミン反応性官能基を含み且つそれ
自体が自然蛍光特性を有する化合物であって、それによ
り誘導体化した試料物質の本体部が励起（自然蛍光励
起）されたとき、当該試薬部がその励起エネルギーを伝
達されて蛍光共鳴するものであることが望ましい。この
場合の芳香族又は芳香族縮合環としては、ベンゼン、ナ
フタレン、アントラセン、ピレン、ベンゾピレン、又は
フェナントレン等があり、対アミン反応性官能基として
は、アルデヒド官能基、カルボン酸ヒドロキシサクシン
イミジルエステル官能基、カルボン酸ハロゲン化物官能
基、ベンゼンスルホン酸ハロゲン化物官能基、又はトリ
アジニル官能基等がある。
【０００９】表１は、各種蛍光試薬をインドールアミン
の一種であるトリプトファンに結合させ、この結合で生
じた誘導体の通常励起波長と、その励起による蛍光波
長、及びこの誘導体をトリプトファンそのものの励起波
長（自然蛍光励起波長＝２８０ｎｍ）において励起した
場合に蛍光共鳴エネルギー移動が生じたと認められる程
度の結果（蛍光発光）が生じたか否かを一覧表にしたも
のである。その結果が（○）であったダンシルクロリド
とＯＰＡは、２８０ｎｍの励起に対してそれぞれ５３０
ｎｍ及び４４５ｎｍと十分に離れた蛍光波長が有為に検
出され、励起光由来の迷光や、蛍光特性が近接する混在
成分の影響が少なく、従って測定の高選択性と高感度化
が可能になる。
の一種であるトリプトファンに結合させ、この結合で生
じた誘導体の通常励起波長と、その励起による蛍光波
長、及びこの誘導体をトリプトファンそのものの励起波
長（自然蛍光励起波長＝２８０ｎｍ）において励起した
場合に蛍光共鳴エネルギー移動が生じたと認められる程
度の結果（蛍光発光）が生じたか否かを一覧表にしたも
のである。その結果が（○）であったダンシルクロリド
とＯＰＡは、２８０ｎｍの励起に対してそれぞれ５３０
ｎｍ及び４４５ｎｍと十分に離れた蛍光波長が有為に検
出され、励起光由来の迷光や、蛍光特性が近接する混在
成分の影響が少なく、従って測定の高選択性と高感度化
が可能になる。
【００１０】
【表１】
【００１１】上表において、ダンシルクロリド及びＯＰ
Ａ以外の試薬の蛍光共鳴の有為性が△となっているの
は、現時点において本発明の方法を適用しても、従来法
（生理活性アミンの当該蛍光試薬による誘導体に、その
誘導体の励起波長で蛍光発光させ、分析する方法）に比
してそれほど顕著な結果は得られなかったが、蛍光共鳴
エネルギー移動が生じていると考えられる程度の結果を
得たということを意味している。
Ａ以外の試薬の蛍光共鳴の有為性が△となっているの
は、現時点において本発明の方法を適用しても、従来法
（生理活性アミンの当該蛍光試薬による誘導体に、その
誘導体の励起波長で蛍光発光させ、分析する方法）に比
してそれほど顕著な結果は得られなかったが、蛍光共鳴
エネルギー移動が生じていると考えられる程度の結果を
得たということを意味している。
【００１２】
【発明の実施の形態】以下、インドールアミン関連物質
及びカテコールアミン関連物質に対し、本発明を適用し
た場合の実施例を説明する。
及びカテコールアミン関連物質に対し、本発明を適用し
た場合の実施例を説明する。
【００１３】
【実施例】１．インドールアミン関連物質の分析 インドールアミン関連物質を含むサンプル液２５０μＬ
に、１Ｍ（モル濃度、以下同じ）ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ
＝１０）１００μＬ、２０ｍＭ２−メルカプトエタノー
ル１００μＬ、１０ｍＭメタノール溶解ＯＰＡ１００μ
Ｌを加え、５分間室温に放置して蛍光誘導体化する。こ
の反応液を、アセトニトリル−メタノール−水（５：
６：９，ｖ／ｖ）４５０μＬで希釈し、その最終液２０
μＬを高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）に注入す
る。クロマトグラフカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ，Ｃ１８
（２５０×４．６ｍｍ，内径５μｍ）、移動相はアセト
ニトリル−メタノール−１０ｍＭ酢酸緩衝液（５：６：
９，ｖ／ｖ）、流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであった。
に、１Ｍ（モル濃度、以下同じ）ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ
＝１０）１００μＬ、２０ｍＭ２−メルカプトエタノー
ル１００μＬ、１０ｍＭメタノール溶解ＯＰＡ１００μ
Ｌを加え、５分間室温に放置して蛍光誘導体化する。こ
の反応液を、アセトニトリル−メタノール−水（５：
６：９，ｖ／ｖ）４５０μＬで希釈し、その最終液２０
μＬを高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）に注入す
る。クロマトグラフカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ，Ｃ１８
（２５０×４．６ｍｍ，内径５μｍ）、移動相はアセト
ニトリル−メタノール−１０ｍＭ酢酸緩衝液（５：６：
９，ｖ／ｖ）、流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであった。
【００１４】上記のＨＰＬＣ溶離液の各ピークを蛍光検
出器において、２８０ｎｍで励起した場合の蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）と、３３５ｎｍで励起した場合の蛍光
強度（ＯＰＡ誘導体の通常励起）を測定した。トリプト
ファン（ＴＲＰ）、及び代謝系においてトリプトファン
から誘導されるトリプタミン（ＴＡ）、５−ヒドロキシ
トリプトファン（５−ＨＴＰ）、セロトニン（５−Ｈ
Ｔ）、５−メトキシトリプタミン（５−ＭＴ）について
の両測定方式による各測定値、並びに感度比は表２に示
す通りである。
出器において、２８０ｎｍで励起した場合の蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）と、３３５ｎｍで励起した場合の蛍光
強度（ＯＰＡ誘導体の通常励起）を測定した。トリプト
ファン（ＴＲＰ）、及び代謝系においてトリプトファン
から誘導されるトリプタミン（ＴＡ）、５−ヒドロキシ
トリプトファン（５−ＨＴＰ）、セロトニン（５−Ｈ
Ｔ）、５−メトキシトリプタミン（５−ＭＴ）について
の両測定方式による各測定値、並びに感度比は表２に示
す通りである。
【００１５】
【表２】
【００１６】上表において、ＴＲＰ及びその誘導体の、
試薬を用いた更なる誘導体（試薬誘導体）ピークにおけ
るＴＲＰ系の自然励起波長２８０ｎｍによる蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）は、試薬誘導体の通常励起波長３３５
ｎｍ（ＯＰＡ励起検出）による蛍光強度に比して約１．
５倍と高く、ベースラインも安定（ノイズ幅で約１／１
５）である。従ってＦＲＥＴ検出は、ＯＰＡ励起検出よ
りも検出限度（Ｓ／Ｎ＝３）で２２〜２３倍程度向上し
た。即ち、ＦＲＥＴ検出は、高感度及び高精度の測定を
可能とすることを示している。このことは、両者のクロ
マトグラムを比較して描いた図１Ａ及びＢからも明確に
認識できる。蛍光強度比が最も高かったのはトリプトフ
ァン（ＴＲＰ）に関する結果である。このＴＲＰに、２
−メルカプトエタノールの存在下、ＯＰＡ蛍光試薬を加
えた本例の場合において、誘導体内で蛍光共鳴エネルギ
ー移動が生ずるメカニズムは、次のような化学構造及び
模式図（化１）によるものと考えられる。
試薬を用いた更なる誘導体（試薬誘導体）ピークにおけ
るＴＲＰ系の自然励起波長２８０ｎｍによる蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）は、試薬誘導体の通常励起波長３３５
ｎｍ（ＯＰＡ励起検出）による蛍光強度に比して約１．
５倍と高く、ベースラインも安定（ノイズ幅で約１／１
５）である。従ってＦＲＥＴ検出は、ＯＰＡ励起検出よ
りも検出限度（Ｓ／Ｎ＝３）で２２〜２３倍程度向上し
た。即ち、ＦＲＥＴ検出は、高感度及び高精度の測定を
可能とすることを示している。このことは、両者のクロ
マトグラムを比較して描いた図１Ａ及びＢからも明確に
認識できる。蛍光強度比が最も高かったのはトリプトフ
ァン（ＴＲＰ）に関する結果である。このＴＲＰに、２
−メルカプトエタノールの存在下、ＯＰＡ蛍光試薬を加
えた本例の場合において、誘導体内で蛍光共鳴エネルギ
ー移動が生ずるメカニズムは、次のような化学構造及び
模式図（化１）によるものと考えられる。
【００１７】
【化１】
【００１８】上記の構造式において、左端のベンゼン核
と１辺を共有するヘテロ環とからなるＴＲＰ本体部の構
造が、ＯＰＡ誘導体化前の自然励起波長による励起振動
を生ずると、右端のベンゼン核と１辺を共有するヘテロ
環とからなるＯＰＡ／２−メルカプトエタノール本体部
も共鳴振動を生じて蛍光を発する。これはＯＰＡ誘導体
化物の励起波長が、ＯＰＡ誘導体化前の自然蛍光波長と
交差しており、この場合は誘導体化生成物のＴＲＰ本体
部がドナーとなり、ＯＰＡ本体部がアクセプターとなっ
て蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を生じたものと
考えられる。
と１辺を共有するヘテロ環とからなるＴＲＰ本体部の構
造が、ＯＰＡ誘導体化前の自然励起波長による励起振動
を生ずると、右端のベンゼン核と１辺を共有するヘテロ
環とからなるＯＰＡ／２−メルカプトエタノール本体部
も共鳴振動を生じて蛍光を発する。これはＯＰＡ誘導体
化物の励起波長が、ＯＰＡ誘導体化前の自然蛍光波長と
交差しており、この場合は誘導体化生成物のＴＲＰ本体
部がドナーとなり、ＯＰＡ本体部がアクセプターとなっ
て蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を生じたものと
考えられる。
【００１９】２．カテコールアミン関連物質の分析 カテコールアミン関連物質を含む試料液２５０μＬに、
１Ｍ（モル濃度、以下同じ）ホウ酸塩（ｐＨ＝１０）１
００μＬ、２０ｍＭ２−メルカプトエタノール１００μ
Ｌ、１０ｍＭメタノール溶解ＯＰＡ１００μＬを加え、
５分間室温に放置して蛍光誘導体化する。これをアセト
ニトリル−メタノール−水（５：６：９，ｖ／ｖ）４５
０μＬで希釈し、その最終液２０μＬを高速液体クロマ
トグラフ（ＨＰＬＣ）に注入する。クロマトグラフカラ
ムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ，Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ，
内径５μｍ）、移動相はアセトニトリル−メタノール−
０．１Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５．０、配合比４：５：１
１，ｖ／ｖ）、流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであった。
１Ｍ（モル濃度、以下同じ）ホウ酸塩（ｐＨ＝１０）１
００μＬ、２０ｍＭ２−メルカプトエタノール１００μ
Ｌ、１０ｍＭメタノール溶解ＯＰＡ１００μＬを加え、
５分間室温に放置して蛍光誘導体化する。これをアセト
ニトリル−メタノール−水（５：６：９，ｖ／ｖ）４５
０μＬで希釈し、その最終液２０μＬを高速液体クロマ
トグラフ（ＨＰＬＣ）に注入する。クロマトグラフカラ
ムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ，Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ，
内径５μｍ）、移動相はアセトニトリル−メタノール−
０．１Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ５．０、配合比４：５：１
１，ｖ／ｖ）、流速は１．０ｍＬ／ｍｉｎであった。
【００２０】上記のＨＰＬＣ溶離液の各ピークを蛍光検
出器において、２８０ｎｍで励起した場合の蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）と、３３５ｎｍで励起した場合の蛍光
強度（ＯＰＡ誘導体の通常励起）を測定した。チロシン
（ＴＹＲ）、及び代謝系においてチロシンから誘導され
るＬ−ドーパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）、ドーパミン（ＤＡ）、
ノルエピネフリン（ＮＥ）、ノルメタネフリン（ＮＭ）
についての両測定方式による各測定値、並びに感度比は
表３に示す通りである。
出器において、２８０ｎｍで励起した場合の蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）と、３３５ｎｍで励起した場合の蛍光
強度（ＯＰＡ誘導体の通常励起）を測定した。チロシン
（ＴＹＲ）、及び代謝系においてチロシンから誘導され
るＬ−ドーパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）、ドーパミン（ＤＡ）、
ノルエピネフリン（ＮＥ）、ノルメタネフリン（ＮＭ）
についての両測定方式による各測定値、並びに感度比は
表３に示す通りである。
【００２１】
【表３】
【００２２】上表において、ＴＹＲ及びその誘導体の、
試薬を用いた更なる誘導体（試薬誘導体）ピークにおけ
るＴＹＲ系の自然励起波長２８０ｎｍによる蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）それ自体は、試薬誘導体（ＯＰＡ主
体）の通常励起波長３３５ｎｍによる蛍光強度に比して
ドーパミン（ＤＡ）において１．１３を得た以外、チロ
シン（ＴＹＲ）で０．４９と低く、Ｌ−ドーパで０．９
１、ノルエピネフリン（ＮＥ）で０．９４、ノルメチレ
フリン（ＮＭ）で０．９３と低く検出されたが、ベース
ラインは安定（ノイズ幅で約１／１５）である。従って
ＦＲＥＴ検出は、ＯＰＡ励起検出よりも検出限度（Ｓ／
Ｎ＝３）で１４〜１５倍程度向上した。即ち、ＦＲＥＴ
検出は、高感度及び高精度の測定を可能とすることを示
している。このことは、両方式によるクロマトグラムを
比較して描いた図２Ａ及びＢからも明確に認識できる。
従って、感度的には検出値の電気的増幅で調整可能であ
り、この場合の各種試料においても高精度な測定が可能
となることは明らかである。
試薬を用いた更なる誘導体（試薬誘導体）ピークにおけ
るＴＹＲ系の自然励起波長２８０ｎｍによる蛍光強度
（ＦＲＥＴ検出）それ自体は、試薬誘導体（ＯＰＡ主
体）の通常励起波長３３５ｎｍによる蛍光強度に比して
ドーパミン（ＤＡ）において１．１３を得た以外、チロ
シン（ＴＹＲ）で０．４９と低く、Ｌ−ドーパで０．９
１、ノルエピネフリン（ＮＥ）で０．９４、ノルメチレ
フリン（ＮＭ）で０．９３と低く検出されたが、ベース
ラインは安定（ノイズ幅で約１／１５）である。従って
ＦＲＥＴ検出は、ＯＰＡ励起検出よりも検出限度（Ｓ／
Ｎ＝３）で１４〜１５倍程度向上した。即ち、ＦＲＥＴ
検出は、高感度及び高精度の測定を可能とすることを示
している。このことは、両方式によるクロマトグラムを
比較して描いた図２Ａ及びＢからも明確に認識できる。
従って、感度的には検出値の電気的増幅で調整可能であ
り、この場合の各種試料においても高精度な測定が可能
となることは明らかである。
【００２３】
【発明の効果】以上述べたように、本発明によれば、イ
ンドールアミン及びカテコールアミン関連物質等の生理
活性アミン類を、それらのアミノ基に対して選択的な蛍
光試薬と反応させ、しかもその生成物には反応前のアミ
ン類の自然蛍光における励起波長を当てて、蛍光共鳴エ
ネルギー移動に基づく高選択的な分析の道を開くもので
ある。
ンドールアミン及びカテコールアミン関連物質等の生理
活性アミン類を、それらのアミノ基に対して選択的な蛍
光試薬と反応させ、しかもその生成物には反応前のアミ
ン類の自然蛍光における励起波長を当てて、蛍光共鳴エ
ネルギー移動に基づく高選択的な分析の道を開くもので
ある。
【図１】インドールアミンを、本発明の方式（Ａ）と従
来の方式（Ｂ）により蛍光測定したクロマトグラムであ
る。
来の方式（Ｂ）により蛍光測定したクロマトグラムであ
る。
【図２】カテコールアミンを、本発明の方式（Ａ）と従
来の方式（Ｂ）により蛍光測定したクロマトグラムであ
る。
来の方式（Ｂ）により蛍光測定したクロマトグラムであ
る。
フロントページの続き (72)発明者 吉武 尚 福岡県大野城市錦町２−１−22−1101 Ｆターム(参考） 2G043 AA01 BA14 DA02 EA01 GA07 GB21 KA02 KA03 KA05 NA13 2G054 AA06 BB04 CA21 CE02 EA03 GA03
Claims (3)
- 【請求項１】 自然蛍光特性を有するインドールアミン
およびカテコールアミン関連物質等の生理活性アミンに
対して、それらのアミノ基に選択的な蛍光試薬を結合さ
せて誘導体化し、この誘導体を前記生理活性アミンの自
然蛍光特性における励起波長で励起することにより、誘
導体内の近接蛍光分子間に蛍光共鳴エネルギー移動を起
こさせて蛍光分析することを特徴とする生理活性アミン
の分析法。 - 【請求項２】 自然蛍光特性を有するインドールアミン
およびカテコールアミン関連物質等の生理活性アミンに
対して、それらのアミノ基に選択的な蛍光試薬を結合さ
せて誘導体化し、この誘導体を液体クロマトグラフィー
に通して溶離し、その溶離液を蛍光検出器に通じて前記
生理活性アミンの自然蛍光特性における励起波長で励起
することにより、各溶離成分内の近接蛍光分子間に蛍光
共鳴エネルギー移動を起こさせて蛍光分析することを特
徴とする生理活性アミンの分析法。 - 【請求項３】 前記アミノ基に選択的な蛍光試薬が、芳
香族又は芳香族縮合環と対アミン反応性官能基を含み且
つそれ自体が自然蛍光特性を有する化合物であって、そ
れにより誘導体化した試料物質の本体部が励起（自然蛍
光励起）されたとき、当該試薬部がそのエネルギーを伝
達されて蛍光共鳴するものであることを特徴とする請求
項１又は２に記載の分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001089802A JP2002286642A (ja) | 2001-03-27 | 2001-03-27 | 生理活性アミンの分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001089802A JP2002286642A (ja) | 2001-03-27 | 2001-03-27 | 生理活性アミンの分析法 |
Publications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2001089802A Pending JP2002286642A (ja) | 2001-03-27 | 2001-03-27 | 生理活性アミンの分析法 |
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| JP (1) | JP2002286642A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008026302A (ja) * | 2006-06-19 | 2008-02-07 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 蛍光検出型ケミカルバイオセンサー及びそれを用いた検体中の特定物質の検出方法 |
| JP2014522965A (ja) * | 2011-06-23 | 2014-09-08 | コリア リサーチ インスティテュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー | ｉＦＲＥＴ用探針及びその用途 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60205262A (ja) * | 1984-03-29 | 1985-10-16 | Doujin Kagaku Kenkyusho:Kk | １，２−ジフエニルエチレンジアミンを用いるカテコ−ルアミンの定量方法 |
| JPH06258311A (ja) * | 1993-03-09 | 1994-09-16 | Hitachi Ltd | １，２−ジフェニルエチレンジアミンとカテコールアミン類との反応媒体 |
| JPH06331619A (ja) * | 1993-05-19 | 1994-12-02 | Shionogi & Co Ltd | 生理活性アミンの蛍光ｈｐｌｃ測定法 |
| JPH08166349A (ja) * | 1994-12-16 | 1996-06-25 | Tokuyama Corp | 蛍光性分子の定量方法 |
| JP2001242174A (ja) * | 2000-03-02 | 2001-09-07 | Chemicals Evaluation & Research Institute | ヒスタミン又はヒスチジンの分析方法 |
-
2001
- 2001-03-27 JP JP2001089802A patent/JP2002286642A/ja active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60205262A (ja) * | 1984-03-29 | 1985-10-16 | Doujin Kagaku Kenkyusho:Kk | １，２−ジフエニルエチレンジアミンを用いるカテコ−ルアミンの定量方法 |
| JPH06258311A (ja) * | 1993-03-09 | 1994-09-16 | Hitachi Ltd | １，２−ジフェニルエチレンジアミンとカテコールアミン類との反応媒体 |
| JPH06331619A (ja) * | 1993-05-19 | 1994-12-02 | Shionogi & Co Ltd | 生理活性アミンの蛍光ｈｐｌｃ測定法 |
| JPH08166349A (ja) * | 1994-12-16 | 1996-06-25 | Tokuyama Corp | 蛍光性分子の定量方法 |
| JP2001242174A (ja) * | 2000-03-02 | 2001-09-07 | Chemicals Evaluation & Research Institute | ヒスタミン又はヒスチジンの分析方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JPN6010001380, 吉武誠 外５名, "蛍光共鳴エネルギー移動に基づく生理活性アミン類の高選択的蛍光分析", 日本薬学会第１２１年会要旨集, 20010305, 第１２１ページ, JP, 日本薬学会第１２１年会組織委員会 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008026302A (ja) * | 2006-06-19 | 2008-02-07 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 蛍光検出型ケミカルバイオセンサー及びそれを用いた検体中の特定物質の検出方法 |
| JP2014522965A (ja) * | 2011-06-23 | 2014-09-08 | コリア リサーチ インスティテュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー | ｉＦＲＥＴ用探針及びその用途 |
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