JP2001061479A - 血液凝固第vii因子改変体 - Google Patents
血液凝固第vii因子改変体Info
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Abstract
VII因子(以下、FVII)及び/または活性化型血
液凝固第VII因子(以下、FVIIa)の改変体を作
製する。 【解決手段】 下記から選択される少なくとも一
つの改変を含むことを特徴とするFVII/FVIIa
改変体及び当該改変体を有効成分として含有する医薬品
組成物。(a)FVIIの159Cys−164Cysの切
断、(b)FVII内の、233番目のスレオニン(23
3Thr)から240番目のアスパラギン(240Asn)
のアミノ酸配列からなるループ構造を構成するアミノ酸
配列またはその一部を、置換、追加または削除、(c)
FVII内の、304番目のアルギニン(304Arg)
から329番目のシステイン(329Cys)の介在アミ
ノ酸配列を構成するアミノ酸配列またはその一部を、置
換、追加または削除。
Description
させた血液凝固第VII因子(以下、FVIIと称する
ことがある)及び/または活性化血液凝固第VII因子
(以下、FVIIaと称することがある)の改変体に関
するものである。詳細には、本願発明は、FVIIに特
有なアミノ酸配列を、置換・欠損することにより、活性
が増強されたFVII/FVIIa改変体、当該改変体
を有効成分として含有する医薬品組成物、及び当該医薬
品組成物からなる血友病インヒビター患者の治療に有効
な薬剤に関するものである。
ンK依存性の血液凝固因子であり、外因系血液凝固の開
始因子であることは広く知られている。他のビタミンK
依存性凝固因子と同様にN末端から35残基までのアミ
ノ酸配列に10個のγカルボキシグルタミン酸(以下、
Glaと称することがある)からなるGla領域を有し
ている(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,
vol.83,p.2412−2416,1986)。FV
IIは、in vitroにおいて、活性化血液凝固第
X因子(以下、FXaと称することがある)、活性化血
液凝固第IX因子(以下、FIXaと称することがあ
る)またはトロンビン(以下、FIIaと称することが
ある)によって、152Arg−153Ileが加水分解さ
れ、一個のS−S結合で架橋されたH鎖とL鎖から構成
される活性型FVIIすなわちFVIIaに変換される
ことは知られている(J.Biol.Chem.,vol.
251,p.4797−4802,1976)。
補酵素である組織因子(TF)と結合すると劇的に上昇
する(Komiyama et al., Biochemistry, 29(40), pp.94
18-25(1990))。FVIIaとTFの1次構造、その複
合体の結晶構造、さらに両分子間の結合部位もアミノ酸
残基レベルで判明しているが、その触媒活性増幅機構の
詳細(TF結合に伴う立体構造変化)は依然として不明
である(Banner et al., , et al., Nature 380(6569):
pp.41-6(1996))。
法として、血液凝固第VIII因子(以下、FVIIIと称す
ることがある)及び血液凝固第IX因子(以下、FIX
と称することがある)製剤の投与が行なわれている。し
かし、当該治療法に伴いFVIII及びFIXに対する中
和抗体(インヒビターと呼ばれることもある)の出現が
問題視されている。
者の対処療法として、(1)FVIII因子の過剰投与、(2)
ブタFVIII因子の投与、(3)FII、FVII、FIX
及びFXからなる複合体製剤の投与、(4)FVIIa製
剤の投与などがある。しかしながらこれらの方法は、そ
れぞれ (1)については、より高力価なインヒビターの誘
導による症状悪化、(2)については、抗原性によるショ
ック、(3)については、血栓・DICの誘発、(4)につい
ては、治療効果が不十分であることや大量・頻回投与に
よりコストが高いなどの問題を抱えている。これらの中
で、効果と危険性のバランスを考慮した場合、最も効率
的なものは(4)のFVIIa製剤の投与である。しかし
ながら、FVIIa製剤はその活性の弱さのため、止血
効果を発揮するには、前述したように大量投与と頻回投
与を必要とし、治療コストを大きく高めている。また、
その治療効果も血友病患者に対して行われている従来の
補充療法に比べれば充分とはいえない。
素活性を上昇させたFVIIの改変体を作製することが
挙げられるが、これは一般的に困難であることが知られ
ている(タンパク質の構造入門、勝部幸輝ら監修、教育
社発行、1992年)。特に、血液凝固因子について、以下
の理由により改変による活性増強は困難と考えられてい
る。
的欠損に伴う活性低下と質的異常による活性低下の2つ
に分類される。このうち質的異常の多くは(ポイント)
ミューテーションであることが知られており、FIXの
異常である血友病Bの患者の解析が行われた結果、FI
Xの構造全域にわたって分子異常が存在することが明ら
かとなり、中にはたった1個のアミノ酸が置換されただ
けで、活性が1%以下になる例が多数ある。従って、血
液凝固因子についてむやみに改変を行っても、活性低下
を招くのは明らかである。
(Dickinson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93
(25), pp.14379-84(1996))によれば、FVIIの11
2個のAlanine置換体ついて、その中で酵素活性が上が
ったものは唯一1つであり、しかもその規則性は見いだ
されていない。
Xを構成する一部のドメインの数アミノ酸残基から構成
される構造単位を欠損・置換する方法を用い、合成基質
活性を上昇させたFIXフラグメント改変体を作製した
(EMBO J, 16(22), pp.6626-35(1997))。しかしなが
ら、これはインタクトなFIXではなく、FIXの部分
フラグメントを大腸菌で発現させたもので合成基質活性
を見ているに過ぎないため、血液凝固活性を増強しうる
どころか血液凝固活性すら有さないものである。さら
に、これはFIXに関するものであり、構造も特異性も
全く異なる別物質であるFVIIに対して何ら示唆する
ものではなく、FVIIの酵素活性を増強させた改変体
についても、これまで何ら報告はない。
の作製は、特に血液凝固因子においては困難と考えられ
ていた。FIXにおいて、その部分フラグメントについ
て合成基質活性を上げる試みはなされたものの、インタ
クトな分子として高い酵素活性を有する血液凝固因子の
改変体についてはこれまでも報告例はない。
に血液凝固因子の改変は困難と考えられている状況にお
いて、血友病インヒビター患者の治療に有効な強い活性
を有するFVII及び/またはFVIIaを作製・提供
することである。
て、本発明者らは、それ自身高い酵素活性を有するFV
IIを作製すべく鋭意研究を重ね種々の検討を行った結
果、本願発明を完成するに至った。本願発明は、FVI
Iと各種セリンプロテアーゼとアミノ酸配列構造を比較
し、FVIIに特有のアミノ酸配列部位を明確にし、そ
の特有な部位を、欠損・置換することにより、活性が増
強されたFVII及び/またはFVIIa改変体を作製
することに成功したものである。
テアーゼの基本構造は、約250残基からなり、アミノ
酸配列上でおよそ、その前半と後半の2つのドメインに
分けられる(図1)。各ドメイン内にはそれぞれ6本の
βストランドがあり、プロテアーゼとして計12本のβ
ストランドを有する構造で形成されている(図2)。こ
れら12本のβストランドはいわばセリンプロテアーゼ
の骨格構造となっており、各ストランド間をつなぐルー
プないし、ヘリックス領域が、その基質特異性やコファ
クターとの反応性などのプロテアーゼ活性を担っている
と考えられている。セリンプロテアーゼの例としては、
FII、FVII、FVIII、FIX、FX等の各種血
液凝固因子、プラスミン等の血栓溶解酵素、またはトリ
プシン、キモトリプシン、エラスターゼなどの消化酵素
がある。そこで、FVIIをはじめとする各種セリンプ
ロテアーゼのアミノ酸配列構造の比較を行い、FVII
に特徴的な領域を特定した(図3)。そして、これらの
部位を改変のターゲットとし、他のセリンプロテアーゼ
の構造を参考に、FVIIのアミノ酸配列を欠損・置換
することによって、高い酵素活性を有するFVII改変
体を作製した。これらの改変体について詳細に説明す
る。
れた改変体 (a−)159Cysと164CysをCys以外のアミノ
酸残基によって置換することにより、当該159Cys−1
64Cysが切断された改変体(VII−5)。この改変
体の具体例として、Cysをそれぞれアラニン(Al
a)に置換したものを配列表配列番号3または4に記載
した。ここで、置換に用いるCys以外のアミノ酸残基
の一例として、Alaを選択したが、置換によって、C
ys−Cys結合を切断すること以外に酵素活性を失活
させるなどの大きな障害を与えない限り、任意のアミノ
酸が選択可能である。
ノ酸残基によって置換し、かつ、299番目のヴァリン
(299Val)をCysに置換することにより、159Cy
s−164Cysが切断され、かつ159Cysと299Cys
間においてジスルフィド結合(159Cys−299Cys)
が形成された改変体(VII−6)。この改変体の具体
例として、Cys以外のアミノ酸残基としてAlaを用
いて置換したものを配列表配列番号5または6に記載し
た。ここで、置換に用いるCys以外のアミノ酸残基に
ついては上述の通り、置換によって159Cys−164Cy
s結合を切断すること以外に酵素活性を失活させるなど
の大きな障害を与えない限り、Ala以外の他のアミノ
酸が選択可能である。
ニン(233Thr)から240番目のアスパラギン(240
Asn)のアミノ酸配列からなるループ構造(以下、9
9−loopと称することもある)を構成するアミノ酸
配列またはその一部が、置換、追加または削除された改
変体。 この領域は、図3に示すようにセリンプロテアーゼに共
通に存在するβストランド5とβストランド6の間に介
在するアミノ酸配列を含むものである。この領域を他の
トリプシン族セリンプロテアーゼの構造上対応するアミ
ノ酸配列で置換することが好ましい。トリプシン族セリ
ンプロテアーゼの好適な一例として、ヒトトリプシンが
挙げられる。さらに、具体的な例として、FVIIの9
9−loop内の235番目のバリン(235Val)か
ら239番目のスレオニン(239Thr)までのアミノ
酸配列が、トリプシンのループ構造内にあるAsp−A
rg−Lys−Thr−Leuで置換された改変体(V
II−30)が挙げられる。この改変体を配列表配列番
号7または8に記載した。
ニン(304Arg)から329番目のシステイン(329C
ys)の介在アミノ酸配列を構成するアミノ酸配列また
はその一部が、置換、追加または削除された改変体。 特にこの領域は、図3に示すように、セリンプロテアー
ゼに共通に存在するβストランド8とβストランド9の
間に介在するアミノ酸配列において、FVIIは他のセ
リンプロテアーゼと比較して数アミノ酸残基長いという
特徴を有することから、FVII改変における好適なタ
ーゲットとなりうるものと推測される。この領域を、他
のトリプシン族セリンプロテアーゼの構造上対応するア
ミノ酸配列で置換することが好ましい。トリプシン族セ
リンプロテアーゼの好適な一例として、ヒトトリプシン
が挙げられる。また、FVII内の置換、追加、削除し
うる好ましい領域は、310番目のシステイン(310C
ys)から329番目のシステイン(329Cys)のア
ミノ酸配列からなるループ構造(170−loopと称
することもある)を構成するアミノ酸配列またはその一
部である。さらに、具体的な例として、FVIIの17
0−loop内の311番目のロイシン(311Leu)
から322番目のアスパラギン(322Asn)までのア
ミノ酸配列が、ヒトトリプシンのループ構造内にあるG
lu−Ala−Ser−Tyr−Pro−Gly−Ly
sで置換された改変体(VII−31)が挙げられる。
この改変体を配列表配列番号9または10に記載した。
宜組み合わせることも可能である。その具体例として、
例えば、(b)と(c)の組み合わせ、すなわち、FV
IIの99−loop内の235番目のバリン(235V
al)から239番目のスレオニン(239Thr)まで
のアミノ酸配列が、ヒトトリプシンのループ構造内にあ
るAsp−Arg−Lys−Thr−Leuで置換さ
れ、かつ、170−loop内の311番目のロイシン
(311Leu)から322番目のアスパラギン(322As
n)までのアミノ酸配列が、トリプシンのループ構造内
にあるGlu−Ala−Ser−Tyr−Pro−Gl
y−Lysで置換された改変体(VII−39)が挙げ
られる。この改変体を配列表配列番号11または12に
記載した。
て得ることができる。発現宿主としては、動物細胞等の
真核細胞が好ましい。本発明の改変体は、上記各改変体
のアミノ酸配列をコードするcDNAを適当な発現ベク
ターに組み込み、宿主細胞にトランスフェクトし、目的
の遺伝子を発現している細胞をクローニングし、得られ
た安定発現株を培養後、精製することにより得られる。
等を行い、活性化型FVII(FVIIa)改変体とし
て使用することができる。
は、治療、診断または他の用途のために製薬学的調合剤
に処方することができる。静脈内投与のための調合剤に
対しては、組成物を、通常、生理学的に適合しうる物
質、例えば塩化ナトリウム、グリシン等を含み、かつ生
理学的条件に適合しうる緩衝されたpHを有する水溶液
中に溶解する。また、長期安定性の確保の観点から、最
終的剤型として凍結乾燥製剤の形態をとることも考慮さ
れうる。なお、静脈内に投与される組成物のガイドライ
ンは政府の規則、例えば「生物学的製剤基準」によって
確立されている。本願発明のFVII/FVIIa改変
体からなる医薬品組成物の具体的な用途としては、FV
IIIまたはFIXの補充療法により当該血液凝固因子
に対してインヒビターを生じた血友病インヒビター患者
の治療が挙げられる。
実施例は本願発明を限定するものではない。本願発明に
ついて添付図面を参照して特定な実施例にて例示する。
実施例は改変体を動物細胞(CHO-K1)の培養上清中に発
現させたものである。以下特に断りが無い限り、遺伝子
組換えに関わる試薬等は、宝酒造、東洋紡、パーキンエ
ルマーアプライドNew England Biolabs 社の製品を用い
た。
ング》ヒト肝臓cDNAライブラリー(宝酒造)を購入
し、文献等(Molecular Basis of Thrombosia and Hemo
stasis)で公知のcDNA配列(配列表配列番号1に記
載)を基にSalIサイトを付加したFVII合成DNAセ
ンスプライマー(VII-PWN;GGGGTCGACATGGTCTCCCAGGCCC
TCAGGCTCCTCTGCCTTCTG)及び、BamHIサイトを付加した
アンチセンスプライマー(VII-PWC;CCCGGATCCCTAGGGAA
ATGGGGCTCGCAGGAGGACTCCTGGGCG)を用いてPCRを行
い、市販のクローニングベクターpCRII(Invitrogen
社)にクローニングした。この際、常法によりDNAシ
ークエンスを行い、文献等で公知の配列(Hagen FS et
al , PNAS 1986; 83; 2412-6)を有することを確認し
た。
製》発現ベクターpCAGn(特許第2824434号公
報)をSalI、BamHIで消化し、そこにFVIIをコード
した配列を含む上記実施例1で調製したDNAフラグメ
ントをSalI、BamHIでカットしたものをライゲーション
し、大腸菌JM105に形質転換し、アンピシリン含有のL
B寒天培地上で培養し、形質転換大腸菌を選択した。出
現したコロニーを市販の培地で一晩培養し、目的の発現
プラスミドを抽出精製し「pVII-W」を調製した。この発
現ベクターのDNAシークエンスを行い、目的の遺伝子
配列を有することを確認した。
図4に示すアミノ酸配列を有する各FVII改変体を、
以下の方法で作成した。なお図4は、FVIIの153
番目のイソロイシンよりC末側のアミノ酸配列のみ示し
たもので、152番目のアルギニンよりN末側のアミノ
酸については、いずれも改変は行っておらず野生型と同
じである。図5に示す合成DNAプライマーを用いてF
VII遺伝子を鋳型としてPCRを行いそれぞれの増幅
断片を得る。各増幅断片と、発現ベクターpCAGnをSalI
及びBamHIでカットしたものをライゲーションし、大腸
菌JM105に形質転換し、アンピシリン含有のLB寒天培
地上で培養し、形質転換大腸菌を選択した。出現したコ
ロニーを市販の培地で一晩培養し、目的の発現プラスミ
ドを抽出精製し「pVII-5」、「pVII-30」、及び「pVII-
31」を調製した(図6)。また、「pVII-6」について
は、図5に記載のプライマー及びを用いて得られた
遺伝子を鋳型にし、さらにプライマー及びを用いて
PCRを行うことにより得られた。また、「pVII-39」
については、プライマー及び(10)を用いて得られた遺
伝子を鋳型にし、さらにプライマー(11)及び(12)を用い
てPCRを行うことにより得られた。さらにDNAシー
クエンスを行い、これらのプラスミドが目的の配列を有
することを確認した。
及び精製》上記発現ベクターを、市販のリポフェクチン
試薬でCHO細胞に対して形質導入を行い、G418(1mg/
ml)で選択し、目的の遺伝子を発現している細胞を限外
希釈法によりクローニングした。FVII改変体の発現
の確認は、市販のFVIIに対するELISAキット
(アセラクロムFVII;Diagnostica Strago社)で行
った。得られた安定発現株を無血清培地(ASF104、味の
素、ペニシリン、ストレプトマイシン、20μg/mlビタミ
ンK、1mM酪酸)で培養し、抗ヒトFVIIモノクロー
ナル抗体カラムで精製した(特許第2824430号公
報)。平衡化・洗浄及び溶出は、平衡化・洗浄バッファ
ー(50mM Tris, pH 7.2, 0.1M NaCl, 50mM Benzamidine
-HCl, 2mM Ca2+)、溶出バッファー(50mM Tris, pH
7.2, 0.1MNaCl, 50mM Benzamidine-HCl, 10mM EDTA)を
用いて行った。純化された改変体をSDS−PAGE、
または市販のFVIIに対する抗体を用いて、ウエスタ
ンブロットを行い、FVII改変体であることを確認し
た。
各改変体の凝固活性は常法に従い、FVII欠乏血漿を
用いた凝固法で測定した。精製した各改変体を50〜5ng
/mlになるようにTris-BSAで希釈し、FVII欠乏血症
と等量混ぜ、37℃で3分加温後、再脂質化TF(トロン
ボプラスチン;Dade社)を等量添加し、凝固反応を開始
させた。凝固時間を測定し、標準曲線と希釈率より凝固
活性を求めた。凝固活性を蛋白濃度(Bradford法で測
定)当たりに換算し比活性を求めた結果を表1に記す。
その結果、本発明のFVII改変体は、血漿由来FVI
I及び野生型組換えFVIIと比較して、2〜6倍高い
凝固活性を有することが明らかとなった。
製》精製した各改変体を、50mM Tris, pH 7.45, 0.1M N
aClに透析し、FXaを1/100(モル比)加え、50mM Tri
s, pH 7.45, 0.1M NaCl, 0.1% PEG 8000, 100μg/mLリ
ン脂質(Platerin(登録商標) Organotecnica社)、 10m
M Ca2+、 37℃の条件下、1〜60分でインキュベーショ
ンし活性化した。活性化後、50mM Benzamidine-HClを加
えて反応を停止し、抗ヒトFVIIモノクローナル抗体
カラムで精製した(実施例4と同じ方法)。精製済みの
各活性化改変体はTBS pH 8.0(0.1% PEG 8000含有)に
透析し、-80℃に凍結保存した。活性化の程度は、SD
S−PAGEで確認した。
基質に対する水解活性測定》実施例6に従い活性化され
た改変体VIIa−31を0.1μMになるまで50mMTris-
HCl, 100mM NaCl,10mM Ca2+, 0.1% PEG 8000, pH 8.0で
希釈し、そこに種々の合成基質を最終濃度1.0mMになる
ように加え、最終容量を200μlとし、30℃で反応さ
せ、1分間当たりの基質の水解量を見た。温度制御が可
能な microplate reader Spectra max plus (Molecular
device社)でpNAの遊離を405nmによる発色度として測
定した。この結果を表2に示す。本発明の改変体の一つ
であるVIIa−31は、何れの合成基質を対しても野
生型(VIIa−W)より高い水解活性を示し、その範
囲は2〜23倍であった。
II及び/またはFVIIaの改変体は、野生型のFV
IIに比べて明らかに高い酵素活性を有するものであ
る。従って、本願発明の改変体は、血友病インヒビター
患者への補充療法として極めて有効な薬剤となりうるも
のである。
示す図。
列を基にしたセリンプロテアーゼの基本構造を示す図。
プロテアーゼ間の3Dマルチアライメントを示す図。
各種FVII改変体のアミノ酸配列の一部を示す図。本
図はFVIIの153番目のイソロイシンよりC末側の
アミノ酸配列のみ示したもので、152番目のアルギニ
ンよりN末側のアミノ酸配列についてはいずれも改変は
行っておらず野生型と同じである。
図。
す図。
Claims (18)
- 【請求項1】 下記から選択される少なくとも一つの改
変を含むことを特徴とする血液凝固第VII因子(以
下、FVII)または活性化型血液凝固第VII因子
(以下、FVIIa)の改変体。 (a)FVII内の、159番目のシステイン(159C
ys)と164番目のシステイン(164Cys)からな
るジスルフィド結合(159Cys−164Cys)を切断す
る。 (b)FVII内の、233番目のスレオニン(233T
hr)から240番目のアスパラギン(240Asn)の
アミノ酸配列からなるループ構造(以下、99−loo
pと称することもある)を構成するアミノ酸配列または
その一部を、置換、追加または削除する。 (c)FVII内の、304番目のアルギニン(304A
rg)から329番目のシステイン(329Cys)の介
在アミノ酸配列を構成するアミノ酸配列またはその一部
を、置換、追加または削除する。 - 【請求項2】 上記159Cysと164CysをCys以外
のアミノ酸残基によって置換することにより、当該159
Cys−164Cysが切断されることを特徴とする請求
項1に記載の改変体。 - 【請求項3】 配列表配列番号4記載のアミノ酸配列か
らなる請求項1または2に記載の改変体。 - 【請求項4】 164CysをCys以外のアミノ酸残基
によって置換し、かつ、299番目のバリン(299Va
l)をCysに置換することにより、159Cys−164C
ysが切断され、かつ159Cysと299Cys間において
ジスルフィド結合(159Cys−299Cys)が形成され
ることを特徴とする請求項1に記載の改変体。 - 【請求項5】 配列表配列番号6記載のアミノ酸配列か
らなる請求項1または4に記載の改変体。 - 【請求項6】 FVIIの99−loopのアミノ酸配
列が、他のトリプシン族セリンプロテアーゼの構造上対
応するアミノ酸配列で置換されることを特徴とする請求
項1に記載の改変体。 - 【請求項7】 他のトリプシン族セリンプロテアーゼが
ヒトトリプシンである請求項1または6に記載の改変
体。 - 【請求項8】 FVIIの99−loop内の235番
目のバリン(235Val)から239番目のスレオニン
(239Thr)までのアミノ酸配列が、ヒトトリプシン
の構造上対応するループ構造内にあるAsp−Arg−
Lys−Thr−Leuで置換されることを特徴とする
請求項1、6または7に記載の改変体。 - 【請求項9】 配列表配列番号8記載のアミノ酸配列か
らなる請求項1または6から8のいずれかに記載の改変
体。 - 【請求項10】 FVII内の、304番目のアルギニ
ン(304Arg)から329番目のシステイン(329Cy
s)の介在アミノ酸配列を構成するアミノ酸配列または
その一部が、他のトリプシン族セリンプロテアーゼの構
造上対応するアミノ酸配列で置換されることを特徴とす
る請求項1に記載の改変体。 - 【請求項11】 他のトリプシン族セリンプロテアーゼ
がヒトトリプシンである請求項1または10に記載の改
変体。 - 【請求項12】 FVII内の、310番目のシステイ
ン(310Cys)から329番目のシステイン(329Cy
s)の介在アミノ酸配列(以下、170−loopと称
することもある)を構成するアミノ酸配列またはその一
部が、置換、追加または削除される請求項1、10また
は11に記載の改変体。 - 【請求項13】 FVIIの170−loop内の31
1番目のロイシン(311Leu)から322番目のアス
パラギン(322Asn)までのアミノ酸配列が、ヒトト
リプシンの構造上対応するループ構造内にあるGlu−
Ala−Ser−Tyr−Pro−Gly−Lysで置
換されることを特徴とする請求項1または10から12
のいずれかに記載の改変体。 - 【請求項14】 配列表配列番号10記載のアミノ酸配
列からなる請求項1または10から13のいずれかに記
載の改変体。 - 【請求項15】 FVIIの99−loop内の235
番目のバリン(235Val)から239番目のスレオニ
ン(239Thr)までのアミノ酸配列が、ヒトトリプシ
ンの構造上対応するループ構造内にあるAsp−Arg
−Lys−Thr−Leuで置換され、かつ、170−
loop内の311番目のロイシン(311Leu)から
322番目のアスパラギン(322Asn)までのアミノ
酸配列が、ヒトトリプシンの構造上対応するループ構造
内にあるGlu−Ala−Ser−Tyr−Pro−G
ly−Lysで置換されることを特徴とする請求項1に
記載の改変体。 - 【請求項16】 配列表配列番号12記載のアミノ酸配
列からなる請求項1または15に記載の改変体。 - 【請求項17】 請求項1から16のいずれかに記載の
改変体を有効成分として含有する医薬品組成物。 - 【請求項18】 請求項17の医薬品組成物からなる血
友病インヒビター患者の治療に有効な薬剤。
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