JP2000166541A - ヒト未分化造血幹細胞およびその分離方法ならびに分離装置 - Google Patents
ヒト未分化造血幹細胞およびその分離方法ならびに分離装置Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 安価、短時間の簡便な操作で、ヒト未分化造
血幹細胞を得ることができる分離方法および装置を提供
する。 【解決手段】 有核細胞を実質的に捕捉し、赤血球を実
質的に通過するフィルターにヒト未分化造血幹細胞含有
液を導入し、次に、該フィルターに液体を導入して、フ
ィルターに捕捉されているヒト未分化造血細胞を回収す
る。
血幹細胞を得ることができる分離方法および装置を提供
する。 【解決手段】 有核細胞を実質的に捕捉し、赤血球を実
質的に通過するフィルターにヒト未分化造血幹細胞含有
液を導入し、次に、該フィルターに液体を導入して、フ
ィルターに捕捉されているヒト未分化造血細胞を回収す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトの未分化造血
幹細胞および該細胞を分離する方法ならびに分離装置に
関する。得られたヒト未分化造血幹細胞は、造血幹細胞
移植療法等、細胞を用いて行う各種疾病の治療および免
疫学や細胞生物学等の基礎科学分野で用いることが可能
となる。
幹細胞および該細胞を分離する方法ならびに分離装置に
関する。得られたヒト未分化造血幹細胞は、造血幹細胞
移植療法等、細胞を用いて行う各種疾病の治療および免
疫学や細胞生物学等の基礎科学分野で用いることが可能
となる。
【０００２】
【従来の技術】従来、ヒト造血幹細胞の表面マーカーと
しては、ＣＤ３４抗原が一般に知られており、ＣＤ３４
抗原陽性細胞集団の中でも、ＣＤ３８抗原陰性かつ分化
抗原陰性細胞がより未分化とされていた（特開平５−７
６３５４）。ところが、近年、マウスではＣＤ３４陰性
細胞がより未分化であるという報告が相次ぎ（例えば、
第５７回日本血液学会総会、演題番号４９０、１９９５
年）、また、さらに最近では、ヒトにおいてもより未分
化な造血幹細胞はＣＤ３４陰性であるという報告が散見
されるようになった（例えば、Ｇｏｏｄｅｌｌ，ｅｔａ
ｌ：ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，Ｎ
ｏ．１２，１９９７、Ｚａｎｊａｎｉ，ｅｔａｌ：Ｅｘ
ｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．ｖｏｌ．２６，１９９８）。これ
らの報告では、ＣＤ３４抗原陰性細胞（より詳細にはＣ
Ｄ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化抗原陰
性、以下、ＣＤ４５+ＣＤ３４-Ｌｉｎ-と略す）の分離
には、特殊なセルソーティング装置と特殊な蛍光染料お
よび／または数多くのモノクローナル抗体を用いてお
り、多大なコスト、時間を要し、かつ操作も非常に煩雑
なもので、実用レベルからはほど遠いものであった。
しては、ＣＤ３４抗原が一般に知られており、ＣＤ３４
抗原陽性細胞集団の中でも、ＣＤ３８抗原陰性かつ分化
抗原陰性細胞がより未分化とされていた（特開平５−７
６３５４）。ところが、近年、マウスではＣＤ３４陰性
細胞がより未分化であるという報告が相次ぎ（例えば、
第５７回日本血液学会総会、演題番号４９０、１９９５
年）、また、さらに最近では、ヒトにおいてもより未分
化な造血幹細胞はＣＤ３４陰性であるという報告が散見
されるようになった（例えば、Ｇｏｏｄｅｌｌ，ｅｔａ
ｌ：ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，Ｎ
ｏ．１２，１９９７、Ｚａｎｊａｎｉ，ｅｔａｌ：Ｅｘ
ｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．ｖｏｌ．２６，１９９８）。これ
らの報告では、ＣＤ３４抗原陰性細胞（より詳細にはＣ
Ｄ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化抗原陰
性、以下、ＣＤ４５+ＣＤ３４-Ｌｉｎ-と略す）の分離
には、特殊なセルソーティング装置と特殊な蛍光染料お
よび／または数多くのモノクローナル抗体を用いてお
り、多大なコスト、時間を要し、かつ操作も非常に煩雑
なもので、実用レベルからはほど遠いものであった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、安価、短時
間の簡便な操作で、ヒト未分化造血幹細胞を得られる方
法を提供することを目的とする。
間の簡便な操作で、ヒト未分化造血幹細胞を得られる方
法を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる問
題点を解決するため鋭意検討を行った。ここで、本発明
者らは、当該分野での常套手段であり前述の先行例にお
いても採用されている、表面抗原による分離技術を採用
するのでは、本課題の達成は困難であると判断し、全く
新しい技術手段による解決を試みた。すなわち、目的と
するヒト未分化造血幹細胞の性状、特に細胞の材料への
捕捉挙動に着目し、該細胞は有核細胞一般に共通した捕
捉挙動を有するものの、脱着挙動は通常の有核細胞に比
し、はるかに高い（脱着し易い）のではないかという仮
定のもと種々検討を重ねた結果、有核細胞を捕捉するフ
ィルターで目的とするヒト未分化造血幹細胞をきわめて
高率に分離できるという驚くべき効果を見出し、本発明
に至ったものである。
題点を解決するため鋭意検討を行った。ここで、本発明
者らは、当該分野での常套手段であり前述の先行例にお
いても採用されている、表面抗原による分離技術を採用
するのでは、本課題の達成は困難であると判断し、全く
新しい技術手段による解決を試みた。すなわち、目的と
するヒト未分化造血幹細胞の性状、特に細胞の材料への
捕捉挙動に着目し、該細胞は有核細胞一般に共通した捕
捉挙動を有するものの、脱着挙動は通常の有核細胞に比
し、はるかに高い（脱着し易い）のではないかという仮
定のもと種々検討を重ねた結果、有核細胞を捕捉するフ
ィルターで目的とするヒト未分化造血幹細胞をきわめて
高率に分離できるという驚くべき効果を見出し、本発明
に至ったものである。
【０００５】すなわち、本発明は、有核細胞を実質的に
捕捉し、赤血球を実質的に通過するフィルターから回収
された、ＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分
化抗原陰性のヒト未分化造血幹細胞であり、また、本発
明は、有核細胞を実質的に捕捉し、赤血球を実質的に通
過するフィルターにＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４陰性
かつ分化抗原陰性の有核細胞を含む有核細胞含有液を導
入し、次に該フィルターに液体を導入して該フィルター
に捕捉されているＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰
性かつ分化抗原陰性の有核細胞を回収するヒト未分化造
血幹細胞の分離方法であり、また、本発明は、ＣＤ４５
抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化系統陰性のヒト
未分化造血幹細胞を分離回収する装置であって、液体流
入口と液体流出口を有する容器に多孔質構造体からなる
有核細胞捕捉材が充填されたフィルターであるヒト未分
化造血幹細胞分離装置である。
捕捉し、赤血球を実質的に通過するフィルターから回収
された、ＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分
化抗原陰性のヒト未分化造血幹細胞であり、また、本発
明は、有核細胞を実質的に捕捉し、赤血球を実質的に通
過するフィルターにＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４陰性
かつ分化抗原陰性の有核細胞を含む有核細胞含有液を導
入し、次に該フィルターに液体を導入して該フィルター
に捕捉されているＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰
性かつ分化抗原陰性の有核細胞を回収するヒト未分化造
血幹細胞の分離方法であり、また、本発明は、ＣＤ４５
抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化系統陰性のヒト
未分化造血幹細胞を分離回収する装置であって、液体流
入口と液体流出口を有する容器に多孔質構造体からなる
有核細胞捕捉材が充填されたフィルターであるヒト未分
化造血幹細胞分離装置である。
【０００６】以下本発明を詳細に説明する。本発明で言
う有核細胞とは、細胞内に核を有する細胞のことを言
い、具体的には白血球、顆粒球、好中球、好酸球、好塩
基球、骨髄球、赤芽球、リンパ球、Ｔリンパ球、Ｂリン
パ球、単球、造血幹細胞、造血前駆細胞等があげられ
る。
う有核細胞とは、細胞内に核を有する細胞のことを言
い、具体的には白血球、顆粒球、好中球、好酸球、好塩
基球、骨髄球、赤芽球、リンパ球、Ｔリンパ球、Ｂリン
パ球、単球、造血幹細胞、造血前駆細胞等があげられ
る。
【０００７】また、本発明で言う有核細胞を実質的に捕
捉し、赤血球を実質的に通過するフィルターとは、例え
ば、有核細胞は実質的に捕捉し、赤血球は実質的に通過
する材料を液体流入口と液体流出口を有する容器に充填
したものがあげられる。有核細胞は実質的に捕捉し、赤
血球は実質的に通過する材料は、通常用いられている細
胞捕捉材であればいかなる材料も使用できるが、成形
性、滅菌性や細胞毒性が低いという点で好ましいものを
例示すると、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピ
レン、ポリスチレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリカ
ーボネート、ポリウレタン等の合成高分子、セルロー
ス、酢酸セルロース、キチン、キトサンアルギン酸塩等
の天然高分子、ハイドロキシアパタイト、ガラス、アル
ミナ、チタニア等の無機材料、ステンレス、チタン、ア
ルミニウム等の金属があげられる。
捉し、赤血球を実質的に通過するフィルターとは、例え
ば、有核細胞は実質的に捕捉し、赤血球は実質的に通過
する材料を液体流入口と液体流出口を有する容器に充填
したものがあげられる。有核細胞は実質的に捕捉し、赤
血球は実質的に通過する材料は、通常用いられている細
胞捕捉材であればいかなる材料も使用できるが、成形
性、滅菌性や細胞毒性が低いという点で好ましいものを
例示すると、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピ
レン、ポリスチレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリカ
ーボネート、ポリウレタン等の合成高分子、セルロー
ス、酢酸セルロース、キチン、キトサンアルギン酸塩等
の天然高分子、ハイドロキシアパタイト、ガラス、アル
ミナ、チタニア等の無機材料、ステンレス、チタン、ア
ルミニウム等の金属があげられる。
【０００８】これらの捕捉材は、このままでも用いるこ
とができるが、細胞の選択的通過性を高める等の目的で
必要に応じ表面改質を施したものでもよい。例えば、血
小板通過性を高めるには、ＷＯ８７／０５８１２公報で
提案されている非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基
を有するポリマーのコートによる方法等があげられる。
とができるが、細胞の選択的通過性を高める等の目的で
必要に応じ表面改質を施したものでもよい。例えば、血
小板通過性を高めるには、ＷＯ８７／０５８１２公報で
提案されている非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基
を有するポリマーのコートによる方法等があげられる。
【０００９】捕捉材の形状としては、粒状、繊維塊、織
布、不織布、スポンジ状多孔質体、平板等があげられる
が、体積あたりの表面積が大きいという点で、粒状、繊
維塊、織布、不織布、スポンジ状多孔質体が好ましく、
また、製造性、流れ性の点から不織布とスポンジ状多孔
質体がより好ましい。不織布の場合、通常、繊維径は
１．０μｍ以上３０μｍ以下であり、好ましくは１．０
μｍ以上２０μｍ以下であり、さらにより好ましくは
１．５μｍ以上１０μｍ以下である。１．０μｍ未満で
は、目的細胞であるＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原
陰性かつ分化抗原陰性のヒト未分化造血幹細胞が強固に
捕捉されてしまい、回収困難となる可能性があり好まし
くない。３０μｍを超えると、ＣＤ４５抗原陽性かつＣ
Ｄ３４抗原陰性かつ分化抗原陰性のヒト未分化造血幹細
胞は不織布に捕捉されず素通りする可能性が高くなる。
いずれの場合でも回収率の低下につながるおそれがある
ので好ましくない。また、スポンジ状構造体の場合、孔
径は通常２．０μｍ以上３０μｍ以下であり、好ましく
は２．５μｍ以上２５μｍ以下であり、さらにより好ま
しくは３．０μｍ以上２０μｍ以下である。２．０μｍ
未満では流れ性が著しく劣り、通液自体が困難になるお
それがあり、また、２５μｍを超えるとＣＤ４５抗原陽
性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化抗原陰性のヒト未分化
造血幹細胞の捕捉率の低下を招くので好ましくない。
布、不織布、スポンジ状多孔質体、平板等があげられる
が、体積あたりの表面積が大きいという点で、粒状、繊
維塊、織布、不織布、スポンジ状多孔質体が好ましく、
また、製造性、流れ性の点から不織布とスポンジ状多孔
質体がより好ましい。不織布の場合、通常、繊維径は
１．０μｍ以上３０μｍ以下であり、好ましくは１．０
μｍ以上２０μｍ以下であり、さらにより好ましくは
１．５μｍ以上１０μｍ以下である。１．０μｍ未満で
は、目的細胞であるＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原
陰性かつ分化抗原陰性のヒト未分化造血幹細胞が強固に
捕捉されてしまい、回収困難となる可能性があり好まし
くない。３０μｍを超えると、ＣＤ４５抗原陽性かつＣ
Ｄ３４抗原陰性かつ分化抗原陰性のヒト未分化造血幹細
胞は不織布に捕捉されず素通りする可能性が高くなる。
いずれの場合でも回収率の低下につながるおそれがある
ので好ましくない。また、スポンジ状構造体の場合、孔
径は通常２．０μｍ以上３０μｍ以下であり、好ましく
は２．５μｍ以上２５μｍ以下であり、さらにより好ま
しくは３．０μｍ以上２０μｍ以下である。２．０μｍ
未満では流れ性が著しく劣り、通液自体が困難になるお
それがあり、また、２５μｍを超えるとＣＤ４５抗原陽
性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化抗原陰性のヒト未分化
造血幹細胞の捕捉率の低下を招くので好ましくない。
【００１０】有核細胞は実質的に捕捉し赤血球は実質的
に通過する材料を充填する容器の材質としては、成型
性、滅菌性や細胞毒性が低いという点で好ましいものを
例示すると、ポリエチレン、ポリプリロピレン、ポリス
チレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリ
カーボネート、ポリアクリルアミド、ポリウレタン、塩
化ビニル等の合成高分子、ハイドロキシアパタイト、ガ
ラス、アルミナ、チタニア等の無機材料、ステンレス、
チタン、アルミニウム等の金属があげられる。
に通過する材料を充填する容器の材質としては、成型
性、滅菌性や細胞毒性が低いという点で好ましいものを
例示すると、ポリエチレン、ポリプリロピレン、ポリス
チレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリ
カーボネート、ポリアクリルアミド、ポリウレタン、塩
化ビニル等の合成高分子、ハイドロキシアパタイト、ガ
ラス、アルミナ、チタニア等の無機材料、ステンレス、
チタン、アルミニウム等の金属があげられる。
【００１１】本発明で言う「有核細胞を実質的に捕捉
し」とは、有核細胞含有液中の有核細胞を６０％以上捕
捉することを言い、また、「赤血球を実質的に通過す
る」とは、有核細胞含有液中の赤血球を６０％以上通過
することを言う。また、本発明で言う有核細胞含有液と
は、例えば、骨髄、臍帯血（臍帯血管だけでなく胎盤血
管から採取されたものも含む）、末梢血（顆粒球コロニ
ー刺激因子等の造血因子を投与して採血されたものも含
む）およびこれらに遠心分離等何らかの処理を施したも
のがあげられる。なお、本発明者らの経験では、臍帯血
を比重遠心により単核球画分としたものが良い結果が得
られている。また、何らかの処理とは凍結解凍も含む。
し」とは、有核細胞含有液中の有核細胞を６０％以上捕
捉することを言い、また、「赤血球を実質的に通過す
る」とは、有核細胞含有液中の赤血球を６０％以上通過
することを言う。また、本発明で言う有核細胞含有液と
は、例えば、骨髄、臍帯血（臍帯血管だけでなく胎盤血
管から採取されたものも含む）、末梢血（顆粒球コロニ
ー刺激因子等の造血因子を投与して採血されたものも含
む）およびこれらに遠心分離等何らかの処理を施したも
のがあげられる。なお、本発明者らの経験では、臍帯血
を比重遠心により単核球画分としたものが良い結果が得
られている。また、何らかの処理とは凍結解凍も含む。
【００１２】本発明において、前記細胞捕捉手段に導入
して捕捉されている目的細胞であるＣＤ４５抗原陽性か
つＣＤ３４陰性回収必要細胞を回収する液体は、生理的
溶液であればいかなるものも使用可能であるが、幾つか
例示すると、生理食塩水、Ｄ−ＰＢＳやＨＢＳＳなどの
緩衝液、ＲＰＭＩ１６４０などの培地があげられる。こ
れらの生理的溶液に、細胞保護、栄養補給、凍結保存時
の凍害防止、粘度向上（回収率の向上に有効な場合があ
る）等の目的で必要に応じ、ＥＤＴＡ、デキストラン、
ヒドロキシエチルデンプン、ジメチルスルホキシド、ア
ルブミン、グロブリン、ゼラチン、グルコース、サッカ
ロース、トレハロース等を添加してもよい。なお、本発
明者らの経験では、ヒト血清アルブミンおよびＥＤＴＡ
加Ｄ−ＰＢＳで良好な結果が得られている。
して捕捉されている目的細胞であるＣＤ４５抗原陽性か
つＣＤ３４陰性回収必要細胞を回収する液体は、生理的
溶液であればいかなるものも使用可能であるが、幾つか
例示すると、生理食塩水、Ｄ−ＰＢＳやＨＢＳＳなどの
緩衝液、ＲＰＭＩ１６４０などの培地があげられる。こ
れらの生理的溶液に、細胞保護、栄養補給、凍結保存時
の凍害防止、粘度向上（回収率の向上に有効な場合があ
る）等の目的で必要に応じ、ＥＤＴＡ、デキストラン、
ヒドロキシエチルデンプン、ジメチルスルホキシド、ア
ルブミン、グロブリン、ゼラチン、グルコース、サッカ
ロース、トレハロース等を添加してもよい。なお、本発
明者らの経験では、ヒト血清アルブミンおよびＥＤＴＡ
加Ｄ−ＰＢＳで良好な結果が得られている。
【００１３】
【発明の実施の形態】以下に実施例により本発明をより
詳細に説明するが、本発明は、これらにより限定される
ものではない。
詳細に説明するが、本発明は、これらにより限定される
ものではない。
【実施例１】細胞分離器 容器外寸（縦×横×厚み）４１×４１×１８ｍｍで液体
流出口と液体流入口を対角線上に持つポリカーボネート
製容器の入口側に平均繊維径２．３μｍのポリエステル
不織布１８枚を、出口側に平均繊維径１２μｍのポリエ
ステル不織布１６枚を充填し細胞分離器とした。なお、
充填密度は０．２ｇ／ｃｍ3、有効濾過面積１２．２５
ｃｍ2、有効濾過長１２．４ｍｍであった。
流出口と液体流入口を対角線上に持つポリカーボネート
製容器の入口側に平均繊維径２．３μｍのポリエステル
不織布１８枚を、出口側に平均繊維径１２μｍのポリエ
ステル不織布１６枚を充填し細胞分離器とした。なお、
充填密度は０．２ｇ／ｃｍ3、有効濾過面積１２．２５
ｃｍ2、有効濾過長１２．４ｍｍであった。
【００１４】また、この細胞分離器に血小板通過性を付
与する目的で、親水性ポリマーのコーティングを行っ
た。すなわち、ヒドロキシエチルメタクリレート・ジメ
チルアミノエチルメタクリレート共重合体（ヒドロキシ
エチルメタクリレートとジメチルアミノエチルメタクリ
レートのモル比＝９７：３）の１％エタノール溶液を該
フィルターの入口側から通液した後、窒素ガスを通して
乾燥させた。
与する目的で、親水性ポリマーのコーティングを行っ
た。すなわち、ヒドロキシエチルメタクリレート・ジメ
チルアミノエチルメタクリレート共重合体（ヒドロキシ
エチルメタクリレートとジメチルアミノエチルメタクリ
レートのモル比＝９７：３）の１％エタノール溶液を該
フィルターの入口側から通液した後、窒素ガスを通して
乾燥させた。
【００１５】細胞分離操作 臍帯血を公知のＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ比重遠心
分離により単核球画分に分離した。得られた単核球画分
を０．１％ヒト血清アルブミン加ＥＤＴＡ−ＤＰＢＳ２
００ｍｌ（以後Ａ液と呼ぶ）に再浮遊させ、原料細胞液
とした。この原料細胞液を２００ｍｌの血液バッグに移
した。この血液バッグを、途中に細胞回収用バッグ５が
接続した三方活栓４とメッシュチャンバー３を有するチ
ューブで、で作製した細胞分離器１の入口側に接続し
た。細胞分離器１の出口側は、途中に回収用シリンジ接
続用の三方活栓６を有するチューブでドレーンバッグ７
を接続した。原料血液バッグ２中の有核細胞含有液を約
６０ｃｍの落差で細胞分離器に通液し、細胞分離器１か
ら流出する微量の赤血球を含む液体をドレーンバッグ７
に排液した。次に、三方活栓６にＡ液３０ｍｌを入れた
３０ｍｌディスポーザブルシリンジを接続し、三方活栓
６をシリンジと細胞分離器のみが連通する方向に回し、
また、三方活栓４を細胞分離器１と細胞回収用バッグ５
のみが連通する方向に回した後、シリンジを押して細胞
分離器内に捕捉されている細胞を細胞回収用バッグ５に
回収した。
分離により単核球画分に分離した。得られた単核球画分
を０．１％ヒト血清アルブミン加ＥＤＴＡ−ＤＰＢＳ２
００ｍｌ（以後Ａ液と呼ぶ）に再浮遊させ、原料細胞液
とした。この原料細胞液を２００ｍｌの血液バッグに移
した。この血液バッグを、途中に細胞回収用バッグ５が
接続した三方活栓４とメッシュチャンバー３を有するチ
ューブで、で作製した細胞分離器１の入口側に接続し
た。細胞分離器１の出口側は、途中に回収用シリンジ接
続用の三方活栓６を有するチューブでドレーンバッグ７
を接続した。原料血液バッグ２中の有核細胞含有液を約
６０ｃｍの落差で細胞分離器に通液し、細胞分離器１か
ら流出する微量の赤血球を含む液体をドレーンバッグ７
に排液した。次に、三方活栓６にＡ液３０ｍｌを入れた
３０ｍｌディスポーザブルシリンジを接続し、三方活栓
６をシリンジと細胞分離器のみが連通する方向に回し、
また、三方活栓４を細胞分離器１と細胞回収用バッグ５
のみが連通する方向に回した後、シリンジを押して細胞
分離器内に捕捉されている細胞を細胞回収用バッグ５に
回収した。
【００１６】分析 有核細胞数は自動血球計算機にて測定、未分化造血幹細
胞はフローサイトメトリー法により、ＣＤ２、３、１
４、１６、１９、２０、３３、３４、４１、５６、Ｇｌ
ｙｃｏｈｏｒｉｎＡ陰性、ＣＤ４５陽性の細胞群を定量
することで行なった。なお、濃縮率、回収率の算出方法
は以下のとおりである。 濃縮率（％）＝１００×の当該細胞陽性率／原料細胞液
中の当該細胞陽性率 回収率（％）＝１００×（回収後当該細胞数／原料血液
中の細胞数）
胞はフローサイトメトリー法により、ＣＤ２、３、１
４、１６、１９、２０、３３、３４、４１、５６、Ｇｌ
ｙｃｏｈｏｒｉｎＡ陰性、ＣＤ４５陽性の細胞群を定量
することで行なった。なお、濃縮率、回収率の算出方法
は以下のとおりである。 濃縮率（％）＝１００×の当該細胞陽性率／原料細胞液
中の当該細胞陽性率 回収率（％）＝１００×（回収後当該細胞数／原料血液
中の細胞数）
【００１７】結果 細胞分離前の未分化造血幹細胞陽性率は濃縮率０．７４
％であった。分離後の当該細胞の陽性率は５０．２％
と、分離操作により高度に当該細胞が濃縮されていた。
濃縮率は６７．８３％となった。また、回収率４２．８
％であった。分離操作に要した時間は、約１０分と極め
て短時間であった。
％であった。分離後の当該細胞の陽性率は５０．２％
と、分離操作により高度に当該細胞が濃縮されていた。
濃縮率は６７．８３％となった。また、回収率４２．８
％であった。分離操作に要した時間は、約１０分と極め
て短時間であった。
【００１８】
【発明の効果】以上示したように、本発明によれば、安
価でかつ簡便・短時間操作でヒト未分化造血幹細胞を分
離することができる。
価でかつ簡便・短時間操作でヒト未分化造血幹細胞を分
離することができる。
【図１】実施例１で用いた細胞分離回路システムの模式
図である。
図である。
１ 細胞分離器 ２ 血液バッグ ３ メッシュチャンバー ４ 三方活栓 ５ 細胞回収用バッグ ６ 三方活栓 ７ ドレーンバッグ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中村 嘉彦 東京都渋谷区富ヶ谷２丁目28番地４号 学 校法人 東海大学内 Ｆターム(参考） 4B029 AA07 AA27 BB11 CC01 FA02 FA11 4B065 AA93X AA94X BC42 BD18 CA44 4D019 AA03 BA01 BA02 BA04 BA06 BA12 BA13 BB02 BB03 BB07 BB10 BB12 BB13 BC13 BD01
Claims (3)
- 【請求項１】 有核細胞を実質的に捕捉し、赤血球を実
質的に通過するフィルターから回収された、ＣＤ４５抗
原陽性かつＣＤ３４抗原陰性かつ分化抗原陰性のヒト未
分化造血幹細胞。 - 【請求項２】 有核細胞を実質的に捕捉し、赤血球を実
質的に通過するフィルターにＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ
３４陰性かつ分化抗原陰性の有核細胞を含む有核細胞含
有液を導入し、次に該フィルターに液体を導入して該フ
ィルターに捕捉されているＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３
４抗原陰性かつ分化抗原陰性の有核細胞を回収すること
を特徴とするヒト未分化造血幹細胞の分離方法。 - 【請求項３】 ＣＤ４５抗原陽性かつＣＤ３４抗原陰性
かつ分化系統陰性のヒト未分化造血幹細胞を分離回収す
る装置であって、液体流入口と液体流出口を有する容器
に多孔質構造体からなる有核細胞捕捉材が充填されたフ
ィルターであることを特徴とするヒト未分化造血幹細胞
分離装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35838598A JP4437335B2 (ja) | 1998-12-03 | 1998-12-03 | ヒト未分化造血幹細胞およびその分離方法ならびに分離装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35838598A JP4437335B2 (ja) | 1998-12-03 | 1998-12-03 | ヒト未分化造血幹細胞およびその分離方法ならびに分離装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000166541A true JP2000166541A (ja) | 2000-06-20 |
| JP4437335B2 JP4437335B2 (ja) | 2010-03-24 |
Family
ID=18459022
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP35838598A Expired - Lifetime JP4437335B2 (ja) | 1998-12-03 | 1998-12-03 | ヒト未分化造血幹細胞およびその分離方法ならびに分離装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4437335B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002101029A1 (fr) * | 2001-05-31 | 2002-12-19 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Methode de separation et de concentration cellulaires pour la regeneration renale |
| WO2004005496A1 (ja) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 臍帯血、骨髄、末梢血等に含まれる新規な未分化幹細胞集団 |
| EP1683857A1 (en) * | 2003-10-10 | 2006-07-26 | Asahi Kasei Medical Co., Ltd. | Method of preparing cell concentrate and cell composition |
| JP2009005655A (ja) * | 2007-06-29 | 2009-01-15 | Olympus Corp | 有核細胞回収装置および有核細胞の回収方法 |
| JP2012120458A (ja) * | 2010-12-06 | 2012-06-28 | Kaneka Corp | 細胞の分離器具。 |
-
1998
- 1998-12-03 JP JP35838598A patent/JP4437335B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002101029A1 (fr) * | 2001-05-31 | 2002-12-19 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Methode de separation et de concentration cellulaires pour la regeneration renale |
| GB2392116A (en) * | 2001-05-31 | 2004-02-25 | Asahi Chemical Ind | Method of separating and concentrating cells for kidney regeneration |
| WO2004005496A1 (ja) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 臍帯血、骨髄、末梢血等に含まれる新規な未分化幹細胞集団 |
| EP1683857A1 (en) * | 2003-10-10 | 2006-07-26 | Asahi Kasei Medical Co., Ltd. | Method of preparing cell concentrate and cell composition |
| EP1683857A4 (en) * | 2003-10-10 | 2007-04-18 | Asahi Kasei Medical Co Ltd | METHOD FOR PRODUCING A CELL CONCENTRATE AND A CELL COMPOSITION |
| JP2009005655A (ja) * | 2007-06-29 | 2009-01-15 | Olympus Corp | 有核細胞回収装置および有核細胞の回収方法 |
| JP2012120458A (ja) * | 2010-12-06 | 2012-06-28 | Kaneka Corp | 細胞の分離器具。 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4437335B2 (ja) | 2010-03-24 |
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