JP2001172259A - 蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び蛍光性基含有カルボジイミド化合物並びにこれらの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 天然由来の核酸も含めて核酸及び蛋白質に蛍
光性基を簡便に効率よく導入することが可能であり、且
つ水に対して十分な溶解性を有する新規な蛍光性基含有
カルボジイミド化合物、および、前記蛍光性基含有カル
ボジイミド化合物の製造に適した、蛍光性基との結合が
簡便かつ効率的に行える蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体を提供する。 【解決手段】 ハロゲン又はスルホン酸基を有する新規
な蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体を作製し、
これを用いてアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、
窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選
ばれる基を少なくとも１つ有する新規な蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物を作製する。さらに、標識物質で標
識した核酸を用いるハイブリダイゼーションによる核酸
の検出方法に、標識物質として前記蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物を用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体及び蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物に関する。詳しくは、蛍光性基との結合
が簡便かつ効率的に行える、ハロゲン又はスルホン酸基
を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び
その製造方法、並びに、核酸及び蛋白質に蛍光性基を簡
便に効率よく導入可能な、カルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１
つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物及びその製
造方法、さらにそれを利用した分析方法に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】蛍光物質を核酸に導入する方法として
は、例えば、蛍光物質が結合したヌクレオチドを用いて
酵素等により核酸へ導入する方法（特開平６−２７１５
９９号公報）、ビオチン標識した核酸に蛍光物質が結合
したストレプトアビジンを結合させる方法、アミノリン
カーが結合した核酸にアミン反応性基含有蛍光物質を反
応させる方法等がある。また、上記以外の方法では、核
酸塩基に対して極めて高い反応性を示す蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物を用いる方法（特開平１０−２８７
８７０号公報）等がある。

【０００３】しかし、上記方法のうち特開平６−２７１
５９９号公報記載の方法、ビオチン標識による方法、ア
ミノリンカー結合を用いる方法においては、蛍光物質を
天然由来の核酸に導入することができず、操作が煩雑で
あるという欠点がある。また、上記蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物を用いる方法では、その分子内に４級ア
ンモニウム塩が存在するため、水に対する溶解性は良好
である。しかし、水に対する溶解性が低い蛍光物質、例
えば、近赤外域に吸収を有する程度に大きなπ電子系を
持つ蛍光物質を使用するためには、水に対する溶解性の
さらなる向上が求められていた。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、天然由来の
核酸も含めて核酸及び蛋白質に蛍光性基を簡便に効率よ
く導入することが可能であり、且つ水に対して十分な溶
解性を有する新規な蛍光性基含有カルボジイミド化合
物、および、前記蛍光性基含有カルボジイミド化合物の
製造に適した、蛍光性基との結合が簡便かつ効率的に行
える蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体を提供す
ることを課題とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ハロゲン又は
スルホン酸基を有するカルボジイミド化合物を原料とし
て、カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ
基から選ばれる基を少なくとも１つ有する、水への溶解
性が十分な蛍光性基含有カルボジイミド化合物を製造す
ることができ、この蛍光性基含有カルボジイミド化合物
を用いれば、核酸及び蛋白質に蛍光性基を導入する際
に、天然由来の核酸も含めて簡便に効率よくこれらを導
入することが可能であることを見出し、本発明を完成さ
せた。

【０００６】すなわち本発明は、以下のとおりである。 （１）下記一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はスルホ
ン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆
体。

【０００７】

【化７】 Ｂ−Ｙ³−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｙ²−Ｗ−Ｙ¹−［Ａ］_n−Ｙ⁴−Ｘ ・・・（Ｉ） ［式（Ｉ）中、Ｘはハロゲン原子又はスルホン酸基を表
す。Ａは、−ＣＨ₂−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−（Ｒ¹は炭素数１から２０ま
での直鎖、環状若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂
肪族炭化水素基を表す。）、−ＮＲ²Ｒ³−（Ｒ²及びＲ³
は、独立して水素原子、炭素数１から２０までの直鎖若
しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
又は置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール
基若しくはアラルキル基を表す。但し、Ｒ²とＲ³のどち
らか一方が水素原子である場合、他方は炭素数１から２
０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪
族炭化水素基、置換基を有してもよいシクロアルキル
基、アリール基若しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ
²とＲ³が相互に結合して全体として酸素を含有してもよ
い含窒素複素環式基を形成してもよい。）、−ＣＯＯ
−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ₂−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−
及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群から選ばれる官能基を表
し、ｎは０又は１を表す。Ｗは直接結合又は４級オニウ
ム基を表す。Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴は、各々下記一般式
（II）で示される官能基を表す。Ｂは水素原子又は式
（Ｉ）中の−Ｗ−Ｙ¹−［Ａ］_n−Ｙ⁴−Ｘと同一もしく
は異なる一価の有機基を表す。また、前記Ｂ、Ｙ¹、
Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ又はＷで表される官能基はいずれの
官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒
素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボ
キシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ば
れる基を有してもよい。］

【０００８】

【化８】 −（ＣＨ₂）_p−（Ｌ）_r−（ＣＨ₂）_q− ・・・（II） ［式（II）中、Ｌは、−ＣＨ₂−、−ＮＨＣＯ−、−Ｃ
ＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−（Ｒ¹は、式
（Ｉ）中におけるものと同意である。）、−ＮＲ²Ｒ³−
（Ｒ²及びＲ³は、式（Ｉ）中におけるものと同意であ
る。）、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ₂−、−
ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群から選
ばれる官能基を表す。ｐ及びｑは各々０から２０の整数
を表し、ｒは０又は１を表す。］

【０００９】（２）下記一般式（III）で表されるアル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
とも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物。

【００１０】

【化９】 ［式（III）中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ、Ｘ、Ｗ
及びｎは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
る。Ｆは蛍光性基を表し、Ｑは３級又は４級窒素若しく
は３級又は４級リンを表す。Ｒ⁴及びＲ⁵は、独立して水
素原子、炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐した
飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、又は置換基を有
してもよいシクロアルキル基、アリール基若しくはアラ
ルキル基を表す。但し、Ｒ⁴とＲ⁵のどちらか一方が水素
原子である場合、他方は炭素数１から２０までの直鎖若
しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール基若
しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ⁴とＲ⁵が相互に結
合して−Ｑ⁺Ｒ⁴Ｒ⁵−として酸素を含有してもよい含窒
素複素環式基又は含リン複素環式基を形成してもよい。
Ｙ⁵は、前記Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴と同義である。ま
た、前記Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ｙ⁵、Ａ、Ｗ、Ｒ⁴、
Ｒ⁵及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能基は、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少な
くとも１つ有する。］

【００１１】（３）式（Ｉ）において、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、
Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する（１）の蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物前駆体。

【００１２】（４）式（III）において、Ｂ、Ｙ¹、
Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つ
の官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、
窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選
ばれる基を少なくとも１つ有する（２）の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物。

【００１３】（５）式（III）において、Ｙ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵
及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカ
リ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを
含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する（２）の蛍光性基含有カルボジイミド化合
物。

【００１４】（６）下記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の工
程を含む（１）の蛍光性基含有カルボジイミド化合物前
駆体の製造方法： （Ａ）下記一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネ
ート化合物と、下記一般式（Ｖ）で表されるアミン化合
物とを反応させて下記一般式（VI）で表される（チオ）
尿素化合物を合成する工程、

【００１５】

【化１０】 ［式中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ、Ｗ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｚは、水酸基、アルキ
ル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル
基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基、又は
ホスホニウム基を表す。］ （Ｂ）前記（Ａ）工程で得られた一般式（VI）で表され
る化合物をハロゲン化又はスルホン化して下記一般式
（VII）で表される化合物を作製する工程、

【００１６】

【化１１】 ［式（VII）中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ｗ、Ａ、ｎ
及びＸは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
る。Ｔは、酸素原子またはイオウ原子を表す。］ （Ｃ）前記（Ｂ）工程で得られた一般式（VII）で表さ
れる化合物を脱水反応又は酸化的脱硫反応させてカルボ
ジイミド化する工程。

【００１７】（７）前記（６）の製造方法において、
Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なく
とも１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する、（３）の
蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体の製造方法。

【００１８】（８）前記（１）の蛍光性基含有カルボジ
イミド化合物前駆体及び下記一般式（VIII）で表される
蛍光性基含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合
物及び蛍光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１
つが、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
官能基を有するように選択し、反応させる工程を含む、
（２）の蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方
法。

【００１９】

【化１２】Ｑ'Ｒ⁴Ｒ⁵−Ｙ⁵−Ｆ ・・・（VIII） ［式（VIII）中、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｙ⁵及びＦは、各々前記一
般式（III）におけるのと同意である。Ｑ'は、水酸基、
アルキル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェ
ニル基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基及
びホスホニウム基から選ばれる基で置換されていてもよ
い２級又は３級窒素含有基若しくは２級又は３級リン含
有基を表す。］

【００２０】（９）前記（８）の製造方法において、
Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なく
とも１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する、（４）の
蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方法。

【００２１】（１０）前記（８）の製造方法において、
Ｙ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦから選ばれる少なくとも１つの官
能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも１つ有する、（５）の蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物の製造方法。

【００２２】（１１）標識物質で標識した核酸を用いる
ハイブリダイゼーションによる核酸の検出方法におい
て、標識物質として、（２）のアルカリ金属、アルカリ
土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基
で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及
びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物を用いることを特徴とす
る方法。

【００２３】（１２）標識物質として、（４）のアルカ
リ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを
含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用い
る（１１）の方法。

【００２４】（１３）標識物質として、（５）のアルカ
リ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを
含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用い
る（１１）の方法。

【００２５】なお、本明細書において、「イソ（チオ）
シアネート化合物」とは、イソシアネート化合物又はイ
ソチオシアネート化合物を示し、「（チオ）尿素化合
物」とは、尿素化合物又はチオ尿素化合物を示す。ま
た、本明細書において、「スルホニル基含有誘導体基」
とは、スルホニル基の２価のうち一方が原子または基に
結合して生じる１価の基を意味する。スルホニル基含有
誘導体基の例としては、アルキルスルホニル基、アルコ
キシフェニル基が挙げられる。

【００２６】

【発明の実施の形態】以下に、本発明の実施の形態を説
明する。まず、本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化
合物について説明する。

【００２７】（１）蛍光性基含有カルボジイミド化合物 本発明のアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物は、上記一般式（III）で表される化合物であ
り、その製造方法は特に限定されないが、例えば、上記
一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はスルホン酸基を有
する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び上記
一般式（VIII）で表される蛍光性基含有化合物からそれ
ぞれ、カルボジイミド化合物及び蛍光性基含有化合物
を、両化合物の少なくとも１つが、アルカリ金属、アル
カリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基
性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ
基及びホスホ基から選ばれる官能基を有するように選択
し、反応させることにより得られるものである。

【００２８】（ｉ）蛍光性基含有カルボジイミド化合物
前駆体 本発明においてハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物前駆体は、上記一般式
（Ｉ）で表される構造を有する。

【００２９】式（Ｉ）中のＸは、ハロゲン原子又はスル
ホン酸基であれば、特に制限はなく、公知のものを用い
ることができる。ハロゲン原子としては特に、Ｃｌ、Ｂ
ｒ及びＩ原子が反応性の観点から好ましい。また、スル
ホン酸基としては、トシル基及びメシル基が反応性の観
点から好ましい。

【００３０】式（Ｉ）中のＡは、−ＣＨ₂−、−ＮＨＣ
Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−、−
ＮＲ²Ｒ³−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ
₂−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群
から選ばれる官能基が挙げられ、ｎは０又は１を表す。

【００３１】Ｒ¹は炭素数１から２０までの直鎖、環状
若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基
を表す。また、Ｒ²及びＲ³は、独立して水素原子、炭素
数１から２０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは
不飽和脂肪族炭化水素基、又は置換基を有してもよいシ
クロアルキル基、アリール基若しくはアラルキル基を表
す。但し、Ｒ²とＲ³のどちらか一方が水素原子である場
合、他方は炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐し
た飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有し
てもよいシクロアルキル基、アリール基若しくはアラル
キル基を表す。また、Ｒ²とＲ³が相互に結合して全体と
して酸素を含有してもよい含窒素複素環式基を形成して
もよい。さらに、上述の通りｎは０又は１であり、一般
式（Ｉ）で表される化合物はＡを有しても有しなくても
よい。

【００３２】また、Ａが有する置換可能な水素は、アル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換さ
れていてもよい。

【００３３】Ｗは直接結合又は４級オニウム基を表す。
なお、ここで用いる「４級オニウム基」とは、式（Ｉ）
に組み込まれて４級オニウム塩を形成し得る基を意味す
る。この様な４級オニウム基として具体的には、下記一
般式（IX）、（Ｘ）又は（XI）で表される基が挙げられ
る。

【００３４】

【化１３】 ［式中のＲ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸及びＲ⁹は、それぞれ独立して、
炭素数１〜２０の直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不
飽和脂肪族炭化水素基、シクロアルキル基又は炭素数６
〜２０のアリール基若しくはアラルキル基を表す。ま
た、これらの炭化水素基は、カルボキシル基、スルホニ
ル基含有誘導体基、ホスホニウム基、フェニル基、シク
ロアルキル基あるいは水酸基で置換されていてもよ
い。］

【００３５】これらのうちでも本発明において特に好ま
しく用いられる４級オニウム基としては、上記一般式
（IX）においてＲ⁶及びＲ⁷がアルキル基である４級アン
モニウム基、上記一般式（Ｘ）で表させる基等が挙げら
れる。

【００３６】さらに、Ｗが有する置換可能な水素は、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換
されていてもよい。

【００３７】Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴は、カルボジイミド
基とＢ、Ａ又はＸとを結合するリンカー部分であり、各
々上記一般式（II）で表される官能基を示す。上記式
（II）中、Ｌは、−ＣＨ₂−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮ
Ｈ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−、−ＮＲ²Ｒ³−、−
ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ₂−、−ＮＨＣ(Ｓ)
ＮＨ−及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群から選ばれる官能
基を表し、ｐ及びｑは各々０から２０の整数を表し、ｒ
は０又は１を表す。Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は、式（Ｉ）中に
おけるものと同意である。

【００３８】また、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴として好まし
くは、直接結合又は主鎖の炭素数が１から１０でありか
つ分岐鎖としてメチル基を有してもよいアルキレン基を
用いることができる。前記アルキレン基としては、特に
制限はなく公知のものを用いることができる。また、こ
れらのアルキレン基が−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−
Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−、−ＮＲ²Ｒ³−、−ＣＯＯ
−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ₂−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−
及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群から選ばれる官能基を介
して相互に連結したものであってもよい。

【００３９】さらに、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴においては
いずれも、各々が有する置換可能な水素が、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換されてい
てもよい。

【００４０】Ｂは水素原子又は一価の有機基を表し、一
価の有機基の場合は式（Ｉ）中の−Ｗ−Ｙ¹−［Ａ］_n−
Ｙ⁴−Ｘと同一であっても異なってもよい。好ましくは
アルキル基、３級アミノ基又は４級アンモニウム基であ
り、好適な基としては以下に示すものが挙げられる。

【００４１】（イ）窒素原子が水素原子、飽和若しくは
不飽和炭化水素基、アリール基、アラルキル基又は蛍光
性基を含む有機基で４級化されてもよい含窒素複素環式
基、例えば、ピリジル基、ピロリジニウム基若しくはピ
ペリジニウム基等。

【００４２】（ロ）窒素原子が水素原子、飽和若しくは
不飽和炭化水素基、アリール基、アラルキル基、又は蛍
光性基を含む有機基で４級化されているアミノ基、例え
ば、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基若しくはジイ
ソプロピルアミノ基等。

【００４３】（ハ）下記一般式（XII）又は（XIII）で
表される複素環式３級アミノ基若しくは４級アンモニウ
ム基等。

【００４４】

【化１４】 ［式中、Ｒ¹¹及びＲ¹²は、各々水素原子、炭素数が１か
ら１０までの直鎖若しくは分岐鎖の飽和若しくは不飽和
炭化水素基、アリール基又はアラルキル基を示す。Ｊは
アニオンを示し、具体的には、サルフェートイオン、ア
ルキルサルフェートイオン、アリールサルフェートイオ
ン、ハロサルフェートイオン、ハライドイオン等を示
す。Ｒ¹³は酸素原子またはそのイオン原子又はメチレン
基を表す。ｍは、０又は１である。］ 具体的には、下記式で表される基：

【００４５】

【化１５】 ［式中、Ｒ¹⁴及びＲ¹⁵は、各々水素原子、炭素数が１か
ら１０までのアルキル基又炭素数が１から１０までのア
ルキル基で置換されていてもよいフェニル基を表す。］

【００４６】（ニ）置換基を有してもよいアルキル基、
例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプ
ロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ
−ブチル基、シクロヘキシル基及び、アリール基、例え
ば、フェニル基等。

【００４７】また、Ｂが有する置換可能な水素は、アル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換さ
れていてもよい。

【００４８】上記のように、本発明の一般式（Ｉ）で示
されるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体において、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、
Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ又はＷで表される官能基はいずれの官能基
も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
を有してもよいが、本発明において好ましくは、これら
から選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１
つ有するものである。

【００４９】アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、
窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基として
具体的には、−ＣＯＯＮａ、−ＣＯＯＫ、（−ＣＯＯ）
₂Ｍｇ、（−ＣＯＯ）₂Ｃａ、（−ＣＯＯ）₂Ｂａ、−Ｃ
ＯＯＮＨ₄、−ＣＯＯＮＲ¹Ｈ₃、−ＣＯＯＮＲ¹ ₂Ｈ₂、−
ＣＯＯＮＲ¹ ₃Ｈ、−ＣＯＯＮＲ¹ ₄、−ＳＯ₃Ｎａ、−Ｓ
Ｏ₃ＮＨ₄、−ＳＯ₃ＮＲ ¹Ｈ₃、−ＳＯ₃ＮＲ¹ ₂Ｈ₂、−Ｓ
Ｏ₃ＮＲ¹ ₃Ｈ、−ＳＯ₃ＮＲ¹ ₄、−ＰＯ₃Ｎａ₂、−ＰＯ₃
Ｋ₂、−ＰＯ₃Ｃａ、−ＰＯ₃（ＮＨ₄）₂、−ＰＯ₃（ＮＲ
¹Ｈ₃）₂、−ＰＯ₃（ＮＲ¹ ₂Ｈ₂）₂、−ＰＯ₃（ＮＲ
¹ ₃Ｈ）₂、−ＰＯ₃（ＮＲ¹ ₄）₂、−ＯＰＯ₃Ｎａ₂、−Ｏ
ＰＯ₃Ｋ₂、−ＯＰＯ₃（ＮＲ¹ ₄）₂（Ｒ¹は、前記式
（Ｉ）中のＲ¹と同意である。）等が挙げられる。

【００５０】この様な、上記一般式（Ｉ）で表される本
発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体とし
て、具体的には、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピ
ル）−Ｎ−（ヘキサン−６−アイオダイド）−カルボジ
イミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ
−（ヘキサン−６−ブロミド）−カルボジイミド、Ｎ−
メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン
−６−クロライド）−カルボジイミド、Ｎ−メチル−
（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−ト
シレート）−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モル
ホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−メシレート）
−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロ
ピル）−Ｎ−（プロピル−（２−エチルカルボン酸ナト
リウム）−３−アイオダイド）−カルボジイミド、Ｎ−
メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（プロピル
−（２−エチルカルボン酸カリウム）−３−アイオダイ
ド）−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノ
プロピル）−Ｎ−（プロピル−（２−プロピルカルボン
酸ナトリウム）−３−アイオダイド）−カルボジイミ
ド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−
（プロピル−（２−イソプロピルカルボン酸ナトリウ
ム）−３−アイオダイド）−カルボジイミド等が挙げら
れる。

【００５１】（ii）蛍光性基含有カルボジイミド化合物 本発明のアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物は、例えば、上記一般式（Ｉ）で表されるハロ
ゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体及び上記一般式（VIII）で表される蛍
光性基含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合物
及び蛍光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１つ
が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官
能基を有するように選択し、反応させることにより得ら
れるものであり、その構造は上記一般式（III）で表さ
れるものである。

【００５２】上記（III）中の蛍光性基Ｆとしては、特
に制限がなく公知のものを用いることができるが、具体
的には、アントラセン誘導体、クマリン誘導体、ピレン
誘導体、ペリレン誘導体、ダンシル誘導体、ローダミン
誘導体、オキサゾール誘導体、ベンゾチアゾール誘導
体、ベンゾオキサジアゾール誘導体、ジピロメテンボロ
ンジフルオライド誘導体、チアゾールオレンジ誘導体、
蛍光希土類金属化合物誘導体及びシアニン誘導体等から
得られる基が挙げられる。

【００５３】また、蛍光性基Ｆが有する置換可能な水素
は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
で置換されていてもよい。

【００５４】また、上記式（III）中のＱは、３級又は
４級窒素若しくは３級又は４級リンを表す。式（III）
中、Ｒ⁴及びＲ⁵は、独立して水素原子、炭素数１から２
０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪
族炭化水素基、又は置換基を有してもよいシクロアルキ
ル基、アリール基若しくはアラルキル基を表す。但し、
Ｒ⁴とＲ⁵のどちらか一方が水素原子である場合、他方は
炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐した飽和若し
くは不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有してもよいシ
クロアルキル基、アリール基若しくはアラルキル基を表
す。また、Ｒ⁴とＲ⁵が相互に結合して−Ｑ⁺Ｒ⁴Ｒ⁵−と
して酸素を含有してもよい含窒素複素環式基又は含リン
複素環式基を形成してもよい。なお、上記ＱはＲ⁴及び
Ｒ⁵との組み合わせ、つまり−Ｑ⁺Ｒ⁴Ｒ⁵−というかたち
で、３級又は４級オニウム基を形成しているものであ
る。前記３級又は４級オニウム基のうちの好ましい基と
しては、上記Ｗにおいて好ましい基として例示した４級
オニウム基と同様のものが例示できる。

【００５５】また、Ｒ⁴及びＲ⁵が有する置換可能な水素
は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
で置換されていてもよい。

【００５６】式（III）中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、
Ａ、Ｘ、Ｗ、Ｒ²、Ｒ³及びｎは、各々前記一般式（Ｉ）
におけるのと同意である。さらに、上記式（III）中の
Ｙ⁵は、上記式（Ｉ）中のＹ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴と同意
である。

【００５７】この様に、本発明の一般式（III）で示さ
れる蛍光性基含有カルボジイミド化合物においては、上
記Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ｙ⁵、Ａ、Ｗ、Ｒ⁴、Ｒ⁵及
びＦで表される官能基はいずれの官能基も、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を含有すること
ができるが、それと同時にこれらから選ばれる少なくと
も１つの官能基が必ず、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有するものであ
る。

【００５８】例えば、上記一般式（Ｉ）で表されるハロ
ゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体と上記一般式（VIII）で表される蛍光
性基含有化合物を反応させることにより得られる本発明
の一般式（III）で示される蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物においては、前記前駆体由来のＢ、Ｙ¹、Ｙ²、
Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する場合には、前記蛍光性基含有
化合物由来のＹ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦで表される官能基は
いずれの官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、
又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換され
たカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基
から選ばれる基を有しても、有さなくてもよい。

【００５９】同様に、前記蛍光性基含有化合物由来のＹ
⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する場合には、前記前駆体由来の
Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷで表される官能基は
いずれの官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、
又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換され
たカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基
から選ばれる基を有しても、有さなくてもよい。

【００６０】この様な、上記一般式（III）で表される
本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物として、具
体的には、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−
Ｎ−（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロ
ピル）−１−ローダミンＢチオウレア−カリウム塩））
−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロ
ピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルア
ミノプロピル）−１−ローダミンＢチオウレア−ナトリ
ウム塩））−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モル
ホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−（Ｎ−３−
（ジメチルアミノプロピル）−１−ローダミンＢチオウ
レア−テトラメチルアンモニウム塩））−カルボジイミ
ド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−
（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）−１−フルオロセインチオウレア−カリウム塩））
−カルボジイミド、２−［２−［３−［［１，３−ジヒ
ドロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−
２Ｈ−インドール−２−イリデン］エチリデン］−２−
フェノキシ−１−シクロヘキセン−１−イル］−エテニ
ル］−１，１−ジメチル［３−プロピルチオウレア−Ｎ
−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサ
ン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピル）−カル
ボジイミド））］１Ｈ−ベンツ［ｅ］−インドリウム
塩、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−
（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）−１−カスケードブルーアミノエチル−４−アジド
ベンズアミド−トリナトリウム塩））−カルボジイミド
等が挙げられる。

【００６１】次に、本発明の蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物の製造方法について説明する。

【００６２】（２）蛍光性基含有カルボジイミド化合物
の製造方法 本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方法
は、特に限定されるものではないが、一般的には、上記
一般式（Ｉ）で表される蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体及び上記一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合物及び蛍
光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１つが、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官能基を
有するように選択し、これらを反応させる製造方法が挙
げられる。

【００６３】具体的には、上記一般式（Ｉ）で表される
蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び上記一般
式（VIII）で表される蛍光性基含有化合物を組み合わせ
たときに、両化合物の少なくとも１つが、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官能基を有するよ
うな（ｉ）上記一般式（Ｉ）で表される蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物前駆体を製造する工程、（ii）上記
一般式（VIII）で表される蛍光性基含有化合物を製造す
る工程、（iii）前記（ｉ）工程で製造した蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体と、前記（ii）工程で製
造した上記一般式（VIII）で表される蛍光性基含有化合
物とを反応させる工程を行うことにより、本発明の蛍光
性基含有カルボジイミド化合物を製造することができ
る。

【００６４】（ｉ）上記（Ｉ）式で表される蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体を製造する工程 本発明におけるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物前駆体は、各々所望する
蛍光性基含有カルボジイミド化合物の構造に応じて適宜
選択できる。このようなハロゲン又はスルホン酸基を有
する蛍光性基含有カルボジイミド基含有化合物前駆体を
製造する方法については、特に制限されないが、例え
ば、まず、（Ａ）イソシアネート化合物とハロゲン誘導
体又はスルホン誘導体に変換されるために必要な官能基
を有する１級アミン誘導体等のアミン化合物を出発原料
として尿素又はチオ尿素化合物を作製し、次いで、
（Ｂ）この（チオ）尿素化合物をハロゲン化又はスルホ
ン化処理して、さらに、（Ｃ）得られる化合物について
脱水あるいは酸化的脱硫によるカルボジイミド化を行う
ことにより達成される。以下に（Ａ）から（Ｃ）の工程
を詳しく説明する。

【００６５】（Ａ）チオ（尿素）化合物を製造する工程 一般的に尿素化合物は、アミン化合物とイソシアネート
化合物との反応により合成することが可能であり[J.H.S
aunders and R.Slocombe,Chem.Rev.,43,203(1948)]、ま
た、チオ尿素誘導体についても、アミン化合物とイソチ
オシアネート化合物との反応により合成することが一般
的に行われている[N.A.Ivanov,R.V.Viasova,V.A.Gancha
rava, and L.N.Smirnov,Izv.Vyssh.Zaved.Khim.Tekhno
l.,19(7),1010(1976)]。

【００６６】本発明の製造方法においても上記方法を適
用することが可能であり、上記一般式（IV）で表される
イソ（チオ）シアネート化合物と、上記一般式（Ｖ）で
表されるハロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変換され
るために必要な官能基を有するアミン化合物とを反応さ
せて、上記一般式（VI）で表される（チオ）尿素化合物
を合成することができる。なお、これにより得られる一
般式（VI）で表される（チオ）尿素化合物も、ハロゲン
誘導体又はスルホン誘導体に変換されるために必要な官
能基、具体的には、水酸基、アルキル基、アルケニル
基、ビニル基、アリル基、フェニル基、カルボキシル
基、スルホニル基含有誘導体基、ホスホニウム基等を有
するものである。

【００６７】上記反応の具体例として、例えば、Ｎ−
（３−モルホリノプロピル）イソチオシアネート、Ｎ−
３−ジメチルアミノプロピル−Ｎ−３−（４−モルホリ
ノ）−プロピルイソチオシアネート、１−エチル−３，
３−ジメチルアミノプロピルイソチオシアネート又はビ
ス−（３，３−ジメチルアミノ）プロピルイソチオシア
ネート等の一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネ
ート化合物と、６−アミノヘキサノール、５−アミノペ
ンタノール、４−アミノブタノール又は３−アミノペン
タノール等の一般式（Ｖ）で表されるハロゲン誘導体又
はスルホン誘導体に変換されるために必要な官能基を有
するアミン化合物を、ジクロロメタン、クロロホルム又
はジメチルホルムアミド（以下「ＤＭＦ」という）等の
公知の溶剤中で混合する反応を挙げることができる。こ
の様にして上記一般式（VI）で示されるハロゲン誘導体
又はスルホン誘導体に変換されるために必要な官能基を
有する（チオ）尿素化合物が得られる。

【００６８】また、上記方法以外にも、以下に反応式を
示す様に、第１のアミン化合物と尿素を縮合させ１置換
尿素を得て、更に第２のハロゲン誘導体又はスルホン誘
導体に変換されるために必要な官能基を有する１級アミ
ンを反応させることにより２置換尿素中間体を合成する
ことができる[T. L. Davis and K. C. Blanchard, Org.
Synth. Coll Vol. 1, 453(1941)]。

【００６９】

【化１６】 ［式中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ、Ｗ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｚは、水酸基、アルキ
ル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル
基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基、又は
ホスホニウム基を表す。］

【００７０】また、前記１置換尿素は第１のアミン化合
物とシアン酸又はその塩とを反応させることによっても
合成することができる[F. Kurzer, Org. Synth. Coll.
Vol.4, 49(1963)]。さらに、これらの反応において第１
のアミン化合物としてハロゲン誘導体又はスルホン誘導
体に変換されるために必要な官能基を有する１級アミン
を用いることも可能であり、その場合には、上記第２の
アミン化合物はハロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変
換されるために必要な官能基を有しても有さなくてもよ
い。

【００７１】なお、上記２置換尿素誘導体は、上述の様
にしてハロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変換される
ために必要な官能基を有するアミン化合物とイソシアネ
ート化合物とを反応させることにより直接得ることもで
きる。

【００７２】また、上記一般式（VI）で示される（チ
オ）尿素化合物がモルホリノアルキル基、モルホリノア
ルキルエステル基、モルホリノアルキルエーテル基、モ
ルホリノアルキルアミド基、モルホリノアルキルケトン
基、モルホリノアルキルチオウレア基、トリアルキルア
ミノ基、トリアルキルエステルアミノ基、トリアルキル
エーテル基、トリアルキルアミドアミノ基、トリアルキ
ルケトンアミノ基、トリアルキルチオウレアアミノ基、
トリアルキルホスホニウム基、トリアルキルエステルホ
スホニウム基、トリアルキルエーテルホスホニウム基、
トリアルキルアミドホスホニウム基、トリアルキルケト
ンホスホニウム基、トリアルキルチオウレアホスホニウ
ム基等の３級窒素又はリン含有基を有する場合には、こ
れをＤＭＦ等の公知の溶剤中でｐ−トルエンスルホン酸
メチル、ヨウ化メチル、ジメチル硫酸等と反応させて４
級オニウム塩化することにより、水溶性を向上させるこ
とができる。

【００７３】ここで、上記（Ａ）工程は、以下に説明す
る（Ａ'）イソ（チオ）シアネート化合物と１級アミン
誘導体等のアミン化合物を出発原料として尿素又はチオ
尿素化合物を作製する工程、次いで、（Ａ"）この（チ
オ）尿素化合物に、これら化合物がハロゲン誘導体又は
スルホン誘導体に変換されるために必要な官能基を導入
する工程の２段階で行うこともできる。

【００７４】この方法においては、まず、（Ａ'）工程
で、上記一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネー
ト化合物と同様の化合物と、下記一般式（Ｖ'）で表さ
れるアミン化合物とを反応させて下記一般式（IV'）で
表される（チオ）尿素化合物を合成する。この反応も上
記同様に、イソ（チオ）シアネート化合物とアミン化合
物との一般的な反応である。

【００７５】

【化１７】 ［式中、Ｂ、Ｙ²及びＹ³は、各々前記一般式（Ｉ）にお
けるのと同意である。Ｗ'は、水酸基、アルキル基、ア
ルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル基、カルボ
キシル基、スルホニル基含有誘導体基及びホスホニウム
基から選ばれる基で置換されてもよい、２級又は３級窒
素含有基若しくは２級又は３級リン含有基を表す。Ｔ
は、酸素原子またはイオウ原子を表す。］

【００７６】また、アミン化合物と二硫化炭素との反応
により上記（IV'）で示される化合物として以下の様な
チオ尿素化合物を合成することもできる[W. W. Levis,
Jr.and E. A. Waipert, U.S. Pat. 3,168,560(1965)]。

【００７７】

【化１８】 ［式中、Ｂ及びＹ³は、各々前記一般式（Ｉ）における
のと同意である。］

【００７８】この他に、アミン化合物と尿素を縮合させ
１置換尿素を得て、更に第２の又は同一の１級アミンを
反応させることにより上記（IV'）で示される化合物と
して以下の様な２置換尿素中間体を合成することができ
る[T. L. Davis and K. C. Blanchard, Org. Synth. Co
ll Vol. 1, 453(1941)]。

【００７９】

【化１９】 ［式中、Ｂ、Ｙ²及びＹ³は、各々一般式（Ｉ）における
のと同意である。Ｗ'は、置換されてもよいオニウム基
を表す。］

【００８０】また、前記１置換尿素はアミン化合物とシ
アン酸又はその塩とを反応させることによっても合成す
ることができる[F. Kurzer, Org. Synth. Coll. Vol.
4, 49(1963)]。

【００８１】次いで、上記（Ａ'）工程で得られた一般
式（IV'）で表される（チオ）尿素化合物を下記一般式
（Ｖ"）で表されるハロゲン誘導体あるいはスルホン誘
導体に変換されるために必要な官能基を有するアミン化
合物と反応させて一般式（VI）で表される化合物を作製
する（Ａ"）工程が行われる。

【００８２】

【化２０】 ［式中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ｗ、Ａ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｄは、水酸基、ハロゲ
ン原子又はスルホニル基含有誘導体基を表し、Ｚは、水
酸基、アルキル基、アルケニル基、ビニル基、アリル
基、フェニル基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘
導体基、又はホスホニウム基を表す。］

【００８３】この様にして（Ａ）工程において上記一般
式（VI）で示されるハロゲン誘導体又はスルホン誘導体
に変換されるために必要な官能基を有する（チオ）尿素
化合物が、上記１段階の反応工程又は（Ａ'）、（Ａ"）
工程の２段階の反応工程により得られる。

【００８４】（Ｂ）ハロゲン化又はスルホン化工程 上記一般式（VI）で示される（チオ）尿素化合物にハロ
ゲンを導入する方法としては、例えば、前記（チオ）尿
素化合物に水酸基が導入されている場合には、前記化合
物と、ハロゲン化試薬、例えば、ハロゲン化水素、ハロ
ゲン化ナトリウム、ハロゲン化カリウム、ハロゲン化リ
ン、ハロゲン化ホスホン酸トリエステル、ハロゲン化ホ
スフィン、ハロゲン化チオニル、酸ハロゲン化合物等を
ＤＭＦ、ベンゼン、ピリジン等の公知の溶剤中で混合し
反応させる方法が挙げられる[O.Kamm, C. S. Marvel, O
rg. Syhth., 1, 25(1941); T. A. Wnuk, P. Kovacic,
J.Am. Chem. Soc., 97, 5807(1975); J. D. Bartleson,
R. E. Burk, H. P. Lankelma, J. Am. Chem. Soc., 6
8, 2513(1946); K. Friedlich, H. K. Thieme, Synthes
is, 111(1973); H. Stone, H. Shechter, Org. Synth.,
4, 323(1963); T.H. Bevan, T. Malkin, D. B. Smith,
J. Chem. Soc., 1383(1955)]。

【００８５】また、上記ハロゲン化試薬として、より具
体的には、臭化水素酸、臭化ナトリウム、塩化亜鉛、三
臭化リン、三塩化リン、ヨウ化カリウム、ヨウ化メチル
トリフェニルホスホン酸、ヨウ素、ヨウ化ナトリウム、
塩化メタンスルホニル、トリフェニルホスフィンジ臭
素、トリフェニルホスフィンジ塩素、トリフェニルホス
フィンジヨウ素、塩化チオニル、臭化チオニル等が挙げ
られる。

【００８６】また、上記一般式（VI）で示される（チ
オ）尿素化合物にスルホン酸基を導入する方法として
は、例えば、前記（チオ）尿素化合物に水酸基が導入さ
れている場合には、前記化合物と、スルホン化試薬、例
えば、ハロゲン化スルホン酸等をジクロロメタン、クロ
ロホルム等の公知の溶剤中で混合し反応させる方法が挙
げられる。

【００８７】また、上記スルホン化試薬として、具体的
には、塩化ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン
酸塩化物、塩化メタンスルホン酸、臭化ベンゼンスルホ
ン酸、ｐ−トルエンスルホン酸臭化物、臭化メタンスル
ホン酸等が挙げられる。

【００８８】この様にして上記一般式（VI）で示される
（チオ）尿素化合物をハロゲン化又はスルホン化するこ
とにより、上記一般式（VII）で示される（チオ）尿素
化合物のハロゲン誘導体又はスルホン酸誘導体が得られ
る。

【００８９】（Ｃ）脱水又は酸化的脱硫工程 本発明の製造方法においては、上記で得られる一般式
（VII）で示される化合物をさらに脱水あるいは酸化的
脱硫反応させることにより、本発明の上記一般式（Ｉ）
で示される蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体へ
と導くことができる。

【００９０】上記脱水反応は、上記一般式（VII）で示
される化合物のうち、式中のＴが酸素である尿素化合物
について行われる反応であり、前記尿素化合物を３級ア
ミン中でｐ−トルエンスルホン酸クロリドと共に加熱す
ることで達成できる[G. Amiard and R. Heymers, Bull.
Soc. Chim. Fr., 1360(1956)]。また、４級アンモニウ
ム塩の存在下でｐ−トルエンスルホン酸クロリド及び炭
酸カリウムを用いても行うことができる[Zsuzsa M. Jas
zay., Synthesis, 520(1987)]。

【００９１】本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合
物前駆体を得るために、上記一般式（VII）で示される
化合物のうち、式中のＴがイオウであるチオ尿素化合物
には、酸化的脱硫反応が施される。前記酸化的脱硫反応
には、一般的に、酸化水銀が脱硫剤として用いられる。
酸化水銀以外にも、酸化鉛[F. Zetzehe and A. Fredric
h, Chem. Ber., 73, 1114(1940)]、酸化亜鉛[R. F. Col
es, U.S. Pat. 2946819(1960)]、炭酸鉛、硝酸鉛、塩化
鉛[J. C. Sheehan, U.S. Pat. 3135748(1964)]等を用い
ることができる。さらに、アルカリ性で次亜塩素酸ナト
リウムを用いてもよい[H. Stetter and C. Wulff, Che
m. Ber., 95, 2302(1962)]。

【００９２】本発明の上記一般式（Ｉ）で示されるハロ
ゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体は上述のようにして製造することがで
きるが、上記製造法はあくまでも例示にすぎず、各工程
の順序は上記順序に制限されるものではない。例えば、
ハロゲン化又はスルホン化とカルボジイミド化はどちら
が先でも構わない。

【００９３】さらに、上記（Ａ）工程が、（Ａ'）工
程、（Ａ"）工程の２段階の反応工程により行われる場
合には、（Ａ'）工程で得られた一般式（VI'）で示され
る化合物をカルボジイミド化した後、（Ａ"）工程でハ
ロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変換されるために必
要な官能基の導入し、最後にハロゲン化工程を行うこと
で、本発明の上記一般式（Ｉ）で示されるハロゲン又は
スルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合
物前駆体を製造することも可能である。

【００９４】この様にして、本発明の一般式（Ｉ）で示
されるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体が得られるが、一般式
（Ｉ）中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ又はＷで表され
る官能基はいずれの官能基においてもこれらが有する置
換可能な水素原子は、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基で置換されていてもよい。

【００９５】前記アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基は、一般式（Ｉ）で示される蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体が上記の様にして製造され
る際に、用いられる原料の段階で既に含まれていてもよ
いし、原料がこれらの基を含有しない場合は製造の最初
の段階で原料に導入されてもよく、また、製造の途中で
中間体に導入されてもよい。さらには最終的に得られる
一般式（Ｉ）で示される蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体がこれらの基を含有していない場合には最後
にこれらの基を導入してもよい。

【００９６】また、導入の方法としては、カルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
と導入のための官能基を有する化合物を用い、前記カル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホ基等をナト
リウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マ
グネシウム等のアルカリ土類金属塩、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基の塩とした後、これを上記蛍光性基
含有カルボジイミド化合物前駆体の原料、中間体、最終
物質等に導入する方法が挙げられる。あるいは、前記化
合物の有するカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基、
ホスホ基等を塩とせずに、そのまま上記前駆体の原料、
中間体、最終物質等に導入した後、これら官能基を上記
同様の塩としてもよい。

【００９７】上記前駆体の原料がカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を有する
化合物の場合、これらをアルカリ金属塩、アルカリ土類
金属塩、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基の
塩とした後、これを上記製造工程に用いればよい。この
場合、原料のカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及
びホスホ基を塩とせずにそのまま上記製造工程に用い、
得られた化合物について適当な段階で、これら官能基を
上記同様の塩としてもよい。

【００９８】ここで、上記化合物をこれらが有するカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホ基等の官能
基を介して、アルカリ金属塩化、アルカリ土類金属塩
化、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基の塩と
する方法としては、特に制限はなく、公知の方法を用い
ることができる。

【００９９】具体的には、上記カルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を含有する
化合物に、水、アルコール等の公知の溶剤を加えてこれ
を溶解させ、得られた溶液に、さらに、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウ
ム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化テトラ
メチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、
臭化テトラメチルアンモニウム又はヨウ化テトラメチル
アンモニウム等を加えて混合し反応させる方法等が挙げ
られる。

【０１００】（ii）上記一般式（VIII）で表される蛍光
性基含有化合物を製造する工程 上記（ｉ）で得られるハロゲン又はスルホン酸基を有す
る蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体と反応させ
ることにより、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を有する本発明の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物を製造することができる上記一般式（VIII）
で表される蛍光性基含有化合物は、各々所望する蛍光性
基含有カルボジイミド化合物に応じて適宜選択できる。

【０１０１】この様な、上記一般式（VIII）で示される
蛍光性基含有化合物を得るには、蛍光性基Ｆを含有する
適当な蛍光性基含有化合物、具体的には、アントラセン
誘導体、クマリン誘導体、ピレン誘導体、ペリレン誘導
体、ダンシル誘導体、ローダミン誘導体、オキサゾール
誘導体、ベンゾチアゾール誘導体、ベンゾオキサジアゾ
ール誘導体、ジピロメテンボロンジフルオライド誘導
体、チアゾールオレンジ誘導体、蛍光希土類金属化合物
誘導体及びシアニン誘導体等に、２級あるいは３級窒素
含有基又は２級あるいは３級リン含有基を、一般的な方
法により導入すればよい。ここで、蛍光性基Ｆと２級あ
るいは３級窒素含有基又は２級あるいは３級リン含有基
とを有する上記一般式（VIII）で示される蛍光性基含有
化合物を製造する際の製造方法は特に限定されるもので
はない。

【０１０２】具体例として、一般式（VIII）中のＹ⁵が
−（ＣＨ₂）_p−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−（ＣＨ₂）_q−である
化合物の製造方法を以下に示すが、この反応はイソチオ
シアネート基と蛍光性基を含有する化合物と２級又は３
級窒素若しくはリン含有基を有するアミン化合物との反
応を示す一般的な反応である。

【０１０３】

【化２１】 ［式中、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦは、各々前記一般式（III）に
おけるのと同意である。Ｑ'は、前記一般式（VIII）に
おけるのと同意である。］

【０１０４】さらに具体的な例として、フルオロセイン
イソチオシアネート、ローダミンＢイソチオシアネート
又は２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−
ジメチル−３−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドー
ル−２−イリデン］エチリデン］−２−フェノキシ−１
−シクロヘキセン−１−イル］−エテニル］−１，１−
ジメチル［３−プロピルイソチオシアネート］１Ｈ−ベ
ンツ［ｅ］−インドリウム塩等と、１級及び３級のアミ
ノ基を有するアミン誘導体、例えば、Ｎ−３−ジメチル
アミノプロピル−Ｎ−３−（４−モルホリノ）プロピレ
ン、１−エチル−３，３−ジメチルアミノプロピレン、
ビス−（３，３−ジメチル）アミノプロピレン又はビス
−（３，３−ジメチルアミノ）プロピレン等をジクロロ
メタン、クロロホルム又はＤＭＦ等の公知の溶剤中で混
合し反応させる方法等が挙げられる。

【０１０５】この様にして、上記一般式（VIII）で示さ
れる蛍光性基含有化合物が得られるが、一般式（VIII）
中、Ｙ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦで表される官能基はいずれの
官能基においてもこれらが有する置換可能な水素原子
は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
で置換されていてもよい。

【０１０６】前記アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基は、一般式（VIII）で示される蛍光性基含
有化合物が上記の様にして製造される際に、用いられる
原料の段階で既に含まれていてもよいし、原料がこれら
の基を含有しない場合は製造の最初の段階で原料に導入
されてもよく、また、製造の途中で中間体に導入されて
もよい。さらには最終的に得られる一般式（VIII）で示
される蛍光性基含有化合物がこれらの基を含有していな
い場合には最後にこれらの基を導入してもよい。

【０１０７】また、導入の方法としては、上記蛍光性基
含有カルボジイミド化合物前駆体の場合と同様とするこ
とができる。原料がカルボキシル基、スルホ基、ホスホ
ノ基及びホスホ基から選ばれる基を有する化合物の場合
の扱いについても、上記蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体の場合と同様とすることができる。さらに、
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を有する化合物をこれらが有する前記官能
基を介して、アルカリ金属塩化、アルカリ土類金属塩
化、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基の塩と
する方法についても、上記同様とすることができる。

【０１０８】（iii）前記（ｉ）工程で製造した蛍光性
基含有カルボジイミド化合物前駆体と、前記（ii）工程
で製造した上記一般式（VIII）で表される蛍光性基含有
化合物とを反応させる工程 本発明の上記一般式（III）で表されるアルカリ金属、
アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する
塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホス
ホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有
する蛍光性基含有カルボジイミド化合物は、前記（ｉ）
工程で製造した一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はス
ルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物
前駆体と前記（iii）工程で製造した一般式（VIII）で
表される蛍光性基含有化合物とを反応させることにより
製造される。

【０１０９】ここで用いられる一般式（Ｉ）で表される
ハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物前駆体および一般式（VIII）で表される
蛍光性基含有化合物においては、その何れかが必ずアル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
とも１つ有する化合物でなければならない。

【０１１０】つまり、一般式（Ｉ）で表されるハロゲン
又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド
化合物前駆体が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を少なくとも１つ有する場合、つまり、一
般式（Ｉ）中の、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷか
ら選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカリ金属、
アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する
塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホス
ホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有
する場合には、一般式（VIII）で表される蛍光性基含有
化合物は、前記官能基を有しても、有さなくてもよい。

【０１１１】同様に一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を少なくとも１つ有する場合、つまり、一
般式（VIII）中の、Ｙ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦから選ばれる
少なくとも１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土
類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で
置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及び
ホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する場合に
は、一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はスルホン酸基
を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体は、
前記官能基を有しても、有さなくてもよい。

【０１１２】この様な一般式（Ｉ）で表されるハロゲン
又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド
化合物前駆体と一般式（VIII）で表される蛍光性基含有
化合物とを反応させる方法は、特に限定されないが、具
体的には、前記両化合物を、ジクロロメタン、クロロホ
ルム又はＤＭＦ等の公知の溶剤中、適当な割合で混合し
反応させることで製造することができる。

【０１１３】本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合
物においては、その製造に際して、上記一般式（Ｉ）で
表されるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体を用いることにより、例
えば、構造中にカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ
基、ホスホ基等の官能基を有する蛍光性基含有化合物に
ついても、これら官能基を前記化合物からあらかじめ除
去することなく、塩のかたちで残してカルボジイミド基
の導入が可能となり、従来の方法に比べて工程数が少な
く効率のよい製造が可能である。

【０１１４】また、カルボキシル基、スルホ基、ホスホ
ノ基、ホスホ基等の官能基をその構造中に含む市販品の
蛍光性基含有化合物に対しても、これらを塩として簡便
にカルボジイミド基を導入することができるため、利用
できる蛍光基含有化合物の種類を大幅に増やすことがで
きるものである。

【０１１５】以上述べた方法により得られる本発明の蛍
光性基含有カルボジイミド化合物は、核酸検出法やイム
ノアッセイ法において標識物質として好適に使用するこ
とができる。その場合は、標識しようとするＤＮＡ等の
核酸又は抗原もしくは抗体等のタンパク質とともに、本
発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物を、溶媒中で
混合させる等の方法で接触させることにより、前記核酸
又はタンパク質に結合させることができる。すなわち、
本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物を、核酸塩
基と高い反応性を示すカルボジイミド基において核酸又
はタンパク質と結合させることにより、高感度な検出試
薬として働く蛍光性物質をこれらに付加し、標識とする
ことができるのである。よって、本発明の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物と核酸又はタンパク質と結合させ
る場合には、カルボジイミド基が反応しやすい条件下、
例えばｐＨ７．５〜８．５程度のアルカリ性の条件下で
両者を接触させるのが好ましい。さらに、本発明の蛍光
性基含有カルボジイミド化合物は、化学発光分析法等に
も適用可能である。

【０１１６】また、本発明の蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物においては、カルボジイミド基がカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホ基等の官能基の塩と
同一系内に存在できるため、従来の蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物に比べて、水溶性が十分に改善されてお
り、上記核酸検出法やイムノアッセイ法において標識物
質として使用する際や化学発光分析法等に使用する際に
有利である。

【０１１７】（３）本発明の核酸検出法 本発明のアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも一つ以上有する蛍光性基含有カルボジ
イミド化合物は、標識物質で標識した核酸を用いるハイ
ブリダイゼーションによる核酸の検出法において、標識
物質として用いることができる。すなわち、蛍光性基含
有カルボジイミド化合物で標識された核酸は、ハイブリ
ダイゼーション用のプローブとして用いることができ
る。測定対象である核酸にプローブをハイブリダイズさ
せて、核酸−核酸ハイブリッドを形成させ、系から遊離
のプローブを除去した後にハイブリッドに含まれる標識
物質を検知することによって、測定対象の核酸を検出す
ることができる。本発明においては、標識物質である蛍
光性基含有カルボジイミド化合物は、蛍光分光光度計、
９６穴マイクロタイタープレート用蛍光分光光度計、蛍
光顕微鏡等を用いて蛍光強度等を測定することにより直
接的に検知することができる。測定対象である核酸は、
通常、ナイロンメンブレン、ニトロセルロース等の膜又
はマイクロタイタープレート上に固定化されて用いられ
る。

【０１１８】本発明の核酸の検出法におけるハイブリダ
イゼーションは、核酸プローブの標識に蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物を用いる以外は、コロニーハイブリ
ダイゼーション、プラークハイブリダイゼーション、ド
ットブロットハイブリダイゼーション、サザンハイブリ
ダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション等
の、通常の核酸のハイブリダイゼーションと特に変わる
ところはない。測定対象である核酸は、ＤＮＡであって
もＲＮＡであってもよく、プローブに用いる核酸もまた
ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよい。

【０１１９】プローブに用いる核酸の標識は、上記の方
法によってポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを
標識することによって行うことが好ましいが、標識され
たヌクレオチドをポリメラーゼ反応によってポリヌクレ
オチド又はオリゴヌクレオチドに取り込ませることによ
って行うこともできる。

【０１２０】

【実施例】以下、実施例により本発明を説明する。

【０１２１】

【実施例１】（１）一般式（Ｉ）で表される蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体の製造 Ｎ−（３−モルホリノプロピル）イソチオシアネート
１．６８ｇ（１０ｍｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン１５ｍ
ｌに溶解し、水浴で冷却した。これに、６−アミノヘキ
サノール１．１７ｇ（１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１
晩攪拌した。反応混合物に水を加えた後、塩化メチレン
を用いて抽出し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥さ
せ、セライトを用いて濾過、濃縮して、化合物（Ｉ−Ｉ
−Ａ）２．７ｇ（収率９５％）を得た。ＮＭＲスペクト
ルデータを以下に示す。

【０１２２】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.35-1.85
(m,12H)、δ=2.40-2.60(m,6H)、δ=3.45(br,2H)、δ=3.
65(t,2H)、δ=3.75(t,4H)。

【０１２３】

【化２２】

【０１２４】次いで、得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ａ）
２．０ｇ（４．８７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ５ｍｌに溶
解し、ヨウ化メチル０．６９１ｇ（４．８７ｍｍｏｌ）
を加え、室温で１晩攪拌した。反応混合物を濃縮した
後、エーテル／メタノールを加えデカンテーションによ
り化合物（Ｉ−Ｉ−Ｂ）２．６ｇ（収率９７％）を得
た。ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。

【０１２５】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.25-1.65
(m,10H)、δ=1.75(t,2H)、δ=2.30-2.45(m,2H)、δ=2.6
5(s,3H)、δ=3.20-3.50(m,6H)、δ=3.60(t,4H)、δ=3.7
5(br,2H)。

【０１２６】

【化２３】

【０１２７】次いで、得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ｂ）２
ｇ（３．６２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ５ｍｌに溶解し、メチ
ル−（トリフェニル）−ホスホニウムアイオダイド３．
２７ｇ（７．２３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪拌
後、メタノール５ｍｌを加え、２０分間攪拌した。さら
に、この反応混合物を濃縮し、シリカゲルクロマトグラ
フィー（展開溶媒：クロロホルム／メタノール＝５０／
１）により、単離精製して化合物（Ｉ−Ｉ−Ｃ）２．９
８ｇ（収率９５％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを
以下に示す。

【０１２８】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.30-1.90
(m,10H)、δ=2.25(t,2H)、δ=2.85-3.00(m,6H)、δ=2.9
5(s,3H)、δ=3.20(t,2H)、δ=3.45(br,2H)、δ=3.90(t,
4H)。

【０１２９】

【化２４】

【０１３０】次いで得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ｃ）２ｇ
（２．３１ｍｍｏｌ）をアセトン５ｍｌに溶解し、酸化
亜鉛１ｇ（４．６２ｍｍｏｌ）を加え、３時間環流下攪
拌した。さらに、１時間放置して反応混合物を冷却後、
デカンテーションを行い濃縮して、化合物（Ｉ−Ｉ−
Ｄ）１．７３ｇ（収率９０％）を得た。この化合物は、
本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体の一
つである。ＮＭＲスペクトルデータ及びＩＲスペクトル
データを以下に示す。

【０１３１】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.30-1.90
(m,10H)、δ=2.40-2.50(m,8H)、δ=3.15(s,3H)、δ=3.2
0(t,2H)、δ=3.30(t,4H)、δ=3.75(t,4H)。 ＩＲ：2127 cm^-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基）

【０１３２】

【化２５】

【０１３３】（２）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 ローダミンＢイソチオシアネート（シグマ社製）２．０
０ｇ（３．７３ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解し、
反応混合液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミノ
プロピル）アミン０．５７ｇ（５．６０ｍｍｏｌ）を徐
々に加え、３０分間攪拌した。この反応混合物を濃縮
し、さらにエーテル／メタノールを加えてデカンテーシ
ョンを行い化合物（Ｉ−ＩＩ−Ａ）２．２６ｇ（収率９
５％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。

【０１３４】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.00-1.20
(m,8H)、δ=2.20-2.60(m,6H)、δ=2.20(s,6H)、δ=3.25
-3.70(m,4H)、δ=6.30-8.00(m,9H)。

【０１３５】

【化２６】

【０１３６】得られた化合物（Ｉ−ＩＩ−Ａ）２．２６
ｇ（３．５４ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、飽和水
酸化カリウムイソプロピルアルコール溶液を約１５ｍｌ
加えて固体を溶出させた。次いで、エタノールを用いて
濾過後、乾燥して化合物（Ｉ−ＩＩ−Ｂ）を２．３０ｇ
（収率９６％）で得た。この化合物は、前記化合物（Ｉ
−ＩＩ−Ａ）の、ローダミンＢ基が有するカルボキシル
基がカリウム塩（−ＣＯＯＫ）化された化合物である。
ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。

【０１３７】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.00-1.20
(m,8H)、δ=2.20-2.60(m,6H)、δ=2.20(s,6H)、δ=3.25
-3.70(m,4H)、δ=6.30-8.00(m,9H)。

【０１３８】

【化２７】

【０１３９】（３）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記（１）で得られた（Ｉ−Ｉ−Ｄ）１．２３ｇ（１．
４８ｍｍｏｌ）及び上記（２）で得られた化合物（Ｉ−
ＩＩ−Ｂ）１ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解
し、室温にて一晩攪拌した。さらに、エーテル／メタノ
ールを加え、デカンテーションにより本発明の蛍光性基
含有カルボジイミド化合物として、化合物（１）２．１
０ｇ（収率９４％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、
ＩＲスペクトルデータ及びＵＶスペクトルデータを以下
に示す。

【０１４０】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.00-1.85
(m,18H)、δ=2.40-2.55(m,12H)、δ=2.85(s,3H)、δ=2.
90(s,6H)、δ=3.15(t,2H)、δ=3.25(t,4H)、δ=3.50-3.
65(m,6H)、δ=3.75(t,4H)、δ=6.30-8.00(m,9H)。 ＩＲ：2125 cm^-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λ_max５４２ｎｍ

【０１４１】

【化２８】

【０１４２】

【実施例２】（１）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 ２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメ
チル−３−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−
２−イリデン］エチリデン］−２−フェノキシ−１−シ
クロヘキセン−１−イル］−エテニル］−１，１−ジメ
チル［３−プロピルイソチオシアネート］１Ｈ−ベンツ
［ｅ］−インドリウム塩（LI-COR社製）４００ｍｇ
（０．５０２mmol）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解
し、反応溶液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミ
ノプロピル）アミン７６．９ｍｇ（０．７５３mmol）を
徐々に加え、１．５時間室温にて攪拌した。この反応溶
液を濃縮し、さらにエーテル／メタノールを加えてデカ
ンテーションを行い化合物（ＩＩ−Ｉ−Ａ）４０２ｍｇ
（収率８９％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを以下
に示す。

【０１４３】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.20-2.40
(m,14H)、δ=2.25(s,6H)、δ=2.45(t,2H)、δ=2.65-3.0
5(m,4H)、δ=3.65-3.95(m,4H)、δ=4.45(t,2H)、δ=6.1
3(d,1H)、δ=6.35(d,1H)、δ=6.90-7.60(m,11H)、δ=7.
70-8.15(m,5H)。

【０１４４】

【化２９】

【０１４５】（２）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記実施例１の（１）で得られた（Ｉ−Ｉ−Ｄ）２３２
ｍｇ（０．４４５ｍｍｏｌ）及び上記実施例２の（１）
で得られた化合物（ＩＩ−Ｉ−Ａ）４００ｍｇ（０．４
４５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、室温にて一
晩攪拌した。さらに、エーテル／メタノールを加え、デ
カンテーションにより本発明の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物として、化合物（２）５７５ｍｇ（収率９１
％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、ＩＲスペクトル
データ及びＵＶスペクトルデータを以下に示す。

【０１４６】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ=1.20-2.10
(m,24H)、δ=2.30-2.50(m,12H)、δ=3.10-3.35(m,4H)、
δ=2.90(s,3H)、δ=2.95(s,6H)、δ=3.60-3.85(m,10
H)、δ=6.13(d,1H)、δ=6.35(d,1H)、δ=6.80-7.60(m,1
1H)、δ=7.80-8.18(m,5H)。 ＩＲ：2127 cm^-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λ_max７９０ｎｍ

【０１４７】

【化３０】

【０１４８】

【実施例３】（１）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 特開平９−３２５１４７号公報及びRatnakaer B Mujumd
ar et. al., Bioconjugate Chem., 4, 2, 105-111(199
3)を参考にして製造したＣｙ３．１８．ＯＳｕ２００ｍ
ｇ（０．１７５mmol）をＤＭＦ５ｍｌに溶解し、反応溶
液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）アミン７１．４ｍｇ（０．６９８mmol）を徐々に加
え、１２時間室温にて攪拌した。この反応溶液を濃縮
し、さらに酢酸エチル／メタノールを加えてデカンテー
ションを数回繰り返し行い化合物（ＩＩＩ−Ｉ−Ａ）１
７０ｍｇ（収率８７％）を得た。ＮＭＲスペクトルデー
タを以下に示す。

【０１４９】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.30-1.60
(m,12H)、δ=1.70(s,12H)、δ=2.05(t,4H)、δ=2.10-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,12H)、δ=2.95(q,4H)、δ=4.12
(t,4H)、δ=6.54(d,2H)、δ=7.36-7.95(m,6H)、δ=8.36
(t,1H)。

【０１５０】

【化３１】

【０１５１】（２）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記実施例１の（１）で得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ｄ）
７９ｍｇ（０．１５２ｍｍｏｌ）及び上記実施例３の
（１）で得られた化合物（ＩＩＩ−Ｉ−Ａ）１７０ｍｇ
（０．１５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、室
温にて一晩攪拌した。さらに、酢酸エチル／メタノール
を加え、デカンテーションにより本発明の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物として、化合物（３）２４９ｍｇ
（収率１００％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、Ｉ
Ｒスペクトルデータ及びＵＶスペクトルデータを以下に
示す。

【０１５２】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.10-1.80
(m,24H)、δ=1.70(s,12H)、δ=2.05(m,4H)、δ=2.10-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,6H)、δ=2.72 (s,3H)、δ=2.85
(s,3H) 、δ=2.85-3.50(m,12H)、δ=3.55(m,4H)、δ=4.
12(t,4H)、δ=6.54(d,2H)、δ=7.36-7.95(m,6H)、δ=8.
36(t,1H)。 ＩＲ：2127 cm^-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λ_max５３２ｎｍ

【０１５３】

【化３２】

【０１５４】

【実施例４】（１）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 特開平９−３２５１４７号公報及びRatnakaer B Mujumd
ar et. al., Bioconjugate Chem., 4, 2, 105-111(199
3)を参考にして製造したＣｙ５．１８．ＯＳｕ２００ｍ
ｇ（０．１７１mmol）をＤＭＦ５ｍｌに溶解し、反応溶
液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）アミン７０ｍｇ（０．６８４mmol）を徐々に加え、
１２時間室温にて攪拌した。この反応溶液を濃縮し、さ
らに酢酸エチル／メタノールを加えてデカンテーション
を行い化合物（ＩＶ−Ｉ−Ａ）１８４ｍｇ（収率９４
％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。

【０１５５】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.32-1.65
(m,12H)、δ=1.72(s,12H)、δ=2.05(t,4H)、δ=2.00-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,12H)、δ=2.95(q,4H)、δ=4.17
(t,4H)、δ=6.57(d,3H)、δ=7.36-7.95(m,6H)、δ=8.45
(t,2H)。

【０１５６】

【化３３】

【０１５７】（２）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記実施例１の（１）で得られた（Ｉ−Ｉ−Ｄ）８２ｍ
ｇ（０．１５７ｍｍｏｌ）及び上記実施例４の（１）で
得られた化合物（ＩＶ−Ｉ−Ａ）１８０ｍｇ（０．１５
７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、室温にて一晩
攪拌した。さらに、酢酸エチル／メタノールを加え、デ
カンテーションにより本発明の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物として、化合物（４）２４６ｍｇ（収率９４
％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、ＩＲスペクトル
データ及びＵＶスペクトルデータを以下に示す。

【０１５８】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.22-1.65
(m,12H)、δ=1.72(s,12H)、δ=2.05(t,4H)、δ=1.95-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,12H)、δ=2.95(q,4H)、δ=4.17
(t,4H)、δ=6.57(d,3H)、δ=7.32-7.95(m,6H)、δ=8.45
(t,2H)。 ＩＲ：2127 cm^-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λ_max６３２ｎｍ

【０１５９】

【化３４】

【０１６０】

【実施例５】＜水溶性試験＞実施例１〜実施例４で得ら
れた化合物（１）〜（４）の水に対する溶解性試験を行
った。また、比較のために、化合物（１）のローダミン
Ｂ基中のカルボン酸カリウム塩基（−ＣＯＯＫ）を水素
原子に置換した化合物（１'）、化合物（２）のＩＲＤ
−４１基中のスルホン酸ナトリウム塩基（−ＳＯ₃Ｎ
ａ）をメチル基に置換した化合物（２'）、化合物
（３）のＣｙ３基中のスルホン酸カリウム塩基（−ＳＯ
₃Ｋ）を水素原子に置換した化合物（３'）及び化合物
（４）のＣｙ５基中のスルホン酸カリウム塩基（−ＳＯ
₃Ｋ）を水素原子に置換した化合物（４'）についても、
同様に水に対する溶解性試験を行った。結果を表１に示
す。

【０１６１】

【表１】

【０１６２】この結果から、本発明の蛍光性基含有カル
ボジイミド化合物が水溶性に優れることが明らかであ
る。

【０１６３】

【実施例６】反応溶液［ファージＤＮＡ（Ｍ１３ｍｐ１
８複製型：宝酒造株式会社製）１μｇ；ホウ酸緩衝液
（ｐＨ８．５）；０．１Ｍの上記実施例１〜４で得られ
た化合物（１）、（３）及び（４）を作製し、８５℃に
て１分間インキュベートした。さらに、この反応溶液
に、その１／９倍量の３Ｍ酢酸ナトリウム及び２．５倍
量の冷エタノールを加えて混合し、−８０℃にて４５分
間放置した。遠心機（国産株式会社製、Ｈ−１５００Ｆ
Ｒ）により、４℃にて１２０００ｒｐｍで１．５分間遠
心した。上澄み液を除去した後、１００μｌの滅菌水に
得られた沈殿を溶解した。

【０１６４】次いで、制限酵素（ＨｉｎｄＩＩ）で直鎖
化したファージＤＮＡ（Ｍ１３ｍｐ１８複製型）を用い
て、２ＭＮａＣｌ中で、４８０ｎｇから４８０ｐｇ／１
００μｌの１０倍希釈系列を作製し、１００℃にて１０
分間熱処理し、氷上で５分間急冷させて熱変性核酸を得
た。プレート上の各ウェルに得られた各濃度の熱変性核
酸を加え、プレートシールをして３７℃にて１２時間固
定した。

【０１６５】前記した熱変性核酸を固定化したプレート
を、蒸留水で洗浄後、プレハイブリダイゼーション溶液
［５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０．１５ＭＮａＣｌ、０．
０１５Ｍクエン酸ナトリウム）、５×デンハーツ（Denh
ardt's）溶液（０．０２％ポリビニルピロリドン、０．
２％フィコール、０．０２％ＢＳＡ）、２５ｍＭリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）、５０％ホルムアミ
ド、０．５ｍｇ／ｍｌ酵母トランスファＲＮＡ及び０．
１％ドデシル硫酸ナトリウム］１００μｌを加え、室温
にて５分間プレートミキサーで振盪させる操作を３回繰
り返し行った。各ウェルの溶液を捨て、２×ＳＳＣを３
００μｌ加え、室温にて５分間放置した。

【０１６６】次いで、各ウェルに５０ｍＭリン酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ７．０）及び１．５ＭＮａＣｌを１０
０μｌ加え、化合物（１Ａ）、（３Ａ）及び（４Ａ）と
して蛍光物質含有ＤＮＡを作製した。さらに、各ウェル
の溶液にキャピラリーを用いて蛍光分光光度計（Ｆ−３
０１０：日立製作所製）にて、励起光を照射したとこ
ろ、Ｍ１３複製型ＤＮＡに標識した蛍光性基から放出さ
れた蛍光を測定した。その結果を表２に示す。

【０１６７】

【表２】

【０１６８】この結果から、本発明の核酸の検出方法に
よれば、核酸の検出が高感度で行えることがわかる。

【０１６９】

【発明の効果】本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化
合物は、水に対して十分な溶解性を有すると共に、これ
を用れば、核酸及び蛋白質に蛍光性基を簡便に効率よく
導入することが可能である。また、本発明の蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体は、蛍光性基と簡便かつ
効率的に結合できることから、前記蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物の製造に最適である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 21/64 Ｇ０１Ｎ 21/64 Ｆ 21/78 21/78 Ｃ 33/533 33/533 (72)発明者 吉川 陽子 東京都足立区西新井栄町１−18−１ 日清 紡績株式会社東京研究センター内 Ｆターム(参考） 2G043 AA04 BA16 DA02 EA01 JA04 KA02 LA01 2G054 AA06 CA22 CA23 CD01 CE02 EA03 EB01 GA04 GB02 4C062 HH21 4C204 AB01 BB04 CB03 CB13 DB13 DB15 EB10 FB15 FB16 GB01 GB29

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又
   はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化
   合物前駆体。 【化１】 Ｂ−Ｙ³−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｙ²−Ｗ−Ｙ¹−［Ａ］_n−Ｙ⁴−Ｘ ・・・（Ｉ） ［式（Ｉ）中、Ｘはハロゲン原子又はスルホン酸基を表
   す。Ａは、−ＣＨ₂−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、
   −Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−（Ｒ¹は炭素数１から２０ま
   での直鎖、環状若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂
   肪族炭化水素基を表す。）、−ＮＲ²Ｒ³−（Ｒ²及びＲ³
   は、独立して水素原子、炭素数１から２０までの直鎖若
   しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
   又は置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール
   基若しくはアラルキル基を表す。但し、Ｒ²とＲ³のどち
   らか一方が水素原子である場合、他方は炭素数１から２
   ０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪
   族炭化水素基、置換基を有してもよいシクロアルキル
   基、アリール基若しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ
   ²とＲ³が相互に結合して全体として酸素を含有してもよ
   い含窒素複素環式基を形成してもよい。）、−ＣＯＯ
   −、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ₂−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−
   及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群から選ばれる官能基を表
   し、ｎは０又は１を表す。Ｗは直接結合又は４級オニウ
   ム基を表す。Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴は、各々下記一般式
   （II）で示される官能基を表す。Ｂは水素原子又は式
   （Ｉ）中の−Ｗ−Ｙ¹−［Ａ］_n−Ｙ⁴−Ｘと同一もしく
   は異なる一価の有機基を表す。また、前記Ｂ、Ｙ¹、
   Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ又はＷで表される官能基はいずれの
   官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒
   素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボ
   キシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ば
   れる基を有してもよい。］ 【化２】 −（ＣＨ₂）_p−（Ｌ）_r−（ＣＨ₂）_q− ・・・（II） ［式（II）中、Ｌは、−ＣＨ₂−、−ＮＨＣＯ−、−Ｃ
   ＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹−（Ｒ¹は、式
   （Ｉ）中におけるものと同意である。）、−ＮＲ²Ｒ³−
   （Ｒ²及びＲ³は、式（Ｉ）中におけるものと同意であ
   る。）、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ₂−、−
   ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−及び−ＳＯ₂ＮＨ−からなる群から選
   ばれる官能基を表す。ｐ及びｑは各々０から２０の整数
   を表し、ｒは０又は１を表す。］
2. 【請求項２】 下記一般式（III）で表されるアルカリ
   金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含
   有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
   基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
   も１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物。 【化３】 ［式（III）中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ、Ｘ、Ｗ
   及びｎは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
   る。Ｆは蛍光性基を表し、Ｑは３級又は４級窒素若しく
   は３級又は４級リンを表す。Ｒ⁴及びＲ⁵は、独立して水
   素原子、炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐した
   飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、又は置換基を有
   してもよいシクロアルキル基、アリール基若しくはアラ
   ルキル基を表す。但し、Ｒ⁴とＲ⁵のどちらか一方が水素
   原子である場合、他方は炭素数１から２０までの直鎖若
   しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
   置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール基若
   しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ⁴とＲ⁵が相互に結
   合して−Ｑ⁺Ｒ⁴Ｒ⁵−として酸素を含有してもよい含窒
   素複素環式基又は含リン複素環式基を形成してもよい。
   Ｙ⁵は、前記Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³及びＹ⁴と同義である。ま
   た、前記Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ｙ⁵、Ａ、Ｗ、Ｒ⁴、
   Ｒ⁵及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能基は、ア
   ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
   ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
   ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少な
   くとも１つ有する。］
3. 【請求項３】 式（Ｉ）において、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、
   Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
   基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
   しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
   ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
   基を少なくとも１つ有する請求項１記載の蛍光性基含有
   カルボジイミド化合物前駆体。
4. 【請求項４】 式（III）において、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、
   Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
   基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
   しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
   ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
   基を少なくとも１つ有する請求項２記載の蛍光性基含有
   カルボジイミド化合物。
5. 【請求項５】 式（III）において、Ｙ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及び
   Ｆから選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカリ金
   属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
   する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
   ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１
   つ有する請求項２記載の蛍光性基含有カルボジイミド化
   合物。
6. 【請求項６】 下記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の工程を
   含む請求項１記載の蛍光性基含有カルボジイミド化合物
   前駆体の製造方法： （Ａ）下記一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネ
   ート化合物と、下記一般式（Ｖ）で表されるアミン化合
   物とを反応させて下記一般式（VI）で表される（チオ）
   尿素化合物を合成する工程、 【化４】 ［式中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ、Ｗ及びｎは、各
   々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
   素原子またはイオウ原子を表す。Ｚは、水酸基、アルキ
   ル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル
   基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基、又は
   ホスホニウム基を表す。］ （Ｂ）前記（Ａ）工程で得られた一般式（VI）で表され
   る化合物をハロゲン化又はスルホン化して下記一般式
   （VII）で表される化合物を作製する工程、 【化５】 ［式（VII）中、Ｂ、Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ｗ、Ａ、ｎ
   及びＸは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
   る。Ｔは、酸素原子またはイオウ原子を表す。］ （Ｃ）前記（Ｂ）工程で得られた一般式（VII）で表さ
   れる化合物を脱水反応又は酸化的脱硫反応させてカルボ
   ジイミド化する工程。
7. 【請求項７】 請求項６記載の製造方法において、Ｂ、
   Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも
   １つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
   は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
   カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
   ら選ばれる基を少なくとも１つ有する、請求項３記載の
   蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体の製造方法。
8. 【請求項８】 請求項１記載の蛍光性基含有カルボジイ
   ミド化合物前駆体及び下記一般式（VIII）で表される蛍
   光性基含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合物
   及び蛍光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１つ
   が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
   くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
   基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官
   能基を有するように選択し、反応させる工程を含む、請
   求項２記載の蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造
   方法。 【化６】Ｑ'Ｒ⁴Ｒ⁵−Ｙ⁵−Ｆ ・・・（VIII） ［式（VIII）中、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｙ⁵及びＦは、各々前記一
   般式（III）におけるのと同意である。Ｑ'は、水酸基、
   アルキル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェ
   ニル基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基及
   びホスホニウム基から選ばれる基で置換されていてもよ
   い２級又は３級窒素含有基若しくは２級又は３級リン含
   有基を表す。］
9. 【請求項９】 請求項８記載の製造方法において、Ｂ、
   Ｙ¹、Ｙ²、Ｙ³、Ｙ⁴、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも
   １つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
   は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
   カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
   ら選ばれる基を少なくとも１つ有する、請求項４記載の
   蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方法。
10. 【請求項１０】 請求項８記載の製造方法において、Ｙ
    ⁵、Ｒ⁴、Ｒ⁵及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能
    基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
    しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
    ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
    基を少なくとも１つ有する、請求項５記載の蛍光性基含
    有カルボジイミド化合物の製造方法。
11. 【請求項１１】 標識物質で標識した核酸を用いるハイ
    ブリダイゼーションによる核酸の検出方法において、標
    識物質として、請求項２記載のアルカリ金属、アルカリ
    土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基
    で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及
    びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する蛍光
    性基含有カルボジイミド化合物を用いることを特徴とす
    る方法。
12. 【請求項１２】 標識物質として、請求項４記載のアル
    カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
    を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
    ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
    とも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用
    いる請求項１１記載の方法。
13. 【請求項１３】 標識物質として、請求項５記載のアル
    カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
    を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
    ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
    とも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用
    いる請求項１１記載の方法。