JP2002253294A - 光学活性脂肪族アミノ酸アミドの製造法 - Google Patents
光学活性脂肪族アミノ酸アミドの製造法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 （Ｓ）−α−アミノ酸アミドの工業的製造法
を提供する。 【解決手段】 α−アミノ酸アミドのラセミ混合物に
（Ｒ）−α−アミノ酸アミドを立体選択的に加水分解す
る活性を有する微生物の生菌体又は該生菌体の処理物を
作用させて、（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、
（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残し、該
（Ｒ）−α−アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混
合物に誘導して、再度立体選択的加水分解に供する。
を提供する。 【解決手段】 α−アミノ酸アミドのラセミ混合物に
（Ｒ）−α−アミノ酸アミドを立体選択的に加水分解す
る活性を有する微生物の生菌体又は該生菌体の処理物を
作用させて、（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、
（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残し、該
（Ｒ）−α−アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混
合物に誘導して、再度立体選択的加水分解に供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は化学式（１）で示さ
れる光学活性脂肪族α−アミノ酸アミドの製造法に関す
る。詳しくは、α−アミノ酸アミドのラセミ混合物を生
化学的に不斉加水分解して対応する（Ｒ）−α−アミノ
酸を生成せしめ、（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応
のまま残すことを特徴とする光学活性脂肪族（Ｓ）−α
−アミノ酸アミドの製造法に関する。更に詳しくは、α
−アミノ酸アミドのラセミ混合物を生化学的に不斉加水
分解して対応する（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、
（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残すことを
特徴とする光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミド
の製造法であって、生成する（Ｒ）−α−アミノ酸をα
アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導して、再度原料と
して使用する光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミ
ドの製造法に関する。光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミ
ノ酸アミドは、各種工業薬品、農薬、および医薬品の製
造中間体として重要な物質である。
れる光学活性脂肪族α−アミノ酸アミドの製造法に関す
る。詳しくは、α−アミノ酸アミドのラセミ混合物を生
化学的に不斉加水分解して対応する（Ｒ）−α−アミノ
酸を生成せしめ、（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応
のまま残すことを特徴とする光学活性脂肪族（Ｓ）−α
−アミノ酸アミドの製造法に関する。更に詳しくは、α
−アミノ酸アミドのラセミ混合物を生化学的に不斉加水
分解して対応する（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、
（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残すことを
特徴とする光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミド
の製造法であって、生成する（Ｒ）−α−アミノ酸をα
アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導して、再度原料と
して使用する光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミ
ドの製造法に関する。光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミ
ノ酸アミドは、各種工業薬品、農薬、および医薬品の製
造中間体として重要な物質である。
【０００２】
【従来の技術】光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸ア
ミドの製造法としては、（Ｓ）−α−アミノ酸を出発原
料とし、公知の方法でエステル化し、更にアミド化して
製造する方法（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１４，４８４
（１９７１））が知られている。しかしながら、この方
法では、エステル化およびアミド化反応後も、未反応の
アミノ酸または一旦生成したエステルが加水分解して生
じるアミノ酸が残り収率が低く、またエステル化の反応
条件下、およびアミド化の反応条件下でエステルおよび
アミドが一部ラセミ化するため、得られる光学活性脂肪
族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドの光学純度が低く、収率
および品質の点で必ずしも満足できる方法とはいえな
い。この他に、α−アミノニトリルのラセミ混合物から
生化学的に不斉加水分解を行い、対応する光学活性α−
アミノ酸及び／又はα−-アミノアミドを製造する方法
（特開平２−３１６９４）があるが、この方法はニトリ
ル化合物の基質阻害を強く受けるため、生化学的不斉加
水分解反応を行う際の反応基質であるα−アミノニトリ
ルのラセミ混合物の濃度を高くすることが困難であり、
工業的に有利な方法とは言えない。
ミドの製造法としては、（Ｓ）−α−アミノ酸を出発原
料とし、公知の方法でエステル化し、更にアミド化して
製造する方法（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１４，４８４
（１９７１））が知られている。しかしながら、この方
法では、エステル化およびアミド化反応後も、未反応の
アミノ酸または一旦生成したエステルが加水分解して生
じるアミノ酸が残り収率が低く、またエステル化の反応
条件下、およびアミド化の反応条件下でエステルおよび
アミドが一部ラセミ化するため、得られる光学活性脂肪
族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドの光学純度が低く、収率
および品質の点で必ずしも満足できる方法とはいえな
い。この他に、α−アミノニトリルのラセミ混合物から
生化学的に不斉加水分解を行い、対応する光学活性α−
アミノ酸及び／又はα−-アミノアミドを製造する方法
（特開平２−３１６９４）があるが、この方法はニトリ
ル化合物の基質阻害を強く受けるため、生化学的不斉加
水分解反応を行う際の反応基質であるα−アミノニトリ
ルのラセミ混合物の濃度を高くすることが困難であり、
工業的に有利な方法とは言えない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
技術における上記したような課題を解決し、各種工業薬
品、農薬、および医薬品の製造中間体として重要な光学
活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを高品質かつ安
価に製造するための製造法を提供することにある。
技術における上記したような課題を解決し、各種工業薬
品、農薬、および医薬品の製造中間体として重要な光学
活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを高品質かつ安
価に製造するための製造法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、高品質か
つ安価に光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを
製造するための製造法に関して鋭意検討を行った結果、
α−アミノ酸アミドのラセミ混合物を生化学的に不斉加
水分解して（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、（Ｓ）
−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残し、生成する
（Ｒ）−α−アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混
合物に誘導して、再度原料として使用することにより、
高品質かつ安価に光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸
アミドを製造できることを見いだし、本発明に到達し
た。本発明で使用する出発原料は、高価な光学活性体で
ある必要はなく、安価なα−アミノ酸アミドのラセミ混
合物であり、また、不斉加水分解で生成する（Ｒ）−α
−アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導
して、再度原料として使用することにより、α−アミノ
酸アミドのラセミ混合物の全量を光学活性脂肪族（Ｓ）
−α−アミノ酸アミドに変換することができるため、本
発明によれば非常に安価に光学活性脂肪族（Ｓ）−α−
アミノ酸アミドを製造することが可能である。
つ安価に光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを
製造するための製造法に関して鋭意検討を行った結果、
α−アミノ酸アミドのラセミ混合物を生化学的に不斉加
水分解して（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、（Ｓ）
−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残し、生成する
（Ｒ）−α−アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混
合物に誘導して、再度原料として使用することにより、
高品質かつ安価に光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸
アミドを製造できることを見いだし、本発明に到達し
た。本発明で使用する出発原料は、高価な光学活性体で
ある必要はなく、安価なα−アミノ酸アミドのラセミ混
合物であり、また、不斉加水分解で生成する（Ｒ）−α
−アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導
して、再度原料として使用することにより、α−アミノ
酸アミドのラセミ混合物の全量を光学活性脂肪族（Ｓ）
−α−アミノ酸アミドに変換することができるため、本
発明によれば非常に安価に光学活性脂肪族（Ｓ）−α−
アミノ酸アミドを製造することが可能である。
【０００５】またα−アミノ酸アミドのラセミ混合物か
ら（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを得る反応は、生化学的
な不斉加水分解反応１工程だけであり、この反応での
（Ｒ）−α−アミノ酸アミドの（Ｒ）−α−アミノ酸へ
の転化率を１００％とすることにより、得られる（Ｓ）
−α−アミノ酸アミドの光学純度は１００％となり、品
質的にも非常に高品質な光学活性脂肪族（Ｓ）−α−ア
ミノ酸アミドを製造することが可能である。
ら（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを得る反応は、生化学的
な不斉加水分解反応１工程だけであり、この反応での
（Ｒ）−α−アミノ酸アミドの（Ｒ）−α−アミノ酸へ
の転化率を１００％とすることにより、得られる（Ｓ）
−α−アミノ酸アミドの光学純度は１００％となり、品
質的にも非常に高品質な光学活性脂肪族（Ｓ）−α−ア
ミノ酸アミドを製造することが可能である。
【０００６】すなわち本発明は、化学式が（１）で示さ
れるα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に（Ｒ）−α−
アミノ酸アミドを立体選択的に加水分解する活性を有す
る微生物の生菌体又は該生菌体の処理物を作用させて、
化学式（２）で示される（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せ
しめ、（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残す
ことを特徴とする光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸
アミドの製造法であって、生成する（Ｒ）−α−アミノ
酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導して、再
度原料として使用する光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミ
ノ酸アミドの製造法である。
れるα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に（Ｒ）−α−
アミノ酸アミドを立体選択的に加水分解する活性を有す
る微生物の生菌体又は該生菌体の処理物を作用させて、
化学式（２）で示される（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せ
しめ、（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを未反応のまま残す
ことを特徴とする光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸
アミドの製造法であって、生成する（Ｒ）−α−アミノ
酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導して、再
度原料として使用する光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミ
ノ酸アミドの製造法である。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明の原料のα−アミノ酸アミ
ドを示す一般式（１）におけるＲは、低級アルキル基、
置換低級アルキル基、シクロヘキシル基、置換シクロヘ
キシル基である。低級アルキル基には特に制限はない
が、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピ
ル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃブチルおよびｔブチル
などの炭素数１乃至４の直鎖または分枝した低級アルキ
ル基が好適である。また、置換低級アルキル基、置換シ
クロヘキシル基のそれぞれに含まれる置換基は、例え
ば、ヒドロキシ、メトキシ、メルカプト、メチルメルカ
プト、アミノ、カルボキシおよびハロゲンなどである。
ドを示す一般式（１）におけるＲは、低級アルキル基、
置換低級アルキル基、シクロヘキシル基、置換シクロヘ
キシル基である。低級アルキル基には特に制限はない
が、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピ
ル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃブチルおよびｔブチル
などの炭素数１乃至４の直鎖または分枝した低級アルキ
ル基が好適である。また、置換低級アルキル基、置換シ
クロヘキシル基のそれぞれに含まれる置換基は、例え
ば、ヒドロキシ、メトキシ、メルカプト、メチルメルカ
プト、アミノ、カルボキシおよびハロゲンなどである。
【０００８】本発明で使用する化学式（１）で示される
α−アミノ酸アミドのラセミ混合物は、その製法および
品質等に特に制限はなく、例えばシュトレッカー法によ
って容易に得られるα−アミノニトリルを部分加水分解
する方法などによって得ることが出来る。α−アミノニ
トリルを部分加水分解する方法としては塩基性物質およ
びケトン類の存在下、水性媒体中でα−アミノニトリル
を部分加水分解する方法、例えば特公昭５８−１７７４
１号公報記載の方法が好ましい。この方法は、例えば、
水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムなどの無機塩
基、ならびに例えば水酸化テトラメチルアンモニウムの
ような有機第４級アンモニウム化合物などの有機塩基の
ような塩基性物質を用い、反応液のｐＨが１４を越える
ようにし、この反応系にアセトン、メチルエチルケト
ン、ジエチルケトン、メチルイソプロピルケトンおよび
シクロヘキサノンなどのケトン類を添加し、かつ、反応
温度を４０℃以下に保ち、該反応液のｐＨを１４を越え
たｐＨに維持しながら加水分解反応を行うことを特徴と
する方法である。このα−アミノニトリル加水分解反応
生成液を濃縮してケトン類を除去して得られた粗α−ア
ミノ酸アミド含有液を、そのまま、または必要に応じて
再結晶等の手段によって精製を行った後、原料として使
用することが出来る。また、塩酸、硫酸等の無機酸や、
酢酸、シュウ酸等の有機酸との塩であっても使用するこ
とができる。
α−アミノ酸アミドのラセミ混合物は、その製法および
品質等に特に制限はなく、例えばシュトレッカー法によ
って容易に得られるα−アミノニトリルを部分加水分解
する方法などによって得ることが出来る。α−アミノニ
トリルを部分加水分解する方法としては塩基性物質およ
びケトン類の存在下、水性媒体中でα−アミノニトリル
を部分加水分解する方法、例えば特公昭５８−１７７４
１号公報記載の方法が好ましい。この方法は、例えば、
水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムなどの無機塩
基、ならびに例えば水酸化テトラメチルアンモニウムの
ような有機第４級アンモニウム化合物などの有機塩基の
ような塩基性物質を用い、反応液のｐＨが１４を越える
ようにし、この反応系にアセトン、メチルエチルケト
ン、ジエチルケトン、メチルイソプロピルケトンおよび
シクロヘキサノンなどのケトン類を添加し、かつ、反応
温度を４０℃以下に保ち、該反応液のｐＨを１４を越え
たｐＨに維持しながら加水分解反応を行うことを特徴と
する方法である。このα−アミノニトリル加水分解反応
生成液を濃縮してケトン類を除去して得られた粗α−ア
ミノ酸アミド含有液を、そのまま、または必要に応じて
再結晶等の手段によって精製を行った後、原料として使
用することが出来る。また、塩酸、硫酸等の無機酸や、
酢酸、シュウ酸等の有機酸との塩であっても使用するこ
とができる。
【０００９】本発明のα−アミノ酸アミドの生化学的不
斉加水分解に使用される微生物は、（Ｒ）−α−アミノ
酸に対応する（Ｒ）−α−アミノ酸アミドを立体選択的
に加水分解する活性を有する微生物であれば良く、この
ような微生物として例えば、ロドコッカス属、シュード
モナス属、オクロバクトラム属およびセラチア属等に属
する微生物、具体的にはロドコッカス エリスロポリス
（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉ
ｓ）ＮＲ２３（ＦＥＲＭ Ｐ−８９３７）、ロドコッカ
ス エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙ
ｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＮＲ２８（ＦＥＲＭ Ｐ８９３
８）、ロドコッカス エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＪＣＭ３２０
１、シュードモナス フローレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１２０５
５、オクロバクトラム アンスロピ（Ｏｃｈｒｏｂａｃ
ｔｒｕｍａｎｔｈｒｏｐｉ）ＡＴＣＣ４９２３７、セラ
チア マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅ
ｓｃｅｎｓ）ＩＡＭ１２１４３が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。また、これら微生物から人
工的変異手段によって誘導される変異株、あるいは細胞
融合若しくは遺伝子組換え法等の遺伝学的手法により誘
導される組換え株等の何れの株であっても上記能力を有
するものであれば、本発明に使用できる。
斉加水分解に使用される微生物は、（Ｒ）−α−アミノ
酸に対応する（Ｒ）−α−アミノ酸アミドを立体選択的
に加水分解する活性を有する微生物であれば良く、この
ような微生物として例えば、ロドコッカス属、シュード
モナス属、オクロバクトラム属およびセラチア属等に属
する微生物、具体的にはロドコッカス エリスロポリス
（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉ
ｓ）ＮＲ２３（ＦＥＲＭ Ｐ−８９３７）、ロドコッカ
ス エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙ
ｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＮＲ２８（ＦＥＲＭ Ｐ８９３
８）、ロドコッカス エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）ＪＣＭ３２０
１、シュードモナス フローレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＩＦＯ１２０５
５、オクロバクトラム アンスロピ（Ｏｃｈｒｏｂａｃ
ｔｒｕｍａｎｔｈｒｏｐｉ）ＡＴＣＣ４９２３７、セラ
チア マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅ
ｓｃｅｎｓ）ＩＡＭ１２１４３が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。また、これら微生物から人
工的変異手段によって誘導される変異株、あるいは細胞
融合若しくは遺伝子組換え法等の遺伝学的手法により誘
導される組換え株等の何れの株であっても上記能力を有
するものであれば、本発明に使用できる。
【００１０】これらの微生物の培養は、通常資化しうる
炭素源、窒素源、各微生物に必須の無機塩、栄養等を含
有させた培地を用いて行われるが、高い酵素活性を得る
ために、培地に予めα−アミノ酸アミドを添加すること
も効果的である。この際に添加されるα−アミノ酸アミ
ドは、目的とするα−アミノ酸アミドを用いることが好
ましいが、一般的なα−アミノ酸アミド、例えばアラニ
ンアミド、バリンアミド等でも良く、特に制限はない。
培養時のｐＨは、４〜１０の範囲であり、温度は２０〜
５０℃である。培養は１日〜１週間程度好気的に行われ
る。このようにして培養した微生物は、生菌体または該
生菌体処理物、例えば培養液、分離菌体、菌体破砕物、
更には精製した酵素として反応に使用される。また、常
法に従って菌体または酵素を固定化して使用することも
できる。
炭素源、窒素源、各微生物に必須の無機塩、栄養等を含
有させた培地を用いて行われるが、高い酵素活性を得る
ために、培地に予めα−アミノ酸アミドを添加すること
も効果的である。この際に添加されるα−アミノ酸アミ
ドは、目的とするα−アミノ酸アミドを用いることが好
ましいが、一般的なα−アミノ酸アミド、例えばアラニ
ンアミド、バリンアミド等でも良く、特に制限はない。
培養時のｐＨは、４〜１０の範囲であり、温度は２０〜
５０℃である。培養は１日〜１週間程度好気的に行われ
る。このようにして培養した微生物は、生菌体または該
生菌体処理物、例えば培養液、分離菌体、菌体破砕物、
更には精製した酵素として反応に使用される。また、常
法に従って菌体または酵素を固定化して使用することも
できる。
【００１１】α−アミノ酸アミドの生化学的加水分解反
応の条件は、α−アミノ酸アミド濃度１〜４０ｗｔ％、
α−アミノ酸アミドに対する微生物の使用量は、乾燥菌
体として重量比０．０００１〜３、反応温度２０〜７０
℃、ｐＨ５〜１３の範囲である。
応の条件は、α−アミノ酸アミド濃度１〜４０ｗｔ％、
α−アミノ酸アミドに対する微生物の使用量は、乾燥菌
体として重量比０．０００１〜３、反応温度２０〜７０
℃、ｐＨ５〜１３の範囲である。
【００１２】α−アミノ酸アミドの生化学的加水分解反
応で生成した（Ｒ）−α−アミノ酸と未反応の（Ｓ）−
α−アミノ酸アミドは、反応終了液から、例えば遠心分
離あるいは濾過膜などの通常の固液分離手段により微生
物菌体を除き、減圧濃縮後、有機溶媒を加えて（Ｒ）−
α−アミノ酸を析出させ、析出した（Ｒ）−α−アミノ
酸を濾取するといった方法、あるいは微生物菌体を除い
た後、減圧下で水を除去し、残査固体に有機溶媒を加え
て未反応の（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを溶解し、不溶
の（Ｒ）−α−アミノ酸を濾取するといった方法により
容易に分離することが出来る。このとき（Ｒ）−α−ア
ミノ酸を析出させるため、あるいは未反応の（Ｓ）−α
−アミノ酸アミドを溶解させるために加える有機溶媒
は、（Ｒ）−α−アミノ酸の溶解度が低く、未反応の
（Ｓ）−α−アミノ酸アミドの溶解度が高い溶媒であれ
ば良く、特に制限はないが、エタノール、２−プロパノ
ール、２−メチル−１−プロパノール、１−ブタノール
および２−ブタノール等のアルコール類が好適に使用さ
れる。また、微生物菌体を分離した反応終了液から、未
反応の（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを溶媒抽出などの方
法により分離することもできる。この時（Ｓ）−α−ア
ミノ酸アミドを抽出する溶媒として、例えばヘキサン、
ベンゼン、トルエン、およびキシレン等の非極性溶媒が
挙げられる。その他にもイオン交換電気透析を用い、除
去すべきアミノ酸のみを透析し分離する方法、若しくは
イオン交換カラムによる吸脱着を利用した分離方法も有
効である。
応で生成した（Ｒ）−α−アミノ酸と未反応の（Ｓ）−
α−アミノ酸アミドは、反応終了液から、例えば遠心分
離あるいは濾過膜などの通常の固液分離手段により微生
物菌体を除き、減圧濃縮後、有機溶媒を加えて（Ｒ）−
α−アミノ酸を析出させ、析出した（Ｒ）−α−アミノ
酸を濾取するといった方法、あるいは微生物菌体を除い
た後、減圧下で水を除去し、残査固体に有機溶媒を加え
て未反応の（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを溶解し、不溶
の（Ｒ）−α−アミノ酸を濾取するといった方法により
容易に分離することが出来る。このとき（Ｒ）−α−ア
ミノ酸を析出させるため、あるいは未反応の（Ｓ）−α
−アミノ酸アミドを溶解させるために加える有機溶媒
は、（Ｒ）−α−アミノ酸の溶解度が低く、未反応の
（Ｓ）−α−アミノ酸アミドの溶解度が高い溶媒であれ
ば良く、特に制限はないが、エタノール、２−プロパノ
ール、２−メチル−１−プロパノール、１−ブタノール
および２−ブタノール等のアルコール類が好適に使用さ
れる。また、微生物菌体を分離した反応終了液から、未
反応の（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを溶媒抽出などの方
法により分離することもできる。この時（Ｓ）−α−ア
ミノ酸アミドを抽出する溶媒として、例えばヘキサン、
ベンゼン、トルエン、およびキシレン等の非極性溶媒が
挙げられる。その他にもイオン交換電気透析を用い、除
去すべきアミノ酸のみを透析し分離する方法、若しくは
イオン交換カラムによる吸脱着を利用した分離方法も有
効である。
【００１３】分離した（Ｓ）−α−アミノ酸アミドは、
酸との塩として単離することもできる。このときの酸の
種類としては、塩酸、硫酸等の無機酸でも、酢酸、シュ
ウ酸等の有機酸でもよく、特に制限はないが、塩酸が好
適に使用される。α−アミノ酸アミドは、それ自体塩基
性で、かつ吸湿性のため、安定性が低く、保存中に分解
を受けやすいが、酸との塩として単離する事によって、
安定性を大幅に向上させることが出来る。
酸との塩として単離することもできる。このときの酸の
種類としては、塩酸、硫酸等の無機酸でも、酢酸、シュ
ウ酸等の有機酸でもよく、特に制限はないが、塩酸が好
適に使用される。α−アミノ酸アミドは、それ自体塩基
性で、かつ吸湿性のため、安定性が低く、保存中に分解
を受けやすいが、酸との塩として単離する事によって、
安定性を大幅に向上させることが出来る。
【００１４】分離した（Ｒ）−α−アミノ酸は、エステ
ル化した後アミノ化し、さらにラセミ化してα−アミノ
酸アミドのラセミ混合物に誘導し、再度原料として使用
する。エステル化は、それ自体公知の方法で行うことが
でき、例えば酸性条件下アルコールと加熱することによ
り行われる。エステル化に使用する酸の種類は、塩酸、
硫酸等の無機酸でも、ベンゼンスルホン酸等の有機酸で
もよく、特に制限はないが、特に硫酸が好適に使用され
る。エステル化に使用するアルコールに特に制限はない
が、炭素数が１〜４の脂肪族１級アルコールが好適に使
用され、特にメタノールが好適である。エステル化の条
件も、通常実施されている範囲で行うことができ、特に
制限はないが、（Ｒ）−α−アミノ酸に対して２〜２０
モル倍量のアルコール中で、（Ｒ）−α−アミノ酸に対
して２〜５当量の酸を存在させて、５０〜１２０℃に加
熱することで良好に行うことができる。また、エステル
化反応で生じる水を反応系外に除去し、さらに収率を向
上させる方法も好適に実施される。エステルのアミド化
もそれ自体公知の方法で行うことができ、例えばアンモ
ニアと反応させることによって行われる。使用されるア
ンモニアは、液体アンモニアであってもアンモニア水で
あってもよいが、通常は１０〜３０％アンモニア水が好
適に使用される。アミド化反応の条件としては、例えば
エステルに対して２〜２０モル倍量のアンモニアを含む
２５％アンモニア水中で、２０〜５０℃で反応させるこ
とによって良好に行うことができる。こうして得られる
（Ｒ）−α−アミノ酸アミドは、強塩基性物質の存在下
で加熱することにより、容易にラセミ化し、αアミノ酸
アミドのラセミ混合物とすることができる。
ル化した後アミノ化し、さらにラセミ化してα−アミノ
酸アミドのラセミ混合物に誘導し、再度原料として使用
する。エステル化は、それ自体公知の方法で行うことが
でき、例えば酸性条件下アルコールと加熱することによ
り行われる。エステル化に使用する酸の種類は、塩酸、
硫酸等の無機酸でも、ベンゼンスルホン酸等の有機酸で
もよく、特に制限はないが、特に硫酸が好適に使用され
る。エステル化に使用するアルコールに特に制限はない
が、炭素数が１〜４の脂肪族１級アルコールが好適に使
用され、特にメタノールが好適である。エステル化の条
件も、通常実施されている範囲で行うことができ、特に
制限はないが、（Ｒ）−α−アミノ酸に対して２〜２０
モル倍量のアルコール中で、（Ｒ）−α−アミノ酸に対
して２〜５当量の酸を存在させて、５０〜１２０℃に加
熱することで良好に行うことができる。また、エステル
化反応で生じる水を反応系外に除去し、さらに収率を向
上させる方法も好適に実施される。エステルのアミド化
もそれ自体公知の方法で行うことができ、例えばアンモ
ニアと反応させることによって行われる。使用されるア
ンモニアは、液体アンモニアであってもアンモニア水で
あってもよいが、通常は１０〜３０％アンモニア水が好
適に使用される。アミド化反応の条件としては、例えば
エステルに対して２〜２０モル倍量のアンモニアを含む
２５％アンモニア水中で、２０〜５０℃で反応させるこ
とによって良好に行うことができる。こうして得られる
（Ｒ）−α−アミノ酸アミドは、強塩基性物質の存在下
で加熱することにより、容易にラセミ化し、αアミノ酸
アミドのラセミ混合物とすることができる。
【００１５】ラセミ化反応に使用する強塩基性物質は、
有機または無機の強塩基性物質であれば良く、代表例と
して水酸化テトラメチルアンモニウムおよび水酸化テト
ラエチルアンモニウムなどの有機第四級アンモニウム化
合物ならびに水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ナト
リウムメチラート、ナトリウムエチラート、ナトリウム
アミドおよびナトリウムハイドライドなどのアルカリ金
属化合物、および水酸化バリウムなどのアルカリ土類金
属化合物が挙げられる。なお、反応系内において上記の
強塩基性物質に変化しうる物質、例えばナトリウムおよ
びカリウムなどのアルカリ金属単体、ならびにバリウム
などのアルカリ土類金属単体などをそれぞれ添加するこ
とも可能である。これら強塩基性物質の使用量は、
（Ｒ）−α−アミノ酸アミド１モルに対して０．００１
〜０．５モルの割合であり、好適には０．０１〜０．１
モルの割合である。ラセミ化反応は、溶媒を使用しない
で行うこともできるが、溶媒を使用した場合には反応温
度を低くすることができ、そのため副生成物が生成する
危険性を低くすることができ、より好適である。この際
に使用される溶媒としては、（Ｒ）−α−アミノ酸アミ
ドおよび強塩基性物質のそれぞれに対して不活性であれ
ば良く、例えばヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、
ベンゼン、トルエンおよびキシレン等の炭化水素類、２
−プロパノール、２−メチル−１−プロパノール、２−
ブタノール、１−ブタノールおよび１−ペンタノール等
のアルコール類、ならびにイソブチロニトリルなどがあ
る。溶媒の使用量に特に制限はないが、実用上、（Ｒ）
−α−アミノ酸アミドの重量に対して１００倍より多く
する必要はなく、１〜２０倍程度が好ましい。ラセミ化
反応液中の水分は少ないほど好ましいが、１ｗｔ％程度
以下ならば殆ど支障はなく、０．１ｗｔ％以下であれば
実質的に支障はない。ラセミ化反応の温度は、２０〜２
００℃、好適には５０〜１５０℃である。ラセミ化反応
は、通常、常圧下で行われるが、減圧下または加圧下で
行うことを妨げない。
有機または無機の強塩基性物質であれば良く、代表例と
して水酸化テトラメチルアンモニウムおよび水酸化テト
ラエチルアンモニウムなどの有機第四級アンモニウム化
合物ならびに水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ナト
リウムメチラート、ナトリウムエチラート、ナトリウム
アミドおよびナトリウムハイドライドなどのアルカリ金
属化合物、および水酸化バリウムなどのアルカリ土類金
属化合物が挙げられる。なお、反応系内において上記の
強塩基性物質に変化しうる物質、例えばナトリウムおよ
びカリウムなどのアルカリ金属単体、ならびにバリウム
などのアルカリ土類金属単体などをそれぞれ添加するこ
とも可能である。これら強塩基性物質の使用量は、
（Ｒ）−α−アミノ酸アミド１モルに対して０．００１
〜０．５モルの割合であり、好適には０．０１〜０．１
モルの割合である。ラセミ化反応は、溶媒を使用しない
で行うこともできるが、溶媒を使用した場合には反応温
度を低くすることができ、そのため副生成物が生成する
危険性を低くすることができ、より好適である。この際
に使用される溶媒としては、（Ｒ）−α−アミノ酸アミ
ドおよび強塩基性物質のそれぞれに対して不活性であれ
ば良く、例えばヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、
ベンゼン、トルエンおよびキシレン等の炭化水素類、２
−プロパノール、２−メチル−１−プロパノール、２−
ブタノール、１−ブタノールおよび１−ペンタノール等
のアルコール類、ならびにイソブチロニトリルなどがあ
る。溶媒の使用量に特に制限はないが、実用上、（Ｒ）
−α−アミノ酸アミドの重量に対して１００倍より多く
する必要はなく、１〜２０倍程度が好ましい。ラセミ化
反応液中の水分は少ないほど好ましいが、１ｗｔ％程度
以下ならば殆ど支障はなく、０．１ｗｔ％以下であれば
実質的に支障はない。ラセミ化反応の温度は、２０〜２
００℃、好適には５０〜１５０℃である。ラセミ化反応
は、通常、常圧下で行われるが、減圧下または加圧下で
行うことを妨げない。
【００１６】このようにして（Ｒ）−α−アミノ酸をα
アミノ酸アミドのラセミ混合物とし、生化学的不斉加水
分解反応系へ循環することにより、α−アミノ酸アミド
のラセミ混合物の全量を光学活性（Ｓ）−α−アミノ酸
アミドに変換することができる。
アミノ酸アミドのラセミ混合物とし、生化学的不斉加水
分解反応系へ循環することにより、α−アミノ酸アミド
のラセミ混合物の全量を光学活性（Ｓ）−α−アミノ酸
アミドに変換することができる。
【００１７】本発明の方法によって、具体的には、例え
ば（Ｓ）−アラニンアミド、（Ｓ）−バリンアミド、
（Ｓ）−ロイシンアミド、（Ｓ）−イソロイシンアミド
および（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド等の光学活性脂肪
族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを製造することができ
る。
ば（Ｓ）−アラニンアミド、（Ｓ）−バリンアミド、
（Ｓ）−ロイシンアミド、（Ｓ）−イソロイシンアミド
および（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド等の光学活性脂肪
族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを製造することができ
る。
【００１８】
【実施例】本発明を実施例により更に具体的に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。 実施例１ 次の組成を有する培地を調整し、この培地２００ｍｌを
１Ｌ三角フラスコに入れ、滅菌後、ロドコッカス エリ
スロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏ
ｐｏｌｉｓ）ＮＲ２８（ＦＥＲＭ Ｐ−８９３８）を接
種し、３０℃で４８時間振盪培養を行った。 培地組成（ｐＨ７．０） グルコース １０ｇ ポリペプトン ５ｇ 酵母エキス ５ｇ KH2 PO4 １ｇ MgSO4 ・ 7H2 O ０．４ｇ FeSO4 ・ 7H2 O ０．０１ｇ MnCl2 ・ 4H2 O ０．０１ｇ （Ｒ）−バリンアミド ５ｇ 水 １Ｌ 次いで培養液から遠心分離により生菌体を得、この生菌
体を１００ｍｌの水に懸濁し、１Ｌ三角フラスコに入
れ、ここにバリンアミドのラセミ混合物５．００ｇ（４
３．１ｍｍｏｌ）を加えて、４０℃で５時間振盪した。
反応後、反応液を遠心分離して上清を得た。この上清液
からエバポレーターで減圧にて水を留去した後、２−メ
チル−１−プロパノール２０mlを加えて未反応の（Ｓ）
−バリンアミドを溶解し、不溶の（Ｒ）−バリンを白色
固体として濾別した。バリンを濾取した後の濾液に濃塩
酸２．２５ｇ（２１．６ｍｍｏｌ）を加えて、析出した
（Ｓ）バリンアミド塩酸塩の白色固体２．８２ｇ（１
８．５ｍｍｏｌ）を濾取した。また濾液を濃縮して二番
晶０．３３ｇ（２．２ｍｍｏｌ）、合計３．１５ｇ（２
０．７ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−バリンアミド塩酸塩を得
た。反応に仕込んだラセミ混合物中の（Ｓ）バリンアミ
ドからの単離収率は９６モル％、バリンアミドのラセミ
混合物からの単離収率は４８モル％であった。また、こ
の固体を光学分割用キラルカラムを用いた液体クロマト
グラフィーによって分析した結果、光学純度は９９％
ｅ．ｅ．以上であった。
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。 実施例１ 次の組成を有する培地を調整し、この培地２００ｍｌを
１Ｌ三角フラスコに入れ、滅菌後、ロドコッカス エリ
スロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒｏ
ｐｏｌｉｓ）ＮＲ２８（ＦＥＲＭ Ｐ−８９３８）を接
種し、３０℃で４８時間振盪培養を行った。 培地組成（ｐＨ７．０） グルコース １０ｇ ポリペプトン ５ｇ 酵母エキス ５ｇ KH2 PO4 １ｇ MgSO4 ・ 7H2 O ０．４ｇ FeSO4 ・ 7H2 O ０．０１ｇ MnCl2 ・ 4H2 O ０．０１ｇ （Ｒ）−バリンアミド ５ｇ 水 １Ｌ 次いで培養液から遠心分離により生菌体を得、この生菌
体を１００ｍｌの水に懸濁し、１Ｌ三角フラスコに入
れ、ここにバリンアミドのラセミ混合物５．００ｇ（４
３．１ｍｍｏｌ）を加えて、４０℃で５時間振盪した。
反応後、反応液を遠心分離して上清を得た。この上清液
からエバポレーターで減圧にて水を留去した後、２−メ
チル−１−プロパノール２０mlを加えて未反応の（Ｓ）
−バリンアミドを溶解し、不溶の（Ｒ）−バリンを白色
固体として濾別した。バリンを濾取した後の濾液に濃塩
酸２．２５ｇ（２１．６ｍｍｏｌ）を加えて、析出した
（Ｓ）バリンアミド塩酸塩の白色固体２．８２ｇ（１
８．５ｍｍｏｌ）を濾取した。また濾液を濃縮して二番
晶０．３３ｇ（２．２ｍｍｏｌ）、合計３．１５ｇ（２
０．７ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−バリンアミド塩酸塩を得
た。反応に仕込んだラセミ混合物中の（Ｓ）バリンアミ
ドからの単離収率は９６モル％、バリンアミドのラセミ
混合物からの単離収率は４８モル％であった。また、こ
の固体を光学分割用キラルカラムを用いた液体クロマト
グラフィーによって分析した結果、光学純度は９９％
ｅ．ｅ．以上であった。
【００１９】反応で生じた（Ｒ）−バリン２．５０ｇ
（２１．４ｍｍｏｌ）をメタノール１０．０ｇ（３１０
ｍｍｏｌ）に溶かし、濃硫酸３．００ｇ（３０．０ｍｍ
ｏｌ）を加えて、２３時間加熱還流してエステル化反応
を行った。反応液を氷冷し、ここに撹拌下２５％アンモ
ニア水１５．０ｇ（２２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で２
３時間撹拌し、アミド化反応を行った。反応後、水酸化
ナトリウム２．４０ｇ（６０．０ｍｍｏｌ）を加えて溶
かし、減圧下、過剰のアンモニア、メタノールおよび水
を留去した後、２メチル１プロパノール２０ｍｌを加え
て、不溶の固体を濾別した。濾液に水酸化ナトリウム
０．０８ｇ（２．００ｍｍｏｌ）を加えて１１０℃で３
０分間撹拌し、ラセミ化した。反応終了後、反応液を冷
却し、塩化アンモニウム０．１１ｇ（２．００ｍｍｏ
ｌ）を加えて中和し、減圧で２メチル１プロパノールを
留去してから水を加えて、粗精製バリンアミドのラセミ
混合物２．１０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を含む水溶液を
得た。（Ｒ）−バリンからの収率は８５モル％であっ
た。
（２１．４ｍｍｏｌ）をメタノール１０．０ｇ（３１０
ｍｍｏｌ）に溶かし、濃硫酸３．００ｇ（３０．０ｍｍ
ｏｌ）を加えて、２３時間加熱還流してエステル化反応
を行った。反応液を氷冷し、ここに撹拌下２５％アンモ
ニア水１５．０ｇ（２２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で２
３時間撹拌し、アミド化反応を行った。反応後、水酸化
ナトリウム２．４０ｇ（６０．０ｍｍｏｌ）を加えて溶
かし、減圧下、過剰のアンモニア、メタノールおよび水
を留去した後、２メチル１プロパノール２０ｍｌを加え
て、不溶の固体を濾別した。濾液に水酸化ナトリウム
０．０８ｇ（２．００ｍｍｏｌ）を加えて１１０℃で３
０分間撹拌し、ラセミ化した。反応終了後、反応液を冷
却し、塩化アンモニウム０．１１ｇ（２．００ｍｍｏ
ｌ）を加えて中和し、減圧で２メチル１プロパノールを
留去してから水を加えて、粗精製バリンアミドのラセミ
混合物２．１０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を含む水溶液を
得た。（Ｒ）−バリンからの収率は８５モル％であっ
た。
【００２０】このようにして回収した粗精製バリンアミ
ドのラセミ混合物２．１０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を含
む水溶液と、新たなバリンアミドのラセミ混合物２．１
０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を合わせ、ロドコッカス エ
リスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒ
ｏｐｏｌｉｓ）ＮＲ２８（ＦＥＲＭ Ｐ８９３８）の培
養液から得た生菌体を用いて、再度、４０℃で５時間反
応した後、同様に処理し、（Ｓ）−バリンアミド塩酸塩
の白色固体２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を濾取し
た。また濾液を濃縮して二番晶０．２５ｇ（１．６ｍｍ
ｏｌ）、合計２．５３ｇ（１６．６ｍｍｏｌ）の（Ｓ）
−バリンアミド塩酸塩を得た。反応に仕込んだラセミ混
合物中の（Ｓ）−バリンアミドからの単離収率は９２モ
ル％、新たに仕込んだバリンアミドのラセミ混合物から
の単離収率は９２モル％であった。また、この固体を光
学分割用キラルカラムを用いた液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、光学純度は９９％ｅ．ｅ．以上
であった。
ドのラセミ混合物２．１０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を含
む水溶液と、新たなバリンアミドのラセミ混合物２．１
０ｇ（１８．１ｍｍｏｌ）を合わせ、ロドコッカス エ
リスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｒｙｔｈｒ
ｏｐｏｌｉｓ）ＮＲ２８（ＦＥＲＭ Ｐ８９３８）の培
養液から得た生菌体を用いて、再度、４０℃で５時間反
応した後、同様に処理し、（Ｓ）−バリンアミド塩酸塩
の白色固体２．２８ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）を濾取し
た。また濾液を濃縮して二番晶０．２５ｇ（１．６ｍｍ
ｏｌ）、合計２．５３ｇ（１６．６ｍｍｏｌ）の（Ｓ）
−バリンアミド塩酸塩を得た。反応に仕込んだラセミ混
合物中の（Ｓ）−バリンアミドからの単離収率は９２モ
ル％、新たに仕込んだバリンアミドのラセミ混合物から
の単離収率は９２モル％であった。また、この固体を光
学分割用キラルカラムを用いた液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、光学純度は９９％ｅ．ｅ．以上
であった。
【００２１】実施例２ 次の組成を有する培地を調製し、滅菌した後、オクロバ
クトラム アンスロピ（Ｏｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ ａ
ｎｔｈｒｏｐｉ）ＡＴＣＣ４９２３７を接種し、３０℃
で１８時間振とう培養を行った。 培地組成（ｐＨ７．０） グルコース １ｇ トリプトン ５ｇ 酵母エキス ５ｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 １ｇ 水 １Ｌ 培養後、培養液を遠心分離して生菌体を得、リン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）に懸濁してから超音波処理を行い、菌
体を破砕し、破砕菌体を遠心分離で除去して無細胞抽出
液とした。この無細胞抽出液を硫安分画（３０〜６０
％）、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡ
Ｅトヨパール、０→１ＭＮａＣｌグラジェント）および
疎水性カラムクロマトグラフィー（ブチルトヨパール、
３０→０％硫安グラジェント）で精製して酵素液を得
た。
クトラム アンスロピ（Ｏｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ ａ
ｎｔｈｒｏｐｉ）ＡＴＣＣ４９２３７を接種し、３０℃
で１８時間振とう培養を行った。 培地組成（ｐＨ７．０） グルコース １ｇ トリプトン ５ｇ 酵母エキス ５ｇ Ｋ2 ＨＰＯ4 １ｇ 水 １Ｌ 培養後、培養液を遠心分離して生菌体を得、リン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）に懸濁してから超音波処理を行い、菌
体を破砕し、破砕菌体を遠心分離で除去して無細胞抽出
液とした。この無細胞抽出液を硫安分画（３０〜６０
％）、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡ
Ｅトヨパール、０→１ＭＮａＣｌグラジェント）および
疎水性カラムクロマトグラフィー（ブチルトヨパール、
３０→０％硫安グラジェント）で精製して酵素液を得
た。
【００２２】２−アミノ酪酸アミドのラセミ混合物５．
００ｇ（４９．０ｍｍｏｌ）を水１００ｍｌに溶かし、
ここに上記の精製酵素液を加えて、３０℃で５時間保温
した。反応後、エバポレーターで減圧にて水を留去した
後、２−メチル−１−プロパノール２０mlを加えて未反
応の（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミドを溶解し、不溶の
（Ｒ）−２−アミノ酪酸を白色固体として濾別した。２
−アミノ酪酸を濾取した後の濾液に濃塩酸２．５６ｇ
（２４．５ｍｍｏｌ）を加えて、析出した（Ｓ）−２−
アミノ酪酸アミド塩酸塩の白色固体２．８５ｇ（２０．
６ｍｍｏｌ）を濾取した。また濾液を濃縮して二番晶
０．２８ｇ（２．０ｍｍｏｌ）、合計３．１３ｇ（２
２．６ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド塩酸
塩を得た。反応に仕込んだラセミ混合物中の（Ｓ）−２
−アミノ酪酸アミドからの単離収率は９２モル％、バリ
ンアミドのラセミ混合物からの単離収率は４６モル％で
あった。また、この固体を光学分割用キラルカラムを用
いた液体クロマトグラフィーによって分析した結果、光
学純度は９９％ｅ．ｅ．以上であった。
００ｇ（４９．０ｍｍｏｌ）を水１００ｍｌに溶かし、
ここに上記の精製酵素液を加えて、３０℃で５時間保温
した。反応後、エバポレーターで減圧にて水を留去した
後、２−メチル−１−プロパノール２０mlを加えて未反
応の（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミドを溶解し、不溶の
（Ｒ）−２−アミノ酪酸を白色固体として濾別した。２
−アミノ酪酸を濾取した後の濾液に濃塩酸２．５６ｇ
（２４．５ｍｍｏｌ）を加えて、析出した（Ｓ）−２−
アミノ酪酸アミド塩酸塩の白色固体２．８５ｇ（２０．
６ｍｍｏｌ）を濾取した。また濾液を濃縮して二番晶
０．２８ｇ（２．０ｍｍｏｌ）、合計３．１３ｇ（２
２．６ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド塩酸
塩を得た。反応に仕込んだラセミ混合物中の（Ｓ）−２
−アミノ酪酸アミドからの単離収率は９２モル％、バリ
ンアミドのラセミ混合物からの単離収率は４６モル％で
あった。また、この固体を光学分割用キラルカラムを用
いた液体クロマトグラフィーによって分析した結果、光
学純度は９９％ｅ．ｅ．以上であった。
【００２３】反応で生じた（Ｒ）−２−アミノ酪酸２．
４０ｇ（２３．３ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｇ（３１
０ｍｍｏｌ）に溶かし、濃硫酸３ｇ（３０ｍｍｏｌ）を
加えて、２３時間加熱還流してエステル化反応を行っ
た。反応液を氷令し、ここに撹拌下２５％アンモニア水
１５ｇ（２２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で２３時間撹拌
し、アミド化反応を行った。反応後、水酸化ナトリウム
２．４ｇ（６０ｍｍｏｌ）を加えて溶かし、減圧下、過
剰のアンモニア、メタノールおよび水を留去した後、２
−メチル−１−プロパノール２０ｍｌを加えて、不溶の
固体を濾別した。濾液に水酸化ナトリウム０．０８ｇ
（２ｍｍｏｌ）を加えて１１０℃で３０分間撹拌し、ラ
セミ化した。反応終了後、反応液を冷却し、塩化アンモ
ニウム０．１１ｇ（２ｍｍｏｌ）を加えて中和し、減圧
で２−メチル−１−プロパノールを留去してから水を加
えて、粗精製２−アミノ酪酸アミドのラセミ混合物１．
９７ｇ（１９．３ｍｍｏｌ）を含む水溶液を得た。
（Ｒ）−２−アミノ酪酸からの収率は８３モル％であっ
た。
４０ｇ（２３．３ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｇ（３１
０ｍｍｏｌ）に溶かし、濃硫酸３ｇ（３０ｍｍｏｌ）を
加えて、２３時間加熱還流してエステル化反応を行っ
た。反応液を氷令し、ここに撹拌下２５％アンモニア水
１５ｇ（２２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で２３時間撹拌
し、アミド化反応を行った。反応後、水酸化ナトリウム
２．４ｇ（６０ｍｍｏｌ）を加えて溶かし、減圧下、過
剰のアンモニア、メタノールおよび水を留去した後、２
−メチル−１−プロパノール２０ｍｌを加えて、不溶の
固体を濾別した。濾液に水酸化ナトリウム０．０８ｇ
（２ｍｍｏｌ）を加えて１１０℃で３０分間撹拌し、ラ
セミ化した。反応終了後、反応液を冷却し、塩化アンモ
ニウム０．１１ｇ（２ｍｍｏｌ）を加えて中和し、減圧
で２−メチル−１−プロパノールを留去してから水を加
えて、粗精製２−アミノ酪酸アミドのラセミ混合物１．
９７ｇ（１９．３ｍｍｏｌ）を含む水溶液を得た。
（Ｒ）−２−アミノ酪酸からの収率は８３モル％であっ
た。
【００２４】このようにして回収した粗精製２−アミノ
酪酸アミドのラセミ混合物１．９７ｇ（１９．３ｍｍｏ
ｌ）を含む水溶液と、新たな２−アミノ酪酸アミドのラ
セミ混合物１．９７ｇ（１９．３ｍｍｏｌ）を合わせ、
上記の精製酵素液を用いて、再度、３０℃で５時間反応
した後、同様に処理し、（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド
塩酸塩の白色固体２．２７ｇ（１６．４ｍｍｏｌ）を濾
取した。また濾液を濃縮して二番晶０．２０ｇ（１．４
ｍｍｏｌ）、合計２．４７ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）の
（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド塩酸塩を得た。反応に仕
込んだラセミ混合物中の（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド
からの単離収率は９２モル％、新たに仕込んだバリンア
ミドのラセミ混合物からの単離収率は９２モル％であっ
た。また、この固体を光学分割用キラルカラムを用いた
液体クロマトグラフィーによって分析した結果、光学純
度は９９％ｅ．ｅ．以上であった。
酪酸アミドのラセミ混合物１．９７ｇ（１９．３ｍｍｏ
ｌ）を含む水溶液と、新たな２−アミノ酪酸アミドのラ
セミ混合物１．９７ｇ（１９．３ｍｍｏｌ）を合わせ、
上記の精製酵素液を用いて、再度、３０℃で５時間反応
した後、同様に処理し、（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド
塩酸塩の白色固体２．２７ｇ（１６．４ｍｍｏｌ）を濾
取した。また濾液を濃縮して二番晶０．２０ｇ（１．４
ｍｍｏｌ）、合計２．４７ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）の
（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド塩酸塩を得た。反応に仕
込んだラセミ混合物中の（Ｓ）−２−アミノ酪酸アミド
からの単離収率は９２モル％、新たに仕込んだバリンア
ミドのラセミ混合物からの単離収率は９２モル％であっ
た。また、この固体を光学分割用キラルカラムを用いた
液体クロマトグラフィーによって分析した結果、光学純
度は９９％ｅ．ｅ．以上であった。
【００２５】実施例３ 実施例１と同様にして各種微生物を培養し、生菌体を得
た。ロイシンアミドのラセミ混合物５．００ｇ（３８．
５ｍｍｏｌ）を基質とし、各種微生物の生菌体を用い
て、実施例１と同様に操作した。結果を表１に示す。な
お、酵素反応後に得られた（Ｓ）−ロイシンアミド塩酸
塩の光学純度は、光学分割用キラルカラムを用いた液体
クロマトグラフィーによって分析した結果、いずれも９
９％ｅ．ｅ．以上であった。
た。ロイシンアミドのラセミ混合物５．００ｇ（３８．
５ｍｍｏｌ）を基質とし、各種微生物の生菌体を用い
て、実施例１と同様に操作した。結果を表１に示す。な
お、酵素反応後に得られた（Ｓ）−ロイシンアミド塩酸
塩の光学純度は、光学分割用キラルカラムを用いた液体
クロマトグラフィーによって分析した結果、いずれも９
９％ｅ．ｅ．以上であった。
【００２６】 表１ 菌名 収率１ 収率２ 収率３ 収率４ ロドコッカス エリスロポリス NR-28 (FERM P-8938) ４８％ ９５％ ９２％ ９２％ シュードモナス フローレッセンス （ＩＦＯ １２０５５） ４４％ ８８％ ８７％ ８７％ セラチア マルセッセンス （ＩＡＭ １２１４３） ４１％ ８２％ ８０％ ８０％ 収率１：１回目の酵素反応に仕込んだロイシンアミドのラセミ混合物に対する （Ｓ）−ロイシンアミド塩酸塩の単離収率（モル％）。 収率２：１回目の酵素反応に仕込んだラセミ混合物中の（Ｓ）−ロイシンアミ ドに対する（Ｓ）−ロイシンアミド塩酸塩の単離収率（モル％）。 収率３：２回目の酵素反応に仕込んだラセミ混合物中の（Ｓ）−ロイシンアミ ドに対する（Ｓ）−ロイシンアミド塩酸塩の単離収率（モル％）。 収率４：２回目の酵素反応に新たに仕込んだロイシンアミドのラセミ混合物に 対する（Ｓ）−ロイシンアミド塩酸塩の単離収率（モル％）。
【００２７】
【発明の効果】本発明の方法によれば、各種工業薬品、
農薬、および医薬品の製造中間体として重要な光学活性
脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを高品質かつ安価に
製造することが可能となる。
農薬、および医薬品の製造中間体として重要な光学活性
脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドを高品質かつ安価に
製造することが可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 41/00 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:425） Ｃ１２Ｒ 1:425） (72)発明者 加山 考 新潟県新潟市太夫浜字新割182番地 三菱 瓦斯化学株式会社新潟研究所内 (72)発明者 井上 敦 新潟県新潟市太夫浜字新割182番地 三菱 瓦斯化学株式会社新潟研究所内 Ｆターム(参考） 4B064 AE03 CA02 CB05 CD27 DA01
Claims (5)
- 【請求項１】 一般式が（１）で示されるα−アミノ酸
アミドのラセミ混合物に（Ｒ）−α−アミノ酸アミドを
立体選択的に加水分解する活性を有する微生物の生菌体
又は該生菌体の処理物を作用させて、一般式（２）で示
される（Ｒ）−α−アミノ酸を生成せしめ、（Ｓ）−α
−アミノ酸アミドを未反応のまま残し、該（Ｒ）−α−
アミノ酸をα−アミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導し
て、再度立体選択的加水分解に供することを特徴とする
光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸アミドの製造法。 【化１】 (Ｒは低級アルキル基、置換低級アルキル基、シクロヘ
キシル基、置換シクロヘキシル基である） 【化２】 （Ｒは低級アルキル基、置換低級アルキル基、シクロヘ
キシル基、置換シクロヘキシル基である） - 【請求項２】 生成する（Ｒ）−α−アミノ酸をα−ア
ミノ酸アミドのラセミ混合物に誘導する際に、（Ｒ）−
α−アミノ酸を（Ｒ）−α−アミノ酸エステルとし、次
いで（Ｒ）−α−アミノ酸エステルを（Ｒ）−α−アミ
ノ酸アミドとした後にラセミ化する請求項１に記載の製
造法。 - 【請求項３】 光学活性脂肪族（Ｓ）−α−アミノ酸ア
ミドを、酸との塩として単離する請求項１または２に記
載の製造法。方法 - 【請求項４】 （Ｒ）−α−アミノ酸アミドを立体選択
的に加水分解する活性を有する微生物として、ロドコッ
カス属、シュードモナス属、オクロバクトラム属または
セラチア属に属する微生物を使用する請求項１乃至３の
いずれかに記載の製造法。 - 【請求項５】 一般式（１）および一般式（２）におい
てＲがエチル基である請求項１乃至４のいずれかに記載
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001057866A JP2002253294A (ja) | 2001-03-02 | 2001-03-02 | 光学活性脂肪族アミノ酸アミドの製造法 |
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| JP2001057866A JP2002253294A (ja) | 2001-03-02 | 2001-03-02 | 光学活性脂肪族アミノ酸アミドの製造法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002253294A true JP2002253294A (ja) | 2002-09-10 |
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ID=18917678
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|---|---|---|---|
| JP2001057866A Pending JP2002253294A (ja) | 2001-03-02 | 2001-03-02 | 光学活性脂肪族アミノ酸アミドの製造法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP2002253294A (ja) |
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-
2001
- 2001-03-02 JP JP2001057866A patent/JP2002253294A/ja active Pending
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