JP2001296287A

JP2001296287A - 目的化合物の高感度検出方法

Info

Publication number: JP2001296287A
Application number: JP2000112162A
Authority: JP
Inventors: Matsuhiro Hori; 松浩堀; Takae Fujii; 孝枝藤井
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2000-04-13
Filing date: 2000-04-13
Publication date: 2001-10-26

Abstract

(57)【要約】【課題】検出器に入った夾雑物等のメモリー効果によ
り、目的化合物の測定に悪影響が与えられたり、バック
グラウンドノイズが発生することが抑制され、測定時の
再現性や感度を向上させる目的化合物の高感度検出方法
及びそれに好適に使用しうる目的化合物の高感度検出装
置を提供すること。【解決手段】目的化合物及び夾雑物を含む試料を、溶離
液を送液している液体クロマトグラフィーに導入した際
に、（Ａ）液体クロマトグラフィーのカラムから流出し
た溶液に目的化合物が含有されているときには、該溶液
を検出器に導入し、（Ｂ）液体クロマトグラフィーのカ
ラムから流出した溶液に目的化合物が含有されていない
ときには、該溶液を検出器に導入せずに排出するととも
に、その間、液体クロマトグラフィーに送液している溶
離液と同一の組成を有する溶離液を連続して検出器に導
入する、目的化合物の高感度検出方法、並びに該方法に
使用しうる目的化合物の高感度検出装置。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、目的化合物、すな
わち有機化合物又は無機化合物の高感度検出方法及び該
方法に使用しうる高感度検出装置に関する。更に詳しく
は、活性汚泥中での有機化合物、例えば、界面活性剤の
生分解物を目的化合物とし、その詳細な解析のための高
感度検出の際に好適に使用しうる目的化合物の高感度検
出方法及び該方法に使用しうる高感度検出装置に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】有機化合物の生分解物の詳細な解析を困
難な作業にしている原因は、生分解物が類似化合物の混
合物であることに基づく。有機化合物は、生分解過程に
おいて、酸化、還元、水酸基化等の種々の代謝経路を経
て極性の高い物質に変化していく。特に、ノニオン性界
面活性剤の場合には、元の化合物のエチレンオキシド鎖
やプロピレンオキシド鎖を保持し、その末端の構造が少
しずつ異なる類似化合物に変化していく場合が多い。

【０００３】このような類似化合物の構造解析において
は、ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）を用いることがで
きる。しかしながら、ＮＭＲによれば、それらの化合物
を平均化したような化合物の構造解析しか行なうことが
できない。したがって、詳細な解析を行なう場合には、
各化合物の分離、精製、濃縮という煩雑な操作を行なっ
た後に解析を行なう必要がある。また、各化合物の定量
分析は、各化合物の構造を解析した後に、各化合物を液
体クロマトグラフィー（以下、ＬＣという）、特に高速
液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという）で分
離した後に行なう必要があるため、非常に多くの労力を
必要とする。

【０００４】有機化合物の生分解物の解析においては、
ＬＣの検出器に、質量分析装置（以下、ＭＳという）を
オンライン接続したＬＣ／ＭＳや、プロダクト（ドータ
ー）イオンスキャン、プリカーサー（ペアレント）イオ
ンスキャン、ニュートラルロススキャン、セレクトイオ
ンモニタリング、マルチイオンモニタリング等が可能な
質量分析装置（以下、ＭＳ／ＭＳという）をオンライン
接続したＬＣ／ＭＳ／ＭＳは、複雑で低濃度の類似化合
物に前処理（脱塩、分離、精製、濃縮、誘導体化等）を
施さなくても高感度で迅速に選択的に各化合物を検出す
ることができるため、詳細な解析に応用されている。ま
た、質量分析イオン化法で安定して測定可能となったこ
とに加え、質量分析装置そのものも精度が向上したた
め、種々のＭＳ／ＭＳ解析を短時間で容易に行なうこと
ができ、ＬＣ／ＭＳによる保持情報や分子量情報に加え
て、ＭＳ／ＭＳによる部分構造情報が得られるため、非
常に簡単に詳細な解析を行なうことができるようになっ
てきている。

【０００５】つまり、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いた場合、
ＬＣ／ＭＳにより、オンラインで分離、質量選択的検出
を行ない、更にＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより、構造選択的検
出を行ない、ＭＳやＭＳ／ＭＳスペクトルで構造解析を
行なうため、単純で迅速に詳細な解析を行なうことがで
きる。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いる方法は、特に、生分解
物のように、元の化合物の一部の構造を保持する類似化
合物の混合物に含まれている各化合物の構造解析や定量
を行なうには、非常に有効な方法であるといえる。

【０００６】生分解物の試料中には、分析の対象の生分
解物である目的化合物や、夾雑物が含まれている。夾雑
物としては、分析対象でない有機化合物、無機塩類等が
挙げられる。試料を遠心分離することにより、固形物や
不溶成分が除去されているが、濃縮操作で活性汚泥の緩
衝液由来の無機塩類（リン酸塩、硫酸塩、塩化物等）が
飽和状態となって析出するようになる。このため、析出
した無機塩類を避けてその上層の液をサンプリングして
使用することが考えられている。しかしながら、そのサ
ンプルは、無機塩類が飽和状態の溶液であるため、ＬＣ
／ＭＳ／ＭＳ分析時には、サンプル溶液中に大量に存在
する塩類がＭＳイオン化に悪影響を与えたり、イオン源
の汚染によるメモリー効果により、ベースラインノイズ
が増加するため、測定の再現性や安定性の面で欠点があ
る。

【０００７】また、ＭＳイオン化は、溶離液導入後、し
ばらくの間、イオン源の環境（温度や溶剤雰囲気）が安
定しないため、再現性に影響を与えるという欠点があ
る。ＭＳ以外の検出器、例えば、誘導結合プラズマ発光
分析装置等でも溶離液を導入した後、しばらくの間、再
現性に影響を与える。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、検出器に入
った夾雑物等のメモリー効果により、目的化合物の測定
に悪影響が与えられたり、バックグラウンドノイズが発
生することが抑制され、測定時の再現性や感度を向上さ
せる目的化合物の高感度検出方法及びそれに好適に使用
しうる目的化合物の高感度検出装置を提供することを課
題とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）目的
化合物及び夾雑物を含む試料を、溶離液を送液している
ＬＣに導入した際に、（Ａ）ＬＣのカラムから流出した
溶液に目的化合物が含有されているときには、該溶液を
検出器に導入し、（Ｂ）ＬＣのカラムから流出した溶液
に目的化合物が含有されていないときには、該溶液を検
出器に導入せずに排出するとともに、その間、ＬＣに送
液している溶離液と同一の組成を有する溶離液を連続し
て検出器に導入する、目的化合物の高感度検出方法、並
びに（２）目的化合物及び夾雑物を含む試料を導入す
るための導入部を有するＬＣのカラム（以下、Ｐとい
う）と、Ｐに送液している溶離液と同一の組成を有する
溶離液を導入するための溶離液送入用ポンプ（以下、Ｑ
という）と、Ｐを検出器（以下、Ｒという）又は排出口
（以下、Ｓという）に切り換えて接続し、ＱをＲ又はＳ
に切り換えて接続するための切換バルブ（以下、Ｔとい
う）を有し、ＴがＰ及びＱと、Ｒ及びＳとの間に配設さ
れてなる目的化合物の高感度検出装置に関する。

【００１０】

【発明の実施の形態】目的化合物としては、特に限定が
ないが、例えば、生分解物をはじめ、有機合成化合物、
天然有機化合物等の有機化合物及び無機化合物が挙げら
れる。また、試料に含まれる目的化合物の濃度は、検出
の対象とする目的化合物の種類等によって異なるので、
一概には決定することができない。通常、質量分析にお
ける一般的な有機化合物の検出限界や、ダイナミックレ
ンジ、ＭＳのイオン化の安定性等を考慮すれば、目的化
合物の濃度は、１０^-14〜１０重量％程度、好ましくは
１０^-11〜１０重量％程度、更に好ましくは１０^-8〜１
重量％程度とすることが望ましい。

【００１１】本明細書において、「夾雑物」とは、試料
に含まれている目的化合物以外の化合物をいう。夾雑物
は、例えば添加物等のように試料に添加されたものであ
ってもよく、あるいは外部から混入したものであっても
よい。夾雑物の種類及びその量は、試料の種類等によっ
て異なるので一概には決定することができない。夾雑物
の一例としては、目的化合物が生分解物である場合に
は、活性汚泥由来の有機化合物、緩衝液由来の無機塩類
（リン酸塩、硫酸塩、塩化物等）等が挙げられる。

【００１２】溶離液としては、通常のＬＣに用いられる
ものであれば特に限定されることない。その例として
は、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトニ
トリル、ヘキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、
水、クロロホルム、ジクロロメタン、トルエン等が挙げ
られ、それらは単独であってもよく、あるいは混合物で
あってもよい。

【００１３】本発明の高感度検出方法を図１に基づいて
説明する。

【００１４】図１は、本発明の有機化合物の高感度検出
方法に好適に使用しうる高感度検出装置１の一実施態様
を示す概略説明図である。

【００１５】図１に示された検出装置１においては、Ｌ
Ｃ用ポンプ２は、試料を導入するための導入部２ａに接
続され、導入部２ａは、カラム（Ｐ）３に接続されてい
る。また、検出装置１には、試料に含まれている溶離液
と同一の組成を有する溶離液を導入するための溶離液送
入用ポンプ（Ｑ）６が配設されている。カラム（Ｐ）３
を検出器（Ｒ）５又は排出口（Ｓ）７に切り換えて接続
し、溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６を検出器（Ｒ）５又は
排出口（Ｓ）７に切り換えて接続するための切換バルブ
（Ｔ）４が、カラム（Ｐ）３及び溶離液送入用ポンプ
（Ｑ）６と、検出器（Ｒ）５及び排出口（Ｓ）７との間
に配設されている。試料中の目的化合物と夾雑物がカラ
ム（Ｐ）３で分離されるため、カラム（Ｐ）３から流出
した溶液には、目的化合物又は夾雑物と、溶離液とが含
まれる。

【００１６】なお、切換バルブ（Ｔ）４と溶離液送入用
ポンプ（Ｑ）６との間には、背圧調整用カラムを設ける
ことが、切換バルブ（Ｔ）４での切換時に検出装置１に
導入される溶離液の更なる同一条件化（組成、温度、流
量）の観点から好ましい。

【００１７】ＬＣとしては、例えば、吸着クロマトグラ
フィー、順相系クロマトグラフィー、逆相系クロマトグ
ラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー等が挙げられ
る。これらのＬＣは、溶離液がグラジェントされる形式
のグラジェントＬＣであることが、幅広い種類の有機化
合物の分析を行なう観点から好ましい。グラジェントＬ
Ｃの形式は、勾配式及び段階式のいずれでもよい。

【００１８】従来、試料は、導入部２ａに導入され、カ
ラム（Ｐ）３から溶液が流出するが、この溶液は、その
まま検出器（Ｒ）５に導入されている。したがって、か
かる溶液に夾雑物が含まれている場合、その夾雑物が検
出器（Ｒ）５内に入り、目的化合物の測定時にも検出器
（Ｒ）５内に残存し、検出器（Ｒ）５内で検出しようと
している目的化合物のＭＳイオン化に悪影響を与えた
り、バックグラウンドノイズを発生させるため、測定に
おける再現性や感度が低下するおそれがあった。

【００１９】これに対し、本発明では、カラム（Ｐ）３
から流出した溶液に目的化合物が含まれていない場合に
は、該溶液を検出器（Ｒ）５に導入せずに切換バルブ
（Ｔ）４によって排出口（Ｓ）７から排出する。したが
って、この溶液に含まれている夾雑物が検出器（Ｒ）５
内に流入しないため、検出しようとしている目的化合物
のＭＳイオン化にこの夾雑物による悪影響が回避され、
バックグラウンドノイズの発生が効果的に阻止されるの
で、測定における再現性や感度が低下するという問題を
大幅に回避することができる。

【００２０】なお、カラム（Ｐ）３から流出した溶液に
目的化合物が含有されていないときには、該溶液を検出
器（Ｒ）５に導入せずに切換バルブ（Ｔ）４によって排
出口（Ｓ）７から排出するが、その間、ＬＣ用ポンプ２
に導入された試料に含まれている溶離液と同一の組成を
有する溶離液を溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６から切換バ
ルブ（Ｔ）４を介して連続的に検出器（Ｒ）５に導入す
る。したがって、検出器（Ｒ）５内には、連続して溶離
液が導入されている状態にある。これにより、検出器
（Ｒ）５内の溶媒雰囲気がほぼ一定に保たれているの
で、溶媒雰囲気等の変動による測定値の変動が抑制さ
れ、再現性のある測定値を得ることができる。更に、再
現性を向上させる場合には、検出器（Ｒ）５内に導入さ
れる、カラム（Ｐ）３から流出した溶液の液温と溶離液
の液温との温度差は、±５℃の範囲内にあることが好ま
しく、±２℃の範囲内にあることがより好ましい。

【００２１】この溶液を検出器（Ｒ）５に導入させず
に、溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６からの溶離液を連続し
て検出器（Ｒ）５内に導入させるために、切換バルブ
（Ｔ）４を切り換えることにより、カラム（Ｐ）３と排
出口（Ｓ）７とを接続し、また溶離液送入用ポンプ
（Ｑ）６と検出器（Ｒ）５とを接続する。

【００２２】なお、カラムから流出した溶液に目的化合
物が含有されているかどうかは、マスクロマトグラムや
セレクトイオンモニタリングにより、容易に確認するこ
とができる。

【００２３】カラム（Ｐ）３から流出した溶液に目的化
合物が含有されている場合には、この溶液が検出器
（Ｒ）５に導入され、溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６から
送液される溶離液が検出器（Ｒ）５内に導入されないよ
うにするために、切換バルブ（Ｔ）４を切り換えること
により、カラム（Ｐ）３と検出器（Ｒ）５とを接続し、
また溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６と排出口（Ｓ）７とを
接続する。

【００２４】検出器（Ｒ）５としては、質量分析装置、
蒸発光散乱検出装置、誘導結合プラズマ発光分析装置
（以下、ＩＣＰという）、示差屈折計、電気化学検出装
置、赤外吸光度計、ポーラログラフ、電気伝導度計、熱
検出装置、放射能測定装置等が挙げられる。これらの中
では、従来法で測定した場合には溶離液及び夾雑物の影
響を受けやすく感度が低いのに対し、本発明の方法によ
って測定した場合には溶離液及び夾雑物の影響を受けに
くく感度が高いという効果を発現させることができるこ
とから、質量分析装置、蒸発光散乱検出装置及びＩＣＰ
が好ましく、質量分析装置がより好ましい。質量分析装
置としては、電子衝撃イオン化質量分析装置、大気圧化
学イオン化質量分析装置、エレクトロスプレーイオン化
質量分析装置、ターボイオンスプレー質量分析装置、高
速原子衝突質量分析装置等が挙げられる。具体的には、
ＭＳ〔パーキンエルマー社(Perkin Elmer)製、商品名：
サイエックス(SCIEX）API300MS〕、ＭＳ／ＭＳ〔ＴＩＳ
−ＭＳ（陽イオン、陰イオン）〕又はＴＩＳ−ＭＳ／Ｍ
Ｓ（陽イオン、陰イオン）が挙げられる。

【００２５】本発明の高感度検出装置１に使用しうる切
換バルブ（Ｔ）４の一実施態様を図２〜３に示す。

【００２６】図２は、カラム（Ｐ）３からの溶液に目的
化合物が含有されているときの、四方切換バルブ（Ｔ）
４の切換状態を示す概略説明図である。四方切換バルブ
（Ｔ）４により、カラム（Ｐ）３は検出器（Ｒ）５と接
続され、また溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６が排出口
（Ｓ）７と接続されている。

【００２７】カラム（Ｐ）３から導入された溶液は、矢
印Ａで示されるように、導入管３ａから切換バルブ
（Ｔ）４内の流路４ａを介して送入路５ａに流れ、検出
器（Ｒ）５へと運ばれる。一方、溶離液送入用ポンプ
（Ｑ）６から導入された溶離液は、矢印Ｂで示されるよ
うに、導入管６ａから切換バルブ（Ｔ）４内の流路４ｂ
を介して排出口（Ｓ）７へと運ばれる。

【００２８】一方、カラム（Ｐ）３からの溶液に目的化
合物が含有されていないときには、図３に示されるよう
に、切換バルブ（Ｔ）４により、カラム（Ｐ）３は排出
口（Ｓ）７と接続され、また溶離液送入用ポンプ（Ｑ）
６が検出器（Ｒ）５と接続されている。

【００２９】カラム（Ｐ）３から導入された溶液は、矢
印Ａで示されるように、導入管３ａから切換バルブ
（Ｔ）４内の流路４ａを介して排出口（Ｓ）７へと運ば
れる。一方、溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６から導入され
た溶離液は、矢印Ｂで示されるように、導入管６ａから
切換バルブ（Ｔ）４内の流路４ｂを介して送入路５ａに
流れ、検出器（Ｒ）５へと運ばれる。

【００３０】以上のようにして、カラム（Ｐ）３から導
入管３ａに導入される溶液に目的化合物が含有されてい
るか否かに応じて切換バルブ（Ｔ）４を切り換えるだけ
で、溶液に目的化合物が含有されている場合には、カラ
ム（Ｐ）３からの溶液を検出器（Ｒ）５に導入し、かつ
溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６からの溶離液を排出口
（Ｓ）７から排出させ、また溶液に目的化合物が含有さ
れていない場合には、カラム（Ｐ）３からの溶液を排出
口（Ｓ）７から排出させ、かつ溶離液送入用ポンプ
（Ｑ）６からの溶離液を連続して検出器（Ｒ）５に導入
することを容易に行なうことができる。

【００３１】本発明の高感度検出装置の他の実施態様と
して、例えば、図４に示されるように、図１に示される
切換バルブ（Ｔ）４の代わりに三方切換バルブ８が２個
が配設された装置が挙げらる。この装置も本発明におい
て好適に使用しうるものである。

【００３２】更に、本発明の高感度検出装置の他の実施
態様として、例えば、図１に示されたＬＣ用ポンプ２と
溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６の代わりに、図５に示され
るように溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６と三方Ｔコネクタ
ー９が設けられ、また三方Ｔコネクター９と検出器
（Ｒ）５との間に三方切換バルブ１０、１１が設けら
れ、溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６からの液を三方Ｔコネ
クター９で２液に分ける装置が挙げられる。この装置に
は、簡素化を図ることができるという利点がある。な
お、この装置には、三方切換バルブ１０、１１の切換時
に、検出器（Ｒ）５に導入される溶離液の更なる同一条
件化（組成、温度、流量）の観点から、三方Ｔコネクタ
ー９と三方切換バルブ１１との間に背圧調整用カラム１
２が設けられていることが更に好ましい。なお、溶離液
送入用ポンプ（Ｑ）６には、ＬＣの性能を高める観点か
ら、ＬＣ用ポンプ２を用いることが好ましい。

【００３３】

【実施例】実施例１（１）解析サンプル生分解物分析用サンプルには、式（Ｉ）：Ｒ¹Ｏ−（ＥＯ)₅（ＰＯ)₂（ＥＯ)₃−Ｈ（Ｉ）（式中、Ｒ¹は炭素数１２又は１４のアルキル基、ＥＯ
は -CH₂CH₂O-基、ＰＯは-CH₂CH(CH₃)O-基を示す）で表
されるポリオキシアルキレンアルキルエーテル型ノニオ
ン界面活性剤〔花王（株）製、商品名：エマルゲンＫＳ
−１０８〕（以下、化合物Ａという）、又は式(II): Ｒ¹Ｏ−（ＥＯ)₇（ＰＯ)₂（ＥＯ)₃−Ｈ (II) （式中、Ｒ¹、ＥＯ及びＰＯは前記と同じ）で表される
ポリオキシアルキレンアルキルエーテル型ノニオン界面
活性剤〔花王（株）製、商品名：エマルゲンＫＳ−１１
０〕（以下、化合物Ｂという）を用いた。

【００３４】（２）生分解試験とサンプルの前処理化合物Ａ及び化合物Ｂを用いて活性汚泥による生分解試
験を１０週間行なった。

【００３５】汚泥からのサンプリングは、２、３、４、
６、８、１０週間目に行なった。サンプルの前処理とし
て、サンプリングした活性汚泥残液を遠心分離により、
固形物や不溶成分を除去し、窒素気流下で４０℃でトッ
ピングにより濃縮した。

【００３６】（３）分析条件図１に示されるのと同様の構造を有する検出装置を使用
し、図２又は図３に示される実施態様で実施した。

【００３７】ＨＰＬＣ分析装置において、ＬＣ２にはヒ
ューレット・パッカード社製、１１００システムを用い
た。切換バルブ（Ｔ）４として、６方切換バルブ（レオ
ダイン社製、品番：７７５０）の６個のポートのうち、
２個のポートを配管で接続して４方切換バルブとしたも
のを用いた。溶離液送入用ポンプ（Ｑ）６として、ポス
トカラムスィッチ用ポンプ〔（株）日立製作所製、品
番：６５５〕を用いた。

【００３８】また、カラム（Ｐ）３と切換バルブ（Ｔ）
４との間に、紫外線吸光度計をモニター用検出器として
設けた。

【００３９】測定装置において、流量は1.0mL/min 、注
入量は0.02mL、カラム温度は40℃に調整した。紫外線吸
光度計の検出波長を210nm とした。検出器（Ｒ）５とし
て、パーキンエルマー社製、ＭＳ：サイエックスＡＰＩ
３００、ＭＳ（陽イオン検出）を使用した。イオン化法
は、ＴＩＳ（ターボイオンスプレー、乾燥窒素ガス７Ｌ
／ｍｉｎ）を使用した。

【００４０】イオン検出時間をフルスキャンで400msec
(scan Range m/z=100/500) 、マルチイオンモニタリン
グで60msec（１イオンあたり）とした。

【００４１】ガードカラム及び分析用カラムには、それ
ぞれ（財）化学品検査協会製、Ｌ−Ｃolumn ODS(10^*4.
0mm i.d.) 及びＬ−Ｃolumn ODS(150 ^*4.6mm i.d.) を
用いた。

【００４２】溶離液に、水（0.1 ％酢酸、10mmol/L酢酸
アンモニウム水溶液）と、メタノール溶液（0.1 ％酢
酸、10mmol/L酢酸アンモニウム水溶液）を流速1.0mL/mi
n で用いた。

【００４３】溶離液のメタノールのグラジェント条件と
して、〔３％（０〜５min)〕−〔３〜97％（５〜20mi
n)〕−〔97％ (20〜30min)〕のリニアグラジェントプロ
グラムを用いた。

【００４４】また、ポストカラムスィッチ用溶液とし
て、97％のメタノール（0.1 ％酢酸、10mmol/L酢酸アン
モニウム）水溶液を用い、ポストカラムスィッチは、サ
ンプル注入後2.7 分経過後に行ない、カラムからの溶離
液を導入した。

【００４５】なお、水としてミロポア(MILLIPORE) 社
製、商品名：ミリ-Q(MILLI-Q) を用いて製造されたイオ
ン交換水を用い、メタノールとして関東化学（株）製の
ＨＰＬＣ用メタノールを用い、酢酸アンモニウムとして
片山化学工業（株）製の試薬特級を用い、また酢酸とし
て和光純薬（株）製の試薬特級を用いた。

【００４６】表１にＭＳ及びＭＳ／ＭＳの測定条件を示
す。

【００４７】

【表１】

【００４８】ＭＳ測定は、イオン源、オルフィス及びリ
ング電圧を、陽イオン検出では、それぞれ４２００Ｖ、
７５Ｖ及び３１０Ｖに、陰イオン検出では、それぞれ−
３０００Ｖ、−２０Ｖ及び−２４０Ｖに調整して行なっ
た。

【００４９】イオン源の温度は、陽イオン及び陰イオン
とも４２５℃に調整した。また、ＭＳ／ＭＳ測定は、陽
イオン及び陰イオンの検出とも、衝突活性解離(CAD; Co
llision Activated Dissorption)ガスに窒素ガスを用
い、圧力３．５×１０^-3Ｐａ、衝突エネルギーは１９．
０ｅＶで行なった。

【００５０】（４）定量用標準化合物定量用標準化合物として、陽イオン検出法では、トリプ
ロピレングリコールを、陰イオン検出法では、ジプロピ
レングリコールモノカルボキシメチルエーテルを用い
た。以上の結果を図６に示す。

【００５１】比較例１実施例１において、カラム（Ｐ）３からの溶液に目的化
合物が含有されていないときでもカラム（Ｐ）３と検出
器（Ｒ）５とが接続されるように切換バルブ（Ｔ）４を
切換えた以外は、実施例１と同様にして分析を行なっ
た。その結果を図７に示す。

【００５２】図６に示された実施例１の結果と、図７に
示された比較例１の結果とを対比して、実施例１の方法
によれば、無機塩由来のベースラインノイズが減少し、
安定した検出を行なうことができることがわかる。

【００５３】

【発明の効果】本発明の方法によれば、ＭＳイオン源に
析出した無機塩等の夾雑物のメモリー効果により、微量
の目的化合物のＭＳイオン化に悪影響を与えたり、バッ
クグラウンドノイズが発生することが抑制され、測定に
おける再現性や感度を向上させることができる。

【００５４】また、本発明の高感度検出装置を用いれ
ば、ＭＳイオン源に析出した無機塩のメモリー効果によ
り、ＭＳイオン化に悪影響を与えたり、バックグラウン
ドノイズが発生することが抑制され、測定における再現
性や感度を向上させることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の高感度検出法に使用される高感度検出
装置の一実施態様を示す概略説明図である。

【図２】本発明の高感度検出法に使用される高感度検出
装置に使用される切換バルブの一実施態様を示す概略説
明図である。

【図３】本発明の高感度検出法に使用される高感度検出
装置に使用される切換バルブの一実施態様を示す概略説
明図である。

【図４】本発明の高感度検出法に使用される高感度検出
装置の他の一実施態様を示す概略説明図である。

【図５】本発明の高感度検出法に使用される高感度検出
装置の他の一実施態様を示す概略説明図である。

【図６】本発明の実施例１におけるＬＣ／ＭＳのＭＳ測
定結果を示す図である。

【図７】従来の比較例１におけるＬＣ／ＭＳのＭＳ測定
結果を示す図である。

【符号の説明】

１検出装置２ＬＣ用ポンプ２ａ試料を導入するための導入部３カラム３ａ導入管４切換バルブ４ａ切換バルブ内の流路４ｂ切換バルブ内の流路５検出器５ａ検出器の送入路６溶離液送入用ポンプ６ａ溶離液送入用ポンプの導入管７排出口８三方切換バルブ９三方Ｔコネクター１０三方切換バルブ１１三方切換バルブ１２背圧調整用カラム

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】目的化合物及び夾雑物を含む試料を、溶
離液を送液している液体クロマトグラフィーに導入した
際に、（Ａ）液体クロマトグラフィーのカラムから流出
した溶液に目的化合物が含有されているときには、該溶
液を検出器に導入し、（Ｂ）液体クロマトグラフィーの
カラムから流出した溶液に目的化合物が含有されていな
いときには、該溶液を検出器に導入せずに排出するとと
もに、その間、液体クロマトグラフィーに送液している
溶離液と同一の組成を有する溶離液を連続して検出器に
導入する、目的化合物の高感度検出方法。
【請求項２】液体クロマトグラフィーが、グラジェン
ト液体クロマトグラフィーである請求項１記載の高感度
検出方法。
【請求項３】目的化合物及び夾雑物を含む試料を導入
するための導入部を有する液体クロマトグラフィーのカ
ラム（以下、Ｐという）と、Ｐに送液している溶離液と
同一の組成を有する溶離液を導入するための溶離液送入
用ポンプ（以下、Ｑという）と、Ｐを検出器（以下、Ｒ
という）又は排出口（以下、Ｓという）に切り換えて接
続し、ＱをＲ又はＳに切り換えて接続するための切換バ
ルブ（以下、Ｔという）を有し、ＴがＰ及びＱと、Ｒ及
びＳとの間に配設されてなる目的化合物の高感度検出装
置。
【請求項４】液体クロマトグラフィーが、グラジェン
ト液体クロマトグラフィーである請求項３記載の高感度
検出装置。