JP2000503684A - 野菜抽出物、その製造方法およびヒト用または動物用医薬における利用 - Google Patents
野菜抽出物、その製造方法およびヒト用または動物用医薬における利用Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、次の工程、a)野菜物質をパルプになるまで圧搾し;b)得たパルプを水また有機溶媒で冷処理または熱処理し;c)一定の濃度を得るまで溶媒を除去し;d)得た抽出物を1以上の下記方法によって選択的にさらに精製する:熱凝固法、硫酸アンモニウムでの精製、沈降、ゲルまたはイオン交換樹脂のクロマトグラフィーを含む方法によって得られる生物活性植物抽出物に関する。
Description
【発明の詳細な説明】
野菜抽出物、その製造方法およびヒト用または動物用医薬における利用
本発明は、新規の野菜抽出物、その製造方法およびそのバイオテクノロジーお
よび医療における利用、特に細胞生長または生物阻害因子としての活性に基づく
利用に関する。
植物はしばしば予期しない薬効あるいはその活性成分を有する。癌などの特に
処置の難しい疾患の処置のために、植物は医薬の有力な供給源である。
本発明において、予想外にも、植物、特に糖質、タンパク質、糖タンパク質お
よびテルペンを含有する野菜から生物活性がある抽出物が得られることが見出さ
れた。この目的のために、ジャガイモ、ラディッシュ、カブ、ビート、ニンジン
、キクイモ、サツマイモ、セイヨウアブラナ、キュウリ、カボチャ、ズッキーニ
、トマトなどの野菜を用いることができる。
本発明の抽出物は次の連続相に従ってつくられる。
−選択した野菜をパルプ(どろどろ状態のもの)になるまで圧搾し;
−得たパルプを水また有機溶媒で冷処理または熱処理し;
−一定の濃度を得るまで溶媒を蒸発し;
−得た抽出物を1以上の下記方法によって選択的にさらに精製する:熱凝固法、
硫酸アンモニウムでの精製、沈降、ゲルまたはイオン交換樹脂のクロマトグラフ
ィー。
一定の活性を有する3種のフラクションを得ることができる。抽出方法につい
ては、BIOMEDIA社の名前のフランス特許出願FR−A−2 732 3
47にすでに記載されている。この出願の内容を本明細書に合体する。
本明細書によって、抽出物をさらに精製すると、分子量5,000、7,500
、10,000、12,000、15,000、20,000、30,000、40,
000、65,000、82,000、105,000、130,000、180,
000、200,000、220,000、250,000ダルトンを有する糖質
、タンパク質、糖タンパク質、テルペンおよびペプチド型の16種の分子が得ら
れ
る。これらの分子はすべて水によく溶ける。
これらの分子は、QハイパーDTM20−ゲルのクロマトグラフィーによって
抽出物をさらに精製することによって得られ、それによって0.09M、0.15
M、0.21M、0.25M、0.32M、0.45M、0.52M、0.70M、0
.78M、0.85M、1.02M NaClで溶出する11種の分子が得られる。
カラム溶出液において、QMAゲルの第2カラム・クロマトグラフィーによっ
てさらに精製される低分子成分が含まれる。5種のフラクションが0.05M、
0.08M、0.12M、0.20Mおよび0.27M NaClで溶出する。
この方法において得られた16種の成分について、実施例に記載のように活性
が測定された。
実施例記載の毒性試験および薬理試験から、本発明の化合物は毒性がなく、顕
著な性質を有することが分かる。
マイトジェン活性を有する本発明の14種の分子は各々、種々な濃度で様々な
目的に用いられる。例えば、研究または診断用の培地の製造に、ヒト用または動
物用医薬としての化合物あるいはワクチンの製造に、あるいは化粧品として用い
られる。
微生物の増殖を促進する5種の分子は、ヒトまたは動物医学、化粧品あるいは
農業についての微生物または化合物を製造するために、醗酵培養の分野で有利に
用いることができる。
代謝に対する作用を有する3種の分子は、体重低下または増加、あるいは微生
物学的診断におけるヒトまたは動物医学で、有利に投与することができる。
細胞阻害活性を有する2種の分子は、その細胞静止能力によって抗腫瘍剤また
は抗癌剤として投与することができる。
本発明を下記の非制限的実施例によってさらに説明する。実施例
実施例1活性物質の単離
新鮮な傷んでいないカボチャ1000gを細かいピューレが得られるように砕
く。得たピューレを2時間冷水500gで処理する。得たペースト(E1)を遠
心分離か濾過の処理をして、パルプ(E2)を採取する。
得た抽出物をアルコール、カプリン酸、酢酸および硫酸アンモニウムの存在下
に熱凝固法によって精製する。遠心分離によって上澄み液を再取し、特定の塩を
除外するために限外濾過を行い、そして正しい濃度の濾過液を得る。
得た濃縮物についてQハイパーDTM20−ゲルのクロマトグラフィー精製を
行い、0.09M、0.15M、0.21M、0.25M、0.32M、0.45M、
0.52M、0.70M、0.78M、0.85M、1.02M NaClで溶出する
11種の分子を得る。その溶出濃度に基づく種々のフラクションについて言及す
る。
カラムが充填されているとき、低分子量のものが存在する。これらはQMA−
ゲルの第2カラムで精製され、0.05M、0.08M、0.12M、0.20Mお
よび0.27M NaClで溶出される。
実施例2活性
実施例1で単離された分子は、QハイパーDTM20−ゲルの0.32Mで、
およびQMA−ゲルの0.12Mで単離された分子を除きすべてのヒトおよび動
物の細胞について高いマイトジェン能を発揮した。これらの2種の分子は顕著な
細胞生長阻害活性を有する。
実施例3毒性試験
インビトロおよびインビボの試験で、本発明の活性成分は低い毒性と優れた耐
容性を示した。
インビトロでの細胞毒性は中性レッドおよびMTTを用いて測定された。60
0μg/ml量で、培養基に毒性は検出されなかった。
次のインビボ試験を実施した。マイトジェン活性を示すすべての分子をマウス
で試験した。この試験で毒性は存在しなかった。これらの各分子の100g/l溶
液0.5m1を24匹の雄マウスと24匹の雌マウスの2群に腹腔内投与したとこ
ろ、7日後で何ら死亡は認められなかった。
細胞生長を阻害する分子について同量で同じ試験を行った。実験の開始時にお
いて平均体重損失は3−4%見られた。これは雌および雄の両方であった。注射
4から5日後に、マウスは正常体重を回復し、これは本発明の分子に毒性のない
ことを示している。
実施例4薬理試験
薬理試験の結果は本発明の活性成分の顕著な性質を示す。1. マイトジェン活性
CRFK−およびVERO−細胞について試験は行われ、6ウエルおよびHA
MF12培地を有するNUNCプレートを用いた。
培地に200,000細胞/mlを分散せしめた。各分子は細胞培養基において
、HAMF12およびHAMF12+10%ウシ胎児血清(FCS)のみからな
るコントロールと比較して0.025g/l−4g/lの間の用量で試験した。
各分子について、活性に関する最適濃度範囲を測定した。平均活性は0.05
g/l−0.05g/lであった。
細胞増殖の割合は試験分子によって3−5の範囲で認められた。すなわち出発
量200,000細胞/mlについて、600,000−1,000,000細胞/ml
が形成される。増殖割合はSVF細胞で得られた値:900,000−1,000
,000細胞/mlに匹敵する。
本発明分子のマイトジェン能は、ATCCまたはプリモ−カルチャー、動物、
成熟核、ヒトまたは二倍体細胞についての120以上の細胞系で順次試験された
。
細胞系についての活性に加えて、0.09M、0.15M、0.70M、0.85
Mおよび1.02Mで溶出された分子がかなりの増殖能を同様に示す。
Lactobacillusについて行われた試験によると、コントロールに比して24時間
で30%のバイオマスが増加する。2. 阻害活性
同じ条件で実施された試験において、QハイパーDTM20−カラムの0.3
2Mで、およびQMA−カラムの0.12Mで溶出された分子は、0.5g/l−
1g/lの用量で細胞増殖の全阻害をもたらした。
これらの2種の分子は、NCJが必要とする腫瘍細胞(62株)の完全なパネ
ルの生長を同様に阻害した。3. インビボにおける代謝に対する作用
この試験は、QハイパーDTM20−カラムの0.21Mおよび0.45Mで、
およびQAMカラムの0.20Mで溶出された分子について行った。24匹の雄
マウス群と24匹の雌マウス群に、試験をする分子の100g/l溶液0.5m1
を与えた。
本発明の分子は雄および雌の両群においてコントロール群に比して8.25%
の平均体重増加を起こした。なお、コントロール群は100g/l塩化ナトリウ
ム0.5m1のみが注射された。
【手続補正書】
【提出日】1999年4月9日(1999.4.9)
【補正内容】
I.明細書
(1)1頁4行、「生物阻害因子」とあるを「生長阻害因子」と訂正する。
(2)4頁末行、「NCJ」とあるを「NCI」と訂正する。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考)
C12N 5/06 C12N 5/00 E
(81)指定国 EP(AT,BE,CH,CY,
DE,DK,ES,FI,FR,GB,GR,IE,I
T,LU,MC,NL,PT,SE),OA(BF,BJ
,CF,CG,CI,CM,GA,GN,ML,MR,
NE,SN,TD,TG),AP(GH,GM,KE,L
S,MW,SD,SZ,UG,ZW),UA(AM,AZ
,BY,KG,KZ,MD,RU,TJ,TM),AL
,AM,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BR,
BY,CA,CH,CN,CU,CZ,DE,DK,E
E,ES,FI,GB,GE,GH,GM,GW,HU
,ID,IL,IS,JP,KE,KG,KP,KR,
KZ,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LV,M
D,MG,MK,MN,MW,MX,NO,NZ,PL
,PT,RO,RU,SD,SE,SG,SI,SK,
SL,TJ,TM,TR,TT,UA,UG,US,U
Z,VN,YU,ZW
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.次の工程、 a)選択した野菜をパルプ(どろどろ状態のもの)になるまで圧搾し; b)得たパルプを水また有機溶媒で冷処理または熱処理し; c)一定の濃度を得るまで溶媒を蒸発し; d)得た抽出物を1以上の下記方法によって選択的にさらに精製する:熱凝固法 、硫酸アンモニウムでの精製、沈降、ゲルまたはイオン交換樹脂のクロマトグラ フィー を含む方法によって得られる生物活性植物抽出物。 2.ジャガイモ、ラディッシュ、カブ、ビート、ニンジン、キクイモ、サツマ イモ、セイヨウアブラナ、キュウリ、カボチャ、ズッキーニ、トマトから選択さ れる野菜より得られる、請求項1の抽出物。 3.請求項1または2の抽出物をさらにQハイパーDTM20クロマトグラフ ィーカラムで精製し、カラムを溶出し、次いで溶出液の一定の濃度で溶出するフ ラクションを採取することにより得られる生物活性化合物。 4.0.09M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 5.0.15M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 6.0.21M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 7.0.25M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 8.0.32M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 9.0.45M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 10.0.52M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 11.0.70M NaC1で溶出する、請求項3の生物活性化合物。 12.0.78M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 13.0.85M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 14.1.02M NaClで溶出する、請求項3の生物活性化合物。 15.請求項1または2の抽出物をQハイパーDTM20−ゲルクロマトグラ フィーカラムにかけ、次いでその溶出液をさらにQMA−ゲルクロマトグラフィ ーカラムで精製し、溶出液の一定の濃度で溶出するフラクションを採取すること により得られる生物活性化合物。 16.0.05M NaClで溶出する、請求項15の生物活性化合物。 17.0.08M NaClで溶出する、請求項15の生物活性化合物。 18.0.12M NaClで溶出する、請求項15の生物活性化合物。 19.0.20M NaClで溶出する、請求項15の生物活性化合物。 20.0.27M NaClで溶出する、請求項15の生物活性化合物。 21.成熟核細胞についてのマイトジェンとしての使用のための請求項4−7 、9−14、16、17、19および20の生物活性化合物。 22.生物生長阻害剤としての使用のための請求項8および18の生物活性化 合物。 23.代謝促進剤としての使用のための請求項6、9および19の生物活性化 合物。 24.微生物についてのマイトジェンとしての使用のための請求項4、5、1 1、13および14の生物活性化合物。 25.成熟核細胞についてのマイトジェンとしての使用のための請求項4−7 、9−14、16、17、19および20の1以上の生物活性化合物の組み合せ 。 26.細胞生長阻害剤としての使用のための請求項8および18の1以上の生 物活性化合物の組み合せ。 27.微生物についてのマイトジェンとしての使用のための請求項4、5、1 1、13および14の1以上の生物活性化合物の組み合せ。 28.方法が a)選択した野菜をパルプ(どろどろ状態のもの)になるまで圧搾し; b)得たパルプを水また有機溶媒で冷処理または熱処理し; c)一定の濃度を得るまで溶媒を蒸発し; d)得た抽出物を1以上の下記方法によって選択的にさらに精製する:熱凝固法 、硫酸アンモニウムでの精製、沈降、ゲルまたはイオン交換樹脂のクロマトグラ フィー を含み、細胞生長に影響を与える生物活性を有する野菜抽出物の製造方法。 29.a)得たパルプの処理を冷水で実施し、 b)得た物質を遠心分離または濾過によって濃縮し、 c)熱凝固法をアルコール、カプリン酸、酢酸および硫酸アンモニウムの存在下 で行い、 d)得た抽出物を遠心分離し、 e)上澄液を限外濾過にかけて抽出物を得ること を特徴とする、請求項28の方法。 30.抽出物をさらにQハイパーDTM−20ゲルのクロマトグラフィー分離 にかけ、カラムを勾配NaClで溶出する、請求項28または29の方法。 31.抽出物をさらにQハイパーDTM−20ゲルのクロマトグラフィー分離 にかけ、次いでその溶出液をQMA−ゲルのカラムでクロマトグラフィー分離を 行い、カラムを勾配NaC1で溶出する、請求項28または29の方法。 32.少なくとも1つの次の成分: 請求項1または2の抽出物、3−24の生物活性化合物、または請求項25−2 7の組み合せを含むヒトまたは動物への医療的使用。 33.少なくとも1つの次の成分:請求項1または2の抽出物、請求項3−2 4の生物活性化合物、または請求項25−27の組み合せを有する培養基。
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