JP2001172259A - Fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor, fluorescent group-containing carbodiimide compound and method for producing the same - Google Patents

Fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor, fluorescent group-containing carbodiimide compound and method for producing the same

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JP2001172259A
JP2001172259A JP2000087013A JP2000087013A JP2001172259A JP 2001172259 A JP2001172259 A JP 2001172259A JP 2000087013 A JP2000087013 A JP 2000087013A JP 2000087013 A JP2000087013 A JP 2000087013A JP 2001172259 A JP2001172259 A JP 2001172259A
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group
fluorescent
compound
carbodiimide compound
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JP2000087013A
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Japanese (ja)
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Naoki Kimura
直紀 木村
Namiko Shiohata
奈美子 塩畑
Yoko Yoshikawa
陽子 吉川
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Nisshinbo Holdings Inc
Original Assignee
Nisshinbo Industries Inc
Nisshin Spinning Co Ltd
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Publication date
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a new fluorescent group-containing carbodiimide compound capable of simply and efficiently introducing the fluorescent group into a nucleic acid and a protein including the nucleic acid derived from a natural product and having a sufficient solubility in water and a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor suitable for producing the fluorescent group- containing carbodiimide compound and capable of simply and efficiently carrying out the binding to the fluorescent group. SOLUTION: A new fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or a sulfonic acid group is prepared and used to prepare the new fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one group selected from carboxy group, sulfo group, phosphono group and phosho group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal or a basic group containing nitrogen or phosphorus. Furthermore the fluorescent group-containing carbodiimide compound is used as a labeling substance for a method for detecting the nucleic acid using the nucleic acid labeled with the labeling substance according to hybridization.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体及び蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物に関する。詳しくは、蛍光性基との結合
が簡便かつ効率的に行える、ハロゲン又はスルホン酸基
を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び
その製造方法、並びに、核酸及び蛋白質に蛍光性基を簡
便に効率よく導入可能な、カルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１
つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物及びその製
造方法、さらにそれを利用した分析方法に関するもので
ある。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a novel fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor and a fluorescent group-containing carbodiimide compound. More specifically, a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group and a method for producing the same, which can easily and efficiently bind to a fluorescent group, and a nucleic acid and a protein in which a fluorescent group is easily and efficiently used. Carboxyl group, sulfo group,
At least one group selected from a phosphono group and a phospho group
The present invention relates to a carbodiimide compound having a fluorescent group and a method for producing the same, and an analytical method using the same.

【０００２】[0002]

【従来の技術】蛍光物質を核酸に導入する方法として
は、例えば、蛍光物質が結合したヌクレオチドを用いて
酵素等により核酸へ導入する方法（特開平６−２７１５
９９号公報）、ビオチン標識した核酸に蛍光物質が結合
したストレプトアビジンを結合させる方法、アミノリン
カーが結合した核酸にアミン反応性基含有蛍光物質を反
応させる方法等がある。また、上記以外の方法では、核
酸塩基に対して極めて高い反応性を示す蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物を用いる方法（特開平１０−２８７
８７０号公報）等がある。2. Description of the Related Art As a method of introducing a fluorescent substance into a nucleic acid, for example, a method of introducing a fluorescent substance into a nucleic acid with an enzyme or the like using a nucleotide bound thereto (Japanese Patent Laid-Open No. 27715/1994).
No. 99), a method of binding streptavidin with a fluorescent substance bound to a biotin-labeled nucleic acid, a method of reacting an amine-reactive group-containing fluorescent substance with a nucleic acid bound with an amino linker, and the like. In addition, in a method other than the above, a method using a fluorescent group-containing carbodiimide compound having extremely high reactivity with a nucleic acid base (Japanese Patent Laid-Open No. 10-287).
No. 870).

【０００３】しかし、上記方法のうち特開平６−２７１
５９９号公報記載の方法、ビオチン標識による方法、ア
ミノリンカー結合を用いる方法においては、蛍光物質を
天然由来の核酸に導入することができず、操作が煩雑で
あるという欠点がある。また、上記蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物を用いる方法では、その分子内に４級ア
ンモニウム塩が存在するため、水に対する溶解性は良好
である。しかし、水に対する溶解性が低い蛍光物質、例
えば、近赤外域に吸収を有する程度に大きなπ電子系を
持つ蛍光物質を使用するためには、水に対する溶解性の
さらなる向上が求められていた。However, of the above methods,
The method described in Japanese Patent No. 599, the method using biotin labeling, and the method using an amino linker bond have the disadvantage that the fluorescent substance cannot be introduced into a naturally-derived nucleic acid, and the operation is complicated. Further, in the method using the carbodiimide compound containing a fluorescent group, the solubility in water is good because a quaternary ammonium salt is present in the molecule. However, in order to use a fluorescent substance having low solubility in water, for example, a fluorescent substance having a π-electron system large enough to absorb in the near infrared region, further improvement in solubility in water has been required.

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、天然由来の
核酸も含めて核酸及び蛋白質に蛍光性基を簡便に効率よ
く導入することが可能であり、且つ水に対して十分な溶
解性を有する新規な蛍光性基含有カルボジイミド化合
物、および、前記蛍光性基含有カルボジイミド化合物の
製造に適した、蛍光性基との結合が簡便かつ効率的に行
える蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体を提供す
ることを課題とする。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention is capable of easily and efficiently introducing a fluorescent group into nucleic acids and proteins, including naturally occurring nucleic acids, and has sufficient solubility in water. Provided is a novel carbodiimide compound having a fluorescent group, and a precursor of the carbodiimide compound having a fluorescent group, which is suitable for the production of the carbodiimide compound having a fluorescent group and can be easily and efficiently bonded to a fluorescent group. As an issue.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ハロゲン又は
スルホン酸基を有するカルボジイミド化合物を原料とし
て、カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ
基から選ばれる基を少なくとも１つ有する、水への溶解
性が十分な蛍光性基含有カルボジイミド化合物を製造す
ることができ、この蛍光性基含有カルボジイミド化合物
を用いれば、核酸及び蛋白質に蛍光性基を導入する際
に、天然由来の核酸も含めて簡便に効率よくこれらを導
入することが可能であることを見出し、本発明を完成さ
せた。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, using a carbodiimide compound having a halogen or sulfonic acid group as a raw material, a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group And a fluorescent group-containing carbodiimide compound having sufficient solubility in water having at least one group selected from a carbodiimide compound and a phospho group. The present inventors have found that it is possible to easily and efficiently introduce these, including naturally occurring nucleic acids, when introducing a sex group, and have completed the present invention.

【０００６】すなわち本発明は、以下のとおりである。 （１）下記一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はスルホ
ン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆
体。That is, the present invention is as follows. (1) A fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the following general formula (I).

【０００７】[0007]

【化７】 Ｂ−Ｙ3−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｙ2−Ｗ−Ｙ1−［Ａ］n−Ｙ4−Ｘ ・・・（Ｉ） ［式（Ｉ）中、Ｘはハロゲン原子又はスルホン酸基を表
す。Ａは、−ＣＨ2−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−（Ｒ1は炭素数１から２０ま
での直鎖、環状若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂
肪族炭化水素基を表す。）、−ＮＲ2Ｒ3−（Ｒ2及びＲ3
は、独立して水素原子、炭素数１から２０までの直鎖若
しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
又は置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール
基若しくはアラルキル基を表す。但し、Ｒ2とＲ3のどち
らか一方が水素原子である場合、他方は炭素数１から２
０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪
族炭化水素基、置換基を有してもよいシクロアルキル
基、アリール基若しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ
2とＲ3が相互に結合して全体として酸素を含有してもよ
い含窒素複素環式基を形成してもよい。）、−ＣＯＯ
−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ2−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−
及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群から選ばれる官能基を表
し、ｎは０又は１を表す。Ｗは直接結合又は４級オニウ
ム基を表す。Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4は、各々下記一般式
（II）で示される官能基を表す。Ｂは水素原子又は式
（Ｉ）中の−Ｗ−Ｙ1−［Ａ］n−Ｙ4−Ｘと同一もしく
は異なる一価の有機基を表す。また、前記Ｂ、Ｙ1、
Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ又はＷで表される官能基はいずれの
官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒
素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボ
キシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ば
れる基を有してもよい。］Embedded image BYThree-N = C = N-YTwo-W-Y1-[A]n-YFour-X (I) [In the formula (I), X represents a halogen atom or a sulfonic acid group.
You. A is -CHTwo-, -NHCO-, -CONH-,
-O-, -S-, -NR1− (R1Is from 1 to 20 carbon atoms
, Cyclic or branched saturated or unsaturated fats
Represents an aliphatic hydrocarbon group. ), -NRTwoRThree− (RTwoAnd RThree
Is independently a hydrogen atom, a linear straight-chain having 1 to 20 carbon atoms.
Or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group,
Or a cycloalkyl group optionally having a substituent, aryl
Represents an aralkyl group or an aralkyl group. Where RTwoAnd RThreeThroat
When one of them is a hydrogen atom, the other has 1 to 2 carbon atoms.
Straight or branched saturated or unsaturated fats up to 0
Group hydrocarbon group, cycloalkyl optionally having substituent (s)
Represents an aryl group or an aralkyl group. Also, R
TwoAnd RThreeMay combine with each other to contain oxygen as a whole.
Nitrogen-containing heterocyclic groups. ), -COO
-, -OCO-, -NHSOTwo-, -NHC (S) NH-
And -SOTwoThe functional groups selected from the group consisting of NH-
And n represents 0 or 1. W is a direct bond or quaternary onium
Represents a group. Y1, YTwo, YThreeAnd YFourIs the following general formula
Represents a functional group represented by (II). B is a hydrogen atom or a formula
-WY in (I)1-[A]n-YFourSame as -X
Represents a different monovalent organic group. In addition, B, Y1,
YTwo, YThree, YFour, A or W is any functional group
Functional groups are also alkali metals, alkaline earth metals, or nitrogen.
Carboxy substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus
Selected from xyl, sulfo, phosphono and phospho groups
May be included. ]

【０００８】[0008]

【化８】 −（ＣＨ2）p−（Ｌ）r−（ＣＨ2）q− ・・・（II） ［式（II）中、Ｌは、−ＣＨ2−、−ＮＨＣＯ−、−Ｃ
ＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−（Ｒ1は、式
（Ｉ）中におけるものと同意である。）、−ＮＲ2Ｒ3−
（Ｒ2及びＲ3は、式（Ｉ）中におけるものと同意であ
る。）、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ2−、−
ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群から選
ばれる官能基を表す。ｐ及びｑは各々０から２０の整数
を表し、ｒは０又は１を表す。］-(CH 2 ) p- (L) r- (CH 2 ) q -... (II) [In the formula (II), L represents -CH 2- , -NHCO-, -C
ONH-, -O-, -S-, -NR 1- (R 1 is as defined in formula (I)), -NR 2 R 3-.
(R 2 and R 3 have the same meanings as in formula (I).), —COO—, —OCO—, —NHSO 2 —, −
It represents a functional group selected from NHC (S) NH-, and the group consisting of -SO 2 NH-. p and q each represent an integer of 0 to 20, and r represents 0 or 1. ]

【０００９】（２）下記一般式（III）で表されるアル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
とも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物。(2) A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted by an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus represented by the following general formula (III): A carbodiimide compound containing a fluorescent group having at least one group selected from the group consisting of:

【００１０】[0010]

【化９】 ［式（III）中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ、Ｘ、Ｗ
及びｎは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
る。Ｆは蛍光性基を表し、Ｑは３級又は４級窒素若しく
は３級又は４級リンを表す。Ｒ4及びＲ5は、独立して水
素原子、炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐した
飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、又は置換基を有
してもよいシクロアルキル基、アリール基若しくはアラ
ルキル基を表す。但し、Ｒ4とＲ5のどちらか一方が水素
原子である場合、他方は炭素数１から２０までの直鎖若
しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール基若
しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ4とＲ5が相互に結
合して−Ｑ+Ｒ4Ｒ5−として酸素を含有してもよい含窒
素複素環式基又は含リン複素環式基を形成してもよい。
Ｙ5は、前記Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4と同義である。ま
た、前記Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ｙ5、Ａ、Ｗ、Ｒ4、
Ｒ5及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能基は、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少な
くとも１つ有する。］Embedded image [In the formula (III), B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A, X, W
And n are the same as those in the general formula (I). F represents a fluorescent group, and Q represents tertiary or quaternary nitrogen or tertiary or quaternary phosphorus. R 4 and R 5 independently represent a hydrogen atom, a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, or a cycloalkyl group or an aryl group which may have a substituent; Alternatively, it represents an aralkyl group. However, when one of R 4 and R 5 is a hydrogen atom, the other is a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms,
Represents a cycloalkyl group, an aryl group or an aralkyl group which may have a substituent. R 4 and R 5 may be mutually bonded to form a nitrogen-containing heterocyclic group or a phosphorus-containing heterocyclic group which may contain oxygen as —Q + R 4 R 5 —.
Y 5 has the same meaning as Y 1 , Y 2 , Y 3 and Y 4 . In addition, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , Y 5 , A, W, R 4 ,
At least one functional group selected from R 5 and F is selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus. At least one group. ]

【００１１】（３）式（Ｉ）において、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、
Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する（１）の蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物前駆体。(3) In the formula (I), B, Y 1 , Y 2 ,
A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group in which at least one functional group selected from Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus; And (1) a carbodiimide compound precursor having a fluorescent group, which has at least one group selected from phospho groups.

【００１２】（４）式（III）において、Ｂ、Ｙ1、
Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つ
の官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、
窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選
ばれる基を少なくとも１つ有する（２）の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物。(4) In the formula (III), B, Y 1 ,
At least one functional group selected from Y 2 , Y 3 , Y 4 , A and W is an alkali metal, an alkaline earth metal, or
The fluorescent group-containing carbodiimide compound of (2), which has at least one group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a nitrogen- or phosphorus-containing basic group.

【００１３】（５）式（III）において、Ｙ5、Ｒ4、Ｒ5
及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカ
リ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを
含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する（２）の蛍光性基含有カルボジイミド化合
物。(5) In the formula (III), Y 5 , R 4 , R 5
And a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group in which at least one functional group selected from F and F is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. (2) the carbodiimide compound containing a fluorescent group, which has at least one

【００１４】（６）下記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の工
程を含む（１）の蛍光性基含有カルボジイミド化合物前
駆体の製造方法： （Ａ）下記一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネ
ート化合物と、下記一般式（Ｖ）で表されるアミン化合
物とを反応させて下記一般式（VI）で表される（チオ）
尿素化合物を合成する工程、(6) A process for producing a carbodiimide compound precursor having a fluorescent group according to (1), comprising the following steps (A), (B) and (C): (A) represented by the following general formula (IV) Reacting an iso (thio) cyanate compound with an amine compound represented by the following general formula (V) to form a (thio) compound represented by the following general formula (VI)
Synthesizing a urea compound,

【００１５】[0015]

【化１０】 ［式中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ、Ｗ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｚは、水酸基、アルキ
ル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル
基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基、又は
ホスホニウム基を表す。］ （Ｂ）前記（Ａ）工程で得られた一般式（VI）で表され
る化合物をハロゲン化又はスルホン化して下記一般式
（VII）で表される化合物を作製する工程、Embedded image [Wherein, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A, W and n have the same meanings as in the above general formula (I). T represents an oxygen atom or a sulfur atom. Z represents a hydroxyl group, an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group, or a phosphonium group. (B) a step of halogenating or sulfonating the compound represented by the general formula (VI) obtained in the step (A) to produce a compound represented by the following general formula (VII);

【００１６】[0016]

【化１１】 ［式（VII）中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ｗ、Ａ、ｎ
及びＸは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
る。Ｔは、酸素原子またはイオウ原子を表す。］ （Ｃ）前記（Ｂ）工程で得られた一般式（VII）で表さ
れる化合物を脱水反応又は酸化的脱硫反応させてカルボ
ジイミド化する工程。Embedded image [In the formula (VII), B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , W, A, n
And X have the same meanings as in the general formula (I). T represents an oxygen atom or a sulfur atom. (C) a step of subjecting the compound represented by the general formula (VII) obtained in the step (B) to a carbodiimidation by a dehydration reaction or an oxidative desulfurization reaction.

【００１７】（７）前記（６）の製造方法において、
Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なく
とも１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する、（３）の
蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体の製造方法。(7) In the method of (6),
At least one functional group selected from B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. The method for producing a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor according to (3), which has at least one group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group.

【００１８】（８）前記（１）の蛍光性基含有カルボジ
イミド化合物前駆体及び下記一般式（VIII）で表される
蛍光性基含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合
物及び蛍光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１
つが、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
官能基を有するように選択し、反応させる工程を含む、
（２）の蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方
法。(8) From the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor of the above (1) and the fluorescent group-containing compound represented by the following general formula (VIII), a carbodiimide compound and a fluorescent group-containing compound are respectively obtained by At least one of
One is selected so as to have a functional group selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus, and reacted. Including steps,
(2) The method for producing a carbodiimide compound containing a fluorescent group.

【００１９】[0019]

【化１２】Ｑ'Ｒ4Ｒ5−Ｙ5−Ｆ ・・・（VIII） ［式（VIII）中、Ｒ4、Ｒ5、Ｙ5及びＦは、各々前記一
般式（III）におけるのと同意である。Ｑ'は、水酸基、
アルキル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェ
ニル基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基及
びホスホニウム基から選ばれる基で置換されていてもよ
い２級又は３級窒素含有基若しくは２級又は３級リン含
有基を表す。］Embedded image Q′R 4 R 5 —Y 5 —F (VIII) wherein, in the formula (VIII), R 4 , R 5 , Y 5 and F are each as defined in the aforementioned general formula (III). I agree. Q ′ is a hydroxyl group,
Secondary or tertiary nitrogen-containing group or secondary or tertiary group which may be substituted with a group selected from an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group and a phosphonium group. Represents a phosphorus-containing group. ]

【００２０】（９）前記（８）の製造方法において、
Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なく
とも１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する、（４）の
蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方法。(9) In the manufacturing method of the above (8),
At least one functional group selected from B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. (4) The method for producing a fluorescent group-containing carbodiimide compound according to (4), which has at least one group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group.

【００２１】（１０）前記（８）の製造方法において、
Ｙ5、Ｒ4、Ｒ5及びＦから選ばれる少なくとも１つの官
能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも１つ有する、（５）の蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物の製造方法。(10) In the manufacturing method of the above (8),
A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group in which at least one functional group selected from Y 5 , R 4 , R 5 and F is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus; The method for producing a fluorescent group-containing carbodiimide compound according to (5), which has at least one group selected from a group and a phospho group.

【００２２】（１１）標識物質で標識した核酸を用いる
ハイブリダイゼーションによる核酸の検出方法におい
て、標識物質として、（２）のアルカリ金属、アルカリ
土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基
で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及
びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物を用いることを特徴とす
る方法。(11) In the method for detecting a nucleic acid by hybridization using a nucleic acid labeled with a labeling substance, the labeling substance may be (2) an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. A carbodiimide compound containing a fluorescent group having at least one group selected from the group consisting of a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group.

【００２３】（１２）標識物質として、（４）のアルカ
リ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを
含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用い
る（１１）の方法。(12) The labeling substance is selected from (4) an alkali metal, an alkaline earth metal, or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group or a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus. (11) using a fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one group to be obtained.

【００２４】（１３）標識物質として、（５）のアルカ
リ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを
含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用い
る（１１）の方法。(13) The labeling substance is selected from the group consisting of an alkali metal, an alkaline earth metal or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus as described in (5). (11) using a fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one group to be obtained.

【００２５】なお、本明細書において、「イソ（チオ）
シアネート化合物」とは、イソシアネート化合物又はイ
ソチオシアネート化合物を示し、「（チオ）尿素化合
物」とは、尿素化合物又はチオ尿素化合物を示す。ま
た、本明細書において、「スルホニル基含有誘導体基」
とは、スルホニル基の２価のうち一方が原子または基に
結合して生じる１価の基を意味する。スルホニル基含有
誘導体基の例としては、アルキルスルホニル基、アルコ
キシフェニル基が挙げられる。In this specification, "iso (thio)
The “cyanate compound” indicates an isocyanate compound or an isothiocyanate compound, and the “(thio) urea compound” indicates a urea compound or a thiourea compound. Further, in the present specification, “sulfonyl group-containing derivative group”
The term means a monovalent group formed by bonding one of divalent sulfonyl groups to an atom or a group. Examples of the sulfonyl group-containing derivative group include an alkylsulfonyl group and an alkoxyphenyl group.

【００２６】[0026]

【発明の実施の形態】以下に、本発明の実施の形態を説
明する。まず、本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化
合物について説明する。Embodiments of the present invention will be described below. First, the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention will be described.

【００２７】（１）蛍光性基含有カルボジイミド化合物 本発明のアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物は、上記一般式（III）で表される化合物であ
り、その製造方法は特に限定されないが、例えば、上記
一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はスルホン酸基を有
する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び上記
一般式（VIII）で表される蛍光性基含有化合物からそれ
ぞれ、カルボジイミド化合物及び蛍光性基含有化合物
を、両化合物の少なくとも１つが、アルカリ金属、アル
カリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基
性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ
基及びホスホ基から選ばれる官能基を有するように選択
し、反応させることにより得られるものである。(1) Fluorescent group-containing carbodiimide compound From the carboxyl group, sulfo group, phosphono group and phospho group substituted with an alkali metal, alkaline earth metal or a basic group containing nitrogen or phosphorus of the present invention. The fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one selected group is a compound represented by the above general formula (III), and its production method is not particularly limited. For example, it is represented by the above general formula (I). A carbodiimide compound and a fluorescent group-containing compound, respectively, from the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group and the fluorescent group-containing compound represented by the above general formula (VIII). One of which is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. Hexyl group, selected to have a sulfo group, a functional group selected from a phosphono group and a phospho group, is obtained by reacting.

【００２８】（ｉ）蛍光性基含有カルボジイミド化合物
前駆体 本発明においてハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物前駆体は、上記一般式
（Ｉ）で表される構造を有する。(I) Fluorescent Group-Containing Carbodiimide Compound Precursor In the present invention, the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group has a structure represented by the above general formula (I).

【００２９】式（Ｉ）中のＸは、ハロゲン原子又はスル
ホン酸基であれば、特に制限はなく、公知のものを用い
ることができる。ハロゲン原子としては特に、Ｃｌ、Ｂ
ｒ及びＩ原子が反応性の観点から好ましい。また、スル
ホン酸基としては、トシル基及びメシル基が反応性の観
点から好ましい。X in the formula (I) is not particularly limited as long as it is a halogen atom or a sulfonic acid group, and a known one can be used. As the halogen atom, in particular, Cl, B
r and I atoms are preferred from the viewpoint of reactivity. Further, as the sulfonic acid group, a tosyl group and a mesyl group are preferable from the viewpoint of reactivity.

【００３０】式（Ｉ）中のＡは、−ＣＨ2−、−ＮＨＣ
Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−、−
ＮＲ2Ｒ3−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ
2−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群
から選ばれる官能基が挙げられ、ｎは０又は１を表す。A in the formula (I) is --CH 2- , --NHC
O -, - CONH -, - O -, - S -, - NR 1 -, -
NR 2 R 3 -, - COO -, - OCO -, - NHSO
2 -, - NHC (S) NH- and a functional group can be mentioned selected from the group consisting of -SO 2 NH-, n represents 0 or 1.

【００３１】Ｒ1は炭素数１から２０までの直鎖、環状
若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基
を表す。また、Ｒ2及びＲ3は、独立して水素原子、炭素
数１から２０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは
不飽和脂肪族炭化水素基、又は置換基を有してもよいシ
クロアルキル基、アリール基若しくはアラルキル基を表
す。但し、Ｒ2とＲ3のどちらか一方が水素原子である場
合、他方は炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐し
た飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有し
てもよいシクロアルキル基、アリール基若しくはアラル
キル基を表す。また、Ｒ2とＲ3が相互に結合して全体と
して酸素を含有してもよい含窒素複素環式基を形成して
もよい。さらに、上述の通りｎは０又は１であり、一般
式（Ｉ）で表される化合物はＡを有しても有しなくても
よい。R 1 represents a linear, cyclic or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms. R 2 and R 3 independently represent a hydrogen atom, a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, or a cycloalkyl group which may have a substituent, Represents an aryl group or an aralkyl group. However, when one of R 2 and R 3 is a hydrogen atom, the other may have a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms or a substituent. Represents a cycloalkyl group, an aryl group or an aralkyl group. Further, R 2 and R 3 may be mutually bonded to form a nitrogen-containing heterocyclic group which may contain oxygen as a whole. Further, as described above, n is 0 or 1, and the compound represented by the general formula (I) may or may not have A.

【００３２】また、Ａが有する置換可能な水素は、アル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換さ
れていてもよい。The replaceable hydrogen of A is selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, and a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus. May be substituted with a group.

【００３３】Ｗは直接結合又は４級オニウム基を表す。
なお、ここで用いる「４級オニウム基」とは、式（Ｉ）
に組み込まれて４級オニウム塩を形成し得る基を意味す
る。この様な４級オニウム基として具体的には、下記一
般式（IX）、（Ｘ）又は（XI）で表される基が挙げられ
る。W represents a direct bond or a quaternary onium group.
The term “quaternary onium group” used herein refers to a compound represented by the formula (I)
To form a quaternary onium salt. Specific examples of such a quaternary onium group include groups represented by the following general formulas (IX), (X) and (XI).

【００３４】[0034]

【化１３】 ［式中のＲ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、
炭素数１〜２０の直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不
飽和脂肪族炭化水素基、シクロアルキル基又は炭素数６
〜２０のアリール基若しくはアラルキル基を表す。ま
た、これらの炭化水素基は、カルボキシル基、スルホニ
ル基含有誘導体基、ホスホニウム基、フェニル基、シク
ロアルキル基あるいは水酸基で置換されていてもよ
い。］Embedded image [Wherein R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are each independently
A linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, a cycloalkyl group or 6 carbon atoms;
-20 represents an aryl group or an aralkyl group. These hydrocarbon groups may be substituted with a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group, a phosphonium group, a phenyl group, a cycloalkyl group, or a hydroxyl group. ]

【００３５】これらのうちでも本発明において特に好ま
しく用いられる４級オニウム基としては、上記一般式
（IX）においてＲ6及びＲ7がアルキル基である４級アン
モニウム基、上記一般式（Ｘ）で表させる基等が挙げら
れる。Of these, a quaternary onium group particularly preferably used in the present invention is a quaternary ammonium group in which R 6 and R 7 are alkyl groups in the above formula (IX), and a quaternary ammonium group in the above formula (X) Groups to be represented are exemplified.

【００３６】さらに、Ｗが有する置換可能な水素は、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換
されていてもよい。Further, the displaceable hydrogen of W is selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted by a basic group containing nitrogen or phosphorus. May be substituted with a group.

【００３７】Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4は、カルボジイミド
基とＢ、Ａ又はＸとを結合するリンカー部分であり、各
々上記一般式（II）で表される官能基を示す。上記式
（II）中、Ｌは、−ＣＨ2−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮ
Ｈ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−、−ＮＲ2Ｒ3−、−
ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ2−、−ＮＨＣ(Ｓ)
ＮＨ−及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群から選ばれる官能
基を表し、ｐ及びｑは各々０から２０の整数を表し、ｒ
は０又は１を表す。Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、式（Ｉ）中に
おけるものと同意である。Y 1 , Y 2 , Y 3 and Y 4 are linker portions for bonding a carbodiimide group to B, A or X, and each represents a functional group represented by the general formula (II). In the above formula (II), L represents —CH 2 —, —NHCO—, —CON
H -, - O -, - S -, - NR 1 -, - NR 2 R 3 -, -
COO -, - OCO -, - NHSO 2 -, - NHC (S)
NH- and represents a functional group selected from the group consisting of -SO 2 NH-, p and q are each an integer of 0 to 20, r
Represents 0 or 1. R 1 , R 2 and R 3 have the same meanings as in formula (I).

【００３８】また、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4として好まし
くは、直接結合又は主鎖の炭素数が１から１０でありか
つ分岐鎖としてメチル基を有してもよいアルキレン基を
用いることができる。前記アルキレン基としては、特に
制限はなく公知のものを用いることができる。また、こ
れらのアルキレン基が−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−
Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−、−ＮＲ2Ｒ3−、−ＣＯＯ
−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ2−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−
及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群から選ばれる官能基を介
して相互に連結したものであってもよい。As Y 1 , Y 2 , Y 3 and Y 4 , a direct bond or an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms in the main chain and optionally having a methyl group as a branched chain is preferably used. be able to. The alkylene group is not particularly limited, and a known one can be used. Further, when these alkylene groups are -NHCO-, -CONH-,-
O-, -S-, -NR 1- , -NR 2 R 3- , -COO
-, - OCO -, - NHSO 2 -, - NHC (S) NH-
And it may be those linked to each other via a functional group selected from the group consisting of -SO 2 NH-.

【００３９】さらに、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4においては
いずれも、各々が有する置換可能な水素が、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換されてい
てもよい。Further, in each of Y 1 , Y 2 , Y 3 and Y 4 , each substitutable hydrogen is an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. Substituted carboxyl group, sulfo group,
It may be substituted with a group selected from a phosphono group and a phospho group.

【００４０】Ｂは水素原子又は一価の有機基を表し、一
価の有機基の場合は式（Ｉ）中の−Ｗ−Ｙ1−［Ａ］n−
Ｙ4−Ｘと同一であっても異なってもよい。好ましくは
アルキル基、３級アミノ基又は４級アンモニウム基であ
り、好適な基としては以下に示すものが挙げられる。B represents a hydrogen atom or a monovalent organic group, and in the case of a monovalent organic group, -WY 1- [A] n -in the formula (I)
It may be the same or different from Y 4 -X. Preferred are an alkyl group, a tertiary amino group and a quaternary ammonium group, and preferred groups include those shown below.

【００４１】（イ）窒素原子が水素原子、飽和若しくは
不飽和炭化水素基、アリール基、アラルキル基又は蛍光
性基を含む有機基で４級化されてもよい含窒素複素環式
基、例えば、ピリジル基、ピロリジニウム基若しくはピ
ペリジニウム基等。(A) A nitrogen-containing heterocyclic group which may be quaternized with a nitrogen atom, an organic group containing a hydrogen atom, a saturated or unsaturated hydrocarbon group, an aryl group, an aralkyl group or a fluorescent group, for example, A pyridyl group, a pyrrolidinium group or a piperidinium group;

【００４２】（ロ）窒素原子が水素原子、飽和若しくは
不飽和炭化水素基、アリール基、アラルキル基、又は蛍
光性基を含む有機基で４級化されているアミノ基、例え
ば、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基若しくはジイ
ソプロピルアミノ基等。(B) an amino group in which the nitrogen atom is quaternized with a hydrogen atom, a saturated or unsaturated hydrocarbon group, an aryl group, an aralkyl group, or an organic group containing a fluorescent group, for example, a dimethylamino group; A diethylamino group or a diisopropylamino group.

【００４３】（ハ）下記一般式（XII）又は（XIII）で
表される複素環式３級アミノ基若しくは４級アンモニウ
ム基等。(C) A heterocyclic tertiary amino group or quaternary ammonium group represented by the following formula (XII) or (XIII).

【００４４】[0044]

【化１４】 ［式中、Ｒ11及びＲ12は、各々水素原子、炭素数が１か
ら１０までの直鎖若しくは分岐鎖の飽和若しくは不飽和
炭化水素基、アリール基又はアラルキル基を示す。Ｊは
アニオンを示し、具体的には、サルフェートイオン、ア
ルキルサルフェートイオン、アリールサルフェートイオ
ン、ハロサルフェートイオン、ハライドイオン等を示
す。Ｒ13は酸素原子またはそのイオン原子又はメチレン
基を表す。ｍは、０又は１である。］ 具体的には、下記式で表される基：Embedded image [Wherein, R 11 and R 12 each represent a hydrogen atom, a linear or branched saturated or unsaturated hydrocarbon group having 1 to 10 carbon atoms, an aryl group or an aralkyl group. J represents an anion, and specifically represents a sulfate ion, an alkyl sulfate ion, an aryl sulfate ion, a halo sulfate ion, a halide ion or the like. R 13 represents an oxygen atom or its ionic atom or a methylene group. m is 0 or 1. Specifically, a group represented by the following formula:

【００４５】[0045]

【化１５】 ［式中、Ｒ14及びＲ15は、各々水素原子、炭素数が１か
ら１０までのアルキル基又炭素数が１から１０までのア
ルキル基で置換されていてもよいフェニル基を表す。］Embedded image [Wherein, R 14 and R 15 each represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, or a phenyl group which may be substituted with an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms. ]

【００４６】（ニ）置換基を有してもよいアルキル基、
例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプ
ロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ
−ブチル基、シクロヘキシル基及び、アリール基、例え
ば、フェニル基等。(D) an alkyl group which may have a substituent,
For example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, sec-butyl group, tert
-A butyl group, a cyclohexyl group and an aryl group such as a phenyl group.

【００４７】また、Ｂが有する置換可能な水素は、アル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基で置換さ
れていてもよい。The replaceable hydrogen of B is selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, and a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus. May be substituted with a group.

【００４８】上記のように、本発明の一般式（Ｉ）で示
されるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体において、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、
Ｙ3、Ｙ4、Ａ又はＷで表される官能基はいずれの官能基
も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
を有してもよいが、本発明において好ましくは、これら
から選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１
つ有するものである。As described above, in the fluorescent group-containing carbodiimide compound having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) of the present invention, B, Y 1 , Y 2 ,
The functional group represented by Y 3 , Y 4 , A or W is a carboxyl group or a sulfo group in which any functional group is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. May have a group selected from a phosphono group and a phospho group, but in the present invention, preferably, at least one functional group selected from these contains an alkali metal, an alkaline earth metal, or nitrogen or phosphorus. Carboxyl group, sulfo group,
At least one group selected from a phosphono group and a phospho group
It has one.

【００４９】アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、
窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基として
具体的には、−ＣＯＯＮａ、−ＣＯＯＫ、（−ＣＯＯ）
2Ｍｇ、（−ＣＯＯ）2Ｃａ、（−ＣＯＯ）2Ｂａ、−Ｃ
ＯＯＮＨ4、−ＣＯＯＮＲ1Ｈ3、−ＣＯＯＮＲ1 2Ｈ2、−
ＣＯＯＮＲ1 3Ｈ、−ＣＯＯＮＲ1 4、−ＳＯ3Ｎａ、−Ｓ
Ｏ3ＮＨ4、−ＳＯ3ＮＲ 1Ｈ3、−ＳＯ3ＮＲ1 2Ｈ2、−Ｓ
Ｏ3ＮＲ1 3Ｈ、−ＳＯ3ＮＲ1 4、−ＰＯ3Ｎａ2、−ＰＯ3
Ｋ2、−ＰＯ3Ｃａ、−ＰＯ3（ＮＨ4）2、−ＰＯ3（ＮＲ
1Ｈ3）2、−ＰＯ3（ＮＲ1 2Ｈ2）2、−ＰＯ3（ＮＲ
1 3Ｈ）2、−ＰＯ3（ＮＲ1 4）2、−ＯＰＯ3Ｎａ2、−Ｏ
ＰＯ3Ｋ2、−ＯＰＯ3（ＮＲ1 4）2（Ｒ1は、前記式
（Ｉ）中のＲ1と同意である。）等が挙げられる。An alkali metal, an alkaline earth metal, or
Carboxy substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus
Boxyl, sulfo, phosphono and phospho groups
Specifically, -COONa, -COOK, (-COO)
TwoMg, (-COO)TwoCa, (-COO)TwoBa, -C
OONHFour, -COONR1HThree, -COONR1 TwoHTwo, −
COONR1 ThreeH, -COONR1 Four, -SOThreeNa, -S
OThreeNHFour, -SOThreeNR 1HThree, -SOThreeNR1 TwoHTwo, -S
OThreeNR1 ThreeH, -SOThreeNR1 Four, -POThreeNaTwo, -POThree
KTwo, -POThreeCa, -POThree(NHFour)Two, -POThree(NR
1HThree)Two, -POThree(NR1 TwoHTwo)Two, -POThree(NR
1 ThreeH)Two, -POThree(NR1 Four)Two, -OPOThreeNaTwo, -O
POThreeKTwo, -OPOThree(NR1 Four)Two(R1Is the above formula
R in (I)1I agree. ) And the like.

【００５０】この様な、上記一般式（Ｉ）で表される本
発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体とし
て、具体的には、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピ
ル）−Ｎ−（ヘキサン−６−アイオダイド）−カルボジ
イミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ
−（ヘキサン−６−ブロミド）−カルボジイミド、Ｎ−
メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン
−６−クロライド）−カルボジイミド、Ｎ−メチル−
（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−ト
シレート）−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モル
ホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−メシレート）
−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロ
ピル）−Ｎ−（プロピル−（２−エチルカルボン酸ナト
リウム）−３−アイオダイド）−カルボジイミド、Ｎ−
メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（プロピル
−（２−エチルカルボン酸カリウム）−３−アイオダイ
ド）−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノ
プロピル）−Ｎ−（プロピル−（２−プロピルカルボン
酸ナトリウム）−３−アイオダイド）−カルボジイミ
ド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−
（プロピル−（２−イソプロピルカルボン酸ナトリウ
ム）−３−アイオダイド）−カルボジイミド等が挙げら
れる。As the precursor of the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention represented by the above general formula (I), specifically, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (hexane -6-iodide) -carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N
-(Hexane-6-bromide) -carbodiimide, N-
Methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (hexane-6-chloride) -carbodiimide, N-methyl-
(3-morpholinopropyl) -N- (hexane-6-tosylate) -carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (hexane-6-mesylate)
-Carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (propyl- (sodium 2-ethylcarboxylate) -3-iodide) -carbodiimide, N-
Methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (propyl- (potassium 2-ethylcarboxylate) -3-iodide) -carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (propyl- (2-propyl Sodium carboxylate) -3-iodide) -carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N-
(Propyl- (sodium 2-isopropylcarboxylate) -3-iodide) -carbodiimide and the like.

【００５１】（ii）蛍光性基含有カルボジイミド化合物 本発明のアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物は、例えば、上記一般式（Ｉ）で表されるハロ
ゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体及び上記一般式（VIII）で表される蛍
光性基含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合物
及び蛍光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１つ
が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官
能基を有するように選択し、反応させることにより得ら
れるものであり、その構造は上記一般式（III）で表さ
れるものである。(Ii) Fluorescent group-containing carbodiimide compound The carboxyl group, sulfo group, phosphono group and phospho group substituted with the alkali metal, alkaline earth metal, or basic group containing nitrogen or phosphorus of the present invention The fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one selected group is, for example, a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) and the general formula (VIII) The carbodiimide compound and the fluorescent group-containing compound are each replaced with a basic group containing an alkali metal, an alkaline earth metal, or nitrogen or phosphorus from the fluorescent group-containing compound represented by Having a functional group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group It is obtained by selecting and reacting, and its structure is represented by the above general formula (III).

【００５２】上記（III）中の蛍光性基Ｆとしては、特
に制限がなく公知のものを用いることができるが、具体
的には、アントラセン誘導体、クマリン誘導体、ピレン
誘導体、ペリレン誘導体、ダンシル誘導体、ローダミン
誘導体、オキサゾール誘導体、ベンゾチアゾール誘導
体、ベンゾオキサジアゾール誘導体、ジピロメテンボロ
ンジフルオライド誘導体、チアゾールオレンジ誘導体、
蛍光希土類金属化合物誘導体及びシアニン誘導体等から
得られる基が挙げられる。The fluorescent group F in the above (III) is not particularly limited and may be a known one. Specific examples thereof include anthracene derivatives, coumarin derivatives, pyrene derivatives, perylene derivatives, dansyl derivatives, Rhodamine derivatives, oxazole derivatives, benzothiazole derivatives, benzoxadiazole derivatives, dipyrromethene boron difluoride derivatives, thiazole orange derivatives,
Examples include groups obtained from fluorescent rare earth metal compound derivatives, cyanine derivatives, and the like.

【００５３】また、蛍光性基Ｆが有する置換可能な水素
は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
で置換されていてもよい。The displaceable hydrogen of the fluorescent group F is a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group or a phosphono group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. It may be substituted with a group selected from the groups.

【００５４】また、上記式（III）中のＱは、３級又は
４級窒素若しくは３級又は４級リンを表す。式（III）
中、Ｒ4及びＲ5は、独立して水素原子、炭素数１から２
０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪
族炭化水素基、又は置換基を有してもよいシクロアルキ
ル基、アリール基若しくはアラルキル基を表す。但し、
Ｒ4とＲ5のどちらか一方が水素原子である場合、他方は
炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐した飽和若し
くは不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有してもよいシ
クロアルキル基、アリール基若しくはアラルキル基を表
す。また、Ｒ4とＲ5が相互に結合して−Ｑ+Ｒ4Ｒ5−と
して酸素を含有してもよい含窒素複素環式基又は含リン
複素環式基を形成してもよい。なお、上記ＱはＲ4及び
Ｒ5との組み合わせ、つまり−Ｑ+Ｒ4Ｒ5−というかたち
で、３級又は４級オニウム基を形成しているものであ
る。前記３級又は４級オニウム基のうちの好ましい基と
しては、上記Ｗにおいて好ましい基として例示した４級
オニウム基と同様のものが例示できる。Q in the above formula (III) represents tertiary or quaternary nitrogen or tertiary or quaternary phosphorus. Formula (III)
Wherein R 4 and R 5 are each independently a hydrogen atom, having 1 to 2 carbon atoms.
And represents a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group up to 0, or a cycloalkyl group, an aryl group or an aralkyl group which may have a substituent. However,
When one of R 4 and R 5 is a hydrogen atom, the other is a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, or a cycloalkyl which may have a substituent. Represents an aryl group or an aralkyl group. R 4 and R 5 may be mutually bonded to form a nitrogen-containing heterocyclic group or a phosphorus-containing heterocyclic group which may contain oxygen as —Q + R 4 R 5 —. The above Q forms a tertiary or quaternary onium group in combination with R 4 and R 5 , that is, in the form of -Q + R 4 R 5- . Preferred examples of the tertiary or quaternary onium group include those similar to the quaternary onium groups exemplified as preferred groups in W.

【００５５】また、Ｒ4及びＲ5が有する置換可能な水素
は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
で置換されていてもよい。The substitutable hydrogen contained in R 4 and R 5 is a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group or a carboxyl group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. It may be substituted with a group selected from a phospho group.

【００５６】式（III）中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、
Ａ、Ｘ、Ｗ、Ｒ2、Ｒ3及びｎは、各々前記一般式（Ｉ）
におけるのと同意である。さらに、上記式（III）中の
Ｙ5は、上記式（Ｉ）中のＹ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4と同意
である。In the formula (III), B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 ,
A, X, W, R 2 , R 3 and n each represent the above-mentioned general formula (I)
I agree with Further, Y 5 in the above formula (III) has the same meaning as Y 1 , Y 2 , Y 3 and Y 4 in the above formula (I).

【００５７】この様に、本発明の一般式（III）で示さ
れる蛍光性基含有カルボジイミド化合物においては、上
記Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ｙ5、Ａ、Ｗ、Ｒ4、Ｒ5及
びＦで表される官能基はいずれの官能基も、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を含有すること
ができるが、それと同時にこれらから選ばれる少なくと
も１つの官能基が必ず、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有するものであ
る。As described above, in the fluorescent group-containing carbodiimide compound represented by the general formula (III) of the present invention, the above B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , Y 5 , A, W, R The functional groups represented by 4 , R 5 and F are each a carboxyl group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus, a sulfo group,
It can contain a group selected from a phosphono group and a phospho group, and at the same time, at least one functional group selected from these groups must be an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. And at least one group selected from the group consisting of a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group.

【００５８】例えば、上記一般式（Ｉ）で表されるハロ
ゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体と上記一般式（VIII）で表される蛍光
性基含有化合物を反応させることにより得られる本発明
の一般式（III）で示される蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物においては、前記前駆体由来のＢ、Ｙ1、Ｙ2、
Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する場合には、前記蛍光性基含有
化合物由来のＹ5、Ｒ4、Ｒ5及びＦで表される官能基は
いずれの官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、
又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換され
たカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基
から選ばれる基を有しても、有さなくてもよい。For example, reacting a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the above general formula (I) with a fluorescent group-containing compound represented by the above general formula (VIII) In the fluorescent group-containing carbodiimide compound represented by the general formula (III) of the present invention obtained by the above, B, Y 1 , Y 2 ,
A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group in which at least one functional group selected from Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus; And when it has at least one group selected from phospho groups, the functional group represented by Y 5 , R 4 , R 5 and F derived from the fluorescent group-containing compound is any one of an alkali metal, Alkaline earth metals,
Alternatively, it may or may not have a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a nitrogen- or phosphorus-containing basic group.

【００５９】同様に、前記蛍光性基含有化合物由来のＹ
5、Ｒ4、Ｒ5及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する場合には、前記前駆体由来の
Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷで表される官能基は
いずれの官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、
又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換され
たカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基
から選ばれる基を有しても、有さなくてもよい。Similarly, Y derived from the fluorescent group-containing compound
5 , a carboxyl group, a sulfo group, or a phosphono group in which at least one functional group selected from R 4 , R 5 and F is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. And at least one group selected from phospho groups, the functional groups represented by B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A and W derived from the precursor are all functional groups , Alkali metal, alkaline earth metal,
Alternatively, it may or may not have a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a nitrogen- or phosphorus-containing basic group.

【００６０】この様な、上記一般式（III）で表される
本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物として、具
体的には、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−
Ｎ−（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロ
ピル）−１−ローダミンＢチオウレア−カリウム塩））
−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロ
ピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルア
ミノプロピル）−１−ローダミンＢチオウレア−ナトリ
ウム塩））−カルボジイミド、Ｎ−メチル−（３−モル
ホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサン−６−（Ｎ−３−
（ジメチルアミノプロピル）−１−ローダミンＢチオウ
レア−テトラメチルアンモニウム塩））−カルボジイミ
ド、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−
（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）−１−フルオロセインチオウレア−カリウム塩））
−カルボジイミド、２−［２−［３−［［１，３−ジヒ
ドロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−
２Ｈ−インドール−２−イリデン］エチリデン］−２−
フェノキシ−１−シクロヘキセン−１−イル］−エテニ
ル］−１，１−ジメチル［３−プロピルチオウレア−Ｎ
−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（ヘキサ
ン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピル）−カル
ボジイミド））］１Ｈ−ベンツ［ｅ］−インドリウム
塩、Ｎ−メチル−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−
（ヘキサン−６−（Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）−１−カスケードブルーアミノエチル−４−アジド
ベンズアミド−トリナトリウム塩））−カルボジイミド
等が挙げられる。As the carbodiimide compound containing a fluorescent group of the present invention represented by the above general formula (III), specifically, N-methyl- (3-morpholinopropyl)-
N- (Hexane-6- (N-3- (dimethylaminopropyl) -1-rhodamine B thiourea-potassium salt))
-Carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (hexane-6- (N-3- (dimethylaminopropyl) -1-rhodamine B thiourea-sodium salt))-carbodiimide, N-methyl- ( 3-morpholinopropyl) -N- (hexane-6- (N-3-
(Dimethylaminopropyl) -1-rhodamine B thiourea-tetramethylammonium salt))-carbodiimide, N-methyl- (3-morpholinopropyl) -N-
(Hexane-6- (N-3- (dimethylaminopropyl) -1-fluoroceinthiourea-potassium salt))
-Carbodiimide, 2- [2- [3-[[1,3-dihydro-1,1-dimethyl-3- (4-sulfobutyl)-]
2H-indole-2-ylidene] ethylidene] -2-
Phenoxy-1-cyclohexen-1-yl] -ethenyl] -1,1-dimethyl [3-propylthiourea-N
-Methyl- (3-morpholinopropyl) -N- (hexane-6- (N-3- (dimethylaminopropyl) -carbodiimide))] 1H-benz [e] -indolium salt, N-methyl- (3- Morpholinopropyl) -N-
(Hexane-6- (N-3- (dimethylaminopropyl) -1-cascade blue aminoethyl-4-azidobenzamide-trisodium salt))-carbodiimide and the like.

【００６１】次に、本発明の蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物の製造方法について説明する。Next, a method for producing the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention will be described.

【００６２】（２）蛍光性基含有カルボジイミド化合物
の製造方法 本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方法
は、特に限定されるものではないが、一般的には、上記
一般式（Ｉ）で表される蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体及び上記一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合物及び蛍
光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１つが、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官能基を
有するように選択し、これらを反応させる製造方法が挙
げられる。(2) Method for producing fluorescent group-containing carbodiimide compound The method for producing the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention is not particularly limited, but is generally represented by the above general formula (I). A carbodiimide compound and a fluorescent group-containing compound, respectively, from the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor and the fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII), wherein at least one of the two compounds is an alkali metal; Alkaline earth metal, or a carboxyl group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus, a sulfo group, selected to have a functional group selected from a phosphono group and a phospho group, a production method of reacting these. No.

【００６３】具体的には、上記一般式（Ｉ）で表される
蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体及び上記一般
式（VIII）で表される蛍光性基含有化合物を組み合わせ
たときに、両化合物の少なくとも１つが、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官能基を有するよ
うな（ｉ）上記一般式（Ｉ）で表される蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物前駆体を製造する工程、（ii）上記
一般式（VIII）で表される蛍光性基含有化合物を製造す
る工程、（iii）前記（ｉ）工程で製造した蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体と、前記（ii）工程で製
造した上記一般式（VIII）で表される蛍光性基含有化合
物とを反応させる工程を行うことにより、本発明の蛍光
性基含有カルボジイミド化合物を製造することができ
る。Specifically, when the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor represented by the general formula (I) and the fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII) are combined, At least one of which is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus, a carboxyl group, a sulfo group,
(I) a step of producing a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor represented by the above general formula (I) having a functional group selected from a phosphono group and a phospho group; A step of producing the fluorescent group-containing compound represented by (iii) the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor produced in the step (i) and the general formula (VIII) produced in the step (ii). By performing the step of reacting with the fluorescent group-containing compound to be performed, the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention can be produced.

【００６４】（ｉ）上記（Ｉ）式で表される蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体を製造する工程 本発明におけるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物前駆体は、各々所望する
蛍光性基含有カルボジイミド化合物の構造に応じて適宜
選択できる。このようなハロゲン又はスルホン酸基を有
する蛍光性基含有カルボジイミド基含有化合物前駆体を
製造する方法については、特に制限されないが、例え
ば、まず、（Ａ）イソシアネート化合物とハロゲン誘導
体又はスルホン誘導体に変換されるために必要な官能基
を有する１級アミン誘導体等のアミン化合物を出発原料
として尿素又はチオ尿素化合物を作製し、次いで、
（Ｂ）この（チオ）尿素化合物をハロゲン化又はスルホ
ン化処理して、さらに、（Ｃ）得られる化合物について
脱水あるいは酸化的脱硫によるカルボジイミド化を行う
ことにより達成される。以下に（Ａ）から（Ｃ）の工程
を詳しく説明する。(I) Step of Producing Fluorescent Group-Containing Carbodiimide Compound Precursor Represented by Formula (I) The fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group in the present invention is each desired. It can be appropriately selected according to the structure of the fluorescent group-containing carbodiimide compound. The method of producing such a fluorescent group-containing carbodiimide group-containing compound precursor having a halogen or sulfonic acid group is not particularly limited. For example, first, (A) an isocyanate compound and a halogen derivative or a sulfone derivative A urea or thiourea compound is prepared using an amine compound such as a primary amine derivative having a functional group necessary for the reaction as a starting material,
(B) This is achieved by subjecting the (thio) urea compound to a halogenation or sulfonation treatment, and further performing (C) a carbodiimidation of the obtained compound by dehydration or oxidative desulfurization. Hereinafter, the steps (A) to (C) will be described in detail.

【００６５】（Ａ）チオ（尿素）化合物を製造する工程 一般的に尿素化合物は、アミン化合物とイソシアネート
化合物との反応により合成することが可能であり[J.H.S
aunders and R.Slocombe,Chem.Rev.,43,203(1948)]、ま
た、チオ尿素誘導体についても、アミン化合物とイソチ
オシアネート化合物との反応により合成することが一般
的に行われている[N.A.Ivanov,R.V.Viasova,V.A.Gancha
rava, and L.N.Smirnov,Izv.Vyssh.Zaved.Khim.Tekhno
l.,19(7),1010(1976)]。(A) Step of Producing a Thio (urea) Compound In general, a urea compound can be synthesized by reacting an amine compound with an isocyanate compound [JHS
aunders and R. Slocombe, Chem. Rev., 43, 203 (1948)], and thiourea derivatives are generally synthesized by reacting an amine compound with an isothiocyanate compound [NAIvanov, RV Visova]. , VAGancha
rava, and LNSmirnov, Izv.Vyssh.Zaved.Khim.Tekhno
l., 19 (7), 1010 (1976)].

【００６６】本発明の製造方法においても上記方法を適
用することが可能であり、上記一般式（IV）で表される
イソ（チオ）シアネート化合物と、上記一般式（Ｖ）で
表されるハロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変換され
るために必要な官能基を有するアミン化合物とを反応さ
せて、上記一般式（VI）で表される（チオ）尿素化合物
を合成することができる。なお、これにより得られる一
般式（VI）で表される（チオ）尿素化合物も、ハロゲン
誘導体又はスルホン誘導体に変換されるために必要な官
能基、具体的には、水酸基、アルキル基、アルケニル
基、ビニル基、アリル基、フェニル基、カルボキシル
基、スルホニル基含有誘導体基、ホスホニウム基等を有
するものである。The above method can be applied to the production method of the present invention. The iso (thio) cyanate compound represented by the general formula (IV) and the halogen represented by the general formula (V) can be used. The (thio) urea compound represented by the above general formula (VI) can be synthesized by reacting with an amine compound having a functional group necessary for being converted into a derivative or a sulfone derivative. The (thio) urea compound represented by the general formula (VI) thus obtained also has a functional group required to be converted into a halogen derivative or a sulfone derivative, specifically, a hydroxyl group, an alkyl group, or an alkenyl group. , A vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group, a phosphonium group, and the like.

【００６７】上記反応の具体例として、例えば、Ｎ−
（３−モルホリノプロピル）イソチオシアネート、Ｎ−
３−ジメチルアミノプロピル−Ｎ−３−（４−モルホリ
ノ）−プロピルイソチオシアネート、１−エチル−３，
３−ジメチルアミノプロピルイソチオシアネート又はビ
ス−（３，３−ジメチルアミノ）プロピルイソチオシア
ネート等の一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネ
ート化合物と、６−アミノヘキサノール、５−アミノペ
ンタノール、４−アミノブタノール又は３−アミノペン
タノール等の一般式（Ｖ）で表されるハロゲン誘導体又
はスルホン誘導体に変換されるために必要な官能基を有
するアミン化合物を、ジクロロメタン、クロロホルム又
はジメチルホルムアミド（以下「ＤＭＦ」という）等の
公知の溶剤中で混合する反応を挙げることができる。こ
の様にして上記一般式（VI）で示されるハロゲン誘導体
又はスルホン誘導体に変換されるために必要な官能基を
有する（チオ）尿素化合物が得られる。As a specific example of the above reaction, for example, N-
(3-morpholinopropyl) isothiocyanate, N-
3-dimethylaminopropyl-N-3- (4-morpholino) -propylisothiocyanate, 1-ethyl-3,
An iso (thio) cyanate compound represented by the general formula (IV) such as 3-dimethylaminopropylisothiocyanate or bis- (3,3-dimethylamino) propylisothiocyanate; 6-aminohexanol and 5-aminopentanol An amine compound having a functional group required to be converted into a halogen derivative or a sulfone derivative represented by the general formula (V) such as 4-aminobutanol or 3-aminopentanol is converted into dichloromethane, chloroform or dimethylformamide ( (Hereinafter referred to as "DMF"). In this way, a (thio) urea compound having a functional group necessary for being converted into the halogen derivative or the sulfone derivative represented by the general formula (VI) is obtained.

【００６８】また、上記方法以外にも、以下に反応式を
示す様に、第１のアミン化合物と尿素を縮合させ１置換
尿素を得て、更に第２のハロゲン誘導体又はスルホン誘
導体に変換されるために必要な官能基を有する１級アミ
ンを反応させることにより２置換尿素中間体を合成する
ことができる[T. L. Davis and K. C. Blanchard, Org.
Synth. Coll Vol. 1, 453(1941)]。In addition to the above method, a first amine compound and urea are condensed to obtain a monosubstituted urea and further converted to a second halogen derivative or a sulfone derivative as shown in the following reaction formula. A disubstituted urea intermediate can be synthesized by reacting a primary amine having a functional group necessary for the reaction [TL Davis and KC Blanchard, Org.
Synth. Coll Vol. 1, 453 (1941)].

【００６９】[0069]

【化１６】 ［式中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ、Ｗ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｚは、水酸基、アルキ
ル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル
基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基、又は
ホスホニウム基を表す。］Embedded image [Wherein, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A, W and n have the same meanings as in the above general formula (I). T represents an oxygen atom or a sulfur atom. Z represents a hydroxyl group, an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group, or a phosphonium group. ]

【００７０】また、前記１置換尿素は第１のアミン化合
物とシアン酸又はその塩とを反応させることによっても
合成することができる[F. Kurzer, Org. Synth. Coll.
Vol.4, 49(1963)]。さらに、これらの反応において第１
のアミン化合物としてハロゲン誘導体又はスルホン誘導
体に変換されるために必要な官能基を有する１級アミン
を用いることも可能であり、その場合には、上記第２の
アミン化合物はハロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変
換されるために必要な官能基を有しても有さなくてもよ
い。The monosubstituted urea can also be synthesized by reacting a first amine compound with cyanic acid or a salt thereof [F. Kurzer, Org. Synth. Coll.
Vol. 4, 49 (1963)]. Furthermore, the first in these reactions
It is also possible to use a primary amine having a functional group necessary to be converted into a halogen derivative or a sulfone derivative as the amine compound of the above, in which case, the second amine compound is a halogen derivative or a sulfone derivative It may or may not have the necessary functional groups to be converted.

【００７１】なお、上記２置換尿素誘導体は、上述の様
にしてハロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変換される
ために必要な官能基を有するアミン化合物とイソシアネ
ート化合物とを反応させることにより直接得ることもで
きる。The disubstituted urea derivative can also be obtained directly by reacting an amine compound having a functional group necessary for being converted into a halogen derivative or a sulfone derivative with an isocyanate compound as described above. .

【００７２】また、上記一般式（VI）で示される（チ
オ）尿素化合物がモルホリノアルキル基、モルホリノア
ルキルエステル基、モルホリノアルキルエーテル基、モ
ルホリノアルキルアミド基、モルホリノアルキルケトン
基、モルホリノアルキルチオウレア基、トリアルキルア
ミノ基、トリアルキルエステルアミノ基、トリアルキル
エーテル基、トリアルキルアミドアミノ基、トリアルキ
ルケトンアミノ基、トリアルキルチオウレアアミノ基、
トリアルキルホスホニウム基、トリアルキルエステルホ
スホニウム基、トリアルキルエーテルホスホニウム基、
トリアルキルアミドホスホニウム基、トリアルキルケト
ンホスホニウム基、トリアルキルチオウレアホスホニウ
ム基等の３級窒素又はリン含有基を有する場合には、こ
れをＤＭＦ等の公知の溶剤中でｐ−トルエンスルホン酸
メチル、ヨウ化メチル、ジメチル硫酸等と反応させて４
級オニウム塩化することにより、水溶性を向上させるこ
とができる。Further, the (thio) urea compound represented by the above general formula (VI) is a morpholinoalkyl group, a morpholinoalkyl ester group, a morpholinoalkyl ether group, a morpholinoalkylamide group, a morpholinoalkylketone group, a morpholinoalkylthiourea group, Alkylamino group, trialkylester amino group, trialkylether group, trialkylamidoamino group, trialkylketoneamino group, trialkylthioureaamino group,
Trialkyl phosphonium group, trialkyl ester phosphonium group, trialkyl ether phosphonium group,
When it has a tertiary nitrogen- or phosphorus-containing group such as a trialkylamidophosphonium group, a trialkylketonephosphonium group, or a trialkylthioureaphosphonium group, the tertiary nitrogen or phosphorus-containing group is dissolved in a known solvent such as DMF in methyl p-toluenesulfonate, Reaction with methyl chloride, dimethyl sulfate, etc.
The water solubility can be improved by performing the onium saltation.

【００７３】ここで、上記（Ａ）工程は、以下に説明す
る（Ａ'）イソ（チオ）シアネート化合物と１級アミン
誘導体等のアミン化合物を出発原料として尿素又はチオ
尿素化合物を作製する工程、次いで、（Ａ"）この（チ
オ）尿素化合物に、これら化合物がハロゲン誘導体又は
スルホン誘導体に変換されるために必要な官能基を導入
する工程の２段階で行うこともできる。Here, the step (A) is a step of preparing a urea or thiourea compound by using an (A ′) iso (thio) cyanate compound and an amine compound such as a primary amine derivative as starting materials described below. Next, (A ") the (thio) urea compound may be subjected to two steps of introducing a functional group necessary for converting the compound into a halogen derivative or a sulfone derivative.

【００７４】この方法においては、まず、（Ａ'）工程
で、上記一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネー
ト化合物と同様の化合物と、下記一般式（Ｖ'）で表さ
れるアミン化合物とを反応させて下記一般式（IV'）で
表される（チオ）尿素化合物を合成する。この反応も上
記同様に、イソ（チオ）シアネート化合物とアミン化合
物との一般的な反応である。In this method, first, in step (A ′), a compound similar to the iso (thio) cyanate compound represented by the above general formula (IV) and a compound represented by the following general formula (V ′) By reacting with an amine compound, a (thio) urea compound represented by the following general formula (IV ′) is synthesized. This reaction is also a general reaction between an iso (thio) cyanate compound and an amine compound as described above.

【００７５】[0075]

【化１７】 ［式中、Ｂ、Ｙ2及びＹ3は、各々前記一般式（Ｉ）にお
けるのと同意である。Ｗ'は、水酸基、アルキル基、ア
ルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル基、カルボ
キシル基、スルホニル基含有誘導体基及びホスホニウム
基から選ばれる基で置換されてもよい、２級又は３級窒
素含有基若しくは２級又は３級リン含有基を表す。Ｔ
は、酸素原子またはイオウ原子を表す。］Embedded image [Wherein, B, Y 2 and Y 3 have the same meanings as in the above general formula (I). W 'may be substituted with a group selected from a hydroxyl group, an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group and a phosphonium group, and Represents a group or a secondary or tertiary phosphorus-containing group. T
Represents an oxygen atom or a sulfur atom. ]

【００７６】また、アミン化合物と二硫化炭素との反応
により上記（IV'）で示される化合物として以下の様な
チオ尿素化合物を合成することもできる[W. W. Levis,
Jr.and E. A. Waipert, U.S. Pat. 3,168,560(1965)]。The following thiourea compound can also be synthesized as a compound represented by the above (IV ′) by reacting an amine compound with carbon disulfide [WW Levis,
Jr. and EA Waipert, US Pat. 3,168,560 (1965)].

【００７７】[0077]

【化１８】 ［式中、Ｂ及びＹ3は、各々前記一般式（Ｉ）における
のと同意である。］Embedded image [Wherein, B and Y 3 are the same as in the above general formula (I), respectively. ]

【００７８】この他に、アミン化合物と尿素を縮合させ
１置換尿素を得て、更に第２の又は同一の１級アミンを
反応させることにより上記（IV'）で示される化合物と
して以下の様な２置換尿素中間体を合成することができ
る[T. L. Davis and K. C. Blanchard, Org. Synth. Co
ll Vol. 1, 453(1941)]。In addition, an amine compound and urea are condensed to obtain a monosubstituted urea, and further reacted with a second or the same primary amine to obtain the compound represented by the above (IV ′) as follows: Bisubstituted urea intermediates can be synthesized [TL Davis and KC Blanchard, Org. Synth. Co.
ll Vol. 1, 453 (1941)].

【００７９】[0079]

【化１９】 ［式中、Ｂ、Ｙ2及びＹ3は、各々一般式（Ｉ）における
のと同意である。Ｗ'は、置換されてもよいオニウム基
を表す。］Embedded image [Wherein, B, Y 2 and Y 3 have the same meanings as in general formula (I). W ′ represents an onium group which may be substituted. ]

【００８０】また、前記１置換尿素はアミン化合物とシ
アン酸又はその塩とを反応させることによっても合成す
ることができる[F. Kurzer, Org. Synth. Coll. Vol.
4, 49(1963)]。The monosubstituted urea can also be synthesized by reacting an amine compound with cyanic acid or a salt thereof [F. Kurzer, Org. Synth. Coll. Vol.
4, 49 (1963)].

【００８１】次いで、上記（Ａ'）工程で得られた一般
式（IV'）で表される（チオ）尿素化合物を下記一般式
（Ｖ"）で表されるハロゲン誘導体あるいはスルホン誘
導体に変換されるために必要な官能基を有するアミン化
合物と反応させて一般式（VI）で表される化合物を作製
する（Ａ"）工程が行われる。Next, the (thio) urea compound represented by the general formula (IV ′) obtained in the step (A ′) is converted into a halogen derivative or a sulfone derivative represented by the following general formula (V ″). (A ") for producing a compound represented by the general formula (VI) by reacting with an amine compound having a functional group necessary for the reaction.

【００８２】[0082]

【化２０】 ［式中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ｗ、Ａ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｄは、水酸基、ハロゲ
ン原子又はスルホニル基含有誘導体基を表し、Ｚは、水
酸基、アルキル基、アルケニル基、ビニル基、アリル
基、フェニル基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘
導体基、又はホスホニウム基を表す。］Embedded image [Wherein, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , W, A and n have the same meanings as in the above general formula (I). T represents an oxygen atom or a sulfur atom. D represents a hydroxyl group, a halogen atom or a sulfonyl group-containing derivative group, and Z represents a hydroxyl group, an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group, or a phosphonium group. . ]

【００８３】この様にして（Ａ）工程において上記一般
式（VI）で示されるハロゲン誘導体又はスルホン誘導体
に変換されるために必要な官能基を有する（チオ）尿素
化合物が、上記１段階の反応工程又は（Ａ'）、（Ａ"）
工程の２段階の反応工程により得られる。In this way, the (thio) urea compound having a functional group necessary for being converted into the halogen derivative or the sulfone derivative represented by the general formula (VI) in the step (A) is converted into the one-step reaction described above. Process or (A '), (A ")
It is obtained by a two-stage reaction process.

【００８４】（Ｂ）ハロゲン化又はスルホン化工程 上記一般式（VI）で示される（チオ）尿素化合物にハロ
ゲンを導入する方法としては、例えば、前記（チオ）尿
素化合物に水酸基が導入されている場合には、前記化合
物と、ハロゲン化試薬、例えば、ハロゲン化水素、ハロ
ゲン化ナトリウム、ハロゲン化カリウム、ハロゲン化リ
ン、ハロゲン化ホスホン酸トリエステル、ハロゲン化ホ
スフィン、ハロゲン化チオニル、酸ハロゲン化合物等を
ＤＭＦ、ベンゼン、ピリジン等の公知の溶剤中で混合し
反応させる方法が挙げられる[O.Kamm, C. S. Marvel, O
rg. Syhth., 1, 25(1941); T. A. Wnuk, P. Kovacic,
J.Am. Chem. Soc., 97, 5807(1975); J. D. Bartleson,
R. E. Burk, H. P. Lankelma, J. Am. Chem. Soc., 6
8, 2513(1946); K. Friedlich, H. K. Thieme, Synthes
is, 111(1973); H. Stone, H. Shechter, Org. Synth.,
4, 323(1963); T.H. Bevan, T. Malkin, D. B. Smith,
J. Chem. Soc., 1383(1955)]。(B) Halogenation or sulfonation step As a method for introducing a halogen into the (thio) urea compound represented by the above general formula (VI), for example, a hydroxyl group is introduced into the (thio) urea compound. In such a case, the compound and a halogenating reagent, for example, hydrogen halide, sodium halide, potassium halide, phosphorus halide, halogenated phosphonic acid triester, phosphine halide, thionyl halide, acid halide compound, etc. A method of mixing and reacting in a known solvent such as DMF, benzene, pyridine or the like [O. Kamm, CS Marvel, O
rg. Syhth., 1, 25 (1941); TA Wnuk, P. Kovacic,
J. Am. Chem. Soc., 97, 5807 (1975); JD Bartleson,
RE Burk, HP Lankelma, J. Am. Chem. Soc., 6
8, 2513 (1946); K. Friedlich, HK Thieme, Synthes
is, 111 (1973); H. Stone, H. Shechter, Org. Synth.,
4, 323 (1963); TH Bevan, T. Malkin, DB Smith,
J. Chem. Soc., 1383 (1955)].

【００８５】また、上記ハロゲン化試薬として、より具
体的には、臭化水素酸、臭化ナトリウム、塩化亜鉛、三
臭化リン、三塩化リン、ヨウ化カリウム、ヨウ化メチル
トリフェニルホスホン酸、ヨウ素、ヨウ化ナトリウム、
塩化メタンスルホニル、トリフェニルホスフィンジ臭
素、トリフェニルホスフィンジ塩素、トリフェニルホス
フィンジヨウ素、塩化チオニル、臭化チオニル等が挙げ
られる。Further, as the halogenating reagent, more specifically, hydrobromic acid, sodium bromide, zinc chloride, phosphorus tribromide, phosphorus trichloride, potassium iodide, methyltriphenylphosphonic acid iodide, Iodine, sodium iodide,
Methanesulfonyl chloride, triphenylphosphine dibromine, triphenylphosphine dichlorine, triphenylphosphine diiodine, thionyl chloride, thionyl bromide and the like can be mentioned.

【００８６】また、上記一般式（VI）で示される（チ
オ）尿素化合物にスルホン酸基を導入する方法として
は、例えば、前記（チオ）尿素化合物に水酸基が導入さ
れている場合には、前記化合物と、スルホン化試薬、例
えば、ハロゲン化スルホン酸等をジクロロメタン、クロ
ロホルム等の公知の溶剤中で混合し反応させる方法が挙
げられる。As a method for introducing a sulfonic acid group into the (thio) urea compound represented by the general formula (VI), for example, when a hydroxyl group is introduced into the (thio) urea compound, A method in which a compound and a sulfonating reagent, for example, a halogenated sulfonic acid or the like are mixed and reacted in a known solvent such as dichloromethane or chloroform.

【００８７】また、上記スルホン化試薬として、具体的
には、塩化ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン
酸塩化物、塩化メタンスルホン酸、臭化ベンゼンスルホ
ン酸、ｐ−トルエンスルホン酸臭化物、臭化メタンスル
ホン酸等が挙げられる。Examples of the sulfonating reagent include benzene sulfonic acid, p-toluene sulfonic acid chloride, methane sulfonic acid, bromobenzene sulfonic acid, p-toluene sulfonic acid bromide, and methane bromide. Sulfonic acid and the like.

【００８８】この様にして上記一般式（VI）で示される
（チオ）尿素化合物をハロゲン化又はスルホン化するこ
とにより、上記一般式（VII）で示される（チオ）尿素
化合物のハロゲン誘導体又はスルホン酸誘導体が得られ
る。By halogenating or sulfonating the (thio) urea compound represented by the general formula (VI) in this manner, a halogen derivative or sulfone of the (thio) urea compound represented by the general formula (VII) is obtained. An acid derivative is obtained.

【００８９】（Ｃ）脱水又は酸化的脱硫工程 本発明の製造方法においては、上記で得られる一般式
（VII）で示される化合物をさらに脱水あるいは酸化的
脱硫反応させることにより、本発明の上記一般式（Ｉ）
で示される蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体へ
と導くことができる。(C) Dehydration or Oxidative Desulfurization Step In the production method of the present invention, the compound represented by the general formula (VII) obtained above is further subjected to a dehydration or oxidative desulfurization reaction. Formula (I)
Can be led to a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor represented by the following formula:

【００９０】上記脱水反応は、上記一般式（VII）で示
される化合物のうち、式中のＴが酸素である尿素化合物
について行われる反応であり、前記尿素化合物を３級ア
ミン中でｐ−トルエンスルホン酸クロリドと共に加熱す
ることで達成できる[G. Amiard and R. Heymers, Bull.
Soc. Chim. Fr., 1360(1956)]。また、４級アンモニウ
ム塩の存在下でｐ−トルエンスルホン酸クロリド及び炭
酸カリウムを用いても行うことができる[Zsuzsa M. Jas
zay., Synthesis, 520(1987)]。The dehydration reaction is a reaction carried out on a urea compound of the formula (VII) wherein T is oxygen, and the urea compound is reacted with p-toluene in a tertiary amine. This can be achieved by heating with sulfonic chloride [G. Amiard and R. Heymers, Bull.
Soc. Chim. Fr., 1360 (1956)]. It can also be carried out using p-toluenesulfonic acid chloride and potassium carbonate in the presence of a quaternary ammonium salt [Zsuzsa M. Jas
zay., Synthesis, 520 (1987)].

【００９１】本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合
物前駆体を得るために、上記一般式（VII）で示される
化合物のうち、式中のＴがイオウであるチオ尿素化合物
には、酸化的脱硫反応が施される。前記酸化的脱硫反応
には、一般的に、酸化水銀が脱硫剤として用いられる。
酸化水銀以外にも、酸化鉛[F. Zetzehe and A. Fredric
h, Chem. Ber., 73, 1114(1940)]、酸化亜鉛[R. F. Col
es, U.S. Pat. 2946819(1960)]、炭酸鉛、硝酸鉛、塩化
鉛[J. C. Sheehan, U.S. Pat. 3135748(1964)]等を用い
ることができる。さらに、アルカリ性で次亜塩素酸ナト
リウムを用いてもよい[H. Stetter and C. Wulff, Che
m. Ber., 95, 2302(1962)]。In order to obtain the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor of the present invention, among the compounds represented by the above general formula (VII), a thiourea compound in which T is sulfur is subjected to an oxidative desulfurization reaction. Is applied. In the oxidative desulfurization reaction, generally, mercury oxide is used as a desulfurizing agent.
In addition to mercury oxide, lead oxide [F. Zetzehe and A. Fredric
h, Chem. Ber., 73, 1114 (1940)], zinc oxide [RF Col
es, US Pat. 2946819 (1960)], lead carbonate, lead nitrate, lead chloride [JC Sheehan, US Pat. 3135748 (1964)] and the like can be used. Further, sodium hypochlorite may be used in an alkaline state [H. Stetter and C. Wulff, Che.
m. Ber., 95, 2302 (1962)].

【００９２】本発明の上記一般式（Ｉ）で示されるハロ
ゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体は上述のようにして製造することがで
きるが、上記製造法はあくまでも例示にすぎず、各工程
の順序は上記順序に制限されるものではない。例えば、
ハロゲン化又はスルホン化とカルボジイミド化はどちら
が先でも構わない。The fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the above general formula (I) of the present invention can be produced as described above, but the above production method is merely an example. However, the order of each step is not limited to the above order. For example,
Either of the halogenation or sulfonation and the carbodiimidation may be performed first.

【００９３】さらに、上記（Ａ）工程が、（Ａ'）工
程、（Ａ"）工程の２段階の反応工程により行われる場
合には、（Ａ'）工程で得られた一般式（VI'）で示され
る化合物をカルボジイミド化した後、（Ａ"）工程でハ
ロゲン誘導体又はスルホン誘導体に変換されるために必
要な官能基の導入し、最後にハロゲン化工程を行うこと
で、本発明の上記一般式（Ｉ）で示されるハロゲン又は
スルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合
物前駆体を製造することも可能である。Further, when the above-mentioned step (A) is carried out by two reaction steps of step (A ′) and step (A ″), the general formula (VI ′) obtained in step (A ′) is obtained. ), The carbodiimidization of the compound represented by the formula (A)), introduction of a functional group necessary for conversion into a halogen derivative or a sulfone derivative in the step (A "), and finally performing the halogenation step, It is also possible to produce a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I).

【００９４】この様にして、本発明の一般式（Ｉ）で示
されるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体が得られるが、一般式
（Ｉ）中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ又はＷで表され
る官能基はいずれの官能基においてもこれらが有する置
換可能な水素原子は、アルカリ金属、アルカリ土類金
属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換
されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホス
ホ基から選ばれる基で置換されていてもよい。In this way, the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) of the present invention is obtained. In the general formula (I), B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A or W is a functional group represented by any of the functional groups, the replaceable hydrogen atom of which is an alkali metal, an alkaline earth metal, or nitrogen or phosphorus. It may be substituted with a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a contained basic group.

【００９５】前記アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基は、一般式（Ｉ）で示される蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体が上記の様にして製造され
る際に、用いられる原料の段階で既に含まれていてもよ
いし、原料がこれらの基を含有しない場合は製造の最初
の段階で原料に導入されてもよく、また、製造の途中で
中間体に導入されてもよい。さらには最終的に得られる
一般式（Ｉ）で示される蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体がこれらの基を含有していない場合には最後
にこれらの基を導入してもよい。The group selected from the group consisting of a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus is represented by the general formula (I): When the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor shown is produced as described above, it may be already contained at the stage of the raw materials used, or when the raw material does not contain these groups, the production starts. May be introduced into the raw material at the stage of the above, or may be introduced into the intermediate during the production. Further, when the finally obtained fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor represented by the general formula (I) does not contain these groups, these groups may be introduced last.

【００９６】また、導入の方法としては、カルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
と導入のための官能基を有する化合物を用い、前記カル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホ基等をナト
リウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マ
グネシウム等のアルカリ土類金属塩、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基の塩とした後、これを上記蛍光性基
含有カルボジイミド化合物前駆体の原料、中間体、最終
物質等に導入する方法が挙げられる。あるいは、前記化
合物の有するカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基、
ホスホ基等を塩とせずに、そのまま上記前駆体の原料、
中間体、最終物質等に導入した後、これら官能基を上記
同様の塩としてもよい。As a method of introduction, a compound having a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group and a functional group for introduction is used. After forming a group or the like into an alkali metal salt such as sodium or potassium, an alkaline earth metal salt such as calcium or magnesium, or a salt of a basic group containing nitrogen or phosphorus, this is used as a precursor for the above-mentioned fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor. Examples of the method include introduction into raw materials, intermediates, and final substances. Alternatively, a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group of the compound,
The raw material of the precursor as it is, without converting the phospho group or the like into a salt,
After introduction into an intermediate, a final substance, or the like, these functional groups may be converted into salts similar to those described above.

【００９７】上記前駆体の原料がカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を有する
化合物の場合、これらをアルカリ金属塩、アルカリ土類
金属塩、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基の
塩とした後、これを上記製造工程に用いればよい。この
場合、原料のカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及
びホスホ基を塩とせずにそのまま上記製造工程に用い、
得られた化合物について適当な段階で、これら官能基を
上記同様の塩としてもよい。When the raw material of the precursor is a compound having a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group, these compounds contain an alkali metal salt, an alkaline earth metal salt, or nitrogen or phosphorus. After forming a salt of a basic group, this may be used in the above-mentioned production process. In this case, the carboxyl group, sulfo group, phosphono group and phospho group of the raw material are used as they are in the above-mentioned production step without salting,
At an appropriate stage in the obtained compound, these functional groups may be converted into salts similar to those described above.

【００９８】ここで、上記化合物をこれらが有するカル
ボキシル基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホ基等の官能
基を介して、アルカリ金属塩化、アルカリ土類金属塩
化、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基の塩と
する方法としては、特に制限はなく、公知の方法を用い
ることができる。Here, an alkali metal chloride, an alkaline earth metal chloride, or a base containing nitrogen or phosphorus is added to the above compound via a functional group such as a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group of the compound. There is no particular limitation on the method of converting the salt into a salt of a functional group, and a known method can be used.

【００９９】具体的には、上記カルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を含有する
化合物に、水、アルコール等の公知の溶剤を加えてこれ
を溶解させ、得られた溶液に、さらに、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウ
ム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化テトラ
メチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、
臭化テトラメチルアンモニウム又はヨウ化テトラメチル
アンモニウム等を加えて混合し反応させる方法等が挙げ
られる。Specifically, a known solvent such as water or alcohol is added to a compound containing a group selected from the above-mentioned carboxyl group, sulfo group, phosphono group and phospho group to dissolve the compound. In addition, further, sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, sodium carbonate, potassium carbonate, sodium hydrogen carbonate, tetramethylammonium hydroxide, tetramethylammonium chloride,
Examples thereof include a method in which tetramethylammonium bromide or tetramethylammonium iodide is added, mixed and reacted.

【０１００】（ii）上記一般式（VIII）で表される蛍光
性基含有化合物を製造する工程 上記（ｉ）で得られるハロゲン又はスルホン酸基を有す
る蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体と反応させ
ることにより、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を有する本発明の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物を製造することができる上記一般式（VIII）
で表される蛍光性基含有化合物は、各々所望する蛍光性
基含有カルボジイミド化合物に応じて適宜選択できる。(Ii) Step of Producing the Fluorescent Group-Containing Compound Represented by the General Formula (VIII) The fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group obtained in the above (i) is reacted. By the alkali metal, alkaline earth metal, or a fluorescent group-containing of the present invention having a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus The above general formula (VIII) which can produce a carbodiimide compound
The fluorescent group-containing compound represented by can be appropriately selected according to the desired fluorescent group-containing carbodiimide compound.

【０１０１】この様な、上記一般式（VIII）で示される
蛍光性基含有化合物を得るには、蛍光性基Ｆを含有する
適当な蛍光性基含有化合物、具体的には、アントラセン
誘導体、クマリン誘導体、ピレン誘導体、ペリレン誘導
体、ダンシル誘導体、ローダミン誘導体、オキサゾール
誘導体、ベンゾチアゾール誘導体、ベンゾオキサジアゾ
ール誘導体、ジピロメテンボロンジフルオライド誘導
体、チアゾールオレンジ誘導体、蛍光希土類金属化合物
誘導体及びシアニン誘導体等に、２級あるいは３級窒素
含有基又は２級あるいは３級リン含有基を、一般的な方
法により導入すればよい。ここで、蛍光性基Ｆと２級あ
るいは３級窒素含有基又は２級あるいは３級リン含有基
とを有する上記一般式（VIII）で示される蛍光性基含有
化合物を製造する際の製造方法は特に限定されるもので
はない。To obtain such a fluorescent group-containing compound represented by the above general formula (VIII), a suitable fluorescent group-containing compound containing a fluorescent group F, specifically, an anthracene derivative, coumarin Derivatives, pyrene derivatives, perylene derivatives, dansyl derivatives, rhodamine derivatives, oxazole derivatives, benzothiazole derivatives, benzoxadiazole derivatives, dipyrromethene boron difluoride derivatives, thiazole orange derivatives, fluorescent rare earth metal compound derivatives and cyanine derivatives, etc. A secondary or tertiary nitrogen-containing group or a secondary or tertiary phosphorus-containing group may be introduced by a general method. Here, the production method for producing the fluorescent group-containing compound represented by the above general formula (VIII) having the fluorescent group F and a secondary or tertiary nitrogen-containing group or a secondary or tertiary phosphorus-containing group is as follows. There is no particular limitation.

【０１０２】具体例として、一般式（VIII）中のＹ5が
−（ＣＨ2）p−ＮＨＣ（Ｓ）ＮＨ−（ＣＨ2）q−である
化合物の製造方法を以下に示すが、この反応はイソチオ
シアネート基と蛍光性基を含有する化合物と２級又は３
級窒素若しくはリン含有基を有するアミン化合物との反
応を示す一般的な反応である。As a specific example, a method for producing a compound in which Y 5 in the general formula (VIII) is-(CH 2 ) p -NHC (S) NH- (CH 2 ) q- is shown below. Is a compound containing an isothiocyanate group and a fluorescent group and a secondary or tertiary compound.
This is a general reaction showing a reaction with an amine compound having a secondary nitrogen or phosphorus-containing group.

【０１０３】[0103]

【化２１】 ［式中、Ｒ4、Ｒ5及びＦは、各々前記一般式（III）に
おけるのと同意である。Ｑ'は、前記一般式（VIII）に
おけるのと同意である。］Embedded image [Wherein, R 4 , R 5 and F have the same meanings as in the above general formula (III). Q ′ has the same meaning as in formula (VIII). ]

【０１０４】さらに具体的な例として、フルオロセイン
イソチオシアネート、ローダミンＢイソチオシアネート
又は２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−
ジメチル−３−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドー
ル−２−イリデン］エチリデン］−２−フェノキシ−１
−シクロヘキセン−１−イル］−エテニル］−１，１−
ジメチル［３−プロピルイソチオシアネート］１Ｈ−ベ
ンツ［ｅ］−インドリウム塩等と、１級及び３級のアミ
ノ基を有するアミン誘導体、例えば、Ｎ−３−ジメチル
アミノプロピル−Ｎ−３−（４−モルホリノ）プロピレ
ン、１−エチル−３，３−ジメチルアミノプロピレン、
ビス−（３，３−ジメチル）アミノプロピレン又はビス
−（３，３−ジメチルアミノ）プロピレン等をジクロロ
メタン、クロロホルム又はＤＭＦ等の公知の溶剤中で混
合し反応させる方法等が挙げられる。As more specific examples, fluorescein isothiocyanate, rhodamine B isothiocyanate or 2- [2- [3-[[1,3-dihydro-1,1-
Dimethyl-3- (4-sulfobutyl) -2H-indole-2-ylidene] ethylidene] -2-phenoxy-1
-Cyclohexen-1-yl] -ethenyl] -1,1-
Dimethyl [3-propylisothiocyanate] 1H-benz [e] -indolium salt and an amine derivative having primary and tertiary amino groups, for example, N-3-dimethylaminopropyl-N-3- (4 -Morpholino) propylene, 1-ethyl-3,3-dimethylaminopropylene,
A method of mixing and reacting bis- (3,3-dimethyl) aminopropylene or bis- (3,3-dimethylamino) propylene in a known solvent such as dichloromethane, chloroform or DMF is exemplified.

【０１０５】この様にして、上記一般式（VIII）で示さ
れる蛍光性基含有化合物が得られるが、一般式（VIII）
中、Ｙ5、Ｒ4、Ｒ5及びＦで表される官能基はいずれの
官能基においてもこれらが有する置換可能な水素原子
は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基
で置換されていてもよい。In this manner, the fluorescent group-containing compound represented by the above general formula (VIII) is obtained.
In any of the functional groups represented by Y 5 , R 4 , R 5 and F, any of the functional groups may have a replaceable hydrogen atom containing an alkali metal, an alkaline earth metal, or nitrogen or phosphorus May be substituted with a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a basic group.

【０１０６】前記アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基は、一般式（VIII）で示される蛍光性基含
有化合物が上記の様にして製造される際に、用いられる
原料の段階で既に含まれていてもよいし、原料がこれら
の基を含有しない場合は製造の最初の段階で原料に導入
されてもよく、また、製造の途中で中間体に導入されて
もよい。さらには最終的に得られる一般式（VIII）で示
される蛍光性基含有化合物がこれらの基を含有していな
い場合には最後にこれらの基を導入してもよい。The group selected from the group consisting of a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus is represented by the general formula (VIII): When the fluorescent group-containing compound shown is produced as described above, it may be already contained at the stage of the raw materials used, or if the raw material does not contain these groups, at the first stage of production It may be introduced into a raw material, or may be introduced into an intermediate during the production. Further, when the finally obtained fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII) does not contain these groups, these groups may be introduced last.

【０１０７】また、導入の方法としては、上記蛍光性基
含有カルボジイミド化合物前駆体の場合と同様とするこ
とができる。原料がカルボキシル基、スルホ基、ホスホ
ノ基及びホスホ基から選ばれる基を有する化合物の場合
の扱いについても、上記蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体の場合と同様とすることができる。さらに、
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を有する化合物をこれらが有する前記官能
基を介して、アルカリ金属塩化、アルカリ土類金属塩
化、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基の塩と
する方法についても、上記同様とすることができる。The method of introduction can be the same as in the case of the above-mentioned fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor. The handling of the case where the raw material is a compound having a group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group can be performed in the same manner as in the case of the above-mentioned fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor. further,
A carboxyl group, a sulfo group, a compound having a group selected from a phosphono group and a phospho group, via the above-mentioned functional group having these, an alkali metal chloride, an alkaline earth metal chloride, or a basic group containing nitrogen or phosphorus The method for preparing a salt of the above can be the same as described above.

【０１０８】（iii）前記（ｉ）工程で製造した蛍光性
基含有カルボジイミド化合物前駆体と、前記（ii）工程
で製造した上記一般式（VIII）で表される蛍光性基含有
化合物とを反応させる工程 本発明の上記一般式（III）で表されるアルカリ金属、
アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する
塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホス
ホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有
する蛍光性基含有カルボジイミド化合物は、前記（ｉ）
工程で製造した一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はス
ルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物
前駆体と前記（iii）工程で製造した一般式（VIII）で
表される蛍光性基含有化合物とを反応させることにより
製造される。(Iii) Reaction of the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor produced in the step (i) with the fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII) produced in the step (ii) An alkali metal represented by the general formula (III) of the present invention;
The fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one group selected from the group consisting of an alkaline earth metal, a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus is as described in the above ( i)
The fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) produced in the step and the fluorescent group-containing carbodiimide compound represented by the general formula (VIII) produced in the step (iii) It is produced by reacting with a compound.

【０１０９】ここで用いられる一般式（Ｉ）で表される
ハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物前駆体および一般式（VIII）で表される
蛍光性基含有化合物においては、その何れかが必ずアル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
とも１つ有する化合物でなければならない。The fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) and the fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII) used here Any one of them must be an alkali metal, an alkaline earth metal, or a compound having at least one group selected from a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus. Must.

【０１１０】つまり、一般式（Ｉ）で表されるハロゲン
又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド
化合物前駆体が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を少なくとも１つ有する場合、つまり、一
般式（Ｉ）中の、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷか
ら選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカリ金属、
アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する
塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホス
ホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有
する場合には、一般式（VIII）で表される蛍光性基含有
化合物は、前記官能基を有しても、有さなくてもよい。That is, the precursor of the fluorescent group-containing carbodiimide compound having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) is an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. Having at least one group selected from the group consisting of a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group, that is, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , At least one functional group selected from A and W is an alkali metal,
When having at least one group selected from the group consisting of an alkaline earth metal, a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus, the compound represented by the general formula (VIII) The fluorescent group-containing compound represented may or may not have the functional group.

【０１１１】同様に一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を少なくとも１つ有する場合、つまり、一
般式（VIII）中の、Ｙ5、Ｒ4、Ｒ5及びＦから選ばれる
少なくとも１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土
類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で
置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及び
ホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する場合に
は、一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又はスルホン酸基
を有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体は、
前記官能基を有しても、有さなくてもよい。Similarly, the fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII) may be a compound having a carboxyl group, a sulfo group, a carboxyl group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. When it has at least one group selected from a phosphono group and a phospho group, that is, at least one functional group selected from Y 5 , R 4 , R 5 and F in the general formula (VIII) is an alkali metal, an alkali metal When the compound has at least one group selected from the group consisting of an earth metal, a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a nitrogen- or phosphorus-containing basic group, a compound represented by the general formula (I) is used. Is a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group,
It may or may not have the functional group.

【０１１２】この様な一般式（Ｉ）で表されるハロゲン
又はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド
化合物前駆体と一般式（VIII）で表される蛍光性基含有
化合物とを反応させる方法は、特に限定されないが、具
体的には、前記両化合物を、ジクロロメタン、クロロホ
ルム又はＤＭＦ等の公知の溶剤中、適当な割合で混合し
反応させることで製造することができる。A method of reacting such a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor having a halogen or sulfonic acid group represented by the general formula (I) with a fluorescent group-containing compound represented by the general formula (VIII) Is not particularly limited, but specifically, can be produced by mixing and reacting the two compounds in a known solvent such as dichloromethane, chloroform or DMF at an appropriate ratio.

【０１１３】本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合
物においては、その製造に際して、上記一般式（Ｉ）で
表されるハロゲン又はスルホン酸基を有する蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体を用いることにより、例
えば、構造中にカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ
基、ホスホ基等の官能基を有する蛍光性基含有化合物に
ついても、これら官能基を前記化合物からあらかじめ除
去することなく、塩のかたちで残してカルボジイミド基
の導入が可能となり、従来の方法に比べて工程数が少な
く効率のよい製造が可能である。In the production of the carbodiimide compound having a fluorescent group of the present invention, the carbodiimide compound having a halogen or sulfonic acid group represented by the above general formula (I) can be used for the production of the carbodiimide compound. Also, for a fluorescent group-containing compound having a functional group such as a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, or a phospho group in the structure, without removing these functional groups from the compound in advance, leaving the carbodiimide group in the form of a salt. Can be introduced, and the number of steps is smaller than in the conventional method, and efficient production is possible.

【０１１４】また、カルボキシル基、スルホ基、ホスホ
ノ基、ホスホ基等の官能基をその構造中に含む市販品の
蛍光性基含有化合物に対しても、これらを塩として簡便
にカルボジイミド基を導入することができるため、利用
できる蛍光基含有化合物の種類を大幅に増やすことがで
きるものである。Further, a commercially available fluorescent group-containing compound having a functional group such as a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, or a phospho group in its structure is easily introduced as a salt into a carbodiimide group. Therefore, the types of fluorescent group-containing compounds that can be used can be greatly increased.

【０１１５】以上述べた方法により得られる本発明の蛍
光性基含有カルボジイミド化合物は、核酸検出法やイム
ノアッセイ法において標識物質として好適に使用するこ
とができる。その場合は、標識しようとするＤＮＡ等の
核酸又は抗原もしくは抗体等のタンパク質とともに、本
発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物を、溶媒中で
混合させる等の方法で接触させることにより、前記核酸
又はタンパク質に結合させることができる。すなわち、
本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物を、核酸塩
基と高い反応性を示すカルボジイミド基において核酸又
はタンパク質と結合させることにより、高感度な検出試
薬として働く蛍光性物質をこれらに付加し、標識とする
ことができるのである。よって、本発明の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物と核酸又はタンパク質と結合させ
る場合には、カルボジイミド基が反応しやすい条件下、
例えばｐＨ７．５〜８．５程度のアルカリ性の条件下で
両者を接触させるのが好ましい。さらに、本発明の蛍光
性基含有カルボジイミド化合物は、化学発光分析法等に
も適用可能である。The carbodiimide compound containing a fluorescent group of the present invention obtained by the above-mentioned method can be suitably used as a labeling substance in a nucleic acid detection method or an immunoassay method. In such a case, the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention is brought into contact with a nucleic acid such as DNA to be labeled or a protein such as an antigen or an antibody by a method such as mixing in a solvent, thereby obtaining the nucleic acid or protein. Can be combined. That is,
By binding the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention to a nucleic acid or protein at a carbodiimide group having high reactivity with a nucleic acid base, a fluorescent substance that acts as a highly sensitive detection reagent is added to these, and a label is formed. You can do it. Therefore, when binding the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention to a nucleic acid or protein, under the condition that the carbodiimide group easily reacts,
For example, it is preferable that both are brought into contact under alkaline conditions of about pH 7.5 to 8.5. Further, the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention is applicable to chemiluminescence analysis and the like.

【０１１６】また、本発明の蛍光性基含有カルボジイミ
ド化合物においては、カルボジイミド基がカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基、ホスホ基等の官能基の塩と
同一系内に存在できるため、従来の蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物に比べて、水溶性が十分に改善されてお
り、上記核酸検出法やイムノアッセイ法において標識物
質として使用する際や化学発光分析法等に使用する際に
有利である。In the carbodiimide compound containing a fluorescent group of the present invention, the carbodiimide group can be present in the same system as a salt of a functional group such as a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group. Compared with the group-containing carbodiimide compound, the solubility in water is sufficiently improved, which is advantageous when used as a labeling substance in the above-described nucleic acid detection method or immunoassay method, or when used in a chemiluminescence analysis method or the like.

【０１１７】（３）本発明の核酸検出法 本発明のアルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素
若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキ
シル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれ
る基を少なくとも一つ以上有する蛍光性基含有カルボジ
イミド化合物は、標識物質で標識した核酸を用いるハイ
ブリダイゼーションによる核酸の検出法において、標識
物質として用いることができる。すなわち、蛍光性基含
有カルボジイミド化合物で標識された核酸は、ハイブリ
ダイゼーション用のプローブとして用いることができ
る。測定対象である核酸にプローブをハイブリダイズさ
せて、核酸−核酸ハイブリッドを形成させ、系から遊離
のプローブを除去した後にハイブリッドに含まれる標識
物質を検知することによって、測定対象の核酸を検出す
ることができる。本発明においては、標識物質である蛍
光性基含有カルボジイミド化合物は、蛍光分光光度計、
９６穴マイクロタイタープレート用蛍光分光光度計、蛍
光顕微鏡等を用いて蛍光強度等を測定することにより直
接的に検知することができる。測定対象である核酸は、
通常、ナイロンメンブレン、ニトロセルロース等の膜又
はマイクロタイタープレート上に固定化されて用いられ
る。(3) Nucleic Acid Detection Method of the Present Invention From the alkali metal, alkaline earth metal, or carboxyl, sulfo, phosphono, and phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus of the present invention, The fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one selected group can be used as a labeling substance in a nucleic acid detection method by hybridization using a nucleic acid labeled with a labeling substance. That is, the nucleic acid labeled with the fluorescent group-containing carbodiimide compound can be used as a probe for hybridization. Detecting a nucleic acid to be measured by hybridizing a probe to a nucleic acid to be measured to form a nucleic acid-nucleic acid hybrid, removing a free probe from the system, and detecting a labeling substance contained in the hybrid. Can be. In the present invention, the fluorescent substance-containing carbodiimide compound as a labeling substance, a fluorescence spectrophotometer,
It can be detected directly by measuring the fluorescence intensity or the like using a fluorescence spectrophotometer for 96-well microtiter plate, fluorescence microscope or the like. The nucleic acid to be measured is
Usually, it is used after being immobilized on a membrane such as a nylon membrane or nitrocellulose or a microtiter plate.

【０１１８】本発明の核酸の検出法におけるハイブリダ
イゼーションは、核酸プローブの標識に蛍光性基含有カ
ルボジイミド化合物を用いる以外は、コロニーハイブリ
ダイゼーション、プラークハイブリダイゼーション、ド
ットブロットハイブリダイゼーション、サザンハイブリ
ダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション等
の、通常の核酸のハイブリダイゼーションと特に変わる
ところはない。測定対象である核酸は、ＤＮＡであって
もＲＮＡであってもよく、プローブに用いる核酸もまた
ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよい。Hybridization in the nucleic acid detection method of the present invention is performed by colony hybridization, plaque hybridization, dot blot hybridization, southern hybridization, or northern hybridization, except that a carbodiimide compound containing a fluorescent group is used to label a nucleic acid probe. There is no particular difference from ordinary nucleic acid hybridization such as hybridization. The nucleic acid to be measured may be DNA or RNA, and the nucleic acid used for the probe may also be DNA or RNA.

【０１１９】プローブに用いる核酸の標識は、上記の方
法によってポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを
標識することによって行うことが好ましいが、標識され
たヌクレオチドをポリメラーゼ反応によってポリヌクレ
オチド又はオリゴヌクレオチドに取り込ませることによ
って行うこともできる。The labeling of the nucleic acid used for the probe is preferably performed by labeling the polynucleotide or the oligonucleotide by the above method, but is performed by incorporating the labeled nucleotide into the polynucleotide or the oligonucleotide by a polymerase reaction. You can also.

【０１２０】[0120]

【実施例】以下、実施例により本発明を説明する。The present invention will be described below with reference to examples.

【０１２１】[0121]

【実施例１】（１）一般式（Ｉ）で表される蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体の製造 Ｎ−（３−モルホリノプロピル）イソチオシアネート
１．６８ｇ（１０ｍｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン１５ｍ
ｌに溶解し、水浴で冷却した。これに、６−アミノヘキ
サノール１．１７ｇ（１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１
晩攪拌した。反応混合物に水を加えた後、塩化メチレン
を用いて抽出し、無水硫酸マグネシウムを用いて乾燥さ
せ、セライトを用いて濾過、濃縮して、化合物（Ｉ−Ｉ
−Ａ）２．７ｇ（収率９５％）を得た。ＮＭＲスペクト
ルデータを以下に示す。Example 1 (1) Preparation of a carbodiimide compound precursor having a fluorescent group represented by the general formula (I) 1.68 g (10 mmol) of N- (3-morpholinopropyl) isothiocyanate was dried in 15 m of methylene chloride.
and cooled in a water bath. To this, 1.17 g (10 mmol) of 6-aminohexanol was added, and 1
Stirred overnight. After water was added to the reaction mixture, the mixture was extracted with methylene chloride, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated using celite, and the compound (II) was added.
-A) 2.7 g (95% yield) were obtained. The NMR spectrum data is shown below.

【０１２２】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.35-1.85
(m,12H)、δ=2.40-2.60(m,6H)、δ=3.45(br,2H)、δ=3.
65(t,2H)、δ=3.75(t,4H)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.35-1.85
(m, 12H), δ = 2.40-2.60 (m, 6H), δ = 3.45 (br, 2H), δ = 3.
65 (t, 2H), δ = 3.75 (t, 4H).

【０１２３】[0123]

【化２２】 Embedded image

【０１２４】次いで、得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ａ）
２．０ｇ（４．８７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ５ｍｌに溶
解し、ヨウ化メチル０．６９１ｇ（４．８７ｍｍｏｌ）
を加え、室温で１晩攪拌した。反応混合物を濃縮した
後、エーテル／メタノールを加えデカンテーションによ
り化合物（Ｉ−Ｉ−Ｂ）２．６ｇ（収率９７％）を得
た。ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。Next, the obtained compound (IIA)
2.0 g (4.87 mmol) was dissolved in 5 ml of dry DMF, and 0.691 g (4.87 mmol) of methyl iodide was dissolved.
Was added and stirred at room temperature overnight. After concentrating the reaction mixture, ether / methanol was added, and 2.6 g (yield 97%) of compound (IIB) was obtained by decantation. The NMR spectrum data is shown below.

【０１２５】1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.25-1.65
(m,10H)、δ=1.75(t,2H)、δ=2.30-2.45(m,2H)、δ=2.6
5(s,3H)、δ=3.20-3.50(m,6H)、δ=3.60(t,4H)、δ=3.7
5(br,2H)。 1 H-NMR (DMSO): δ = 1.25-1.65
(m, 10H), δ = 1.75 (t, 2H), δ = 2.30-2.45 (m, 2H), δ = 2.6
5 (s, 3H), δ = 3.20-3.50 (m, 6H), δ = 3.60 (t, 4H), δ = 3.7
5 (br, 2H).

【０１２６】[0126]

【化２３】 Embedded image

【０１２７】次いで、得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ｂ）２
ｇ（３．６２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ５ｍｌに溶解し、メチ
ル−（トリフェニル）−ホスホニウムアイオダイド３．
２７ｇ（７．２３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪拌
後、メタノール５ｍｌを加え、２０分間攪拌した。さら
に、この反応混合物を濃縮し、シリカゲルクロマトグラ
フィー（展開溶媒：クロロホルム／メタノール＝５０／
１）により、単離精製して化合物（Ｉ−Ｉ−Ｃ）２．９
８ｇ（収率９５％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを
以下に示す。Next, the obtained compound (IIB) 2
g (3.62 mmol) was dissolved in 5 ml of DMF, and methyl- (triphenyl) -phosphonium iodide was dissolved.
After adding 27 g (7.23 mmol) and stirring at room temperature for 3 hours, 5 ml of methanol was added and the mixture was stirred for 20 minutes. Further, the reaction mixture was concentrated and subjected to silica gel chromatography (developing solvent: chloroform / methanol = 50 /
According to 1), the compound (I-I-C) 2.9 was isolated and purified.
8 g (95% yield) were obtained. The NMR spectrum data is shown below.

【０１２８】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.30-1.90
(m,10H)、δ=2.25(t,2H)、δ=2.85-3.00(m,6H)、δ=2.9
5(s,3H)、δ=3.20(t,2H)、δ=3.45(br,2H)、δ=3.90(t,
4H)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.30-1.90
(m, 10H), δ = 2.25 (t, 2H), δ = 2.85-3.00 (m, 6H), δ = 2.9
5 (s, 3H), δ = 3.20 (t, 2H), δ = 3.45 (br, 2H), δ = 3.90 (t,
4H).

【０１２９】[0129]

【化２４】 Embedded image

【０１３０】次いで得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ｃ）２ｇ
（２．３１ｍｍｏｌ）をアセトン５ｍｌに溶解し、酸化
亜鉛１ｇ（４．６２ｍｍｏｌ）を加え、３時間環流下攪
拌した。さらに、１時間放置して反応混合物を冷却後、
デカンテーションを行い濃縮して、化合物（Ｉ−Ｉ−
Ｄ）１．７３ｇ（収率９０％）を得た。この化合物は、
本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体の一
つである。ＮＭＲスペクトルデータ及びＩＲスペクトル
データを以下に示す。Next, 2 g of the obtained compound (IIC)
(2.31 mmol) was dissolved in 5 ml of acetone, 1 g (4.62 mmol) of zinc oxide was added, and the mixture was stirred under reflux for 3 hours. After allowing the reaction mixture to cool for another hour,
After decantation and concentration, the compound (II-
D) 1.73 g (90% yield) was obtained. This compound
It is one of the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursors of the present invention. The NMR spectrum data and the IR spectrum data are shown below.

【０１３１】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.30-1.90
(m,10H)、δ=2.40-2.50(m,8H)、δ=3.15(s,3H)、δ=3.2
0(t,2H)、δ=3.30(t,4H)、δ=3.75(t,4H)。 ＩＲ：2127 cm-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.30-1.90
(m, 10H), δ = 2.40-2.50 (m, 8H), δ = 3.15 (s, 3H), δ = 3.2
0 (t, 2H), δ = 3.30 (t, 4H), δ = 3.75 (t, 4H). IR: 2127 cm -1 (-N = C = N- group)

【０１３２】[0132]

【化２５】 Embedded image

【０１３３】（２）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 ローダミンＢイソチオシアネート（シグマ社製）２．０
０ｇ（３．７３ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解し、
反応混合液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミノ
プロピル）アミン０．５７ｇ（５．６０ｍｍｏｌ）を徐
々に加え、３０分間攪拌した。この反応混合物を濃縮
し、さらにエーテル／メタノールを加えてデカンテーシ
ョンを行い化合物（Ｉ−ＩＩ−Ａ）２．２６ｇ（収率９
５％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。(2) Production of fluorescent group-containing compound represented by formula (VIII) Rhodamine B isothiocyanate (manufactured by Sigma) 2.0
Dissolve 0 g (3.73 mmol) in dichloromethane,
After cooling the reaction mixture to 0 ° C., 0.57 g (5.60 mmol) of N-3- (dimethylaminopropyl) amine was gradually added, and the mixture was stirred for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated, and ether / methanol was further added to perform decantation, and 2.26 g of compound (I-II-A) (yield 9)
5%). The NMR spectrum data is shown below.

【０１３４】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.00-1.20
(m,8H)、δ=2.20-2.60(m,6H)、δ=2.20(s,6H)、δ=3.25
-3.70(m,4H)、δ=6.30-8.00(m,9H)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.00-1.20
(m, 8H), δ = 2.20-2.60 (m, 6H), δ = 2.20 (s, 6H), δ = 3.25
-3.70 (m, 4H), δ = 6.30-8.00 (m, 9H).

【０１３５】[0135]

【化２６】 Embedded image

【０１３６】得られた化合物（Ｉ−ＩＩ−Ａ）２．２６
ｇ（３．５４ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、飽和水
酸化カリウムイソプロピルアルコール溶液を約１５ｍｌ
加えて固体を溶出させた。次いで、エタノールを用いて
濾過後、乾燥して化合物（Ｉ−ＩＩ−Ｂ）を２．３０ｇ
（収率９６％）で得た。この化合物は、前記化合物（Ｉ
−ＩＩ−Ａ）の、ローダミンＢ基が有するカルボキシル
基がカリウム塩（−ＣＯＯＫ）化された化合物である。
ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。The obtained compound (I-II-A) 2.26
g (3.54 mmol) was dissolved in methanol, and about 15 ml of a saturated potassium hydroxide isopropyl alcohol solution was added.
In addition, solids were eluted. Next, the mixture was filtered using ethanol and dried to obtain 2.30 g of compound (I-II-B).
(96% yield). This compound is the compound (I)
-II-A) wherein the carboxyl group of the rhodamine B group is converted to a potassium salt (-COOK).
The NMR spectrum data is shown below.

【０１３７】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.00-1.20
(m,8H)、δ=2.20-2.60(m,6H)、δ=2.20(s,6H)、δ=3.25
-3.70(m,4H)、δ=6.30-8.00(m,9H)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.00-1.20
(m, 8H), δ = 2.20-2.60 (m, 6H), δ = 2.20 (s, 6H), δ = 3.25
-3.70 (m, 4H), δ = 6.30-8.00 (m, 9H).

【０１３８】[0138]

【化２７】 Embedded image

【０１３９】（３）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記（１）で得られた（Ｉ−Ｉ−Ｄ）１．２３ｇ（１．
４８ｍｍｏｌ）及び上記（２）で得られた化合物（Ｉ−
ＩＩ−Ｂ）１ｇ（１．４８ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解
し、室温にて一晩攪拌した。さらに、エーテル／メタノ
ールを加え、デカンテーションにより本発明の蛍光性基
含有カルボジイミド化合物として、化合物（１）２．１
０ｇ（収率９４％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、
ＩＲスペクトルデータ及びＵＶスペクトルデータを以下
に示す。(3) Production of fluorescent group-containing carbodiimide compound represented by general formula (III) 1.23 g of (I-ID) obtained in the above (1) (1.
48 mmol) and the compound (I-
II-B) 1 g (1.48 mmol) was dissolved in DMF and stirred at room temperature overnight. Further, ether / methanol was added, and the compound (1) 2.1 was obtained as a carbodiimide compound having a fluorescent group of the present invention by decantation.
0 g (94% yield) was obtained. NMR spectrum data,
The IR spectrum data and the UV spectrum data are shown below.

【０１４０】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.00-1.85
(m,18H)、δ=2.40-2.55(m,12H)、δ=2.85(s,3H)、δ=2.
90(s,6H)、δ=3.15(t,2H)、δ=3.25(t,4H)、δ=3.50-3.
65(m,6H)、δ=3.75(t,4H)、δ=6.30-8.00(m,9H)。 ＩＲ：2125 cm-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λmax５４２ｎｍ 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.00-1.85
(m, 18H), δ = 2.40-2.55 (m, 12H), δ = 2.85 (s, 3H), δ = 2.
90 (s, 6H), δ = 3.15 (t, 2H), δ = 3.25 (t, 4H), δ = 3.50-3.
65 (m, 6H), δ = 3.75 (t, 4H), δ = 6.30-8.00 (m, 9H). IR: 2125 cm -1 (-N = C = N- group) UV (EtOH): λ max 542nm

【０１４１】[0141]

【化２８】 Embedded image

【０１４２】[0142]

【実施例２】（１）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 ２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメ
チル−３−（４−スルホブチル）−２Ｈ−インドール−
２−イリデン］エチリデン］−２−フェノキシ−１−シ
クロヘキセン−１−イル］−エテニル］−１，１−ジメ
チル［３−プロピルイソチオシアネート］１Ｈ−ベンツ
［ｅ］−インドリウム塩（LI-COR社製）４００ｍｇ
（０．５０２mmol）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解
し、反応溶液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミ
ノプロピル）アミン７６．９ｍｇ（０．７５３mmol）を
徐々に加え、１．５時間室温にて攪拌した。この反応溶
液を濃縮し、さらにエーテル／メタノールを加えてデカ
ンテーションを行い化合物（ＩＩ−Ｉ−Ａ）４０２ｍｇ
（収率８９％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを以下
に示す。Example 2 (1) Production of fluorescent group-containing compound represented by general formula (VIII) 2- [2- [3-[[1,3-dihydro-1,1-dimethyl-3- (4 -Sulfobutyl) -2H-indole-
2-ylidene] ethylidene] -2-phenoxy-1-cyclohexen-1-yl] -ethenyl] -1,1-dimethyl [3-propylisothiocyanate] 1H-benz [e] -indolium salt (LI-COR) Made) 400mg
(0.502 mmol) was dissolved in 10 ml of dichloromethane, and the reaction solution was cooled to 0 ° C., and 76.9 mg (0.753 mmol) of N-3- (dimethylaminopropyl) amine was gradually added thereto. And stirred. This reaction solution was concentrated, and ether / methanol was further added to perform decantation, and 402 mg of compound (II-IA)
(89% yield). The NMR spectrum data is shown below.

【０１４３】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.20-2.40
(m,14H)、δ=2.25(s,6H)、δ=2.45(t,2H)、δ=2.65-3.0
5(m,4H)、δ=3.65-3.95(m,4H)、δ=4.45(t,2H)、δ=6.1
3(d,1H)、δ=6.35(d,1H)、δ=6.90-7.60(m,11H)、δ=7.
70-8.15(m,5H)。 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.20-2.40
(m, 14H), δ = 2.25 (s, 6H), δ = 2.45 (t, 2H), δ = 2.65-3.0
5 (m, 4H), δ = 3.65-3.95 (m, 4H), δ = 4.45 (t, 2H), δ = 6.1
3 (d, 1H), δ = 6.35 (d, 1H), δ = 6.90-7.60 (m, 11H), δ = 7.
70-8.15 (m, 5H).

【０１４４】[0144]

【化２９】 Embedded image

【０１４５】（２）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記実施例１の（１）で得られた（Ｉ−Ｉ−Ｄ）２３２
ｍｇ（０．４４５ｍｍｏｌ）及び上記実施例２の（１）
で得られた化合物（ＩＩ−Ｉ−Ａ）４００ｍｇ（０．４
４５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、室温にて一
晩攪拌した。さらに、エーテル／メタノールを加え、デ
カンテーションにより本発明の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物として、化合物（２）５７５ｍｇ（収率９１
％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、ＩＲスペクトル
データ及びＵＶスペクトルデータを以下に示す。(2) Production of a carbodiimide compound having a fluorescent group represented by the general formula (III) (IID) 232 obtained in (1) of Example 1 above
mg (0.445 mmol) and (1) of Example 2 above.
400 mg (0.4 mg) of the compound (II-IA) obtained in
45 mmol) was dissolved in 10 ml of DMF and stirred at room temperature overnight. Further, ether / methanol was added, and 575 mg of Compound (2) (yield: 91) was obtained as a carbodiimide compound having a fluorescent group of the present invention by decantation.
%). The NMR spectrum data, IR spectrum data and UV spectrum data are shown below.

【０１４６】1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ=1.20-2.10
(m,24H)、δ=2.30-2.50(m,12H)、δ=3.10-3.35(m,4H)、
δ=2.90(s,3H)、δ=2.95(s,6H)、δ=3.60-3.85(m,10
H)、δ=6.13(d,1H)、δ=6.35(d,1H)、δ=6.80-7.60(m,1
1H)、δ=7.80-8.18(m,5H)。 ＩＲ：2127 cm-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λmax７９０ｎｍ 1 H-NMR (CDCl 3 ): δ = 1.20-2.10
(m, 24H), δ = 2.30-2.50 (m, 12H), δ = 3.10-3.35 (m, 4H),
δ = 2.90 (s, 3H), δ = 2.95 (s, 6H), δ = 3.60-3.85 (m, 10
H), δ = 6.13 (d, 1H), δ = 6.35 (d, 1H), δ = 6.80-7.60 (m, 1
1H), δ = 7.80-8.18 (m, 5H). IR: 2127 cm -1 (-N = C = N- group) UV (EtOH): λ max 790 nm

【０１４７】[0147]

【化３０】 Embedded image

【０１４８】[0148]

【実施例３】（１）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 特開平９−３２５１４７号公報及びRatnakaer B Mujumd
ar et. al., Bioconjugate Chem., 4, 2, 105-111(199
3)を参考にして製造したＣｙ３．１８．ＯＳｕ２００ｍ
ｇ（０．１７５mmol）をＤＭＦ５ｍｌに溶解し、反応溶
液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）アミン７１．４ｍｇ（０．６９８mmol）を徐々に加
え、１２時間室温にて攪拌した。この反応溶液を濃縮
し、さらに酢酸エチル／メタノールを加えてデカンテー
ションを数回繰り返し行い化合物（ＩＩＩ−Ｉ−Ａ）１
７０ｍｇ（収率８７％）を得た。ＮＭＲスペクトルデー
タを以下に示す。Example 3 (1) Production of Fluorescent Group-Containing Compound Represented by General Formula (VIII) JP-A-9-325147 and Ratnakaer B Mujumd
ar et.al., Bioconjugate Chem., 4, 2, 105-111 (199
Cy 3.18. Produced with reference to 3). OSu200m
g (0.175 mmol) was dissolved in 5 ml of DMF, the reaction solution was cooled to 0 ° C., and 71.4 mg (0.698 mmol) of N-3- (dimethylaminopropyl) amine was gradually added thereto, followed by stirring at room temperature for 12 hours. did. The reaction solution was concentrated, and ethyl acetate / methanol was further added, and decantation was repeated several times to give compound (III-IA) 1
70 mg (87% yield) were obtained. The NMR spectrum data is shown below.

【０１４９】1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.30-1.60
(m,12H)、δ=1.70(s,12H)、δ=2.05(t,4H)、δ=2.10-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,12H)、δ=2.95(q,4H)、δ=4.12
(t,4H)、δ=6.54(d,2H)、δ=7.36-7.95(m,6H)、δ=8.36
(t,1H)。 1 H-NMR (DMSO): δ = 1.30-1.60
(m, 12H), δ = 1.70 (s, 12H), δ = 2.05 (t, 4H), δ = 2.10-2.
30 (m, 8H), δ = 2.15 (s, 12H), δ = 2.95 (q, 4H), δ = 4.12
(t, 4H), δ = 6.54 (d, 2H), δ = 7.36-7.95 (m, 6H), δ = 8.36
(t, 1H).

【０１５０】[0150]

【化３１】 Embedded image

【０１５１】（２）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記実施例１の（１）で得られた化合物（Ｉ−Ｉ−Ｄ）
７９ｍｇ（０．１５２ｍｍｏｌ）及び上記実施例３の
（１）で得られた化合物（ＩＩＩ−Ｉ−Ａ）１７０ｍｇ
（０．１５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、室
温にて一晩攪拌した。さらに、酢酸エチル／メタノール
を加え、デカンテーションにより本発明の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物として、化合物（３）２４９ｍｇ
（収率１００％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、Ｉ
Ｒスペクトルデータ及びＵＶスペクトルデータを以下に
示す。(2) Preparation of fluorescent group-containing carbodiimide compound represented by general formula (III): Compound (IID) obtained in (1) of Example 1 above
79 mg (0.152 mmol) and 170 mg of the compound (III-IA) obtained in (1) of Example 3 above
(0.152 mmol) was dissolved in 10 ml of DMF and stirred at room temperature overnight. Further, ethyl acetate / methanol was added, and the resultant was subjected to decantation to obtain 249 mg of the compound (3) as the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention.
(100% yield). NMR spectrum data, I
The R spectrum data and the UV spectrum data are shown below.

【０１５２】1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.10-1.80
(m,24H)、δ=1.70(s,12H)、δ=2.05(m,4H)、δ=2.10-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,6H)、δ=2.72 (s,3H)、δ=2.85
(s,3H) 、δ=2.85-3.50(m,12H)、δ=3.55(m,4H)、δ=4.
12(t,4H)、δ=6.54(d,2H)、δ=7.36-7.95(m,6H)、δ=8.
36(t,1H)。 ＩＲ：2127 cm-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λmax５３２ｎｍ 1 H-NMR (DMSO): δ = 1.10-1.80
(m, 24H), δ = 1.70 (s, 12H), δ = 2.05 (m, 4H), δ = 2.10-2.
30 (m, 8H), δ = 2.15 (s, 6H), δ = 2.72 (s, 3H), δ = 2.85
(s, 3H), δ = 2.85-3.50 (m, 12H), δ = 3.55 (m, 4H), δ = 4.
12 (t, 4H), δ = 6.54 (d, 2H), δ = 7.36-7.95 (m, 6H), δ = 8.
36 (t, 1H). IR: 2127 cm -1 (-N = C = N- group) UV (EtOH): λ max 532 nm

【０１５３】[0153]

【化３２】 Embedded image

【０１５４】[0154]

【実施例４】（１）一般式（VIII）で表される蛍光性基
含有化合物の製造 特開平９−３２５１４７号公報及びRatnakaer B Mujumd
ar et. al., Bioconjugate Chem., 4, 2, 105-111(199
3)を参考にして製造したＣｙ５．１８．ＯＳｕ２００ｍ
ｇ（０．１７１mmol）をＤＭＦ５ｍｌに溶解し、反応溶
液を０℃に冷却後、Ｎ−３−（ジメチルアミノプロピ
ル）アミン７０ｍｇ（０．６８４mmol）を徐々に加え、
１２時間室温にて攪拌した。この反応溶液を濃縮し、さ
らに酢酸エチル／メタノールを加えてデカンテーション
を行い化合物（ＩＶ−Ｉ−Ａ）１８４ｍｇ（収率９４
％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータを以下に示す。Example 4 (1) Production of Fluorescent Group-Containing Compound Represented by Formula (VIII) JP-A-9-325147 and Ratnakaer B Mujumd
ar et.al., Bioconjugate Chem., 4, 2, 105-111 (199
Cy5.18. Produced with reference to 3). OSu200m
g (0.171 mmol) was dissolved in DMF (5 ml), the reaction solution was cooled to 0 ° C., and N-3- (dimethylaminopropyl) amine (70 mg, 0.684 mmol) was gradually added.
Stir at room temperature for 12 hours. This reaction solution was concentrated, and ethyl acetate / methanol was further added to perform decantation, and 184 mg of compound (IV-IA) (yield 94)
%). The NMR spectrum data is shown below.

【０１５５】1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.32-1.65
(m,12H)、δ=1.72(s,12H)、δ=2.05(t,4H)、δ=2.00-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,12H)、δ=2.95(q,4H)、δ=4.17
(t,4H)、δ=6.57(d,3H)、δ=7.36-7.95(m,6H)、δ=8.45
(t,2H)。 1 H-NMR (DMSO): δ = 1.32-1.65
(m, 12H), δ = 1.72 (s, 12H), δ = 2.05 (t, 4H), δ = 2.00-2.
30 (m, 8H), δ = 2.15 (s, 12H), δ = 2.95 (q, 4H), δ = 4.17
(t, 4H), δ = 6.57 (d, 3H), δ = 7.36-7.95 (m, 6H), δ = 8.45
(t, 2H).

【０１５６】[0156]

【化３３】 Embedded image

【０１５７】（２）一般式（III）で表される蛍光性基
含有カルボジイミド化合物の製造 上記実施例１の（１）で得られた（Ｉ−Ｉ−Ｄ）８２ｍ
ｇ（０．１５７ｍｍｏｌ）及び上記実施例４の（１）で
得られた化合物（ＩＶ−Ｉ−Ａ）１８０ｍｇ（０．１５
７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、室温にて一晩
攪拌した。さらに、酢酸エチル／メタノールを加え、デ
カンテーションにより本発明の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物として、化合物（４）２４６ｍｇ（収率９４
％）を得た。ＮＭＲスペクトルデータ、ＩＲスペクトル
データ及びＵＶスペクトルデータを以下に示す。(2) Production of a carbodiimide compound containing a fluorescent group represented by the general formula (III) (I-ID) 82 m obtained in (1) of Example 1 above
g (0.157 mmol) and 180 mg (0.15 mmol) of the compound (IV-IA) obtained in (1) of Example 4 above.
7 mmol) was dissolved in 10 ml of DMF and stirred at room temperature overnight. Furthermore, ethyl acetate / methanol was added, and 246 mg of compound (4) (yield: 94) was obtained as a fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention by decantation.
%). The NMR spectrum data, IR spectrum data and UV spectrum data are shown below.

【０１５８】1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ=1.22-1.65
(m,12H)、δ=1.72(s,12H)、δ=2.05(t,4H)、δ=1.95-2.
30(m,8H)、δ=2.15(s,12H)、δ=2.95(q,4H)、δ=4.17
(t,4H)、δ=6.57(d,3H)、δ=7.32-7.95(m,6H)、δ=8.45
(t,2H)。 ＩＲ：2127 cm-1（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−基） ＵＶ（ＥｔＯＨ）：λmax６３２ｎｍ 1 H-NMR (DMSO): δ = 1.22-1.65
(m, 12H), δ = 1.72 (s, 12H), δ = 2.05 (t, 4H), δ = 1.95-2.
30 (m, 8H), δ = 2.15 (s, 12H), δ = 2.95 (q, 4H), δ = 4.17
(t, 4H), δ = 6.57 (d, 3H), δ = 7.32-7.95 (m, 6H), δ = 8.45
(t, 2H). IR: 2127 cm -1 (-N = C = N- group) UV (EtOH): λ max 632 nm

【０１５９】[0159]

【化３４】 Embedded image

【０１６０】[0160]

【実施例５】＜水溶性試験＞実施例１〜実施例４で得ら
れた化合物（１）〜（４）の水に対する溶解性試験を行
った。また、比較のために、化合物（１）のローダミン
Ｂ基中のカルボン酸カリウム塩基（−ＣＯＯＫ）を水素
原子に置換した化合物（１'）、化合物（２）のＩＲＤ
−４１基中のスルホン酸ナトリウム塩基（−ＳＯ3Ｎ
ａ）をメチル基に置換した化合物（２'）、化合物
（３）のＣｙ３基中のスルホン酸カリウム塩基（−ＳＯ
3Ｋ）を水素原子に置換した化合物（３'）及び化合物
（４）のＣｙ５基中のスルホン酸カリウム塩基（−ＳＯ
3Ｋ）を水素原子に置換した化合物（４'）についても、
同様に水に対する溶解性試験を行った。結果を表１に示
す。Example 5 <Water solubility test> The compounds (1) to (4) obtained in Examples 1 to 4 were subjected to a water solubility test. Further, for comparison, IRD of compound (1 ′) in which potassium carboxylate base (—COOK) in rhodamine B group of compound (1) was replaced by a hydrogen atom was used.
Sodium sulfonate base in -41 group (-SO 3 N
Compound (2 ′) in which a) is substituted with a methyl group, potassium sulfonate base (—SO 2) in Cy3 group of compound (3)
Compound (3 ′) in which 3 K) is replaced with a hydrogen atom and potassium sulfonate base (—SO
The compound (4 ′) in which 3 K) is replaced by a hydrogen atom also includes
Similarly, a solubility test in water was performed. Table 1 shows the results.

【０１６１】[0161]

【表１】 [Table 1]

【０１６２】この結果から、本発明の蛍光性基含有カル
ボジイミド化合物が水溶性に優れることが明らかであ
る。From these results, it is clear that the fluorescent group-containing carbodiimide compound of the present invention is excellent in water solubility.

【０１６３】[0163]

【実施例６】反応溶液［ファージＤＮＡ（Ｍ１３ｍｐ１
８複製型：宝酒造株式会社製）１μｇ；ホウ酸緩衝液
（ｐＨ８．５）；０．１Ｍの上記実施例１〜４で得られ
た化合物（１）、（３）及び（４）を作製し、８５℃に
て１分間インキュベートした。さらに、この反応溶液
に、その１／９倍量の３Ｍ酢酸ナトリウム及び２．５倍
量の冷エタノールを加えて混合し、−８０℃にて４５分
間放置した。遠心機（国産株式会社製、Ｈ−１５００Ｆ
Ｒ）により、４℃にて１２０００ｒｐｍで１．５分間遠
心した。上澄み液を除去した後、１００μｌの滅菌水に
得られた沈殿を溶解した。Example 6 Reaction solution [phage DNA (M13mp1
8 μg: 1 μg of Takara Shuzo Co., Ltd .; borate buffer (pH 8.5); 0.1 M of compounds (1), (3) and (4) obtained in Examples 1 to 4 above were prepared. , 85 ° C for 1 minute. Further, 1/9 volume of 3M sodium acetate and 2.5 volume of cold ethanol were added to the reaction solution, mixed, and left at -80 ° C for 45 minutes. Centrifuge (H-1500F, manufactured by Kokusan Co., Ltd.)
R), the mixture was centrifuged at 12,000 rpm for 1.5 minutes at 4 ° C. After removing the supernatant, the obtained precipitate was dissolved in 100 μl of sterilized water.

【０１６４】次いで、制限酵素（ＨｉｎｄＩＩ）で直鎖
化したファージＤＮＡ（Ｍ１３ｍｐ１８複製型）を用い
て、２ＭＮａＣｌ中で、４８０ｎｇから４８０ｐｇ／１
００μｌの１０倍希釈系列を作製し、１００℃にて１０
分間熱処理し、氷上で５分間急冷させて熱変性核酸を得
た。プレート上の各ウェルに得られた各濃度の熱変性核
酸を加え、プレートシールをして３７℃にて１２時間固
定した。Next, using phage DNA (M13mp18 replication type) linearized with a restriction enzyme (HindII), 480 ng to 480 pg / 1 in 2 M NaCl.
A 100 μl 10-fold dilution series was prepared.
The mixture was heat-treated for 5 minutes and quenched on ice for 5 minutes to obtain a heat-denatured nucleic acid. Each concentration of the heat-denatured nucleic acid obtained was added to each well on the plate, and the plate was sealed and fixed at 37 ° C. for 12 hours.

【０１６５】前記した熱変性核酸を固定化したプレート
を、蒸留水で洗浄後、プレハイブリダイゼーション溶液
［５×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０．１５ＭＮａＣｌ、０．
０１５Ｍクエン酸ナトリウム）、５×デンハーツ（Denh
ardt's）溶液（０．０２％ポリビニルピロリドン、０．
２％フィコール、０．０２％ＢＳＡ）、２５ｍＭリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）、５０％ホルムアミ
ド、０．５ｍｇ／ｍｌ酵母トランスファＲＮＡ及び０．
１％ドデシル硫酸ナトリウム］１００μｌを加え、室温
にて５分間プレートミキサーで振盪させる操作を３回繰
り返し行った。各ウェルの溶液を捨て、２×ＳＳＣを３
００μｌ加え、室温にて５分間放置した。The plate on which the above-mentioned heat-denatured nucleic acid was immobilized was washed with distilled water, and then subjected to a pre-hybridization solution [5 × SSC (1 × SSC = 0.15 M NaCl, 0.1 μM NaCl).
015M sodium citrate), 5 × Denharts (Denh
ardt's) solution (0.02% polyvinylpyrrolidone, 0.
2% Ficoll, 0.02% BSA), 25 mM sodium phosphate buffer (pH 6.5), 50% formamide, 0.5 mg / ml yeast transfer RNA and 0.1%
[1% sodium dodecyl sulfate] 100 μl was added, and the operation of shaking with a plate mixer at room temperature for 5 minutes was repeated three times. Discard the solution in each well and add 2 × SSC to 3
After adding 00 μl, the mixture was left at room temperature for 5 minutes.

【０１６６】次いで、各ウェルに５０ｍＭリン酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ７．０）及び１．５ＭＮａＣｌを１０
０μｌ加え、化合物（１Ａ）、（３Ａ）及び（４Ａ）と
して蛍光物質含有ＤＮＡを作製した。さらに、各ウェル
の溶液にキャピラリーを用いて蛍光分光光度計（Ｆ−３
０１０：日立製作所製）にて、励起光を照射したとこ
ろ、Ｍ１３複製型ＤＮＡに標識した蛍光性基から放出さ
れた蛍光を測定した。その結果を表２に示す。Next, 50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.0) and 1.5 M NaCl were added to each well.
0 μl was added to prepare fluorescent substance-containing DNAs as compounds (1A), (3A) and (4A). Furthermore, the solution in each well was measured with a fluorescence spectrophotometer (F-3) using a capillary.
010: manufactured by Hitachi, Ltd.), the fluorescence emitted from the fluorescent group labeled on the M13 replicative DNA was measured when the sample was irradiated with excitation light. Table 2 shows the results.

【０１６７】[0167]

【表２】 [Table 2]

【０１６８】この結果から、本発明の核酸の検出方法に
よれば、核酸の検出が高感度で行えることがわかる。From these results, it can be seen that the nucleic acid detection method of the present invention can detect nucleic acids with high sensitivity.

【０１６９】[0169]

【発明の効果】本発明の蛍光性基含有カルボジイミド化
合物は、水に対して十分な溶解性を有すると共に、これ
を用れば、核酸及び蛋白質に蛍光性基を簡便に効率よく
導入することが可能である。また、本発明の蛍光性基含
有カルボジイミド化合物前駆体は、蛍光性基と簡便かつ
効率的に結合できることから、前記蛍光性基含有カルボ
ジイミド化合物の製造に最適である。Industrial Applicability The carbodiimide compound containing a fluorescent group of the present invention has sufficient solubility in water, and if it is used, a fluorescent group can be easily and efficiently introduced into nucleic acids and proteins. It is possible. Further, the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor of the present invention can be easily and efficiently bonded to a fluorescent group, and is therefore most suitable for producing the fluorescent group-containing carbodiimide compound.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 21/64 Ｇ０１Ｎ 21/64 Ｆ 21/78 21/78 Ｃ 33/533 33/533 (72)発明者 吉川 陽子 東京都足立区西新井栄町１−18−１ 日清 紡績株式会社東京研究センター内 Ｆターム(参考） 2G043 AA04 BA16 DA02 EA01 JA04 KA02 LA01 2G054 AA06 CA22 CA23 CD01 CE02 EA03 EB01 GA04 GB02 4C062 HH21 4C204 AB01 BB04 CB03 CB13 DB13 DB15 EB10 FB15 FB16 GB01 GB29 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) G01N 21/64 G01N 21/64 F 21/78 21/78 C 33/533 33/533 (72) Inventor Yoko Yoshikawa 1-18-1 Sakaemachi, Nishiarai, Adachi-ku, Tokyo F-term in Nisshinbo Spinning Co., Ltd. Tokyo Research Center 2G043 AA04 BA16 DA02 EA01 JA04 KA02 LA01 2G054 AA06 CA22 CA23 CD01 CE02 EA03 EB01 GA04 GB02 4C062 HH21 4C204 AB01 BB04 CB03 CB13 DB13 DB15 EB10 FB15 FB16 GB01 GB29

Claims (13)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で表されるハロゲン又
はスルホン酸基を有する蛍光性基含有カルボジイミド化
合物前駆体。 【化１】 Ｂ−Ｙ3−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｙ2−Ｗ−Ｙ1−［Ａ］n−Ｙ4−Ｘ ・・・（Ｉ） ［式（Ｉ）中、Ｘはハロゲン原子又はスルホン酸基を表
す。Ａは、−ＣＨ2−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、
−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−（Ｒ1は炭素数１から２０ま
での直鎖、環状若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂
肪族炭化水素基を表す。）、−ＮＲ2Ｒ3−（Ｒ2及びＲ3
は、独立して水素原子、炭素数１から２０までの直鎖若
しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
又は置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール
基若しくはアラルキル基を表す。但し、Ｒ2とＲ3のどち
らか一方が水素原子である場合、他方は炭素数１から２
０までの直鎖若しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪
族炭化水素基、置換基を有してもよいシクロアルキル
基、アリール基若しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ
2とＲ3が相互に結合して全体として酸素を含有してもよ
い含窒素複素環式基を形成してもよい。）、−ＣＯＯ
−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ2−、−ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−
及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群から選ばれる官能基を表
し、ｎは０又は１を表す。Ｗは直接結合又は４級オニウ
ム基を表す。Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4は、各々下記一般式
（II）で示される官能基を表す。Ｂは水素原子又は式
（Ｉ）中の−Ｗ−Ｙ1−［Ａ］n−Ｙ4−Ｘと同一もしく
は異なる一価の有機基を表す。また、前記Ｂ、Ｙ1、
Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ又はＷで表される官能基はいずれの
官能基も、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒
素若しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボ
キシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ば
れる基を有してもよい。］ 【化２】 −（ＣＨ2）p−（Ｌ）r−（ＣＨ2）q− ・・・（II） ［式（II）中、Ｌは、−ＣＨ2−、−ＮＨＣＯ−、−Ｃ
ＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ1−（Ｒ1は、式
（Ｉ）中におけるものと同意である。）、−ＮＲ2Ｒ3−
（Ｒ2及びＲ3は、式（Ｉ）中におけるものと同意であ
る。）、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＳＯ2−、−
ＮＨＣ(Ｓ)ＮＨ−及び−ＳＯ2ＮＨ−からなる群から選
ばれる官能基を表す。ｐ及びｑは各々０から２０の整数
を表し、ｒは０又は１を表す。］1. A halogen compound represented by the following general formula (I):
Is a carbodiimidation containing a fluorescent group having a sulfonic acid group
Compound precursor. Embedded image BYThree-N = C = N-YTwo-W-Y1-[A]n-YFour-X (I) [In the formula (I), X represents a halogen atom or a sulfonic acid group.
You. A is -CHTwo-, -NHCO-, -CONH-,
-O-, -S-, -NR1− (R1Is from 1 to 20 carbon atoms
, Cyclic or branched saturated or unsaturated fats
Represents an aliphatic hydrocarbon group. ), -NRTwoRThree− (RTwoAnd RThree
Is independently a hydrogen atom, a linear straight-chain having 1 to 20 carbon atoms.
Or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group,
Or a cycloalkyl group optionally having a substituent, aryl
Represents an aralkyl group or an aralkyl group. Where RTwoAnd RThreeThroat
When one of them is a hydrogen atom, the other has 1 to 2 carbon atoms.
Straight or branched saturated or unsaturated fats up to 0
Group hydrocarbon group, cycloalkyl optionally having substituent (s)
Represents an aryl group or an aralkyl group. Also, R
TwoAnd RThreeMay combine with each other to contain oxygen as a whole.
Nitrogen-containing heterocyclic groups. ), -COO
-, -OCO-, -NHSOTwo-, -NHC (S) NH-
And -SOTwoThe functional groups selected from the group consisting of NH-
And n represents 0 or 1. W is a direct bond or quaternary onium
Represents a group. Y1, YTwo, YThreeAnd YFourIs the following general formula
Represents a functional group represented by (II). B is a hydrogen atom or a formula
-WY in (I)1-[A]n-YFourSame as -X
Represents a different monovalent organic group. In addition, B, Y1,
YTwo, YThree, YFour, A or W is any functional group
Functional groups are also alkali metals, alkaline earth metals, or nitrogen.
Carboxy substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus
Selected from xyl, sulfo, phosphono and phospho groups
May be included. ]-(CHTwo)p-(L)r− (CHTwo)q-(II) [In the formula (II), L is -CHTwo-, -NHCO-, -C
ONH-, -O-, -S-, -NR1− (R1Is the expression
I agree with the one in (I). ), -NRTwoRThree−
(RTwoAnd RThreeIs in agreement with that in formula (I)
You. ), -COO-, -OCO-, -NHSOTwo−, −
NHC (S) NH- and -SOTwoSelected from the group consisting of NH-
Represents a functional group. p and q are each an integer from 0 to 20
And r represents 0 or 1. ] 【請求項２】 下記一般式（III）で表されるアルカリ
金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含
有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ
基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくと
も１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物。 【化３】 ［式（III）中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ、Ｘ、Ｗ
及びｎは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
る。Ｆは蛍光性基を表し、Ｑは３級又は４級窒素若しく
は３級又は４級リンを表す。Ｒ4及びＲ5は、独立して水
素原子、炭素数１から２０までの直鎖若しくは分岐した
飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、又は置換基を有
してもよいシクロアルキル基、アリール基若しくはアラ
ルキル基を表す。但し、Ｒ4とＲ5のどちらか一方が水素
原子である場合、他方は炭素数１から２０までの直鎖若
しくは分岐した飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素基、
置換基を有してもよいシクロアルキル基、アリール基若
しくはアラルキル基を表す。また、Ｒ4とＲ5が相互に結
合して−Ｑ+Ｒ4Ｒ5−として酸素を含有してもよい含窒
素複素環式基又は含リン複素環式基を形成してもよい。
Ｙ5は、前記Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3及びＹ4と同義である。ま
た、前記Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ｙ5、Ａ、Ｗ、Ｒ4、
Ｒ5及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能基は、ア
ルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリ
ンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、ス
ルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少な
くとも１つ有する。］2. A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a nitrogen- or phosphorus-containing basic group represented by the following general formula (III): A fluorescent group-containing carbodiimide compound having at least one selected group. Embedded image [In the formula (III), B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A, X, W
And n are the same as those in the general formula (I). F represents a fluorescent group, and Q represents tertiary or quaternary nitrogen or tertiary or quaternary phosphorus. R 4 and R 5 independently represent a hydrogen atom, a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, or a cycloalkyl group or an aryl group which may have a substituent; Alternatively, it represents an aralkyl group. However, when one of R 4 and R 5 is a hydrogen atom, the other is a linear or branched saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms,
Represents a cycloalkyl group, an aryl group or an aralkyl group which may have a substituent. R 4 and R 5 may be mutually bonded to form a nitrogen-containing heterocyclic group or a phosphorus-containing heterocyclic group which may contain oxygen as —Q + R 4 R 5 —.
Y 5 has the same meaning as Y 1 , Y 2 , Y 3 and Y 4 . In addition, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , Y 5 , A, W, R 4 ,
At least one functional group selected from R 5 and F is selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group, and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus. At least one group. ] 【請求項３】 式（Ｉ）において、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、
Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する請求項１記載の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物前駆体。3. In the formula (I), B, Y 1 , Y 2 ,
A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group in which at least one functional group selected from Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus; The carbodiimide compound precursor having a fluorescent group according to claim 1, wherein the carbodiimide compound precursor has at least one group selected from a group selected from the group consisting of: 【請求項４】 式（III）において、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、
Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する請求項２記載の蛍光性基含有
カルボジイミド化合物。4. In the formula (III), B, Y 1 , Y 2 ,
A carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group in which at least one functional group selected from Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus; 3. The carbodiimide compound containing a fluorescent group according to claim 2, wherein the carbodiimide compound has at least one group selected from a group selected from the group consisting of a phosphine and a phospho group. 【請求項５】 式（III）において、Ｙ5、Ｒ4、Ｒ5及び
Ｆから選ばれる少なくとも１つの官能基が、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有
する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スルホ基、
ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１
つ有する請求項２記載の蛍光性基含有カルボジイミド化
合物。5. In the formula (III), at least one functional group selected from Y 5 , R 4 , R 5 and F is an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. Carboxyl group, sulfo group,
At least one group selected from a phosphono group and a phospho group
The fluorescent group-containing carbodiimide compound according to claim 2, wherein 【請求項６】 下記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）の工程を
含む請求項１記載の蛍光性基含有カルボジイミド化合物
前駆体の製造方法： （Ａ）下記一般式（IV）で表されるイソ（チオ）シアネ
ート化合物と、下記一般式（Ｖ）で表されるアミン化合
物とを反応させて下記一般式（VI）で表される（チオ）
尿素化合物を合成する工程、 【化４】 ［式中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ、Ｗ及びｎは、各
々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意である。Ｔは、酸
素原子またはイオウ原子を表す。Ｚは、水酸基、アルキ
ル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェニル
基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基、又は
ホスホニウム基を表す。］ （Ｂ）前記（Ａ）工程で得られた一般式（VI）で表され
る化合物をハロゲン化又はスルホン化して下記一般式
（VII）で表される化合物を作製する工程、 【化５】 ［式（VII）中、Ｂ、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ｗ、Ａ、ｎ
及びＸは、各々前記一般式（Ｉ）におけるのと同意であ
る。Ｔは、酸素原子またはイオウ原子を表す。］ （Ｃ）前記（Ｂ）工程で得られた一般式（VII）で表さ
れる化合物を脱水反応又は酸化的脱硫反応させてカルボ
ジイミド化する工程。6. The method for producing a carbodiimide compound precursor having a fluorescent group according to claim 1, comprising the following steps (A), (B) and (C): (A) represented by the following general formula (IV): Reacting an iso (thio) cyanate compound with an amine compound represented by the following general formula (V) to form a (thio) compound represented by the following general formula (VI)
A step of synthesizing a urea compound, [Wherein, B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A, W and n have the same meanings as in the above general formula (I). T represents an oxygen atom or a sulfur atom. Z represents a hydroxyl group, an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group, or a phosphonium group. (B) a step of halogenating or sulfonating the compound represented by the general formula (VI) obtained in the step (A) to produce a compound represented by the following general formula (VII): [In the formula (VII), B, Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , W, A, n
And X have the same meanings as in the general formula (I). T represents an oxygen atom or a sulfur atom. (C) a step of subjecting the compound represented by the general formula (VII) obtained in the step (B) to a carbodiimidation by a dehydration reaction or an oxidative desulfurization reaction. 【請求項７】 請求項６記載の製造方法において、Ｂ、
Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも
１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を少なくとも１つ有する、請求項３記載の
蛍光性基含有カルボジイミド化合物前駆体の製造方法。7. The method according to claim 6, wherein B,
A carboxyl group in which at least one functional group selected from Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus 4. The method for producing a fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor according to claim 3, wherein the precursor has at least one group selected from a group consisting of a sulfonic group, a phosphono group and a phospho group. 【請求項８】 請求項１記載の蛍光性基含有カルボジイ
ミド化合物前駆体及び下記一般式（VIII）で表される蛍
光性基含有化合物からそれぞれ、カルボジイミド化合物
及び蛍光性基含有化合物を、両化合物の少なくとも１つ
が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若し
くはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシル
基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる官
能基を有するように選択し、反応させる工程を含む、請
求項２記載の蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造
方法。 【化６】Ｑ'Ｒ4Ｒ5−Ｙ5−Ｆ ・・・（VIII） ［式（VIII）中、Ｒ4、Ｒ5、Ｙ5及びＦは、各々前記一
般式（III）におけるのと同意である。Ｑ'は、水酸基、
アルキル基、アルケニル基、ビニル基、アリル基、フェ
ニル基、カルボキシル基、スルホニル基含有誘導体基及
びホスホニウム基から選ばれる基で置換されていてもよ
い２級又は３級窒素含有基若しくは２級又は３級リン含
有基を表す。］8. A carbodiimide compound and a fluorescent group-containing compound, respectively, from the fluorescent group-containing carbodiimide compound precursor according to claim 1 and a fluorescent group-containing compound represented by the following general formula (VIII): At least one is selected to have a functional group selected from an alkali metal, an alkaline earth metal, or a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus, The method for producing a fluorescent group-containing carbodiimide compound according to claim 2, comprising a step of reacting. Embedded image Q′R 4 R 5 —Y 5 —F (VIII) wherein, in the formula (VIII), R 4 , R 5 , Y 5 and F are each as defined in the above general formula (III) I agree. Q ′ is a hydroxyl group,
Secondary or tertiary nitrogen-containing group or secondary or tertiary group which may be substituted with a group selected from an alkyl group, an alkenyl group, a vinyl group, an allyl group, a phenyl group, a carboxyl group, a sulfonyl group-containing derivative group and a phosphonium group. Represents a phosphorus-containing group. ] 【請求項９】 請求項８記載の製造方法において、Ｂ、
Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3、Ｙ4、Ａ及びＷから選ばれる少なくとも
１つの官能基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又
は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基で置換された
カルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基か
ら選ばれる基を少なくとも１つ有する、請求項４記載の
蛍光性基含有カルボジイミド化合物の製造方法。9. The method according to claim 8, wherein B,
A carboxyl group in which at least one functional group selected from Y 1 , Y 2 , Y 3 , Y 4 , A and W is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus The method for producing a carbodiimide compound having a fluorescent group according to claim 4, wherein the carbodiimide compound has at least one group selected from a group selected from a group consisting of a sulfo group, a phosphono group and a phospho group. 【請求項１０】 請求項８記載の製造方法において、Ｙ
5、Ｒ4、Ｒ5及びＦから選ばれる少なくとも１つの官能
基が、アルカリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若
しくはリンを含有する塩基性基で置換されたカルボキシ
ル基、スルホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる
基を少なくとも１つ有する、請求項５記載の蛍光性基含
有カルボジイミド化合物の製造方法。10. The method according to claim 8, wherein Y
5 , a carboxyl group, a sulfo group, or a phosphono group in which at least one functional group selected from R 4 , R 5 and F is substituted with an alkali metal, an alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus. The method for producing a fluorinated group-containing carbodiimide compound according to claim 5, wherein the carbodiimide compound has at least one group selected from a group selected from the group consisting of a carbodiimide and a phospho group. 【請求項１１】 標識物質で標識した核酸を用いるハイ
ブリダイゼーションによる核酸の検出方法において、標
識物質として、請求項２記載のアルカリ金属、アルカリ
土類金属、又は、窒素若しくはリンを含有する塩基性基
で置換されたカルボキシル基、スルホ基、ホスホノ基及
びホスホ基から選ばれる基を少なくとも１つ有する蛍光
性基含有カルボジイミド化合物を用いることを特徴とす
る方法。11. A method for detecting a nucleic acid by hybridization using a nucleic acid labeled with a labeling substance, wherein the labeling substance is an alkali metal, alkaline earth metal, or a basic group containing nitrogen or phosphorus according to claim 2. A carbodiimide compound containing a fluorescent group having at least one group selected from the group consisting of a carboxyl group, a sulfo group, a phosphono group and a phospho group. 【請求項１２】 標識物質として、請求項４記載のアル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
とも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用
いる請求項１１記載の方法。12. The labeling substance is selected from the alkali metal, alkaline earth metal or carboxyl group, sulfo group, phosphono group and phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus according to claim 4. The method according to claim 11, wherein a carbodiimide compound having a fluorescent group having at least one group to be used is used. 【請求項１３】 標識物質として、請求項５記載のアル
カリ金属、アルカリ土類金属、又は、窒素若しくはリン
を含有する塩基性基で置換されたカルボキシル基、スル
ホ基、ホスホノ基及びホスホ基から選ばれる基を少なく
とも１つ有する蛍光性基含有カルボジイミド化合物を用
いる請求項１１記載の方法。13. The labeling substance is selected from the alkali metal, alkaline earth metal or carboxyl group, sulfo group, phosphono group and phospho group substituted with a basic group containing nitrogen or phosphorus according to claim 5. The method according to claim 11, wherein a carbodiimide compound having a fluorescent group having at least one group to be used is used.
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