JP2001299351A - 新規ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 遺伝子組換え技術を用いることにより、安価
にかつ大量にアルデヒドオキシダーゼ（ALOD）活性を有
するタンパク質を製造する方法を提供する。 【解決手段】 微生物スクリーニングの結果新たに見出
したALOD生産菌Methylobacillus sp. C38株のALODの構
造遺伝子の下流に存在し、ALODの活性を向上させる活性
を有するポリペプチドをコードする遺伝子、およびアル
デヒドオキシダーゼ（ALOD）活性を有するタンパク質を
コードする遺伝子を有する形質転換体を培養して得られ
るポリペプチドとタンパク質とを共存させ、工業的に有
利にALOD活性を有するタンパク質を生産する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、アルデヒドオキシ
ダーゼ（以下、ＡＬＯＤと略す）活性を有するタンパク
質のＡＬＯＤ活性を向上させる活性を有するポリペプチ
ド、該ポリペプチドによりＡＬＯＤ活性の向上するタン
パク質、該タンパク質と該ポリペプチドを共存させるこ
とによる該タンパク質のＡＬＯＤ活性の向上方法、該タ
ンパク質または該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、該
ＤＮＡを組み込んだ組換え体ＤＮＡ、該組換え体ＤＮＡ
により形質転換された形質転換体、および該形質転換体
を用いたアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク
質の工業的に有利な製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＡＬＯＤは、例えば腎機能マーカーであ
る血中クレアチニン定量用臨床診断用酵素や各種サンプ
ル中のアルデヒドの測定用酵素、およびホルムアルデヒ
ドなどの有害な環境汚染アルデヒドの分解、除去用酵素
として有用である。本酵素は、分子状酸素の存在下で各
種アルデヒドを酸化して、カルボン酸と過酸化水素を生
成する。

【０００３】ＡＬＯＤはブタやウサギの肝臓中に見出さ
れている[R. L. Felsted, A. E. Chu & S. Chaykinn,
J. Biol. Chem., 248, 2580 (1973)]。微生物界では、D
esulfovibrio gigasがaldehyde oxidoreductaseを生産
すると言われているが、それは分子状酸素を電子受容体
とし過酸化水素を生成するＡＬＯＤというよりも、むし
ろNADや色素などを電子受容体とするaldehyde dehydrog
e naseに相当する[N.Turner, B. Barata, R. C. Bray,
J. Deistung, J. Le Gall & J. J. Moura, Biochem.
J., 243, 755 (1987)]。

【０００４】唯一ＡＬＯＤを製造する方法としては、Ps
eudomonas属、Escherichia属などに属する微生物を用い
る方法（特公平2-015191号公報）が知られている。しか
しながら、これらの微生物は、通常酵素生産に利用され
る培地で培養しても、その生産量は極めて少なく、経済
的に不利である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、遺伝
子組換え技術を用いることにより、安価にかつ大量にＡ
ＬＯＤ活性を有するタンパク質を製造する方法を提供す
ることにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記課題
を解決するため鋭意検討し、Pseudomonas属、Escherich
ia属、Methylobacillus属由来のＡＬＯＤをコードする
遺伝子を単離することに成功した。さらに、該遺伝子に
コードされたＡＬＯＤの活性を向上させる方法を見出し
本発明を完成させるに至った。

【０００７】すなわち、本発明は以下の（１）〜（２
３）に関する。 （１） アルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク
質の該アルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる活性を
有するポリペプチド。 （２） 配列番号１３または１４のアミノ酸配列を有す
るポリペプチド。 （３） 配列番号１３のアミノ酸配列において１以上の
アミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列
からなり、かつ配列番号１４のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドと共存させた場合にアルデヒドオキシダーゼ
活性を有するタンパク質のアルデヒドオキシダーゼ活性
を向上させる活性を有するポリペプチド、または配列番
号１４のアミノ酸配列において１以上のアミノ酸が欠
失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、か
つ配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプチドと
共存させた場合にアルデヒドオキシダーゼ活性を有する
タンパク質のアルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる
活性を有するポリペプチド。

【０００８】（４） 配列番号１３のアミノ酸配列を有
するポリペプチドと６０％以上の相同性を有するポリペ
プチドであり、かつ配列番号１４のアミノ酸配列を有す
るポリペプチドと共存させた場合にアルデヒドオキシダ
ーゼ活性を有するタンパク質のアルデヒドオキシダーゼ
活性を向上させる活性を有するポリペプチド、配列番号
１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドと６０％以上
の相同性を有するポリペプチドであり、かつ配列番号１
３のアミノ酸配列を有するポリペプチドと共存させた場
合にアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク質の
アルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる活性を有する
ポリペプチド。

【０００９】（５） アルデヒドオキシダーゼ活性を有
するタンパク質と、上記（１）〜（４）いずれか１つの
ポリペプチドとを共存させることを特徴とする、アルデ
ヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク質のアルデヒド
オキシダーゼ活性を向上させる方法。 （６） 上記（１）〜（４）いずれか１つのポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ。

【００１０】（７） 配列番号１５の塩基番号１〜５４
６、または塩基番号５４６〜１５３２に示される塩基配
列からなるＤＮＡ。 （８） 上記（６）または（７）のＤＮＡとストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであり、か
つアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク質のア
ルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる活性を有するポ
リペプチドをコードするＤＮＡ。

【００１１】（９） ＤＮＡがMethylobacillus属に属
する微生物由来のＤＮＡである、上記（６）〜（８）い
ずれか１つのＤＮＡ。 （１０） アルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパ
ク質であって、上記（１）〜（４）いずれかのポリペプ
チドの存在下で該活性の向上するタンパク質。

【００１２】（１１） タンパク質が、配列番号１のア
ミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号２のアミノ
酸配列を有するポリペプチドおよび配列番号３のアミノ
酸配列を有するポリペプチドからなるタンパク質、配列
番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号
６のアミノ酸配列を有するポリペプチドおよび配列番号
７のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなるタンパ
ク質、および配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペ
プチド、配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドおよび配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペ
プチドからなるタンパク質からなる群より選ばれるタン
パク質である、上記（１０）のタンパク質。

【００１３】（１２） タンパク質が、上記（１１）の
ポリペプチドの有するアミノ酸配列において１以上のア
ミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を
有し、かつ上記（１）〜（４）いずれか１つのポリペプ
チドによりアルデヒドオキシダーゼ活性が向上されるタ
ンパク質である、アルデヒドオキシダーゼ活性を有する
タンパク質。

【００１４】（１３） タンパク質が、上記（１１）の
ポリペプチドの有するアミノ酸配列と６０％以上の相同
性を有し、かつ上記（１）〜（４）いずれか１つのポリ
ペプチドによりアルデヒドオキシダーゼ活性が向上され
ることを特徴とする、アルデヒドオキシダーゼ活性を有
するタンパク質。 （１４） 上記（１０）〜（１３）いずれか１つのタン
パク質をコードするＤＮＡ。

【００１５】（１５） ＤＮＡが、配列番号４または８
の塩基配列を有するＤＮＡである、上記（１４）のＤＮ
Ａ。 （１６） 上記（１４）または（１５）のＤＮＡとスト
リンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであ
り、かつアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク
質をコードするＤＮＡ。

【００１６】ただし、本発明のＤＮＡは、ＡＬＯＤをコ
ードする公知のＤＮＡを含まない。

【００１７】（１７） ＤＮＡが、Methylobacillus
属、Pseudomonas属およびEscherichia属から選ばれる属
に属する微生物由来のＤＮＡである、上記（１４）〜
（１６）いずれか１つのＤＮＡ。 （１８） 上記（１４）〜（１７）いずれか１つのＤＮ
Ａをベクターに組み込んで得られる組換え体ＤＮＡ。 （１９） 組換え体ＤＮＡが、上記（６）〜（９）いず
れか１つのＤＮＡを有する組換え体ＤＮＡである、上記
（１８）の組換え体ＤＮＡ。 （２０） 上記（１８）または（１９）の組換え体ＤＮ
Ａを宿主細胞に導入して得られる形質転換体。

【００１８】（２１） 形質転換体が、エシェリヒア
属、セラチア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、
コリネバクテリウム属、ミクロバクテリウム属、シュー
ドモナス属からなる群より選ばれる属に属する微生物で
ある、上記（２０）の形質転換体。 （２２） 形質転換体が、Escherichia coli JM109/pSA
LODM+M45(FERM BP-7021)、Escherichia coli JM109/pSA
LODP+M45(FERM BP-7022)、またはEscherichia coli JM1
09/pSALODE+M45(FERM BP-7020)からなる群より選ばれる
形質転換体である、上記（２０）または（２１）の形質
転換体。 （２３） 上記（２０）〜（２２）いずれか１つの形質
転換体を培地に培養し、培養物中にアルデヒドオキシダ
ーゼ活性を有するタンパク質を生成蓄積させ、該培養物
からアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク質を
採取することを特徴とするアルデヒドオキシダーゼ活性
を有するタンパク質の製造法。

【００１９】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチドは、ＡＬＯ
Ｄ活性を有するタンパク質と共存させることにより、該
タンパク質のＡＬＯＤ活性を向上させる活性を有するポ
リペプチドである。具体的な例としては、配列番号１３
または１４のアミノ酸配列を有するポリペプチドをあげ
ることができる。配列番号１３または配列番号１４のア
ミノ酸配列を有するポリペプチドはそれぞれ単独で用い
ることもできるが、両者が共存することが好ましい。

【００２０】配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドおよび配列番号１４のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドにおいて、一方のポリペプチドが該ポリペプ
チドのアミノ酸配列中の、１以上のアミノ酸が欠失、置
換若しくは付加されたポリペプチドであっても、もう一
方のポリペプチドおよびＡＬＯＤ活性を有するタンパク
質と共存させたときに、該タンパク質のＡＬＯＤ活性を
向上させることができれば、該ポリペプチドは本発明の
ポリペプチドに包含される。

【００２１】ここで、１以上のアミノ酸が欠失、置換若
しくは付加されたアミノ酸配列からなるポリペプチド
は、Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second
Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (198
9)（以下、モレキュラー・クローニング第２版と略
す）、Current Protocols in Molecular Biology, John
Wiley & Sons (1987-1997)（以下、カレント・プロト
コールズ・イン・モレキュラー・バイオロジーと略
す）、Nucleic Acids Research, 10, 6487 (1982)、Pro
c.Na tl. Acad. Sci. USA, 79, 6409(1982)、Gene, 34,
315 (1985)、Nucleic Acids Research, 13, 4431 (198
5)、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488 (1985)等に
記載の部位特異的変異導入法を用いて、例えば配列番号
１３または配列番号１４で示されるアミノ酸配列を有す
るポリペプチドをコードするＤＮＡに部位特異的変異を
導入することにより、取得することができる。

【００２２】欠失、置換もしくは付加されるアミノ酸の
数は特に限定されないが、上記の部位特異的変異法等の
周知の方法により欠失、置換もしくは付加できる程度の
数であり、１個から数十個、好ましくは１〜２０個、よ
り好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個で
ある。また、該ポリペプチドがアルデヒドオキシダーゼ
活性を有するタンパク質のアルデヒドオキシダーゼ活性
を向上させる活性を有するためには、配列番号１３また
は１４記載のアミノ酸配列と、ＢＬＡＳＴ〔J. Mol. Bi
ol., 215, 403 (1990)〕やＦＡＳＴＡ〔Methods in Enz
ymology, 183, 63-98 (1990)〕等を用いて計算したとき
に、少なくとも６０％以上、通常は８０％以上、特に９
５％以上の相同性を有していることが好ましい。本発明
のポリペプチドをコードする本発明のＤＮＡ（以下、Ｄ
ＮＡ−１と略す）としては、例えば、配列番号１５の塩
基番号１〜５４６、または塩基番号５４６〜１５３２に
示される塩基配列からなるＤＮＡがあげられる。該ＤＮ
Ａとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤ
ＮＡであり、かつアルデヒドオキシダーゼ活性を有する
タンパク質のアルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる
活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡもＤＮＡ
−１に包含される。

【００２３】ここで、ＤＮＡ−１とストリンジェントな
条件下でハイブリダイズ可能なＤＮＡとは、配列番号１
５で表される塩基配列を有するＤＮＡをプローブとし
て、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・
ハイブリダイゼーション法あるいはサザンブロットハイ
ブリダイゼーション法等を用いることにより得られるＤ
ＮＡを意味し、具体的には、コロニーあるいはプラーク
由来のＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、０．７
〜１．０mol/lの塩化ナトリウム存在下、６５℃でハイ
ブリダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳ
ＳＣ溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０mmol
/l塩化ナトリウム、１５mmol/lクエン酸ナトリウムより
なる）を用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄するこ
とにより同定できるＤＮＡをあげることができる。ハイ
ブリダイゼーションは、モレキュラー・クローニング第
２版、カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー
・バイオロジー、DNA Cloning 1: Core Techniques, A
Practical Approach, SecondEdition, Oxford Universi
ty (1995)等に記載されている方法に準じて行うことが
できる。ハイブリダイズ可能なＤＮＡとして具体的に
は、前述のＢＬＡＳＴやＦＡＳＴＡ等を用いて計算した
ときに、配列番号１５で表される塩基配列と少なくとも
６０％以上の相同性を有するＤＮＡ、好ましくは８０％
以上の相同性を有するＤＮＡ、さらに好ましくは９５％
以上の相同性を有するＤＮＡをあげることができる。

【００２４】本発明におけるＡＬＯＤ活性を有するタン
パク質は、上記本発明のポリペプチドと共存させること
によりＡＬＯＤ活性が向上するタンパク質である（以
下、本発明のＡＬＯＤタンパク質と略す）。具体的に
は、配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチド、
配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドおよび
配列番号３のアミノ酸配列を有するポリペプチドからな
るタンパク質、配列番号５のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチド、配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドおよび配列番号７のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドからなるタンパク質、および配列番号９のアミノ酸
配列を有するポリペプチド、配列番号１０のアミノ酸配
列を有するポリペプチドおよび配列番号１１のアミノ酸
配列を有するポリペプチドからなるタンパク質からなる
群より選ばれるタンパク質をあげることができる。

【００２５】該タンパク質としては、本発明のポリペプ
チドによりＡＬＯＤ活性が向上されるタンパク質であれ
ば、該タンパク質のアミノ酸配列において１以上のアミ
ノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有
するタンパク質も本発明のＡＬＯＤタンパク質に含まれ
る。該１以上のアミノ酸が欠失、置換または付加された
アミノ酸配列を有するタンパク質は、上記本発明のポリ
ペプチドにおいて記載したＤＮＡに部位特異的変異を導
入する方法に準じて取得することができる。

【００２６】欠失、置換もしくは付加されるアミノ酸の
数は特に限定されないが、上記の部位特異的変異法等の
周知の方法により欠失、置換もしくは付加できる程度の
数であり、１個から数十個、好ましくは１〜２０個、よ
り好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個で
ある。また、本発明のポリペプチドがアルデヒドオキシ
ダーゼ活性を有するためには、本発明におけるＡＬＯＤ
活性を有するタンパク質が有するアミノ酸配列と、前述
のＢＬＡＳＴやＦＡＳＴＡ等を用いて計算したときに、
少なくとも６０％以上、通常は８０％以上、特に９５％
以上の相同性を有していることが好ましい。

【００２７】上記本発明のＡＬＯＤタンパク質をコード
するＤＮＡも本発明のＤＮＡに包含される（以下、ＤＮ
Ａ−２と略す）。ＤＮＡ−２としては、例えば、配列番
号４または８の塩基配列を有するＤＮＡをあげることが
できる。また、ＤＮＡ−２とストリンジェントな条件下
でハイブリダイズするＤＮＡであり、かつアルデヒドオ
キシダーゼ活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ
も、ＤＮＡ−２に包含される。

【００２８】ここで、ストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズ可能なＤＮＡとは、配列番号４または８で表
される塩基配列を有するＤＮＡをプローブとして、コロ
ニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリ
ダイゼーション法あるいはサザンブロットハイブリダイ
ゼーション法等を用いることにより得られるＤＮＡを意
味する。該ＤＮＡは、上記ＤＮＡ−１において記載した
方法に準じて取得することができる。

【００２９】該ポリペプチドとＡＬＯＤ活性を有するタ
ンパク質とを共存させることにより、本発明のＡＬＯＤ
タンパク質のＡＬＯＤ活性を向上させることができる。
該ポリペプチドと該タンパク質を共存させる方法として
は、該タンパク質がＡＬＯＤ活性を示すことのできる状
態で共存することができればいかなる状態で共存させて
もよい。例えば該ポリペプチドを含有する溶液と該タン
パク質を含有する溶液を混合する方法があげられる。

【００３０】該溶液としては、下記の方法に従って該ポ
リペプチドまたは該タンパク質を発現させた形質転換体
の培養液または該培養液の処理物でもよいし、該培養液
より下記の方法に従って精製された該ポリペプチドまた
は該タンパク質を含有する溶液でもよい。溶液として
は、水溶液、リン酸緩衝液、HEPES(N-2ヒドロキシエチ
ルピペラジン-N-エタンスルホン酸）緩衝液、トリス[ト
リス(ヒドロキシメチル)アミノメタン]塩酸緩衝液等の
緩衝液があげられる。

【００３１】該ポリペプチドまたは該タンパク質は常法
に従ってペプチド合成により得ることもできるが、下記
の方法によって、該ポリペプチドまたは該タンパク質を
コードする遺伝子を組み込んだ組換え体ＤＮＡにより形
質転換された形質転換体を培養し、該遺伝子を発現させ
ることによって得ることが好ましい。発現の方法として
は、以下の方法をあげることができる。 （ａ）該タンパク質をコードする遺伝子と該ポリペプチ
ドを、同一の菌体内で発現させる方法発現させる方法 （ｂ）該タンパク質をコードする遺伝子と該ポリペプチ
ドを、異なる菌体内で発現させる方法

【００３２】上記（ａ）において、同一の菌体内で該タ
ンパク質をコードする遺伝子と該ポリペプチドを同時に
発現させる方法としては、ＤＮＡ−１とＤＮＡ−２を発
現ベクターに組み込み、該遺伝子の組み込まれた組換え
体ベクターを用いてモレキュラー・クローニング第２版
やカレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バ
イオロジー等に記載された方法により、微生物を形質転
換し該形質転換体を培養する方法があげられる。ＤＮＡ
−１とＤＮＡ−２は、同一の発現ベクター内に組み込ま
れてもよいし、異なる発現ベクター内に組み込まれても
よい。

【００３３】上記（ｂ）において、ＤＮＡ−１とＤＮＡ
−２をそれぞれ異なる菌体で発現させるには、該ＤＮＡ
は同一の発現ベクター内に組み込まれていてもよいが、
該ＤＮＡは異なる発現ベクターに組み込まれることが望
ましい。該菌体は同一の培地で培養してもよいし、別々
に培養して、培養後に培養液を混合してもよい。また、
本発明のＡＬＯＤタンパク質を含有する溶液に本発明の
ポリペプチドを含有する溶液を添加してもよい。ここで
溶液は、培養液の他に上記で示したように、水溶液また
は緩衝液でもよい。

【００３４】以下に、本発明をさらに詳細に説明する。
ＤＮＡ−１を取得することのできる微生物としては、本
発明のＡＬＯＤタンパク質の該ＡＬＯＤ活性を向上させ
ることができるポリペプチドを有する微生物であればい
ずれの微生物も用いることができる。該微生物として
は、例えばMethyl obacillus属に属する微生物をあげる
ことができる。該ＤＮＡは該微生物の染色体ＤＮＡから
得ることができる。具体的には、メチロバチルス・エス
ピー(Methylobacillus sp.) C38株から得られる染色体
ＤＮＡより取得することができる。該生物の染色体ＤＮ
ＡからのＤＮＡ−１の単離は、常法、たとえばカレント
・トピックス・イン・マイクロバイオロジー・アンド・
イムノロジー(Current Topics in Microbiology and Im
munology)、96、69-95 (1982)に記載の方法に従って行
うことができる。

【００３５】ＤＮＡ−２は、本発明のポリペプチドによ
り活性の向上するＡＬＯＤを有している微生物であれば
いずれの微生物からも得ることができる。該微生物とし
ては、例えば、Methylobacillus属、Pseudomonas属、Es
cherichia属に属し、ＡＬＯＤ産生能を有する微生物が
あげられる。該ＤＮＡは該微生物の染色体ＤＮＡから得
ることができる。具体的には、メチロバチルス・エスピ
ー(Methylobacillus sp.) C38株、シュードモナス・エ
スピー(Pseudomonas sp.) FERM P-6467、エシェリヒア
・コリ(Escherichia coli) K-12株から得られる染色体
ＤＮＡをあげることができる。これらＡＬＯＤ産生能を
有する微生物の染色体ＤＮＡからのＤＮＡ−２の単離
は、常法、たとえばカレント・トピックス・イン・マイ
クロバイオロジー・アンド・イムノロジー、96、69-95
(1982)に記載の方法に従って行うことができる。

【００３６】得られたＤＮＡ−１またはＤＮＡ−２（以
下、単に本発明のＤＮＡと略すこともある）を、モレキ
ュラー・クローニング第２版、カレント・プロトコール
ズ・イン・モレキュラー・バイオロジー等に記載された
方法により宿主細胞中で発現させて、本発明のポリペプ
チドあるいは本発明のＡＬＯＤタンパク質を製造するこ
とができる。該方法の例を以下に示す。本発明のポリペ
プチド、あるいは本発明のＡＬＯＤタンパク質をコード
するＤＮＡより、必要に応じて該ポリペプチドをコード
する部分を含む適当な長さのＤＮＡ断片を調製する。

【００３７】また、必要に応じて、本発明のＡＬＯＤタ
ンパク質、または本発明のポリペプチド（以下、両者を
あわせて本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチドと略す）を
コードする部分の塩基配列を、宿主細胞の発現に最適な
コドンとなるように塩基を置換したＤＮＡを調製する。
該ＤＮＡは本発明のポリペプチドの効率的製造に有用で
ある。該ＤＮＡ断片、または全長ＤＮＡを適当な発現ベ
クターのプロモーターの下流に挿入することにより、組
換えベクターを作製する。

【００３８】該組換えベクターを、該組換えベクターに
適合した宿主細胞に導入する。宿主細胞としては、細
菌、酵母、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞等、目的とす
る遺伝子を発現できるものであればいずれも用いること
ができる。発現ベクターとしては、上記宿主細胞におい
て自立複製可能ないしは染色体中への組込が可能で、Ｄ
ＮＡ−１またはＤＮＡ−２を転写できる位置にプロモー
ターを含有しているものが用いられる。

【００３９】細菌等の原核生物を宿主細胞として用いる
場合は、ＤＮＡ−１またはＤＮＡ−２を含有してなる組
換えベクターは、原核生物中で自立複製可能であると同
時に、プロモーター、リボソーム結合配列、ＤＮＡ−１
またはＤＮＡ−２、転写終結配列、より構成されたベク
ターであることが好ましい。プロモーターを制御する遺
伝子が含まれていてもよい。

【００４０】発現ベクターとしては、例えば、pBTrp2、
pBTac1、pBTac2（いずれもベーリンガーマンハイム社よ
り市販）、pKK233-2（Pharmacia社製）、pSE280 (Invit
rogen社製）、pGEMEX-1（Promega社製）、pQE-8（QIAGE
N社製）、pKYP10（特開昭58-110600）、pKYP200〔Agri
c. Biol. Chem., 48, 669 (1984)〕、pLSA1〔Agric. Bi
ol. Chem., 53, 277 (1989)〕、pGEL1〔Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 82, 4306 (1985)〕、pBluescript II SK
(-)（Stratagene社製）、pTrs30〔Escherichiacoli JM1
09/pTrS30 （FERM BP-5407）より調製〕、pTrs32〔Esch
erichia coli JM109/pTrS32（FERM BP-5408）より調
製〕、pGHA2〔Escherichia coli IGHA2（FERM B-400）
より調製、特開昭60-221091〕、pGKA2〔Escherichia co
li IGKA2（FERM BP-6798）より調製、特開昭60-22109
1〕、pTerm2（US4686191、US4939094、US5160735）、pS
upex、pUB110、pTP5、pC194、pEG400〔J. Bacte riol.,
172, 2392 (1990)〕、pGEX（Pharmacia社製）、pETシ
ステム（Novagen社製）等をあげることができる。

【００４１】宿主としてEscherichia coliを用いる場
合は、pUC18、pBluescriptII、pSupexなどが好適に用い
られる。プロモーターとしては、宿主細胞中で機能する
ものであればいかなるものでもよい。例えば、trpプロ
モーター（P_trp）、lacプロモーター、P_Lプロモータ
ー、P_Rプロモーター、T7プロモーター等の、大腸菌やフ
ァージ等に由来するプロモーターをあげることができ
る。また_Ptrpを２つ直列させたプロモーター（P_trp×
２）、tacプロモーター、lacT7プロモーター、let Iプ
ロモーターのように人為的に設計改変されたプロモータ
ー等も用いることができる。

【００４２】リボソーム結合配列であるシャイン−ダル
ガノ（Shine-Dalgarno）配列と開始コドンとの間を適当
な距離（例えば６〜18塩基）に調節したプラスミドを用
いることが好ましい。本発明の組換えベクターにおい
て、ＤＮＡ−１またはＤＮＡ−２の発現には転写終結配
列は必ずしも必要ではないが、構造遺伝子の直下に転写
終結配列を配置することが好ましい。

【００４３】ＤＮＡ−１またはＤＮＡ−２を組み込んだ
組換えベクターの宿主細胞としては、エシェリヒア属、
セラチア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリ
ネバクテリウム属、ミクロバクテリウム属、シュードモ
ナス属等に属する微生物、例えば、Escherichia coli X
L1-Blue、Escherichia coli XL2-Blue、Escherichiacol
i DH1、Escherichia coli MC100 0、Escherichia coli
KY3276、Escherichiacoli W1485、Escherichia coli JM
109、Escherichia coli HB101、Escherichiacoli No.4
9、Escherichia coli W3110、Escherichia coli NY49、
Escherichia coli GI698、Escherichia coli TB1、Serra
tia ficaria、Serratia fonticola、Serratia liquefac
iens、Serratia marcescens、Bacillus subtilis、Baci
llus amyloliquefacines、Brevibacterium ammoniagene
s、Brevibacterium immariophilum ATCC14068、Breviba
cterium saccharolyticum ATCC14066、Brevibacteriumf
lavum ATCC14067、Brevibacterium lactofermentum ATC
C1386 9、Corynebacterium glutamicum ATCC13032、Cor
ynebacterium glutamicum ATCC13869、Corynebacterium
acetoacidophilum ATCC13870、Microbacterium ammoni
aphilum ATCC15354、Pseudomonas putida 、Pseudomona
s sp. D-0110等をあげることができる。

【００４４】組換えベクターの導入方法としては、上記
宿主細胞へＤＮＡを導入する方法であればいずれも用い
ることができる。例えば、カルシウムイオンを用いる方
法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 2110 (197
2)〕、プロトプラスト法（特開昭63-248394）、またはG
ene, 17, 107 (1982)やMolecular & General Genetics,
168, 111 (1979)に記載の方法等をあげることができ
る。

【００４５】酵母を宿主細胞として用いる場合には、発
現ベクターとして、例えば、YEP13（ATCC37115）、YEp2
4（ATCC37051）、YCp50（ATCC37419）、pHS19、pHS15等
をあげることができる。プロモーターとしては、酵母菌
株中で発現できるものであればいずれのものを用いても
よく、例えば、ヘキソースキナーゼ等の解糖系の遺伝子
のプロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモ
ーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター、ga
l 1プロモーター、gal 10プロモーター、ヒートショッ
クポリペプチドプロモーター、MFα1 プロモーター、CU
P 1プロモーター等をあげることができる。

【００４６】宿主細胞としては、Saccharomyces属、Sch
izosaccharomyces属、Kluyveromyces属、Trichosporon
属、Schwanniomyces属、Pichia属、Candida属等に属す
る微生物、例えば、Saccharomyces cerevisiae、Schizo
saccharomyces pombe、Kluyveromyces lactis、Trichos
poron pullulans、Schwanniomyces alluvius、Candida u
tilis等をあげることができる。

【００４７】組換えベクターの導入方法としては、酵母
にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いることが
でき、例えば、エレクトロポレーション法〔Methods En
zymol., 194, 182 (1990)〕、スフェロプラスト法〔Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 1929 (1978)〕、酢酸リ
チウム法〔J. Bacteriol., 153, 163 (1983)〕、Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 75, 1929 (1978)記載の方法等
をあげることができる。

【００４８】動物細胞を宿主として用いる場合には、発
現ベクターとして、例えば、pcＤＮＡI、pcDM8（フナコ
シ社製）、pAGE107〔特開平3-22979、Cytotechnology,
3, 133 (1990)〕、pAS3-3（特開平2-227075）、pCDM8
〔Nature, 329, 840 (1987)〕、pcＤＮＡI/Amp（Invitr
ogen社製）、pREP4（Invitrogen社製）、pAGE103〔J.Bi
ochem., 101, 1307 (1987)〕、pAGE210等をあげること
ができる。

【００４９】プロモーターとしては、動物細胞中で機能
するものであればいずれも用いることができ、例えば、
サイトメガロウイルス（CMV）のIE（immediate early）
遺伝子のプロモーター、SV40の初期プロモーター、レト
ロウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモー
ター、ヒートショックプロモーター、ＳＲαプロモータ
ー等をあげることができる。また、ヒトＣＭＶのＩＥ遺
伝子のエンハンサーをプロモーターと共に用いてもよ
い。

【００５０】宿主細胞としては、ヒトの細胞であるナマ
ルバ（Namalwa）細胞、サルの細胞であるCOS細胞、チャ
イニーズ・ハムスターの細胞であるCHO細胞、HBT5637
（特開昭63-299）等をあげることができる。動物細胞へ
の組換えベクターの導入方法としては、動物細胞にＤＮ
Ａを導入する方法であればいずれも用いることができ、
例えば、エレクトロポレーション法〔Cytotechnology,
3, 133 (1990)〕、リン酸カルシウム法（特開平2-22707
5）、リポフェクション法〔Proc. Natl. Acad. Sci. US
A, 84, 7413 (1987)〕、Virology, 52, 456 (1973)等を
あげることができる。

【００５１】昆虫細胞を宿主として用いる場合には、例
えばカレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・
バイオロジー、Baculovirus Expression Vectors, A La
boratory Manual, W. H. Freeman and Company, New Yo
rk (1992)、Bio/Technology,6, 47 (1988)等に記載され
た方法によって、ポリペプチドを発現することができ
る。

【００５２】即ち、組換え遺伝子導入ベクターおよびバ
キュロウイルスを昆虫細胞に共導入して昆虫細胞培養上
清中に組換えウイルスを得た後、さらに組換えウイルス
を昆虫細胞に感染させ、ポリペプチドを発現させること
ができる。該方法において用いられる遺伝子導入ベクタ
ーとしては、例えば、pVL1392、pVL1393、pBlueBacIII
（ともにInvitorogen社製）等をあげることができる。

【００５３】バキュロウイルスとしては、例えば、夜盗
蛾科昆虫に感染するウイルスであるアウトグラファ・カ
リフォルニカ・ヌクレアー・ポリヘドロシス・ウイルス
(Autographa californica nuclear polyhedrosis viru
s)等を用いることができる。昆虫細胞としては、Spodop
tera frugiperdaの卵巣細胞であるSf9、Sf21〔Baculovi
rus Expression Vectors, A Laboratory Manual, W. H.
Freeman and Company, New York (1992)〕、Trichoplu
sia niの卵巣細胞であるHigh 5（Invitrogen社製）等を
用いることができる。

【００５４】組換えウイルスを調製するための、昆虫細
胞への上記組換え遺伝子導入ベクターと上記バキュロウ
イルスの共導入方法としては、例えば、リン酸カルシウ
ム法（特開平2-227075）、リポフェクション法〔Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 84,7413 (1987)〕等をあげるこ
とができる。

【００５５】植物細胞を宿主細胞として用いる場合に
は、発現ベクターとして、例えば、Ｔｉプラスミド、タ
バコモザイクウイルスベクター等をあげることができ
る。プロモーターとしては、植物細胞中で発現できるも
のであればいずれのものを用いてもよく、例えば、カリ
フラワーモザイクウイルス（CaMV）の35Sプロモータ
ー、イネアクチン１プロモーター等をあげることができ
る。

【００５６】宿主細胞としては、タバコ、ジャガイモ、
トマト、ニンジン、ダイズ、アブラナ、アルファルフ
ァ、イネ、コムギ、オオムギ等の植物細胞等をあげるこ
とができる。組換えベクターの導入方法としては、植物
細胞にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いるこ
とができ、例えば、アグロバクテリウム（Agrobacteriu
m）（特開昭59-140885、特開昭60-70080、WO94/0097
7）、エレクトロポレーション法（特開昭60-251887）、
パーティクルガン（遺伝子銃）を用いる方法（特許第26
06856、特許第2517813）等をあげることができる。

【００５７】上記の方法で得られた形質転換体の選択
は、ＤＮＡ−１またはＤＮＡ−２に選択的に結合するプ
ローブを用いたプラークハイブリダイゼーションやコロ
ニーハイブリダイゼーション等を用いることができる。
ここで用いられるプローブとしては、例えば、精製した
ＡＬＯＤポリペプチドの部分的アミノ酸配列情報に基づ
き、ＰＣＲ法によって増幅した部分ＤＮＡ断片をラジオ
アイソトープやジゴキシゲニンで修飾したものを用いる
ことができる。

【００５８】遺伝子の発現方法としては、直接発現以外
に、モレキュラー・クローニング第２版に記載されてい
る方法等に準じて、分泌生産、融合タンパク質発現等を
行うことができる。酵母、動物細胞、昆虫細胞または植
物細胞により発現させた場合には、糖あるいは糖鎖が付
加されたポリペプチドを得ることができる。

【００５９】以上のようにして得られる本発明の形質転
換体を培地に培養し、培養物中に本発明のポリペプチド
を生成蓄積させ、該培養物から採取することにより、本
発明のポリペプチドを製造することができる。本発明の
形質転換体を培地に培養する方法は、宿主の培養に用い
られる通常の方法に従って行うことができる。

【００６０】本発明の形質転換体が大腸菌等の原核生物
あるいは酵母等の真核生物を宿主として得られた形質転
換体である場合、該形質転換体を培養する培地として、
該形質転換体が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等
を含有し、該形質転換体の培養を効率的に行える培地で
あれば天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。

【００６１】炭素源としては、該形質転換体が資化し得
るものであればよく、グルコース、フラクトース、スク
ロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデン
プン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の
有機酸、エタノール、プロパノールなどのアルコール類
等を用いることができる。

【００６２】窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸
アンモニウム等の無機酸もしくは有機酸のアンモニウム
塩、その他の含窒素化合物、ならびに、ペプトン、肉エ
キス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加
水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌
体およびその消化物等を用いることができる。

【００６３】無機塩としては、リン酸第一カリウム、リ
ン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシ
ウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫
酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。培養
は、振盪培養または深部通気攪拌培養などの好気的条件
下で行う。培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間
は、通常１６時間〜７日間である。培養中のｐＨは３．
０〜９．０に保持することが好ましい。ｐＨの調整は、
無機または有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシ
ウム、アンモニアなどを用いて行う。

【００６４】また、培養中必要に応じて、アンピシリン
やテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよ
い。プロモーターとして誘導性のプロモーターを用いた
組換えベクターで形質転換した微生物を培養するときに
は、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよ
い。例えば、lacプロモーターを用いた組換えベクター
で形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピル
−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド等を、trpプロモー
ターを用いた組換えベクターで形質転換した微生物を培
養するときにはインドールアクリル酸等を培地に添加し
てもよい。

【００６５】動物細胞を宿主として得られた形質転換体
を培養する培地としては、一般に使用されているRPMI16
40培地〔The Journal of the American Medical Associ
ation, 199, 519 (1967)〕、EagleのMEM培地〔Science,
122, 501 (1952)〕、ダルベッコ改変MEM培地〔Virolog
y, 8, 396 (1959)〕、１９９培地〔Proceeding of the
Society for the Biological Medicine, 73, 1 (195
0)〕またはこれら培地に牛胎児血清等を添加した培地等
を用いることができる。

【００６６】培養は、通常ｐＨ６〜８、３０〜４０℃、
５％ＣＯ₂存在下等の条件下で１〜７日間行う。また、
培養中必要に応じて、カナマイシン、ペニシリン等の抗
生物質を培地に添加してもよい。

【００６７】昆虫細胞を宿主として得られた形質転換体
を培養する培地としては、一般に使用されているTNM-FH
培地（Pharmingen社製）、Sf-900 II SFM培地（Life Te
chnologies社製）、ExCell400、ExCell405（いずれもJR
H Biosciences社製）、Grace's Insect Medium〔Natur
e, 195, 788 (1962)〕等を用いることができる。

【００６８】培養は、通常ｐＨ６〜７、２５〜３０℃等
の条件下で、１〜５日間行う。また、培養中必要に応じ
て、ゲンタマイシン等の抗生物質を培地に添加してもよ
い。植物細胞を宿主として得られた形質転換体は、細胞
として、または植物の細胞や器官に分化させて培養する
ことができる。該形質転換体を培養する培地としては、
一般に使用されているムラシゲ・アンド・スクーグ(MS)
培地、ホワイト(White)培地、またはこれら培地にオー
キシン、サイトカイニン等、植物ホルモンを添加した培
地等を用いることができる。

【００６９】培養は、通常ｐＨ５〜９、２０〜４０℃の
条件下で３〜６０日間行う。また、培養中必要に応じ
て、カナマイシン、ハイグロマイシン等の抗生物質を培
地に添加してもよい。上記のとおり、ＤＮＡ−１または
ＤＮＡ−２を組み込んだ組換え体ベクターを保有する微
生物、動物細胞、あるいは植物細胞由来の形質転換体
を、通常の培養方法に従って培養し、該ポリペプチドを
生成蓄積させ、該培養物より該ポリペプチドを採取する
ことにより、該ポリペプチドを製造することができる。

【００７０】遺伝子の発現方法としては、直接発現以外
に、モレキュラー・クローニング第２版に記載されてい
る方法等に準じて、分泌生産、融合ポリペプチド発現等
を行うことができる。ＤＮＡ−１またはＤＮＡ−２を組
み込んだ宿主細胞を用いて本発明のＡＬＯＤ関連ポリペ
プチドを生産する方法としては、該ポリペプチドを宿主
細胞内に生産させる方法、宿主細胞外に分泌させる方
法、あるいは宿主細胞外膜上に生産させる方法があり、
使用する宿主細胞や、生産させる本発明のＡＬＯＤ関連
ポリペプチドの構造を変えることにより、該方法を選択
することができる。

【００７１】本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチドが宿主
細胞内あるいは宿主細胞外膜上に生産される場合、ポー
ルソンらの方法〔J. Biol. Chem.，264, 17619 (198
9)〕、ロウらの方法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 8
6, 8227 (1989)、Genes Develop., 4, 1288（1990)〕、
または特開平5-336963、WO94/23021等に記載の方法を準
用することにより、本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチド
を宿主細胞外に積極的に分泌させることができる。

【００７２】すなわち、遺伝子組換えの手法を用いて、
本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチドの活性部位を含むポ
リペプチドの手前にシグナルペプチドを付加した形で発
現させることにより、本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチ
ドを宿主細胞外に積極的に分泌させることができる。ま
た、特開平2-227075に記載されている方法に準じて、ジ
ヒドロ葉酸還元酵素遺伝子等を用いた遺伝子増幅系を利
用して生産量を上昇させることもできる。

【００７３】さらに、遺伝子導入した動物または植物の
細胞を再分化させることにより、遺伝子が導入された動
物個体（トランスジェニック非ヒト動物）または植物個
体（トランスジェニック植物）を造成し、これらの個体
を用いて本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチドを製造する
こともできる。

【００７４】形質転換体が動物個体または植物個体の場
合は、通常の方法に従って、飼育または栽培し、該ポリ
ペプチドを生成蓄積させ、該動物個体または植物個体よ
り該ポリペプチドを採取することにより、該ポリペプチ
ドを製造することができる。動物個体を用いて該ポリペ
プチドを製造する方法としては、例えば公知の方法〔Am
erican Journal of Clinical Nutrition, 63, 639 (199
6)、American Journal of Clinical Nutrition, 63, 62
7S (1996)、Bio/Technology, 9, 830(1991)〕に準じて
遺伝子を導入して造成した動物中に該ポリペプチドを生
産する方法があげられる。

【００７５】動物個体の場合は、例えば、本発明のＡＬ
ＯＤ関連ポリペプチドをコードするＤＮＡを導入したト
ランスジェニック非ヒト動物を飼育し、該ポリペプチド
を該動物中に生成・蓄積させ、該動物中より該ポリペプ
チドを採取することにより、該ポリペプチドを製造する
ことができる。該動物中の生成・蓄積場所としては、例
えば、該動物のミルク（特開昭63-309192）、卵等をあ
げることができる。この際に用いられるプロモーターと
しては、動物で発現できるものであればいずれも用いる
ことができるが、例えば、乳腺細胞特異的なプロモータ
ーであるαカゼインプロモーター、βカゼインプロモー
ター、βラクトグロブリンプロモーター、ホエー酸性プ
ロテインプロモーター等が好適に用いられる。

【００７６】植物個体を用いて本発明のＡＬＯＤ関連ポ
リペプチドを製造する方法としては、例えば本発明のＡ
ＬＯＤ関連ポリペプチドをコードするＤＮＡを導入した
トランスジェニック植物を公知の方法〔組織培養, 20
(1994)、組織培養, 21 (1995)、Trends in Biotechnolo
gy, 15, 45 (1997)〕に準じて栽培し、該ポリペプチド
を該植物中に生成・蓄積させ、該植物中より該ポリペプ
チドを採取することにより、該ポリペプチドを生産する
方法があげられる。

【００７７】本発明の形質転換体により製造された本発
明のＡＬＯＤ関連ポリペプチドを単離精製するために
は、通常の酵素の単離精製法を用いることができる。
例えば該ポリペプチドが、細胞内に溶解状態で発現した
場合には、培養終了後、細胞を遠心分離により回収し、
水系緩衝液にけん濁後、超音波破砕機、フレンチプレ
ス、マントンガウリンホモゲナイザー、ダイノミル等に
より細胞を破砕し、無細胞抽出液を得る。該無細胞抽出
液を遠心分離することにより得られる上清から、通常の
酵素の単離精製法、即ち、溶媒抽出法、硫安等による塩
析法、脱塩法、有機溶媒による沈殿法、ジエチルアミノ
エチル（DEAE）−セファロース、DIAION HPA-75（三菱
化成社製）等のレジンを用いた陰イオン交換クロマトグ
ラフィー法、S-Sepharose FF（Pharmacia社製）等のレ
ジンを用いた陽イオン交換クロマトグラフィー法、ブチ
ルセファロース、フェニルセファロース等のレジンを用
いた疎水性クロマトグラフィー法、分子篩を用いたゲル
ろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロマ
トフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等
の手法を単独あるいは組み合わせて用い、精製標品を得
ることができる。

【００７８】上記クロマトグラフィーとしては、フェニ
ル-トヨパール（東ソー）、DEAE-トヨパール（東ソ
ー）、セファデックスG-150（ファルマシアバイオテ
ク）を用いたカラムクロマトグラフィーが好ましく用い
られる。また、該ポリペプチドが細胞内に不溶体を形成
して発現した場合は、同様に細胞を回収後、破砕し、遠
心分離を行うことにより、沈殿画分としてポリペプチド
の不溶体を回収する。回収したポリペプチドの不溶体を
蛋白質変性剤で可溶化する。該可溶化液を希釈または透
析し、該可溶化液中の蛋白質変性剤の濃度を下げること
により、該ポリペプチドを正常な立体構造に戻す。該操
作の後、上記と同様の単離精製法により該ポリペプチド
の精製標品を得ることができる。

【００７９】本発明のＡＬＯＤ関連ポリペプチド、ある
いは該ポリペプチドに糖鎖の付加されたポリペプチド等
の誘導体が細胞外に分泌された場合には、培養上清に該
ポリペプチドあるいは該ポリペプチドの誘導体を回収す
ることができる。即ち、該培養物を上記と同様の遠心分
離等の手法により処理することにより培養上清を取得
し、該培養上清から、上記と同様の単離精製法を用いる
ことにより、精製標品を得ることができる。以下、実施
例により本発明を更に具体的に説明する。なお、本発明
はこれらの実施例により限定されるものではない。

【００８０】

【実施例】実施例中、アルデヒドオキシダーゼ（ＡＬＯ
Ｄ）活性の測定は、以下の第１表に示す試薬および測定
条件で行った。

【００８１】

【表１】

【００８２】「測定条件」上記試薬混液３ｍｌを３７℃
で約３分間予備加温後、０．１ｍｌの酵素溶液を加え、
３７℃で反応を開始し、１０分間反応させた後、５００
ｎｍにおける吸光度の増加を分光光度計を用いて測定す
る。盲検は、酵素溶液の代わりに蒸留水を試薬混液に加
えて、以下、同様に吸光度変化を測定する。上記の条件
で１分間に１μｍｏｌの過酸化水素を生成する酵素量を
１単位(U)とする。以下、実施例中で、ＨｉｎｄIII、Ｋ
ｐｎI、ＳａｃI、ＢａｍＨI、ＸｂａIはそれぞれ制限酵
素名である。

【００８３】（実施例１）Methylobacillus sp.のＡＬ
ＯＤ遺伝子のクローニングと発現 (1) 酵素精製およびアミノ酸配列決定 メチロバチルス・エスピー(Methylobacillus sp.) C38
株の菌体を超音波破砕法で破砕し、遠心分離した。遠心
分離後、上清として粗酵素液を得た。得られた粗酵素液
を公知の方法（特公平02-15191）に従って精製し、ＡＬ
ＯＤ酵素液を得た。該酵素液をＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動で調べたところ、均一な３つのバンド
（８８ｋＤａ、３９ｋＤａ、１８ｋＤａ）が認められ
た。このことより、Methylobacillus sp. C38株のＡＬ
ＯＤはヘテロトライマー構造をとっていることが明らか
となった。

【００８４】得られた３つのバンドのＮ末端アミノ酸配
列を常法により決定した。その結果を、次に示す。 １８ｋＤａポリペプチド：SERISLTMQVNGQPYPMEIDP(R)VT
L （配列番号１６） ３９ｋＤａポリペプチド：MNPFHWKVAQSASEAAALKQQ
（配列番号１７） ８８ｋＤａポリペプチド：検出されず。

【００８５】精製されたＡＬＯＤの酵素学的性質を調べ
た。基質特異性、作用至適ｐＨ、安定ｐＨ、作用至適温
度、安定温度、Ｋｍ値を第２表に示した。なお、以下の
実施例で述べる、Pseudomonas sp.、Escherichia coli
由来の酵素についても第２表中に同時に示した。

【００８６】

【表２】

【００８７】(2) 染色体ＤＮＡの分離 メチロバチルス・エスピー（Methylobacillus sp.） C3
8株を１００ｍｌの２Ｘ ＹＴ培地［１．６％ポリペプ
トン、１％酵母エキス、０．５％塩化ナトリウム（ｐＨ
７．２）］に植菌し、３０℃で、一晩振とう培養した。
培養後、培養液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１５
分間）し、菌体を分離した。得られた菌体をカレント・
トピックス・イン・マイクロバイオロジー・アンド・イ
ムノロジー[Current Topics in Microbiology and Immu
nology、96、69-95 (1982)]に記載されている方法で処
理し、約１０ｍｇの染色体ＤＮＡを得た。

【００８８】(3) 染色体ＤＮＡライブラリーの作製 前項(2)で得られた染色体ＤＮＡ １０ｍｇをＨｉｎｄII
I（宝酒造社製）で切断し、約１０ｋｂｐの大きさの断
片を分離した。該ＤＮＡ断片に、ＨｉｎｄIII（宝酒造
社製）で切断したｐＵＣ１８ １ｍｇとＴ４ ＤＮＡリガ
ーゼ（宝酒造社製）1単位を添加混合し、１６℃、１２
時間反応させた。反応により得られた組換え体ＤＮＡを
用いて、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli)JM109
を形質転換し、アンピシリン（２０ｍｇ／ｍｌ）を含む
ＬＢ寒天平板培地[１．０％バクトトリプトン（ディフ
コ社製）、０．５％酵母エキス（ディフコ社製）、１．
０％塩化ナトリウム、２．０％寒天粉末]に塗布した。
これを３７℃で１６時間培養し、形質転換体約１，００
０クローンを得た。

【００８９】(4) ポリメラーゼチェインリアクションに
よるプローブの作製 ポリメラーゼチェインリアクション(ＰＣＲ)による増幅
のために、前項(1)で得られたＡＬＯＤの１８ｋＤａポ
リペプチドのＮ末端部分アミノ酸配列を基にして、ATGC
ARGTNAAYGGNCARCCの配列からなるセンスプライマー＃１
（配列番号２０）を合成し、３９ｋＤａポリペプチドの
Ｎ末端部分アミノ酸配列を基にして、ACYTTCCARTGRAANG
GRTTCATの配列からなるアンチセンスプライマー＃２
（配列番号２１）を合成した。

【００９０】前項(2)で得られた染色体ＤＮＡ １００ｎ
ｇ、各プライマー ２００ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ混合物１
０μｌ、反応緩衝液１０μｌ、Ｐｆｕ ＤＮＡポリメラ
ーゼ（STRATAGENE社製）２．５Ｕを混合し、１００μｌ
とした。該混合溶液をＰＣＲに用いた。ＰＣＲは９５℃
−１分間、５０℃−１分間、および７２℃−２分間の反
応を３０サイクル繰り返す条件下で行った。その結果、
約５００ｂｐのＤＮＡフラグメントが増幅された。この
ＰＣＲ産物の塩基配列を調べたところ、１８ｋＤａポリ
ペプチドのＮ末端の残りの配列が確認されたので、目的
のＡＬＯＤ遺伝子の一部が増幅されたことが明らかとな
った。該増幅断片を、ＰＣＲ ＤＩＧプローブ合成キッ
ト（ロシュ・ダイアグノスティック社製）を用いてジゴ
キシゲニン化し、プローブを作製した。

【００９１】(5) ＡＬＯＤをコードする遺伝子を含有す
る形質転換体の選択 前項(3)の方法で得られた形質転換体をレプリカ法によ
ってナイロン・フィルター（Hybond-N、アマルシャム社
製）に転写した。モレキュラー・クローニング第２版に
記載された方法に従って、溶菌、ＤＮＡの変性および固
定操作を行った。前項(4)で得られたジゴキシゲニンで
標識したプローブを用いてコロニー・ハイブリダイゼー
ションを行った（脱アイソトープ実験プロトコール、
DIGハイブリダイゼーション、秀潤社）。その結果、約
１２ｋｂｐの挿入ＤＮＡ断片を有するポジティブクロー
ン、ｐＵＡＬＯＤＭを見出すことができた。

【００９２】挿入ＤＮＡ断片を種々の制限酵素にて切断
し、サブクローンＤＮＡを調製した。それぞれのサブク
ローンＤＮＡの塩基配列を、常法に従い調べた。該塩基
配列を配列番号４に示した。該塩基配列には配列番号１
〜３に示される３つのオープンリーディングフレームが
存在していた。塩基配列から、ＡＬＯＤの３つのポリペ
プチドはＮ末端から１８ｋＤａ、３９ｋＤａ、８８ｋＤ
ａの順にフレームを一つづつずらして連続して並んでい
ることが判明した。また８８ｋＤａのポリペプチドの１
２８ｂｐ下流に、さらに２０ｋＤａと３６ｋＤａの２つ
のポリペプチドが同様に連続してコードされていた。該
ポリペプチドのアミノ酸配列をそれぞれ、配列番号１３
と１４に示した。該ポリペプチドをコードするＤＮＡの
塩基配列を配列番号１５に示した。

【００９３】(6) ＡＬＯＤ生産用組換えベクターの作製 発現ベクターｐＳｕｐｅｘを、ＨｉｎｄIIIとＢａｍＨI
で切断し、調製した。

【００９４】まずＮ末端上流にＨｉｎｄIIIサイトを導
入するために、上記クローニングで得られたｐＵＡＬＯ
ＤＭを鋳型とし、ＨｉｎｄIIIの認識配列を含むセンス
プライマー＃３ GGGAAAGCTTAAATGTCAGAAAGAATTTCGC
（配列番号２２）とＮ末端から約６００ｂｐのところに
あるＫｐｎIサイトの認識配列を含むアンチセンスプラ
イマー＃４ TGAGTGGTACCGCCCGCCAGAATCTG（配列番号２
３）を用いてＰＣＲ反応を行った。反応は、９５℃−１
分間、５０℃−１分間、７２℃−２分間のサイクルを３
０回繰り返す条件下で行った。得られたＤＮＡフラグメ
ントをＨｉｎｄIIIとＫｐｎIで処理し、約６００ｂｐの
断片をアガロースゲルより抽出し、精製した。また、酵
素のＡＬＯＤの構造遺伝子の下流に存在する遺伝子によ
ってコードされる上記２つのポリペプチド部分を得るた
めに、pUALODMをＫｐｎIとＢａｍＨIで処理して得られた
約５ｋｂｐの断片も同様にアガロースゲルより抽出し、
精製した。以上の操作により得られた３つの断片を、Ｄ
ＮＡリガーゼで結合させて、ＡＬＯＤの発現ベクターｐ
ＳＡＬＯＤＭ＋Ｍ４５を構築した。

【００９５】上記操作の概略図を第１図に示した。 (7) 発現ベクターｐＳＡＬＯＤＭ＋Ｍ４５の宿主細胞へ
の導入およびその発現 上記（６）で構築したMethylobacillus由来のＡＬＯＤ
発現ベクターｐＳＡＬＯＤＭ＋Ｍ４５で大腸菌JM109株
を形質転換した。形質転換株の中から１株選択し、Esch
erichia coli JM109/pSALODM+M45と命名した。

【００９６】該菌株をアンピシリン（２０ｍｇ／ｍｌ）
を含む２Ｘ ＹＴ培地で、２８℃で１８時間振とう培養
した。遠心分離で集菌後、菌体を１０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ７．０）に懸濁し、これを超音波破砕したのち、
遠心分離し、その上清を粗酵素液とした。先に述べた方
法で酵素活性を測定した結果、培養液中には、６９３ｍ
ｕ／ｍｌのＡＬＯＤ活性のあることがわかった。

【００９７】Escherichia coli JM109/pSALODM+M45は平
成１２年２月４日付けで工業技術院生命工学工業技術研
究所（茨城県つくば市東１丁目１番３号）にＦＥＲＭ
ＢＰ−７０２１として寄託されている。

【００９８】（実施例２）Pseudomonas sp.のアルデヒ
ドオキシダーゼ遺伝子のクローニングと発現 (1) 酵素精製およびアミノ酸配列決定 シュードモナス・エスピー(Pseudomonas sp.) FERM P-6
467の菌体を超音波破砕法で破砕し、遠心分離した。遠
心分離後、上清として粗酵素液を得た。得られた粗酵素
液を公知の方法（特公平02-15191）に従って精製した。
精製により得られた酵素液をＳＤＳ−ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動に供したところ、均一な３つのバンド
（８８ｋＤａ、３９ｋＤａ、１８ｋＤａ）を確認するこ
とができた。このことより、Pseudomonas sp. FERM BP-
6497のＡＬＯＤもヘテロトライマー構造をとっているこ
とが明らかとなった。

【００９９】得られた３つのバンドのＮ末端アミノ酸配
列を常法により決定した。その結果を、次に示す。 23kDa：検出されず 39kDa：MNXFGYAKPNAVPDAIRQHGPQ （配列番号１８） 88kDa：VSLQKAVPRVDGL （配列番号１９） 精製された酵素の性質を調べた結果を第２表に示した。

【０１００】(2) 染色体ＤＮＡの分離 実施例１の(2)と同じ方法により、(Pseudomonas sp.) F
ERM P-6467より約１０ｍｇの染色体ＤＮＡを得た。 (3) 染色体ＤＮＡライブラリーの作製 実施例１の（３）と同様の方法により形質転換体約５０
０クローンを得た。ただし制限酵素としてＨｉｎｄIII
の代わりにＢａｍＨI（宝酒造社製）を用いた。

【０１０１】(4) ポリメラーゼチェインリアクションに
よるプローブの作製 ＰＣＲによる増幅のために、前項(1)で得られたＡＬＯ
Ｄの３９ｋＤａポリペプチドのＮ末端部分アミノ酸配列
を基にして、TTCGGSTAYGCNAARCCNAAYGCの配列からなる
センスプライマー＃５（配列番号２４）を、そして８８
ｋＤａポリペプチドのＮ末端部分アミノ酸配列を基にし
て、ACSCKSGGSACNGCYTTYTG（配列番号２５）の配列から
なるアンチセンスプライマー＃６を合成した。

【０１０２】実施例１の(4)と同じ方法を用いてＰＣＲ
反応を行った結果、約１，０００ｂｐのＤＮＡフラグメ
ントが増幅された。このＰＣＲ産物の塩基配列を調べた
ところ、３９ｋＤａポリペプチドのＮ末端の残りの配列
が確認されたので、目的のＡＬＯＤ遺伝子の一部が増幅
されたことが明らかになった。そこでその増幅断片をジ
ゴキシゲニン化し、プローブを作製した。

【０１０３】(5) ＡＬＯＤをコードする遺伝子を含有す
る形質転換体の選択 実施例１の(5)と同じ方法を用いてＡＬＯＤをコードす
る遺伝子を含有する形質転換体の選択を行った。その結
果、約１３ｋｂｐの挿入ＤＮＡ断片を有するポジティブ
クローン、ｐＵＡＬＯＤＰを見出すことができた。常法
に従って、挿入ＤＮＡ断片の塩基配列を調べた。該塩基
配列を配列番号８に示した。該塩基配列には配列番号５
〜７に示されるアミノ酸配列を有する３つのオープンリ
ーディングフレームがコードされていた。このことか
ら、Pseudomonas sp. FERM P-6467のＡＬＯＤの３つの
ポリペプチドもＮ末端から２３ｋＤａ、３９ｋＤａ、８
８ｋＤａの順に並んでいることが判明した。しかしなが
ら、その下流には、Methylobacillus sp.の場合に見出
されたような２つのポリペプチドの存在は確認されなか
った。なお、該形質転換体を培養し、ＡＬＯＤ活性を測
定したところ、ＡＬＯＤ活性は全く検出されなかった。

【０１０４】(6) ＡＬＯＤ生産用組換えベクターの作製 発現ベクターｐＳｕｐｅｘをＨｉｎｄIIIとＳａｃIで切
断した。インサートの調製は、Ｎ末端上流にＨｉｎｄII
Iサイトを、C末端下流にＳａｃIサイトを導入するため
に、上記クローニングで得られたpUALODPを鋳型とし
て、センスプライマー＃７ GTGAAAGCTTAAATGAACGGCACC
CCCGCGCGC（配列番号２６）とアンチセンスプライマー
＃８ CCACGAGCTCGTCCTAGTGCACCAACTCGTCGGC（配列番号
２７）を用いてＰＣＲ反応を行った。反応は、９８℃−
３０秒間、４８℃−１５秒間、７４℃−３分間を４０サ
イクル行う条件下で行った。得られたＤＮＡフラグメン
トをＨｉｎｄIIIとＳａｃIで処理し、約４．０ｋｂｐの
断片をアガロースゲルより抽出し、精製した。以上の操
作によって得られた２つの断片を、ＤＮＡリガーゼで結
合し、Pseudomonas属用のＡＬＯＤの発現ベクターｐＳ
ＡＬＯＤＰを構築した。

【０１０５】次に、ＡＬＯＤをコードする遺伝子と上記
実施例１で得られたMethylobacillus sp.由来のＡＬＯ
Ｄの発現に必要なポリペプチドをコードする遺伝子を両
方含む発現ベクターの構築も試みた。発現ベクターｐＳ
ｕｐｅｘを、そのマルチクローニングサイトにあるＨｉ
ｎｄIIIとＢａｍＨIで切断した。ｐＵＡＬＯＤＭを鋳型
とし、ＳａｃI認識配列を含むセンスプライマー＃９ C
AAAGAGCTCTGATTACGGCGGATGCCG（配列番号２８）とＢａ
ｍＨI認識配列を含むアンチセンスプライマー＃１０ A
CGCGGATCCGTCAGCCAGCCGGGAGCGATCG（配列番号２９）を
用いてＰＣＲを行い、活性発現に必要な遺伝子断片を得
た。ＰＣＲは上記と同じ条件下で行った。得られたフラ
グメントをＳａｃIとＢａｍＨIで処理し、約１．５ｋｂ
ｐの断片をアガロースゲルより抽出し、精製した。以上
の操作により得られた２つの断片と上記のPeudomonas s
p.のＡＬＯＤの構造遺伝子の計３つの断片を、ＤＮＡリ
ガーゼで結合させて、Peudomonas属用のＡＬＯＤの発現
ベクターｐＳＡＬＯＤＰ＋Ｍ４５を構築した。

【０１０６】上記操作の概略図を第１図に示した。 (7) 発現ベクターｐＳＡＬＯＤＰおよびｐＳＡＬＯＤＰ
＋Ｍ４５の宿主細胞への導入およびその発現 実施例１の(7)と同様の方法に従い、ｐＳＡＬＯＤＰお
よびｐＳＡＬＯＤＰ＋Ｍ４５のそれぞれのプラスミドを
もつ形質転換体を作製し、培養し、粗酵素を調製した。
その結果、ｐＳＡＬＯＤＰを導入した形質転換体の培養
液中には３ｍｕ／ｍｌのＡＬＯＤ活性のあることがわか
った。一方、pSＡＬＯＤP+M45をもつ形質転換体(Escher
ichia coli JM109 /pSALODP+M45) の培養液中には６７
７ｍｕ／ｍｌのＡＬＯＤ活性のあることがわかった。

【０１０７】Escherichia coli JM109 /pSALODP+M45は
平成１２年２月４日付けで工業技術院生命工学工業技術
研究所（茨城県つくば市東１丁目１番３号）にＦＥＲＭ
ＢＰ−７０２２として寄託されている。 （実施例３）Escherichia coliのＡＬＯＤ遺伝子のクロ
ーニングと発現

【０１０８】(1) ホモロジー検索Escherichia coliではすでに全塩基配列が明らかにされ
ているので、実施例１および２において得られた塩基配
列を指標に、遺伝子配列データーバンクGenBank中に相
同な配列を検索した。その結果、Escherichia coliの配
列中に前期実施例１および２で得られたMethylobacillu
s sp.およびPseudomonas sp.由来のＡＬＯＤと比較的高
い相同性（３６−５７％）を示す配列（YAGT、YAGS、YA
GR）を見出した。該塩基配列の機能は未知と記載されて
いた。該塩基配列を含む塩基配列を配列番号１２に示し
た。該塩基配列中には、配列番号９〜１１に示される３
つのオープンリーディングフレームが存在していた。

【０１０９】(2) ＡＬＯＤをコードする遺伝子の単離 実施例１(2)と同じ方法でEscherichia coliK-12株の染
色体ＤＮＡを調製した。該染色体ＤＮＡを鋳型として、
ＳａｃIの認識配列を含むセンスプライマー＃１１ TAT
GAGCTCTATGAGCAACCAAGGCGAATACCCCGAAGA（配列番号３
０）とＢａｍＨIの認識配列を含むアンチセンスプライ
マー＃１２ GTAGGATCCTGTTCTAGATTAAACCACATCCGGCAGCTT
ATCGAGCAG（配列番号３１）を用いてＰＣＲを行った。
反応は、９８℃−３分間、５５℃−３０秒間、７４℃−
５分間を１サイクル行った後に、９８℃−３０秒間、５
５℃−３０秒間、７４℃−１分間を３９サイクル行う条
件下で行った。得られたＤＮＡフラグメントをＳａｃI
とＢａｍＨIで処理した。制限酵素処理により得られた
約４．０ｋｂｐのＤＮＡ断片をアガロースゲルより抽出
し、精製した。該ＤＮＡ断片をｐＵＣ１８のＳａｃIサ
イトとＢａｍＨIサイトの間に導入し、ｐＵＡＬＯＤＥ
を得た。なお、該プラスミドにより形質転換された形質
転換体のＡＬＯＤ活性を調べたところ、該活性はきわめ
て低かった。

【０１１０】(3) ＡＬＯＤ生産用組換えベクターの作製 ＡＬＯＤ遺伝子を発現ベクターｐＳｕｐｅｘに組み込む
ために、EscherichiacoliのＡＬＯＤ遺伝子の内部にあ
る２ヶ所のＨｉｎｄIIIサイトを部位特異的変異法（Mut
ant- Express Kmキット、宝酒造社製）を用いて破壊し
た。プライマーとしてGGGATGGAAATAAGCTGACCCTCTGGAC
（プライマー＃１３、下線部分が変異箇所：配列番号３
２）とCGCCTGTATGAAGCTGCGCGAAATGATTGCC（プライマー
＃１４、下線部分が変異箇所：配列番号３３）の塩基配
列を有する２つの変異オリゴヌクレオチドを用いた。該
操作の前後でアミノ酸配列の変化は認められなかった。

【０１１１】発現ベクターｐＳｕｐｅｘを、ＨｉｎｄII
IとＸｂａIで切断した。まず、Ｎ末端上流にＨｉｎｄII
Iサイトを導入し、Ｃ末端下流にＸｂａIサイトを導入す
るために、上記変異処理によりＨｉｎｄIIIサイトを欠
失したＡＬＯＤを含むｐＵＡＬＯＤＥ’を鋳型として、
センスプライマー＃１５ GGAGGAAGCTTATGCCCCTGACACTG
AAGGTG（配列番号３４）とアンチセンスプライマー＃１
６ TTGTTCTAGATTAAACCACATCCGGCAGCTTATC（配列番号３
５）を用いてＰＣＲ反応を行った。反応は、前項(3)と
同じ条件下で行った。得られたフラグメントをＨｉｎｄ
IIIとＸｂａIで処理し、約４．０ｋｂｐの断片をアガロ
ースゲルより抽出し、精製した。以上の操作により得ら
れた２つの断片を、ＤＮＡリガーゼで結合して、大腸菌
のＡＬＯＤの発現ベクターｐＳＡＬＯＤＥを構築した。

【０１１２】次に、ＡＬＯＤをコードするＤＮＡと上記
実施例１で得られたMethylobacillus sp.のＡＬＯＤの
発現に必要なポリペプチド遺伝子を両方含む発現ベクタ
ーの構築も試みた。発現ベクターｐＳｕｐｅｘをＨｉｎ
ｄIIIとＢａｍＨIで切断し、調製した。上述のEscheric
hia coliのＡＬＯＤ構造遺伝子(ＨｉｎｄIII−ＸｂａI)
と、実施例２の(6)に記載した方法と同様の方法で調製
したＡＬＯＤ活性発現に必要なMethylobacillus sp.由
来の２つのポリペプチド遺伝子(ＸｂａI−ＢａｍＨI)を
含む３つの断片を、ＤＮＡリガーゼで結合して、Escher
ichia coli用のＡＬＯＤの発現ベクターｐＳＡＬＯＤＥ
＋Ｍ４５を構築した。

【０１１３】上記操作の概略図を第１図に示した。 (4) 発現ベクターｐＳＡＬＯＤＥとｐＳＡＬＯＤＥ＋Ｍ
４５の宿主細胞への導入およびその発現 実施例１の(7)に記載した方法と同様の方法により、ｐ
ＳＡＬＯＤＥとｐＳＡＬＯＤＥ＋Ｍ４５の２種類のプラ
スミドをもつ形質転換体を作製した。該形質転換体を実
施例１(7)と同様の方法で培養し、得られた培養液より
粗酵素を調製した。該粗酵素の活性を測定した結果、ｐ
ＳＡＬＯＤＥで形質転換された形質転換体の培養液中に
は、１ｍｕ／ｍｌのＡＬＯＤ活性があることがわかっ
た。一方、ｐＳＡＬＯＤＥ＋Ｍ４５により形質転換され
た形質転換体(Escherichia coli JM109 /pSALODE+M45)
の培養液中には、２８７ｍｕ／ｍｌのＡＬＯＤ活性のあ
ることがわかった。

【０１１４】Escherichia coli JM109 /pSALODE+M45は
平成１２年２月４日付けで工業技術院生命工学工業技術
研究所（茨城県つくば市東１丁目１番３号）にＦＥＲＭ
ＢＰ−７０２０として寄託されている。該粗酵素液よ
り常法に従い、ＡＬＯＤを精製した。得られたＡＬＯＤ
の性質を調べた。結果を第２表に示した。

【０１１５】（実施例４）Methylobacillus sp.由来
の、ＡＬＯＤの構造遺伝子の下流に存在する遺伝子によ
ってコードされる２つのポリペプチドの機能の推定 上記実施例２(7)で得られた形質転換体を、ＩＰＴＧを
０、０．１ｍｍｏｌ／ｌ、０．４ｍｍｏｌ／ｌの最終濃
度になるようにそれぞれ添加したＬＢ培地で培養した。
得られた培養液より、実施例１(1)と同様に粗酵素液を
調製した。該粗酵素液をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動に供した。また、該粗酵素液のＡＬＯＤ酵素
活性を調べた。その結果、以下の(a)〜(c)に示す結果が
得られた。

【０１１６】(a)ＩＰＴＧが存在する場合（誘導条件
下）では、ｐＳＡＬＯＤＰを導入した形質転換株、ｐＳ
ＡＬＯＤＰ＋Ｍ４５を導入した形質転換株のいずれの菌
株から得た粗酵素液においてもＡＬＯＤのバンドが確認
された。 (b)ＩＰＴＧがない場合（非誘導条件下）では、ｐＳＡ
ＬＯＤＰを導入した形質転換株、ｐＳＡＬＯＤＰ＋Ｍ４
５を導入した形質転換株のいずれの菌株から得た粗酵素
液においてもＡＬＯＤのバンドは確認されなかった。 (c)上記(b)において、ＡＬＯＤの生成が認められたにも
かかわらず、ＡＬＯＤ活性はｐＳＡＬＯＤＰ＋Ｍ４５を
導入した形質転換株でのみ認められた。

【０１１７】以上のことから、Methylobacillus sp.由
来のＡＬＯＤの構造遺伝子の下流に存在する遺伝子によ
ってコードされる２つのポリペプチドは、ＡＬＯＤの活
性の向上に関与していると推定された。

【０１１８】

【発明の効果】本発明により、アルデヒドオキシダーゼ
(ＡＬＯＤ)を効率よく製造することができた。

【０１１９】

【配列表フリーテキスト】

配列番号２０−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２１−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２２−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２３−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２４−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２５−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２６−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２７−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２８−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号２９−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号３０−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号３１−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号３２−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号３３−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号３４−人工配列の説明：合成ＤＮＡ 配列番号３５−人工配列の説明：合成ＤＮＡ

【０１２０】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> KYOWA HAKKO KOGYO CO., LTD <120> A method for producing Aldehyde oxidase <130> H11-1261T4 <140> <141> <160> 35 <170> PatentIn Ver. 2.0

【０１２１】 <210> 1 <211> 162 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <400> 1 Met Ser Glu Arg Ile Ser Leu Thr Met Gln Val Asn Gly Gln Pro Tyr 1 5 10 15 Pro Met Glu Ile Asp Pro Arg Val Thr Leu Leu Asp Ala Leu Pro Glu 20 25 30 His Leu Asn Leu Thr Gly Thr Lys Lys Gly Cys Asp Gln Gly Gln Cys 35 40 45 Gly Ala Cys Thr Val Leu Val Asn Gly Gln Arg Val Leu Ser Cys Leu 50 55 60 Thr Leu Ala Ala Gln Ala Asp Gly Ala Glu Val Thr Ser Ile Glu Gly 65 70 75 80 Leu Gln Ser Ala Ser Gly Glu Leu His Pro Val Gln Arg Cys Phe Val 85 90 95 Glu Asn Asp Ala Phe Gln Cys Gly Tyr Cys Thr Pro Gly Gln Ile Met 100 105 110 Ser Ala Val Ala Cys Ile Lys Glu Gly His Ala Gly Ser Asp Asp Glu 115 120 125 Ile Arg Glu Tyr Met Ser Gly Asn Leu Cys Arg Cys Gly Ala Tyr Pro 130 135 140 His Ile Ile Asp Ala Ile Lys Gln Ala Ala Ala Glu Met Ala Lys Glu 145 150 155 160 Ser Ala

【０１２２】 <210> 2 <211> 330 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <400> 1 Met Asn Pro Phe His Trp Lys Val Ala Gln Ser Ala Ser Glu Ala Ala 1 5 10 15 Ala Leu Lys Gln Gln Ser Gly Ser Gln Ile Leu Ala Gly Gly Thr Thr 20 25 30 Gln Leu Asp Leu Met Lys Cys Gly Val Phe Asn Pro Pro Gln Leu Ile 35 40 45 Gly Ile Asn Gly Leu Ser Glu Leu Arg Ser Leu Ser Phe Asp Asn Asp 50 55 60 Lys Ile Ser Ala Gly Ala Leu Ile Thr Met Ser Gln Leu Ala Asp His 65 70 75 80 Pro Asp Cys Gln Gln His Ala Pro Ala Ile Tyr Gly Ser Leu Trp Gln 85 90 95 Ala Ala Ser Pro Gln Ile Arg Asn Met Ala Thr Leu Gly Gly Asn Leu 100 105 110 Arg Gln Arg Thr Arg Cys Ala Tyr Tyr Arg Asp Pro Ala Thr Phe Ser 115 120 125 Ala Cys Asn Lys Arg Asn Pro Gly Ser Gly Cys Ala Ala Arg Gln Gly 130 135 140 Val Asn Ser Asn His Ala Ile Leu Gly Ala Ser Asp Ser Cys Ile Ala 145 150 155 160 Val Tyr Pro Gly Asp Leu Ala Val Ala Leu Val Ala Phe Asp Ala Val 165 170 175 Val Ile Val Gln Asn Pro Gln Gly Glu Thr Arg Arg Ile Ala Ile Asp 180 185 190 Asp Phe Ser Leu Leu Pro Gly Glu Thr Pro Asp Gln Glu His Asp Leu 195 200 205 Arg Asp Asp Glu Ile Ile Val Ala Ile Glu Val Pro Gln Thr Ala Ser 210 215 220 Leu Gln Arg Ser His Tyr Leu Lys Val Arg Asp Arg Ser Ser Asn Glu 225 230 235 240 Phe Ala Ala Ala Ser Ala Ala Ala Gly Phe Thr Leu Glu Asn Gly Val 245 250 255 Met Arg Gln Val His Val Ala Leu Gly Gly Val Ala Thr Glu Pro Trp 260 265 270 Arg Ala Thr Arg Val Glu Gln Ala Leu Glu Gly Gln Pro Phe Asn Glu 275 280 285 Glu Thr Val Phe Arg Pro Ala Glu Leu Ile Asn Gln Glu Thr Gln Ala 290 295 300 Leu Glu His Asn Ala Tyr Lys Val Lys Leu Ala Pro Arg Val Ile Ala 305 310 315 320 Arg Ala Leu Met Ala Ala Gly Glu Ile Ala 325 330

【０１２３】 <210> 3 <211> 775 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <400> 1 Met Ser Glu Val Asn His Asp Ala Arg Gln Ala Lys His Ile Pro Glu 1 5 10 15 Ala Thr Ala Gly Asp Thr Ala Thr Ala Glu Ala Gly Ser Pro Ile Glu 20 25 30 Gly Leu Gly Ala Ala Arg Ser Arg Gly Asp Gly Arg Val Lys Val Ile 35 40 45 Gly Glu Ala Arg Tyr Ala Ile Glu His Gln Pro Glu Asn Pro Leu Tyr 50 55 60 Gly Val Val Leu Gln Ser Thr Val Ala Ser Gly Arg Ile Ser Arg Leu 65 70 75 80 Ser Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ala Asp Gly Val Leu Ala Val Tyr Thr 85 90 95 His Leu Asn Pro Leu Lys Ile Asn Lys Pro Thr Ala Ile Ala Asp Gly 100 105 110 Gly Ala Ala Gln Ser Thr Tyr Thr Pro Ile Gln Asp Asp Val Ile Ile 115 120 125 His Asn Gly Gln Asn Ile Gly Ile Val Ile Ala Glu Thr Phe Glu Gln 130 135 140 Ala Thr Trp Ala Ala Ser Leu Val Glu Ile Glu Tyr Glu Thr Thr Pro 145 150 155 160 Ala Arg Val Phe Ala Thr Asp Glu Gly Val Glu Ala Lys Pro Met Ser 165 170 175 Ala Gln Asp Ile Asp Leu Gly Asp Ala Ala Thr Ala Met His Ser Ala 180 185 190 Glu Val Arg Ile Asn Gln Arg Tyr Thr Thr Pro Arg Glu Tyr Asn Met 195 200 205 Pro Met Glu Pro His Ala Cys Ile Ala His Trp His Glu Gly Gln Ile 210 215 220 Thr Val Trp Glu Pro Ser Gln Trp Val Ala Gly Ala Gln Val Glu Ile 225 230 235 240 Ala Glu Trp Leu Gly Ile Glu Thr Glu Lys Val Arg Ile Ile Ser Pro 245 250 255 Tyr Val Gly Gly Gly Phe Gly Ser Lys Pro Val Pro Tyr Thr His Val 260 265 270 Ala Leu Ala Ser Val Ala Ser Arg Ala Leu Asn Arg Pro Val Lys Val 275 280 285 Ser Leu Thr Arg Pro Gln Thr Phe Thr Gly Leu Gly Gly Arg Pro Ala 290 295 300 Thr Ser Gln Gln Leu Glu Leu Gly Ala Ser Arg Asp Gly Lys Ile Glu 305 310 315 320 Ala Ile Ile Gln Arg Ser Phe Ser Glu Thr Ser Leu Ile Asp Val Phe 325 330 335 Ala Glu Asn Cys Ser Lys Val Thr Ala Arg Met Tyr Ala Val Ser Asn 340 345 350 Val Ser Ala Gln His Gln Val Arg Leu Ile Asn Thr Val Thr Pro Gly 355 360 365 Trp Met Arg Ala Pro Gly Glu Asn Pro Ser Ala Phe Gly Leu Glu Val 370 375 380 Ala Met Asp Glu Leu Ala Tyr Ala Leu Asp Ile Asp Pro Leu Glu Leu 385 390 395 400 Arg Leu Arg Asn Trp Ala Asp Lys Asp Tyr Gln Leu Asp Leu Pro Trp 405 410 415 Ser Thr Arg Arg Leu Lys Glu Ala Tyr Gln Lys Gly Ala Glu Ala Phe 420 425 430 Gly Trp Asp Lys Arg Ile Met Thr Pro Arg Ser Met Arg Glu Gly Arg 435 440 445 Glu Leu Ile Gly Trp Gly Met Ala Ser Gly Thr Tyr Pro Val Asn Arg 450 455 460 Leu Pro Ala Glu Ala Lys Ile Ile Leu Thr Pro Gln Gly Arg Phe Val 465 470 475 480 Val Gln Cys Ala Gly Ala Asp Ile Gly Thr Gly Thr Tyr Thr Ile Leu 485 490 495 Ala Gln Thr Ala Ala Asp His Leu Gly Val Gly Ser Glu Thr Ile Glu 500 505 510 Val Glu Leu Gly Asp Thr Ala Leu Pro Arg Ala Gly Val Ala Gly Gly 515 520 525 Ser Gln Leu Ala Gly Asn Leu Thr Ala Ala Val Asn Asp Thr Ala Lys 530 535 540 Lys Met Arg Glu Arg Leu Leu Ala Leu Ala Ser Glu Leu Pro Ala Ser 545 550 555 560 Pro Leu Ser Gly Leu Pro Val Ser Gln Phe Thr Leu Gln Asp Gly Ala 565 570 575 Ile Gln His Ser Gly Gly Ser Gly Leu Ser Leu Ala Gln Leu Ala Thr 580 585 590 Leu Ala Pro Pro Asp Ser Leu Ser Val Lys Gly Gly Thr Phe Pro Asp 595 600 605 Asp Met Pro Gln Ser Glu Arg Asp Lys Ile Val Arg Asn Leu Asn Asp 610 615 620 Met Ser Arg Pro Glu Ala Phe Ser Ala His Ser Trp Ser Ala Gln Phe 625 630 635 640 Val Glu Val Arg Val Asp Glu Asp Phe Gly Thr Ile Arg Val Lys Arg 645 650 655 Met Val Ala Ala Leu Asp Ser Gly Arg Leu Tyr Asn Pro Lys Leu Ala 660 665 670 Arg Ser Gln Trp Ile Gly Gly Met Ile Met Gly Val Gly Gln Ala Leu 675 680 685 Met Glu Glu Gly Ile Val Asp Pro Arg Asn Gly Arg Val Ile Asn Asn 690 695 700 Asn Leu Ala Asp Tyr Leu Val Pro Val Asn Gly Asp Ile Pro Ser Ile 705 710 715 720 Thr Thr Ile Asn Val Gly Glu Pro Asp Phe Glu Ala Thr Thr Met Gly 725 730 735 Gly Lys Ala Val Gly Glu Leu Gly Ile Val Gly Val Ala Ala Ala Ile 740 745 750 Ser Asn Ala Val Phe His Ala Thr Gly Lys Arg Val Arg Gly Leu Pro 755 760 765 Ile Thr Leu Asp Lys Ile Ile 770 775

【０１２４】 <210> 4 <211> 3802 <212> DNA <213> Methylobacillus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(486) <220> <221> CDS <222> (486)..(1475) <220> <221> CDS <222> (1475)..(3799) <400> 4 atgtcagaaa gaatttcgct aacaatgcag gtcaatggcc agccataccc gatggagatc 60 gatccccggg tcaccttact tgatgcatta cctgagcacc tcaacctgac cggcactaaa 120 aaaggctgcg atcagggaca gtgtggggcc tgcacggtac tggttaacgg tcagcgggtg 180 ctgagttgtc tgacgctggc cgctcaggct gacggcgctg aggtgaccag cattgaaggg 240 ctgcaatctg ccagcggtga attacatccg gtgcagcgtt gctttgttga aaacgatgcc 300 ttccagtgcg gctactgtac gccaggccaa atcatgtcgg ccgtcgcctg cattaaagag 360 ggccatgccg gatcggacga tgaaatccgc gaatacatga gcggcaacct gtgccgctgc 420 ggtgcctatc cacacattat cgatgccatt aaacaggcgg cggctgaaat ggcgaaggag 480 tccgcatgaa tccctttcac tggaaagtcg cacagtcagc cagcgaagcc gcagcgttaa 540 agcagcagtc aggcagtcag attctggcgg gcggtaccac tcaactcgat ttgatgaaat 600 gcggcgtgtt taacccgccg cagctgattg gcattaacgg cctgtctgaa cttcgcagcc 660 tgagttttga caatgataaa atcagtgctg gcgcgctgat caccatgagc cagctggctg 720 atcatcccga ctgtcagcaa catgcgcccg ctatctacgg cagcttatgg caggccgcgt 780 cgccgcaaat ccgcaatatg gccacgctgg gcggcaattt acgtcagcgc acccgctgtg 840 cttattatcg cgatccggcg accttttcag cctgcaataa acgcaatccc ggctccggct 900 gtgccgcacg gcagggcgtc aacagtaatc acgccattct gggtgccagc gacagctgca 960 ttgcggtcta tccgggtgac ctggcggtcg cgctggtggc gtttgatgcg gtggtgatag 1020 tgcagaaccc gcagggcgaa actcgccgga tcgccattga tgatttctcc ctgctgccgg 1080 gagagacgcc ggatcaggaa cacgatctgc gcgatgacga gatcatcgtg gcgattgaag 1140 tgccacaaac cgcttccctg caacgctctc actatctcaa agtgcgcgat cgcagttcta 1200 acgagtttgc cgccgccagc gcagccgctg gtttcacgct ggagaatggc gtgatgcgtc 1260 aggtgcatgt tgcgctgggc ggcgttgcca ccgaaccctg gcgcgccacg cgggttgagc 1320 aggcgttaga gggacagccg ttcaacgaag agacggtatt caggccggcg gagctgatca 1380 atcaggaaac ccaggcgctg gagcataatg cgtataaagt gaagctggcc ccgcgcgtaa 1440 tagcgcgtgc gctaatggca gcaggagaga tcgcatgagt gaagtaaacc acgacgcacg 1500 ccaggctaaa cacatccctg aagccaccgc tggcgacacg gcgacggccg aagctggcag 1560 cccgattgaa ggattgggcg cggcccgatc gcggggtgac ggccgggtta aggtgatcgg 1620 tgaagcacgt tatgccatcg aacatcagcc ggaaaatccg ctgtacggcg tcgtgctcca 1680 gtcaaccgtc gccagtggcc gcatttcccg cctgtcagcc gaaaaagccc tgcaggctga 1740 cggtgtgctg gcagtctata cccatctgaa tccgttaaag attaacaagc cgaccgcgat 1800 tgctgacggc ggcgcagcgc agtccactta caccccgatt caggacgatg tgatcattca 1860 taacggccag aacattggca tcgtgatcgc tgaaaccttc gaacaggcca cctgggcagc 1920 ctcgctggtt gagatcgagt atgagaccac gccggcgcgg gtgtttgcca ccgacgaggg 1980 cgtcgaggct aaaccgatgt cggcgcagga tattgatctg ggcgatgcgg cgaccgcaat 2040 gcacagtgcc gaggtgcgta tcaaccagcg ttataccacc ccgcgtgaat acaacatgcc 2100 gatggagcca catgcctgca tcgcgcactg gcacgaaggt cagatcacgg tctgggaacc 2160 cagccagtgg gtggcgggcg cgcaggttga aatcgccgaa tggctgggga ttgagaccga 2220 aaaagtacgg attatttcac cctatgtcgg cgggggtttt gggtccaaac cggtgcctta 2280 cactcacgtt gccttagcca gcgtcgcgtc gcgcgccctg aaccgtccgg tgaaagtctc 2340 actgacccgg ccgcagacct ttaccggtct gggtggacgt ccggcgacct cgcagcagct 2400 ggagctgggc gcttcacgtg acggtaaaat tgaggcgatt attcagcgca gcttcagcga 2460 aacctcgctg attgatgtat ttgctgagaa ctgcagcaaa gtgaccgccc ggatgtacgc 2520 cgtcagcaac gtgtcggcac agcatcaggt ccgactgatt aacaccgtca cgccaggctg 2580 gatgcgggcg ccgggcgaga atcccagtgc gtttggcctt gaagtggcga tggatgagct 2640 ggcctatgcg ctggacatcg atccgctgga actgcgtctg cgcaactggg cagacaaaga 2700 ttatcagctc gatctgccgt ggagtacgcg tcggctgaaa gaggcgtacc agaaaggggc 2760 agaagcgttt ggctgggata agcgcattat gacgccgcgt tccatgcgtg aaggccgtga 2820 gctgataggc tggggcatgg cctccggcac ttatccggtc aaccgactgc cggccgaagc 2880 gaaaatcatc ctgacgccgc agggccgctt tgtggtgcag tgcgccggcg cagatatcgg 2940 aaccggcact tacactattc tggcgcagac ggccgcggat catctcggcg tcggttcgga 3000 aaccattgag gtagagctgg gcgatacagc gttgccgcgc gcaggcgtgg caggcggatc 3060 gcagctggcc ggtaacctga cggcggcggt gaacgatacc gcgaagaaaa tgcgcgaacg 3120 gttgctggct ctggccagtg agctgcccgc gtcgccgctc agcggcctgc cggtgtcgca 3180 gtttaccctg caggatggcg caattcagca cagcggtgga tcgggcctct cgctcgccca 3240 actggcgacg ctggcacctc ccgatagcct gagcgtgaaa ggcgggacct tcccggacga 3300 catgccgcaa agcgaacgcg acaaaatcgt gcgtaacctt aacgacatga gccggccaga 3360 ggcgttttcc gcccacagct ggagcgcaca gtttgttgag gtgcgggtcg atgaagattt 3420 cggcaccatc cgggtgaaac gcatggtggc ggcactcgac agcggtcggc tctacaaccc 3480 taaactggcg cgcagccagt ggatcggcgg gatgatcatg ggcgtcggtc aggcactgat 3540 ggaagagggg attgtcgatc ctcgcaacgg tcgggtgatt aacaataacc tggcggacta 3600 tctggtgccg gttaacggcg atattcccag catcaccacc atcaatgtcg gtgaacccga 3660 ctttgaggcg accaccatgg gcggtaaagc ggtcggtgag ctgggcatcg ttggcgtggc 3720 ggcggcgatc agtaatgcgg tcttccatgc caccggcaag cgggtacgtg gcctgccgat 3780 caccctcgac aaaatcatct ga 3802

【０１２５】 <210> 5 <211> 176 <212> PRT <213> Pseudomonas sp. <400> 5 Met Asn Ala Thr Pro Ala Arg Gln Leu Gln Pro Leu Ala Glu Pro Glu 1 5 10 15 Ser His Thr Ile Ala Leu Thr Leu Asn Gly Lys Gln Leu Gln Leu Ala 20 25 30 Val Glu Pro Trp Thr Thr Leu Leu Asp Leu Leu Arg Asp His Leu Asp 35 40 45 Leu Thr Gly Thr Lys Lys Gly Cys Asp His Gly Gln Cys Gly Ala Cys 50 55 60 Thr Val Leu Val Asn Gly Thr Arg Ile Asn Ser Cys Leu Ala Leu Ala 65 70 75 80 Val Met Gln Asp Gly Ala Glu Val Thr Thr Val Glu Gly Leu Ala Gln 85 90 95 Gly Asp Gln Leu His Pro Met Gln Ala Ala Phe Val Ala Glu Asp Ala 100 105 110 Phe Gln Cys Gly Tyr Cys Thr Pro Gly Gln Ile Cys Ser Ala Ile Gly 115 120 125 Met Leu Lys Glu Gly His Ala His Ser Glu Ala Glu Val Ala Glu Gln 130 135 140 Met Ser Gly Asn Leu Cys Arg Cys Gly Ala Tyr Arg Asn Ile Arg Ala 145 150 155 160 Ala Ile Glu Arg Ala Arg Pro Asp Cys Gln Gln Gly Glu Gly Arg Glu 165 170 175

【０１２６】 <210> 6 <211> 328 <212> PRT <213> Pseudomonas sp. <400> 6 Met Asn Arg Phe Gly Tyr Ala Lys Pro Asn Ala Val Pro Asp Ala Ile 1 5 10 15 Arg Gln His Gly Pro Gln Thr His Phe Ile Ala Gly Gly Thr Asn Leu 20 25 30 Leu Asp Leu Met Lys Glu Asn Val Glu Arg Pro Glu Gln Leu Ile Asp 35 40 45 Val Asn Gly Leu Pro Leu Arg Glu Val Glu Thr Thr Ala Glu Gly Gly 50 55 60 Leu Arg Ile Gly Ala Leu Val Lys Asn Ala Glu Val Ala Tyr His Pro 65 70 75 80 Glu Val Gln Arg Arg Tyr Pro Leu Leu Ala Lys Ala Ile Leu Ala Gly 85 90 95 Ala Ser Pro Gln Leu Arg Asn Met Ala Ser Thr Gly Gly Asn Leu Leu 100 105 110 Gln Arg Thr Arg Cys Tyr Tyr Phe Tyr Asp Val Gly Thr Pro Cys Asn 115 120 125 Lys Arg Glu Pro Gly Ser Gly Cys Gly Ala Arg Glu Gly Gln Asn Arg 130 135 140 Ile His Ala Ile Leu Gly His Ser Glu Gln Cys Ile Ala Thr His Pro 145 150 155 160 Ser Asp Met Cys Val Ala Leu Ala Ala Leu Glu Ala Arg Val Glu Val 165 170 175 Ser Gly Pro Ser Gly Glu Arg Val Ile Asp Phe Ala Asp Phe His Arg 180 185 190 Leu Pro Gly Asp Thr Pro Glu Arg Asp Thr Asn Leu Ala Ala Asp Glu 195 200 205 Leu Ile Thr Ala Val Thr Leu Pro Ala Asp Ser Leu Ala Ala Asn Ser 210 215 220 Ala Tyr Leu Lys Ile Arg Asp Arg Ala Ser Tyr Ala Phe Ala Leu Val 225 230 235 240 Ser Val Ala Ala Ala Leu Glu Leu Asp Gly Glu Arg Ile Lys Gln Val 245 250 255 Arg Val Ala Leu Gly Gly Val Ala His Lys Pro Trp Arg Leu Pro Glu 260 265 270 Ala Glu Gln Ala Val Val Gly Gln Val Ala Asp Lys Ala Thr Phe Gly 275 280 285 Gln Leu Ala Asp Arg Leu Leu Gln Gly Ala Gln Gly Phe Ala His Asn 290 295 300 Ser Phe Lys Ile Glu Leu Ala Arg Arg Ala Ile Val Arg Ala Leu Thr 305 310 315 320 Glu Ala Ala Gly Gly Thr Leu Gln 325

【０１２７】 <210> 7 <211> 741 <212> PRT <213> Pseudomonas sp. <400> 7 Met Thr Val Val His Leu Gln Lys Ala Val Pro Arg Val Asp Gly Pro 1 5 10 15 Leu Lys Val Thr Gly Gln Ala Leu Tyr Ala Gly Glu Phe Ser Val Pro 20 25 30 Asp Leu Ala Phe Gly Phe Val Val Asn Ala Thr Ile Thr Lys Gly Arg 35 40 45 Leu Leu Gly Leu Asp Val Ser Glu Ala Leu Ala Gln Pro Gly Val Leu 50 55 60 Glu Val Leu Ser His Leu Asn Arg Pro Lys Met Ala Ser Tyr Asp Glu 65 70 75 80 Ser Tyr Thr Asp Met Asp Ala Ala Asp Gly Lys Pro Phe Arg Pro Leu 85 90 95 Tyr Asn Asp Arg Ile Leu Tyr Ser Gly Gln Pro Ile Ala Leu Val Val 100 105 110 Ala Glu Thr Phe Glu Ala Ala Arg His Ala Ala Ser Leu Ile Arg Ala 115 120 125 Gln Tyr Ser Glu Glu Asp His Ala Thr Asp Leu Ala Gln Ala Arg Asp 130 135 140 Gln Ala His Glu Ala Pro Met Glu Leu Pro Asp Asn Arg Gly Asp Ala 145 150 155 160 Pro Ala Ala Trp Ala Ala Ala Pro Val Arg Ile Glu Ala Glu Tyr His 165 170 175 Ser Ala Ala Glu Phe His Asn Pro Met Glu Met His Ala Ser Thr Val 180 185 190 Ile Tyr His Lys Asp Gly Lys Leu Thr Val His Asp Lys Thr Gln Gly 195 200 205 Val Gln Asn Ser Ala Gln Phe Val Ser Asn Ile Phe Gly Leu Gly Glu 210 215 220 Gly Asp Val Lys Val Ile Ser Pro Phe Val Gly Gly Ala Phe Gly Ser 225 230 235 240 Gly Leu Arg Pro Gln Tyr Gln Leu Val Leu Ala Thr Met Ala Ala Leu 245 250 255 Gln Leu Lys Arg Ser Val Arg Val Thr Leu Thr Arg Gln Gln Met Phe 260 265 270 Thr Phe Gly Tyr Arg Pro Glu Thr Tyr Gln Gln Leu Lys Leu Ala Cys 275 280 285 Asp Ser Asp Gly Lys Leu Gln Ala Ile Asp His Ser Ala Leu Gly Ile 290 295 300 Thr Ser Arg Phe Glu Asp Phe Thr Glu Met Val Leu Val Trp Ser Ala 305 310 315 320 Ser Leu Tyr Ala Cys Pro Asn Val Lys Leu Ala Tyr Gln Leu Ala Ala 325 330 335 Leu Asp Val Tyr Thr Pro Leu Asp Met Arg Ala Pro Gly Ala Val Leu 340 345 350 Gly Val Tyr Ala Leu Glu Ser Ala Met Asp Glu Leu Ala Tyr Ala Ala 355 360 365 Asp Ile Asp Pro Leu Glu Leu Arg Ile Arg Asn Phe Thr Asp Thr Asp 370 375 380 Pro Ala Lys Gly Lys Pro Tyr Ser Ser Lys Glu Leu Leu Ala Cys Tyr 385 390 395 400 Arg Gln Ala Ala Glu Arg Phe Gly Trp Glu Arg Arg Ser Met Ala Pro 405 410 415 Arg Ser Met Arg Asp Gly Asn Gln Leu Val Gly Trp Gly Met Ala Thr 420 425 430 Gly Val Trp Glu Ala Met Gln Gln Pro Ala Thr Ala Lys Ala Val Met 435 440 445 Asn Ile Asp Gly Ser Leu Val Val Ala Ser Ala Thr Ser Asp Ile Gly 450 455 460 Thr Gly Thr Tyr Thr Val Met Thr Gln Ile Ala Ala Glu Asn Leu Gly 465 470 475 480 Leu Pro Leu Asp Lys Val Thr Phe Lys Leu Gly Asp Ser Thr Leu Pro 485 490 495 Lys Ala Pro Leu Glu Gly Gly Ser Phe Thr Val Ser Ser Val Gly Thr 500 505 510 Ala Val Lys Leu Ala Cys Asp Gln Leu Arg Gln Gln Leu Leu Asp Ala 515 520 525 Ala Lys Glu Met Asp Asp Ser Pro Leu Ala Lys Ala Glu Leu Glu Gln 530 535 540 Val Val Phe Ala Asp Gly Gly Ile Ser Leu Lys Thr Asp Ser Ala Gln 545 550 555 560 Arg Val Asp Phe Thr Ala Ile Leu Lys Ala Ser Gly Ser Pro Ser Met 565 570 575 Glu Thr Leu Ala Ser Ala Glu Pro Ala Glu Gly Arg Asp Asp Tyr Ala 580 585 590 Thr Gly Thr His Ser Ala Val Phe Val Glu Val Lys Val Asp Glu Asp 595 600 605 Phe Gly Ser Val Gln Val Ser Arg Val Val Thr Ala Val Ala Ala Gly 610 615 620 Arg Ile Leu Asn Leu Lys Thr Gly Glu Asn Gln Val Ala Gly Gly Ile 625 630 635 640 Val Trp Gly Ile Gly Met Gly Leu Gln Glu Glu Gly Met Met Asp Thr 645 650 655 Ser Glu Gly Arg Trp Met Asn His Ser Leu Ala Glu Tyr His Phe Pro 660 665 670 Val Gln Ala Asp Ile Gln Gln Leu Glu Val Ile Phe Val Glu Glu His 675 680 685 Asp Glu Ile Val Asn Pro Leu Gly Ala Lys Gly Ile Gly Glu Ile Gly 690 695 700 Ile Val Arg Val Ala Ala Ala Ile Ala Asn Ala Ile Phe His Ala Thr 705 710 715 720 Gly Lys Arg Val Arg Asp Leu Pro Ile Thr Leu Asp Lys Val Phe Ala 725 730 735 Asp Glu Leu Val His 740

【０１２８】 <210> 8 <211> 3736 <212> DNA <213> Pseudomonas sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(528) <220> <221> CDS <222> (528)..(1511) <220> <221> CDS <222> (1511)..(3733) <400> 8 atgaacgcca cccccgcgcg ccagctccag cccctggccg aacccgagtc ccataccatc 60 gccctgaccc tcaacggcaa gcagctgcag ctggccgtgg agccctggac cacgctgctc 120 gatctcttgc gcgaccacct cgatctgacc ggtaccaaga agggctgcga tcacgggcag 180 tgcggcgcct gcaccgtgct ggtcaacggt acccgcatca acagctgcct ggccctggcg 240 gtcatgcagg acggcgccga ggtcaccacc gtcgagggcc tggcccaggg cgaccagctg 300 caccccatgc aggccgcctt cgtcgccgaa gacgccttcc agtgcggcta ttgcaccccg 360 gggcagatct gctcggcgat cggcatgctc aaggagggcc atgcccacag cgaggccgag 420 gtggccgagc agatgagcgg caacctctgc cgctgcggcg cctatcgcaa catccgcgcc 480 gccatcgagc gggcgcgtcc ggattgccag caaggggagg gccgcgaatg aaccgcttcg 540 gttatgccaa gcccaacgcc gtgcccgacg ccatccgcca gcatggcccc cagacccatt 600 tcatcgccgg tggcaccaac ctgctggatc tgatgaagga aaacgtcgag cgccccgagc 660 agctgatcga cgtcaacggc ctacccctgc gcgaggtcga gaccaccgcc gaaggcggtc 720 tgcgcatcgg tgccctggtc aagaacgccg aggtcgccta tcaccccgag gtacagcggc 780 gctatccgct gctggccaag gccatcctcg ccggcgcctc gccgcaactg cgcaacatgg 840 cctccaccgg cggcaacctg ctgcagcgta cccgctgcta ctacttctac gacgtgggca 900 ccccctgcaa caagcgtgag cccggctccg gctgcggcgc gcgcgaaggg cagaatcgca 960 tccacgccat cctcggccac agcgagcagt gcatcgccac ccatccctcg gacatgtgcg 1020 tggccctggc cgcgctggaa gcccgggtcg aggtgagcgg tccaagtggc gagcgcgtca 1080 tcgacttcgc cgacttccat cgcctgcccg gcgacacccc cgagcgcgat accaacctcg 1140 ccgccgatga actcatcacc gccgtgaccc tgccggccga cagcctggcg gccaacagcg 1200 cctacctgaa gattcgcgac cgcgcctcct atgccttcgc cttggtctcg gtggcagccg 1260 cgctggaact ggacggcgag cgcatcaagc aggtccgcgt cgccctgggc ggcgtggccc 1320 acaaaccctg gcgtctgcca gaagccgagc aggccgtcgt cggccaggtg gcggacaagg 1380 ccaccttcgg ccagttggcc gatcgcctgc tgcagggcgc ccagggcttc gcccacaaca 1440 gcttcaagat cgaactggcc cggcgcgcca tcgtgcgtgc ccttaccgaa gccgccggag 1500 gtaccctgca atgaccgtcg tccatctgca aaaagccgtt ccccgcgtcg acggtccgct 1560 caaggtcacc ggtcaggcgc tctatgccgg cgaattcagc gttcctgatc tggccttcgg 1620 attcgtggtc aacgccacca tcaccaaggg ccgcctgctt gggctggacg tcagcgaagc 1680 cctggcccag ccgggtgtgc tcgaggtgct cagccatctc aaccgaccca agatggccag 1740 ctacgacgag agctacaccg acatggacgc ggccgacggc aagcccttcc ggccgctgta 1800 caacgatcgc atcctctata gcggccagcc cattgccctg gtggtggccg agaccttcga 1860 ggccgcgcgt cacgccgcct cgctgatccg ggcccagtac agcgaggaag accacgccac 1920 cgacctggcc caggcccgcg accaggccca cgaagcgccc atggaattgc cggacaatcg 1980 cggcgacgcc ccggcggcct gggccgcggc gcccgtccgt atcgaggccg agtaccactc 2040 cgcggcggaa ttccacaatc ccatggagat gcatgcctcc accgtcatct accacaagga 2100 cggcaagctg acggtgcacg acaagaccca gggcgtgcag aacagcgccc agttcgtcag 2160 caacatcttc ggcctgggcg agggcgacgt gaaggtcatc tcgcccttcg ttggtggggc 2220 cttcggctcc ggtctgcgtc cccagtacca gctggtgctg gcgaccatgg ccgcgctgca 2280 gctcaagcgc tcggtgcgag tgaccctgac gcgccagcag atgttcacct tcggctatcg 2340 ccccgagacc taccagcagc tcaagctggc ctgcgacagc gacggcaagc tgcaggccat 2400 cgatcacagc gccctgggca tcacctcgcg cttcgaggac ttcaccgaga tggtgctggt 2460 ctggtcggcg tcgctctatg cctgccccaa cgtcaagctg gcctatcaac tggccgcgct 2520 ggacgtctac acccccctgg acatgcgcgc cccgggcgcg gtgctgggtg tctatgcgct 2580 ggaaagcgcc atggacgaac tggcctatgc ggccgacatc gatccgctgg aattgcgcat 2640 ccgcaatttc accgacaccg atccggccaa gggcaagccc tattccagca aggaactgct 2700 ggcgtgctac cgccaggccg ccgagcggtt cggctgggag cggcgcagca tggcgccacg 2760 ctccatgcgc gacggcaacc agctggtggg ctggggcatg gccaccgggg tgtgggaagc 2820 catgcagcaa cccgccaccg ccaaggcggt gatgaacatc gacggcagcc tggtggtggc 2880 cagtgccacc tccgacatcg gcaccggtac ctacacggtg atgacccaga tcgccgccga 2940 aaacctcggc ctgccgctgg acaaggtcac cttcaagctg ggcgattcca ccctgcccaa 3000 ggcacccctg gagggcggtt cctttaccgt gtcctcggtg ggtaccgccg tcaagctggc 3060 ctgcgaccag ttgcgccagc aactgctgga tgcggccaag gaaatggatg actcgccact 3120 ggccaaggcg gagctggagc aggtggtgtt cgccgatggc ggcatcagcc tcaagaccga 3180 ctcggcccag cgcgtcgact tcaccgccat cctcaaggcc tctggctcgc cgtccatgga 3240 aaccctggcc agcgccgaac cggcggaggg gcgcgacgac tacgccaccg gtacccactc 3300 ggcggtgttc gtcgaggtca aggtcgacga agacttcggc agcgtccagg tcagtcgcgt 3360 ggtcaccgcg gtggccgcgg gtcgcatcct caacctcaag accggcgaga accaggtggc 3420 cggcggcatc gtctggggca tcggcatggg cctgcaggaa gaggggatga tggacacttc 3480 cgaggggcgc tggatgaacc acagcctggc ggagtaccac ttcccggtgc aggccgacat 3540 ccagcagctg gaggtgatct tcgtcgagga acacgacgag atcgtcaatc cgctcggcgc 3600 caagggcatc ggcgagatcg gcatcgtcgg ggtggcggca gccattgcca acgccatctt 3660 ccacgccacc ggcaagcggg tccgcgatct gcccatcacc ctggacaagg tattcgccga 3720 cgagttggtg cactag 3736

【０１２９】 <210> 9 <211> 169 <212> PRT <213> Escherichia coli <400> 9 Met Pro Leu Thr Leu Lys Val Asn Gly Lys Thr Glu Gln Leu Glu Val 1 5 10 15 Asp Thr Arg Thr Thr Leu Leu Asp Thr Leu Arg Glu Asn Leu His Leu 20 25 30 Ile Gly Thr Lys Lys Gly Cys Asp His Gly Gln Cys Gly Ala Cys Thr 35 40 45 Val Leu Val Asn Gly Arg Arg Leu Asn Ala Cys Leu Thr Leu Ala Val 50 55 60 Met His Gln Gly Ala Glu Ile Thr Thr Ile Glu Gly Leu Gly Ser Pro 65 70 75 80 Asp Asn Leu His Pro Met Gln Ala Ala Phe Ile Lys His Asp Gly Phe 85 90 95 Gln Cys Gly Tyr Cys Thr Ser Gly Gln Ile Cys Ser Ser Val Ala Val 100 105 110 Leu Lys Glu Ile Gln Asp Gly Ile Pro Ser His Val Thr Val Asp Leu 115 120 125 Val Ser Ala Pro Glu Thr Thr Ala Asp Glu Ile Arg Glu Arg Met Ser 130 135 140 Gly Asn Ile Cys Arg Cys Gly Ala Tyr Ala Asn Ile Leu Ala Ala Ile 145 150 155 160 Glu Asp Ala Ala Gly Glu Ile Lys Ser 165

【０１３０】 <210> 10 <211> 318 <212> PRT <213> Escherichia coli <400> 10 Met Lys Ala Phe Thr Tyr Glu Arg Val Asn Thr Pro Ala Glu Ala Ala 1 5 10 15 Leu Ser Ala Gln Arg Val Pro Gly Ala Lys Phe Ile Ala Gly Gly Thr 20 25 30 Asn Leu Leu Asp Leu Met Lys Leu Glu Ile Glu Thr Pro Thr His Leu 35 40 45 Ile Asp Val Asn Gly Leu Gly Leu Asp Lys Ile Glu Val Thr Asp Ala 50 55 60 Gly Gly Leu Arg Ile Gly Ala Leu Val Arg Asn Thr Asp Leu Ala Ala 65 70 75 80 His Glu Arg Val Arg Arg Asp Tyr Ala Val Leu Ser Arg Ala Leu Leu 85 90 95 Ala Gly Ala Ser Gly Gln Leu Arg Asn Gln Ala Thr Thr Ala Gly Asn 100 105 110 Leu Leu Gln Arg Thr Arg Cys Pro Tyr Phe Tyr Asp Thr Asn Gln Pro 115 120 125 Cys Asn Lys Arg Leu Pro Gly Ser Gly Cys Ala Ala Leu Glu Gly Phe 130 135 140 Ser Arg Gln His Ala Val Val Gly Val Ser Glu Ala Cys Ile Ala Thr 145 150 155 160 His Pro Ser Asp Met Ala Val Ala Met Arg Leu Leu Asp Ala Val Val 165 170 175 Glu Thr Ile Thr Pro Glu Gly Lys Thr Arg Ser Ile Thr Leu Ala Asp 180 185 190 Phe Tyr His Pro Pro Gly Lys Thr Pro His Ile Glu Thr Ala Leu Leu 195 200 205 Pro Gly Glu Leu Ile Val Ala Val Thr Leu Pro Pro Pro Leu Gly Gly 210 215 220 Lys His Ile Tyr Arg Lys Val Arg Asp Arg Ala Ser Tyr Ala Phe Ala 225 230 235 240 Leu Val Ser Val Ala Ala Ile Ile Gln Pro Asp Gly Ser Gly Arg Val 245 250 255 Ala Leu Gly Gly Val Ala His Lys Pro Trp Arg Ile Glu Ala Ala Asp 260 265 270 Ala Gln Leu Ser Gln Gly Ala Gln Ala Val Tyr Asp Thr Leu Phe Ala 275 280 285 Ser Ala His Pro Thr Ala Glu Asn Thr Phe Lys Leu Leu Leu Ala Lys 290 295 300 Arg Thr Leu Ala Ser Val Leu Ala Glu Ala Arg Ala Gln Ala 305 310 315

【０１３１】 <210> 11 <211> 732 <212> PRT <213> Escherichia coli <400> 11 Met Lys Phe Asp Lys Pro Ala Gly Glu Asn Pro Ile Asp Gln Leu Lys 1 5 10 15 Val Val Gly Arg Pro His Asp Arg Ile Asp Gly Pro Leu Lys Thr Thr 20 25 30 Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Tyr Glu Trp His Glu Glu Ala Pro Asn Ala 35 40 45 Ala Tyr Gly Tyr Ile Val Gly Ser Ala Ile Ala Lys Gly Arg Leu Thr 50 55 60 Ala Leu Asp Thr Asp Ala Ala Gln Lys Ala Pro Gly Val Leu Ala Val 65 70 75 80 Ile Thr Ala Ser Asn Ala Gly Ala Leu Gly Lys Gly Asp Lys Asn Thr 85 90 95 Ala Arg Leu Leu Gly Gly Pro Thr Ile Glu His Tyr His Gln Ala Ile 100 105 110 Ala Leu Val Val Ala Glu Thr Phe Glu Gln Ala Arg Ala Ala Ala Ser 115 120 125 Leu Val Gln Ala His Tyr Arg Arg Asn Lys Gly Ala Tyr Ser Leu Ala 130 135 140 Asp Glu Lys Gln Ala Val Asn Gln Pro Pro Glu Asp Thr Pro Asp Lys 145 150 155 160 Asn Val Gly Asp Phe Asp Gly Ala Phe Thr Ser Ala Ala Val Lys Ile 165 170 175 Asp Ala Thr Tyr Thr Thr Pro Asp Gln Ser His Met Ala Met Glu Pro 180 185 190 His Ala Ser Met Ala Val Trp Asp Gly Asn Lys Leu Thr Leu Trp Thr 195 200 205 Ser Asn Gln Met Ile Asp Trp Cys Arg Thr Asp Leu Ala Lys Thr Leu 210 215 220 Lys Val Pro Val Glu Asn Val Arg Ile Ile Ser Pro Tyr Ile Gly Gly 225 230 235 240 Gly Phe Gly Gly Lys Leu Phe Leu Arg Ser Asp Ala Leu Leu Ala Ala 245 250 255 Leu Ala Ala Arg Ala Val Lys Arg Pro Val Lys Val Met Leu Pro Arg 260 265 270 Pro Ser Ile Pro Asn Asn Thr Thr His Arg Pro Ala Thr Leu Gln His 275 280 285 Leu Arg Ile Gly Ala Asp Gln Ser Gly Lys Ile Thr Ala Ile Ser His 290 295 300 Glu Ser Trp Ser Gly Asn Leu Pro Gly Gly Thr Pro Glu Thr Ala Val 305 310 315 320 Gln Gln Ser Glu Leu Leu Tyr Ala Gly Ala Asn Arg His Thr Gly Leu 325 330 335 Arg Leu Ala Thr Leu Asp Leu Pro Glu Gly Asn Ala Met Arg Ala Pro 340 345 350 Gly Glu Ala Pro Gly Leu Met Ala Leu Glu Ile Ala Ile Asp Glu Leu 355 360 365 Ala Glu Lys Ala Gly Ile Asp Pro Val Glu Phe Arg Ile Leu Asn Asp 370 375 380 Thr Gln Val Asp Pro Ala Asp Pro Thr Arg Cys Phe Ser Arg Arg Gln 385 390 395 400 Leu Ile Glu Cys Leu Arg Thr Gly Ala Asp Lys Phe Gly Trp Lys Gln 405 410 415 Arg Asn Ala Thr Pro Gly Gln Val Arg Asp Gly Glu Trp Leu Val Gly 420 425 430 His Gly Val Ala Ala Gly Phe Arg Asn Asn Leu Leu Glu Lys Ser Gly 435 440 445 Ala Arg Val His Leu Glu Gln Asn Gly Thr Val Thr Val Glu Thr Asp 450 455 460 Met Thr Asp Ile Gly Thr Gly Ser Tyr Thr Ile Leu Ala Gln Thr Ala 465 470 475 480 Ala Glu Met Leu Gly Val Pro Leu Glu Gln Val Ala Val His Leu Gly 485 490 495 Asp Ser Ser Phe Pro Val Ser Ala Gly Ser Gly Gly Gln Trp Gly Ala 500 505 510 Asn Thr Ser Thr Ser Gly Val Tyr Ala Ala Cys Met Lys Leu Arg Glu 515 520 525 Met Ile Ala Ser Ala Val Gly Phe Asp Pro Glu Gln Ser Gln Phe Ala 530 535 540 Asp Gly Lys Ile Thr Asn Gly Thr Arg Ser Ala Thr Leu His Glu Ala 545 550 555 560 Thr Ala Gly Gly Arg Leu Thr Ala Glu Glu Ser Ile Glu Phe Gly Thr 565 570 575 Leu Ser Lys Glu Tyr Gln Gln Ser Thr Phe Ala Gly His Phe Val Glu 580 585 590 Val Gly Val His Ser Ala Thr Gly Glu Val Arg Val Arg Arg Met Leu 595 600 605 Ala Val Cys Ala Ala Gly Arg Ile Leu Asn Pro Lys Thr Ala Arg Ser 610 615 620 Gln Val Ile Gly Ala Met Thr Met Gly Met Gly Ala Ala Leu Met Glu 625 630 635 640 Glu Leu Ala Val Asp Asp Arg Leu Gly Tyr Phe Val Asn His Asp Met 645 650 655 Ala Gly Tyr Glu Val Pro Val His Ala Asp Ile Pro Lys Gln Glu Val 660 665 670 Ile Phe Leu Asp Asp Thr Asp Pro Ile Ser Ser Pro Met Lys Ala Lys 675 680 685 Gly Val Gly Glu Leu Gly Leu Cys Gly Val Ser Ala Ala Ile Ala Asn 690 695 700 Ala Val Tyr Asn Ala Thr Gly Ile Arg Val Arg Asp Tyr Pro Ile Thr 705 710 715 720 Leu Asp Lys Leu Leu Asp Lys Leu Pro Asp Val Val 725 730

【０１３２】 <210> 12 <211> 3658 <212> DNA <213> Escherichia coli <220> <220> CDS <222> (1)..(507) <220> <220> CDS <222> (507)..(1460) <220> <220> CDS <222> (1460)..(3655) <400> 12 atgcccctga cactgaaggt gaacggcaaa accgagcagc ttgaggtgga tacccgaacc 60 acgctactgg acactttgcg tgaaaatctg catttgatcg gtaccaagaa aggttgcgat 120 cacggacagt gcggagcctg taccgtgctg gtcaatggtc gcaggcttaa tgcctgcctg 180 acgcttgcag tcatgcatca gggggccgag atcaccacca ttgaaggcct gggttcgcca 240 gataatcttc accccatgca ggcggccttt atcaagcatg atggcttcca gtgcggctac 300 tgcacctccg ggcaaatttg ctcatcagta gcggtgctaa aagagattca ggacggcatt 360 cccagtcacg tcacggtcga tttggtttcc gctccagaaa caactgccga tgagatccgt 420 gaacgtatga gcggcaacat ctgtcgctgt ggtgcatacg ctaacatcct tgccgccatt 480 gaagatgctg cgggggagat aaaatcatga aggcgtttac ctatgaacga gtgaataccc 540 cagccgaggc ggcacttagc gctcagcgcg tacccggcgc aaaatttatc gcgggcggga 600 ccaatctgct ggacctgatg aagctggaaa ttgaaacgcc cacccacctt atcgatgtga 660 acggcctcgg gctcgataag attgaagtga ccgacgcggg tgggctgcgc atcggcgcac 720 tggtacggaa caccgacctg gcggctcacg agcgcgtgcg tcgtgattac gcggtactct 780 cccgcgccct gctcgctggc gcgtctggtc agttacgtaa tcaggcaacc accgcaggta 840 atctgctcca gcgcacgcgc tgcccctatt tttacgacac caatcagccc tgcaataagc 900 gcctgcccgg gagcggctgc gcggcgcttg aaggctttag ccgtcagcac gcggtggtag 960 gcgtaagcga agcctgcatt gccacccatc cgagcgatat ggcggtcgca atgcggttgc 1020 tggatgcggt ggtggaaacc atcacgccgg agggaaagac tcgcagtatc acactggctg 1080 atttttatca ccctccggga aaaacgccgc acattgaaac cgccctgctt cccggtgagc 1140 ttatcgttgc ggtgacgtta cctccaccgc tcggcggaaa acatatctac cgtaaggtgc 1200 gcgatcgcgc ctcctacgcc tttgccctgg tatcggtcgc ggcgattatt cagcctgacg 1260 gcagcgggcg cgtcgcgctg ggcggagtag cacataagcc ctggcgcatt gaggctgcgg 1320 atgctcagct atcccagggg gcgcaggccg tatatgacac gctgttcgcc agcgcccatc 1380 ccaccgctga aaacaccttt aaactcctgt tggcgaagcg aacgcttgcc tccgtactgg 1440 ctgaagcgag ggcacaggca tgaaatttga taaacccgca ggggaaaacc cgatcgatca 1500 gctgaaggtt gtcggtcgtc cccatgaccg catcgacgga ccgctgaaaa ctaccggcac 1560 ggcacgctac gcctacgaat ggcatgaaga agcccccaac gccgcctatg gctatatcgt 1620 cggttccgcc attgccaaag gacgcctcac cgcccttgat acggacgccg cgcaaaaagc 1680 gccgggcgta ctggctgtca ttaccgccag taacgccggg gcactcggca aaggcgacaa 1740 aaacaccgcc aggctgttag gcggccccac tattgagcac tatcatcagg ccattgcgct 1800 ggtagtggcc gagaccttcg aacaggcgcg agcggcggcc tcgctggtgc aggcacacta 1860 tcgccgtaat aaaggagctt actccctggc ggacgaaaaa caggccgtca atcagccgcc 1920 ggaagacacg cccgacaaaa acgtcggtga ctttgacggg gctttcacct ccgctgcggt 1980 gaagattgat gctacctaca cgaccccgga ccagagccat atggcgatgg agccgcatgc 2040 ctcgatggcc gtctgggatg gaaataagct taccctctgg acctcaaatc agatgattga 2100 ctggtgccgc accgatctgg caaaaacgct gaaagttccc gtggagaatg tgcgtattat 2160 ctccccgtat atcggcggag ggtttggcgg caagctgttc ctgagaagcg atgcgctgct 2220 ggcggccctc gccgcccgag cggtgaaacg tccggttaaa gtgatgctcc cccgcccctc 2280 tattcccaat aacaccacgc accgccccgc cacccttcag cacttgcgta tcggtgccga 2340 ccagagcggg aaaatcaccg ctatctcaca tgaaagctgg tctggaaacc tgcccggcgg 2400 cacgccggaa acggcggtac agcaaagcga attactctac gccggggcga atcgtcatac 2460 cggcctgcgg ctcgccacgc ttgatttgcc ggaagggaac gccatgcgtg cgcccggcga 2520 agcccccggt ctgatggcgc tcgaaatcgc gatcgacgaa ctggcggaaa aagcgggcat 2580 cgatcccgtc gagtttcgca tcctgaatga cactcaggtt gaccccgccg acccgacgcg 2640 ctgcttctct cgccgtcagc ttatcgagtg cttgcgcacc ggagcggata aatttggctg 2700 gaagcagcgc aacgccacac ccggacaggt gcgcgacggg gagtggctag tcggccacgg 2760 tgttgcggcg ggctttcgca ataatctgct ggaaaaatcg ggtgctcggg ttcacctcga 2820 acaaaacggc accgttaccg tagaaacgga catgaccgac attggcaccg gcagctacac 2880 cattctggcc cagacggcag cggaaatgct tggcgtaccg ctggagcagg ttgcggttca 2940 cctcggcgat tccagtttcc cggtttctgc gggttctggt ggacaatggg gcgcgaatac 3000 ctccacctcc ggcgtttacg ccgcctgtat gaagcttcgc gaaatgattg cctcggcagt 3060 cgggtttgat cctgagcagt cgcagtttgc cgacggcaag attaccaacg gtacccgaag 3120 cgccacgcta catgaagcca ccgcaggcgg cagactgaca gcggaagaga gcattgaatt 3180 cggaacactg agcaaagagt accagcagtc gacctttgcc gggcattttg tggaggtcgg 3240 cgtgcatagc gcgacgggag aagttcgggt ccggcgtatg ctcgctgtgt gtgctgcagg 3300 acgcatcctg aatccgaaaa ctgcgcgcag ccaggtcatt ggcgcaatga ctatgggcat 3360 gggcgcggca ctgatggagg agctggcggt ggatgaccgt ttgggctact tcgttaatca 3420 cgatatggcg gggtatgagg tgccggttca tgcggatatc ccaaaacagg aggtgatttt 3480 cctggatgat accgacccca tatcctcccc gatgaaggcc aaaggtgtcg gtgagctggg 3540 cctgtgcggc gtgagcgcgg ctatcgccaa cgcggtgtat aacgccaccg gtattcgggt 3600 acgggattat cccatcactc tggataagct gctcgataag ctgccggatg tggtttaa 3658

【０１３３】 <210> 13 <212> 182 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <400> 13 Met Met Ala Ala Gly Phe Ser Arg Arg Phe Arg Gln Gln Ser Gly Glu 1 5 10 15 His Lys Leu Leu Ala Gln Leu Asn Gly Lys Pro Leu Leu Gln His Thr 20 25 30 Leu Gln Gln Ala Ala Ala Ser Gly Leu Asp Leu Phe Val Val Thr Arg 35 40 45 Pro Glu Gln Ala Ala Ile Arg Ala Leu Ile Asp Pro Ala Thr Ala Val 50 55 60 Leu Cys Asp Ser His Gly Leu Gly Asp Ser Ile Ala Ala Gly Val Ala 65 70 75 80 Ala Ser Ser Glu Tyr Asp Gly Trp Leu Ile Ala Leu Gly Asp Met Pro 85 90 95 Leu Ile Thr Ala Asp Ser Tyr Arg Ala Val Ser Ala Ala Leu Ala Asp 100 105 110 Ala Ala Val Val Arg Pro Trp Val Asp Gly Ile Pro Gly His Pro Val 115 120 125 Gly Phe Gln Arg His Tyr Tyr Pro Leu Leu Thr Gly Leu Leu Gly Asp 130 135 140 Val Gly Ala Gln Ala Ile Val Lys Arg Asp Ala Val Arg Leu Pro Leu 145 150 155 160 Ser Asp Arg Gly Cys Val Tyr Asp Ile Asp Leu Pro Gly Asp Leu Gln 165 170 175 Ala Ile Lys Glu Phe Ser 180

【０１３４】 <210> 14 <211> 329 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <400> 14 Met Ile Thr Leu Asp Gln Arg Val Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ser Cys 1 5 10 15 Glu Ala Gly Gln Ser Val Trp Leu Cys Thr Val Leu Arg Thr Tyr Gly 20 25 30 Ser Ser Pro Arg Ala Pro Gly Thr Leu Met Thr Val Asn Gln Ala Gly 35 40 45 Ala Tyr Cys Gly Ser Leu Ser Gly Gly Cys Ile Glu Lys Asp Phe Leu 50 55 60 Ala Gln Leu Ala Thr Gly Asp Tyr Arg Ala Ser Ser Gln Gln Val Arg 65 70 75 80 Tyr Gly Glu Gly Gly Met Arg Pro Asn Val Ser Leu Pro Cys Gly Gly 85 90 95 Ser Leu Glu Ile Met Ile Glu Tyr Leu Pro Pro Asp Thr Ala Ser Leu 100 105 110 Asp Leu Leu Ile Ala Met Gln Arg Ala Leu Ser Gly Gln Gln Pro Met 115 120 125 Val Lys Leu Ile Arg Pro Gly Glu Arg Ala Gln Trp Glu Ala Met Ala 130 135 140 Ala Asp Arg Arg Leu Pro Ala Leu Ser Val Ser Asp Gln Leu Val Arg 145 150 155 160 Leu Pro Val Gly Ala Ile Pro Glu Leu Leu Val Ala Gly Tyr Ser Ser 165 170 175 Val Ala Phe Glu Cys Ile Arg Leu Gly Gln Met Leu Gly Phe His Val 180 185 190 Arg Val Cys Glu His Arg Pro Gly Met Leu Asp Glu Leu Glu Arg His 195 200 205 Phe Gly Ala Ala Asp Asn Val Thr Leu Val Arg Gln His Pro Ala Arg 210 215 220 Trp Leu Glu Leu Asn Gly Ala His Ala Ala Val Ala Ile Val Ala Leu 225 230 235 240 Thr His Asp Pro Arg Ile Asp Asp Leu Thr Met Met Glu Ala Ile Ala 245 250 255 Thr Pro Ala Phe Tyr Ile Gly Ile Met Gly Ser Val Lys Asn Ser Glu 260 265 270 Lys Arg Arg Ala Arg Leu Gln Gln Ile Ala Gly Met Asp Arg Ser Glu 275 280 285 Leu Asp Arg Ile His Ala Pro Ile Gly Leu Pro Ile Gly Ser Lys Thr 290 295 300 Pro Ala Glu Ile Ala Leu Ser Val Met Ala Asp Ile Val Arg Val Lys 305 310 315 320 Asn Leu Gly Arg Ser Leu Pro Ala Ala 325

【０１３５】 <210> 15 <211> 1535 <212> DNA <213> Methylobacillus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(546) <220> <221> CDS <222> (546)..(1532) <400> 15 atgatggcgg cgggcttcag ccgccgtttt cgtcagcaga gcggtgaaca caaattgctg 60 gctcaactga atggcaagcc gctgttacag cataccctgc aacaggcggc ggccagcggt 120 ctggatctgt ttgtggtaac ccgtccggag caggcagcga ttcgggcgtt gatcgatccg 180 gcgacggcgg tgctgtgcga cagccacggg ttgggtgatt ccattgccgc cggtgttgct 240 gccagcagcg aatacgacgg ctggctgatc gcactcggtg atatgccgtt gatcaccgcc 300 gacagctatc gggccgtcag cgcagcgctg gccgatgcgg cggtggtcag accctgggtc 360 gacggcatac cgggccatcc ggtcggcttt cagcggcact attacccgct gttaaccggc 420 ttactgggtg atgtgggcgc gcaggcaata gtcaaacgtg acgcggttcg cttgcccctt 480 agcgatcgcg gctgtgttta tgacattgac ctgccgggcg atttgcaggc gataaaggaa 540 ttttcatgat tacgctggac caacgggtga ttaatgcggc gttaagcagc tgcgaggcgg 600 ggcaatccgt ctggctgtgt acggtattgc ggacttacgg ctcgtcgccg cgcgcgcccg 660 ggacgctgat gacggtcaat caggcgggcg catactgcgg ttcgctgtca ggtggctgca 720 tcgaaaagga ttttttagcc cagctggcga ccggcgatta ccgtgccagc agtcagcagg 780 tgcgttatgg cgaaggcggc atgcgtccga atgtcagtct gccgtgcggc ggcagtctgg 840 agattatgat tgaatatttg ccgcccgata ccgccagtct ggatttgctg atcgcgatgc 900 agcgggcgct gagcggccag cagccgatgg tgaagctgat ccggcccggt gagcgcgctc 960 agtgggaagc gatggcggcg gatcggcgat tacccgctct cagcgtcagc gaccagctgg 1020 tacggttacc ggtcggcgcg atcccggaac tgctggtggc cggctactcc agcgtggcgt 1080 ttgaatgcat ccggctgggc cagatgctgg gatttcatgt gcgggtttgc gagcatcgtc 1140 ccgggatgct cgatgaactg gagcgccact tcggcgcagc cgataacgtt acgctggtgc 1200 gccagcatcc ggcgcgctgg ctggagctga acggggcgca tgcggccgtg gcgattgtgg 1260 cgctgaccca cgatccacgc attgatgacc tgacgatgat ggaagcgatc gccacgcctg 1320 ccttttatat cggcattatg ggatcggtga agaacagcga aaagcgccgg gcgcggctgc 1380 agcagattgc ggggatggat cgcagcgagc tggaccgcat ccatgccccg attggcctgc 1440 cgattggcag taaaaccccg gcggagatcg cgctatcggt gatggctgat atcgtcaggg 1500 tgaagaacct cgggcgatcg ctcccggctg cctga 1535

【０１３６】 <210> 16 <211> 25 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(25) <400> 16 Ser Glu Arg Ile Ser Leu Thr Met Gln Val Asn Gly Gln Pro Tyr Pro 1 5 10 15 Met Glu Ile Asp Pro Arg Val Thr Leu 20 25

【０１３７】 <210> 17 <211> 21 <212> PRT <213> Methylobacillus sp. <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(21) <400> 17 Met Asn Pro Phe His Trp Lys Val Ala Gln Ser Ala Ser Glu Ala Ala 1 5 10 15 Ala Leu Lys Gln Gln 20

【０１３８】 <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Pseudomonas sp. <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(22) <400> 18 Met Asn Xaa Phe Gly Tyr Ala Lys Pro Asn Ala Val Pro Asp Ala Ile 1 5 10 15 Arg Gln His Gly Pro Gln 20

【０１３９】 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Pseudomonas sp. <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(13) <400> 19 Val Ser Leu Gln Lys Ala Val Pro Arg Val Asp Gly Leu 1 5 10

【０１４０】 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 20 atgcargtna ayggncarcc 20

【０１４１】 <210> 21 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 21 acyttccart graanggrtt cat 23

【０１４２】 <210> 22 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 22 gggaaagctt aaatgtcaga aagaatttcg c 31

【０１４３】 <210> 23 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 23 tgagtggtac cgcccgccag aatctg 26

【０１４４】 <210> 24 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 24 ttcggstayg cnaarccnaa ygc 23

【０１４５】 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 25 acscksggsa cngcyttytg 20

【０１４６】 <210> 26 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 26 gtgaaagctt aaatgaacgg cacccccgcg cgc 33

【０１４７】 <210> 27 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 27 ccacgagctc gtcctagtgc accaactcgt cggc 34

【０１４８】 <210> 28 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 28 caaagagctc tgattacggc ggatgccg 28

【０１４９】 <210> 29 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 29 acgcggatcc gtcagccagc cgggagcgat cg 32

【０１５０】 <210> 30 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 30 tatgagctct atgagcaacc aaggcgaata ccccgaaga 39

【０１５１】 <210> 31 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 31 gtaggatcct gttctagatt aaaccacatc cggcagctta tcgagcag 48

【０１５２】 <210> 32 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 32 gggatggaaa taagctgacc ctctggac 28

【０１５３】 <210> 33 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 33 cgcctgtatg aagctgcgcg aaatgattgc c 31

【０１５４】 <210> 34 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 34 ggaggaagct tatgcccctg acactgaagg tg 32

【０１５５】 <210> 35 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: synthetic ＤＮＡ <400> 35 ttgttctaga ttaaaccaca tccggcagct tatc 34

【図面の簡単な説明】

【図１】は、本発明に関わる組換え体ＤＮＡの構築の概
略図である。制限酵素名は図中に示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/21 1/21 9/04 Ｚ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9/04 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） //(Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:07） Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:13） Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:15） Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:38） Ｃ１２Ｒ 1:425） (Ｃ１２Ｎ 1/21 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:425） Ｃ１２Ｒ 1:185） (Ｃ１２Ｐ 21/02 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:185） Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 21/02 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:38） Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:01） 5/00 Ａ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA08 BA80 CA03 DA01 DA02 DA05 DA11 EA04 GA11 4B050 CC03 DD02 LL03 4B064 AG01 CA02 CA19 CC24 DA13 DA16 4B065 AA01X AA01Y AA26X AA26Y AA41Y AA57X AA87X AB01 AC14 BA02 CA28 CA46 CA60 4H045 AA10 AA20 BA10 CA11 DA89 EA50 FA72 FA74

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アルデヒドオキシダーゼ活性を有するタ
   ンパク質の該アルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる
   活性を有するポリペプチド。
2. 【請求項２】 配列番号１３または１４のアミノ酸配列
   を有するポリペプチド。
3. 【請求項３】 配列番号１３のアミノ酸配列において１
   以上のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
   酸配列からなり、かつ配列番号１４のアミノ酸配列を有
   するポリペプチドと共存させた場合にアルデヒドオキシ
   ダーゼ活性を有するタンパク質のアルデヒドオキシダー
   ゼ活性を向上させる活性を有するポリペプチド、または
   配列番号１４のアミノ酸配列において１以上のアミノ酸
   が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からな
   り、かつ配列番号１３のアミノ酸配列を有するポリペプ
   チドと共存させた場合にアルデヒドオキシダーゼ活性を
   有するタンパク質のアルデヒドオキシダーゼ活性を向上
   させる活性を有するポリペプチド。
4. 【請求項４】 配列番号１３のアミノ酸配列を有するポ
   リペプチドと６０％以上の相同性を有するポリペプチド
   であり、かつ配列番号１４のアミノ酸配列を有するポリ
   ペプチドと共存させた場合にアルデヒドオキシダーゼ活
   性を有するタンパク質のアルデヒドオキシダーゼ活性を
   向上させる活性を有するポリペプチド、配列番号１４の
   アミノ酸配列を有するポリペプチドと６０％以上の相同
   性を有するポリペプチドであり、かつ配列番号１３のア
   ミノ酸配列を有するポリペプチドと共存させた場合にア
   ルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク質のアルデ
   ヒドオキシダーゼ活性を向上させる活性を有するポリペ
   プチド。
5. 【請求項５】 アルデヒドオキシダーゼ活性を有するタ
   ンパク質と、請求項１〜４いずれか１項に記載のポリペ
   プチドとを共存させることを特徴とする、アルデヒドオ
   キシダーゼ活性を有するタンパク質のアルデヒドオキシ
   ダーゼ活性を向上させる方法。
6. 【請求項６】 請求項１〜４いずれか一項に記載のポリ
   ペプチドをコードするＤＮＡ。
7. 【請求項７】 配列番号１５の塩基番号１〜５４６、ま
   たは塩基番号５４６〜１５３２に示される塩基配列から
   なるＤＮＡ。
8. 【請求項８】 請求項６または７記載のＤＮＡとストリ
   ンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡであ
   り、かつアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパク
   質のアルデヒドオキシダーゼ活性を向上させる活性を有
   するポリペプチドをコードするＤＮＡ。
9. 【請求項９】 ＤＮＡがMethylobacillus属に属する微
   生物由来のＤＮＡである、請求項６〜８いずれか１項に
   記載のＤＮＡ。
10. 【請求項１０】 アルデヒドオキシダーゼ活性を有する
    タンパク質であって、請求項１〜４いずれか１項に記載
    のポリペプチドの存在下で該活性の向上するタンパク
    質。
11. 【請求項１１】 タンパク質が、配列番号１のアミノ酸
    配列を有するポリペプチド、配列番号２のアミノ酸配列
    を有するポリペプチドおよび配列番号３のアミノ酸配列
    を有するポリペプチドからなるタンパク質、配列番号５
    のアミノ酸配列を有するポリペプチド、配列番号６のア
    ミノ酸配列を有するポリペプチドおよび配列番号７のア
    ミノ酸配列を有するポリペプチドからなるタンパク質、
    および配列番号９のアミノ酸配列を有するポリペプチ
    ド、配列番号１０のアミノ酸配列を有するポリペプチド
    および配列番号１１のアミノ酸配列を有するポリペプチ
    ドからなるタンパク質からなる群より選ばれるタンパク
    質である、請求項１０記載のタンパク質。
12. 【請求項１２】 タンパク質が、請求項１１記載のポリ
    ペプチドの有するアミノ酸配列において１以上のアミノ
    酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を有
    し、かつ請求項１〜４いずれか１項に記載のポリペプチ
    ドによりアルデヒドオキシダーゼ活性が向上されるタン
    パク質である、アルデヒドオキシダーゼ活性を有するタ
    ンパク質。
13. 【請求項１３】 タンパク質が、請求項１１記載のポリ
    ペプチドの有するアミノ酸配列と６０％以上の相同性を
    有し、かつ請求項１〜４いずれか１項に記載のポリペプ
    チドによりアルデヒドオキシダーゼ活性が向上されるこ
    とを特徴とする、アルデヒドオキシダーゼ活性を有する
    タンパク質。
14. 【請求項１４】 請求項１０〜１３いずれか１項に記載
    のタンパク質をコードするＤＮＡ。
15. 【請求項１５】 ＤＮＡが、配列番号４または８の塩基
    配列を有するＤＮＡである、請求項１４記載のＤＮＡ。
16. 【請求項１６】 請求項１４または１５記載のＤＮＡと
    ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡ
    であり、かつアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタン
    パク質をコードするＤＮＡ。
17. 【請求項１７】 ＤＮＡがMethylobacillus属、Pseudom
    onas属およびEscherichia属から選ばれる属に属する微
    生物由来のＤＮＡである、請求項１４〜１６いずれか１
    項に記載のＤＮＡ。
18. 【請求項１８】 請求項１４〜１７いずれか１項に記載
    のＤＮＡをベクターに組み込んで得られる組換え体ＤＮ
    Ａ。
19. 【請求項１９】 組換え体ＤＮＡが、請求項６〜９いず
    れか１項に記載のＤＮＡを有する組換え体ＤＮＡであ
    る、請求項１８記載の組換え体ＤＮＡ。
20. 【請求項２０】 請求項１８または１９記載の組換え体
    ＤＮＡを宿主細胞に導入して得られる形質転換体。
21. 【請求項２１】 形質転換体が、エシェリヒア属、セラ
    チア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネバ
    クテリウム属、ミクロバクテリウム属、シュードモナス
    属からなる群より選ばれる属に属する微生物である、請
    求項２１記載の形質転換体。
22. 【請求項２２】 形質転換体が、Escherichia coliJM10
    9/pSALODM+M45(FERMBP-7021)、Escherichia coli JM109
    /pSALODP+M45(FERM BP-7022)、またはEscherichia coli
    JM109/pSALODE+M45(FERM BP-7020)からなる群より選ば
    れる形質転換体である、請求項２０または２１記載の形
    質転換体。
23. 【請求項２３】 請求項２０〜２２いずれか１項に記載
    の形質転換体を培地に培養し、培養物中にアルデヒドオ
    キシダーゼ活性を有するタンパク質を生成蓄積させ、該
    培養物からアルデヒドオキシダーゼ活性を有するタンパ
    ク質を採取することを特徴とするアルデヒドオキシダー
    ゼ活性を有するタンパク質の製造法。