HUT62917A - Process for producing hepqrin derivatives and pharmaceutical compositions comprising such active ingredient - Google Patents
Process for producing hepqrin derivatives and pharmaceutical compositions comprising such active ingredient Download PDFInfo
- Publication number
- HUT62917A HUT62917A HU922685A HU268592A HUT62917A HU T62917 A HUT62917 A HU T62917A HU 922685 A HU922685 A HU 922685A HU 268592 A HU268592 A HU 268592A HU T62917 A HUT62917 A HU T62917A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- heparin
- salts
- molecular weight
- process according
- derivatives
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
A jelen találmány olyan heparin-származékokra vonatkozik, amelyeknek a farmakológiai tulajdonágai a jelenleg forgalomban levő és az antikoaguláns terápiában használatos heparin készítményekétől eltérőek . Az uj származékok antitrombin aktivitása és az Xa faktorra és a vérlemezke faktor 4-re (PF^-re) gyakorolt hatása közötti viszony különbözik a heparin esetében tapasztalttól. Más szóval, a PF^gyel szemben affinitásuk jelentős, ugyanakkor a heparin által katalizált, az antitrombin III és trombin közötti reakcióra gyakorolt hatásuk mérsékelt .
Ezzel párhuzamosan, az antitrombin III és az Xa faktor közötti reakció, amelyet a heparin maga katalizál, még érzékenyebb az uj származékokra. Mivel a PF^-re és a trombin és Xa faktor által aktivált reakciókra a heparintól eltérő arányban hatnak, az uj vegyületek képesek a trombózis kialakulásának megakadályozására anélkül, hogy vérzést idéznének elő, ami a heparin trombózisellenes hatását kíséri. Megjegyzendő, hogy a vérzést okozó hatás felléphet a túlzott trombingátlás következményeként is. A találmány szerinti uj vegyületek PF^-hez való kötődési képessége, és az a tulajdonságuk, hogy az Xa faktor által aktivált reakciókra alcsony koncentrációban és a trombin által katalizált reakciókra csak magasabb koncentrációban fejtenek ki hatást, alkalmassá teszi ezen vegyületeket az artériás és vénás trombózisok kezelésére.
Az uj heparin-származékokat és sóikat úgy kapjuk, hogy (1 ) heparin kvaterner ammóniumsót heterogyürüs szerves oldószerben oldunk, az oldószer N-hidrokarbi1-pirro1idin-2 -3-
on vagy N-hidrokarbil-piperidin-2-on, amely helyettesítetlen vagy kevés szénatomos alkilcsoportokkal helyettesített, és ezek olyan származéka, amelyekben a heterogyürü egy heteroatommal vagy heteroatomot tartalmazó csoporttal, így oxigénvagy kénatommal vagy -NH-csoporttal van megszakítva, vagy valamely ilyen vegyület aprotikus oldószerben készült tömény oldata, és 6-nál több szénatomot tartalmazó szénhidrogénből származtatható alkilezőszerrel ( éterezőszerrel) hosszabb ideig kezelünk környezeti vagy annál egy kicsit magasabb hőmérsékleten , (2) a kapott terméket magas hőmérsékleten szerves vagy szervetlen bázis vizes oldatával kezeljük, (3) a szabad vagy alkálifémsó formájában kapott heparinszármazékot elkülönítjük, és kívánt esetben (4) a kapott vegyületet szabad formájúvá vagy alkálifémmel vagy más fémmel vagy szerves bázissal alkotott sóvá alakítjuk.
Az uj heparin-származékoknak nemcsak a fentebb említett farmakológiai tulajdonságaik különböznek a heparinétól, hanem kémiai szerkezetük és molekulatömegük is eltérő;
kémiai szerkezetüket még nem határoztuk meg teljesen.
Az azonban már bizonyos, hogy termékek keverékéből állnak, ezért molekulatömegük a kiindulási vagy közepes , a keverék egymáshoz anyagokhoz képest kicsi hasonló f rag ment uniókban gazdag és ezek molekulatömege ugyanazon szűk tartományba esik, és a fragmentumok csak kis részének molekulatömege téréi ettől a középértéktől,
-4b) a kiindulási anyagokhoz viszonyítva jelentősen csökkent bennük az iduron-tipusu szacharid-egység és a glükuron-tipusu egység aránya.
A heparint véve alapul, az uj származékokban fellelhető további változások részben azok, amelyeket a heparin észterek bázisos kezelése eredményeként kapott fragmentumokra vonatkozóan már leírtak, ilyen például a deszu1fatálás és a telítetlen mdnoÖZacharid egységek jelenléte.
Az uj 1 fezabmazékok azonosítása a kémiai vizsgálatok mellett a spektroszkópia,elsősorban a magmágneses rezonancia spektrum Segítségével történhet, amely különösen az irodalomban már leírt heparin fragmentumok és az uj származékok megkülönböztetésére ad lehetőséget.
A heparin kvaterner ammóniumsójának a szokásosan alkalmazott alkilezőszerekkel, azaz a kevés szénatomos szénhidrogénekkel, például kevés szénatomos alkil-halogenidekkel, így etil-bromiddal, valamely szokásos oldószerben, például dimeti1-szulfoxidban, dimeti1-formamidban végzett kezelése olyan heparin-észterek keletkezéséhez vezet, mint amilyeneket a 1 501 095 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetnek. Ha ezeket az észtereket bázissal reagáltatják, ami megfelel a jelen találmány szerinti eljárás második lépésének, a találmány szerintiektől eltérő heparin fragmentumokat kapnak, ami az NMR-analízisse1 kimutatható .
Az uj, kis molekulatömegü heparin-származékok, amelyeket a példákban írunk le, uj termékek, és jellemzésük főként nagyfrekvenciánál végzett NMR-spektroszkópia (400-500 MHz a • · ··
-5protonanalizis és 100-125 MHz a C-13 analízis esetében) alapján, a hagyományos egydimenziós spektrumok Fourier transzformációs vizsgálatával, az utóbbi időben közismertté vált kétdimenziós (a H-H és C-H korrelációjára vonatkozóan információt adó) módszerekkel, adott esetben még újabb, az ilyen bonyolult termékek tanulmányozásához szükséges eljárások ( például TOSCY = totál correlation spectroscopv) alkalmazásával lehetséges.
Az előzőekben említett módszerekkel végzett vizsgálatok eredményeként a következőket állapíthatjuk meg:
1) A találmány szerinti kis molekulatömegü heparin olyan oligoszacharidők bonyolult keveréke, amelyek a nitrogén- és oxigénatomon szülfatáltak, a kiindulási heparin heterogenitását tükrözve. Alapvetően IdoA és GlcnAc összetevőkből áll, amelyek eltérő módon szül fatáltak, és másodlagos komponensek ( főként GlcA) kapcsolódnak hozzájuk különféle' szekvenciális kombinációkat hozva létre.
2) A kiindulási heparinhoz viszonyítva a jelen találmány tárgyát képező termékek az IdoA/GlcN arányban jelentős csökkenést mutatnak, amely csökkenés az NMR vizsgálattal kimutatható. Ennek megfelelően a tipikus IdoA szekvencia anomer helyeinek jelei (2δθθ)-GlcNSOg) (6SO3) (102 és 99,5 ppm a szénre; 5,18 és 5,32 ppm a protonra) drasztikusan lecsökkennek. Ilyen átalakulások nem észlelhetők az ismert, kis molekulatömegü heparinokban, vagy ha igen, akkor sokkal kisebb mértékben. Ezzel párhuzamosan egy uj monoszacharid egység igen intenzív csúcsai jelennek meg ( ld. a 1.pontot ).
3) Egy további jellemző tény , hogy olyan uj szignálok • « ·
-6jelentkeznek a spektrumban ( 54,2 és 53,3 ppm-nél a szén és 3,73 és 3,68 ppm-nél a kapcsolatba hozható protonok esetében), amelyek a jelen esetben csak a GlcN maradék 2helyzetével hozhatók összefüggésbe, ahol a nitrogénatomhoz nem kapcsolódik -SO3H csoport. Ez a 2-D NMR vizsgálattal kimutatható jellegzetesség az ismert kis molekulatömegü heparinok spektrumából gyakorlatilag hiányzik.
4) Jellemző módon, a fenti oligoszacharidok legtöbbje telítetlen monoszacharid egységgel végződik, amelynek 1-2 helyzetében három helyettesítő kapcsolódik, mint az az NMR spektrumból látható (a C-13 spektrumban 147 és 172 ppm; a proton esetében 6 ppm-nél egy dublett). Ezek a jelek más ismert, alacsony molekulatömegü heparinok spektrumából hiányoznak, vagy nagyon gyengék.
Ezért arra kell következtetnünk, hogy a jelen találmány szerinti eljárásnak már az első lépésében nem egy egyszerű észterezés történik, hanem egy bonyolultabb kémiai reakció megy végbe.
Ezen adatok alapján tehát feltételezhetjük, hogy a jelen találmány szerinti heparinszerü termékek újak, és különböznek az irodalomban eddig leírt heparin fragmentumoktól. Például, eltérnek a 0 302 034 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett fragmentumoktól, amelyeket heparin-észterek bázissal való kezelésével kaptak, és amelyek rézionokkal angiogén hatású komplexeket képeznek. Ugyanígy, a 4,440,926 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett, jól meghatározott heparin észterekből 0,1-0,5 N nátrium-hidroxiddal 20 és 60°C közötti • ·· . .·· . ·. : . · · :: .
-7hömérsékleten kapott heparin fragmentumok is különböznek a jelen találmány szerinti termékektől.
A jelen találmány szerinti uj heparin-származékok fenti tulajdonságait a következő példákban mutatjuk be a szemléltető példákban leírt terméken, amelyet a következőkben PE rövidítéssel jelölünk. A kísérletekben nem-frakciónált (unfractioned, UFH) heparint és egy kis móltömegü heparinszármazékot (CY 216 = Fraxiparine^) használunk összehasonlítási anyagként. Mindkét termék a kereskedelemben kapható és trombózis kezelésére alkalmazható.
A rajzok rövid ismertetése
Az l.ábra a PE UFH-hoz és CY 216-hoz viszonyított in vi t ro antikoaguláns hatását mutatja trombin időben (s) kifejezve. Az adatok minden vizsgált termékre vonatkozóan 7-10 ismétlés középértékei.
A 2.ábrán a PE UFH-hoz és CY 216-hoz viszonyított ex vivő antikoaguláns hatása látható a trombin időnek megfelelően, i.v. adagolást követően. Az adatok minden vizsgált anyag esetében 5 nyullal végzett kísérletből származó értékek átlagai.
A 3.ábra a PE UFH-hoz és CY 216-hoz viszonyított ex vivő antikoaguláns hatását szemlélteti az anti-FXa hatás alapján ( eltűnési kinetikák s.c. adagolás után). Az adatok vizsgálandó anyagonként 5 nyullal végzett kísérletből származó értékek átlagai.
A 4.ábra a PF^-re kifejtett ex vivő aktivitást mutat ja a PE i.v. adagolását követően, az UFH-hoz és CY 216-hoz viszonyítva.
• · • ♦ « · • ·
-8l.In vitro antikoaguláns hatás regenerált humán ρ ] a z ni á r a
Anyagok és módszerek
Vizsgálandó anyagok ( oldás és koncentrációk)
A következő anyagokat vizsgáltuk:
- heparinszármazék PE
- nem-frakcionált heparin (UFH) kis molekulatömegü heparinszármazék (CY 216
Fraxiparin**)
A vizsgálandó anyagokat steril nátrium-klorid-oldatban oldottuk és 0,5 és 12,5 mikrogramm/ml koncentrációkban vizsgáltuk.
Paraméterek
1. Trombin idő ( az antikoaguláns hatás indikátoraként)
2. Anti-FXa hatás ( az antikoaguláns hatás indikátoraként)
Eredmények
1.Trombin idő
Az 1. ábrából világosan látszik, hogy
- a PE 1,25 mikrogramm/ml koncentrációtól kezdve fejt ki antikoaguláns hatást;
a PE antikoaguláns hatása jelentősen gyengébb a nemfrakcionált heparinénál ( a trombin idő az UFH-hoz viszonyítva kb. 4-5-ször nagyobb koncentrációknál nő).
A CY 216-tal összehasonlítva nem figyeltünk meg lényeges különbségeket.
2. Anti-FXa hatás
Az 1.Táblázatban az előzetes adatok arra utalnak, hogy
- a PE 3 mikrogramm/ml koncentrációtól kezdve fejt ki anti-FXa hatást;
- az anti-FXa hatás a heparinénál határozottan gyengébb.
··«· • : · · · · • · ·.·.!··♦ ..... ·. ·..· ·..·
-9Ezzel kapcsolatban megjegyezzük, hogy ez a hatás a CY
216-énál is gyengébb, de a különbség kisebb annál, mint amit az UFH-val kapcsolatban megfigyeltünk.
1.Táblázat
A PE in vitro anti-FXa hatása a nem-frakcionált heparinéhoz | |||
és a CY 216-éhoz viszonyítva | PE | ||
Koncentrációk(pg/ml) | UFH | CY 216 | |
0,5 | 0,336 | - | - |
1 | - | 0,331 | 0,342 |
1,5 | 0,281 | - | - |
2,5 | 0,212 | - | - |
3 | - | 0,261 | 0,296 |
3,5 | 0,179 | - | - |
5 | - | 0,200 | 0,245 |
7 | - | 0,158 | 0,201 |
Az adatok minden egyes vizsgált termékre vonatkozóan koncentrációnként három kísérlet átlagai.
2.Nyúl plazmára ex vivő gyakorolt antikoaguláns hatás i.v.
és s.c. adagolást követően
Az uj heparinszármazék (PE) antikoaguláns hatását nyúl plazmán ex vivő értékeltük. Az ex vivő kifejezés azt jelenti, hogy olyan állatból származó vérrel végzünk i n vitro méréseket, amelynek a kémiai anyagot beadtuk. Különösen a következőket vizsgáltuk:
a) trombin idő, artériás véren, a vizsgálandó anyagok akut • ·· · • ·
-10bólusz intravénás adagolását követően;
b) anti-FXa hatás , artériás véren, akut szubkután adagolást követően.
Ez az eljárás nagy érzékenysége következtében a vizsgálandó anyagok biológiai hozzáférhetőségét is megmutatja, mivel lehetővé teszi a szubkután beadott vizsgált anyag eltűnési kinetikájának követését.
A vizsgált anyagokat steril nátrium-klórid-ο1datbán oldottuk és 0,86 mg/kg koncentrációban intravénásán és 1-2 mg/kg koncentrációban szubkután gyorsan beadtuk.
A vizsgálat leírása
a) Trombin idő
E vizsgálat segítségével a vizsgált anyag bóluszának intravénás beadása után nyulak artériás vérmintáiban határozzuk meg a trombin időt különböző időközönként ( 2-5-1020-30-40 perc).
b) Anti-FXa hatás
Az anti-FXa hatásnak egy kromogén teszttel való mérésével, amely teszt a vegyület nagyon kis koncentrációira érzékeny, a vizsgált anyagokat a keringésben nagyon hosszú időn át követni tudjuk. Az artériás vérmintákat ( a fül központi artériájából) különböző időközönként ( 1-2-3-4-56-7-8 óránként) vesszük a szubkután adagolást követően.
Eredmények
a) Trombin idő
A 2.ábrából világosan látható, hogy
- a PE antikoaguláns hatása 0,86 mg/kg dózis intravénás beadása esetén kicsi,ami az in vitro adatokat támasztja alá;
-11« ·« · ·· ··· '·· ·· ·· • * · · * · · ·
a PE antikoaguláns hatása határozottan gyengébb az UFHénál, de nem tér el lényegesen a CY 216-étól.
b) Anti-FXa hatás
A 3.ábra azt mutatja, hogy
- a PE 1 mg/kg szubkután beadása után hosszab ideig megmarad a keringésben, mint a kétszeres, azaz 2 mg/kg dózisban szubkután beadott UFH.
A heparin-származék PE eltűnési kinetikája ezért lassúbb, mint az UFH-é, de hasonló a CY 216-éhoz.
3.A vérlemezke faktor 4-gyel (PF^-gyel) szembeni ex vivő af f initás
Az alábbi kísérletekben a jelen találmány szerinti uj heparin-származék (PE) affinitását humán határoztuk meg, azaz az ilyen anyagok tulajdonságát vizsgáltuk.
Az alkalmazott ex vivő módszer a PF4
PF4-gyel szemben keringésből való eltűnésének kinetikáját követte heparin jelenlétében és tá vollétében.
Jól ismert, hogy a heparin vagy a glikozamino-glikánok (GAGs) a PF4 előtt beadva, jelentősen fokozzák annak kinetikáját [G. Cella és munkatársai, Humán platelet factor 4 and protamin sulphate interaction with glyeosaminog1ycans in the rabbit, Eur.J.Cl in.Invest. , Vol. 17 , 548-554 ( 1987)].
Következésképpen azok a vegyületek, amelyek képesek a PF4~et megkötni, jelentősen meg kell hogy hosszabbítsák a PF4 keringésben való jelenlétét. Ez a hatás arányos a be injektált GAG mennyiségével és a PF4~gyel szembeni affinitásával .
-12A vizsgálandó anyagokat steril nátrium-klorid-ol datban oldottuk és 0,86 mg/kg mennyiségben intravénásán adtuk be.
A vizsgálat leírása
A vizsgálandó anyagokat gyorsan intravénás bólusz formájában adtuk be 0,86 mg/kg dózisban. Ezután 2-3 perccel a fül központi artériájából vettünk artériás vérmintákat ( alap minta). Az első bólusz beadása után 5 perccel egy második, tisztított humán PF^ bóluszt adtunk be (30 mikrogramm/kg).
A PF4 beadását követően 1,5-1,5-5-10-20-30 perccel vettünk mintákat. Ezeket centrifugáltuk, tároltuk és RIA teszt segítségével ( a kereskedelemben kapható kit) vizsgáltuk a humán PF4 tartalmukat.
Eredmények
Amint az a 4.ábrából leolvasható, a kapott adatok arra utalnak, hogy
- a PE affinitást mutat a PF^-gyel szemben, és fokozatosan eltűnik a keringésből, a beadás után 30 perccel már alacsony koncentrációban van jelen.
- A PE PF^-gyel szembeni affinitása sokkal kisebb, mint az UFH-é (annak kb. 60%-a), és a PF^-gyel képezett komplex eltűnési kinetikája is sokkal gyorsabb, mint az UFH-é, míg a CY 216-éhoz hasonló.
4.In vivő antitrombotikus hatás artériás trombózis modellen, nyulban vizsgálva
A következőkben leírt kísérlet az uj heparin-származék (PE) in vivő antitrombotikus hatását vizsgálja. Azt kívántuk meghatározni, hogy az anyagok milyen mértékben gátolják az ··*
-13artériás trombuszok képződését a nyúl nyaki verőerében a. belhám felsértésével és az ér keresztmetszetének csökkentésével létrehozott akut modellben.
A vizsgálandó anyagokat steril nátrium-klorid-oldatban oldottuk és l,2mg/kg-tól 6 mg/kg-ig változó mennyiségben intravénásán adtuk be.
A modell leírása
A nyulakat 30 mg/kg Nembutal intravénásán beadott bóluszinjekciójával érzéstelenítettük, és a fokozott légzés érdekében légcsövüket felmetszettük. A femorális vénába és artériába csövet helyeztünk, ezen adagoltuk folyamatosan az érzéstelenítőt és a vizsgálandó anyagot. A szisztémás vérnyomást állandóan figyelemmel kísértük, és a nyaki artériát egy áramlásmérővel és egy kaccsal kötöttük össze. Amikor a rendszer stabilizálódott, az eret elszorítottuk. Megfelelő, de 20 percnél nem rövidebb időközönként sebészeti csipeszszel mechanikai sérülést idéztünk elő és az eret a sérülés felett elszórítottuk· Az áramlásban bekövetkező csökkenést addig követtük, amíg az ér elzáródásának megfelelő 0 értéket el nem érte. A kontroll artériát ugyanilyen módon készítettük elő. Ezután a vizsgálandó anyagokat intravénás infúzió utján összesen 8 percig adagoltuk, a mechanikai károsodást. 2 perces infúzió után hoztuk létre. Az áramlást folyamatosan figyeltük, legalább a kezelést követő első óra végéig. Az állatot a kísérlet végén az érzéstelenítő túladagolásával leöltük.
Eredmények
Mint a 2.táblázatból is látható, a kapott adatok arra ···
-14utalnak, hogy
- a PE teljes mértékben megakadályozza az eret elzáró troinbusz képződését. A hatás 6 mg/kg intravénás dózis esetében nyilvánvaló;
- A PE trombózisellenes hatása kb. ötször gyengébb a nemfrakcionált heparinénál (UFH-énál), amely már 1,2 mg/kg dózisban megakadályozza az eret elzáró trombusz képződését; a PE farmakológiái hatékonysága a CY 216-éhoz hasonló.
2.Táblázat
A PE trombózisellenes hatása a nem-frakcionált heparinéhoz (UFH ) és a CY 216-éhoz viszonyítva nyulban, elsziikített, artériás modellben vizsgálva
Anyagok | Intravénás dózis | Elzáródásos állatok száma/ kezelt állatok száma |
UFH | 1,2 mg/kg | 2/12 |
PE | 6 mg/kg | 2/12 |
3 mg/kg | 6/8 | |
CY 216 | 6 mg/kg | 2/12 |
3 mg/kg | 5/9 |
5.In vivő trombózisellenes hatás vénás trombózisos modellben
Az alábbiakban leírt kísérletben a PE in vivő trombózisellens hatását vizsgáltuk meg patkányban, vénás trombózisos modellben.
A vénás pangásos technikát alkalmaztuk az alsó V.cava • * « ♦ • « · <·
-15elzárásával, mivel ez a módszer főként fibrinből álló Lrombuszok képződését idézi elő a V.cava és a bal renális véna elágazásának szintjén bekövetkező véráramlás-változás eredményeként. A vizsgált modell ezért érzékeny az antikoaguláns szerek hatására, és különösen a heparin trombózisellenes hatékonyságára ( beadás és elszorítás után).
A vizsgálandó vegyületeket steril nátrium-kloridoldatban oldottuk és intravénásán, a pangás előidézése előtt 15 perccel 0,5 és 3 mg/kg közötti dózisban intravénásán adagoltuk.
A vizsgálat leírása
A kísérletekhez 175-200 g testtömegü Ilim CD-COBS patkányokat használtunk. Az állatokat 40 mg/kg nátrium-pentobarbitál intravénás beadásával érzéstelenítettük, és az alsó részüket alkohollal fertőtlenítettük. Az alhasat középen, a bordáktól kezdve, 4 cm-es hosszúságban felmetszettük. A véna cavat az aortától a közös csípőartériáig elkülönítettük, és egy pamutszállal elkötöttük közvetlenül a bal renális véna elágazása alatt. A kétszeres elzárással állandó és folyamatos nyomást fejtettünk ki 5 másodpercen át. Az alhas falát aztán bezártuk. Két órával később ismét kinyitottuk, hogy a trombusz-képződést megvizsgáljuk. Miután a véna cavat és a közös csípőartériákat kizártuk és a cirkulácót hemosztáttal fenntartottuk, az érnek az elzáródás alatti részét egy tűvel hosszában felnyitottuk . A troinbuszt el távolítottuk és desztillált vízbe helyeztük, ezután papíron leitattuk róla a vizet, majd 24 órára szárítószekrénybe helyeztük, és· a száraz maradék tömegét mg-ban • · ·
-16mg-ban meghatároztuk.
Eredmények
A 3.Táblázatban látható, a trombusz tömegére (mg), és a
4.Táblázatban a trombózis gyakoriságára vonatkozó, a vénás elszorítás után 2 órával kapott adatok azt mutatják, hogy
- a PE trombózisellenes hatású; védohatása ( előkezelés) 1,5 mg/kg intravénás dózis esetén szignifikáns;
- a PE hatása a nem-frakcionált heparinénál (UFH-énál) rosszabb (az UFH már 0,5 mg/kg intravénás dózisban szignifikáns hatást fejt ki).
3.Táblázat
A PE in vivő trombózisellenes hatása az UFH-hoz viszonyítva véna-elszorításos modellben vizsgálva: a vizsgált anyagok i.v. beadása után 15 perccel létrehozott vénás elszorítás után 2 órával kapott trombusz tömegében (mg-ban) kifejezve
Dózisok (mg/kg i.v.) | ||||
Anyagok 0 η = 15 | 0,5 n = 14 | 1,0 n = 24 | 1,8 2,0 n = 20 n = 14 | 3,0 n = 14 |
PE 2,2 | 1,4 | 1,5 | 0,8* 0,0** | 0,0** |
UFH 2,2 | 0,7* | 0,5** | 0,02** | - |
* p < 0,05; ** p < 0,01 Dunnett-féle teszt n = az állatok száma
4.Táblázat
A PE in vivő trombózisellenes hatása az UFH-éhoz viszonyítva véna-elszórításos modellben vizsgálva: a vizsgált anyagok i.v. beadása után 15 perccel létrehozott vénás elszorítás után 2 órával kapott trombusz gyakorisága %-ban kifejezve
Dózisok (mg/kg | i.v. ) | |||||
Anyagok | 0 | 0,5 | 1,0 | 1,8 | 2,0 | 3,0 |
η = 15 | n = 14 | n = 24 | n = 20 | n = 14 | n = 14 | |
PE | 93,3 | 85,7 | 62,5 | 60,0 | 0,0 | 0,0 |
UFH | 93,3 | 57,1 | 50,0 | 14,3 | - | - |
n = az állatok száma
6.A vérzés idejére gyakorolt hatás patkányban
A következőkben leírt kísérlettel a PE azon hatását vizsgáltuk meg, amelyet a vizsgálandó anyagok intravénás adagolása után 15 perccel a vérzési időre gyakorolnak. A vizsgálandó anyagokat steril nátrium-klorid-oldatban oldottuk, és intravénásán 1 és 3 mg/kg közötti mennyiségben adtuk be .
A vizsgálat leírása
A kísérletekhez 175-200 g tömegű him CD-COBS patkányokat használtunk, amelyeknek a vizsgálandó anyagokat intravénásán, gyorsan adtuk be. A vérzési időt ( másodpercekben)
perccel később, a standard farok-felmetszési módszerrel határoztuk meg [Dejana és munkatársai, Bleeding tinié in rats: A comparison of different experimental conditions, Vérzési idő patkányokban: A különböző kísérleti körülmények összehasonlítása, Thromb. Haemostat. 48 , 108-111 ( 1982)].
Eredmények
A kapott, és az 5.Táblázatban feltüntetett adatok azt mutatják, hogy
- a PE vérzési időre gyakorolt hatása 2,0 mg/kg intravénás dózis esetében szignifikánsan emelkedik;
a PE hatása jelentősen rosszabb a nem-frakcionált heparinénál (UFH-énál), amely a vérzési időt már 1 mg/kg intravénás dózisnál jelentősen növeli, de a CY 216-éval összemérhető ( adatok nincsenek megadva).
Érdekes megjegyezni, hogy ugyanolyan vérzési idő eléréséhez a PE-ből legalább háromszor akkora dózist kell beadni, mint az UFH-ból.
5.Táblázat
A PE és UFH hatása a vérzési időre a vizsgálandó anyagok intravénás beadása után 15 perccel
Dózisok (mg/kg | i . v . ) | ||||
Anyagok | 0 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | 3,0 |
n = 14 | n = 14 | n = 14 | n = 14 | n = 14 | |
PE | 130 | 146 | 147 | 250* | 389** |
UFH | 130 | 413** | 487** | - | - |
• ·
-19* ρ < 0,05; ** ρ < 0,01 Dunnett-féle teszt η = az állatok száma
7. In vivő elviselhetöség i.v. és s.c. adagolást követően, egérben
Ebben a kísérletben a PE vegyület maximálisan tolerált dózisát határoztuk meg egérben intravénás és szubkután adagolás után.
A vizsgálandó anyagokat steril nátrium-klorid-oldatban oldottuk és 125 és 2000 mg/kg közötti dózisokat adtunk be intravénásán és szubkután .
A vizsgálat leírása
A kísérletet 25-35 g tömegű him és nőstény CD-1 egerekkel (CV.River) végeztük, és a következő lépésekből állt.
1) Screenelés. Egy hím és egy nőstény egérnek a következő dózisok egyikét adtuk be: 125, 250, 500, 1000 és 2000 mg/kg. A mortalitást a kezelést követően 7 napig kísértük figyelemmel .
2) Minden vegyület és adagolási mód esetében 5 hím és 5 nőstény egérből álló csoportokat kezeltünk a screenelés során megállapított legmagasabb tolerált dózissal. Az állatokat 14 órán át figyeltük, ezalatt a mortalitást, a viselkedésben bekövetkező változást és az általános mérgezési tüneteket regisztráltuk. A mortalitás esetében kisebb dózist alkalmaztunk, amíg a maximális tolerált dózist megtaláltuk. Ahol lehetséges volt, a kimúlt állatokat felboncoltuk.
Eredmények
1.Intravénás elviselhetőségi dózis
-20Amint az a 6. és 7.Táblázatokból látható, a vizsgált vegyületek maximális elviselt dózisai a következők:
- PE: 1000 mg/kg i.v.
- nem-frakcionált heparin (UFH): 125 mg/kg i.v.
- CY 216: 1000 mg/kg i.v.
Meg kell tehát jegyeznünk, hogy a PE elviselhető dózisa nagyobb, mint a nem-frakcionált hepariné ( UFH-é).
Az 500 és 250 mg/kg nem-frakcionált heparinnal (UFHval ) való kezelés után elpusztult állatok boncolása során makroszkopikus elváltozásokat nem találtunk, néhány állatban azonban a bélben feltehetően belső vérzés nyomai voltak láthatók.
2.Szubkután elviselhetőségi dózis
A kapott, és a 8. és 9.Táblázatban összefoglalt eredmények azt mutatják, hogy a vizsgált anyagok maximális elviselt dózisai a következők:
- PE: 2000 mg/kg s.c.
- nem-frakcionált heparin (UFH): 125 mg(kg s.c.
- CY 216: 2000 mg/kg s.c.
Az intravénás adagolási módhoz hasonlóan, a PE elviselhetőségi dózisa sokkal nagyobb a nem-frakcionált heparinénál ( UFH-énál), míg a CY_216-éhoz hasonló. Azonban fontos kiemelnünk a következőket:
Minden állatnál (10/10), amelyet CY 216-tal kezeltünk (2000 mg/kg s.c.), a háton, az injekció helyén köralaku folt volt látható, amely a bőr elhalása következtében alakult ki, és amelynek mérete állatról állatra változott, a maximális átmérő kb. 1 cm volt. A boncolás során
-21megállapítottuk, hogy az elhalás csak a bőrre korlátozódott, nem érintette az alatta lévő izmokat.
A 2000 mg/kg (s.c.) PE-vel kezelt állatok esetében anomáliákat nem észleltünk.
A 250 mg/kg UFH-val való kezelés után elpusztult állatoknál a szubkután dorzális régióban, ahol a kezelés történt, kiterjedt sérülés mutatkozott.
A szubkután elviselhetőségi adatok ezért különbséget mutatnak a PE és CY 216 között. Az igaz, hogy a maximális elviselhető dózisok azonosak, azonban a CY 216 esetében az injekció helye körül a bőr elhal, ami arra utal, hogy a CY 216 lokálisan kevésbé tolerálható, mint a PE, amelynél anomáliák nem jelentkeznek.
6.Táblázat
A PE, CY 216 és a nem-frakcionált heparin (UFH) letalitása egyetlen intravénás dózis beadása után (screenelés)
Kezelés | Elpusztult | állatok/Kezelt állatok |
(mg/kg i.v.) | him | nőstény |
PE 2000 | 0/1 | 0/1 |
PE 1000 | 0/1 | 0/1 |
PE 500 | 0/1 | 0/1 |
PE 250 | 0/1 | 0/1 |
PE 125 | 0/1 | 0/1 |
CY 216 2000 | 1/1 | 0/1 |
CY 216 1000 | 0/1 | 0/1 |
CY 216 500 | 0/1 | 0/1 |
···· * · · · · · · ·· • · · · · · · • . · · · · ·
-22( a 6.Táblázat folytatása)
Heparin | UFH | 2000 | 1/1 | 1/1 |
Heparin | UFH | 1000 | 1/1 | 1/1 |
Heparin | UFH | 500 | 0/1 | 0/1 |
Heparin | UFH | 250 | 0/1 | 0/1 |
Heparin | UFH | 125 | 0/1 | 0/1 |
7,Táblázat
A PE, CY 216 és a nem-frakcionált heparin (UFH) letalitása egyetlen intravénás dózis beadása után
Kezelés Elpusztult állatok/Kezelt állatok A halál ideje (mg/kg him nőstény a kezelés után
i.v.) (nap ) azonnal* 1234
PE 2000 | 3/7 | 1/5 | 2 | - 1 - 1 | |
PE 1000 | 0/5 | 0/5 | - | _ _ _ _ | |
CY 216 1000 | 0/5 | 0/5 | - | _ _ _ _ | |
Heparin UFH | 500 | 0/5 | 2/5 | - | 2 - - - |
Heparin UFH | 250 | 3/5 | 0/5 | - | 3 - - - |
Heparin UFH | 125 | 0/5 | 0/5 | - | - - - - |
* a kezelés perceiben
. Táblázat
A PE,CY 216 és a nem-frakcionált heparin (UFH) letalitása egyetlen dózis szubkután beadása után (screenelés)
Kezelés Elpusztult állatok/Kezelt állatok (mg/kg s.c.) him nőstény
PE | 2000 | 0/1 | 0/1 | ||
PE | 1000 | 0/1 | 0/1 | ||
PE | 500 | 0/1 | 0/1 | ||
PE | 250 | 0/1 | 0/1 | ||
PE | 125 | 0/1 | 0/1 | ||
CY | 216 : | 2000 | 1/1 | 0/1 | |
CY | 216 | 1000 | 0/1 | 0/1 | |
CY | 216 | 500 | 0/1 | 0/1 | |
Heparin | UFH | 2000 | 1/1 | 1/1 | |
Heparin | UFH | 1000 | 1/1 | 0/1 | |
Heparin | UFH | 500 | 1/1 | 0/1 | |
Heparin | UFH | 250 | 0/1 | 0/1 | |
Heparin | UFH | 125 | 0/1 | 0/1 |
···· « ···· ·« ·· • · · · · · · • * · · · · · « · · · ·· · · ·
-249.Táblázat
A PE, CY 216 és a nem-frakcionált heparin (UFH) letalitása egyetlen dózis szubkután beadása után
Kezelés Elpusztult állatok/Kezelt állatok A halál ideje
(mg/kg | him | nőstény | a kezelés után | |
i.v. ) | ( nap ) | |||
azonnal 1234 | ||||
PE 2000 | 0/5 | 0/5 | _ _ _ _ | |
CY 216 2000 | 0/5 | 0/5 | _ _ _ _ | |
Heparin UFH | 250 | 1/5 | 2/5 | 2 1 - - |
Heparin UFH | 125 | 0/5 | 0/5 | — _ _ _ _ |
Következtetések
Az előzőekben leírt módon kapott in vitro és in vivő eredmények a PE heparin-származék érdekes farmakológiai profilját körvonalazzák, ami különbözik a nem-frakóiónált heparinétól (UFH-étól) és a PE farmakológiai hatását még értékesebbé teszi.
A PE hatása csekély mértékben különbözik a CY 216-étól, amely egyike a Franciaországban forgalomban levő legjobb kis molekulatömegü heparinoknak, és egérben, szubkután adagolva sokkal jobb helyi elviselhetőséget mutat.Noha a maximális elviselhető dózisok azonosak, minden CY 216-tal (2000 mg/kg
s.c.) kezelt állat esetében az injekció helyén a bőr elhalt,
-25míg a PE-vel kezelt állatok bőre változatlan marad t.
Az in vitro és in v ivó farmakológiai hatás esetében érdekes megjegyezni, hogy a PE antikoaguláns hatása sokkal rosszabb, mint az UFH-é;
szubkután adagolást követően a biológiai hozzáférhetősége sokkal nagyobb, mint az UFH-é, ezáltal ugyanolyan gyógyászati hatás eléréséhez kisebb napi dózis szükséges;
- kevesebb a mellékhatás, ez az UFH-hoz viszonyítva a csökkent vérzési időből látható, és nem okoz bőrelhalást az injekció helyén, mint a CY 216 ( a Franciaországban forgalomban levő legjobb kis molekulatömegü heparin), amely helyi intoleranciás jelenséget (bőrelhalást) okoz minden kezelt állat esetében;
- in vivő trombózisellenes hatású, mint az patkányban a véna-szükítéses és nyulban az artériás trombózis modell kísérletben látható. A termék ezen patológiás elváltozásokat 1,5 illetve 6 mg/kg dózisban megakadályozza, amely dózisok nem okoznak semmilyen jelentős változást a mellékhatásokban. Különösen a vénás trombózis elleni hatást tekintve, a PE 1,5 mg/kg intravénás dózisban, az UFH-tól eltérően, nem okoz semmilyen változást a vérzési időben.
A jelen találmány szerinti uj, kis molekulatömegü heparin-származékok ezért minden indikáció esetében használ hatók a nem-frakcionált heparin helyett antikoagu 1 ánsként, és trombocita aggregáció gátlóként. Az egyes esetekben alkalmazható intravénás dózisok 1 és 7 mg/kg/nap között vannak.
Az előzőekben ismertetett találmány szerinti eljárásban különböző eredetű és tipusu heparinok, így a sertés, szar• · · ·
-26• V ·* · ·· ·· • · · · · · · • · » · · · · • a*····· vasmarha és birka beléből, ökörszívből extrakcióval kinyert, különösen a kereskedelemben kapható vagy az irodalomban leírt heparinok használhatók. Az ilyen termékek molekulatömege széles tartományban, például 2000 és 30 000 dalton között változik, különösen a nem-frakcionált hepariné (az UFH-é), és vannak a standard (2000 - 10000 dalton molekulatömegű) heparinok frakcionálásával kapható kis molekulatömegű heparinok, és a standard heparinok kémiai vagy enzimatikus utón való részleges depóiimerizálásával kapott 50010 000 dalton molekulatömegü heparin fragmentumok. Az említett eljárásban kiindulási anyagként használandó kvaterner ammóniumsókat ismert módon, például a heparin nátrium- vagy káliumsójának vizes oldatát kvaterner ammóniumsó formájában levő gyantán, például kvaterner ammónium-bázisokka1 sóvá alakított szulfonsavas gyantán, ioncseréléssel állíthatjuk elő. A kvaterner ammóniumsót az eluátum fagyasztva szárításával kaphatjuk. Kvaterner ammóniumsókként előnyösen kevés szénatomos alkilcsoportokat tartalmazó tetraalkil-aminóniumsókat, különösen a maximálisan 6 szénatomos alkilcsoportokat tartalmazó tetraalkil-ammónium-sókat használhatjuk. Adott esetben alkil-aril-ammónium-sókat is alkalmazhatunk, például olyanokat, amelyekben az alkilcsoport hosszú szénláncu. A tetraalkil-ammónium-sók közül a tetrabuti1-ammónium-sók előnyösek. A jelen találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként használandó kvaterner ammóniumsókat a fenti módon, az iparban használatos tipusu heparin alkálifémmel alkotott sóiból, például nátrium- vagy káliumsóiból , azaz semleges sóiból kapjuk ioncserével. Ezeket a kvaterner • «· ·
-27ammóniumionok feleslegével reagáltatjuk, úgy, hogy szintén a megfelelő semleges sók képződjenek.
A kvaterner ammóniumsók mind a korábban említett hete rogyürüs oldószerekben, mind az aprotikus szerves oldószerekben, így például dimetil-szulfoxidban és dimetil-formamidban oldódnak. Az alkilező szerrel való reakciót az e 1 járás első lépésének megfelelően például a fenti gyűrűs oldószerben vagy annak valamely aprotikus szerves oldószerben készült, előnyösen tömény oldatában végezzük. Az említett heterogyürüs oldószerek közül mindenekelőtt azok előnyösek, amelyek a gyűrűben nem tartalmaznak helyettesitőkét, ilyenek az
N-alkil-O-aril-2-pirrolidonok vagy ezek olyan származékai amelyek a gyűrűs szerkezetben heteroatomot tartalmaznak például az imidazolin, piperazin vagy morfolin megfelelő származékai. A heterogyürüs oldószerek
N-alki1-csoportjai előnyösen kevés, maximálisan 6 szénatomos alkilcsoportok, és az arilcsoport elsősorban fenilcsoport, amely adott esetben 1-3 kevés szénatomos alkilcsoporttal, különösen metilcsoporttal helyettesített.
Előnyösen az Nmetil-2-pirrolidont használjuk.
A 6-30 , előnyösen 8-18 szénatomos szénhidrogénből származó alkilező szer olyan vegyület, amely a megfelelő szénhidrogéncsoportot könnyen képes szolgáltatni, így például egy savnak megfelelő számú szénatommal rendelkező alkohollal képezett reakcióképes észtere, az alifás vagy aralifás, előnyösen maximáli san szénatomos, ilyen például a hexil-, heptil-, oktil- vagy
A reakcióképes észterek származhatnak szervetlen vagy szer• ···· ·· • · · V «
-28·· vés savakból, így hidrogénsavakból, kénsavból vagy kénessavból, vagy alkil- vagy ari1-szu1fonsavakbó1, például metánszulfonsavból vagy p-toluolszülfonsavból. A hidrogénsavak észterei különösen kloridok, bromidok és jodidok. A kvaterner ammóniumsó és a fenti alkilezőszer közötti reakciót környezeti (20°C) vagy kissé magasabb, például 30-35°C, de 60°C-ot meg nem haladó hőmérsékleten és hosszabb ideig, kb. 5-20, általában kb. 16 órán át végezzük.
A reakcióterméket elkülöníthetjük és aztán az eljárás második lépésének megfelelő lúgos kezelést elvégezzük, vagy úgy is eljárhatunk, hogy az első lépésben kapott reakciótermék oldatát közvetlenül, adott esetben betöményíLés után vetjük alá lúgos kezelésnek. További 1 ehetőség,hogy az eljárás első lépésben kapott oldatból az oldószert enyhe körülmények között eltávolítjuk, és a maradékot kezeljük bázissal. Ily módon a találmány szerinti eljárás egy-edényes eljárásként is elvégezhető. A heparin kvaterner aminóniumsójának és az alkilezőszernek a reakciójával kapott termék bázikus kezelése 5 és 120°C, megfelelően 50 és 120°C közötti hőmérsékleten, előnyösen kb.70°C-on, 2 órán át történik.
Alkálifém-hidroxidokat, például nátrium- vagy kálium-hidroxidot vagy más szervetlen és/vagy szerves bázist használunk, előnyösen 0,1 és 1 mól közötti koncentrációban. A bázisokat vizes vagy alkoholos oldataik formájában alkalmazzuk, de más, vízzel vagy víz-alkohol keverékkel elegyedő oldószerek, például a fenti egy-edényes eljárás első lépésében használt oldószerek maradékai is jelen lehetnek.
Ha az eljárás első lépésében a reakció terme két el ·· ♦ akarjuk különíteni, szerves poláros oldószer, előnyösen alifás alkohol, például metil-vagy etil-alkohol hozzáadásával kicsaphatjuk, amely alkoholhoz előzőleg valamely karbonsav bázissal képezett sóját, például ecetsav vagy propionsav nátrium- vagy káliumsóját adtuk. Más bázikus pufferek, így alkálifémvhidrogén-karbonátok vagy alkálifém-foszfátok is használhatók. A kicsapott terméket előnyösen a kicsapáshoz alkalmazott poláros oldószerrel, például metanollal mossuk.
Tanácsos a kicsapott terméket még egyszeri vagy többszöri átcsapással tisztítani, azaz a terméket vízben oldani és alkohollal kicsapni.
A kis molekulatömegü heparin-származékból álló és az előzőekben ismertetett tulajdonságú reakcióterméket fémmel vagy szerves bázissal alkotott sójából a szokásos módon felszabadíthatjuk
Az eljárás második lépésében használt alkálifém-hidroxidnak megfelelő alkálifémsót úgy kaphatjuk meg, hogy az oldatot savval, például 2 M hidrogén-kloriddal semlegesítjük, az oldatot vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, például metilén-kloriddal extrahálva tisztítjuk, és ezt a műveletet néhány alkalommal megismételjük. A sót aztán desztillált vízzel és nátrium-kloriddal dializáljuk és fagyasztva szárítjuk.
A találmány szerinti termékeket főként fémsóik vagy szerves bázissal képezett sóik formájában használjuk. Ha a fenti bázisos kezeléshez használt alkálifém-hidroxidnak megfelelő alkálifémtől eltérő fémmel alkotott sókat kívánunk előállítani, az ismert ioncserés eljárást alkalmazzuk. A heparin terméket sav formájában is elkülöníthetjük, ekkor a
-30kapott alkálifémsóhoz valamely híg erős sav, például hidrogén-klorid vagy kénsav számított menynyiségét adjuk, a terméket olyan alkalmas szerves oldószerrel extraháljuk, amely elkülöníti a szabad formában levő heparin vegyületet, és aztán azt a kívánt sóvá alakítjuk.
A jelen találmánnyal kapcsolatban használható fém- vagy szerves bázissal alkotott sók közül azok különösen fontosak, amelyek gyógyászatilag elfogadhatóak, ilyenek az alkálifémés alkáliföldfémsók, például a nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium- és magnéziumsók, vagy a nehéz fémek , például a réz és vas sói. A szerves bázisokkal alkotott sókat primer, szekunder vagy tercier alifás, aromás vagy heterogyüriis aminokból , például metil-aminból , eti1-aminból, propilaminból, piperidinből, morfolinból, efedrinből, furfurilaminból, kolinból, etilén-diaminból és amino-etanolból származtathatjuk .
A találmány körébe tartozó, de a gyógyászatban közvetlenül nem használható sók azok, amelyeket a találmány szerinti uj heparin-származékok tisztítására használhatunk, ilyen például néhány nehéz fém sója.
A találmány kiterjed hatóanyagként a fenti eljárással előállítható, kis molekulatömegü uj heparin-származékokat, különösen azok gyógyászatilag elfogadható sóit tartalmazó gyógyászati készítményekre is.
Ezek a készítmények készülhetnek parenterális , például szubku tán vagy ί n t raνóná s adagolásra vagy helyileg, például krémek vagy orrpermetek formájában alkalmazhatók got tartalmazó oldatok vagy fagyasztva ««*· • ·· * 9 9 · . · · · · · · ·· ·»· ·· ··
-31készíthetők, amelyek egy vagy több gyógyászatilag elfogadható segédanyaggal vagy hígítószerre1 keverve a fenti alkalmazásra megfelelők és ozmolalitásuk a fiziológiai folyadékokkal kompatibilis. A találmány az uj kis molekulatömegü heparin-származékok mellett kiterjed az előállításukra alkalmas eljárásra is. A találmány magábafoglalja az előállítási eljárás egy lépésben megvalósított formáját, azaz a heparin kvaterner ammóniumsójának valamely fentebb meghatározott alkilezőszerrel az előzőekben említett oldószerek valamelyikében való reakcióját , és a reakciótermék bázissal való kezelését is.
A következő példák a találmány szemléltetésére szolgálnak, azonban nem tekintendők korlátozó jellegüeknek. 1) Injekciós készítmények . 1
PE mg 10 20 3040 injekciós víz ml 0,1 0,2 0,30,4
Csomagolás: azonnal használható fecskendő, amely a szubkután adagolásra alkalmas steril oldatot tartalmazza. 1.2.
PE mg 150300 injekciós víz ml48
Csomagolás: fiola, amely az intravénásán adagolható steril oldatot tartalmazza.
1.3.
PE | mg | 10 | 20 | 30 | 40 |
további komponensek: | |||||
nátrium-klorid | mg | 0,3 | 0,6 | 0,9 | 1 , 2 |
injekciós víz | ml | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 |
-32Csomagolás: azonnal használható fecskendő, amely a szubkután adagolásra alkalmas steril oldatot tartalmazza. 1.4.
PE mg
150
300 további komponensek:
nátrium-klorid mg injekciós víz ml
Csomagolás:
fiola, amely az intravénásán adagolható steril oldatot tartalmazza.
1.5.
PE mg 150 további komponensek:
nátrium-klorid mg 35 nátrium-metabiszulfit mg 5 klór-butanol (*) mg 25 injekciós víz ml
300
Csomagolás viola, amely az intravénásán adagolható steril oldat többszörös dózisát tartalmazza.
( ) Az 1.5 példában konzerváló szerként használt klór-butanol az alábbi vegyületekkel helyettesíthető;
benzil-alkohol mg
100 klór-krezol mg 510
2) Orálisan adagolható készítmények
2.1. (pilula vagy kapszula)
PE mg 30 60120 további komponensek:
foszfatidil-kolin + foszfatidil-szerin (*) mg 80 160320
-33tejenkor mikrokristályos cellulóz t a 1 kinn kolloidál is kovasav ( ) a készítményekben a szerin aránya változhat.
2.2 (pilula vagy kapszula)
PE további komponensek:
főszfatidi1-ko1in + foszfatidil-szerin (*) kol eszterin tejcukor mikrokristályos cellulóz ta 1 kuni kolloidál is kovasav ( ) a készítményekben a szerin aránya változhat.
2.3 (porcsomag)
PE további komponensek:
foszfát, idil-kolin + foszfát i d i1-szer i n (*) k öles z t e r i n tejcukor ízesítő- és édesítőszer kívánság szerint.
szacharózzal (**) k i egész í Ive
mg | 50 | 100 | 200 | |
mg | 10 | 20 | 40 | |
mg | 3 | 6 | 12 | |
mg | 3 | 6 | 12 | |
foszfatidil | -kolin és | foszfatidil | ||
mg | 30 | 60 | 120 | |
mg | 80 | 160 | 320 | |
mg | 2 | 4 | 8 | |
mg | 50 | 100 | 200 | • |
mg | 10 | 20 | 40 | |
mg | 3 | 6 | 12 | |
mg | 3 | 6 | 12 | |
foszfatidil | -kolin | i és | foszfatidil | |
mg | 60 | 120 | 180 | |
mg | 250 | 500 | 750 | |
mg | 5 | 10 | 15 | |
mg | 100 | 200 | 300 | |
2000 | 4000 | 6000 | mg- ra |
a készítményekben a főszfatidi1-kolin és foszfatidilszerin aránya változhat ( ) a szacharóz fruktozzal helyettesíthető.
2.4 (nyújtott hatású tabletta)
PE | mg | 30 | 60 | 120 |
további komponensek: | ||||
fősz fátidi1-kolin + | ||||
f o s z f a t i d i 1 - s z e r i n ( * ) | mg | 80 | 160 | 320 |
tejcukor | mg | 30 | 60 | 120 |
mikrokristályos cellulóz | mg | 5 | 10 | 20 |
hi d rox i-propi1-me til- | ||||
cellulóz | mg | 10 | 20 | 40 |
t a 1 k u in | mg | 3 | 6 | 12 |
kolloidális kovasav | mg | 3 | 6 | 12 |
( ) a készítményekben a | foszfatidil | -kolin és foszfatidil | ||
zerin aránya változhat. | ||||
.5 (gyomorban nem oldódó | tabletta) | |||
PE | mg | 30 | 60 | 120 |
tovább i komponensek: | ||||
fősz fát id i 1-ko.l in + | ||||
foszfatidil-szerin ( ) | mg | 80 | 160 | 320 |
tejcukor | mg | 50 | 100 | 200 |
mikrokristályos cellulóz | mg | 10 | 20 | 40 |
tál kinn | mg | 30 | 60 | 120 |
kolloidális kovasav | mg | 3 | 6 | 12 |
metakrilsav kopolimer | mg | 15 | 30 | 60 |
a készítményekben a főszfatidi1-kolin és
foszfatidilszerin aránya változhat.
-352.6 (gyomorban nem oldódó, nyújtott hatású tabletta)
PE | mg | 30 | 60 | 120 | |
további komponensek: | |||||
foszfatidil-kolin + | |||||
f ősz f a ti d i1-szerin (*) | mg | 80 | 160 | 320 | |
tejcukor | mg | 50 | 100 | 200 | |
ini krokr i s tályos cellulóz | mg | 10 | 20 | 40 | |
h i drox i-propi1-met iΙ- | |||||
ον 11u1 óz | mg | 5 | 10 | 20 | |
ta1kum | mg | 30 | 60 | 120 | |
kolloidál is kovasav | mg | 3 | 6 | 12 | |
metakrilsav kopolimer | mg | 15 | 30 | 60 | |
( ) a készítményekben a | f ősz f at idi1 | -kolin | és | foszfátidil | |
szerin aránya változhat. | |||||
2.7 (orálisan, cseppek formájában | adagolandó oldat) | ||||
PE | mg | 30 | 60 | 120 | |
további komponensek: | |||||
c i t romsav | mg | 7,5 | 15 | 30 | |
tisztítót.t vízzel kiegészítve | 0,25 0, | 5 | 1 ml-re | ||
2.8 (granula *) | |||||
PE | mg | 30 | 60 | 120 | |
további komponensek: | |||||
c i t.romsav | mg | 7,5 | 15 | 30 | |
szacharóz | mg | 30 | 60 | 60 | |
kukor i cakemény í tő | mg | 12,5 | 25 | 25 | |
t .a 1 kuni | mg | 5 | 10 | 10 | |
po1 i v i n i1pi rrolidőn | mg | 4 | 8 | 8 |
( ) 3 granula adandó be egy kemény zselatinkapszulában
2.9 (gyomorban nem oldódó granula ) | ||||
PE | mg | 30 | 60 | 120 |
további komponensek: | ||||
c i t. romsav | mg | 7,5 | 15 | 30 |
szacharóz | mg | 30 | 60 | 60 |
kuko r i cakeményítő | mg | 12,5 | 25 | 25 |
talkum | mg | 5 | 10 | 10 |
pol ivini1pirro1 időn | mg | 4 | 8 | 8 |
inetakrilsav kopolimer | mg | 10 | 15 | 15 |
( ) 3 granula adandó be | egy kemény | zselatinkapszulában |
3. Nazális vagy pulmonális készítmények
3.1.
PE finom fehér por mg 20 40
A finom fehér por formában levő hatóanyagot egy zsela tin kapszula tartalmazza, amelyet használat előtt feltörünk és a hatóanyagot inhaláló készülékbe töltjük.
3.2. ( inhalációs por)
PE finom fehér por főszfatidil-kolin + foszfatidil-szerin(*) mg 20 40 mg 30 60
A finom fehér por formában levő hatóanyagot zselatin kapszula tartalmazza, amelyet használat előtt feltörünk és a hatóanyagot inhaláló készülékbe öntjük.
( ) a készítményekben a főszfatidi1-kolin és foszfatidil szerin arányéi változhat.
. Rcktálisan adagolható készítmények
-ΟΤ-
PE | mg | 30 | 120 |
f é 1 s z i n t.e t i kus glicerid | mg | 1940 | 1880 |
2 PE foszfatidil-szerin + | mg | 30 | 120 |
foszfatidil-kolin | mg | 100 | 200 |
félszintetikus glicerid | mg | 1840 | 1680 |
A találmány szerinti kis molekulatömegü heparinszármazókokat. és azok sóit tehát úgy kaphatjuk, hogy valamely heparin kvaterner ammóniumsóját egy heterogyürüs szerves oldószerben, kölebbröl helyettesitetlen vagy kevés szénatoinos alkilcsoporttal helyettesített N-alkil-pirrolidin-2-onban, N-alkil-piperidin-2-on-ban, ezek olyan származékaiban, ahol a beterogyürüt egy másik heteroatom vagy heteroatomot tartalmazó csoport, azaz oxigén- vagy kénatom vagy -ΝΙΙ-csoport szakítja meg, vagy a fenti vegyületek aprotikus oldószerrel készült tömény oldatában oldjuk, és egy 6-30, előnyösen 8-18 szénatomos szénhidrogénből származtatott alki 1 ezőszerrel (éterezőszerrel) kb. 20°C (szobahőmérséklet) és 60°C közötti hőmérsékleten hosszabb ideig, például kb. 5
-20 órán át reagál tatjuk. A kapott reakcióterméket aztán 5 és 120°C közötti, előnyösen kb. 70°C-on szervetlen vagy szerves bázissal vizes oldatban kezeljük. A bázisos kezelés után kapott, terméket aztán szabad formában vagy alkálifémmel vagy a 1káliföldfémmel alkotott sója formájában különítjük cl. Más fémek vagy szerves bázisok sóihoz úgy juthatunk,
-38hogy a sókat egymásba alakítjuk. Előnyös esetben az eljárás második lépésben a reakcióterméket alkálifém-hidroxiddal vizes oldatban kezeljük. A kapott kis molekulatömegü heparin-származék és sói gyógyászati célra, például trombózisellenes szerekként használhatók.
• · · ·
-39• ·· • ·
Claims (3)
3. ábra idő (óxa)
4/4
4. ábra
1/4
1. ábra • ·
1. Eljárás kis molekulatömegü heparin-származuékok és/vagy sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy (1) valamely heparin kvaterner ammóniumsóját heterogyürüs szerves oldószerben, amely oldószer helyettesitetlen vagy kevés szénatomos alki1csopor11a 1 helyettesített N-alki1-pirrolidin-2-on, N-alkil-piperidin-2-on vagy ezek olyan származékai, amelyekben a heterogyürü egy másik heteroatommal vagy heteroatomot tartalmazó csoporttal, így oxigén- vagy kénatommal vagy -NH-csoporttal van megszakítva, vagy a fenti vegyület aprotikus oldószerrel készült tömény oldatában oldjuk, és 6-30 szénatomos szénhidrogénből leszármaztatható alkilezőszerrel környezeti vagy annál egy kicsit magasabb hőmérsékleten reagáltatjuk , (2) a kapott reakcióterméket 5 és 12 0 °C közötti hőmérsékleten szervetlen vagy szerves bázissal vizes oldatban kezeljük, és (3) a kapott heparin-származékokat szabad formában vagy alkálifémmel vagy alkáliföldfémmel képezett sóik alakjában elkülönítjük.
2. ábra
26-]
2/4
2. Az 1.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fenti heparin-származékokat vagy sóikat más fémekkel vagy szerves bázissal alkotott sókká alakítjuk át.
3. Az 1.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szabad formában kapott heparin-származékokat gyógyászatilag elfogadható sókká vagy a fenti sókat szabad formában levő heparinná alakítjuk.
4. Az 1.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a a (2) lépésben a reakcióterméket alkálifém-hidroxidda1 vizes • · oldatban kezeljük.
5. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkilezöszer és a heparin kvaterner ammóni umsójának reakciójával kapott terméket a szervetlen vagy szerves bázissal való kezelés előtt elkülönítjük.
6. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként 2000 és 30 000 dalton közötti molekulatömegü heparin kvaterner ammóniumsóját alkalmazzuk.
7. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez- ve, hogy kiindulási anyagként nem-frakcionált heparin kvaterner ammóniumsóját alkalmazzuk.
8. Az 1. vagy 4.
igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként heparin frakcionálásával kapott 2000 és 10 000 dalton közötti molekulatö megü és heparin részleges kémiai vagy enzimatikus depóiimerizációjával kapott, 500 és 10 000 dalton közötti molekulatömegü heparin kvaterner ammóniumsóját használjuk.
atomosak
ve , hogy kvaterner ammóniumsóként tetrabutil-ammónium-sót alkalmazunk.
11. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a heterogyürüs szerves oldószerben az N-alki.lcsöpört 1-6 szénatomos.
12.Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez ♦ · · · ve, hogy a heterogyürüs szerves oldószer N-metil-pirrolidőn.
13. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkilezoszerként valamely sav 6-30 szénatomos alifás vagy aralifás alkohollal képezett észterét alkalmazzuk .
14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkilezőszer 8-18 szénatomos.
15. A 14.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkilezoszerként jodidot, bromidot vagy alki1-kloridőt vagy valamely alkil- vagy aril-szulfonsav észterét alkalmazzuk.
16. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jelle- mezve, hogy az alkilezőszert a heparin kvaterner ammóniumsójával heterogyürüs szerves oldószerben oldva kb. 20 és 60 °C közötti hőmérsékleten reagál tatjuk.
17. Az 1. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkilezoszer és a heparin kvaterner ammóniumsója reakciójával kapott reakcióterméket poláros szerves oldószer hozzáadásával, kicsapással különítjük el.
18. A 17.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy poláros szerves oldószerként alifás alkoholt alkalmazunk.
19. Λ 18.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alifás alkoholhoz egy bázikus puffért adunk .
20. A 19.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy bázikus pufferként valamely karbonsav bázissal képezett sóját 'alkalmazzuk.
21. A 17.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kicsapott terméket még néhány alkalommal ugyanazzal a szerves oldószerrel átcsapjuk.
*··· »w *··· ·« *
··
22. Az 1 . igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (2) lépésben a reakcióterméket alkálifém-hidroxiddal vagy egy másik szervetlen és/vagy szerves bázissal 0,1 és 1 M közötti koncentrációjú vizes vagy vizes-alkoholos oldatban 5 és 120°C közötti hőmérsékleten kezeljük.
23. A 22.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a bázissal való kezelést az (1) lépésben kapott,elkülönített reakcióterméken 0,1 és 1 M közötti koncentrációjú vizes nátrium-hidroxiddal kb. 70°C hőmérsékleten és elegendő ideig végezzük ahhoz, hogy a fenti kis molekulatömegü heparinszármazékot és/vagy sóját kapjuk.
24. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (2) lépésben kapott reakcióterméket úgy különítjük el, hogy a bázisos vizes oldatot semlegesítjük, egy vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel extraháljuk, és desztillált vízzel és nátrium-kloriddal dializáljuk.
25. Eljárás kis molekulatömegü heparinszármazékok és/vagy sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy (1) 15 000 dalton molekulatömegü heparin tetrabutil- ammónium-sót N-meti1-pirro1idonban oldunk és 1-jód-oktánnal szobahőmérsékleten 16 órán át reagáltatunk, (2) a reakcióterméket a kapott oldatnak nátrium-acetátot tartalmazó metanolhoz való öntésével kicsapjuk, (3) a kapott terméket; nátr ium-acetátot tartalmazó metanolból néhány alkalommal átcsapva tisztítjuk, (4) a megszárított terméket; 0,5 N vizes nátrium- hidroxid-oldattál kb. 2 órán át 70°C körüli hőmérsékleten kezeljük, ·♦·· , · ♦ · · • * · · · • -43- (5) a kapott oldatot 2 M sósavval semlegesítjük, (6) az oldatot néhány alkalommal metilén-kloriddal extraháljuk, (7) az oldatot desztillált vízzel és 0,1 M nátriumkloriddal dializáljuk, és (8) a kapott oldatot fagyasztva szárítjuk.
26. Kis molekulatömegü heparin-származékok. és sóik, amelyeket az 1-25.igénypontok bármelyike szerinti eljárással állítunk elő.
27. Kis molekulatömegü heparin-származékok alkálifémmel vagy alkáliföldfémmel alkotott sói, amelyeket az 1-25.igénypontok bármelyike szerinti eljárással állítunk elő.
28. Az 1-25.igénypontok bármelyike szerint előállított heparin-származékok nátrium-, kálium- vagy kalciumsói.
29. Az 1-25.igénypontok bármelyike szerint előállított heparin-származékok gyógyászatilag elfogadható bázisokkal képezett sói.
30. A 29.igénypont szerint előállított heparin-származékok nátrium-, kálium- vagy kalciumsója.
31. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként a 26.igénypont. szerinti kis molekulatömegü heparin-származékokat és gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígít.ó- vagy segédanyagokat tartalmaz.
32. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként a 26. igénypont. szerinti kis molekulatömegü heparin-származékok alkáli fémmel vagy alkáliföld fémmel alkotott sóját és gyógyászati 1 ag elfogadható hordozó-, hígító- vagy segédanyagokat t a r tál in az .
33. A 26.igénypont szerinti kis molekulatömegü heparin-szár··«· mazékok gyógyszerként való alkalmazása.
34. A 27.igénypont szerinti kis molekulatömegü heparinszármazékok alkálif émme1 vagy alkáliföldf émme1 képezett sóinak gyógyszerként való alkalmazása.
35. A 26.igénypont szerinti kis molekulatömegü heparin-származékok vagy sóik alkalmazása trombózis kezelésére.
36. A 31. vagy 32. igénypont szerinti gyógyászati készítmény alkalmazása trombózis kezelésére.
‘ODA
3 η
i
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT04175290A IT1243300B (it) | 1990-12-20 | 1990-12-20 | Derivati dell'eparina |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT62917A true HUT62917A (en) | 1993-06-28 |
Family
ID=11253436
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU922685A HUT62917A (en) | 1990-12-20 | 1991-12-20 | Process for producing hepqrin derivatives and pharmaceutical compositions comprising such active ingredient |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0516792A1 (hu) |
JP (1) | JPH05504785A (hu) |
KR (1) | KR920703644A (hu) |
CN (1) | CN1062537A (hu) |
AU (1) | AU658594B2 (hu) |
BR (1) | BR9106234A (hu) |
CA (1) | CA2075970A1 (hu) |
FI (1) | FI923762A0 (hu) |
HU (1) | HUT62917A (hu) |
IT (1) | IT1243300B (hu) |
NO (1) | NO923240L (hu) |
PT (1) | PT99898A (hu) |
WO (1) | WO1992011294A1 (hu) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2663639B1 (fr) * | 1990-06-26 | 1994-03-18 | Rhone Poulenc Sante | Melanges de polysaccharides de bas poids moleculaires procede de preparation et utilisation. |
FR2704861B1 (fr) * | 1993-05-07 | 1995-07-28 | Sanofi Elf | Fractions d'héparine purifiées, procédé d'obtention et compositions pharmaceutiques les contenant. |
ES2077533B1 (es) * | 1994-02-28 | 1996-07-01 | Bioiberica | Procedimiento de obtencion de fracciones de oligosacaridos por despolimerizacion quimica de heparina. |
US5639469A (en) * | 1994-06-15 | 1997-06-17 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Transmucosal delivery system |
US5744457A (en) * | 1995-03-31 | 1998-04-28 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
US5763427A (en) * | 1995-03-31 | 1998-06-09 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
US6001820A (en) * | 1995-03-31 | 1999-12-14 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
CN1114410C (zh) * | 1996-03-15 | 2003-07-16 | 宝酒造株式会社 | 糖醛酸类的热处理产物、以及含有这种产物的食品、饮料和药物 |
US5767269A (en) * | 1996-10-01 | 1998-06-16 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Processes for the preparation of low-affinity, low molecular weight heparins useful as antithrombotics |
FR2763848B1 (fr) * | 1997-05-28 | 2000-01-28 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Utilisation des heparines de bas poids moleculaire pour la prevention et le traitement du trauma du systeme nerveux central |
DE10217557A1 (de) * | 2002-04-19 | 2003-11-06 | Degussa Bioactives Gmbh | Funktionsnahrungsmittel enthaltend eine Phospholipid-haltige stabile Matrix |
WO2003088949A2 (de) * | 2002-04-19 | 2003-10-30 | Bioghurt Biogarde Gmbh & Co. Kg. | Matrix mit einer bioaktiven phospholipid-haltigen komponente |
CN100335506C (zh) * | 2004-05-20 | 2007-09-05 | 汕头市金丰医疗器械科技有限公司 | 一种肝素化合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2482603A1 (fr) * | 1980-05-14 | 1981-11-20 | Pharmindustrie | Nouveaux esters d'heparine utilisables pour la preparation de medicaments, et procedes pour leur preparation |
ES2071608T3 (es) * | 1986-08-20 | 1995-07-01 | Univ Miami | Esteres de alcanoilo de heparina de bajo peso molecular. |
SE8702254D0 (sv) * | 1987-05-29 | 1987-05-29 | Kabivitrum Ab | Novel heparin derivatives |
-
1990
- 1990-12-20 IT IT04175290A patent/IT1243300B/it active IP Right Grant
-
1991
- 1991-12-20 PT PT99898A patent/PT99898A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-12-20 JP JP4501399A patent/JPH05504785A/ja active Pending
- 1991-12-20 EP EP92901426A patent/EP0516792A1/en not_active Withdrawn
- 1991-12-20 WO PCT/EP1991/002479 patent/WO1992011294A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-12-20 KR KR1019920701996A patent/KR920703644A/ko not_active Application Discontinuation
- 1991-12-20 AU AU90964/91A patent/AU658594B2/en not_active Ceased
- 1991-12-20 BR BR919106234A patent/BR9106234A/pt unknown
- 1991-12-20 CA CA002075970A patent/CA2075970A1/en not_active Abandoned
- 1991-12-20 CN CN91111853A patent/CN1062537A/zh active Pending
- 1991-12-20 HU HU922685A patent/HUT62917A/hu unknown
-
1992
- 1992-08-18 NO NO92923240A patent/NO923240L/no unknown
- 1992-08-20 FI FI923762A patent/FI923762A0/fi not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IT9041752A0 (it) | 1990-12-20 |
IT9041752A1 (it) | 1992-06-21 |
JPH05504785A (ja) | 1993-07-22 |
PT99898A (pt) | 1992-12-31 |
BR9106234A (pt) | 1993-03-30 |
FI923762A (fi) | 1992-08-20 |
FI923762A0 (fi) | 1992-08-20 |
KR920703644A (ko) | 1992-12-18 |
WO1992011294A1 (en) | 1992-07-09 |
CA2075970A1 (en) | 1992-06-21 |
NO923240L (no) | 1992-10-19 |
EP0516792A1 (en) | 1992-12-09 |
AU658594B2 (en) | 1995-04-27 |
CN1062537A (zh) | 1992-07-08 |
IT1243300B (it) | 1994-05-26 |
NO923240D0 (no) | 1992-08-18 |
AU9096491A (en) | 1992-07-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK173982B1 (da) | Depolymeriserede heparinderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf og farmaceutisk præparat samt biologisk reagens med indhold heraf | |
US5250519A (en) | Non-anticoagulant heparin derivatives | |
US5280016A (en) | Non-anticoagulant heparin derivatives | |
US3766167A (en) | Orally active anticoagulant | |
EP1070503B1 (en) | Compositions comprising low molecular weight Heparin | |
HUT62917A (en) | Process for producing hepqrin derivatives and pharmaceutical compositions comprising such active ingredient | |
US20240041918A1 (en) | Oligosaccharide Compound for Inhibiting Intrinsic Coagulation Factor X-Enzyme Complex, and Preparation Method Therefor and Uses Thereof | |
EP3093296B1 (en) | Fuc3s4s substituted oligoglycosaminoglycan and preparation method thereof | |
KR20210151798A (ko) | 콘드로이틴 설페이트 다당류, 이의 반합성 제조방법 및 이의 용도 | |
US10494452B2 (en) | Low-molecular-weight glycosaminoglycan derivative containing terminal 2, 5-anhydrated talose or derivative thereof | |
CN108285498B (zh) | 一种抑制内源性凝血因子x酶复合物的寡糖化合物及其制备方法与用途 | |
JP6293862B2 (ja) | 低分子量グリコサミノグリカン誘導体及びその薬物組成物、これらの製造方法と用途 | |
JPH10182703A (ja) | 低分子量のフカン類とその医薬組成物 | |
JP2714718B2 (ja) | 新規硫酸化多糖及びその薬学的に許容される塩、その製造方法並びにそれを有効成分とする医薬 | |
CN111423523B (zh) | 一种寡糖化合物及其药学上可接受的盐、制备方法及应用 | |
JP2643950B2 (ja) | ヘパリン誘導体 | |
CN109414452A (zh) | 作为促凝血剂的环糊精 | |
WO1994008595A1 (en) | Use of non-anticoagulant heparin for treating ischemia/reperfusion injury | |
JP3487620B2 (ja) | 逆転写酵素阻害剤及び抗ウイルス剤 | |
JP2964352B2 (ja) | 抗hiv剤 | |
US20060069044A1 (en) | Modified glycosaminoglycans, pharmaceutical compositions and methods for oral delivery thereof | |
US20090275543A1 (en) | Modified Glycosaminoglycans, Pharmaceutical Compositions and Methods for Oral Delivery Thereof | |
FR2637804A1 (fr) | Compositions pharmaceutiques contenant un derive d'heparine partiellement n-desulfate a activite antithrombotique | |
WO2012138003A1 (ko) | 탈황산화된 헤파린-담즙산 유도체의 염증성 질환의 예방 및 치료 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |