JP2000083649A - 細胞分離・回収装置および細胞の分離・回収方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】簡便に、無菌的に処理することができ、目的と
する細胞を、品質、特性等を低下せずに、高い回収率で
分離・回収することができる細胞分離・回収装置を提供
すること。 【解決手段】細胞分離・回収装置１は、フィルター装置
２と、第１ライン３と、第２ライン４と、第３ライン５
と、第４ライン６と、第１コネクタ７と、第２コネクタ
８とを有している。第３ライン５は、第３チューブ５０
と、第３クレンメ５１と、貯留容器５２とを有してい
る。貯留容器５２は、フィルター装置２を通過したプラ
イミング液を貯留する。この貯留されたプライミング液
は、フィルター装置２を洗浄する際の洗浄液として用い
られる。さらに、貯留容器５２は、目的細胞を含む回収
液を貯留する機能を兼有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、被処理液中から目
的とする細胞を分離・回収するための細胞分離・回収装
置およびその分離・回収方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】造血幹細胞移植、養子免疫療法、遺伝子
治療等の細胞を用いた治療、細胞の培養や保存のよう
に、生体外で細胞を扱う際に、例えばリンパ球のような
目的とする細胞（以下「目的細胞」と言う）を他の成分
から分離、濃縮することが行われている。

【０００３】細胞の培養や細胞を用いた治療において
は、目的細胞以外の細胞や不要な液体成分の除去、細胞
の老廃物や産生物質の除去が、また、保存した細胞を使
用する際には、凍結保存時に使用される凍害保護液のよ
うな、細胞や生体に有害な物質の除去が非常に重要な課
題となっている。このため、種々の細胞分離やそれに応
じた回収の方法が提案されている。

【０００４】この細胞分離の方法としては、大別して、
細胞の比重差を利用した沈降法、遠心分離法、密度勾
配遠心法、細胞の表面荷電を利用した電気的分離法、
細胞表面に存在する抗原に対する抗体の特異性を利用
したアフィニティ分離法、細胞の大きさと変形能の違
いを利用した濾過分離法等が挙げられる。

【０００５】しかしながら、〜の方法には、それぞ
れ、次のような欠点がある。

【０００６】における細胞の密度を利用した沈降法で
は、目的細胞を重力で分離するため、分離に長時間を要
し、分離効率が極めて低く、また、純度および収率も低
いという問題がある。

【０００７】この分離効率を遠心力を利用して向上させ
た方法が遠心分離法であり、大量の細胞を処理する方法
として一般的に使用されている。しかしながら、遠心分
離法では、細胞の無菌的な処理や回収のために大がかり
で高額な装置を必要とし、また、細胞は密度の差が小さ
いことから、分離できる細胞の種類に制限がある。

【０００８】分離能を上げるためには、比重を厳密に調
整した比重媒体による密度勾配遠心法が用いられる。し
かしながら、この方法では、同時に大量の細胞が処理で
きず、密度差により形成された界面から注意深く目的細
胞を回収する必要があり、また、不要な細胞成分の除去
操作と不要な液体成分の除去操作とを別々の条件で行わ
ざるを得ないこと、クリーンベンチを使用しないと回収
操作の無菌性を保証できないこと等、操作が非常に煩雑
である。

【０００９】また、の方法では、遠心条件等によって
は、目的細胞に与えるダメージが大きい場合がある。

【００１０】の電気的分離法では、細胞間の表面荷電
の差が小さいため、分離効率に限界があり、また、大量
の細胞を迅速に処理するには不適当である。さらに、こ
の方法では、電場を印加することにより目的細胞にダメ
ージを与えることがある。

【００１１】のアフィニティ分離法は、分離方法とし
ては最も特異性が高いが、この方法で分離した細胞を回
収するためには、結合した抗体分子を解離させる酵素処
理が必要であり、酵素処理による細胞への障害の発生、
操作の煩雑さ、抗体の活性維持等の技術的問題に加え、
高価な抗体を使用するので、コストの上昇を招き、大量
の細胞を迅速に処理するには不適当である。

【００１２】の濾過分離法は、目的細胞を含む細胞懸
濁液をフィルター部材に通過させて目的細胞を濾別し、
次いで、フィルター部材に前記と逆方向から液体を通過
させてフィルター部材に捕捉されている目的細胞をフィ
ルター部材から除去し、回収する方法であり、目的細胞
を不要な細胞や液体成分から大量に迅速に分離する方法
として適しているが、目的細胞の回収率が低いという欠
点がある。この欠点は、フィルター部材の細孔の径が一
連の処理作業過程において一定であることに由来する。

【００１３】すなわち、回収時の目的細胞の離脱性を考
慮して、フィルター部材の孔径を比較的大きく設定する
と、濾過の際にフィルター部材に捕捉されずに通過する
目的細胞の量が増え、逆に、フィルター部材の孔径を比
較的小さく設定すると、濾過の際にフィルター部材を通
過する目的細胞の量は減少し、捕捉量は増えるが、目的
細胞の細孔に対する接着性が増大し、回収時において、
フィルター部材からの離脱性が低下し、高い収率で回収
することができず、また、不要な細胞の除去率も低下す
る。

【００１４】このようなことから、目的細胞の捕捉性と
離脱性とを両立し得る適度な孔径のフィルター部材を目
的に応じ選択して使用する必要があった。

【００１５】なお、濾過分離法においては、濾過の際に
細胞懸濁液の供給量を下げることにより、フィルター部
材を通過する目的細胞の量がある程度減少し、捕捉率を
増加させることもできるが、この場合には、単位時間当
たりの処理量が減少するので、大量、迅速処理に適する
という濾過分離法の利点が損なわれてしまう。

【００１６】また、目的細胞の回収の際に、回収のため
の液体の供給量を上げることにより、フィルター部材に
捕捉されている目的細胞の離脱性を向上させることも可
能であるが、この場合には、目的細胞が受けるダメージ
が大きくなり、回収された目的細胞の特性、品質が低下
する。

【００１７】このように、従来の方法には、目的細胞を
不要成分と分離する手段と、分離した細胞を回収する手
段とに、それぞれ一長一短があり、目的や要求レベルに
応じた方法を選択し、または組み合わせて行われてい
る。

【００１８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記従来技
術の欠点、特に濾過分離法における欠点を解消するもの
であり、その目的は、簡便に、無菌的に処理することが
でき、目的とする細胞を、品質、特性等を低下せずに、
高い回収率で分離・回収することができる細胞分離・回
収装置および細胞の分離・回収方法を提供することにあ
る。

【００１９】

【課題を解決するための手段】このような目的は、下記
（１）〜（２５）の本発明により達成される。

【００２０】（１） 空孔率を２以上の異なる空孔率に
設定し得るフィルター部材を有するフィルター装置と、
該フィルター装置にプライミング液を供給する第１のラ
インと、前記フィルター装置に分離目的である細胞を含
む被処理液を供給する第２のラインと、前記フィルター
装置を通過した前記プライミング液を貯留する貯留容器
を備えた第３のラインとを有する細胞分離・回収装置で
あって、前記貯留容器に貯留された前記プライミング液
を、前記フィルター装置の洗浄に用いることを特徴とす
る細胞分離・回収装置。

【００２１】（２） 前記フィルター部材は、複数の膜
状多孔質体の積層体で構成され、前記積層体のうちの全
部または一部が、空孔率の変化の勾配を有するものであ
る上記（１）に記載の細胞分離・回収装置。

【００２２】（３） 前記第１のラインは、前記細胞を
回収する回収液を供給するラインとして兼用される上記
（１）または（２）に記載の細胞分離・回収装置。

【００２３】（４） 前記貯留容器は、前記細胞を回収
する容器として兼用される上記（１）ないし（３）のい
ずれかに記載の細胞分離・回収装置。

【００２４】（５） 前記フィルター装置を通過した前
記被処理液を貯留する廃液容器を備えた第４のラインを
有する上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の細胞
分離・回収装置。

【００２５】（６） 前記第１のライン、前記第２のラ
イン、前記第３のラインのうちの少なくとも１つに、液
の流通の開放・遮断を選択する開放・遮断手段を有する
上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の細胞分離・
回収装置。

【００２６】（７） 互いに鋭角となるように二股に分
岐した分岐管を有する第１のコネクタの前記両分岐管
に、それぞれ前記第２のラインと前記第３のラインとが
接続されている上記（１）ないし（６）のいずれかに記
載の細胞分離・回収装置。

【００２７】（８） 前記第１のコネクタが、ト字管ま
たはＹ字管である上記（７）に記載の細胞分離・回収装
置。

【００２８】（９） 互いに鋭角となるように二股に分
岐した分岐管を有する第２のコネクタの前記両分岐管
に、それぞれ前記第１のラインと前記フィルター装置に
連通するラインとが接続されている上記（１）ないし
（８）のいずれかに記載の細胞分離・回収装置。

【００２９】（１０） 前記第２のコネクタが、ト字管
またはＹ字管である上記（９）に記載の細胞分離・回収
装置。

【００３０】（１１） 空孔率が変更可能な多孔質体よ
りなるフィルター部材を用いて目的とする細胞の分離回
収を行う方法であって、前記フィルター部材にプライミ
ング液を含浸させるプライミング工程と、前記フィルタ
ー部材の空孔率を前記細胞が捕捉可能な第１の空孔率に
設定した状態で、被処理液を前記フィルター部材に通過
させて前記細胞の分離を行う分離工程と、前記プライミ
ング工程で前記フィルター部材を通過した余剰の前記プ
ライミング液を、前記フィルター部材に再び通過させて
前記フィルター部材を洗浄する洗浄工程と、前記フィル
ター部材の空孔率を前記第１の空孔率より大きい第２の
空孔率に設定した状態で、回収液を前記フィルター部材
に通過させ、前記フィルター部材に捕捉された前記細胞
の回収を行う回収工程とを有することを特徴とする細胞
の分離・回収方法。

【００３１】（１２） 空孔率が変更可能な多孔質体よ
りなるフィルター部材と、該フィルター部材にプライミ
ング液を供給する第１のラインと、前記フィルター部材
に目的とする細胞を含む被処理液を供給する第２のライ
ンとを有する装置を用いて前記細胞の分離回収を行う方
法であって、前記第１のラインを介して前記プライミン
グ液を供給し、前記フィルター部材を含浸させるととも
に、通過した余剰のプライミング液を貯留容器に貯留す
るプライミング工程と、前記フィルター部材の空孔率を
前記細胞が捕捉可能な第１の空孔率に設定した状態で、
前記第２のラインを介して前記被処理液を供給し、前記
被処理液を前記フィルター部材に通過させて前記細胞の
分離を行う分離工程と、前記プライミング工程で前記貯
留容器に貯留されたプライミング液を前記フィルター部
材に通過させて前記フィルター部材を洗浄する洗浄工程
と、前記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率よ
り大きい第２の空孔率に設定した状態で、回収液を前記
フィルター部材に通過させ、前記フィルター部材に捕捉
された前記細胞の回収を行う回収工程とを有することを
特徴とする細胞の分離・回収方法。

【００３２】（１３） 前記洗浄工程において、前記第
２のラインをも洗浄する上記（１２）に記載の細胞の分
離・回収方法。

【００３３】（１４） 前記一連の工程が閉鎖系で行わ
れる上記（１２）または（１３）に記載の細胞の分離・
回収方法。

【００３４】（１５） 前記プライミング工程において
前記プライミング液が前記フィルター部材を通過する方
向と、前記被処理液が前記フィルター部材を通過する方
向とが逆である上記（１１）ないし（１４）のいずれか
に記載の細胞の分離・回収方法。

【００３５】（１６） 前記被処理液が前記フィルター
部材を通過する方向と、前記洗浄工程において前記プラ
イミング液が前記フィルター部材を通過する方向とが同
じである上記（１１）ないし（１５）のいずれかに記載
の細胞の分離・回収方法。

【００３６】（１７） 前記プライミング工程と前記洗
浄工程とにおいて、前記プライミング液が前記フィルタ
ー部材を通過する方向が逆である上記（１１）ないし
（１６）のいずれかに記載の細胞の分離・回収方法。

【００３７】（１８） 前記洗浄工程において前記プラ
イミング液が前記フィルター部材を通過する方向と、前
記回収液が前記フィルター部材を通過する方向とが逆で
ある上記（１１）ないし（１７）のいずれかに記載の細
胞の分離・回収方法。

【００３８】（１９） 上記（１）ないし（１０）のい
ずれかに記載の細胞分離・回収装置を用い、前記細胞分
離・回収装置が有するフィルター部材にプライミング液
を含浸させ、前記フィルター部材の空孔率を前記細胞が
捕捉可能な第１の空孔率に設定した状態で前記被処理液
を前記フィルター部材に通過させて前記細胞の分離を行
い、前記フィルター部材を通過した余剰の前記プライミ
ング液を前記フィルター部材に再び通過させ、前記フィ
ルター部材の空孔率を前記第１の空孔率より大きい第２
の空孔率に設定した状態で前記回収液を前記フィルター
部材に通過させ、目的とする細胞の回収を行うことを特
徴とする細胞の分離・回収方法。

【００３９】（２０） 前記回収液は、前記第１のライ
ンを介して供給される上記（１２）ないし（１９）のい
ずれかに記載の細胞の分離・回収方法。

【００４０】（２１） 前記貯留容器に前記細胞を回収
する上記（１２）ないし（２０）のいずれかに記載の細
胞の分離・回収方法。

【００４１】（２２） 前記プライミングの開始から前
記細胞の分離の開始までの間に、前記フィルター部材中
の気泡を除去する脱気操作を行う上記（１１）ないし
（２１）のいずれかに記載の細胞の分離・回収方法。

【００４２】（２３） 前記脱気操作は、前記フィルタ
ー部材の圧縮率を複数回変えることにより、その空孔率
を複数回変化させることである上記（２２）に記載の細
胞の分離・回収方法。

【００４３】（２４） 前記細胞の回収の途中で、前記
フィルター部材およびその近傍の回収液の流れの方向お
よび／または流速を瞬間的に変えて前記細胞の前記フィ
ルター部材からの離脱を促進する離脱操作を行う上記
（１１）ないし（２３）のいずれかに記載の細胞の分離
・回収方法。

【００４４】（２５） 前記離脱操作は、前記フィルタ
ー部材の圧縮率を複数回変えることにより、その空孔率
を複数回変化させることである上記（２４）に記載の細
胞の分離・回収方法。

【００４５】

【発明の実施の形態】以下、本発明を添付図面に示す好
適実施例に基づいて説明する。

【００４６】図１は、本発明の細胞分離・回収装置の実
施例を示す回路構成図である。

【００４７】図１に示すように、本発明の細胞分離・回
収装置１は、フィルター装置２と、フィルター装置２に
プライミング液等を供給する第１ライン３と、フィルタ
ー装置２に分離目的である細胞を含む被処理液等を供給
する第２ライン４と、フィルター装置２を通過したプラ
イミング液等を貯留する貯留容器５２を備えた第３ライ
ン５と、フィルター装置２を通過した被処理液等の廃液
を排出する第４ライン６と、第２ライン４と第３ライン
５とを接続しフィルター装置２に連通する第１コネクタ
７と、第１ライン３と第４ライン６とを接続しフィルタ
ー装置２に連通する第２コネクタ８とを有している。

【００４８】フィルター装置２の一端（後述する第１の
ポート２２１１）は、第１コネクタ７の第３分岐管７３
に接続され、フィルター装置２の他端（後述する第２の
ポート２２２１）は、第２コネクタ８の第２分岐管８２
に接続されている。

【００４９】フィルター装置２は、後述する被処理液か
ら、分離、回収を目的とする細胞（以下、「目的細胞」
という）を捕捉し、さらには、捕捉した目的細胞を離脱
させることができる。

【００５０】図２、図３に示すように、フィルター装置
２は、ハウジング２２と、該ハウジング２２内に設置さ
れたフィルター部材２１と、流路確保部材２３ａ、２３
ｂと、シール部材２４とを有している。

【００５１】フィルター部材２１は、複数の高分子多孔
質膜２１１を積層してなるものである。各高分子多孔質
膜２１１は、好ましくは弾性材料、すなわち、圧縮や延
伸等の外力に対し塑性変形を生じ難く、その外力を除去
した際に復元力を有するもので構成されている。具体的
には、例えばポリウレタン、スチレン−ブタジエンラバ
ー、ポリビニルアルコール、ポリプロピレン、ポリエー
テルポリアミド、その他各種高分子材料からなる多孔質
体が挙げられる。

【００５２】本実施例におけるフィルター部材２１の各
高分子多孔質膜２１１は、図３に示すように、フィルタ
ー部材２１に所定の圧縮力が作用して圧縮された状態で
は、圧密化されるので、各高分子多孔質膜２１１の空孔
率は、後述する第２の空孔率より低い第１の空孔率とな
る。この第１の空孔率は、目的細胞を捕捉、分離するの
に適した空孔率とされる。

【００５３】また、図２に示すように、圧縮力が付与さ
れていない状態、圧縮力が解除された状態、または圧縮
力が緩和された状態では、その空孔率が、捕捉されてい
る目的細胞を離脱させるのに適した第２の空孔率となっ
ている。

【００５４】この場合、第１の空孔率に対する第２の空
孔率の比率は、目的細胞の種類や大きさ等の諸条件に応
じて適宜決定されるが、通常は、１．０５〜３倍程度で
あるのが好ましく、１．１０〜２．０倍程度であるのが
より好ましい。第１の空孔率に対する第２の空孔率の比
率がこの範囲の下限値を下回ると、目的細胞の種類や大
きさ等の条件によっては、空孔率の変更による目的細胞
の収率向上効果が十分に得られない場合があり、また、
この範囲の上限値を超えると、第１の空孔率が３３％未
満となり、目的細胞を含む被処理液の通過性が著しく損
われるため不適当となる場合があるからである。

【００５５】また、フィルター部材２１の圧縮状態にお
ける平均孔径を第１の孔径、フィルター部材２１の圧縮
力が解除された状態における平均孔径を第２の孔径とし
たとき、これら第１の孔径、第２の孔径は、目的細胞の
種類や大きさ等の諸条件に応じて適宜決定されるが、目
的細胞がリンパ球である場合には、第１の孔径は、好ま
しくは５μm 未満、より好ましくは２〜４．９μm 、第
２の孔径は、好ましくは５μm 以上、より好ましくは６
μm 以上とされる。

【００５６】このようなフィルター部材２１は、各高分
子多孔質膜２１１が同一のものでもよいが、各高分子多
孔質膜２１１が物理的または化学的特性に勾配を有する
ものであること、特に、各高分子多孔質膜２１１のうち
全部または一部が異なった物理的または化学的特性を有
していることが好ましい。この物理的または化学特性の
相違により、目的細胞の捕捉性および／または回収時の
離脱性が高められる。

【００５７】勾配を設ける物理的または化学的特性とし
ては、目的細胞の種類、サイズ、特性等の条件を１つの
要因として適宜決定され、それに勾配を設けることによ
りフィルター部材による目的細胞の捕捉性または回収時
の離脱性のうちの少なくとも一方が向上するようなもの
とする。

【００５８】このような勾配を持たせる例としては、空
孔率、平均孔径、ゼータ電位、または親水性のうちの少
なくとも１つが被処理液の通液方向に連続的または段階
的変化するように高分子多孔質膜を積層する構成が挙げ
られる。

【００５９】空孔率を変化させる積層の構成としては、
後述する第１のポート２２１１側から第２のポート２２
２１側に向けて空孔率が小さくなってゆくように高分子
多孔質膜２１１を順に積層する方法がある。

【００６０】平均孔径を変化させる積層の構成として
は、後述する第１のポート２２１１側から第２のポート
２２２１側に向けて平均孔径が小さくなってゆくように
高分子多孔質膜２１１を順に積層する方法がある。

【００６１】また、ゼータ電位を変化させる積層の構成
としては、第１のポート２２１１側から第２のポート２
２２１側に向けてゼータ電位が増加、特に負から正にな
るように高分子多孔質膜２１１を順に積層する方法があ
る。

【００６２】また、親水性を変化させる積層の構成とし
ては、第１のポート２２１１側から第２のポート２２２
１側に向けて親水性が小から大になるように高分子多孔
質膜２１１を順に積層する方法がある。

【００６３】これらの勾配の方向性は、これに限定され
るものではなく、目的細胞に応じて適宜変えることがで
きる。

【００６４】このようなフィルター部材２１の両面に
は、それぞれ、流路確保部材２３ａ、２３ｂが装着さ
れ、この状態でハウジング２２内に収納される。流路確
保部材２３ａ、２３ｂは、例えば圧縮の際のゆがみやひ
ずみを防止するための連通孔を有するポリカーボネート
製のスペーサ２３２と、該スペーサ２３２とフィルター
部材２１との間に挿入されたメッシュ（図示せず）とで
構成されている。

【００６５】流路確保部材２３ａの設置により、後述す
るリブ２２１２の内側に第１のポート２２１１に連通す
る空間が形成され、第１のポート２２１１から流入した
液体のフィルター部材２１への流路が確保され、流路確
保部材２３ｂの設置により、そのリブ２２１２の内側に
第２のポート２２２１に連通する空間が形成され、第２
のポート２２２１から流入した液体のフィルター部材２
１への流路が確保される。すなわち、フィルター部材２
１は、第１のポート２２１１に連通する空間と第２のポ
ート２２２１に連通する空間とを区画するようハウジン
グ２２内に設置される。

【００６６】また、流路確保部材２３ａ、２３ｂにおい
て、スペーサ２３２とフィルター部材２１との間にメッ
シュ（図示せず）を設置したことにより、リブ２２１２
の内側空間を液体が通過する際に、その液体がフィルタ
ー部材２１の面方向に均一に拡散され、濾過、洗浄、目
的細胞の回収等の効率が向上する。

【００６７】ハウジング２２は、ほぼ対象に構成される
第１ハウジング部材２２１および第２ハウジング部材２
２２で構成されている。

【００６８】第１ハウジング部材２２１および第２ハウ
ジング部材２２２の中央部には、ハウジング２２内に連
通し、被処理液流入口となる第１のポート２２１１、お
よび、ハウジング２２内に連通し、濾過済液流出口とな
る第２のポート２２２１が、それぞれ突出形成されてい
る。

【００６９】第１ハウジング部材２２１および第２ハウ
ジング部材２２２の内側には、それぞれ、フィルター部
材２１を圧縮するために流路確保部材２３ａ、２３ｂを
押圧する板状のリブ２２１２および２２２２が設けられ
ている。これらのリブ２２１２、２２２２は、それぞ
れ、ハウジング２２の中心軸から放射状に複数個づつ設
けられている。

【００７０】第１ハウジング部材２２１の上部内面は、
第１のポート２２１１に向かって収斂するような漏斗状
となっている。これにより、後述するプライミング時
に、気泡がこの内面に沿って浮上することができ、気泡
の抜け性が良くなる。

【００７１】第２ハウジング部材２２２の下部内面は、
ハウジング２２内の液の流れ、特に第２のポート２２２
１からの液の排出を円滑にするため、第２のポート２２
２１に向かって収斂するような漏斗状となっている。

【００７２】また、第１ハウジング部材２２１および第
２ハウジング部材２２２の外周部には、それぞれ、シー
ル部材２４を固定するための環状リブ２２１３、２２２
３が対向するように形成されている。

【００７３】このようなハウジング２２の外周部には、
円筒状のシール部材２４が設置されている。このシール
部材２４は、各種ゴムや熱可塑性エラストマー等の弾性
材料で構成され、その軸方向両端部がそれぞれ環状リブ
２２１３および２２２３に接着または融着されることに
より、ハウジング２２に対し液密に固着されている。

【００７４】前記環状リブ２２１３および２２２３は、
フィルター２１の圧縮状態では、各高分子多孔質膜２１
１の周縁端部を強く押圧するように形成されている。そ
のため、フィルター２１の圧縮状態において、フィルタ
ー装置２内を通過する被処理液が前記環状リブ２２１３
および２２２３を越えてフィルター部材２１の外周部へ
流出するのが抑制される。

【００７５】図２に示すフィルター部材２１の非圧縮状
態では、シール部材２４はほぼ円筒状をなしているが、
ハウジング２２に圧縮力Ｐを付与することにより、図３
に示すようにフィルター部材２１は圧縮状態となり、シ
ール部材２４はその軸方向中央部が外方へ突出するよう
に変形する。

【００７６】このようなシール部材２４の設置により、
フィルター部材２１の圧縮状態、非圧縮状態にかかわら
ず、ハウジング２２の液密性、特に無菌性が確保され
る。

【００７７】なお、シール部材２４の形状は、図示のも
のに限定されず、例えば蛇腹形状のものであってもよ
い。また、シール部材２４は、環状リブ２２１３、２２
２３の内側に固定されていてもよい。

【００７８】このフィルター装置２では、必要時に、図
示しない空孔率変更手段により、ハウジング２２に付与
する圧縮力Ｐを変えて、フィルター部材２１の圧縮状態
を変え、空孔率を変更することができる。

【００７９】この空孔率変更手段としては、例えば、少
なくとも一方が移動することにより接近、離間可能な一
対の押圧部材と、該押圧部材を接近、離間させるように
移動させる移動手段とで構成されたものが挙げられる。

【００８０】この空孔率変更手段の両押圧部材の間にフ
ィルター装置２を装填し、この状態で、前記押圧部材を
接近させることにより、フィルター装置２のハウジング
２２に圧縮力Ｐを付与し、ハウジング２２内のフィルタ
ー部材２１を圧縮することができる。

【００８１】また、前記押圧部材を離間させることによ
り、ハウジング２２に付与した圧縮力Ｐを解除し、ハウ
ジング２２内のフィルター部材２１の圧縮を解除するこ
とができる。

【００８２】以下、上記フィルター装置２に接続される
各コネクタと、各コネクタに接続される各ラインについ
て説明する。

【００８３】第１ライン３は、第１チューブ３０と、第
１クレンメ３１と、第１瓶針３２とを有している。

【００８４】第１チューブ３０の一端は、第２コネクタ
８の第１分岐管８１に接続されている。第１チューブ３
０の他端には、第１瓶針３２が接続されている。

【００８５】かかる第１瓶針３２を、図示しないプライ
ミング液が貯留されている容器（以下、「プライミング
液貯留容器」という）の弾性栓に穿刺することにより、
第１ライン３とプライミング液貯留容器とが接続され
る。これにより、フィルター装置２のフィルター部材２
１を含浸させるプライミング液を、プライミング液貯留
容器から、第１瓶針３２、第１チューブ３０、第２コネ
クタ８を介して、フィルター装置２に供給することがで
きる。

【００８６】さらに、目的細胞を回収する際には、プラ
イミング液貯留容器等から、第１瓶針３２、第１チュー
ブ３０、第２コネクタ８を介して、フィルター装置２で
捕捉した目的細胞を回収するための回収液をフィルター
装置２に供給することができる。

【００８７】すなわち、第１ライン３は、フィルター装
置２にプライミング液を供給する機能と、回収液を供給
する機能とを兼有する。

【００８８】第１チューブ３０は、十分な可とう性、柔
軟性を有し、クレンメ等による閉塞・開放に適し、また
滅菌に適した材料として、例えば、軟質ポリ塩化ビニル
で構成されている。

【００８９】なお、後述する第２チューブ４０、第３チ
ューブ５０、第４チューブ６０についても、第１チュー
ブ３０と同様な材料で構成されている。

【００９０】プライミング液としては、フィルター装置
２のフィルター部材２１を含浸させることが可能であれ
ば特に限定されないが、例えば、生理食塩水、リン酸緩
衝液、クエン酸緩衝液等の緩衝液、培養液、比重液、代
用血漿、またはこれらにアルブミンや血漿を添加したも
のなどが挙げられる。その中でも、後述する被処理液が
血液等の場合には、プライミング液は、血漿成分に近い
成分を有する液、例えば、生理食塩水、リン酸緩衝液、
培養液、またはこれらにアルブミンや血漿を添加したも
のなどが好ましい。

【００９１】回収液としては、フィルター装置２から目
的細胞を回収可能なものであれば特に限定されず、例え
ば、プライミング液と同様のもの、その他凍害保護液な
どが挙げられる。

【００９２】目的細胞がリンパ球や造血幹／前駆細胞で
ある場合には、回収液は、アルブミン含有生理食塩水等
のアルブミンを含有する液であることが好ましい。回収
液にアルブミンを含有していると、フィルター部材２１
からリンパ球や造血幹／前駆細胞がより離脱し易くなる
からである。

【００９３】これらプライミング液と回収液とは、同種
の液であることが好ましい。これにより、プライミング
液貯留容器内に貯留されたプライミング液を、後述する
第１クレンメ３１を操作するだけで回収液として用いる
ことができる。すなわち、プライミング液貯留容器を回
収液を供給する容器として兼用することができる。

【００９４】第１チューブ３０の途中には、液の流通の
開放・遮断を選択する開放・遮断手段として、第１クレ
ンメ３１が設置されている。

【００９５】この第１クレンメ３１の開閉操作により、
第１チューブ３０を圧閉・開放し、プライミング液や回
収液を必要時に必要量、第１チューブ３０に導入するこ
とができる。さらに、第１クレンメ３１で第１チューブ
３０を封止することにより、後述する被処理液が、第１
チューブ３０の他端側すなわち第１瓶針３２側へ流入す
るのを阻止する。

【００９６】第３ライン５は、第３チューブ５０と、第
３クレンメ５１と、貯留容器５２とを有している。

【００９７】第３チューブ５０の一端は、第１コネクタ
７の第１分岐管７１に接続されている。第３チューブ５
０の他端には、貯留容器５２が接続されている。

【００９８】フィルター装置２にプライミング液が供給
されると、プライミング液が第２のポート２２２１から
フィルター装置２内に流入し、ハウジング２２の内部が
プライミング液で満たされ、フィルター部材２１はプラ
イミング液で含浸される。さらにプライミング液を供給
すると、プライミング液が第１のポート２２１１からオ
ーバーフローし、プライミング液は、第３チューブ５０
を通り、貯留容器５２に導入され、貯留される。

【００９９】そして、この貯留容器５２に貯留された前
記余剰のプライミング液は、フィルター装置２を洗浄す
る際の洗浄液として用いられる。また、貯留容器５２
は、フィルター装置２を通過した前記目的細胞を含む回
収液を回収することができる。すなわち、貯留容器５２
は、前記余剰のプライミング液を貯留する機能と、前記
目的細胞を含む回収液を回収する機能とを兼有する。

【０１００】従って、第３チューブ５０は、第１のポー
ト２２１１から流出した前記余剰のプライミング液を貯
留容器５２に導入する流路となるとともに、前記洗浄液
をフィルター装置２に供給する流路となる。さらに、第
３チューブ５０は、フィルター装置２を通過した目的細
胞を含む回収液の流路として兼有される。

【０１０１】このように、フィルター部材２１を含浸し
た後、第１のポート２２１１から流出した余剰のプライ
ミング液を、後に洗浄液として用いることにより、フィ
ルター装置２を洗浄する洗浄液を新たに用意する必要が
なくなる。

【０１０２】また、細胞分離・回収装置１は、洗浄液を
注入するための注入口を設ける必要がないので、装置の
構成が従来のものより簡易となり、細胞分離・回収装置
１を従来のものより低いコストで製造することができ
る。

【０１０３】貯留容器５２は、例えば、ポリ塩化ビニル
等の軟質樹脂製の可とう性を有するシート材を重ね、そ
の周縁を融着または接着し、袋状としたバッグで構成さ
れている。

【０１０４】貯留容器５２の上部には、ピールタブによ
り開封可能な袋体で覆われ、先端が封止された短チュー
ブよりなる開口部５２１が形成されている。このピール
タブを引っ張り袋体を開封すると、そこから短チューブ
が露出する。この短チューブに例えば針管を穿刺するこ
とにより、該針管と短チューブとが連通し、貯留容器５
２内の、目的細胞を含む回収液をサンプリングすること
ができる。このサンプリングした液は、例えば、ウイル
スチェック、細胞の機能検査などの種々の検査・測定に
供することができる。

【０１０５】また、貯留容器５２の上部には、回収液回
収用チューブ５２２が接続されている。この回収液回収
用チューブ５２２の先端は、例えば、融着により封止さ
れている。そして、例えばチューブ無菌接続装置（実開
平６−２６８７７参照）等を用いることによって、回収
液回収用チューブ５２２と他のチューブとを無菌的に接
続し、この接続された回収液回収用チューブ５２２と他
のチューブとを介して、貯留容器５２内の回収液を回収
液回収用チューブ５２２から前記他のチューブに連通す
る別の容器へ移送することができる。

【０１０６】第３チューブ５０の途中には、液の流通の
開放・遮断を選択する開放・遮断手段として、第３クレ
ンメ５１が設置されている。

【０１０７】この第３クレンメ５１の開閉操作により、
第１チューブ３０を圧閉・開放し、洗浄液を必要時に、
第３チューブ５０に導入することができる。また、回収
液を貯留容器５２に導入することができる。さらに、第
３クレンメ５１で第３チューブ５０を封止することによ
り、被処理液が、貯留容器５２に流入するのを防止す
る。

【０１０８】第２ライン４は、第２チューブ４０と、第
２クレンメ４１と、第２瓶針４２とを有している。

【０１０９】第２チューブ４０の一端は、第１コネクタ
７の第２分岐管７２に接続されている。第２チューブ４
０の他端には、第２瓶針４２が接続されている。

【０１１０】かかる第２瓶針４２を、図示しない被処理
液が貯留されている容器（以下、「被処理液貯留容器」
という）の弾性栓に穿刺することにより、第２ライン４
と被処理液貯留容器とが接続される。これにより、分離
を目的とする目的細胞を含む被処理液を、被処理液貯留
容器から、第２瓶針４２、第２チューブ４０、第１コネ
クタ７を介して、フィルター装置２に供給することがで
きる。

【０１１１】細胞分離・回収装置１に用いられる被処理
液としては、フィルター装置２で分離可能な目的細胞を
含むものであれば特に限定されないが、例えば、血液、
リンパ液、髄液、さい帯血等の体液、血液成分（例えば
血漿、バフィーコート）等の体液を処理したもの、細胞
懸濁液などが挙げられる。

【０１１２】また、目的細胞としては、例えば、リンパ
球（全体またはそれらのうちの特定の細胞）、造血幹／
前駆細胞などの細胞が挙げられる。さらに、本発明にお
ける細胞には、前述したようないわゆる細胞のみなら
ず、例えば、細胞核、染色体、染色質、細胞膜状構造
物、オルガネラなどの生体微細組織も含まれる。

【０１１３】第２チューブ４０の途中には、液の流通の
開放・遮断を選択する開放・遮断手段として、第２クレ
ンメ４１が設置されている。

【０１１４】この第２クレンメ４１の開閉操作により、
第２チューブ４０を圧閉・開放し、被処理液を必要時
に、第２チューブ４０に導入することができる。さら
に、第２クレンメ４１で第２チューブ４０を封止するこ
とにより、プライミング液、洗浄液、回収液が、第２チ
ューブ４０の他端側すなわち第２瓶針４２側へ流入する
のを防止する。

【０１１５】なお、必要に応じ、第２ライン４の途中ま
たは端部に、メッシュ、織布、不織布、濾紙等の濾材を
設置してもよい。これにより、例えば、被処理液中に血
液の凝集塊等が含まれる場合には、これをあらかじめ
（フィルター装置２で被処理液を処理する前に）除去す
ることができ、フィルター装置２のフィルター部材２１
の目詰まりを防止することができるので、濾過の効率が
向上する。

【０１１６】第４ライン６は、第４チューブ６０と、第
４クレンメ６１と、廃液容器６２とを有している。

【０１１７】第４チューブ６０の一端は、第２コネクタ
８の第３分岐管８３に接続されている。第４チューブ６
０の他端には、廃液容器６２が接続されている。

【０１１８】フィルター装置２を通過した被処理液や洗
浄液は、第４チューブ６０を介して、廃液容器６２に送
液、貯留される。

【０１１９】廃液容器６２は、例えば、ポリ塩化ビニル
等の軟質樹脂製の可とう性を有するシート材を重ね、そ
の周縁を融着または接着し、袋状としたバッグで構成さ
れている。

【０１２０】廃液容器６２の上部には、ピールタブによ
り開封可能な袋体で覆われ、先端が封止された短チュー
ブよりなる２つの開口部６２１、６２１が形成されてい
る。このピールタブを引っ張り袋体を開封すると、そこ
から短チューブが露出する。この短チューブに、例えば
針管を穿刺することにより、該針管と短チューブとが連
通し、フィルター装置２を通過し廃液容器６２内に貯留
された被処理液等をサンプリングもしくは回収すること
ができる。そして、被処理液をサンプリングした場合に
は、かかるサンプリングした被処理液を、例えばウイル
スチェック等の種々の検査・測定に供することができ
る。

【０１２１】第４チューブ６０の途中には、液の流通の
開放・遮断を選択する開放・遮断手段として、第４クレ
ンメ６１が設置されている。

【０１２２】この第４クレンメ６１の開閉操作により、
第４チューブ６０を圧閉・開放し、フィルター装置２を
通過した液を必要時に、廃液容器６２に送液することが
できる。さらに、第４クレンメ６１で第４チューブ６０
を封止することにより、第１チューブ３０から供給され
たプライミング液や回収液が廃液容器に流入するのを防
止し、フィルター装置２へ供給されるようになる。

【０１２３】第１コネクタ７は、Ｙ字管で構成され、第
１分岐管７１と、第２分岐管７２と、第３分岐管７３と
を有している。第１分岐管７１には第３チューブ５０
が、第２分岐管７２には第２チューブ４０が、第３分岐
管７３にはフィルター装置２の第１のポート２２１１が
それぞれ接続されている。

【０１２４】図示のように、第１分岐管７１と第２分岐
管７２とは、互いに鋭角（９０°以下）となるように分
岐している。

【０１２５】このように、第１分岐管７１と第２分岐管
７２とを介して第３ライン５と第２ライン４とが互いに
鋭角となるように接続されることにより、被処理液が第
２チューブ４０からフィルター装置２に供給されると
き、被処理液が第３チューブ５０に流入しにくくなる。
そして、被処理液が第３チューブ５０に流入しにくくな
ると、第３チューブ５０の内壁に被処理液の成分が付着
する量が減り、目的細胞を貯留容器５２に回収する際
に、回収液に不要成分がより混入しにくくなる。

【０１２６】特に、被処理液が血液、血漿等の粘性の高
い液体である場合には、第２ライン４と第３ライン５と
が鋭角になるように接続されることにより、被処理液が
第３チューブ５０内に、より流入しにくくなる。一方、
洗浄液が、生理食塩水等の粘性の低い液体である場合に
は、洗浄液を第３チューブ５０から第２チューブ４０へ
容易に導入することができる。

【０１２７】なお、図示の例では、第３分岐管７３と第
１のポート２２１１とが直接接続されているが、これら
をチューブを介して接続してもよい。

【０１２８】第２コネクタ８は、ト字管で構成され、第
１分岐管８１と、第２分岐管８２と、第３分岐管８３と
を有している。第１分岐管８１には第１チューブ３０
が、第２分岐管８２にはフィルター装置２の第２のポー
ト２２２１（フィルター装置２に連通するライン）が、
第３分岐管８３には第４チューブ６０がそれぞれ接続さ
れている。

【０１２９】図示のように、第１分岐管８１と第２分岐
管８２とは、互いに鋭角（９０°以下）となるように分
岐している。

【０１３０】このように、第１分岐管８１と第２分岐管
８２とを介して第１チューブ３０とフィルター装置２の
第２のポート２２２１とが互いに鋭角となるように接続
されることにより、フィルター装置２から被処理液が第
４チューブ６０に流入するとき、被処理液が第１チュー
ブ３０に流入しにくくなる。そして、被処理液が第１チ
ューブ３０に流入しにくくなると、第１チューブ３０の
内壁に被処理液の成分が付着する量が減り、目的細胞を
貯留容器５２に回収する際に、回収液に不要成分がより
混入しにくくなる。

【０１３１】特に、被処理液が血液、血漿等の粘性の高
い液体である場合には、第１ライン３とフィルター装置
２に連通するラインとが鋭角になるように接続されるこ
とにより、被処理液が第１チューブ３０内に、より流入
しにくくなる。一方、プライミング液や回収液が、生理
食塩水等の粘性の低い液体である場合には、かかる液を
第１チューブ３０からフィルター装置２へ容易に供給す
ることができる。

【０１３２】なお、図示の例では、第２分岐管８２と第
２のポート２２２１とが直接接続されているが、これら
をチューブを介して接続してもよい。

【０１３３】以下、細胞分離・回収装置１の使用方法の
一例について説明する。まず、第１瓶針３２を、プライ
ミング液貯留容器に穿刺する。また、第２瓶針４２を、
被処理液貯留容器に穿刺する。

【０１３４】これにより、第１ライン３とプライミング
液貯留容器とが接続され、さらに、第２ライン４と被処
理液貯留容器とが接続される。

【０１３５】第１ライン３と第２ライン４とがそれぞれ
プライミング液貯留容器と被処理液貯留容器とに接続さ
れることにより、細胞分離・回収装置１は、閉鎖系を構
成し、以下の工程を閉鎖系内で行うことができるように
なる。従って、無菌的に目的細胞を分離・回収すること
ができる。

【０１３６】以下の各操作では、プライミング液、被処
理液、洗浄液、回収液を、重力による自然流下で送液す
る。

【０１３７】この場合、廃液容器６２よりもフィルター
装置２が高くなるように、フィルター装置２よりも被処
理液貯留容器が高くなるように、被処理液貯留容器より
も貯留容器５２が高くなるように、貯留容器５２よりも
プライミング液貯留容器が高くなるようにセットするこ
とが好ましい。すなわち、プライミング液貯留容器、貯
留容器５２、被処理液貯留容器、フィルター装置２、廃
液容器６２の順番で低くなるようにセットすることが好
ましい。

【０１３８】このとき、フィルター装置２は、気泡の浮
上による除去を促進するために、第１のポート２２１１
を鉛直上方に、第２のポート２２２１を鉛直下方にセッ
トすることが好ましい。

【０１３９】これにより、第１〜第４クレンメの開閉操
作だけで、プライミング液、被処理液、洗浄液、回収液
を適切に送液することができるようになる。

【０１４０】以下の各操作において、適宜第１〜第４ク
レンメを開閉するとともにフィルター部材２１を圧縮・
解放する。その開閉パターンおよび圧縮・解放パターン
を下記表１に示す。

【０１４１】

【表１】

【０１４２】［１］まず、フィルター部材２１を解放、
すなわちフィルター装置２に圧縮力を付与しない状態に
して、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パターンに
設定する。

【０１４３】これにより、プライミング液が、プライミ
ング液貯留容器から、第１瓶針３２、第１チューブ３
０、第２コネクタ８を通り、フィルター装置２へ供給さ
れる。

【０１４４】フィルター装置２へ供給されたプライミン
グ液は、第２のポート２２２１から、フィルター装置２
内に導入される。そして、フィルター装置２の内部の空
気がプライミング液で置換され、フィルター装置２の内
部はプライミング液で満たされる。

【０１４５】これにより、フィルター装置２内のフィル
ター部材２１は、プライミング液に含浸される。

【０１４６】さらにプライミング液がフィルター装置２
内へ供給されると、プライミング液がフィルター装置２
の第１のポート２２１１から溢れ、この溢れた余剰のプ
ライミング液が、第１コネクタ７、第３チューブ５０を
通過し、貯留容器５２内に導入され、貯留される。

【０１４７】このとき、プライミング液は、図１中下か
ら上にフィルター装置２を通過する。

【０１４８】フィルター装置２の内部はプライミング液
で満たされることにより、フィルター部材２１が湿潤
し、被処理液がフィルター部材２１を通過するのに好適
な状態になる。

【０１４９】また、フィルター装置２内の空気がプライ
ミング液に置換されると、フィルター装置２内に、被処
理液、洗浄液、回収液等の流路が確保され、これらの液
がフィルター部材２１を円滑に通過できるようになる。

【０１５０】本操作では、フィルター装置２にて、プラ
イミング液を鉛直下方から鉛直上方に通過させることが
好ましい。プライミング液を鉛直下方から鉛直上方に通
過させると、気泡の浮上が促進され、フィルター装置２
内の気泡の残存率をより減少させることができる。

【０１５１】なお、プライミング液がフィルター装置２
を通過している間に、適宜、脱気操作を行うことが好ま
しい。これにより、フィルター部材２１中の気泡の除去
が促進され、フィルター部材２１の実質的な有効膜面積
が増大し、被処理液、洗浄液、回収液等が、フィルター
部材２１をより円滑かつ効率よく通過できるようにな
る。従って、脱気操作により、被処理液をフィルター装
置２に通過させる濾過時間が短縮できるとともに、目的
細胞の回収率が向上する。

【０１５２】脱気操作は、例えば、フィルター部材２１
の圧縮率を１回または複数回変える方法、具体的には、
フィルター部材２１の圧縮（圧縮力の付与）と解放（圧
縮力の解除）を複数回繰り返すこと（以下、「ポンピン
グ」という）により行うことができる。

【０１５３】この圧縮、解放の程度は、任意でよく、前
述した第１の空孔率、第２の空孔率に設定する圧縮力と
は無関係である。

【０１５４】ポンピングを行う回数は、１回でもよい
が、複数回、特に、フィルター部材２１中の気泡が十分
に除去されるような回数を行うのが好ましい。フィルタ
ー部材２１中の気泡が十分に除去されるような回数とし
ては、例えば、第３チューブ５０内を気泡が上昇するの
が確認されなくなる程度にまでポンピングを繰り返した
ときの回数が挙げられる。

【０１５５】脱気操作の他の例としては、フィルター装
置２に振動や加速度を与えること、フィルター装置２に
プライミング液を急速に通過させることなどが挙げられ
る。

【０１５６】なお、この脱気操作は、プライミング液を
フィルター装置２に通液後であれば、被処理液をフィル
ター装置２に通過させるまでの間に、いつ行ってもよ
い。

【０１５７】［２］次に、フィルター部材２１を解放し
たまま、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パターン
に設定する。

【０１５８】これにより、貯留容器５２に貯留されたプ
ライミング液の一部が、第３チューブ５０、第１コネク
タ７を通り、第２チューブ４０内に導入され、第２チュ
ーブ４０内の空気がプライミング液に置換される。

【０１５９】このようにして、第２チューブ４０内の空
気を排除することにより、被処理液を被処理液貯留容器
からフィルター装置２へ供給する際に、第２チューブ４
０内の空気がフィルター装置２内に移動して、フィルタ
ー部材２１の実質的な有効膜面積を低下させることを防
止することができる。

【０１６０】［３］次に、第１〜第４クレンメを表１に
示す開閉パターンに設定し、フィルター部材２１の空孔
率を目的細胞の捕捉に適した第１の空孔率に設定（フィ
ルター部材２１を圧縮）する。

【０１６１】フィルター部材２１を圧縮すると、フィル
ター装置２内の容積が減少し、この減少分に相当するフ
ィルター装置２内のプライミング液が、第１のポート２
２１１から排出される。このとき、あらかじめ第３クレ
ンメ５１を開放しておくことにより、液の逃げ道ができ
るので、フィルター装置２内の内圧を上昇させることな
く、支障なくフィルター部材２１を圧縮することができ
る。

【０１６２】フィルター装置２の第１のポート２２１１
から流出した余剰のプライミング液は、第３チューブ５
０を通り、貯留容器５２内に導入され、貯留される。

【０１６３】［４］次に、フィルター部材２１を圧縮し
た状態で、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パター
ンに設定する。

【０１６４】これにより、被処理液が、被処理液貯留容
器から、第２瓶針４２、第２チューブ４０、第１コネク
タ７を通り、フィルター装置２へ供給される。

【０１６５】被処理液がフィルター装置２内を通過する
際に、目的細胞が、フィルター部材２１内に捕捉、分離
される。

【０１６６】フィルター装置２を通過した被処理液は、
第２コネクタ８、第４チューブ６０を通過し、廃液容器
６２に導入され、貯留される。

【０１６７】このとき、被処理液は、図１中上から下に
フィルター装置２を通過する。すなわち、前記［１］の
プライミングにおいてプライミング液がフィルター部材
２１を通過する方向と、被処理液が通過する方向とが逆
である。これにより、次工程における被処理液貯留容器
の内壁の洗浄が容易となる。

【０１６８】本発明では、フィルター装置２に被処理液
を通過させるだけで、目的細胞を捕捉、分離できるの
で、操作が簡易であり、容易に細胞を分離・回収でき
る。

【０１６９】［５］次に、フィルター部材２１を圧縮し
た状態で、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パター
ンに設定する。

【０１７０】これにより、貯留容器５２に貯留されたプ
ライミング液の一部が、洗浄液として、第３チューブ５
０、第１コネクタ７、第２チューブ４０、第２瓶針４２
を通り、被処理液貯留容器に導入される。

【０１７１】このとき、被処理液貯留容器を揺動する等
して、被処理液貯留容器内に導入された洗浄液で被処理
液貯留容器の内壁を洗浄する。

【０１７２】被処理液貯留容器の内部を洗浄することに
より、被処理液貯留容器内に残留した目的細胞をフィル
ター装置２に供給することができるようになり、目的細
胞の回収率の向上に寄与する。

【０１７３】［６］次に、フィルター部材２１を圧縮し
た状態で、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パター
ンに設定する。

【０１７４】これにより、被処理液貯留容器内に導入さ
れた残存目的細胞を含む洗浄液が、第２瓶針４２、第２
チューブ４０、第１コネクタ７を通り、フィルター装置
２へ供給される。

【０１７５】被処理液貯留容器内を洗浄した洗浄液がフ
ィルター装置２に供給されることにより、被処理液貯留
容器内に残存した目的細胞も、フィルター装置２を通過
する際にフィルター部材２１に捕捉される。

【０１７６】フィルター装置２を通過した洗浄液は、第
２コネクタ８、第４チューブ６０を通り、廃液容器６２
へ導入され、貯留される。

【０１７７】このとき、洗浄液は、図１中上から下にフ
ィルター装置２内を通過する。

【０１７８】なお、上記［５］および本操作により、第
２チューブ４０の内壁が洗浄される。これにより、目的
細胞を回収する際に、不要物質が回収液により混入しに
くくなる。

【０１７９】［７］次に、フィルター部材２１を圧縮し
た状態で、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パター
ンに設定する。

【０１８０】これにより、貯留容器５２内に貯留されて
いたプライミング液が洗浄液として、第３チューブ５
０、第１コネクタ７を通り、フィルター装置２へ供給さ
れる。

【０１８１】フィルター装置２に供給された洗浄液は、
フィルター装置２を通過し、第２コネクタ８、第４チュ
ーブ６０を通り、廃液容器６２へ導入され、貯留され
る。

【０１８２】洗浄液がフィルター装置２を通過する際、
フィルター装置２内に残存していた、特にフィルター部
材２１に付着していた目的細胞以外の不要物質が洗浄、
排出され、目的細胞を回収する際に、回収液に不要物質
が混入することが防止される。

【０１８３】洗浄液は、図１中上から下にフィルター装
置２を通過する。すなわち、前記［１］のプライミング
においてプライミング液がフィルター部材２１を通過す
る方向と洗浄液が通過する方向とが逆であり、前記
［４］の濾過において被処理液がフィルター部材２１を
通過する方向と洗浄液が通過する方向とが同じである。

【０１８４】被処理液がフィルター部材２１を通過する
方向と洗浄液が通過する方向とが同じであることによ
り、被処理液と洗浄液の廃液容器を兼用できる。すなわ
ち、細胞分離・回収装置１では、フィルター装置２を通
過して不要となった廃液を、すべて廃液容器６２に貯留
することができる。

【０１８５】また、前記プライミング液がフィルター部
材２１を通過する方向と洗浄液が通過する方向とが逆で
あることにより、洗浄効率を高めることができる。ま
た、前記プライミング液を洗浄液として用いることが容
易となる。

【０１８６】このように、貯留容器５２に貯留された
液、すなわちフィルター部材２１を含浸し、通過した余
剰のプライミング液を洗浄液として用いることにより、
フィルター装置２を洗浄する洗浄液を新たに用意する必
要がなくなる。

【０１８７】このため、フィルター装置２を洗浄する洗
浄液を節約することができる。特に、プライミング液が
希少な成分、高価な試薬等を含有しており、同様の試薬
を洗浄液にも含有させる必要がある場合には、プライミ
ング液を洗浄液として用いることにより、かかる試薬、
成分を節約することができる。

【０１８８】ゆえに、本発明によれば、目的細胞を分離
・回収する際のコストを下げることができる。

【０１８９】［８］次に、第１〜第４クレンメを表１に
示す開閉パターンに設定し、フィルター部材２１を目的
細胞の離脱に適した第２の空孔率に設定（フィルター部
材２１を解放）する。

【０１９０】フィルター部材２１を解放することによ
り、捕捉された目的細胞を、フィルター装置２を通過す
る回収液に遊離させることが可能となる。

【０１９１】フィルター部材２１を解放すると、フィル
ター装置２内の容積が増大する。このとき、あらかじめ
第１クレンメ３１を開放しておくことにより、第１ライ
ン３から回収液が供給されるので、フィルター装置２内
の内圧が減少せず、支障なくフィルター部材２１を解放
することができる。

【０１９２】なお、回収液の組成をプライミング液の組
成と変える場合には、フィルター部材２１を解放する前
に、例えばチューブ無菌接続装置等を用いることによっ
て、第１チューブ３０を、プライミング液貯留容器から
回収液が貯留された容器に無菌的に接続しなおす。

【０１９３】このとき、細胞分離・回収装置１内の無用
な液の移動を避けるため、第１クレンメ３１〜第４クレ
ンメ６１までの全てのクレンメを閉じて行うのが好まし
い。

【０１９４】回収液の組成と、プライミング液の組成が
同じ場合には、かかる操作は必要ない。

【０１９５】［９］次に、フィルター部材２１を解放し
た状態で、第１〜第４クレンメを表１に示す開閉パター
ンに設定する。

【０１９６】これにより、回収液が、プライミング液貯
留容器等から、第１瓶針３２、第１チューブ３０、第２
コネクタ８を通り、フィルター装置２へ供給される。

【０１９７】フィルター装置２へ供給された回収液が、
フィルター部材２１を通過する際に、フィルター部材２
１に捕捉された目的細胞が、フィルター部材２１から離
脱し、回収液中に遊離する。

【０１９８】かかる回収液は、第１コネクタ７、第３チ
ューブ５０を通り、貯留容器５２内に導入され、回収さ
れる。

【０１９９】このとき、回収液は、図１中下から上にフ
ィルター装置２を通過する。すなわち、前記［７］の洗
浄において洗浄液がフィルター部材２１を通過する方向
と、回収液が通過する方向とが逆である。

【０２００】これにより、貯留容器５２を、洗浄液を貯
留する容器と目的細胞を回収する容器とに兼用すること
が容易となる。さらには、フィルター部材２１の各高分
子多孔質膜２１１が物理的または化学的特性に勾配を有
するものである場合には、少量で効率良く目的細胞を回
収できるようになる。

【０２０１】なお、目的細胞を回収中に、適宜、フィル
ター部材２１およびその近傍の回収液の流れの方向およ
び／または流速が瞬間的に変わるような離脱操作を行う
ことが好ましい。これにより、フィルター部材２１から
目的細胞の離脱が促進され、目的細胞の回収率がより向
上する。

【０２０２】離脱操作としては、例えば、１または複数
回ポンピングを行うことが挙げられる。さらに他の離脱
操作として、例えば、フィルター装置２に振動や加速度
を与えることなどが挙げられる。

【０２０３】［１０］フィルター部材２１から目的細胞
を離脱させ、目的細胞を含む回収液を、貯留容器５２に
回収し終えたら、例えば、チューブシーラー等で第３チ
ューブ５０を封止し、この封止部を切断する。

【０２０４】これにより、目的細胞を貯留容器５２に無
菌的に回収することができる。

【０２０５】なお、上記［２］、［５］、［６］、［１
０］等の操作のうちのいずれか１つ以上は、行わなくて
もよい。

【０２０６】また、上記［２］の操作を行わず、上記
［３］の操作において、第１クレンメ３１と第３クレン
メ５１と第４クレンメ６１を閉塞し、第２クレンメ４１
を開放して、フィルター部材２１を圧縮することによ
り、フィルター装置２内の余剰のプライミング液を第２
チューブ４０内に導入し、第２チューブ４０内の空気を
プライミング液に置換してもよい。

【０２０７】これにより、上記［２］の操作を省略しつ
つ、フィルター部材２１の圧縮と第２チューブ４０内の
プライミングとを１つの工程で行うことができるので、
操作がより簡易となる。

【０２０８】なお、上記使用方法の一例では、プライミ
ング液、被処理液、洗浄液、回収液を、重力による自然
流下で送液したが、このときのプライミング液貯留容
器、貯留容器５２、被処理液貯留容器、フィルター装置
２、貯留容器６２の位置関係は上述したものに限られな
い。

【０２０９】また、上記使用方法の一例では、プライミ
ング液、被処理液、洗浄液、回収液を、重力による自然
流下で送液したが、これらの液は他の方法、例えば、ロ
ーラーポンプなどの低流速ポンプを用いて送液してもよ
い。

【０２１０】以上、本発明を添付図面に示す好適実施例
に基づいて説明したが、本発明はこれに限定されるもの
ではない。

【０２１１】例えば、第１チューブ３０、第２チューブ
４０、第３チューブ５０、第４チューブ６０の各チュー
ブにおいて、通過する液の流通の開放・遮断を選択する
開放・遮断手段は、クレンメ以外に、コッヘル、コッ
ク、バルブ等であってもよい。

【０２１２】また、第１チューブ３０、第２チューブ４
０の他端は、瓶針ではなく、例えば、コネクタ、三方活
栓、血液バッグ、注射針、エアフィルター等に接続され
ていてもよく、融着により封止されていてもよい。

【０２１３】また、第１コネクタ７は、Ｙ字管以外に、
例えばト字管で構成されていてもよい。

【０２１４】また、第２コネクタ８は、ト字管以外に、
例えばＹ字管で構成されていてもよい。

【０２１５】さらに、第１コネクタ７において、第２チ
ューブ４０に接続された分岐管と第３チューブ５０に接
続された分岐管、すなわち第１分岐管７１と第２分岐管
７２とは、互いに鋭角となるように分岐していなくても
よい。例えば、第１コネクタ７は、Ｔ字管などで構成さ
れていてもよい。

【０２１６】さらに、第２コネクタ８において、第１チ
ューブ３０に接続された分岐管とフィルター装置２に連
通するラインに接続された分岐管、すなわち第１分岐管
８１と第２分岐管８２とは、互いに鋭角となるように分
岐していなくてもよい。例えば、第２コネクタ８は、Ｔ
字管などで構成されていてもよい。

【０２１７】

【実施例】（実施例１） ［１］図２に示す構成のフィルター装置を製造した。

【０２１８】ハウジングの容積は、２０〜４０mlの範囲
とした。また、フィルター部材としては、第１のポート
２２１１側に大きい孔径を有するポリウレタン製多孔質
体シートを６枚、第２のポート２２２１側に小さい孔径
を有するポリウレタン製多孔質体シートを１枚積層した
ものを使用した。これら各ポリウレタン製多孔質体シー
トの有効径は６０mm、厚さは０．６mmであり、合計厚さ
は４．２mmであった。

【０２１９】また、積層したフィルター部材の両面と、
上流側スペーサ２３ａ及び下流側スペーサ２３ｂとの間
にポリプロピレン製メッシュを挿入した。

【０２２０】空孔率設定手段により、フィルター部材に
圧縮力を作用させない状態と、フィルター部材を合計厚
さ１．９mmに圧縮した状態とで、平均孔径および空孔率
をそれぞれ測定した。

【０２２１】その結果、非圧縮状態では、大きい孔径を
有する多孔質体シートの平均孔径は１５μm 、空孔率は
８３％であり、小さい孔径を有する多孔質体シートの平
均孔径は７μm 、空孔率は８３％であった。一方、圧縮
状態では、大きい孔径を有する多孔質体シートの平均孔
径は３μm 、空孔率は６１％であり、小さい孔径を有す
る多孔質体シートの平均孔径は２μm 、空孔率は６１％
であった。

【０２２２】なお、平均孔径の測定は、パームポロメー
タ（PMI Automated Capillary FlowPorometer, PMI(ポ
ロシマテリアルス社製））により行い、空孔率は、ウレ
タンの真比重と、かさ比重とから求めた。

【０２２３】［２］このフィルター装置を用い、図１に
示す細胞分離・回収装置にて、ヒト全血（被処理液）か
らリンパ球（目的細胞）を分離・回収する実験を行っ
た。

【０２２４】なお、貯留容器５２の容量は２００mlであ
り、廃液容器６２の容量は３５０mlであった。

【０２２５】まず、第１瓶針３２を０．５％アルブミン
添加生理食塩水が貯留されたバッグ（プライミング液貯
留容器）の弾性栓に穿刺し、第１チューブ３０とアルブ
ミン添加生理食塩水が貯留されたバッグとを接続した。
この０．５％アルブミン添加生理食塩水は、以下の操作
において、プライミング液（洗浄液）、回収液として使
用した。

【０２２６】また、第２瓶針４２を、抗凝固剤（クエン
酸）添加のヒト全血が貯留されたバッグ（被処理液貯留
容器）の接続口に穿刺し、第２チューブ４０とヒト全血
が貯留されたバッグとを接続した。このバッグには、ヒ
ト全血は、１００ml貯留されていた。

【０２２７】これにより、細胞分離・回収装置は、閉鎖
系を構成した。

【０２２８】次に、この閉鎖系を構成した細胞分離・回
収装置を、廃液容器６２よりもフィルター装置２が高く
なるように、フィルター装置２よりも被処理液貯留容器
が高くなるように、被処理液貯留容器よりも貯留容器５
２が高くなるように、貯留容器５２よりもプライミング
液貯留容器が高くなるようにセットした。すなわち、プ
ライミング液貯留容器、貯留容器５２、被処理液貯留容
器、フィルター装置２、廃液容器６２の順番で低くなる
ように、これら各容器および装置をセットした。

【０２２９】これにより、以下の操作において必要な液
の供給は、各容器の高低差、すなわち重力による自然流
下だけで行えるようになった。

【０２３０】［２．１］次に、第２クレンメ４１と第４
クレンメ６１を閉じ、第１クレンメ３１と第３クレンメ
５１を開けた。

【０２３１】これにより、プライミング液貯留容器か
ら、第１瓶針３２、第１チューブ３０、第２コネクタ８
を通り、フィルター装置２へプライミング液が供給さ
れ、フィルター装置２のフィルター部材２１が含浸され
た。

【０２３２】フィルター装置２を通過した余剰のプライ
ミング液は、第１コネクタ７、第３チューブ５０を通
り、貯留容器５２内に貯留された。

【０２３３】このとき、フィルター装置２内に存在した
空気が、円滑に第３チューブ５０内に移動し、円滑に第
３チューブ５０を通過したことが確認された。従って、
フィルター装置２内の空気が円滑にプライミング液に置
換されたことが確認された。

【０２３４】この作業は、フィルター部材２１を解放し
た状態で行った。

【０２３５】なお、フィルター装置２へ供給したプライ
ミング液は、計１１０mlであり、これを約１分間かけて
フィルター装置２へ供給した。

【０２３６】［２．２］次に、第１クレンメ３１と第４
クレンメ６１を閉じ、第２クレンメ４１と第３クレンメ
５１を開けた。

【０２３７】これにより、貯留容器５２に貯留されたプ
ライミング液の一部が、第３チューブ５０、第１コネク
タ７を通り、第２チューブ４０に導入され、第２チュー
ブ４０内部の空気が除去された。

【０２３８】［２．３］次に、第３クレンメ５１と第２
クレンメ４１と第４クレンメ６１を閉じ、第１クレンメ
３１を開け、空孔率設定手段により、フィルター部材２
１を圧縮した。

【０２３９】［２．４］次に、第１クレンメ３１と第３
クレンメ５１を閉じ、第２クレンメ４１と第４クレンメ
６１を開けた。

【０２４０】これにより、すべての被処理液が、被処理
液貯留容器から、第２瓶針４２、第２チューブ４０、第
１コネクタ７を通り、フィルター装置２へ供給され、さ
らに、フィルター装置２を通過し、第２コネクタ８、第
４チューブ６０を通り、廃液容器６２に貯留された。

【０２４１】フィルター装置２をすべての被処理液が通
過するのに要した時間（以下、「濾過時間」という）は
約６分であった。

【０２４２】［２．５］次に、第１クレンメ３１と第４
クレンメ６１を閉じ、第２クレンメ４１と第３クレンメ
５１を開けた。

【０２４３】これにより、貯留容器５２に貯留されたプ
ライミング液の一部が、洗浄液として、第３チューブ５
０、第１コネクタ７、第２チューブ４０、第２瓶針４２
を通り、被処理液貯留容器に流入した。

【０２４４】このとき、被処理液貯留容器を動かし、被
処理液貯留容器の内壁を、流入してきた洗浄液で洗っ
た。

【０２４５】［２．６］次に、第１クレンメ３１と第３
クレンメ５１を閉じ、第２クレンメ４１と第４クレンメ
６１を開けた。

【０２４６】これにより、被処理液貯留容器内に存在し
た洗浄液は、第２瓶針４２、第２チューブ４０、第１コ
ネクタ７を通り、フィルター装置２へ供給され、フィル
ター装置２を通過し、第２コネクタ８、第４チューブ６
０を通り、廃液容器６２へ貯留された。

【０２４７】なお、上記［２．５］および本操作によ
り、第２チューブ４０の内壁にわずかに残存した被処理
液が、洗浄された。

【０２４８】［２．７］次に、第１クレンメ３１と第２
クレンメ４１を閉じ、第３クレンメ５１と第４クレンメ
６１を開けた。

【０２４９】これにより、貯留容器５２内に貯留された
プライミング液が、洗浄液として、第３チューブ５０、
第１コネクタ７を通り、フィルター装置２へ供給され、
フィルター装置２を通過し、第２コネクタ８、第４チュ
ーブ６０を通り、廃液容器６２へ貯留された。

【０２５０】貯留容器からフィルター装置２へ供給され
た洗浄液は、７０mlであり、これを約２分間かけてフィ
ルター装置２へ供給した。

【０２５１】なお、従来の技術では、上記［２．５］、
［２．６］の操作を行わない場合でも、洗浄液として７
０mlのアルブミン添加生理食塩水が新たに必要である。
一方、本実施例では、フィルター装置２を含浸したプラ
イミング液を洗浄液として再利用することにより、７０
mlのアルブミン添加生理食塩水を節約するのに成功し
た。

【０２５２】［２．８］次に、第２クレンメ４１と第３
クレンメ５１と第４クレンメ６１を閉じ、第１クレンメ
３１を開け、空孔率設定手段により、フィルター部材２
１を解放した。

【０２５３】［２．９］次に、第２クレンメ４１と第４
クレンメ６１を閉じ、第１クレンメ３１と第３クレンメ
５１を開けた。

【０２５４】これにより、回収液が、プライミング液貯
留容器から、第１瓶針３２、第１チューブ３０、第２コ
ネクタ８を通り、フィルター装置２へ供給され、フィル
ター装置２を通過し、第１コネクタ７、第３チューブ５
０を通り、貯留容器５２に貯留された。

【０２５５】フィルター装置２へ供給した回収液の液量
は、１００mlであり、これを約１分間かけてフィルター
装置２へ供給した。

【０２５６】［３］そして、貯留容器５２に貯留された
回収液中の細胞数を細胞計数装置により測定し、リンパ
球の回収率を求めた。また、同様に、回収液中の不要成
分である赤血球、血小板の回収率も求めた。

【０２５７】（実施例２）プライミング（上記工程
［２．１］）中に、脱気操作としてポンピングを行った
こと以外は、実施例１と同様の実験を行った。

【０２５８】ポンピングは、第３チューブ５０中に気泡
が浮上してくるのが確認されなくなるまで繰り返した。

【０２５９】（実施例３）目的細胞を回収（上記工程
［２．９］）中に、離脱操作としてポンピングを行った
こと以外は、実施例１と同様の実験を行った。

【０２６０】ポンピングは、目的細胞を回収中、５〜６
回程度フィルター部材２１の圧縮、解放を繰り返すこと
により行った。

【０２６１】（実施例４）プライミング（上記工程
［２．１］）中に、脱気操作としてポンピングを行い、
目的細胞を回収（上記工程［２．９］）中に、離脱操作
としてポンピングを行ったこと以外は、実施例１と同様
の実験を行った。

【０２６２】プライミング時のポンピングは、第３チュ
ーブ５０中に気泡が浮上してくるのが確認されなくなる
まで繰り返した。回収時のポンピングは、目的細胞を回
収中、５〜６回程度フィルター部材２１の圧縮、解放を
繰り返すことにより行った。

【０２６３】（実施例５）細胞分離・回収装置の第１コ
ネクタ７をＹ字管の代わりにＴ字管で構成し、第２コネ
クタ８をト字管の代わりにＴ字管で構成したこと以外は
実施例４と同様の実験を行った。

【０２６４】第１コネクタ７において、第１分岐管７１
と第２分岐管７２とが、直線をなすように分岐してお
り、第２コネクタ８において、第１分岐管８１と第２分
岐管８２とが、直線をなすように分岐していた。

【０２６５】（比較例１）プライミング（上記工程
［２．１］）を行わなかったこと以外は実施例１と同様
の実験を行った。

【０２６６】なお、洗浄に用いた洗浄液は、チューブ無
菌接続装置を用いて、第３チューブ５０を、空の貯留容
器５２から０．５％アルブミン添加生理食塩水が７０ml
貯留された貯留容器５２と同様の容器に接続しなおすこ
とにより供給した。

【０２６７】（比較例２）洗浄（上記工程［２．５］〜
［２．７］）を行わなかったこと以外は実施例１と同様
の実験を行った。

【０２６８】なお、貯留容器５２に貯留されたプライミ
ング液は、チューブ無菌接続装置を用いて、第３チュー
ブ５０を、洗浄液が貯留された貯留容器５２から空の貯
留容器５２と同様の容器に接続しなおすことにより除去
した。

【０２６９】（比較例３）フィルター部材２１を解放せ
ずに圧縮した状態で目的細胞の回収を行った、すなわち
上記工程［２．８］を行わなかったこと以外は実施例１
と同様の実験を行った。

【０２７０】（比較例４）フィルター部材２１を圧縮せ
ずに解放した状態で被処理液の濾過を行った、すなわち
上記工程［２．３］を行わなかったこと以外は実施例１
と同様の実験を行った。

【０２７１】これら実施例１〜５および比較例１〜４に
おける操作の条件を下記表２に示す。

【０２７２】

【表２】

【０２７３】また、実施例１〜５および比較例１〜４に
おける濾過時間、リンパ球、赤血球および血小板の回収
率を下記表３に示す。

【０２７４】

【表３】

【０２７５】表３の結果に示されるように、実施例１で
は、非常に高い回収率でリンパ球を、ヒト全血から分離
・回収できることが確認された。それと同時に、赤血
球、血小板等の不要成分を非常に効率よく除去できる、
すなわち、非常に高純度でリンパ球を回収できることが
確認された。

【０２７６】しかも、短い濾過時間で、目的細胞の分離
・回収を効率よく行えることが確認された。

【０２７７】表３の結果に示されるように、実施例２で
は、実施例１と同様に、非常に高い回収率でリンパ球
を、ヒト全血から分離・回収できることが確認された。
それと同時に、実施例１と同様に、赤血球、血小板等の
不要成分を非常に効率よく除去できる、すなわち、非常
に高純度でリンパ球を回収できることが確認された。

【０２７８】しかも、実施例１よりも、濾過時間がより
短縮された。これにより、被処理液をフィルター装置２
に供給する前に脱気操作を行うと、濾過時間をより短縮
することができ、目的細胞の分離・回収をより効率よく
行うことができることが確認された。

【０２７９】表３の結果に示されるように、実施例３で
は、実施例１よりもさらに高い回収率でリンパ球を、ヒ
ト全血から分離・回収できることが確認された。それと
同時に、実施例１と同様に、赤血球、血小板等の不要成
分を非常に効率よく除去できる、すなわち、非常に高純
度でリンパ球を回収できることが確認された。これによ
り、目的細胞の回収中に離脱操作を行うと、目的細胞の
回収率をさらに高めることができることが確認された。

【０２８０】しかも、実施例１と同様の短い濾過時間
で、目的細胞の分離・回収を効率よく行えることが確認
された。

【０２８１】表３の結果に示されるように、実施例４で
は、実施例１よりもさらに高い回収率でリンパ球を、ヒ
ト全血から分離・回収できることが確認された。それと
同時に、実施例１と同様に、赤血球、血小板等の不要成
分を非常に効率よく除去できる、すなわち、非常に高純
度でリンパ球を回収できることが確認された。これによ
り、目的細胞の回収中に離脱操作を行うと、目的とする
目的細胞の回収率をさらに高めることができることが確
認された。

【０２８２】しかも、実施例１よりも、濾過時間がより
短縮された。これにより、被処理液をフィルター装置２
に供給する前に脱気操作を行うと、濾過時間をより短縮
することができ、目的細胞の分離・回収をより効率よく
行うことができることが確認された。

【０２８３】表３の結果に示されるように、実施例５で
は、実施例４と同様の非常に高い回収率でリンパ球を、
ヒト全血から分離・回収できることが確認された。それ
と同時に、実施例４に準ずる程度に、赤血球、血小板等
の不要成分を効率よく除去できる、すなわち、高純度で
リンパ球を回収できることが確認された。

【０２８４】しかも、実施例４と同様に、短い濾過時間
で、目的細胞の分離・回収を効率よく行えることが確認
された。

【０２８５】なお、実施例１〜５において、回収後のリ
ンパ球の生存率、機能は、それぞれ、実験前に被処理液
貯留容器に貯留されていたヒト全血中のリンパ球と相違
がなく、また、回収後のリンパ球にダメージはなかった
ことが確認された。

【０２８６】表３の結果に示されるように、プライミン
グを行わない比較例１では、濾過に非常に長時間を要す
ることが確認され、目的細胞の分離・回収を効率よく行
うことができないことが分かった。その原因は、フィル
ター装置２内、さらにはフィルター部材２１中に気泡が
多く存在し、フィルター部材２１の実質的な有効膜面積
が減少していたためと考えられる。

【０２８７】表３の結果に示されるように、洗浄を行わ
ない比較例２では、回収液に赤血球、血小板等の不要成
分が混入し、低純度でしかリンパ球を回収することがで
きないことが分かった。その原因は、フィルター装置２
内に残存していた不要物質やフィルター部材２１に付着
していた不要物質が、目的細胞回収時に、回収液に混入
したためと考えられる。

【０２８８】表３の結果に示されるように、フィルター
部材２１を解放しないで目的細胞の回収を行う比較例３
では、リンパ球をほとんど回収できないことが分かっ
た。その原因は、回収液がフィルター部材２１を通過す
るときに、目的細胞がフィルター部材２１から離脱でき
ず、回収液中に遊離しなかったためと考えられる。

【０２８９】表３の結果に示されるように、フィルター
部材２１を圧縮しないで被処理液の濾過を行う比較例４
では、リンパ球をほとんど回収できないことが分かっ
た。その原因は、被処理液がフィルター部材２１を通過
するときに、目的細胞がフィルター部材２１に捕捉され
なかったためと考えられる。

【０２９０】

【発明の効果】以上述べたように、本発明によれば、閉
鎖系で細胞を分離、回収できる。従って、無菌的に細胞
の分離、回収を行うことができる。

【０２９１】しかも、細胞分離・回収装置の構成が簡便
となり、かかる装置を製造する手間およびコストを下げ
ることができる。

【０２９２】また、短い濾過時間、かつ、高い回収率で
細胞の分離、回収を行うことができ、細胞の分離・回収
の効率がよい。

【０２９３】また、プライミングおよび洗浄に用いる液
の使用量を少なくできるので、より低コストで細胞を分
離、回収することができる。特に、かかる液が希少な成
分や高価な試薬等を含有する場合には、顕著にコストを
節約することができ、有用性が高い。

【０２９４】さらに、プライミングの開始時から細胞の
分離までの間に脱気操作を行うと、さらに濾過時間を短
く、回収率を高めることができ、細胞の分離・回収の効
率をさらに高めることができる。

【０２９５】さらに、細胞回収時に、離脱操作を行うと
細胞の回収率をさらに高めることができる。

【０２９６】さらに、フィルター装置に被処理液を供給
するラインと、フィルター装置を通過したプライミング
液を貯留する貯留容器を備えたラインとを接続するコネ
クタが、ト字管またはＹ字管であると、さらに高純度、
高収率でリンパ球を分離・回収することができる。

【０２９７】さらに、フィルター装置にプライミング液
を供給するラインと、フィルター装置に連通するライン
とを接続するコネクタが、ト字管またはＹ字管である
と、さらに高純度、高収率でリンパ球を分離・回収する
ことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の細胞分離・回収装置の実施例を示す回
路構成図である。

【図２】図１に示すフィルター装置の部分断面側面図で
ある。

【図３】図１に示すフィルター装置の部分断面側面図で
ある。

【符号の説明】

１ 細胞分離・回収装置 ２ フィルター装置 ２１ フィルター部材 ２１１ 各高分子多孔質膜 ２２ ハウジング ２２１ 第１ハウジング部材 ２２１１ 第１のポート ２２１２ リブ ２２１３ 環状リブ ２２２ 第２ハウジング部材 ２２２１ 第２のポート ２２２２ リブ ２２２３ 環状リブ ２３ａ 流路確保部材 ２３ｂ 流路確保部材 ２３２ スペーサ ２４ シール部材 ３ 第１ライン ３０ 第１チューブ ３１ 第１クレンメ ３２ 第１瓶針 ４ 第２ライン ４０ 第２チューブ ４１ 第２クレンメ ４２ 第２瓶針 ５ 第３ライン ５０ 第３チューブ ５１ 第３クレンメ ５２ 貯留容器 ５２１ 開口部 ５２２ 回収液回収用チューブ ６ 第４ライン ６０ 第４チューブ ６１ 第４クレンメ ６２ 廃液容器 ６２１ 開口部 ７ 第１コネクタ ７１ 第１分岐管 ７２ 第２分岐管 ７３ 第３分岐管 ８ 第２コネクタ ８１ 第１分岐管 ８２ 第２分岐管 ８３ 第３分岐管

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/48 Ｇ０１Ｎ 33/48 Ｐ (72)発明者 鮫島 正 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BB03 BB05 BB14 CB01 HA14 JA07 4B029 AA09 HA06 HA10 4C077 AA12 BB02 CC06 CC09 DD23 DD27 GG02 GG20 KK09 KK11 KK19 KK23 LL02 LL13 NN02 PP14 4D006 GA02 HA42 HA95 JA02A JA05A JA05C JA06A JA06C JA14A JA18A JA22A JA22C JA55C JA62A JA67A JA67C JA67Z JA70A JA71 KA13 KA31 KA61 KB17 KC02 KC03 KC16 KD30 KE11P KE12P KE13P KE22Q KE24Q KE28P MA03 MA22 MA24 MA31 MA40 MB09 MC23 MC33 MC53X MC55 MC68 PA01 PB09 PB42 PB43 PB52 PB70 PC41

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 空孔率を２以上の異なる空孔率に設定し
   得るフィルター部材を有するフィルター装置と、該フィ
   ルター装置にプライミング液を供給する第１のライン
   と、前記フィルター装置に分離目的である細胞を含む被
   処理液を供給する第２のラインと、前記フィルター装置
   を通過した前記プライミング液を貯留する貯留容器を備
   えた第３のラインとを有する細胞分離・回収装置であっ
   て、 前記貯留容器に貯留された前記プライミング液を、前記
   フィルター装置の洗浄に用いることを特徴とする細胞分
   離・回収装置。
2. 【請求項２】 前記第２のラインと前記第３のラインと
   を接続する第１のコネクタが、ト字管またはＹ字管であ
   る請求項１に記載の細胞分離・回収装置。
3. 【請求項３】 前記第１のラインと前記フィルター装置
   に連通するラインとを接続する第２のコネクタが、ト字
   管またはＹ字管である請求項１または２に記載の細胞分
   離・回収装置。
4. 【請求項４】 空孔率が変更可能な多孔質体よりなるフ
   ィルター部材を用いて目的とする細胞の分離回収を行う
   方法であって、 前記フィルター部材にプライミング液を含浸させるプラ
   イミング工程と、 前記フィルター部材の空孔率を前記細胞が捕捉可能な第
   １の空孔率に設定した状態で、被処理液を前記フィルタ
   ー部材に通過させて前記細胞の分離を行う分離工程と、 前記プライミング工程で前記フィルター部材を通過した
   余剰の前記プライミング液を、前記フィルター部材に再
   び通過させて前記フィルター部材を洗浄する洗浄工程
   と、 前記フィルター部材の空孔率を前記第１の空孔率より大
   きい第２の空孔率に設定した状態で、回収液を前記フィ
   ルター部材に通過させ、前記フィルター部材に捕捉され
   た前記細胞の回収を行う回収工程とを有することを特徴
   とする細胞の分離・回収方法。
5. 【請求項５】 前記一連の工程が閉鎖系で行われる請求
   項４に記載の細胞の分離・回収方法。
6. 【請求項６】 前記プライミングの開始から前記細胞の
   分離の開始までの間に、前記フィルター部材中の気泡を
   除去する脱気操作を行う請求項４または５に記載の細胞
   の分離・回収方法。
7. 【請求項７】 前記細胞の回収の途中で、前記フィルタ
   ー部材の圧縮率を複数回変えることにより、その空孔率
   を複数回変化させる離脱操作を行う請求項４ないし６の
   いずれかに記載の細胞の分離・回収方法。