JP2000105232A - 抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 抗原活性を保持した小粒子化ＨＢｓ抗原を用
いる抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法を提供する。 【解決手段】 小粒子化ＨＢｓ抗原を用いる抗ＨＢｓ抗
体測定試薬の製造方法であって、上記小粒子化ＨＢｓ抗
原は、界面活性剤及びタンパク質変性剤からなる群より
選択される少なくとも１種をＨＢｓ抗原溶液に添加する
ことにより小粒子化処理されたものであることを特徴と
する抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗ＨＢｓ抗体測定
試薬の製造方法に関し、詳しくは、小粒子化ＨＢｓ抗原
を用いる抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染時の患
者血清中には、直径４２ｎｍのＤａｎｅ粒子と呼ばれる
二本鎖ＤＮＡウイルスの他に、直径２２ｎｍの小型球状
粒子や同じ外径で長さ５０〜７００ｎｍの管状粒子が存
在することが知られている。これらＨＢＶには、ＨＢＶ
の外被（ｓｕｒｆａｃｅ）、芯（ｃｏｒｅ）に対応する
表面抗原（ＨＢｓ抗原）、核抗原（ＨＢｃ抗原）等が存
在する。

【０００３】このような各抗原に対する抗体の検出は、
臨床診断上重要である。特に、ＨＢｓ抗体は、ＨＢＶに
対する感染防御抗体であるので、過去にＨＢＶの感染が
あり既に排除されている場合やＨＢＶワクチン接種後で
ある場合に血中に検出される。従って、ＨＢｓ抗体が陽
性であることは、ＨＢＶに対して抵抗性があり、再感染
のおそれがないことを示すものである。

【０００４】血中のＨＢｓ抗体の定量的測定法として
は、通常、抗原抗体反応を利用した免疫測定法が用いら
れ、例えば、ＨＢｓ抗原を血球やラテックス等の不溶性
担体に担持させた血球凝集法やラテックス凝集法等が挙
げられる。

【０００５】血球凝集法やラテックス凝集法は、精製し
たＨＢｓ抗原をラテックスや血球等に担持させ、これを
ＨＢｓ抗体含有検体と混合させる。抗原抗体反応の結
果、ラテックスや血球が抗体により架橋され、凝集が生
じ、この凝集度を測定することにより検体中のＨＢｓ抗
体を定量することができる。

【０００６】ラテックスや血球に担持させる抗原量は、
多ければ多いほど反応性が増加し、試薬の測定感度が向
上する。しかしながら、ＨＢｓ抗原は分子量３００万〜
４００万という巨大分子であるために、担体（ラテック
スや血球）の表面積当たりの担持分子数が少なくなり、
充分な試薬感度を得ることが困難であった。そのため、
ＨＢｓ抗原を小粒子化処理して、これを不溶性担体に担
持させることができれば、従来の試薬に比べて測定感度
の向上が可能となる。

【０００７】特開平６−１３８１２３号公報には、ＨＢ
ｓ抗原を還元剤、例えば１０％ジチオスレイトールを用
いてＨＢｓ抗原のジスルフィド（−ＳＳ−）結合を開裂
し、分子量が５０万〜１００万の小粒子化処理したＨＢ
ｓ抗原を調製し、これを用いて酵素標識体を調製する方
法が開示されている。しかしながら、このような方法で
得られたＨＢｓ抗原は、抗原活性に関与するジスルフィ
ド結合まで開裂するため、活性の低下が生じ、目的とす
る試薬感度を向上させることはできなかった。従って、
抗原活性を保持した小粒子化ＨＢｓ抗原を調製し、これ
を試薬化する方法が望まれていた。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記現状に
鑑み、抗原活性を保持した小粒子化ＨＢｓ抗原を用いる
抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法を提供することを目的
とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、小粒子化ＨＢ
ｓ抗原を用いる抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法であっ
て、上記小粒子化ＨＢｓ抗原は、界面活性剤及びタンパ
ク質変性剤からなる群より選択される少なくとも１種を
ＨＢｓ抗原溶液に添加することにより小粒子化処理され
たものである抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法である。

【００１０】本発明の抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法
は、小粒子化ＨＢｓ抗原を用いるものである。上記小粒
子化ＨＢｓ抗原は、界面活性剤及びタンパク質変性剤か
らなる群より選択される少なくとも１種をＨＢｓ抗原溶
液に添加することにより小粒子化処理されたものであ
る。上記小粒子化処理を行うことによって、抗原活性を
保持した小粒子化ＨＢｓ抗原を得ることができる。本明
細書中において、小粒子化ＨＢｓ抗原とは、ＨＢｓ抗原
を界面活性剤及びタンパク質変性剤からなる群より選択
される少なくとも１種で処理することによって得られ
る、低分子量化したＨＢｓ抗原を意味する。

【００１１】上記界面活性剤としては、脂質を除去可能
なものであれば特に限定されず、例えば、ドデシル硫酸
ナトリウム（ＳＤＳ、ｃｍｃ＝８．２ｍＭ）、ドデシル
スルホン硫酸ナトリウム（ｃｍｃ＝９．８ｍＭ）、コー
ル酸ナトリウム（ｃｍｃ＝１４ｍＭ）、デオキシコール
酸ナトリウム（ｃｍｃ＝５ｍＭ）、タウロデオキシコー
ル酸ナトリウム（ｃｍｃ＝４ｍＭ）等の陰イオン性界面
活性剤；セチルトリメチルアンモニウムブロマイド（Ｃ
１６ＴＡＢ、ｃｍｃ＝０．９２ｍＭ）、ドデシルピリジ
ニウムクロライド（ｃｍｃ＝１６ｍＭ）等の陽イオン性
界面活性剤；３−［（コールアミドプロピル）ジメチル
アンモニオ］−１−プロパンスルホン酸（ＣＨＡＰＳ、
ｃｍｃ＝８ｍＭ）、３−［（コールアミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンス
ルホン酸（ＣＨＡＰＳＯ、ｃｍｃ＝８ｍＭ）等の両性界
面活性剤；オクチルグルコシド（ＯＧ、ｃｍｃ＝２５ｍ
Ｍ）、オクチルチオグルコシド（ｃｍｃ＝９ｍＭ）、ノ
ナノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＧＡ−９、ｃｍ
ｃ＝２５ｍＭ）、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド
（ＭＥＧＡ−１０、ｃｍｃ＝７ｍＭ）、ポリオキシエチ
レン ドデシルエーテル（Ｂｒｉｊｉ、ｃｍｃ＝０．０
０２〜０．３ｍＭ）、ポリオキシエチレンｉ−オクチル
フェニルエーテル（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ｃｍｃ＝
０．２４ｍＭ：ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４、ｃｍｃ＝０．
２０ｍＭ：ＴｒｉｔｏｎＸ−１６５、ｃｍｃ＝０．４３
ｍＭ）、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル
（Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、ｃｍｃ＝０．２９ｍ
Ｍ）、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル（Ｓｐａ
ｎ）、ポリオキシエチレンソルビトールエステル（Ｔｗ
ｅｅｎ、ｃｍｃ＝０．０１２〜０．０５９ｍＭ）等の非
イオン性界面活性剤が挙げられる。

【００１２】上記界面活性剤は、溶液中の濃度により、
その存在形態が異なり、薄い濃度ではモノマーとして存
在するが、ある濃度以上ではミセルを形成するようにな
る。上記ミセルは、複数のモノマーがコンパクトに集合
した会合体であり、親水性（極性）部分が外側を向いて
水と接し、疎水性（非極性）部分が内側に隠されたよう
な構造をとっている。このミセルの状態でタンパク質の
疎水部分との相互作用が大きくなるため、ＨＢｓ抗原を
小粒子化処理する場合には、ミセルが形成される濃度
（臨界ミセル濃度：ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｉｃｅｌｌｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ、以下ｃｍｃともい
う。）以上の濃度を存在させることが好ましい。

【００１３】上記タンパク質変性剤としては、タンパク
質の高次構造をほぐしポリペプチド側鎖間の水素結合、
疎水性相互作用を解離するものであれば特に限定され
ず、例えば、グアニジン塩酸塩、尿素等が挙げられる。
上記タンパク質変成剤の使用濃度は、処理するＨＢｓ抗
原濃度によって異なるが、０．１〜８Ｍの範囲が好まし
い。上記界面活性剤及びタンパク質変性剤は、それぞれ
単独で用いても、混合して用いてもよい。

【００１４】上記界面活性剤及び／又はタンパク質変性
剤に加えて、更に、少量であるならば、還元剤を添加し
てもよい。上記還元剤は、タンパク質のジスルフィド結
合を解離させるものであれば特に限定されず、例えば、
β−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチルアミ
ン、ジチオスレイトール、ジチオエリスルトール、水素
化ホウ素ナトリウム、モノチオリン酸等が挙げられる。

【００１５】上記還元剤の使用濃度としては、処理する
ＨＢｓ抗原の濃度によって異なるが、通常は溶液中の濃
度が０．００１〜１０ｍＭの範囲で用いることができ
る。０．００１ｍＭ未満であると、その効果が発揮でき
ない場合があり、１０ｍＭを超えると、抗原活性に必要
な分子内ジスルフィド結合まで解離する。

【００１６】本発明の小粒子化ＨＢｓ抗原は、上記界面
活性剤及びタンパク質変性剤からなる群より選択される
少なくとも１種を溶解させた溶液と、ＨＢｓ抗原溶液と
を混合し、反応させることにより得ることができる。

【００１７】上記ＨＢｓ抗原溶液の希釈液としては特に
限定されず、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グ
ッド緩衝液、グリシン緩衝液、トリス塩酸緩衝液等が挙
げられる。上記希釈液のイオン強度としては、ＨＢｓ抗
原を希釈するのに好適なものであれば特に限定されない
が、ＮａＣｌを０．０５〜１Ｍとなるようにしたものが
好ましい。上記希釈液のｐＨは特に限定されないが、
４．５〜９．０の範囲が好ましい。

【００１８】上記界面活性剤及びタンパク質変性剤から
なる群より選択される少なくとも１種、又は、それに還
元剤を添加したものを溶解させておく緩衝液としては特
に限定されず、上記ＨＢｓ抗原の希釈液で例示したもの
等が挙げられる。上記ＨＢｓ抗原の処理濃度としては特
に限定されず、０．００１〜１０ｍｇ／ｍＬが通常用い
られる。

【００１９】上記小粒子化処理反応は、例えば１０〜６
０℃等の一定温度条件下で１〜１０時間インキュベーシ
ョンするだけでも小粒子化ＨＢｓ抗原を調製することが
できるが、更に、攪拌操作、超音波処理又は加熱処理等
を行うことによって、小粒子化反応を促進することもで
きる。

【００２０】本発明においては、上記小粒子化ＨＢｓ抗
原を用いて、抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造を行う。上記
小粒子化ＨＢｓ抗原は、不溶性担体に担持されたもので
あることが好ましい。

【００２１】上記不溶性担体としては、疎水性の表面を
有する不活性担体、及び、部分的に疎水性表面を有する
不活性担体が挙げられ、例えば、ラテックス、プラスチ
ックビーズ、プラスチックプレート等の合成高分子化合
物からなるもの；シリカ等の無機材料からなるもの；タ
ンニン酸処理した赤血球；ニトロセルロース等の高分子
膜等が挙げられる。なかでも、工業的に安定した品質で
大量生産しうるラテックス；プラスチックビーズ、プラ
スチックプレート等のプラスチック成型品が好ましい。

【００２２】上記不溶性担体の表面には、化学結合を目
的とする種々の官能基が存在してもよく、また、アビジ
ン−ビオチン等の親和性を利用して物質を固定化するた
めのスペーサー等を有していてもよい。

【００２３】特に、検査の全自動化処理による検査時間
の短縮及び省力化が可能なこと等から、ラテックスがよ
り好ましい。上記ラテックスとしては、ポリスチレン
系、合成ゴム系等特に限定されないが、好ましくはポリ
スチレン系のものである。上記ラテックスの平均粒径は
０．０５μｍ〜２．０μｍのものが好ましく、より好ま
しくは、０．１μｍ〜０．５μｍのものである。

【００２４】上記不溶性担体への担持方法としては、例
えば、本発明によって得られた小粒子化ＨＢｓ抗原をそ
のまま、又は、好適な緩衝液で希釈し、若しくは、透析
処理を行って界面活性剤等を除去して、これをＨＢｓ抗
原液とする。上記ＨＢｓ抗原液と上記不溶性担体とを、
ｐＨ４．５〜９．０の水性媒体中で接触させ、所定時間
インキュベートすることによりＨＢｓ抗原を不溶性担体
に固定化することができる。

【００２５】上記不溶性担体への担持においては、界面
活性剤の濃度はｃｍｃ濃度以下にして行うことが好まし
い。即ち、不溶性担体への小粒子化ＨＢｓ抗原の担持と
は、両者の疎水性相互作用に基づく物理吸着であるた
め、界面活性剤がミセル状態で存在している場合、疎水
性相互作用が妨害されるためである。上記界面活性剤の
濃度がｃｍｃ濃度以下になるとモノマーとして存在する
ため、透析等の処理によって界面活性剤の濃度を低下さ
せることができる。

【００２６】上記不溶性担体とのインキュベーション終
了後、試薬の非特異的反応を抑制することを目的とし
て、ウシ血清アルブミン溶液等でブロッキング操作等を
行い、その後、遠心分離操作等により抗原担持不溶性担
体を回収することができる。洗浄操作を数回行った後、
適当な緩衝液を用いて、希釈、保存する。

【００２７】上記小粒子化ＨＢｓ抗原を担持させた不溶
性担体を保存する液、及び、抗原抗体反応の反応液とし
て使用する水性媒体としては特に限定されず、例えば、
上記ＨＢｓ抗原の希釈緩衝液として例示したもの等の一
般に用いられている緩衝液が好ましい。

【００２８】上記酵素標識した小粒子化ＨＢｓ抗原、及
び、上記不溶性担体に担持させた小粒子化ＨＢｓ抗原
は、免疫測定試薬として使用した場合、高感度な免疫測
定法を行うことができる。例えば、上記不溶性担体に担
持させた小粒子化ＨＢｓ抗原と検体とを混合して、免疫
凝集反応後、この凝集を検出することにより、検体中の
ＨＢｓ抗体の量を測定することができる。

【００２９】上記ＨＢｓ抗原は、タンパク質、脂質及び
リン脂質から構成されている巨大分子であることが知ら
れている。巨大分子の形成には、主としてリン脂質が関
与しており、タンパク質の疎水部がリン脂質膜の疎水部
に埋没することにより、安定な構造に保たれている考え
られる。更に、タンパク質間のジスルフィド結合や非共
有結合（水素結合、疎水性結合等）等の安定化により、
巨大分子を形成していると推定される。

【００３０】本発明は、界面活性剤やタンパク質変性剤
を用いることによって、巨大分子の形成の要因であると
考えられるリン脂質やタンパク質間の非共有結合を除去
する。上記界面活性剤は、タンパク質の疎水部に相互作
用してタンパク質と脂質を分離することにより、また、
上記タンパク質変性剤は、タンパク質間の水素結合や疎
水相互作用等の非共有結合を解離させることにより、抗
原活性を保持した小粒子化ＨＢｓ抗原を得ることができ
る。

【００３１】

【実施例】以下に本発明の実施例を掲げて更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。

【００３２】実施例１ 小粒子化ＨＢｓ抗原の調製
（１） （１）試薬及び材料 ＨＢｓ抗原：ヒト陽性血漿より精製した。精製方法は、
塩化セシウム溶液及びショ糖溶液による密度勾配法によ
り小型球状粒子抗原を回収し、更にゲル濾過法により精
製した。得られたＨＢｓ抗原を、５０ｍＭリン酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ７．５）＋０．２Ｍ ＮａＣｌを用い
て４ｍｇ／ｍＬとなるように調製し、これをＨＢｓ抗原
液とした。 小粒子化用液：５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７．５）＋０．２ＭＮａＣｌに、オクチルグルコシド
（同仁化学社製）を６０ｍＭとなるように添加して、こ
れを小粒子化用液とした。 ＨＢｓ抗原量測定用キット：ヘキストジャパン社製のエ
ンザイグノストＨＢｓＡｇ モノクローナルを用いた。

【００３３】（２）小粒子化方法及びジスルフィド反応 ＨＢｓ抗原溶液２ｍＬ及び小粒子化用液２ｍＬを混合
し、２５℃にて２時間インキュベーションした。この粒
子化抗原含有液の少量を適当量希釈して、この液の抗原
性をＨＢｓ抗原測定キットを用いて測定した結果、小粒
子化操作前の抗原液とほぼ同等の抗原活性を保持してい
ることを確認した。

【００３４】（３）分子量の測定 この操作で得られた小粒子化ＨＢｓ抗原の分子量分布を
調べるために高速液体クロマトグラフィーによる解析を
行った。高速液体クロマトグラフィーは島津社製ＨＰＬ
Ｃ−１０Ａシステムを、カラムは東ソー社製のゲル濾過
クロマト用カラムＴＳＫｇｅｌＧ４０００ＳＷ_XLを用
い、溶離液として５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）＋０．１Ｍ ＮａＣｌにオクチルグルコシド
３０ｍＭ添加した液を用いた。検出は２８０ｎｍの吸光
度を測定することにより行い、また分子量標準物質とし
て東ソー社製のＴＳＫ標準ポリエチレンオキシドを用い
て較正曲線を作製し、これをもとに分子量分布を求め
た。その結果、分子量分布６０〜９０万付近にピークが
認められた。

【００３５】実施例２ 小粒子化ＨＢｓ抗原の調製
（２） （１）試薬及び材料 小粒子化用液として下記のものを使用したこと以外は、
実施例１と同様のものを使用した。 小粒子化用液：５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７．５）＋０．２ＭＮａＣｌに、オクチルグルコシド
（同仁化学社製）を７０ｍＭ、グアニジン塩酸塩（和光
純薬社製）を６Ｍとなるように、それぞれ添加して、こ
れを小粒子化用液とした。

【００３６】（２）小粒子化方法 実施例１と同様に行った。この粒子化抗原含有液の少量
を適当量希釈して、この液の抗原性をＨＢｓ抗原測定キ
ットを用いて測定した結果、小粒子化操作前の抗原液と
ほぼ同等の抗原活性を保持していることを確認した。

【００３７】（３）分子量の測定 実施例１と同様にして行った結果、約４０〜６０万付近
にピークが認められた。

【００３８】実施例３ 小粒子化ＨＢｓ抗原の調製
（３） （１）試薬及び材料 小粒子化用液として下記のものを使用したこと以外は、
実施例１と同様のものを使用した。 小粒子化用液：５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７．５）＋０．２ＭＮａＣｌに、ＭＥＧＡ−９（同仁化
学社製）を５０ｍＭ、尿素（和光純薬社製）を８Ｍとな
るように、それぞれ添加して、これを小粒子化用液とし
た。

【００３９】（２）小粒子化方法 実施例１と同様に行った。この粒子化抗原含有液の少量
を適当量希釈して、この液の抗原性をＨＢｓ抗原測定キ
ットを用いて測定した結果、小粒子化操作前の抗原液と
ほぼ同等の抗原活性を保持していることを確認した。

【００４０】（３）分子量の測定 実施例１と同様にして行った結果、約４０〜６０万付近
にメインピークが出現した。

【００４１】実施例４ 小粒子化ＨＢｓ抗原の調製
（４） （１）試薬及び材料 小粒子化用液として下記のものを使用したこと以外は、
実施例１と同様のものを使用した。小粒子化用液：５０
ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）＋０．２Ｍ
ＮａＣｌに、ＣＨＡＰＳ（同仁化学社製）を４０ｍＭ、
グアニジン塩酸塩（和光純薬社製）を８Ｍ、ジチオスレ
イトール（和光純薬社製）を１ｍＭとなるように、それ
ぞれ添加して、これを小粒子化用液とした。

【００４２】（２）小粒子化方法 実施例１と同様に行った。 この粒子化抗原含有液の少量を適当量希釈して、この液
の抗原性をＨＢｓ抗原測定キットを用いて測定した結
果、小粒子化操作前の抗原液とほぼ同等の抗原活性を保
持していることを確認した。

【００４３】（３）分子量の測定 実施例１と同様にして行った結果、約２０〜４０万付近
にメインピークが出現した。

【００４４】実施例５ ＨＢｓ抗体試薬用ラテックス試
薬の調製（１） （１）ＨＢｓ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１で得られた小粒子化ＨＢｓ抗原を５０ｍＭリン
酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を用いて１．０ｍｇ
／ｍＬに希釈し、この液７．５ｍＬに、平均粒径０．３
μｍのポリスチレンラテックス（固形分１０％（Ｗ／
Ｖ）、積水化学工業社製）０．５ｍＬと０．１ＭＮａＣ
ｌを添加した３６ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液２ｍＬと
を添加し、３０℃にて６０分間攪拌した。次いで、この
液にウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を１重量％含有する
リン酸−食塩緩衝液（０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）、０．１ＭＮａＣｌ、以下ＰＢＳともいう）を
添加し、３０℃にて６０分間攪拌した後、４℃にて２０
分間、１８０００ｒｐｍで遠心分離することにより洗浄
した。洗浄操作は３回行った。得られた沈殿物にＢＳＡ
を１重量％含有するＰＢＳを１０ｍＬ添加し、ラテック
スを懸濁した後、超音波破砕機にて分散処理を行い、固
形分０．１％（Ｗ／Ｖ）のＨＢｓ抗原感作ラテックス液
を調製した。

【００４５】（２）検体希釈液の調製 平均分子量５００，０００のポリエチレングリコール
（以下、ＰＥＧともいう：和光純薬社製）を、ＢＳＡを
１重量％含有するＰＢＳに、０．９重量％の濃度となる
ように溶解した。

【００４６】（３）ＨＢｓ抗体測定試薬 本実施例のＨＢｓ抗体測定試薬は、上記（１）項のＨＢ
ｓ抗原感作ラテックスからなる第１試薬と、上記（２）
項のＰＥＧ溶液からなる第２試薬とから構成される２液
系の試薬である。

【００４７】（４）標準ＨＢｓ抗体液 ＨＢｓ抗体を０、３００、６００、１２００、１８００
ｍＩＵ／ｍＬ濃度で含むヒト血清を標準品として使用し
た。

【００４８】（５）測定方法 検体２０μＬと上記（２）項の検体希釈液１２０μＬを
混合し、３７℃で適時保持した後、上記（１）項のＨＢ
ｓ抗原感作ラテックス液１２０μＬを添加攪拌した。こ
の後、１分後及び５分後の波長７５０ｎｍでの吸光度を
測定し、この差を吸光度変化量（△Ａｂｓ）とした。測
定は日立自動分析７１５０形を使用した。標準ＨＢｓ抗
体液を測定して、検量線を作成した。得られた結果を表
１及び図１に示す。

【００４９】実施例６ ＨＢｓ抗体測定用ラテックス試
薬の調製（２） 実施例３で得られた小粒子化ＨＢｓ抗原を用いた以外
は、実施例５と同様にしてＨＢｓ抗体測定用のラテック
ス試薬を調製し、検量線を作成した。得られた結果を表
１及び図１に示す。

【００５０】比較例１ ラテックスに感作する抗原を、実施例１で調製した小粒
子化ＨＢｓ抗原の代わりに小粒子化処理していない精製
ＨＢｓ抗原を用いた以外は実施例５と同様に行った。得
られた結果を表１及び図１に示す。

【００５１】比較例２ ラテックスに感作する抗原を、実施例１において、小粒
子化用液の７０ｍＭオクチルグルコシド、８Ｍ尿素の代
わりに、１００ｍＭジチオスレイトールを用いて調製し
た小粒子化ＨＢｓ抗原を用いたこと以外は実施例５と同
様に行った。得られた結果を表１及び図１に示す。

【００５２】

【表１】

【００５３】

【発明の効果】本発明の抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方
法は、上述の構成よりなるので、活性を保持した小粒子
化ＨＢｓ抗原を用いることにより、高感度な抗ＨＢｓ抗
体測定試薬、特に、抗ＨＢｓ抗体測定用ラテックス凝集
試薬を調製することが可能となった。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例５及び６並びに比較例１及び２における
抗ＨＢｓ抗体の抗体量と吸光度変化量との関係を示すグ
ラフである。縦軸は吸光度変化量、横軸は抗ＨＢｓ抗体
の抗体量を示す単位（ｍＩＵ／ｍＬ）である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 小粒子化ＨＢｓ抗原を用いる抗ＨＢｓ抗
   体測定試薬の製造方法であって、前記小粒子化ＨＢｓ抗
   原は、界面活性剤及びタンパク質変性剤からなる群より
   選択される少なくとも１種をＨＢｓ抗原溶液に添加する
   ことにより小粒子化処理されたものであることを特徴と
   する抗ＨＢｓ抗体測定試薬の製造方法。
2. 【請求項２】 小粒子化ＨＢｓ抗原は、不溶性担体に担
   持させるものである請求項１記載の抗ＨＢｓ抗体測定試
   薬の製造方法。