JP2000159673A - 形質転換増殖因子β阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】低分子化合物を有効成分とする新規なＴＧＦ−
β阻害剤を提供する。 【解決手段】ウルソール酸又はその塩を有効成分とする
ＴＧＦ−β阻害剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】ウルソール酸を有効成分とす
る形質転換増殖因子β阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】形質転換増殖因子β（以下、ＴＧＦ−β
とする）は線維芽細胞の増殖を促進する因子として１９
８２年に発見されたものであり、その後の研究から１１
２個のアミノ酸から成る２本のペプチドがジスルフィド
結合で連結する分子量２５ｋＤａのホモダイマーである
ことが明らかとなっている。現在は線維芽細胞だけでな
く多くの細胞に対し増殖抑制因子として作用することが
判明しており、代表的な生理作用としては血球細胞の増
殖抑制、免疫系細胞の増殖と機能の抑制、細胞外基質の
産生促進、Ｔｈ２細胞のアポトーシス誘導の抑制等を挙
げることができる。

【０００３】また、ＴＧＦ−βは慢性糸球体腎炎、糖尿
病性腎症、肝硬変、肺繊維症、動脈硬化など様々な疾患
との関連を示唆する報告（Ｂｉｏ Ｃｌｉｎｉｃａ，１
２（６），４０，（１９９７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０，１８１４，
（１９９３）、Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ，３２４，９３
３，（１９９１），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ，８８，６６４２，（１９９１））があり、ＴＧＦ
−βを阻害する物質はこれら疾患の有効な治療薬となる
ことが期待されている。

【０００４】これまで発見されているＴＧＦ−β阻害物
質としては、抗ＴＧＦ−β抗体（Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏ
ｌ．３４６，ｐ２８１（１９９０））やデコリン（Ｃｅ
ｌｌ，ｖｏｌ．６９，ｐ１０６７，（１９９２））など
の高分子蛋白質が挙げられる。

【０００５】しかし、医薬品として開発する上では安定
性等の問題から低分子化合物が望ましい。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、低分子化合
物を有効成分とする新規なＴＧＦ−β阻害剤を提供する
ことを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記目的に
鑑み鋭意検討を重ねた結果、ある種の五環性トリテルペ
ン化合物がＴＧＦ−β阻害作用を有することを見出し、
本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明はウルソール酸又はその
塩を有効成分とするＴＧＦ−β阻害剤である。

【０００９】本発明の有効成分であるウルソール酸は、
式（Ｉ）

【００１０】

【化１】

【００１１】で表される。

【００１２】また、ウルソール酸は、カキ、サンザシ、
リンゴ等の葉や実に含まれることが知られており、これ
らの植物より公知の方法で抽出・分離精製することによ
り得ることができる。さらに、ウルソール酸は市場で一
般に入手することも可能であり、例えばシグマケミカル
カンパニー等から購入した市販品を本発明に使用しても
よい。

【００１３】また、本発明においてウルソール酸塩と
は、ウルソール酸の薬学的に許容される塩を意味し、具
体的には、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアル
カリ金属塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩、
アルギニン塩などの塩基性アミノ酸塩を含む有機塩基塩
等を挙げることができる。

【００１４】本発明のＴＧＦ−β阻害剤は、医薬として
使用することが可能であり、ＴＧＦ−β阻害活性に基づ
く医薬組成物、具体的には、例えば慢性糸球体腎炎、腎
臓間質性線維症、糖尿病性腎症、肝線維症、肝硬変、肺
繊維症、ケロイド、強皮症、動脈硬化、後部心筋梗塞、
心臓性線維症、血管形成後再狭窄、急性巨核芽球性白血
病、成人Ｔ細胞白血病などの疾患のＴＧＦ−β阻害活性
に基づく予防剤又は治療剤も本発明の権利の範囲であ
る。

【００１５】本発明を医薬として使用する場合、有効成
分であるウルソール酸の投与量は、疾患及び症状によっ
て異なるが、通常成人を治療する場合で０．０１〜１０
００ｍｇであり、これを１日２〜３回に分けて投与す
る。

【００１６】本発明のＴＧＦ−β阻害剤は、公知の方法
で適当な賦形剤を用いて錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル
剤、シロップ剤等の経口剤として使用することができ
る。また、軟膏、クリーム等の外用剤として、あるいは
注射剤としても使用することができる。

【００１７】

【発明の効果】本発明により新規なＴＧＦ−β阻害剤の
提供が可能となり、慢性糸球体腎炎、腎臓間質性線維
症、糖尿病性腎症、肝線維症、肝硬変、肺繊維症、ケロ
イド、強皮症、動脈硬化、後部心筋梗塞、心臓性線維
症、血管形成後再狭窄、急性巨核芽球性白血病、成人Ｔ
細胞白血病などの疾患治療に有用である。

【００１８】以下、試験例を挙げて本発明を更に詳細に
説明する。

【００１９】試験例１ ＜ＴＧＦ−β₁受容体結合試験＞実験には Balb/c 3T3
細胞を用い、２４穴プレートに１穴あたり２〜３×10⁴
個の密度で播種して２〜３日培養した。培地はダルベッ
コ改変イーグル培地（低グルコース含有）に牛血清１０
％、抗生物質（ペニシリンＧ100units/ml−ストレプト
マイシン100μg/ml）を添加して用いた。コンフルエン
トに達した細胞の培地をバインデ_イングバッファー（＊
１）に交換して４℃で３０分間インキュベートした。さ
らにバインデ_イングバッファー（ 270μl）を交換して検
体調製液（15μl）および [¹²⁵I] ＴＧＦ−β₁ （15μ
l）を添加し、４℃で４時間インキュベートして結合反
応させた。次にバインデ_イングバッファーにて５回洗浄
後、細胞溶解液（＊２）を1.0ml加えて、再度４℃で４
０分間インキュベートした。その後、細胞溶解液の放射
活性をガンマカウンターにて測定した。尚、上記実験に
おいて検体調製液に変えてバッファーのみの調製液を加
えた際の放射活性を総結合量、検体調製液にかえて２０
０倍過剰量の非放射性ＴＧＦ−β₁を含む調製液を添加
した際の放射活性を非特異的結合量として求め、総結合
量から非特異的結合量を引いた値を特異的結合量とし
た。検体のＴＧＦ−β₁受容体拮抗活性はＴＧＦ−β₁の
特異的結合を５０％抑制する濃度（IC₅₀）として算出し
た。その結果、ＴＧＦ−β₁の特異的結合を５０％抑制
するウルソール酸の濃度は3.0μg/mlであった。

【００２０】なお、測定に用いた試薬を以下に示した。 ＊１ バインデ_イングバッファー 50mM ヘペス／水酸化ナトリウム(pH7.5) 128mM 塩化ナトリウム 5mM 硫酸マグネシウム 1.2mM 塩化カルシウム 5mM 塩化カリウム 2mg/ml 牛血清アルブミン ＊２ 細胞溶解液 1% (v/v) トライトンＸ−１００ 10% (v/v) グリセロール 25mM ヘペス／水酸化ナトリウム(pH7.5) 1mg/ml 牛血清アルブミン。

【００２１】試験例２ ＜ＴＧＦ−β₁の細胞増殖抑制活性に対する作用＞ミン
ク肺上皮細胞（Mv1 Lu細胞）を24穴プレートに播種して
MEM培地（10％FBS)で24時間培養後、枯渇条件下（0.02
％FBS）に24時間静置した。続いて濃度10pMＴＧＦ−β₁
と被験化合物（終濃度0.1〜５μg/ml）を添加したMEM培
地（10％ FBS)で24時間培養後、1穴あたり1μCiの³H-チ
ミジンを添加して2時間培養し、この間の³H-チミジンの
取り込みを細胞増殖の指標とした。³H-チミジンの取り
込みは10ｐM ＴＧＦ−β₁によって90％抑制されるた
め、ＴＧＦ−β₁阻害活性は被験化合物を加えることに
よる³H-チミジン取り込み量の回復率（％）を指標とし
て評価した。その結果、ＴＧＦ−β₁の細胞増殖抑制活
性を５０％阻害するウルソール酸の濃度（IC₅₀）は0.5
μg/mlであった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 斉藤 秀次 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 吉村 広光 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 宮田 則之 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 楊 峻山 北京市海淀区西北旺中国医学科学院薬用植 物研究所内 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 DA08 MA01 MA04 NA14 ZA45 ZA75 ZA81 ZB21 4C091 AA06 BB20 CC01 DD01 EE04 FF02 FF06 GG03 GG05 HH01 JJ03 KK01 LL03 LL06 MM01 PA02 PA12 QQ05 QQ15

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ウルソール酸又はその塩を有効成分とする
   形質転換増殖因子β阻害剤。