HUE027064T2 - Fokozott immunstimuláns aktivitású, hidrofób T-analógokat tartalmazó CPG oligonukleotid-analógok - Google Patents

Fokozott immunstimuláns aktivitású, hidrofób T-analógokat tartalmazó CPG oligonukleotid-analógok Download PDF

Info

Publication number
HUE027064T2
HUE027064T2 HUE07870434A HUE07870434A HUE027064T2 HU E027064 T2 HUE027064 T2 HU E027064T2 HU E07870434 A HUE07870434 A HU E07870434A HU E07870434 A HUE07870434 A HU E07870434A HU E027064 T2 HUE027064 T2 HU E027064T2
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
seq
cancer
class
oligonucleotide
odn
Prior art date
Application number
HUE07870434A
Other languages
English (en)
Inventor
Harald Debelak
Eugen Uhlmann
Marion Jurk
Original Assignee
Coley Pharm Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Coley Pharm Gmbh filed Critical Coley Pharm Gmbh
Publication of HUE027064T2 publication Critical patent/HUE027064T2/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/332—Abasic residue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/335—Modified T or U

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

FOKOZOTT IMMHNSTBÂÀNS AKTmTÁSÓ, ÍIIIJROFOB T-ANAÎÂÛKAT TARTALMAZÓ €PÖ 0L!G0NÜKLE011ö-ANÁLCk';0K: A TALÁjLMÁffV TEJÄ« Â találmány szerinti megölés áltáláílosan ax inmúníolögia teröietére vonalközik;, Közelebbről, a találmány tárgya fokozott ímiRuösfímuláfts ypéáiás# terápiás olipnukleotidofc. a találmány háttere A bakteriális DNS Immunsipslns Itatásé, ezitaLaktiváijaaB s^tÂêsatiÈOTészetes ölő $φ£&*Μ& a gerinces DNS »et«: (Tokunaga, T., és munkatársai: 1988. Jpn. 3. Cancer Res. 79:682-886; Toknxsaga, T., és munkatársai: 1984, JNC1 72:955-962; Messina, TR, és mtúÁaiámai; 147:1759-1764;; ίβ
Krieg, î 998, ín: Applied Oligoímcleotids Technology, C.A. Stein and AM Krieg, pzerk.), John Wiley and Sons, Ine., New York, NY, pp. 481-448k ismert, hogy a bakteriális ONS ezen immunsíimnláns hatásai adott báziskomexíushan (Cpö motívumokban) lévő utetilálaian Cpö nukieoíidok - amelyek metlláltak és ritkák a gerinces DNS-feen -- jelenlétének çfedinédye, amely gyakran előfordul a bakteriális DMS-bea (Krieg és mnnka* társai: 1995 Nature 174:546-549; Krieg, 1999 Biocldm, Biöphys. Äeiä 93321:1-16). A bakteriális DNS irnmímstírbniáns; katásal utánozhalők szintetikus i<i|lfM-ezoÂakîe«4M|idfèi' φΜ$% amelyek tartalompák ezeket a CpG motívumokat. Az ilyen CpG ODN-ok éfös stimuláns hatásúak humán és egér ieukoeitákon, indukálják a l-se|tek pröhfeíóeibját, a citokin- Is ímmungiobidir-szekréciot, természetes öiösejíek (NK) sejlliíikus aktivitását és JFN-y szekrécióját; és a. dendritikns sejtek {DC-k) és egyéb antigén prezentáló sejték kostitaolátoros molekula expressziójái aktiválják és cítokíriszekréeiáját indukálják,, különösen a Thl-szeri citoklnekéi, amelyek fontos szerepet játszattak a Thl-szerő Kseglválasz kifejlődésének elősegítésében:. A nativ foszfodieszter gerincű CpO <3ÖN~ök immnnsífmnláns batá&amp;ai erősen Cpß-specitkasak, amennyiben ezek a hatások drámai módon kesökkettlhetök, ha a CpO-mptfwm meitiálí, OpC-re van cserélve vap más módos ellmínáit vagy megváltoztatott (Krieg és munkatársai: 1995 Nature 374:546-549; Hartmann és mtmkatámaf: 1999 Proe. Natl. Acad. Sei USA 96:9365-10). A korai vizsgálatok alapján ágy vélték, hogy az immár,stimuláns CpCí-motlvum szerkezete a következő: purin-pttrio-Cpö-pirííntdin-pirimldln {Krieg és munkatársai: 1991 Nature 374:546-549; Fisetsky, 1996 3. Immunoi. 156:421-423:; Hacker és munkatársak 1998 EMBO I. í 7:6230-6240; Lipford és munkatársai: 1998 Trends in Mierobidi. 6:496-500), Jeleriíeg azonbanegyértelmű, hogy az égét Hmfociták meglehemsen jól; vála-szoínak azokráá tbszftldíészter CpCmnftjvumokra, amelyek nem ezt á képletet követik (Yi és munkatársai:: 1998: |. Immuool, 160:5898-5906), és ugyanez igaz a humán B-sejtek és óendrikus sejtek esetén {Hartmann és munkatársai: 1996 j, Clin. Invest. 98:1119-1129}. inéÉ^f&amp;iiÍiiőá.ftatótat be a WÖ20Ö5/Ö3Ö259, :Ts8ö: és munkatársai: Biochemistry: American arenpcal Society, lasíon, FA, ÜS, Vol.30, óo.i8, lan 1991 pges 4565-4572), WO2001183503, Agrawal Sudhir és munkatársai {Trends in molecular medíest, Elsevier Current trends, vol.8, no,3, Marcit 2602, pages ti 4-121) Uhíhimtn és i«unkatárSáí:{CuiTent opinion ír drug discovery and development, emTentdfdgS, London GB Vol.6, no.2, lart 2003 pages 204-217), valamint Iyer és munkatársai: Current opinion in molecular therapeutics, vol.l, no,3,1999, pages 344-358). A közelmöltban a CpO nokleinsavak több kíOőrtbözŐ osztályát Idák le. Egyik osztálya potensen aktiváip á B-sejteket, de viszonylag gyenge?·: indukálja: az IPN-o. és 3ΊΚ sejtek aktívációját; ezt az osztály &amp; osztálynak neveztek -ei. A 8 osztályé GpG nuRleînsavab jellemző módon tefes mértékben stabilizáltak és bizonyos előnyős hazMohtejöusokhan metliálmlaö Cg®' dmökleotidöt: tartalmaznak, lásd például é 194 3Í&amp;; ó2Í? 640; 6214 8Öó; 62ÎÎÎ 371; é 239 116; és 6 339 96S számú amerikai egyesült államokbeli száfeadainmk- A Cgía nalfr leinsavak másik osztálya aktívába » B-sejtefeet és az XK sejtekét és indukálja az IFbEnp; ezt az osztályt C osztálynak «eveztek el. A C osztályba Cpö ïpkleà^yak: elisé jenemzésökáek: mértékben stabilizáltak, B osztály típosá szekvenciát és GC-ben gazdag palindrom vagy nmjdnem-palíndrom szekvenciát tartaknaznak. Ezt az. osztályt írja le a 2.00I. augissztus l?~én és 2002. augusztus :19-én benyújtott 60/313 273 és US 10/224 523 számé egyesölt államokbeli Ideiglenes szabadtdmi bejelentés, és a kapcsolódé PCT/U$02/264Ö8 számá* WO 034315711 számon közzétett nemzetközi Száhádáhni bejelentés,
A TALÁLMÁ^y ÖSSZEFOGLALÁSA A találmány tárgya egy vagy több módosítást tartalmazó oligomikleoild, átiély tokozott ínmnmpáátdáftS kapacitást lejt ki. Xjeotelíésk a találmány azon az eredményen alapul, högy legalább egy hpoíi| szdbszíiíüáit «ukléOiídöt tartalmazó óSígmstÉleosidok specifikus alosztályai különösen hatékonyak az immunválasz közvetítésében. Ezek: az oiigonukleotidok terápiásán és profilaktikusan alkalmazhatók az immunváiasz indukálására és lelégségek és reodsiiehésséglc:,; például rák és vírasfeitózésék kezelésére, Ä találmány egy szeotpottija szerint a találmány tárgya oligenukleoíid* amely a következőket tartalmazza: RíYER?, szekvencia, ahol R, és 1½ jelentése a következők alkotta csoportból választott: ipohl, szöbszíitnáit nukleotid^hálóg (L). taiMeotid, és kötés, aboi R; és R> legalább egyike lipofil, szubsztiínált nukle-ötid-ahalóg :(L), ahol 'Y jelentése plrimidin nnkleoíid és ahol Έ jelentése puri«, plrimidin vagy abázisos csoport, ahol $4 jéientése a kövstkezók közöl választott: S-klór-uraeil, 5-bróm-uraeil, 5-jód-uracíi, 5-etíi-uradl, és (E)-S--{2%0orvioiiy-uracil, azzal a feltétellel, hogy az ollgenukleoíid jelentése nem d[GCGAAtpröj(BtlJ)GGGk ahol Brlí jelentése 3-bfóm-uracil. A leizás egy szempontja szerint a leírás tmgya a követkézé szekvenciát taztahnazó készítmény: R,YZRj, áhol R* és R2 jelentése ilpöíi, sznbs^huált nokleotid-asalóg p.), nnklebad, és kötés, ahol Rs és R> legalább egyike lipoil, szabsztítuálí nukfemlb-anaíóg fLk ahol Y jelentése pirirosdlnnoklemld és aboi £ jelentése purin, plrirnidin vagy abázísösesogoft
Egyes megvalósítási módok szerint E magában: foglal 5- vagy ő-tagú gyűrűs nukleobázis-analógot, A leírás ezen: szempontja szerinti egyesmegvalósítási mtkfofc szerint L jelentése pkképleíü csoport
sarely tartalmazza a következőket;: A, B, X, D, E, es F jelétnél C (szén) vagy N (nitrogén), amelyhez adott esetben hidrogén vagy szabs&amp;itusns kapcsolódik; n értéke 8 vagy 1; a szaggatott vonalak adott esetben jéfeölévő nem a követkeÄ alkoha csoportból választott: oaOi íkt, hidroxll, merkapfo, rmin«; amino, raeiii és hidrogén, és az összes A, B, X, ö, E és F atomok jelen- töse közűi 3-nál nem többnek a jelentése nitrogén (N). Egyes esetekben « éneke 5, és más esetekbe® « éneke 0,
Szerint valamennyi A, B, X, Û, 8. P átöm jeléntése szén (C). Egyes megvalósítási módok Szerint M A, B, X, D, E, F atomok jelentése közűi egy, keltő vagy három atom jelentése nitrogén (N >. Egyes j^paieSitási^módok szerint az A. B, X. D, B, F tstomok legalább egyike a következők egyikévet ISWÄ % <3| Sf„ ?, alkik aikeatl, alfcími, halogénezett alktí, hálopnezep alksml. elkloaikil, 0-ai|# O-^aiketril, 'MB-stki, -Níaikd ty -S-alkil, - SCEal&amp;it, -SÖy-alirii, nitro, eiano, karhoKtkészter, férni, tiölenii, beozíi, ÖKö, tio, hídroxt, merkapro. és imtno, ahol legalább egy szrfosxtifoéns nein öxo, tjö, hidroxi, merkapto, tmíno, ikaino vagy metii. Más megvalósítást módok szerint az A vagy E atömök; egyike a következők egyikévei azahsztnuáit: E, Cl, 8r, ï, CrC6~aikik alkerni álklml, halogénezett áíktl, halogéneíótt aikeail, elkiöáikíl, Ö^alkil, balként?, -NM-aJkíi, -M(aikl)2;. -S-alfcil -Sö-alkíl, -Sörálkti nitro, étái®, Äh tfofohíi, béhzil, vagy tnetIL azzal a feltétellel, hogy amennyiben mell!, akkor A, 8, X, i>, E és F rnindegyikének jeientése C.
Egyes megvalósítási módok szerint az (1) képlet szitöszfifoäit píöínldink utöetít, töhtölt, ímidazoh: vagy pirazol! vagy triazolí tartalmaz. Más megvalósítást módok szetmt az ¢1 ) képltö a ItövÄeÄ közöl yälasztöit: 5--kiór-uracil, 5-hróm-inacit, s-jód-uracil, ö-etd-uracil, 5-propiS-uracií, ÓptöFtóBőtööík {B}-5-(2-brőmvlnil}--mmtl és 2;s4HÍIÖttöriolnók A leírás egy megvalósítási: módja szerint; az (I) képlet őatötagö aromás vagy alifás gylWééndszefrel tözlonálí, Más megvalósítást módok szerint az 0) képlett csoport SriíAagá epRnrcsoporitoz kötött* példáit peníózhoz vagy hexózhoz. Egyes esetekben st &amp; á bé^z ptetözi átttelv adott esetben Szüfesztiíuáls lehet a következőkkel: F, atnino, alkoxi, aiköxkétöxs, ámönígröpi,, állétil, alkintí vagy Cfr -Cralkíién lid. Más esetekben a furanóz ribóz vagy dezoxíribóz, A Séirás egyes megvalósítási módjai szerint mind R*, töiöd jelentése B, Egyes megvalősilási módok szerbit Ry elöntése L és ki jelentése nakleotid. Más esetekben R( jelentése L és R2 jelentése kötés, oly módon, hogy az ollgotmkleotid tártalrnazzá a 5' RtCö 1' szerkezetet. Más megvalósítási módok olyan oiigonukleoridot foglalnak magukban, ahol R, jelentése L és R? kötés, és ahol R3 jeletttése 5’- R)YZ. oly módon, hogy az ohgömrkfeötíd tartalmazza a 5( R:iR(Y2 3' szerkezetei Egyes megvalósítási módok szerint R( jelentése E és R2 jeléhiése kötés, és ahol R(YZ~fől 5' irányban egy hí nPkleotiddal elválasztva egy második R1 van, oly módon, hegy az oligonokleotid 5' RjhtRiYZ 3’ szerkezetet tartalmaz. Egyes esetekben az olsgooukleotid tartalmazhat két 5’ R|NRjYZ 3’ motívumot.
Egyes megvalósítási módok szertöt az ohgomskleotid Y-t tartalmaz, aminek jelentése a következő pirimsdinek; egyike: eitozin, Snnetíi-cíioztö, Sditdroxi-eRozin, ő-hidroxímetii-citoztö, ó-balogenö-eítozsH, 2-tio-· Autozin, 4AfoA!íoztö, hí 3 Aoetíi-eltozin, N4-alkiiAtíöztö vagy ó-szobsztituált eitoztö.
Egyes megvalósítást módok szerint az oligennfclemM Za tarialraaz, amely pórin nnkleood, közte;: goantö, Ydeaza-gnanin, hipoxantin, ?Aleaza-hipoxanrint 2^amlno->porin, 4Ato-pnri», 2,ö‘-d:inmmö-p*frim hidrögnanift, Ytïa?-8Oxn-?,8-dihidfoguanio, 7töiM!^8töxm7,8Aitöidn>guanm, 7-deaza-kAZäAtöaam, S-azs-gna* nin,MiAnetth-gÄiin vagy pori«; Más megvaiösftM tööfÄ szerint Z jelentése pirhatdín hukleötld, például T, A taláhnány egyes megvalósítási módjai szerint R2 jelentése 1, és Rs jelentésé nokléótldi Egyék ihégyalÂàsi módok szerint az oigonokleotid hossza 3-100 nukleotid; például az oligonukleotid hossza 3 tö nuklemtö,: 3-iöö nukleotid, vagy 7-ÍÖÖ nsÉleotii. Bizonyos körülmények közt» m ollgonnkleotld Y -ben pzdag, azaz A találmány magában foglal olyan megvalósítást módokat, amely legalább egy palindrom szekvenciát foglalnak magában. Egyes esetekben példán! az oitgimtäkleotidM paltödrom szekvenciái láritömaz. A találmány szedni egyes megvalósítási módok tartalmaznak egy#jgÿ metilálaíkin ÉG dtnükjö^iddt, Egyes megvalósítási módok sz&amp;xM az oiigonnkleotid tsitatemfeat legalább egy (G)m szekvenciái, siói m értéke 4-10, EgyeS esetekben legalább egy, de akár mindegyik CG dinukleoíid meíilálsdan, Egyes megvalósítási módok Mérlnk az: íadalmazhat továbbá anißr-naEefeEd módosítási is. A nem-nukléotid módosítások :toze táflóZnak a korlátozás szándéka nélkül: C’s-C.js-pokeEieaglïkol, :Cr£®-élkándtol, Cs-Ç^alkHamino kôiô-esOpidyiCs'ess-alkiííiíd kőtőesoport, koleszterin, epesav,, telített vagy telílettlen zsírsav,. Edát, ihexadedi-gílcerln vágy díiiexadeeskgiicertö csoport, okiadecikglleerin vagy ábfetóeeikgUe^g.. tpaftfï» E-vhaMn csoport Más megvalósítási módok szerint: 8: üskSlmáüy szerlmi oligonukleotid tadalrpStzEat äiem-ddkleotid dágaztmócsofíortót vagy mrkleotíd elägaztätoesoportot is. Egyes megvalósítási módok szerint az «iigönnkjeeíidök: tartalmaznak elágaztató; csoportot, ahol az oligonukiemidoknak legalább kél S'-végé van. A találmány szerint egye* megvalósitási módok tartalmaznak az oligonukleoíidban legalább két oukleo-tidöt, amelynek stabilizált kötése van, példáid:; fószibrotbát, Eíszüiroditíoáí, metíiRísZfönák: medifesZíonoílöát-tuíranoloszlbmü, foszlbramklát, vagy deíaszfó-kötés, akár enantiomer keverék, ;ákár: enantiomer szempontjából tiszta E- vagy R-kondguráclóban. Más megvalósitási módok szedni sz i:;YZ% YX csoporija lÿoftSi vágy: fószlsrötioáí-'kdtdst tartalmaz;,, Egyes esetekben az Rj.YZR2 Éj Y Isivagy ZK3 része feszforotíoát-kötést tartalmaz. Egyes; aíégvalösüási módok szerint, yalámenoyl egyéb nakleótíd iosziöröiiöáírkötést tartalmaz, A találmány egyes meg valósítási módjai szerint, az oligonukleotid mentes mikrohordozótó!, például lipid hordozótól. A leírásnak megleielöen az oiigondkieodd lebet A osztályd olpoankleotld, B osztályú ollgósakleotid, £ ószíilyti eEgóEnkléotíd, f osztályú Oltgondkieötid T osztályö ollgmsukleotid. A találmány s^sisE B osztályú oiígonuklgotidók esetén, egyes megvalósítási m&amp;fök íatialmazzak a 5riX3M(ÄiX2GGXjX4 3’ ssskvenesát, ahol X} jelentésé G vágy A; X® jelentess ?» G vagy A; 3G jelentése T vagy G és X4 jelentése T vagy és M jelentése bármely nnkîedttd, ésjsij és Nj jelentése mimégy ÏE2S IV'khosszüságó néklejnsav. .A találmány egyes megvalósítási módjai szerint azöiigonúkieotid legalább egy 3-3’ kétest ésAragy legalább egy 5**5' kötést tattáimaz,
Egy másik szempont szerint a íaláhnány tárgya készitmltry, amely tartalmazza az itt leírt oíigonukleo-íidokat antigénnel vagy más terápiás vegynlettel, például anEmíkrobiális anyaggal együtt. Az anímtikrobiális szer lehet példáid antivlrálié sz©r,:parazúadk®es szer, aníibakleriálss szer vagy gombaellenes szer. A találmány égy másik szempontja szerint a találmány tárgya áZ id leírt óligttótdcleöttdot tartalmazó, szabályozott haíóanyagíelszabádulásá eszközben lévő készítményt. A készítmény adott esetben tartalmazhat gyógyászatilag el®sg|!$|®IÉ á<H#azdé étvágy ben lehet kiszerelve. Egyes megvalósítási módok szerint a bejuttató eszköz ©kővetkezők alkotta csoportból vl* laszíoít: kallöítos llpidék, sejtbe belépő fehérjék és szabályozott batóanyagrléadású eszközök. Egyes megvagy tási módok szerint a szabályozott hatóanyag-leadásé eszköz biológiailag igbotnló polimer vagy mikrorészecske, A találmány egy másik szempontja szerint az immunválasz stlmplálására szolgáló eljárást is leírunk, Azí eljárás magában foglalja oltgonokleotid beadását alanynak, az alanyban immunválasz indukálására hatékony mennyiségben. Előnyösen az oligomjkleotidot orálisan, helyileg, szabályozott haítknyag-felszahádulási: eszközben, nyálkahártyán keresztül, szisztémásán, parenseráüsan vagy iniramas^iilMsim adjuk be. Aménnyilsn az oSigomikisotidőt nyálkahártya leisteten keresztül adjuk be, bejuttatható olyan mennyiségben, amely Indukálja a 'MSmÁts mmmnválaszí vagy a szisztémás immunválaszt. Előnyös megvaiéeirási módok szerint a nyálkahártya felttléí a következők alkotta csoportból; választott: orális, nazális, rektális, vaginálls és okulár» földiéi..
Egyesmegvalósítási módok szerint az eljárás magában foglalja az alany antigénnek történő kiléteiéi, ahol az. tmmunvÉáSZ antígénspeeifikus immunválasz. Egyes megvalósítási módok szerint az antigén a következők alkotta csoportból választott: tumoraníigén, yirosaotigén, bahferium-untigén, paraalto-imtigén és pepiid antigén.
Az oiigonukleoíídök alkalmazhatók rák kezelésére rákban szenvedő alanyban vagy rák kocká- zatának kitett alanyban (például rák kifejlődése kockázatának csökkenése). A rák lehet a következők alkotta csoportból választott rák: epevezetékrák, mellrák, méhnyakrák, koriokarcinóoia, vasiagbétrák, méhnyáikahártya-rák, gyomorrák, tránieplteíiális psopíazma, Urnfóma, májrák, tüdőrák (például kissejtes és nem kissejtes), méla-néma, neurobfäyÄm, szájüregi rák, píeleszekrák,» hasnyáírn irigyrák, j»ps:Aaíárál, rektáfls rák, szarkoma, pajzsmtrigyrák és veserák, és szarkóma. Egyes lényeges rnegvalósilási módok szerint 8 rák a, Ikövetke/ók aíköttá csoportból választott: esentrák, agy és központi idegrendszeri rák, kötőszövetrák, ítyélőesőrák, szemrák, HrálgkltMtmtorna, gégerák, srájihegi rák, bőrrák és hererák.
Az oligonukleotidok alkalmazhatók rákos seif rákterápiára (például rákellenes terápiám) adott válaszkés«-· ségónek lókőzásáfá, adott esetbe«, amennyiben a :€pG knmmistimuláns oligonukieohdoi rákellenes terápiával ftsszekapcsoÍvá:«dj«k be, Â rákellenes terápia lehet kéíPöíerápia, ditás (például in vtim immunizálással elöáltítoti dendrítikus sejt vakcina vagy rákántigémoltóanyag), vagy ellenanyag alap« terápia. Az utóbbi terápia magában foglalhatja példátil ráksejt sejtiefezlpi üipnjdre specifikus ellenanyag. beadását, ahol az ísmmmvál&amp;sz eredpjé-nye ellenanyag depenöéns eelluláfis éitöíóxlcitás (ADCC). Egy «legvalóslási htod szerint az ellenanyag a következők alkotta csoportból yálasArát lehet: lűbutaxís, líerceptln, Onadmroet, Eaoorex, 1DEC-¥28S, BEC2, €225, Úncolym, SMART Ml 95, ATEAGEN, Ovarex, öexxar, LDP-Ő3, ior tó, M.DX-2Î0, MDX-1 1, MDX-22, ÖV 103, 3622W94, anli-VEGF, Zenapax, MOX-22Ü, MDX-447, MEÍJMMtJME-2, MELiMMöMB-1, CiEAODE, Preíarget, NevoMAb-G2, TWF, Giiomab-H, ÖNMM: EMI>-72M, ÍymphoCide, CMA "m, Monopharm-C, 4B5, sor ,egf>3, sor ¢5, BASS, anti-FLK-2, MDX-260, AN A Ab, SMART ÍDK) Ab, SMART ABL 3S4 Ab és ImirmRAIT-GEA.
Azaz, a íaláhnány egyes szempontjai szerM oligonakleotsdof és rákellenes terápiát adunk be rákban szenvedő alanynak vagy a rák kockázatának kitett alanynak. Egyes megvalósítási módok szerint a rákellenes terápia a kövedíszok alkotta csoportból választott: kemoterápiás szer, immasterápíás szer és rákellenes oltóanyag. A találmány más szempontjai leírnak alanyban betegség megelőzését® szolgáló eljárásokat. Az eljárás magiban foglalj» oíigonukleotid rendszeres beadását az alanynak, ezáltal az Immunrendszer válaszkészségének tokozását,; ezáltal az alanyban betegség .megelőzését A találmány szerinti proölakíikus eljárások alkalmazásával ntogekadályezandó betegségek vagy állapotok közé tartoznak míkroMáljls fertőzések (példáéi szexuális ötön közvetiíett betegségek) és az éíeimiszer-allergiákbó! eredő anafdaktikus sokk. Más szempontok szerint a taláimány » természetes immunválasz iodukálására szolgáló eljárás az alanynak a természetes Immunválasz aktiválására hatékonymennyiségá olráonnkkeetid beadásávák A taliráány egy másik szempontja szerint leírunk virális vagy retroviráfis fertőzés kezelésére szolgáló eljárást. Az eljárás magában foglalja a találmány szerinti bármely készfebrán^ virális vagy retreviráfis fertőzés kezelésére hatékony mennyiségének beadását virális vagy retrovlrális fertőzésben szenvedő vagy veszélyének kkeft aktnynak. Egyes megvalósítási módok szerint a fertőzést feepatítiszviriís, például hepatitis R. hepatitis €, 1I1V, hérpeszvir;n vagy papillomavirus: ökózza. A találmány egy másik szempontja szerint a találmány tárgya eljárás bAenálís fertőzés kezdésére. &amp;a eljárás magában foglalja a találmány szerinti bármely készítmény bakteriális fortözés kézelésibefi háfokony mennyiségének beadását bakteriális fortózésfeen szenvedő vagy bakteriális fertőzés Egy megvalósítási mód szerint a bakteriális fertőzés oka iníraeeítutáris baktérium. A találmány egy másik szempontja szerint a találmány tárgya eljárás Az épé rás magában foglalja a találmány szerinti bármely készítmény para;«taforíőzés kezelésében btÄo®y mennyisé-gének beadását pmazitaíerlőzpsben szenvedő vagy parazitafértőzés kockázatán# kitétt alanynak, Egy megvalósítási mód szerint a parazitafértőzés oka míracelluláds parazita. Egy másik megvalósítási mód szerint a parazita-fertőzés oka béiforegfŐl különböző parazita.
Egyes megvalósítási módok szerint az alany einber, és más megvalósítást módok skenní az alany embertől különböző gerinces, amely á kővetkezők alkotta csoportból választott: kutya, macska, tó. tehén, sertés, pulyka, kecske, hal, majom, csirke, patkány, egér és birka.
Egy másik szempont szerint a találmány ieir autoimmun betegség kezelésére szolgáló eljárást, a találmány szerinti bármely fcészfooépy autoimmun betegség RZelésére vagy megelőzésére hatékony mennyiségének autoimmun betegségben szenvedő vagy autoimmun betegség kockázatának A. találmány egyes szempont# szerint leíríégúti átrendeződés, asztma vágy allergia kezelésére: szolgáló eljárást, amely magában foglalja a kővetkezőket; a'ttÜM^vjp^nmá bármely késztetény beadása alanynak, M alanyban légúti Rendeződés, asztma vagy allergia kezelésében hatékony tnehtzyisdgben, Egy megyalősilásí méá szerint az alany asztmában, krónikus obstruktiv pulmonáris betegségben szenved;vagy dobányos. Más nmgvaló-sltási módok szerint az alany mentes az aszimá tíineteitőí. A találmány egy széniponfm á találmány széf inti oiigpunkleotid alkalmazás immunválasz sfonuláiására. A találmány tátgya továbbá eljárás immunválasz stimulÉására szolgáló, a találmány szerinti oíigonukleo-tid alkotta gyógyszer előállítására. A találmány valamennyi jellemzője a találmány különböző megvalósítási módjait öleli lel. Ennek megfelelően a találmány szerinti megoldás valamennyi* bármely elemét vagy elemek feombínáeirpi ínagában foglaló jellemzője beisisríozik a találmány mindegyik szempontjába. Az itt alkalmazott: kifejezések és terminológia a leírás céljait szolgálják és nem tekinthetők korlátozó jellegáeknek. A „magában: foglal”, „tartalmaz”, kifejezések, ragozott formáik és változataik vonatkoznak az utánuk íelsoroit és további tételekre. AZ ABRAK RÖVID HSMKRWTÉSl
Az 1 ábra két fajza a találmány szerinti módosított bázisok szerkezetét mntafa be. Az !a ábra :CpS hexaroet motívum (QTCGTT) egy részét matatja be. Az 1b ábm a 2!-dez0xiti:mldin beépült, hídrofob forma-analógjait, a 2,4-dífluortoíuolt 1FF), az 5-brömuridim (BU) és az 5-jódouridmt (íll) mutatja be. A 2. ábra a timin formaanalógjával, a 2,4-diílaortoluollaí (FF) módosított, B osszályba tartozó oligonukíe-ofidok (ODN) luciferáz-vizsgáiatának eredményén bemutató gráfikon. Az FF-fel módosított ODbi (SEQ íp NO:3-9) aktivitását hasonlítottuk össze á nem módosított, B osztályba tartozó szülőszékvencía (SEQ 10 blö:l>, teljesen PS szUlöszekvencia (SEQ ipldQ:2jés egy harmadik., módosítatlan, δ osztályba tartozó OPN ($EQ IP NÛG7) #f lyitésával. Ilf PE9-EQC-293 sejtekét stintdláltunk a jelzett mennyiségit OPN-dal, és 16 órával később a laeilerázaktivitás: mérésével határoztuk meg a NF-KB-siímöíáeiót. K-íengely: ODP-koaeentráció logaritmusa pM-ban mérve, és az y-teogely: relatív stimuiáeíós indexa A 3. ábra B osztályba tartozó, módoshott oligosukleotld (ΟΡΗ) iueiRráz-vp^matásak eredményeit be- matató grafikon.: límini helyettesíteSlink d-bróm-S’-dezoxitajdlímel (8ö> (SEQ íQ :NQri:fiQ:2) és 5-jód-2!-dezoxiurkimnel (JU) íSEQ iöNö: 13-15}. Aktivitásukat nem módosított, B osztályai íaslAzd szülSszekvencia (SEQ 1 ö NO: i), teljese« PSiSZüiäszekveneia (SEQ ID HO:2) és egy harmadik, :módosStatí8h, B osztályba tartozó ODN fSHQ 1D NO:37) tmfivitásávai: hasonlítottak össze- XHJÏ4LDC-293 sejteket stimuláltunk a jelzett meny-nyiségű ODN-dal. és 16 àM késóbfe a. luctíerázaktivitás mérésével Isatároztok peg a NEóeB-sdmujádót. X-tengely: ODM-kotícentráetÖdogariteusa pM-baa mérve, és az y-tenply;relatív stímulácíós index, A 4 ábra S oszíáíyfoa teítozöymódösiíött dipmi^jeotíd íPÍ5iM| i^ctiesiz-vjzsgálstának eredtseHyelt bemutató grafikon. 2Adezoxítímidini (T) helyettes itetíüuk 2^1οζοχίηπ0ΐηηό1 (0) (SEQ ÍD NO)tÓ-I8}, Az ü-módosított ÛDM aktivitását mm módosltotQB osztályba tartozó szblöszekvencia (SEQ ID NOB), teljesen PSi szälSszekvenela (SEQ ÍD Hö:2ij és egy harmadik,, Módosítatlan, B osztályba. tartozó ÓDN (SEQ ID Nü;37) aktivitásával hasonlítottuk össze. h'TLR9~Íd7CQÍQ sejteker stimuláltunk a jelzett mennyiségű ODN-dal, és lő órával később a ínciíerázaktlvítás mérésével kaíáibzíuk meg a ΝΡ-κΒ-stùnulàciôl, X-tengely: ODN-köiteeoítSeió logaritmusa uM-ban mérve* és az y~teogelyi relatív stimulât lös index.:
Az 5. ábra B osztályba tartozó, módosított QDN luclfcráz^|íá^«Í0^^'B8Ét^v|í^||«Íi^::ö^Í«^ oye# bemutató két graftkoa. 5~Etii-2^dez6xiarMtut (EU) (SEQ IQ NQ:42), Z'-dezexmridkt :-(0)- (SEQ D NQ:íó), S(jéd-2'~dezcmuiridim (JtJ) (SEQ |1> NO; 13), s.-br6nv2Aíezoxmrí<lmt (BU) (SEQ lUND:I8}ésóékíór-2-dezöXiuridmt (CU) (SEQ 1D NO:4l ) tartalmazó ODN relatív aktivitását hasonlítottuk össze a szMszekvenesa (S5EQ ID NÖ: i ) aktivitásával. Az Sa ábra- a 1'EK$dtfctiyitásR mM ábra az I^-altá-tertueiM mutatja be, AM-rom dotier áilagái f/- SEM-: mutötjMk be. X-teogélyek: ÖITöBköseenttáeró gM-ban mérve, és m yAengeíyek: relatív stímulácíós index (5a ábra) vagy az IFN-Sila kotreeíitrieié|a gglstl-ben mérve (5 b áferak A 6. ábra Eü-motkwdott ODN ktetferáK--vtzsgáía1á8&amp;k eredmények bemutató grslrkoiu Az, EU-módbsított, SEQ 1D NO:29. 30 és 42 szerinti ODN aktivitását hasmtlííQttufe össz® a szSlészekveneia (SEQ ÍD NQQ) és egy másik, nem módosított, B oszlályfes tartozó QI>N (SEQ ID NÖt37) íódiyiMsával. X-teap^íy: ÖDM-kbimemráeió μΜ-bau mérve, és az y-íéngely: relatív stímulácíós index. A ?< ábra módosított, B osztályba tartozó QDN lacilbráz-vjzsgáíatának eredményed bemutató-páEkoa. A ÍÖ-módosított, SEQ ÍD NO: 19-24 szerinti ODN aktivitását ássoslítottuk össze a szalSszekveneía (SEQ ID NO: 3 7) aktivitásával, X-töogsly: ÖDN-koneeub-áeló gM-ban mérve* és az y-tengeiy: reímtvstanntéiiös index. A 4 ábra módosított, A osztályba tartozó DON Itícilsiráz^vízsgálatának és FBMG-vtzsgábóásak eredményeit bemutató két grafikon. A l'U-módosltott SEQ ÍD NO:3S-37 szerinti DON aktivitását Ssasonliöttak Össze a nemi módosított szütöszekvesmia (SEQ IP MD:43) és a nem módosítóik B osztályba tartozó, SEQ !B NtM szerimä ODN aktivitásává!.: A 8s ábra it FERd-aktívitást, a Sfe ábra m IFM-alímíermelést mutatja be, A bárom donor átlagát +A SBM-t mutatjuk hé, X-íeugelyek: ODN-ikoneetífiáció logaritmusa vagy ODN-koncentráeió μΜ-bao mérvé: (8b; ábra), és az y-teógelyek: relatív sitsuoióeiós írklex: (Sa ábra) vagy m IFN-allá koncentrációja pg/ffií-béiUIbérvé: (8 b ábra) A 9. ábra módositon,, C osztályba tartozó ÖEtbl lUeiíeráiAviíí^álaS^ták eredményeit bemutató grafikon. A illdfiodösitött, SEQ 1D NO:27-28 és 44-45 szerinti, G osztályba tartozó 0881 akiivitását '^hasonlítottuk fissze a nem módosított sztilöszekveneia (SEQ ID NO:45) és oem módosított, B osztályba tartozó, SEQ 3D NO:37 szerinti 01>N aktivitásával. X-tengely: QDN-koneeuiráeló μΜ-ban mérve, és az y-teogeiy: relatív stitnulóéiós index.
A 10. ábra P osztályba tartozó, módosított ÖDN IocfM|i^vtpgálat^^:.aí^aA^ít bemata# grafikon. A JÖ-módosítod, SEQ ÍD NQ:3i-33 szerinti ODM :#tívltását ia nem módosított Sztilöszekveneia (EEQ ID ΝΌ:32): aktivitásával hasonlítottuk össze. X-íengely: OON-koncentráció logaritmusa pM-bah; iuérve, és az y-tengeiy: relatív stinmiásiús index. A 11. ábra T osztályba tartozó, módosított ODN ineííeí4x*yjaá01aiás:íak eredmé nyelt ixúhusató grafikon, A JB-módoshetí, SEQ ÍD NO: 47-50 szerinti ODN akítyltasái: és az li-módosított, SEQ ID NO:51 sezmti ODN aktivitásút a nem módosított sziiiőszekvencia, SEQ ID NO:25, aktivitásúvá) hasonlítottuk össze. X-tengeh·: pM-ban mérve, és m y4enply: relatív stimüláslós Index, A 12. ábra rövid ODN bemutató grafikon. A Jü-roódositott, SEQ il> HO: 39-40 szetinti rövid QDN aktivitasâï &amp; nem tuodöstíoíí, SEQ ID Nö:38 szerinti szildssæfeyescia -és a B osztályba tartozó, SEQ !DiNQ:37 szstiíií ODN aktivitásával hasótdítoííuk ősszé. Az OD#;EÖOTAE-pal és DOTA? nélkül állítottuk elő. X-tengdy: ODN-koneeRtráeió logaritmusa μΜ-ban mérve, és az y-tengely: relatív stímulációs index. A 13. ábra bemutató négy grafikon, ahol a BALBA egérből származó, .kSI- Üönböző OPNpÄal együtt fönyésaíett iépe|lek lépss|tteayészet-félSíúszójál>an mértük a éttokinktmeenirúelöt, A tenyészetek felSlösz<^áí S óra CTHF-aÍiá esetén) t®gy 24 óra (M-6, IL-lö és 11.Ί2 esetén j után gyűjtöttük be, jll-rnódosiíoít, B osztályba taAözó ODN (SEQ ID NQ:13}S módosítatlan, 8 osztályt tartozó ODN (SEQ 10 NQ:37) és nem-Qpö, negatív knmxïii ODN {SEQ 10 NO:26) aktivitását hasonlítottak össze. A 13a-ö ábrák rendre a FNF-alía, IL-6, IL-li és ÍL-12 koncentrációst mutatják be, X-tengelyek: ODN-koneeniráető aglmEbén mérve, y-teogelyek: mérve, A 14, ábra a B-sejfeproiífenáeíó FACS-anattziséuek eredményeit bemutató grafikon, CESE-vel lestett, BALBA egérből származó lépsejteket (4x lOS/lyuk) snkubáitunk 0,001, 0,01, 0,1,0,3, 1, 3 vagy 10 pgári ÖDN-daí. 72 órával az inkubálás után a sejteket CDÍ9-re festettük, és a B-æjt-proîiferâciôt FACS-gaí határoztuk meg, amit AíödFit szoftverrel történő elemzés követett Jll-módósitött, B osztályba tartozó ODN (SEQ I.Q NO: 13) módosítatlan, B osztályba tartozó ÖDN (SEQ ÍD NÖ:3?) és nem-CpG, negativ konboll ODN (SEQ 1D NO;2ő) aktivitását hasonlítottuk össze. X-tengelyc ODN-koneeníráeió pg/mi-bsn mérve, yAepgely: relativ 8-selt-pro! iteráció. A 15. ábra EiiSA-val mért m φ&amp; citoktntermelést bemutató kát grafikon. BALBA egereket (SAsoport) se, injektáltunk iö, 50 vagy lüöpg ÜDN-dal. A kontrollcsoport UK) μ! PBS-t kapott önmagában. Az állatokat az injekeiö után egy órával (ïNF-alfa: esetés) vagy 3 órával (lö-lö esetéig kardlális punkcióvalAlvérezteftíík, és a: plazmát EEtSA-vai vizsgálink INF-aíf|ra és IP-lÖ-re, jlNmódositotí, 8 osztályba tartozó ODN (SEQ 1D NO: (3:) és. módosítatlan, 8 osztályba tartozó ODN (SEQ 1D140-37) aktivitását hasonlítottuk össze. A15» ábra p TNE-al&amp;köueemráelcgát,: a. 15b ábra :az IP-jfi köncentrásís)jáí mutatja. bé. XAengely: ODN-dózis pg-ban. mérve* y-tengeiy: c i tok in k o ne en ír ácí ó pg/m 1-ben mérve, A 16. ábra TLR9-mediáita, a szülöszekvene-ia (SEQ ID NO: I) tkninje helyett általános bázist (Ö-aiftobeazimid&amp;zol) (SEQ |D NQ: Í 7S) tartalmazó, 8 osztályba tartozó QDNkdai kiváltott NE-KB-aktíválást mutat be. hTLR9~LUC-?.93 sejteket hikubáíbmk a míkleinsav jelzett uienttyiségévei, és a NiF-KBvaktivációt a lueíferázakítyitás rtrérésével határoztak meg ló órával később. X-tengely: ODN-fconeentraeíő lögartttnusa pM-ban mécvSi yAengely: 1FN-íí koneeniráeiója pg/ml-l»» mérm A13· ábra l'LRó-mediaita, ú szülőszekveneia (SEQ 1D NQ:1) tsBinJe Ür- talmazó, B osztál)ha tartozó ODN-däl (SEQ 1D NO: 153 és ISA) kiváltóit NF-KBÂtvâMst mutat :bé. íifLlS-· LUC-293 sejteket tnkobáltunk a nakléinsav jelzett mennyíségévei és á NF-xB-ákíivációt a lueiíerázíiktívíiás mérésével határoztuk meg ! ö órával későik X-to8jg$f* QON^meemrádó topríttnusa pM-feáít «.éve, y-tengely: IFN-a koncentrációja pg/mi -ben mérve, A 18, Ibra, TLR9-medtáíta, a tipofil smbs2iäÄ:«Aip«||^pi30g mellett cukormódosftást {2-O-iaetÜ-gnanozín) Is tartalmazó, B osztályba tartozó OTíN-dal (SEQ ÍD Äli 1-1! 3) kiváltott ΝΡ-κδ-Ρΐί válást matat l>e. Esés €>QN-ök aktivitását a szüföszekvencia t$EQ ID NO: l) és Csák lipoúi, SZubszÉOslt ntÉQóibiNöalógot tartalmazó, azonos szekvencia (SEQ ID NO: i 3 ï akti vitásával Itatopjítoiiuk össze. hIEX9~U,)0-2ÍQ sejtekét IPabáltek am«kieístsav jelzett mennyiségével és a NF-KÖ-aktivámÓt a iiKifcrâmkîî mérésé vei határoztuk meg M érával később. XAéngely: ODN-koneentráció logaritmusa (tM-bau mérve, y-tépply; IFN-tt koftCenírá-ctöjá ppmbbén mérve,
A 19. ábra TLR9~mediáUa, több, IsozzáíMmtö 5‘ végét tárialítiázói elágazó* 8 osztályba tartozó ÓDN-őal kiváltott NF-KB-akUválást mutat be. Az elágazó OöN: fft MM* %. ÍM és 102j aktivitását a SEQ 1D NQli szerisiti szekvencia aktivitásával hasonlítottuk össze, híL:R9-EíJO-293 sejteket inkwbáltonk a nakletpav jélZéti snennylségével, és a NF-KB-aktlváeléí a iucítotozaktlvitás mérésével hÄoznik meg ló órával később. 30 tengely: ODN-koncentráció logarnmusa pM~ban mérve, y~íengsly; ÎlN-stkmmentrâet^pg/tnt-beatnérve, A 2Ö, ábra TLR9-mediáita, rövid, módosítatlan, B osztályba tartozó ÖDN-<!ai (SEQ tO MO:3S) és lípó®, Szubsztitnáit aukíeottd-analógot és üpoíit, 3’ címkét tartalmazó, azonos szekvenciáin OöN-dal (SEQ 10 NO: 1261 kiváltott ΝΡ-κΒ-akiiválásí mutat be. Mindkettő DöTAP-pál és DOTAP néíköl előállított, hFEB9-EUC-293 sejteket MaMHunk a mtkMnsav jelzett mennyiségével és a NF-KB-aktivációt a iimtíerázaktmíás mérésével határoztak öreg 16 órával később. X-tengely: ÖDN-korieentrádó logaritmusa pM-bao mérvé, y~ tengely: IFN-n koncentrációja pg/ml-bcm mérve, A 21 · ábra TlJtó-raediálta, a sztllőszekvencsa ISBQ íD NO: 1} Ömlője helyett Ó-pretnii-dö-í tartalmazó, két, B osztályba tartozó OONAiat (SEQ 10 NO: Hő és 02j Mváitetí NE-sB-aktrváíást mutat be. hTERÓ-LUCN 293 sejteket inkabáituok a nnkieinsav jelzett metmyiségevel és a NF-KBÄiväeidt a lud&amp;rázaktivitás; mérésével határoztuk meg 16 órával később. 3£-tengeiy: ÖON-koscentrásie logaritmusa pM-batr mérve, yrienply: IFM -íx koncemrációja pg. snl-ben mérve, A 22, ábra hÓlBÓ-mediálta, a lipofll, mkxszritoált nukteötid-analóg mellett második pulleotsd-analógst is tartalmazó, B osztályba tartozó QÖN-dát $ttQ IÚ Nö:13g, 7-óeazaKlö; SEQ 10 NÜA39, jnozm; SEQ ip NO:3411 S-metll-dCj kiváltott NP-üBtokdválást mutat be. Ezen O0N-ok aktlvilását a szölőszéitoéneia (SEQ tQ: NO: 1) és a esak Üpoíil, szubsztituáh mikleotid-enaidgot iarialtnnzó, portos szekvencia (SEQ 10 Nö:l3) aktivitásával hasonlítottuk össze. h3'ERP-LBO-2'93 sejteket inkubáitunk a nukleinsav jelzett mennyiségével, és a NF-eB-alílvádÓt a Ind ferázaktivitás mérésével határoztuk meg 16 érával később, X-ieöpty: QQN-koncenttoclö logaritmusa pM-ban mérve, y-íengely: l|Nra:koneentráeiójapg?mIrben mérve, A 33. ábra b!'l.R9-mediálta, lipéfll szuhszíitoaií nukíémkbanaiőgot tartalmazó, ? osztályba tartozó QBN-óai(SlQ IQ NO: 132-134} kiváltott NFocB-aktlválást mutat be, Ezen ÖDN-ok aktivitását immunsümu-láns, C osztályba tartozó ODN (SEQ 10 NO: 198) aMvitásával hasonlítottuk össze. h tER9-LUC-293 sejteket mkubáltnnk a ntáíleinsav jelzett inennyiséglvel^ és a NF-KB^sktiváelót a lucíferázaktivltás mérésével határoztuk meg ló őrávd késíksb, X-tonply: Ö0lsi-koítcemrácto logaritmusa gM-Nm tnérve, ydéngely: ïFN-α koaeemrá-ctójapg/uibíxm mérve. A 24. ábra: hfLRiS-mediália, P osztályba tartozó ODN-dal (SEQ ÍQ NO: 58-63) kíváliöil NF-vB-aktívá-iást bemutató két grafikon. A 24a ábra a SEQ fl> MO:5S-ői szermií szekvencia aktivitását mtitutja be B osztály ba tartozó pozitív kontroll (SEQ ID NO:S6) Is modosítátian, F osztályba tartozó ODN (SEQ ID NO: Só) aktivitásival Összehasonlítva. A 24b ábra a SEQ 10 NO:62-63 szerinti szekvencia aktivitását mutatja be «ly&amp;naaoa: pozitív és negatív kontroll aktivitásával összehasonlítva. bTHitALliC-293 sejteket inkübáitank a nuklemsav jel-zsíi mennyiségével, és a NF-xB-áfcíiváeiót a híeiBrázakiivitás mérésével határoztuk még 16 órával később, X-tengely: ODN-koneentrácíó iogmimtusa μΜ-han mérve, y-tengeíy: realattv stimulációs index. A 25, ábra bfLRO-meíltáita, Ρ osztályba tartozó, Ilpofil. szubszumált smkleöiid-analögot tartalmazó QDN-daF(SEQ ID NO:64, 66-67} kiváltott NP-scB-aktiváíásí bemutató grafikon. Ezen vegvíííetekaktivitását B osztályba tartozó pozitív kontroll (SEQ ID NO:55), C osztályba tartozó ODN (SEQ IÏ) NO:68) és módosítatlan, P o$#t|yba:táí## ODN (SEQ ID NO:57) aktivitásával Imsoníitottuk össze. hTLR9-LUC-293 sejteket inkrsbál-lunk *öőnnyíség|v«4 és a ®*kB-akílváetöí a iociferázakíivitás mérésével hstámziuk meg 16 órával |é#bh, X-t#geÍy: GDN-koneántráelö logaritmusa μΜ-han mérve, y-teogeiy: realáíív stimulációs index. A 26: ábra IFN-rt Imlukclöjái matatja feelipoíll, szubsztituált nukleötíd-amáógot tartalmazó, F osztályba tartozó QÄ-dai (SEQ ID NQ:58-63). A 26a ábra SEQ ID 610:56-61 szerinti szekvencia aktivitását mutatja Im B Osztályba tartozó pozitív kontroli (SEQ ID 610:55} és módosítatlan, P osztályba tartozó ODN (SEQ 1B 6((3::56} aktivitásával összehasonlítva, A 26b .ábra SEQ ÎD 610:62-63 szerinti szekvencia aktivitását mutatja Ugyâhszôù pozitív es negativ kontroli aktivitásával összehasonlítva. Emberi FBMC-ket inkubáitunk a jelzett QDN-dal, 48 Órán át, Ezután a sejttenyészeí félíllöszójáhan EIJSA-val tuegktíáróztuk az IFN-«~í, X-iettgelyek: ODN-koneentmeió μΜ-han mérve, y-letígeíyek; íFN-a koncentráeüó|a pgtml-ben mérve. A 27. ábra JEN-a: indukcióját mutatja be lipofii, szahsztiíuálí nukleotid-analogot tartalmazó, P oartályba ίφ&amp;ζά QDN-da! (SiQ ID NO:64, 66-67), Ezen vegyületek aktivitását B osztályba tartozó pozitív ko8trolF(SEQ ID 610:55),, C osztályba tartozó ODN (SEQ ID 140:68} és P osztályba tartozó tartozó, módösliailaö ÖBN (SEQ 1D NÖ:S7) aktivitásával hasonlítottuk össze, Embert PBMC-ket ipkubáhunk a jelzett ÖDN-dal, 48 órán át. ;Bz-: után a sejkenyészet íelöltNzöjlbsn ELISÄ-ya! megbatáí9#ík az IFN-ö-l. X-tengejyek: ODN-kütm#trMó pá-ban mérve, y-teogelyek: IPN-u koncentrációja pg/mi-ben mérve. Á 28. ábra B# IlpoEl, szubs#öláit hukíeotíd-ábaíógot tartalmazó, P osztályba tartozó €)Dbl-dat (SEQ 1D 610:58, ó0~ó2, 28a ábráj (SEQ ID 610:64 és 67, 28b ábra) történd Indukcióját bemutató RÉ gmrtteu M alrtfVbást módosítatlan, B osztályba tartozó ÛDN (SÉQ ID NO:55), rnódositatlsn, G osztályba Brtó# ODN (SËQ ÍD 610:54), negatív kontroll ODN (SEQ ID NO:53) és iBórhslíáílan, F osztályba tartozó ODN (SEQ 10 610:56) aktivitásával hasonlítottuk össze. Ä három dohóíié! származró PBMC-et ODN-öai iokobâltak 24 órán át, és a Íelülószéí: iundnex-szeí etemezsíík. Az ábra az átlagot: és a +/-- ÉEM-áí mutatja be. X-tengelyek: ODN* koneeotrácló μΜ-han mérve, y4#gelyek: mérve, A 29. ábra B-sejt prol iterációját mutatja be lipofíl, szubsztstuált nukleotid-anaiógot tartalmazó, P osztályba tartozó ÖDN-dal (SEQ 10 640:58, 69-62, 29a ábm) (SEQ ID NÖ#4 and 67, 29b ábra) történt kezelést kővetően, Az aktivitást módosítatlan, B osztályba tartó# ÖDM (EEQ ID NÖtSS), módosbatlaö, Q osztályba ΐ#ό# DD6Í (SEQ tD M>;54E negatív kootsoll ODN (SEQ IB 140:53}, modöDtaiíatt, F ösztályha tartó# ÖDÍI (SEQ ID BO:56), i-FS, B“848i SEB és pöli|;I}:(C} össze, A bárom donort#! szátma#, CFSE-veí jelölt PBMC-eí ODN-dai inkubáitok 5 ttapoo át, majd CD-19-eIienanyaggaS fèstetttik. À csökkent CfSE-'fesíSdésu B-sejtek százalékos antnyáí határoztok tneg. X-tengelyek: ODN-koncentrácló μΜ-han mérvei y-tenplyíÉ: csökkent t'estödósü B-sejtek %-a osztódás után. A Jb. ábra egér BBiMx. Itportl, szub^tituáií ntáclemtdi-áítatógöt tartalmazó, F osztályba tartozó ODN-dai (SEQ: ID NO: 58, 684¾ 64 és 67) történő ind akálásái bemutató gmfiköh. isse« vegyületek aktivitását B osztályba tartozó pozitív kdbíít}!í(SBQ It) NO:5S) és negativ kontroll ÍSECJ íl> KO:2# aktivitásával hasonlítottuk: ősszé,-BALBA; egereket (5/csoport) se. injektáltunk különböző dőzísö ODM-dal Az áriatoktól az injekciót kővetően 3 órával vért vettünk, és a plazmát ELÏSA-val IFN-aifára íesztelíöle .X-tangely: 01>hl-dózis pg-bao mérve, yuengely: 1PN·« koncentáciöja pg/mi-ben mérve. A 31. őblá:tp (3Ä egér SAÍ/N tyroormodelíben tumorra kifejteit hatását bemutató két grafikon. Nőstény A/I egereket a 0. napon (iO/csopon) se, mjekiáitank 5 x 105: Sul/hi tumorseiíteí. Az egereket 35 pg (3ta ábra) vagy 388 pg píb ábrái E osztályba tartozó, lipofil, szttbsztituálí ntîkleotid-anaîôgoî tsutaimaző G£5bl--dal (SEíj 11) NÖ;6Ü, 64 és 67), módosítatlan* C osztályba tartozó ODN-dal, módosítatlan, B osztályba tartozó ODN-dai (SBQ 113 ;MC1:5Ő:1 vágy FBS-sel önmagában kezeltük hetente*. a &amp;. poszttumor napon kezdődően. Az állatokat télélés és íumortériogat szempontjából monitoroztuk. A tamötméreiet (hosszúság és szélesség) digitális nóniu-szös leíőtnéröveí mértük. A íumortérfogatot a kkövetkezŐ képlettel számítottuk ki: tumortéríhgat::: (0,4) (ab2), ahol a ^ óagyóbi átmérő és b - kisebb átmérő. X-tenply: a tammimdnkeio utáni naptár szánta, y-tengéíyí lutmmérlogat mm3-ben mérve. A TALÁLMÁNY ÍZLETES LEÍRÁSA: A találmány széf’inti ntégíédás részben fokozott'€ρ€* <É|piÉÍéottd3k^g alapul. Ismert, hogy a CpCi pSigonukleoddok stimétáljáfe az Immunm^szerk pélŐM a S^es tölbszeri (H,K9) létrehozóit iníeíákáiőn keresztül, A lillifsiunulálás^^ van, például Thl túlsúlyú immun válasz síbmíláiása, NK-sejt-aktiválás és B-sejt-akiiválás. A találmány egyes szempontjai megváltozott szerkezeté immunstimuláns oiigonukteotidok azonosítására voostkoznak, amely érkezei változás hatosai van a TLRÜ-cel történő ímerakölőrni A léítalálők ksftxtiáiíák, hogy a Cpö>-motivumon kívül Sipofit, szübsztituáií nukléoííd-anáfegokát tailshnázó oSigoouklemidok interieron-o (íFbi-ö) termelést stiítmlálé és Mit# Elválást litdukáló ké-pésségé #köÁhk Bz a hatás a tesztelt immanstímtdáns oligonukleotídok vá|p$®|^ volt. A ipkoKOtt stimu láos kapacitású módosítod oügonukleotidokat E osztályú olîgooéktemidoknakæveztdk al, A jelen találmány szerinti E osztáíyó módosított olig<mokleofidök immunválaszt Indukáló k^apítása egyes esetekben tokozott: .Az immunválasz índukálása az immuasejtek számának vagy atóvításának bármilyen növekedésére vagy egy itmmmlakíor, például ehökin, abszolút szintjének vagy expiesszíőjának fokozódására utal Az imnémseltek közé tartoznak a korlátozás szándéka nélkül az MK sejtek, (Mf f límfocíiák, €D8-f T limfoesíák, :B sejtek, dendrillkus sejtek, makroügok és egyéb anílgétEprezentálö sejtek. A korlátozás szándéka nélkül a elíokinek közé tartoznak az IhterieukiïKîkv ΤΝΕ-α, Flt-SigäPdök és ko-stimuláns molekulák.
Ismeri, hogy a metilálstian CpG-motívumokat tartaimazé oíigonukieotidek képesek stimulálni az immun-rendszeri a i Toll-szem receptor 9 (TLR9) útvonalon keresztül. Számos cUokúü:lddWbÉii|á ÄÄ;i TI..E.9 akti-váeíójával Azaz az indukció fokozódik, ahogy a TLR9 stimulációja fokozódik. Általában azOpbah inverz körire*, láció figyelhető meg a TLR9 és az IFN-o indukciója között a CpG ÖDN-ok esetén. Kimutattuk.. hogy egyes, a találmány szerinti módosítások .módosított jelxöminíázaíöt képesek előállítani oly módon, hogy forditott korreláció helyett közvetlen korreláció figyelhető meg a ILRS Sktiváeió és az IPN-o között, A feltalálók megvizsgáltak a lipofil csoportok hatását a CpG motívumot körülvevő régióban. Amint lent a példákban bemutatjuk, különböző típusú lipofil, szubsztituált nukleoíid-analógók, például 2yl-őílíuoriöÍUö!j 3---brómutacll és S jődtüadl épült be a CpG olígonukleotiőba mind a CIpCí motívumok % mind a 3' oldalán. Meglepő módon a lípoill, sz.ui>szíiíuáit nukleotkl-assalógok beépülése a hTLR9-aktívítás, valatním az IFN-ó-indukció szöfcatlasa! erős fokozódágáte vezetett humán PBMíÁkben, Is»ii»SS nukieotíddai, példád xiraelllal (amely szerkezetileg hasonlít a hiányzik a meiicsspert) íÖrtéHÖ helyettesítés a hTIRR-síinmláesÖ erős csökkenését eredményezte,: A ^i^^t’iííígt^ieotiykÉ^e a TLR.9 stönuíáelípoak fokozdÜ^.:|£M^;inthäto kozott, arnenr^lhep a ÍipöSi, szuissztátuált nukfeettd-anaidg a CpO mchívtnníGÍ 5’ iránybmhéípízkedeít el, mint anieööyjhen a mc^ysrötá! $* irányban helyezkedett el, Λ dupla szubsztitúció (azaz lipoíii, sznhszíi£uá|í aakleo-tM-analóggal történő szubsztitúció 5’ és 3*- irâayban) eredményezte a tesztelt leprőssbb stíxnxdáeídt» Ezzel szemben guaxsin vagy oltozin szubsztitúciója 2,4-diíl^sortolucfMaí a Cpö í»#fetepná! un«## esetben a TLR9 siimuiáeiós index erős: csökkenéséhez vezetett, A lipoili, sziíbsztiteah Kakleotidaíxalóg-nxédosíiás az IEbl-ö xndúfcctö erős fokozódását eredményezte. lö-iönösen az 3-hrőmtiJ-aeülal és 5 jAdnraeiilal »iódösiíöít ÖBH esetén vöft megfigyelhető erős köitéiáeiö a ΉΜ8* stimuláció és az ÍP$k»4ndöfceió között. Mint lent léittuk, ez a megfigyelés váratlan, mivel |ij: a 21317 jelŐ; sziiőmoiekula lényegében inaktiv az íFM-ö ihdnkálásában, és §§ az ezeket a módosításokat: nem tartalmazó Gpö CtöM-ok esetén általában fordított kdtzéláéió yan a TÏ..R9 és áz lEbba indukció között, A leírás bizonyos jszempontjai szerint az öíigonukieeUd szekvenciája RíYZRí. Az oligönnifeotld tárták mazhat égy vagy több iíyexs motívumot. R: és 1¾ jelentése egymástól iliggetlerúu bármely kpofU, szubszíítuáit nukleotid-anslóg (L), rtukleoiid vagy kötés,: Előnyős azonban, amennyiben R, és IG legalább egyikének jelentése iipoßl szabszihMit /mikteotid-anaiog (ΙΑ BgyéS: esetekben minci Et, mind R* jelentése L, MM a. példákban bemmsgúk, a CpCx xnötiy tinit# mind: $\ blind 3' May ban írt. Mámáé- oiigonukleotidbk MWmi stimuláns hatásnak. Azóxtbán neltány esetben csak egy É jelentése h. Például R( jelentése lőhet L és I.2 jelentése leltet nuk-leotid, vagy fordítva. Más esetben Rj jelentése leltet L és Rj jelentése főhet kötés, oly nrödött, bogy az ölispaak-ieoíxd 5’ RjCG 3' szerkezetet íarfalxnaa.
Egyes esetekben az olgonukleoíid szekvenciája RiNiYZI^dR, ahol és N, jelentése: Θ-3 nakleoiki hosszúságú rmkleatid. Egyéb lehetséges variációk például .5’ Ei M5R5¥^ H2 3k 5’ RÄYZ 3 ^¾¾¾. Y jelentése píxitniclin nuMeofidi Z jelentése parin, plnMdin vagy abázfsns csoport. Egyes megvalósítási módok szerint Z jelentése előnyösen purin.
Ljelentése lipofti, szuhsztituált nakleoííd-analóg, amely lehet például,5- vagy ő-tagú gyárik atfkleobázis-analóg, Az 5- vagy ő-tagú gyűrűs mjkteobázis atuilóg egy példáját :f$ képié# csoport
A, B.3Î, f>, R és F jelentése egymástól Jííggeüenü! a kfvfelkezôk bármelyike lehet: C (szén) vagy N (nitrogén) -©^beílffeíáiÉ&amp;gátk- is0p''ÍSÉsztít»ens kötődik, például a korlátozás szándéka nélkül F, Cl,
Rt, :l, alldi, alfcenil,; alkinil, káiídgexiezett alkik halogénezett; álkéhtl cikioalkíl» O-aikil, O-aikenü, -NH-alkil, d^faikíiR ~S-alk|fs. -ÉO-alkíl, -BÖMlkil, nitro, ciano, kaxboxiïbészter,; lend, tíefenil, benzil, oxo, tio, bidroxll, metkapío és mim Egyes esefekbetn a szubsztiíuensek legalább egyike mm oxo, tiö, hidroxl, metkapio, imino, ïamino vagy metál, n értéke Ö vagy 1, A szaggatott vonal adött: esetben jelenlévő kettős ÄMjehiz.: A szubsztitu-: essek legalább egyike azonban nem a követezők alkotta ésopsttbói: választott oso. tiöy tndroxi, méfkapío, Imins, amino, tneíil és hidrogén. Továbfeá A, B, X, Ö, Ë és f SíöíWök összességéből nem több mint 3 jeléniësé:: nitrogén .pi). Egyes megvalósítási módok szerint valamennyi A, B, X, í), É, F atom jelentése szén í€). Más esetbe« A;, B, X, D, % F atomok közül legalább egy, keltő vagy három jelentése nitrogén (N>.
Az (1) képletéi vegvület lehet például a következő iipofiï, szubsztituált nukleotid-analógok bármelyiké; szubsztituált ptnmidi«, szubszíimáli uracil. szubsztituált tokiói sz«bsztímá|t Imidazol vagy pirazol, szubsztiisáit: trlazoi, á-dtlóő-öfacik Ó^Am-uraell,, S^őd-uraeil, S-etiimrád|y 5»pfopil»uraeii S-pt'opiml-uraeii (B)-5-(2-brőm-vini{}-uracii vagy 2.4-diíluor-toluol. A ílipik szufesztlmáit rntkleotid-analóg állhat önmagában vagy lehet másik vegyídettel fezioMit, Például fúZlottálva lefest 3#íató: stomás vagy áldás .gyiÄmtodbak Kapcsolva lehet 5-6~tagú eukoraxopotifeoz, pél» dául peikozfeoz vagy hexdafeoz, Fentözok közé tartozó példa a fhranúz; Így a ríboz vagy dezoxMhoz, és: a hexó-pk közé 'tmwé példa a piranóz. A psntóz vagy hexóz adott esetbe:« szobszíttnált leltet a következőkké!; F, amino, aífeovi, SiköxBeíokk anxonipropil, alkeníl. alkírtil vagy öiGj-alfciíé« híd.
Az oligoouklaotíd tartalmazhat nem sukleotki mödöshást is, példáid Ç6-pÎSpoliétiiénglikoitv CrCj0--alkáís-dioit, Cr-G tralkílami«o-k.ÖtŐcsoportot, CrCB-alkiitlokkifeScsoportot, kplés'Asi'int, epesav&amp;t, telheti vagy telítettlen zsirsaatv, lelátok hexadeeil-glicensn, dihexadecikglicerm csoportot, oktadecikgilcerio vagy diokta-dsdl-glicert« csoportot vagy E»vlts«íife esoportot.
A lipoflt, szufesztímáit npkíeatíd-aoaiógokaí bármely kmmms&amp;milSns oligoRtikleptid: tiataipsas^akia. A tm láhsáey egyes megvalőshási módjai sprint az immunsbrnuMns öltgöBukkopdok „CpG dnmkleotid” tmmafe--stímulárss ipotlvinaókat taPälipäsSiäk^ A CpG dinukleoííd lehet metüáít vagy metllálatlast. A legalább egy metiíáiat-kin CpG äimikleotMöi tartamázó Immtmstbstiläns «hklemsay a|yaa «tAlemsav-örnktola. mely metilálaláá eiíözlmgímsiö-dibhkléötld szgfcvéúéláí (azaz «ietllàlatlan, # húnyó elíidiM 3' irányba« guanozin kövét és ioszfátkö-tés köti ók® össze) tartalmaz; és amely aktiválja az az ilyen immtmsíimaláus suklo insav CpG
sntkleinsav. Számos szabadalom, közzétett szabadalmi bejelentés és egyéb publikáció ír le CpG «ukieinsavakai, példáai 6 BM IP; ö 207 646; 6 214 SÖ6; 6 2M 371; 6 2301iój és 6 339 068 számú egyestllt államokbeli szabadalmak, A iepbÄ égy médiák CpG dinufclemidpt tartamazá immuosíimuláíts mádemsav olyan mádeinsav «tôle» kóla, mely métsiáh eiíozin-gúmíinMinukfeúíd smkveneiät (azaz ragiiláli, 5' irányú eitidmt 3’ irányban guanoztn követ és íoszlls kötés köti ókét ősszé) tartalmaz, és amely íódőíáija az knmanrendszert. Más megválésMst mèdeà szeriftt az imttmÂit«ùlà«s öltgomikleoödok mentesek a CpG dámkleoddoktól. Azokat az oíi^mékleotidokatv amelyek mentések a CpG dionkleotidoktöL «er« CpG óílgomtkleotidokoak nevezzök, és nem-CpG
Gbe« gazdag CGG-ok, azaz azÖGN legalább f, A találmány szerinti £ osztályú ODN-ok taríalmaGratják egyéb CpG OiXM osztályok, például A osztály, B osztály, C osztály, T osztály és P osztály rnotivumaii és tuiajdortságait, amennyiben tnagakhttn foglalnak íipoft sztibsztimálí «nkinetldokräÄ Y GZ motívumtól 5' és/s'agy 3' irányban. “A osztályú” CpG immunstimoSáns tsukleirtsavakat ismertet a 2000. szeptember 27-én benyújtott, 09/672126 szántó egyesült állantokbeli nent-icleigienes szabadalmi bejelentés és a PCT/USöO/2652? (WO Ö1/229I10) számon köz^íetí Bzen nuklemsavakat jeilemzk hogy kiesek «nvtíéron-áiía maps szintjeinek indnkáiására, miközben hatásuk a B-seitek aktiválására minimábs. Az A osztár lyuCpGímmutt^imuiánsnuklemsavafc «em sz0ks%s?æiilen tad^ Yamamoto és munkatársai (Yamamo to S e? aí. J Immunoi 148:4072-6 (t902)) által letet GACG ÍC. AGCGCT vagy AACGTf feexamér plindromöt; A.,2000,. szeptember benyújtott, 09/672126 szám« egyesült államokbeli öetn-idelglenes szabydllïti feíjélentés és: a PCT/USÛÔ/MS27 fWD 01/22999} számon közzétett nemzetközi: szabadalmi bejelentés ,Α ·φ&amp; iáíyba tartózó immunstbnidáns nukleinsávak példáit ismerteti. A “B osztályú” ODhl-ok potens módon aktiválják a B-sejíeket de viszonylag gyengén indukálják az IFN-őri és viszonylag gyengéns aktiválják az; NK-sejíeket. A B osztályba tartozó CpG nukleinsavak jellemzően tejesen stabilizáltak és bizot^os é^^ báziskeníevHtsban nresilálatlan CpG dinukleoiidot tartalmaznak. Lásd pl. 0194388;; :62Ú764ő; 6214ί1Βό> 6218371; 6219! in. és 6319068 szánni amerikai egyesült államokbeli szabadalmak. Egy másik osztály p#éas mdílöa Wöfcáljs az íFN-a~t és aktívába az j^íGsejteket, &amp; viszonylag pengén Slimgilä: a B-sejíeket; ezt az osztályt “ A osztálynak” nevezték el. Az A osztályba tartozó Cpt3 nnkieinsavak 5' és y j«îïeînsç6en stabMí^áiS poll-G: szekvenciákat és legalább 6 nukleotid hosMóságu; palindrom fosz-íodiéSztér CpG dint jkléöí Idát : taítálittazö szekvenciát tartalmaznak. Lásd pl. a P€17LíSÖ9/26S27 számon közzé-tett szabadalmi bejelentést. é CpG nukÍéinsavak égy másik osztálya aktívája a B-sejieket és Nk-sejteket, és indukálja az IFN-mt: ezt az osztályt C osztálynak nevezték el. A “C oszíályöP ímmtmsBmniáss nuklelnsavak legalább két köfeíallö motívumot íariaitnaznak, az immunrenszer sejtjeire: egyedi: és: fcMuaiss stimuláns Látást gyakorolnak, Äahty ÖPN tartalmaz mind hagyományos “stimuláns’* Cpö-szekvenciát, mind “GC-gazdag” vagy “B-sejt nentralizli#’ motívumot. A kombinált motívumot tartalmazó nufcMnsavak immansdmuláns batári valahová a hagyományos WB osztályú” CpG GÖN-okkál asszociált hatások - amely GOM-ok a B-sejt akti válás és a dendritíkns sej* (GC) aktiválásának erős induktorai - és a feözelmülthan leírt immaustitoMlaas nuk5emsav?b^á8%al (“A osztályé” CpG; Om) - amely ÖDN-ok az IFM-o és természetes: Slésejt (íéíí) ákiiváeíó erős mdöktoraj, de a B-sejí aktiválás és a DC-áktlválás viszonylag gyenge indnittotui - asszodáh hatások k&amp;ró esik, Krieg AM et aL 11995} Mature 374::S46-9; Bällas 2K ét ál. (1996) I Immunol ! 57: í 840-5; Yamamoto S et al. (1992) 1 Immunol 148::4072-6. Mlg à B Osztályba tartozó, előnyös CpG van foskíbrikioái gerince, és az A osztályba tarto zó, előnyős CpG ODN-oknak keveri vagy klroéra gerince vsa,, a kombinált motívumot tartalmazó, C osztályba tartozó ímmuostmvuláus nukleíitsavak lehetnek akár stabilizáltak, pl, lehet feszioroiioáí, kimére vagy fosz&amp;dl-észtét gerinóök, és egyes előnyös: esétékbéh lehet íélpaha gerincűk. Bzt az osztályt hja le a 2fíÖ2. augusztus 19-ép bényújtOít, IÛ/224523 számú egyesöl államokbeli szabadalmi bejelentés, mély hivatkozás htján teljes egészében a kitanítás részét képezi, A “P ©sztályó” línmunstlmnláns oiígonukleotidok több doméní tsutalmaznak, köztük egy S'ilLR: aktivációs: doménb 2 doplexképzó régiék íés adott esetben jetenlévő távkOzt ás 3:’ iarkat. Az ebbe az Osztályba tartozó óligöuhkieotidok képesek egyes esetekben sokkal magasabb szintű IFN-a szekréciót indukált»', mint a C-osztály. A P Osztályba tartozó oiigonukíeotidok képesek spontán módon összeszereiőání konkatamerré akár in víüyk akác ifi Gbó, akár in vitro és in vrró- SSrinelÿ elméleti korlátozás nélkül, egy, ezen molekulák működési módjára vonatkozó lehetséges hipotézis, hogy ez; a tulajdonság felruházza a P osztályba tartozó oligotntkleoí idokat azzal a képességgel, hogy bizonyos immunsejtekben nagyobb mértékben keresztííödk a TLR9~eí, ezáltal a korábban leírt CPG oiigottukleotid-osztályokhoz képest diszíitikí itummtaktivslás-tniritázíitot indukálnak. ATUR8 receptorok keresztkötése erősebb ÏFN-α szekfééíót indukálhat az 1. típusú ÍFMR visszacsatolási burkon keresztül a plazhtacitoid dendritikns sejtekben, A P osztályba tartozó oligonnkleotidókst ltja le a 1ÏÎ7MSM serozaíszántú egyesült államokbeli szabadalmi bejelanlés. A “T osztályé” oligöntJkleoíiddk lFN-alíá alacsonyabb színjeinek szekrécíÓ|áí iodaMláfc, ainennyíbén ufoeseoek úgy mödpriiys, mint a iájálmáuy szerinti öitisMok, as lEN-nei kapcsolatos eifoktoek és kentednek ^mrniyé>b mɧmMmefáé^^^&amp;s§ék^ «äs B oszláiyhá vagy € osztályba tartozó oligonukleotidofc, miközben mégtaxri# azt a feépessêgüfeetv bogy a B osztályba tartózó OíiptíXíkleotidokboz hasonló IL-lÖ~szin-tekét indteátoak, 4 T psMlyba fortozé otigonukleotidokÄt bp jo a 1 lfoP9Ó83 sorozatszámá egyesíllt álla-mokbeii s4tbaM£B| bfejelebtéSi oteynek levies tartalma hivatkozás bitón a kiiantiás részét képezi.
Egy megváfosllási mód szerint a találmány szerinti ímmtmstimuiáns ÖDN előnyösen kombinált katfonos Iliiddel. Egy megvalósítási mád Szerint a katiönos lipid DOTAF ÍM~[l~pJ-óió1soiioxi)propii3^t^lÍ4díHettí* ammonianvmeti-szöÄj. Λ DCM'AJ* helyett vagy mellett más, hastmiótidajdooságokkal remtekezÖ anyagok is alkalmazhatók, például olyanok, amelyek képesek az endoszomális komparimentbé szálMsa. Az egy# l%íiÓkászitmények közé tartoznak például az EídIECI'ENE™ (egy item iipöszömilis lipid. speciális PMS ta·* tieszáló eohanszerrei) és a BtlEEBiEEíÍl™ (᧠hatásmechanizmusá dendrimer technológia). A iiposzómák lm> reskedelmi tornatomban beszerezhetők a öihep BRE-fok példán! LiPÖEBCTfoí** és néven, amelyek kationos llpidkeot, például NHÍtip,3 (DOTMA) és dHoetIMiokíadeeitatnmóniutB-brpfuldkéhí (PDAB) kiszereltek. A llpl^lplk':^ÉálÍÉs^t 3$#* gáló eljárások jól ismerlek a szakirodalomból, és számos publikáció írja le éket. A liposzómákat áttekinti Gregoriadis G. ( 19tS) Trends Bioteehnoí 3:235-241,
Egyéb megvalósbásl nto#k sz#nt az imnmnsEmuláns CíBN-ok nem kattonos liposzómában kiszereltek. Az öPNti?an található mériösltött analógok iipofd teripészefonek köszönhetőén még a rövid, akár 3 nukteákl hosszúságú ÖDN-pkat sem szökséges tornmláiní a hatékony in vim működéshez.
Egy megvalósítási mód: szerint a találmány szerinti immunsimmláns ÖDN-ok kovalensen zári, primer és szekunder szerkezetű, súlyzó formája molekulák formájában vannak Jetet, Egy megvalósítási mód szerint, a ciklusos oigoribonnkleotidok köztes dupíaszálu szegmenssel összekötött, kék egyszála burkot tartalmaznák. Egy megvalósítási módszertől legalább egy egyszáló lttatác: tartalmaz a találmány szerinti ifontunstimtíláns DÉS motívumot. Egyéb, a íaláhriány szerinti, kovalensen zátt>: súlyzó formed molekulák magokban foglalnak kimét» TíNfoNNS molekulákat, amelyekben például a dupla szála szegmens legalább részben DNS (példán! vagy bomoáimer dsDNS vágy heterodimer DNS: RMS), és legalább egy egyszálú hurok magában foglal találmány szerinti immnnstimaíáns DMS motívumot. Más esetekben a kunéra molekula dnpiaszálú szegmens« DNS.
Bizonyos inegyálósitást módok szerűd az ímmansinfoíiáns ÖDN izolált. Izolált molekulának nevezzük azt a molekulát, amely lényegében tiszta, és mentes egyéb anyagoktól, amelyekkel általában egyött található a természetben, vagy /« rendszerekben, a szándékolt áíkáhöazásunak eéfszerő és megfelelő mértekben. KiUlö* nősén, az immnnstímalins OON-ok megfelelő mértékben tiszták és megfelelő mértékben mentesek a sejtek egyéb bioiéval alkotóejéíbéhöl, hogy alkalmazhatók legyenek például gyógyászati Ifosriifoepyek élöálihására. Mivel a találmány szerinti Izolált hnnmnsilnsplans ÖDN-okat összekeverhetjük gyógyászaíiiag elfogadható bor-dozóval gyógyászati készítményekben, a teszítotény tömegének kis százaléka tartalmazhatja az OÖM~ot. Mind* azonáhal az úmmmsílmuiáns DON lényegben tiszta, mivel lênye|$&amp;ç» »me* lyekkel élő rendszerekben kapcsolatban lebet.
Az ímnnmsrimuláns miklemsavuktíák leheá fetfoéta gerince. A táláiíuiny eéljáihák leírásában a klméra gerinc jelentése részben stabíbzáít gerinc, amelyben legalább egy íniernukleoiid-kötés foszfodiészter vagy foszfo-díészter-szerő, és abol legalább egy másik mtklötidek közötti kötés stabilizált nnkleotidofc közötti kötés, ahol a legalább foszfodiészter vagy foszfodiészter-szeri kötés és a legalább egy stabillzáll kötés különbözőek. A te- ranofoszfouát kötésekről kimutatták, hogy a IbszfodlészSer kötésekhez Itéf est tdáMlizáitak, így a gerne fclméfá természetét tekintve a boranofosÄsgi kötéseket köfoyezeíüktöi figgftén ökMlvozhatfok foszfodiésziéf--szeriekként vagy stabilizáltként, Pé!dáítis a tsiláhMny szerinti kiíiiérá gettóé egy o:segvalősitáxí mód szerint tartalmazhat kgatófe agy foszfodiésZter ífo&amp;dbdiészíer vagy foszfodtésZtcrAzcfÖ) kötést és legalább égj bo-ranöfoszfortáifoiabilizáll) kötést. Egy másik o^gyálöSÜásí mód szerbit » taiáltéány szárító któet gédné tártai* utazhat bomüdfoszfonáí (foszfodiésztér vagy foSzfodiészter-szerü) és foszforotibát |stabi!z|lli Mfoseket, A %a-blllxált itdemaklaottdAStes" jetétnéSé ölyaft mtérnkkíeotid-kötés, amely viszonylag ellenálló m fo#i dégradé-dévai szemben {például exo- vagy entótókleáz áltól* íoszfodsészter íntemukleotid-kötéshez képest. Az előnyös stabtílzálí látetiankíeetó-kéíések közé tartozik « Itóáfozás szándéka nélkül a foszfofotloát fosztfoodltfoát, tnebiíbszfonát: és átétllfoszforötíoát:: Az egyéb stabilizált míentekíeotidAötések: közé; tanteznak a ksrtótozás szándéka nélkül: pepid, alkii, de fosztó és egyéb leni leirt kötések. A :mtóösífott gerincek, így példáéi á Itszlóröilöátok foszínratoidái vagy M-lószlénát ketóót alksíntazó áótéósátízilt eljárásokká! szintetizálhatok. Az tói*lés aikikfoszfortáíök eíöálliíhatók példán! a 4 469 M3 szántó aáirtikal egyesült államokbeli szabadalomban leírlak szerint; és az alkilfoszfotritészterek ^amelyekben a töltéssel ifondeílezó oxigén rész aíkiláh. amint azt az S 623 243 számú amerikai egyesült államokbeli, és a 862 524 szánté európai szabadalom leírja) döálíltéatók aatnmatizáíí szilárd íazlsó szintézissel, keresfctóefo« featő reagensek alkalmazásával Egyéb ÎS4S gerinc módosítások és szifostótócfok kai is leírtak pJblmann.E és nntnkatársat: f I6SK)) Cfeetn Rév 96:544; Ooodehild 3 (1696) BieCönpgáis Chets 1:165]. Kánéra oligonukieotidok eiöallÄi é|ÉásnÍ szintén Ismertek:: Példán! ühlmann és rmmkalársálnak szabadalmai ismerteinek ilyen eljárásokat.
Kevert germemódösításokat tartalmazó Öfobl-ok szintetlzSibalÓk keréSkédelmi forplonfoan kaprafo ;Dl9S-sziníet!Zátdrrtí| Is standár íószforamidít kémiával, |F. E. Eckstein,, ’’Oligonucleotides and Analogs ~ A Practical Approach” ÍRLRréssi, Oxford. UK, 1491, és M D. Matteucci és M H. Caruthm, Tetrahedron Köb M, 719 {1980)]. A páróálÉS diáit a PS kötéseket a Beaucage-reagens [R. P. íyer, W. Ligán, .1, B, Regan é» S. L. Ö#@éage, 3, Am. Chéirt. Söé- 112, 1253 {1996)] (6,675 M acetonrtrilben} vagy iemlaceíii-diszulftd (PADS) alkalmazásával, szulfurizáelővai visszük be, amelyet eeetanbidriddel, 2,6-lutidmnei tetrahidroforánban (1:1:8; v:v:v) és N-roesilimidátói ttó^^rofiutóban) történő sapk ázás követ. A sapkázósí lépés a szulforizáciős reakciót kővetőért végezzük, ezáltal Hbnimalizáljok a nemkívánatos foSzfodiészter {PO) kötések képződését olyan pozíciókban, ahol foszforodéi!: kötésnek varr helye. Poszfodiésztér kötés bevitele esetén,: példád Cpö din« k Sees idha, az iníefOrÖdier foSZÍbfAlba! jód vtzes/pirtátnes oldatával történő kezeléssét okidáíjwk. A. szilárd hordozóról történő hasítást és iíőfoéüy ámmóniával végzett (15 óra 56‘-C-on) végső vétlŐCSŐpöróéílávolitást kővetően az ODN-okat Gen-Pak Fax oszlopon (Millipore-Waicss), MaG-gradiens alkalmazásával {példáéi A puffot;; 10 raM NaH>PÖ. acefonitrtbviZ:l;4/v.v arányú kevetékében, pH“6,8, B puffer. 10 mM NaH^PO... 1,5 M bláCd acetonitrií/viz. l:4/v:v árányó keverékében; 5-60 % B, 30 perc alatt 1 ml/perc sebességgel) HPLC»ve! vagy kapilláris gél-elektrőforéZÍSSel elemeztük, Az ODN Sisztltbató ItPLC eljárással vagy FPLC eljárással Source High Pedbmmnce oszlopón (Antefsbam Phtsnnísela). A HPLC-homogén frakciókat egyesítjük és sőmen-tesítjük C!S-oszkipon vagy; nltfoszőflssél. Az ÖDM-okaf MALSMOF tömegspektféutetrtávál élemeztükj hogy megerősítsük a számított tömeget. A találmány szerinti: nnkleirtsavak tartalmazhatnak egyéb módosításokat is. Ezek közé tartoznak a nem-ionos DNS-anaiógok, például az aikil- és aril-foszfátok {amelyben a töltéssel rendelkező foszibnát-oxigént alkil- vagy arilesöpbrí helyettes.síi), ioszSodlészíérék iS amelyben a töltéssel rendelkező oxigén- csoport áikílált. Nukleinsavak. àmélÿék egyik vágy mindkét végükön: dióit, például íetoetilénglikolí vagy bexasiilénglikoit tártaira aznak. szintén lényegében ellenállónak blzonynftak »••»«Miàzîasi.à^rÂd.è'val szemben.
Egyes megvalósítási módok szerint az oligonukleotidok lehetnek puha ij,SölY’) vagy félpuha („semi-soíT) Oiigomtkiéötidök. À púba ollgoxmkleotid olyan immumtiirudáns ollgonufcleotkl, amelynek részben stabilizált gerince van, ahol a íbszíodiészíer vagy íöszfbdiészter-szerd iníemuklemid-kőtések kizárólag legalább egy belső plriMdin-püriö dimskieotidban (YZ) és közvetlenül hozzá kapcsolódva fordulnak elő, Előnyösen YZ jelentésé YÍ3, gírimidimguanozin (YG) dinukleotid, Â legalább egy belső YZ dlnukléöÖd tartalmaz Ibszfodiészíer vagy Ibszíodiészíer-szerli internnkieötid-kőtést. A legalább egy belső YZ dinukiléotlddal közvetlenül szomszédosán előforduló: íbsztbdíészter vagy föszíhdtészíeiYszerii imemukleolídköiés lédét 5', 3s vagy 5' és 3’ irányú a legalább egy belsői YZ dinukleotídhoz képest.
Kiemelten, a íbszíodíészter vagy foszfödíészter-szerü inienu&amp;ieotid-kötések magukban jeglÄak "belső dinukleotidokst'*. A belső dimddeoíid jelentése általában bát^mely, iftíeínokkotid-kőtéssel összékápéSölt szomszédos nukleotidpár, ahol a niikicotidpárban lévő egyik nukleottd sem terminális nukleotid, azaz a nukieo-tidpárban lévő egyik nukleotid sens az cjigonokleotíd 5" vagy 3’ végét meghatározó nukleotid. Azaz, egy n nuk-leotid hosszúságú líxmár is oîlgonukleofid n-i díniíkleoíidot tartalmaz összesen, és csak n-3 belső dmukieóíídoi. A belső dittukleőtidban lévő valamennyi intemukisotid-kötés belső mtemukleotid-köíés. Azaz, egy n nukleotid liösszuságö .lineáris oiig.onukkíotid összesen n-l internuklemid-köíesí és mindössze n-3 belső internukkotid-kőtést tártaltnáz. A stratégiailag eÉéiyezétt föszfMészíéf vágy íbszfediészteé-szera iritérnukleöíid'^Eötésefc jelentése téliét a nwkleinsav-sztdevencía: bármely BukleGíidpárja közé jmzieionáií fbsxíbdlészter vagy fbszíődk észter-szerii mtemukleőMrkötés. Egyes megvalósítási módok szerint a föszfbdíészier vagy íoszíődiészter-szerű internnkleotld-kötések az 5’ vagy 3 * véghez legközelebb eső egyik nukleotidpár közé sem pozícionáltak.
Előnyösen a legalább egy belső Y2 ditmkleotiddai közvetlenül szomszédos foszfodiészter vagy foszíodí-észler-szeríl intemukleotid^kötés maga belső internukieoiid-k&amp;tés. Azaz, egy Mt YZ b% szekvencia esetén, ahol blj: és 'N2 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül bármely egyedülálló nukleotid. az Ύ2 dinukleotid tartalmaz fesziodiészter vagy íószfodíészter-szerü imemukleotid-kötést, és továbbá (a) amennyiben M, belső nukleotid, Nret és Y-t íosz&amp;diészter vagy íbszfodiésztcr-szera iótermfkleotid-köiés köti össze, (ti) amennyiben 1¾ belső nukleotid, Z-x ás bij-t íbszíbdíészter vagy fbsziMlé^áer-szerü imersdkleötid-kötés köti össze, vagy (é) amenoyiöext N j belső nukleotid és 2À és bip íbszfodiészter vagy ioszíodiésztemszerő inteumikleorid-kötés köti Össze, és amennyiben N:í belső nskleotid, bbyet és. Y-í lesziodiészter vagy mszfodiészter-szerö interaukleotid-kötés köti össze, A találmány szerinti oiígonukleoíidban az R^YZBy szekvencia legalább egy YZ csoportja tartalmazhat ÉíSZfiidiésztei· kötést. Más esetben az RjYZR:; szekvencia YZ csoportja tartalmazhat Ibszfbrotioát kötést. Más megvalösíiási módok szerint m RíYZRj szekvencia R$Y ss/vagy 2¾ csoportja tbszíorotioát kötési tartalmaz. A találmány szerinti púba öíígönnkleotidokról feliéteiezlk, bogy a teljes mértékben stabilizált oligortúkie-ótidókhoz képest viszonylag érzékenyek a xsukleázos hasításra. Bármely elmélet vagy mecbítnlzmtss adtä korlátozás nélkül feltételezzek, bogy a találmány szerinti puha oligonukleotidok a teljes hosszúságú puha oligonukle-oíidokböz képest csökkent inmmnstiöpláns aktivitási vagy hmxtunstmndahs aktivitás nélkíili fragmensekre ItasÄötÖk. Feltételezik, hogy leplább egy nukleázérzékeny míernykleolldrkötés beépítése, különöse«: az: ptigpnukleotid közepe közeiében egy ^kikapcsolö gombot” biztosít, amely úgy változtatja meg az uligdnukleo- tM íasmakökinetikáját, bogy Ez kttlőnőssn értékes lehet Olyan szövetekben és klinikai alkalmazásokban, ahol a krénikosihélyi gytdisdäsiioz; vagy &amp;maœsÂ^â|MjoK:l5è^S::séràliis eifcer&amp;íése kívánatos, péfoáál a vesébe». A felpEiha oligoimkleotid olyan immunstirauiáns oligonEikleotid, amelynek részben stabilizált gétinéé van, ahol a foszfodiészter :vsgy foszfodiészíer-szerö internukleotid-kötések kizárólag legalább égy: béisö primMin--ptirin(YZ) dinnkleotidba» fordulnak «lô. A félpuha oHgonukteotidok tmmtmslimulàns poteneldia a teljes: mértékben stabilizált »pfounsiimuiáns oligonukleotidokhoz képest általában fokozott A folpttha oligpuakleotidok ttisgyobb pofetidáíáttgk köszönhetőé» egyes esetekbe» kívánt biológiai hatás megvfoóskásáfeoKr alacsonyabb hatékony koncé oíráei#an alkalmaÉsalők Is hatékony dózisok alacsonyabb, mint a hagyományos, teljes mérték-beáiStabihzált immunstinmiáss eligOMíkleótidöké.
Feltételezzük,: hogy a félpuha oiigottukleoiidok font lebt tulajdonságai fokozódnak belső YZ dlnuklep* tídlkhím lévő foszfodiészter vagy feszfodiészíer-szsrő: íníemifolsotid-kötések „dézsának'* emelésével Azaz folléfoiezhetö például,; bogy általánosságban egy adott;, őt belső YZ diotskleeiidoi tartalmazó ollgonukieotid szekvencia esetén egy Őt belső foszfodiészter vagy foszfodiészlen-szerü YZ íntemuldeotM-'kMésf Isbíaimazó öügondkleoiid erősebben Irtmmnsímséláns, mini egy ttégy belső foszfodiésziet vagy foszfodilsztee-sleíf Yö iníemukleotkl-kőtési tartalmazó oügonukieoíkh amely azonban erősebb ífofoynstimöláRS, mint egy három belső foszfodiészter vagy foszfodiékztetvszera YZ íttteblikiloíÉd-kötlss tartalmazó ollgonukkotid, amely azonban ssősebb ónsnuttstÉmulátts,. mint (így kit belső iopfodléfoder vagy ibszfodíésátcí-szeru YZ ítttenRikleodd-kőíást tartalmazó oligonakieotid:, afol ponbás éiősébb Isttittttnstlnsulätis, tn int egy egy belső íbszfodiészler vagy fo&amp;zipdiészíemszerö. YZ ííiefpukleütld^kőtést iatfoíidazó oltgósiukleoiid. Lényeges, bogy akár egyetlen belső foszfodsés&amp;sr vagy fosZfodrészfer-szérü YZ mtemükteoíiddíötés bevitele feltétek-ziteíées előnyős áhboz az: ällapofoOZ Mpesh amely nem tartalmaz belső fosztod lisztet vagy foszfodiészter-szerő YZ mtermíkleotM-kötést Afoszfodiésztér vagy foszfodtlsvtett-szerő Iníernttkleotíddtőtések: szátda mlllM antt&amp;tnssvbmt lévő pzíeíőjuk is látással: lehet » pfeaeiárá. A puha és félpuha oligottukleotidok általánosságban tartalmaznak: az előnyös belső pozíciókban lévő foszfódlészíer vagy foszíodiésAer-szerő internakleotsddíöíések melleit degiadáeámak ellenálló 5* és 3' végeket. A degrádácíőttak ellenálló végek tartalmazhatnak bármely megfelelő módosítási amely &amp; megfelelő, ufodssltat-lan végekhez képest exomskteázos emésztéssel szemben fokozott ellenállást emdofenyez. Az 5’ és 3’ végek példátd stabilizáltak lehelnek a gerinc legalább egy foszhdinődosÉtásáisakl^vifeléveL Egy előnyös megvalósiláal m&amp;á szerint a gerinc legalább egy foszfetmődosiíása nthídket veg^t egymástól iSggetfentt! foszforetfoát, tbszfo-rodttioát, metlifoszfeoát vagy metílfoszforoiíoáí ítilemukleoud-kőtés. Egy tnástk megvalősilasl: mód szerint, a degEadáeíonsk ellenálló vég; a: 3’ végen pepiiddel vagy amidkötéssel kapcsok egy vagy Ab: sEÄotidegyseget foglal magában. A foszfodiészter ittfetóakleoíld^őtés a feratészefben található nukieinsavakra jelfetszö kötéstipas. A foszfodiészter ÍRterttuklédg<^^^ íarfelmaz föszforatomot, amelyet két kötő oxigénatom határol, és két további oxigénatomhoz is kötődik, ezek: egyike töltéssel fondélkező és a: másiknak nines töltésé. A foszfodiészter ittfefmdtíeotid-kölés különösen előnyös, amennyiben lényeges, hogy az oligonakieotid fol-éfeí Ideiét a szövetben esökkeíttsük. A foszfodiészter-szefő InternEíkleotid-kötés egy foszfort tarfeltnaző fohidáló csoport, amely Miatátiag vagy diásztereomer szempontból hasonló a foszfodiiéSirtmhéz, A foszfbdiésztéfhéz való hasonlóság maíafof közé fedozlk a nukieázos emésztéssel szemben muisíöít érzékenység és gz RMâz H &amp;éj*éS8ege. Azáz, például a feszioíiíésztsr oligonukleoíidok érzékenyek a nukleázza! történő emésztésre, de a foszforotioát oligormkieotidok nem, míg mind a foszfediészter, mind a foszibrotíoát oligonukleoíidok äMMpk az RNaz Π-t. Egy eiöayöá ..raejp^sfiÉsimèâ szériát a foszfodiészler-szerü internakleotid-kötés bovsnöíbszfát í'aagy ezzel ekvivalens módon fcoranöíbszíonáf) kötés. 5 177 198; 5 859 231; 6 160 109; 6 207 819 számú amerikai egyesült áíkmokbeSi: szabadalmi leírások;; Sergueey és munkatársai: {1908} J Am Chem Soc 120:9417-271.. $gy másiá megvalósítást mód szerint a foszfod'iészter-szeró internukleotid-köiés diaszterecmetrikusan tiszta Rp fosztom*· tioát. feltételezhető, hogy a őszi a Rp foszforotíoát dtásztereomer a nukSéázos emésztésre érzékenyebb és jobban aktiválja az RNáz H-t. mint a kevert diasztereomerek, vagy a tiszta % feszíorotioáí diástdemomer, A CpG oilgonukleotldok sztereoizomerjet képezik tárgyát a -09/36 L,575 számi, 1999. jálins 27*én: benyújtóit és a PÇ1MIS99/ 17Í Ö0 számú közzétett (WO 00/06588) szabadalmi bejelentésnek, Megjegyezzük, hogy a jelen találmány esetett a ''ib^zfódíészísAszefíl intemtdíleetíd-feOtés" kifejezés specifikus módon kizárja a őssztoroditioát és meíílfoszíohál internukleotid-kôlésekei.
AmiM ásd Ént íéirtiikt a láiálntáay szerinti puha és fél-puha oíigonukleoiidók tariabïtazltâlnak íbszfodí-észíer-szeri kötéseket a O és O között. A tbszlbdiészíer-szerii kötések egy példája m Rp konformációban lévő Ibszforoíidáí kötés. Az oltgonakleötld; p-kifalilása egyérielmöen ellentétes hatást gyakorolhat a CpG oligonukie-· étid imtnunakíivitására, idggöen az aktivitás tnérési időpontjától. Egy korai, 40 percnél mórt időpont az Rp sztereolzomer feszfbrotioái CpG oligonukieotíö indukálja a JNK foszíbxiláctól egér lépsejiben. az SP szíereeizomer azonban nem. Ezzel ellentéteset* egy késői, 44 órás mérési időpontban az Sf SztéreoizpmeF a lépsejtek pröliíenkióját stimulálja, az RR sztereoizomer nem. Az Rp és SP sztereoízoínerek ezen kinetikai és Moaktivitäsbeli különbség asm a sejtbe történd felvétel ktilönbségéböl adódik, hanem nagy vatószútáségpl a -kiralitás két ellentétes biológiai szerepéből következik, Egyrészt az Rp szíereoizomer SE-hez képest fokozott immünsejtstiinuláió aktivríássi korai időpontokban azt jelzi, hogy az Rp ÄökönyÄaö léphet Interakcióba a CpG recept orr ai, a H,R9-e! vagy hatékonyabban indukálja a lefelé irányuld {,,downstream”) szignál útvonalakat. Másrészt az Rp PS-oiigonukleötidok RP-béz képest gyorsabb degradációja sőkkáí pővidébh idejű sztgöáiizáeiót eredményez, ezáltal az Sp PS-o 1 igonuk leoiidők biológiailag aktívabbnak törtnek későbbi iéfêptÂàban mérve.
Meglepően erős haiäs érhető el $ p-kiralitássai megánál a CpG dínukie^titöi. A s&amp;ermrandpu CpG lOiigonuRleotidhoz képest az a rokon vegyölet, amelyben esetlen €pG dinukleotid az Rp pozfeiöbaB volt kötve, kissé aktívabb volt, míg az Sp kötést tartalmazó rokonvegySiet közei inaktív f^liferációjának índukáíásában. 4 sdtiiklemsgv” és „oligonukleoiid” kifejezések mapkfean foglalják a szub^tóetóknl vagy módosi· fásokat - példáid a. bázisokban és/vagy cukrokban - tartalmazd nukíemsavákaí; vagy oligenukleottdokaí. Például nragukbaü :feglainak olyan nukieinsavaka, amelyek germeetÉrai a 2’ pozíeiöfeam a himwoPSopoitldl és az 5’ pozícióba!* föszfáíesoportíól vagy IndasKicbopofttól különböző,, kis molekníaiöntegü: szerves csoporthoz kovalensen kapcsoltak. Azaz a módoskolt nukleinsavak iaríádmaíÉaínák 2’~ö-älkiieZCtt ribozesoportot, Továbbá, a módosfei nuklelnsavak taríaimazhatnak cukrokat; így aráfeinézt vagy ^’-ÖOobsÄInö^ a ribóz helyett. Azaz a nokiélnsavak gerineösszetétel szempontjából lekéinek heterogének, azaz az egymáshoz kötöd polimer egységek béilély lehetséges kombinációját íariainíázhaíják, például pepiid aminosav gerinc van nukíeissav bázisokkal), A nuklelnsavak tartalmaznak szubszfimáit pufinekat és pirimídíneket is, például C-5 jsopm-pMmidint és ?-dea^-^~s^ssätoä!t purin módosított bázisokat Wagner S W ás munkmámak ( Í99Ö)HatBiöteehnöl IddkMb -4. A príöok és phimidioék közé termák a korlátozás szándéka nélkül m. ádenin, éÜözin, guanio, ttmm, 5--tnetilciíozin, 5-bidroxieitozin, 5-üuorcitozin, 2-amb3opurin, 2-mmiso-0-kl0rporint2,6~$^ hlpoxantio, ás egyéb íéttnészelesen előforduló és természetesén elő nem iőrdnió nukleobázisok, szuhsztíttsáit ás szabsz»-tuálatíao aromás csoportok, Egyéb módosítások a szakember számára istngrtek, A talámáoy szerinti immunsfbnuiáns oiigonukleotidök Sstalmazbamak különböző kbiniabpadoslilisefei; és szubsztitúciókat a természetes RHS-hez és ÖMl^ié? képest, köztök foszlediészter mternukleotkl hidat, jM>~ -ribóz épségét és/vagy természetes nokieotid bázist {ademn, gdaom, eitozip, timin, máé ti). A kémiai módosítá-sok példái ismertek a szakember számára, ás leírja őket például Uhlroann E és munkatársai: (1990) Cbetn Rév 90:543; "Protocols for Oligonukieoüdok and Analogs” Synthesis and Properties &amp; Synthesis and Analytical Techniques, S. Ajpausif, Hd, Humana Press, Totowa, USA 1993; Ctooke ST és mimkatársat: ( 1996) Anno Rev Pharmacol s^Buaziker j és munkteársat: (1993) Mod Synth Metods 7:331-41?. A talál- mápy szerinti öíigonokíéötid tamímázhat egy vagy több módosítást, ahol mindegyik módosítás egy adott ípsáfitdiészler iníerrtukléötíd hídon étvágy egy adod |i-13-ríbőz egységen ás/vagy egy adott természetes nnkíeo-fid bázis pözieíoban iölafeált, a természetes DHS-MI vagy R19S-b8? felépüld ugyanolyan szekvenciáin eíígonokieoíidhox képest,: Például a találmány tárgya olyan oiigontddeoíid, amely egy vagy több módosítást taítahnaz, és ahol 3%·. lameouyí módosítás egymástól lüggetlenül a következők közéi választott: a) a aokleotid 3' és/vagy S" végén található teszíodiészter intemukleotld-bid helyettesítése módosított intemukleotíd-hidáa!, b) a nnkleotíd 3 * és/vagy $ * végén található ibsKtodíészter híd Imiyettesítése detesziMiddat, e) a enkor-tosztät-gerine eokor-toszlai egységének helyettesítése másik egységgé!, d) (hD-riboz egység helyettesítése módosított éukörégységgel, és e) íermészeies nakleoiid bázis helyettesítése módosított ttukleotíd bázissal. Öíigonukleotid kémiát módosítására további részletes példák a kővetkezők, blukleotid 3* ésfvágy 5; végén elhelyezkedő íosxiodíészter Ittternakleotid híd belyéttésithétő módosított intenmkleotM hítklaj, ábdí a módosított intenmkleottd híd például a kővetkezők közül választott leltet: iiszforótíölí, íbsztotóditioát, N R t Rribszforamidát, boranoíosvÉt, ö-hídrmcihenztí foszfbnát, fószláí-40í4G3í)> rö^Slkil-észter, ί'05ζΓόΙ-[(υή-€!2}3Γΐ1-(€ί-υ2;Ρθ-η1Κ;1|~ε$ζίβ^ (Cj«C*) alkilfoszíooát és/vi^ hidak, fC7-C}3)-e-hidtxíxímetll-arií (amint azt pokláid a WO 95/01363 szántó pemzetközi irat leírja), abOl á (CV -Cojaril, (CírCjo)arii és {C6«Ci4>arü adott esetben a következeikkel szubsztitűéit: halogén, alk.il, alkoxl, nitro, el&amp;nö, és áhpí Rí és jelentése, egymástól függetlenül hidrogén, (CrCjel-alkil, <C«*€a*hadl, (Cs-C;i3)-arlK€;i~ ~Us)-álkíl, előnytíSerrhídíSígéb, <C:t«Cs)-alkiî, előnyösén {C;j-C4)-alkíl és/vagy metoxietlk vagy Rí és R2, azezo-ket hordozó ítítrogéóaíömmsi együtt, 5~ö-tagü heterociklusos gyűrűt alkotnák, amely tártaínrnZhát még egy to-vábbi heteSíittomot a következő csoportból: Ö, S és N,
Nukleotid 3’ |s 5’ végéh elhelyezkedő fosztod iészíer híd helyettesítése défezfbdïlddàl: (a déföszfó»: hidakat ltja le péidéttl llhlnpno E. és Peyrtrao A,: ’’Metiuvis in Molecular Biology“, ¥ol,: 20, 'ttbötoeols fer OlígöhucleOtldés and Ánálögs", S. Agrawal, Ed,, Hutnána Press, Totowa 1993, Chapter l é, pp. 355 almi a delbszio-hld példáiul a kövelkezö defoszlb-bídak közöl választott: íormaeetái, 3-tloibrmaceíái> metlihithmál-amin, oxim, medléndlmettl-hidrazo, dimetilénszulíón és/vagy szüli csoportok. A eukof- foszfát gerlne (azaz 8 énkor-foszfát gerinc eakor-foszfot egységekbőláll) eakor-foszíii egysége |ß4>-rshoz is bid, amely együtt cukor-foszfát egpégei; förmäi) helyetteslfoétő pub sik egységgé!. ahol a másik egység például alkalmas ^reiörfoMu^szárma?^5’ bigorner folépitésérá $mátá azt példáéi Síirehak KP és munkatársai' (108-9) Nucleic Adds Res 17:0129-41 leírja), aaaz például taotl-olsso származék egység helyettesítése vagy pohamsd nukleinsav kialakítása (!,Ι*ΝΑΚ; leírj« például; HtetetfE és m«nka-társai;: (1994) Biocorgug Chem 5:3-7), azaz például helyettesítés AMA genneegységgei, például1 2-am«to-etilgliclnnel β-ríbóz egység vagy p-ö-2'-ílezoxlrihéz egység helyettesíthető módosított cUkoregy »éggel, ahol a foódo-sííott eukoregység példáéi! a következők jkőzül választett: ß-p-riboz, a-D~2’-dezoxirihóz, L~2’-dezoxirihőz, 2'~F--S^dezexítibóz, á'-F-arubisdZí 2*-0~(€tC$)a!kiMbóz, efönyöSésr a 2!-0-(€ΚΑ)3&amp; il-ríbóz r-O-metilribóz; 2-0--íQ-C^dkeaíi-ribŐz, 2''-[Ö-|p’rCs)3lkilrö-(C(-Cs)aíkü 2‘~NBr2'-dezoxínbóz, j3vD-x.ilo-fttónőz, «- -arabinoforanóz, 2,4~dktezoxHi-D~eritH>hexo~pira«0z, és kailxmiklusés |íeirja például Froehler J (1992) Am Chem Soc 114:8320) έχ/vagy nyitót láncú eakoranasógesk (leírja például Varfoendriessehe és munkatársat: (1993) Tetrahedron 49:7223) éstvagy bMkiusos cukoranaíógok (leírja például Tarköy M és istuíkatátsaí: (1993) Me|v Chip Acta 76:481 ). ügyes előnyős -rrtegvalàsftÉlI- á^rt&amp;í: M édkor 2^0^001511302, különösért egy vagy két foszfo-dlèsztér vagy foszfodiésAer-szefíi lutetmuyeödddíőtéssel kötött nakleotid eseten. A ouklsmsáyák magttkhau foglalnál;, szühsztítoáií paritokat Is gjAtPidiríékeí így C-5 propitepiámkhn éa á 7-déaza-7-szúbsztituá|t ptafo ntodositoti bázisokat; Wagner ÈW es munkatársai: (1996) Nat Btoteehsmi 14:84(1--4: A pufmok I» pkiinidinek tnagokbas foglalják a korlátozás szándéka nélkül az adenini, ettelnt, gaa-nmt, és timiat, és egyéb iermészetesen előforduló és természetesen elő nem forduló mtkléobázisekaí, tumbsztf-taált és szabszbmálaílan antisás esoptóofeat.
Modosltólt bázis bármely bázis, amely kémiailag különböző a ame- iyek jellemzően me^alálhamk a DNS-hen és az RNS-be», mint például a T, Ç*- <3, A és U; de antelyék áíupvető kémiai .struktümja közils ezekkel a természetesen előfördúlÓ bázisófocai A módosított nukleotidbázls például a következők közül választót idret: híposantm, uracil, díbidrooracil, pszeudöurneils Bdipmäetl, Aítómaeji, 5-ami-ttotsracil, S-CCt-C^-aifciluraeit, SACrC^tókeniimaeii, S-CCrC^-alkmileractl, 5Ab*^tmximeiii)utaeii, fokiöF-xtracil, 5-tluorixradl, 5-bromuracil, 5-hkîroxicitozin, 5-(€yC\,}-aikiieitozin, S-fCj-CÓ-alkeniicitözng 5-(C2-C«)--alkinikitozitt, 5-kióreitozin, S-fluorcitozin, 5-brómcitoztn, Njfoimetilguaain, 2,4-diamitKvpunn, 8-azaporin, szubsztfáiált 7fo«aza£arin. előnyösen 7-deaza~7-szub:tóií«ait és/vagy 7toeaza~k-szubsztit«ált pórin, 5-hídro:<>-melildtozm, Rralkiicítozm, például, N^-etilcitozin, Sfotdroxidoxiettidin, S-hidroximetildezoxteíddin, Kraikií- ö-ttodezoxiguanozia, és niteopirtó, Cj-ptOpmlfoiBmídl®^-és diaminopudu deztíxiríbtm«kfei>tíd|aí, például, 2,0-diamiíteparm, inozin, S-metiMtozin, 2-aUdnopuria> 2-amiao-6-kiöíparm, hspoxaiÄ vagy más módosított terméstóes nukleotid bázis. A lista aeat ieljesfcörö és nem korlátozó jelleg«.
Adott, itt leírt formulákba®, meghatározzuk a módosított bázisok készletét. Például az Y jelentése piti-midin és egyes megvalósítási módokban eitoziní vagy .&amp;tódo$Ée&amp; A módosított dtozin kifejezés jelentése a leírásban a eitözín természetesen előforduló vagy természetesen elő item forduló pírímidinbázis analógja, amely anélkül helyétiesíiheti ezt a bázist, hogy kárositená az oligonokleotíd immua-sttmukins aktivitását. A korlatozls szápdéka nélkül a módosított iiíozmök közé tartoznak; S-szafostóttjált citozin (példátd S-metii-citozm, dxilttörteifozlte 5-klór-eltozin, 3-brÖm-citcszin, S-jód-dfozm, ófotdroxi-eitozis, 5- #ídroxlmeííí<ít(«att, J-difiuormetil^iíozin, és szubsriituálatfen vagy szubsztjmkii S^alkmibeiMziu), é-rszobsAitMIt eitozin, Ns-szubsAituàit citozin (például N^-sblAntozm), S-aza-eitözin, 2m«Ü&amp;ßo~cimi% "m«: eiíózin, psZeoáo-iztssitozin, eitozinanalógok kondenzált győrürendszerekksl (példásd eilórin vágy tehoxazni), és uracil ás származékai (például S-Buor-öracil, 5-bróm-uráeÍÍ, 5-bíömvinn-mádk Φ-tlâHiiraâï, 5-dddroxl-aracik 3-pföplml-nraen>. Néhány előnyös citozin: S-metií-citozin, 5-éuor-citozin, 5'biÄxi--bteio> 5--hidroximeîtl-eitozin, és N«-etil-citözm. A találmány egsy másik megvalósítási módja szerint a eitozin bázis univerzális bázissal (például S-nitropirrol, P-bázis) aromás gyűrűs rendszerrel (például fluorbenzöl vagy diiluor-benzol) vagy hidrogénatommai (áSpaeer) szubsrijmált. A 7, jelentése parin, pirimidin vagy abázis és egyes megvalósítási módok szerint guantn vagy módosított géant» bázis, A mödös&amp;od guanln fejffejezés jelentése a feiàsba» a vagy termé szetesen eiÖ «er« tördelő purinbázis: análóliá, amely ágy helyettesitheti ezt a bázist, ieggy asm károsítja az aktivitását. ,4%<^Íteá^ásÉRdélcamjÉI§!: a módoslíoe gnaatnok közé tartóik: 7VáéSZagaabibi, 7Aleaza-7-sriíhsziÍleált guanót (így 7-deaz^7-(€rGs)aMnÍlg»iasffij, 7^eaza^S-szubsztWlt guanih, bipöxahtm, Ni-szöbszrituáít goanink (példáéi N^medl-guama), S-mrnno-S-naetil-aH.bfkt^zolePJ·' -djpiriuödíb-S^-dióOs^z.ó-dlamlnópte'io, 2-aminopnrin, parin, indok adern», -rnsíií-sáenhh: k-oxo-adenin) 8-szuhsztireált guanin (például 8-hidroxlguanm és 8-brÖmgaa»n), és Mtiogeáma. A táláteáay egy süástk kiviéit alakjában, a gsanin bázis egy univerzális bázissal (példáid A^etii-möoi, S-nttré·-ondói ós fí-bázisj, aromás gyárös rendszerrel (példáéi feenzimidazol vagy djkjótrbenzimMazol, |~metil-lll--||:,3AliríazsiiV3;-karbönsavamÍd) vagy feidrpgérsaiomtííal (dSpacer) szubsztituáit,
Az öiiguaakfeötidaak egy vagy több hoz:#lefhetö S’-yége lehet, lehetséges két ilyen 5!-végö oigonukle*· odd előállítása, Ez megvalósítható például kát óííj^öfcfeeM szállal egy vagy fest hozzáférhető 5 "-végi olígoaukleotidöt állítva elé, A 35-3’ kötés lehet: iöszfediésáísr, foszföFödoát vagy bár^ mely egyéb módosított ifitétnukleotid bld, A szakimbalomfean ismertek az ilyen kétesek elpllitásám szolgáié eljárások, Példáid ilyen kötéseket ír le: Seliger, H.; és munkatársai: Oligonucleotide analoges with terminai 3*-3’~ and SVS’-internucleotid linkages as antisense inhibitors of viral gene expression, Nucleotides &amp; Nucleotides (1991) , 10(1-3 ), 469-77 és Jiang, és munkatársai: Pseudé-ciklie óligonnejéöddés: in vitro and in vivo properties, Bioorganic &amp;, Médicinal Chemistry (1999), 7( 12), 2727-2735;
Ezenklvtil olyan .3T4M: nökléibsavak, aboi a kötés a jMetminál« nukieoödök közén nem fbszlb-diészter, foszforotíoát vagy más módosított bid, elóálíithatók további távköz alkalmazásival, például ói- vagy ietra-eidénglskol-fószfás csoporttal (Durand, M. és munkatársai; Tripíe-beiix formation by an oügonucíeosid epóétiíting one (dA)12 and tvvó (Μ')12 sequences bridged by íwd hexaethyíene glycol chains, Bioehemktry (1992) , 31(38), 9197-204. 5ŐSS238 és |Óö82ó5 mtóíó amerikai égyesölt államokbeli szabadalmak). Más esetben a aenr-nuklemidkotÖcsoport származhat eiándioíból, propándíoíbo! vagy- abázisos dezoxiííhóz egységséglkíí MSpacer) (Pontaneí, Marie Laurence és munkatársai: Statical recognition by T4 poiinueíeotide kinase of nem-aueícosfdié ímsiéties S’-attaehed: to oligonucleotides; Nucleic Acids Research (1994¾ 22(11 ), 2022-7) standard itszlbramiáií kémia alkalmazásával, A nem-haMebtid tipusi kötöcsoportokat beépithepék «082ér többször, vagy kombinálhatják ékéi égymássái, ily utódén lehetővé téve bármely kívánatos távolságot a két összekötendő ODN j’-végei között.
Az oiigoankieotidok részben ellenállnak a degyadádőnak (például stbilizáltak), A "stabíiizák ollgönukie-ötiá-tndíekula" jelentése: olyan oligonukléotid, Äely viszosryíag tézisAens az: in \>m> degratiációvai (például exo- vagy endo-otÄäzok által) szemben, A, nukleínsáX :siábilízáiásá megvalósítható germcmódosításokkal. A fösziőrotioát kötéseket tartalmazó olígönuk!e#dök maximális äktlvMst biztosítanak és védik a?, oligomrkleo· tidöt az intraceilulárix e:<o- és e n do - n aki eá zokkal történő degradációtóL Az egyéb módosítóik oíígorwkleoüdok közé tartoznak a: üModtészter-módositott nmukleinsavak, íbszfbdíészter- és foszforotioábíiikléiítSayiÉ Imdbi-nációk metílföszfötiát, metilfoszforotioát. foszíoroditioát, p-etoxi és kombinációik. A módosított gerincek, például a foszforoiioát, foszforamidát vagy H-foszfonát kémiát alkalmazó miío-matizák technológiákkal szintetizálhatok. Az aril- vagy alkií-ibszíbnátok előáliíthatók például a4 4ó9 SÓ3 szá-rsü amerikai egyesült államokbeli szabadalomban leírtak szerint; és az aikilfoszíbtnészterefc (ahol a töltéasel rendelkező oxigénesoport alkiláii, rnint azt az J 023 243 Számá aóisrikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás #¢:092 574 számú európai.száhádáímí leírás iélíjáj előállítható kéreskedelmí Ibrgalomban kaphatö reagensek alkalmazásával automatizált szilárd Ézisó szisítézlsssi, Egyéb ÔÂgerÙK módosítások és szubsztitúciók előállítására szolgáld eljárásokat is j&amp;Mt, E> es Peyman, A., Chem. Eev. 90:544,1990; Goodsblld, I., Biccenj ugaíe Chem, 1:165;, 1996).
Az egyéb stabilizált ollgonukleotidok közé tartoznak nem-ionos OlslS-analógok, például alkil- és aril--fószíátok -(amelyekben "a töltéssel rendelkező feszfonái-oxiigén alfcillal vagy ariíM :MÿéÎtesftve), foszfo-diészter és alkilfoszfoíriészterelc, amelyekben a töltéssel rendelkező oxigéncsoport: aikllált Azon twkleinsavak-ról, amelyek egyik vagy mindkét tertnimusukon droit. például tetraetiiénghkolr vagy bexaetilénglíkolt tartalmaznak,: kimutatták, hogy lényegébenzezísztensek á pakfeázos dggTádáciéval szembéU,
Egyes megvalósítási módók széflm m; óíígbftukleotidpk egy vagy több palindrom szekvenciáitartaím#-nak. A leírásban a „palindrom” vagy az ezzel lekvÁalens „paliadromszckvencia” kiS'ejezés jelentése invertált ismétlődés, azaz egy ABCPEE'Ö’G'B'A* szekvencia, amelyben az A és A> 8 és B’, stb. bázis# képesek a szokásos Watson-Criek bázispárosodást képezni. Egyes esetekben a palindrom GC-hen gazdag. A GC-ben gazdag púimét® jelentése olyan palindrom* amelynek báztsösszetétele legalább fcéihartnadhan G-bői és C-bői áll. Egyes íHégvaíósításí módok szerint: a GC-ben gazdag domain előnyösen 3' Mhyb® helyezkedik el a "8 sejt stimnláns deraén"-tôi. Azaz egy 10 bázis bíBszjásagú GC-ben gazdag palindrom esetén a palindrom legalább S G-t és tartalmaz. Egy 12 báíls hőssziságt öC-ben gazdag palindrom esetén a palindrom szintén legalább 8 G-t és G-t tartalmaz. Egy 14 tagú GÉ-beo gazdag palindrom esetén a palindrom legalább 10 bázisa G és G. Egyes megvalósítási módok szerint a GG-hen gazdag palindrom kizárólag G-bőí és C-ből épül fel. Egyes megvalósítási rMdak szerint az oligomíkleotil több mint egy palindrom szek venciát tartalmaz. A DbíB 3 '-5’ foszibdiészter kötésékkeí összekapcsoíí óezcrxiribóönfcleoíidtAból felépülő polimer. IÄ· lálmátsy szeri®: polimer egységeit is összékápesolhatják 3-51 foszfodiészím· kötések. Azonban, a találmány magáb® dog® s?#atian poiimereket is, például különösen 5*-5', 3-3*, 2¾ 2A3!, és 2E5' inmm#feotíd-kötés#eE Egy megvalósítási mód szerint az ilyen szokatlan kötések ki vártnak zárva az immunstimuláns DNS-motivutnbói habár egy vagy több ilyen kötés előfordulhat a polimeren belül máshol. Egy 3-f- int®rn#íeotid- kötés bevitele szábád végződésű polimerbe két szabad 5’ végit polimert eredményezhet. Ennek förditóttiá egy 5-5" szabad végződésű polimerbe két szabad T végé polimert eredményezhet A taMimány szerinti ímmunstimdláns .készítmény tartalmaz!® két vagy több immunstimuiáns DlrtS motívumot amely# elágaztató egységen kérésztől lehetnek összekötve. Az ibienmkleotíd-kőtések lehetnek 3'-S*, f ~ -5',: 3’-3!, 2'-2!, '2*4?, vagy 2*-5' kötések. A #-5!: nomenklatura a deStkirtbóz szénatonpához igazodik. .Atoérmyí- ben azonban « természetben elő nem lordniö eidmmsoportet alkalmazunk, például gyirüs kiterjesztésű ebkor-analógokat (például hexanőz, ctiohexéis vagy piranóz) vagy bi- vagy tnciklusos eukoranaSógokat, a nomenklatúra a monomer nomenklatúrájának msgieleiden változik. A szokásostól eltérő ihternúkleöiid-köíés teher foszfo-diészter kötés, de más esetekben foszibrotioát módosítás lehet, vagy egyébmódositoü kötés, a leírásnak megfelelően. A (IV) képlet a találmány szerinti elágazó DNS oíigomerek és módosított oligonbonukleotid-analógok rmkieotid elágaztatöegységgei összekötött általános szerkezetét mutatja. Nul, Nn2 és Nu3 3'-5', 5¾ 3!-3’, 2-2', 2-3' vagy 2-5' -kötéseken keresztül lehet összdöteve. A foglalhatja nem nukleotrd kötöcsopörtök és abázisos távtartók alkalmazását:, Így mégyalösrfási mód szerint Nul, Nu2 és Ne3 jelentése azonos vagy különböző immünstmmláns DNS-moitvam.
A módositótt óligoribonukkötisbáhaiög tartalbtazhtP: duplázó vágy lóigiá:# csoportot (G len Research, Sterling, ¥A), különösen a 3-3' kötést tartalmazó módosított oligódezpxifíbpnpkteotid-aííaiógtsk. A duplázó egység alapja egy megvalósítás! mód szerint etiIlP,Ni-diizopmpi:lj]-fószföramidit lehet. Egy megvalósítási mód szerint a háromszoros egység alapulhat !^;χζ~2,2,2-|3-{ό,4 -όίηκΧίο:(η·ίίίΙοχί}ρΓορίΙοχΙ®βΐ!]|^ί(Ε2χ:Ιαηοϋί5ίΝ(Ν.Ν-όΙ:Ιζορτορί1):]'Ι05ζίόΓηϊηΙίίΙί beágyazásán. A mődósdott öligoribonuileotíd^nológölc elâgaztafâsa többszörös duplázó, tripláké vagy egyéb sökszöröző egységek alkalmazásával dendrimerekhez vezet, amelyek a találmány további megvalósítási módjait jelentik. Az elágazó módosított oUgonhömthteotid-anatögoh receptorok, például TLR*, TLR?, TIR« és TlJte keresztkötés-Óhoz vezethetnek, különösen íoimsnsiímuiáns RNS és DNS kombinációi esetén, ami a nem elágazó analóg formákhoz képest eltérő ímmrahatást jelent, Az elágazó vagy más módon moltimer analógok szintézise ezenkivttl siabiltzáíharía a DNS-t a degradáeiövaí szemben és lehetővé teheti, hogy a gyenge, vagy részlegesen hatékony ISNS-szekvenciák terápiásán alkalmmdíaíö szhdd Immtm^ctivltást tejtsenek Iá. A módosíttat ohgodeztíxiríbo-ntskfeotlá-analógok tartalmazhatnak pepiid móteitó reagensekből vagy oligmmkieoti# módosító reagensekből wémmé összekötő egységár (Gten Sesearctó. Iteváhbá, a mődositöti öí^odezoxiribonakleotid-analógok tartalmazhatnak egy vagy több: természetes vagy nem temrfeetes aminosavat, amelyeket pepiid- (amid) kötések kötnek a polimerhez. A 3’-5‘, 5'-5:, 3'-3‘, 2'-2’, 2¾1 és 2'vE MemokleodddíOtések fehérnél közvéÉenek vagy közvetettek. A leírásban a közvetlen kötés jelentésé I tenáshan teirt Éfezfiírt vágy módósitött ibszlátköíés, köztes kötöesoport nélkül; A köztes kötőesoporí olyan: szerves· csoport, amely különbözik az itt leírt foszfáttől vagy módosltottíösz-íáíköíéstői, amely magjai jbglatotja például a következőket: jxdietiiéngílkoi, tetóíéttglíkok hexaeöfettgifeöl dSpaeer (azaz, abázisos dezöxinukleotid}, duplázó egység vap triplázd egység. A köteleket előnyösen a következők alkotják: G, M, N,0y S> B, F és balogén, és 3-360 atomot tartalmaz* flak: 3 atomos például az ácetáilcöíés (0í>N r3M>CH2-O-30OOí%b .ámeiy például cp ffiikleotid 35 -hídröXli éisö-: portját köti össze egy másod! rntkleotid 3'~hidroxi csoportjával. Ep mintegy 3(K) atomospélda a FE0-40 (tattá-könfa-pöiíeúléngiíkol}, Előnyös kötések a ioszfödiészier, Äzfotodöäi, niÉiibszlbháí, foszlorantidák bütánoíbszfbnár, ásnád, éter, doéter, aceiál, iíoaeeiál, karbáítod, tipkaibamM, szuifönamld, SéblfEfeázts és diszul-ild kötések. Alkalmazható a Soluliak BioConjagatton Systém rendszer is fwww.!rilmkhlôiéch.epork
Amennyiben az oHgcaokleotidot kettő vagy több székvendaíész alkotja, ezek a részek jelfötttek iszonoxak vagy különbözőek, Azaz. egy 3T kötést tartalmazó oíigöaukleotidbsb a szekvenciák leketöék azottosak: S'~ *ODNr3’3f-ÖDNr5’ vagy különbözőek: 5~ODNr30k01)lSír5'. Továbbá, a Milőub&amp;zS eligondkleoîîdsrészek, valamint a?: őket összekötő köiöcsoport kémiai médösftásái lehetnek különbözőek. Mivel a rövid oligonukíeo-fidöh fölvétele kevésbé hatékonynak tűnik, mint a hosszé oilgonuklemidoké, két vagy több rövid szekvencia összétcötése jobb immunstimuMciói eredményez. A rövid oligönukleolídök hosszá előnyősén 2-20' Míkleőtidj előnyösebben 3-16 nukleotid, igen előnyösen 3-10 nukleotid. Előnyösek a két vagy több mm kötött S'-végét tartalmazó kapcsolt oiigooukleotidok.
Az oiigoíutklelötidrész-szekvesciéktít nem-nukléötid kStecsoporíok Is Ős&amp;toköföeílk. A ’hSem^sÖkiéöod:: köiöcsoport" a leírásban bármely kötőelemet jelölhet, amely nem nukleotid vagy nokfeoíidpoiifncr (azaz pdí-nukíeotid), aboi a nukleotid magában foglal purin vagy pinmidiu nukleobázist és eukor-fosaülok különösen ábázlsoS kötöesoportökat (dSpcer-eket), rtíetilén-gtífeol épségekét és hekaetiién-glitó egységeket, További előnyős kötöcscipertok az aíkílámino kőtöcsöportok, így G*. Gs, 4¾ ammo cspportpk, így G, vagy €{. tlpl köíőcsoporíok. Az csoportok is SsszeköíhsÉk, amelyek szubsztiîuàltak lehetnek áltól vagy szubsztituält alkilcsopottokkai. A sejtbe történő fölvétel elősegítésére epes megvalöstásí mődok szerint az immunsíimeiáns oligomikle-cdMok hossza 3-1Θ0 bázis. Egyes megvalósítási módok szedni az oligonakleotidok hossza 1- I öö bázis. A 6 nuk-leeítonál hosszabb, bármely hesszuségá (akár több Mioházis hosszúságii} mtklemsavák jellemzően képesek immunválasz kiváltására a taJálmáhy szedőt, amennyiben elegendő immmtsdmuláns motívum van jelen, A találmány szedeti módosított oiigonufcleetidofc javított ínrpmnsíiínbláns kapacitása azonban jelentősen rövídebb smmonsíímnlass molekulákat biztosít. Epés megvalósítást módok szerint az Immunstimulânepllpmekleotidok 3-ö bázis hosszúságúak. A Cpö mrntausiimuiáns ollgonukleotídok a taiáíntány epes szempontjai szedni aikalpazEatök vakema-ként, allergia vap asztma, fertőző szervezettel történő fertőződés, vagy olyan rák kiíéjlődése veszélyek kitett alany kezelésére, ahol specifikus rákantígént azonosítottak. A GpG immuosíimuláns eiigooskleotldok: leadhatok az antigfe vagy Míergén nökők fertőzés, allergia vagy rák elleni védelemként, és ebben az esetben az ismételt dózisok hosszabb védelmet tesznek lehetővé. A veszélpek kitett alany kifejezés jelentése a ielsisbp olyan alap, ató fertőzést okozö patogénnek, ráknak vap atlergéímek történő expozíció vagy rák kifejlődése kockáza-tának van kitéve. A veszélynek kiföd alsny lehet jráldtó olyan älapy, aki egy adott típusé fertőző ágens előfordulási helyére tervez utazást, vagy életmódja vagy gyógyászati eljárás miatt olyan testíolyadékokkal érintkezik, amelyek fertőző organizmusokat tartalmazhatnak, vagy közvetlenül ki van leve az organizmusnak, vagy akár bármely olÿart alany* aki olyan környezetben él, ahol fertőző organizmust vagy allergént azonosítottak, A ferlé* izés kifejlődésének U&amp;áémtM viselő alanyok magukban iogâatetk olyan: általános populációkat Is, amelyek sa$» :mám az egészségügyi hátőságok ad«p fertőző organizmus antigénjével történő oltást javasolnak. Amennyiben az ábílgsn állérgéft, és az alany allergiás választ ad m adóst antigénre, és m alatty esetleg exponátódik az antigén* Pék, átsííá: |joÍés\ -smssm akit, m alany antigénnek IStténő expozietó kockázatát viseli. Az: allergia vagy asztma kifejlődésének kockázatát viselő alany kifejezés magában ibglalja azokat;, akiknél allergiát vagy asztmát azonosi-Mikik* de &amp; betegség még: nem; aktív a CpG íntmunátitnuiásá oiigptsukfeoiiddal történő kezelés ala&amp; yaiafeioi azokat az alanyokat, akik genetikai vagy környezed: faktorok miatt ezen betegségek kifejlődésének koekázaíát viselőknek tekinthetők. Rák kifejlődésének ködkizátát viselő alany az. akinél nagy valószisaséggel ^IdÉk M Â- Ezeu alanyok közé tartoznak például a genetikai; elváltozást hordozó alanyok, amely genetikai elváltozás jelenléte bizonyítottan korreiát a. rák kifejfedésének nagyobb valószínűségével, és rákot okozó anyagok, például dohány, azbeszt vagy más kémiai anyagoknak kitelt alanyok, vagy olyan alany, akit korábban rákkal kezeitek és a rák nyilvánvalóan remittal. Amennyiben a rák kifejlődésének kockázatát viselő alanyt olyan antigénnel kezelik, amely specifikus: ar ra g ráktíposcá, á inely kifej lődésének kockázatát az alany viseli, a GpG immanstiíaulánsöligonnkleofiddaí az alany képes lehel elpusztítani a ráksejteket, amint illődnek, Amennyiben a tumor kialakulása megkezdődik az alanyban, az alany spesiikus immanváfeszí A €pO immanstimuláns oltgonuklsotidok profSlaktikos kszelésm történő alkalmazásán Äi a találmány tárgyé a €pö immanstimtiláns oilgonaklemidíik alkalmazása fertőzésben, allergiában, asztmában vagy rákban szenvedd alany kezelésére, A fertőzésben szenvedő alany olyan alany, aki esponálódoti fertőző patogénnek, és testében a paiogén szintje akütan vagy krónikusan kimutatható. A €pG mununstumsláns oligonnkleoddek alkaimazhatők aótigénnéi vagy antigén nélkül, mlsgjép - .^eiflôs· :.s$szfe«t᧠vagy roukozáiís immunválasz kiváltására, amely képes a fettőaf pge$$$ ·%*φ' &amp; &amp;)ί#2$-patogàn kiirtására. A fertőző betegség kifejezés jelenté- se a leírásban olyan betegség, amely a testben lévő idegen mikroorganizmus jelenlétéből ered. Különös jelentőséggel bír a fest nyálkahártya-ieiszinetnek, amely a pafegén belépés primer helyszíne, védelmére szolgáló hatékony oltási stratégiák és kezelések kifejlesztése.
Allergiában szenvedő alany az, aki slietglnre allergiás reakcióval válaszol, vagy allergiás reakció kifejlődésének kockázatát viseli. Az allergia égy anyagra (allergen) adód szerzett hiperszenzitivitásra utal, A korlátozás sááadéka nélkül az-allergiás állapodik kfözá tartozik az ekcéma, allergiás rimősz, vagy koriza, szénaríátha, köÍö>-bádya-gyulladáSj brőuellális :aá^ák.:^|^a,(g!S*áife|:iülés) és étel allergiák, valamint egyéb atöpíás állapotok.
Az ialfetgüül:.ÜWábati. :Wito68Éai!t ;#lierg#ödfeM válaszul adott IgE ellenanyag-termelés okozza. A CpO imínunsttrnnláns öiigőnukleotidök szisztémás vágy nyálkahártyán kérésziül történő beadásával indukált gidaiéit·dltósafbfe*i·ííil-pfe PséVeáétí osztályba tartoznak (például 11.,-12, IP-tó, IFM~a és ÏFM-γ) és mind a biunőfells,: mind: a eeifeiáris tmmimyálaszt tTtdtikiíják. À másik iS immunválasz-típust*; amely az 1L-4 és 11,-á éhokt tofôîelÔàéséhez kötődik, Th2 immunválasznak nevezzük. Általánosságban úgy tűnik, hogy az allergiás betegségeket; a "í'h típusú immunválasz közvetíti A CpG iraraunstirmíláns oügonnkleotidok azon képességére alapozva, ímgyképesek alanyban a tolnyomórészt T&amp;2 immunválaszt (atnely az í^ eifenayagök termeléshez és allergiáihoz kapesoiödik). kiegyensúlyozott ÏÜ2/fhï immunválasz (amely védelmet nyújt az allergiás reakciókkal szemben) irányba tolni az asztma vagy megelőzésére, CpG tntamnsilpnilhs oltgonukkotidök lm- mnnvál&amp;szt haíélmnpn Indukáló dózisa adható be az alanynak.
Azaz, a 'Ù0 iotmimstimuláns ölígemAleolkíök szipiilkáns terápiás alkáitnazhatósággá! hitpak allergiás ás eero allergiás állapotok, például asztma kezelésében:. A Fh2 ciíokinek, különösen m ÍL-4 és az IL-ő sznüjé asztmás alanyok léguíalbso megemelkedett Ezen eiíoklnefc az asztmás gyulladásos válasz lényeges apektssáb segítik elő, köztük az IgE izotóp-átkapcsolást, az eozinoîll kemeiaxísl és aktiváeiót, és a hízósejtek szaporodását. A Thl citokinek, különösen az í$H-y m 11.I2, képesek sz.uppresszálni a Th2 klánok kialakulását es a Th2 cítokmek termelését. Az asztma jelentése a légzőrpndszermegbetegedése, amelyet gyulladás, a légutak szűkülése és a légutak belélegzett anyagokra mutatott fokozott aktivitása jellemez. Az asztma gyakran, de nem kizárólagos módon kapcsolódik atópíás vagy allergiás tünetekkel. líákhan szenvedő alany az, akihéa kísöapábálók rákos sejtek. A rák lehel máltpus vagy nem málignos rák. Á korlátozás szándéka nélkül a rákok vagy fotnorok közé tartoznak a következők: az epeutak rákja, tígyrák, meprák, PéhnyalrSk, koríokareitxsma, vastaghélrák. nfohnyáikahártyarák. nyeíöesőrák, gyomorrák, tntraepiíéli-ális neoplazmák. lintfömák, májrák, tüdőrák (példáid kissejtes és nem kis sejtes) melanőma, nenröhíásztómák, szőj üregi rák, petefészekrák, hasnyáímirigyrák, prosztatarák, végbéirák, szarkómák, bőrrák, hererák, pajzsmi-rigyrák és veserák, valamint egyéb karcinómák és szarkómák. Egy megvalósítási mód szerint a rak kissejtes leukémia, krónikus mieioid leukémia, bőr ériníettségü T-sejtes leukémia, myeloma multiplex, fóllikuláns iim-íöma, mélammta malignem, faphámsejles: kardnórna, vesesejt-kareínórsa, proszíatakarcinéma, Mgyhölyapejí-kaiPírióroá vagy vastagbél kareinóma.
Az alany jelentése ember vagy gerinces állat, köztük például a korlátozás szándéka nélkül kutya, macska, ló, tehén, sertés, birka, kecske, pulyka, tyuk, főemlős, például majom és hal (arp#üllúrás &amp;pk|> példád lazáé. Esnék megfelelően a .találmány alkalmazható rák és tatsorok, fertőzések és alléfgtáAiszdná kezelésére embertől különböző alanyokban. A rák a társéi latok (azaz kutyák és macskák) egyik vezető halálozási oka. A leírásban rendellenességgel, így például fertőző betegséggel, rákkal, allergiával vagy asztmával kapcsolatban alkalmazva a kezel, kezelt, kezelés ki&amp;jezések proElaktikus kezelésre utalnak, amely emeli az alany ellenállását a betegség kliéjlödésével szentsen fpéídátt! patogéunel történő ftatőződésj vagy más szavakkal csőfc-kent! a valószínűségét annak, bogy az A (példán! megíérlözödik a patogénnei), valamim a betegséggel történő megküzdés érdekében folytatott kezelésre az után, hogy a betegben kifejlődött a betegség (példáid a vagy a betegség rorhlásának nregakaöáiyozására.
Azokban az esetekben, amikor antigénnel adjuk b% az alany exponálva lehet az antigénnek. A leírásban az expónk kIS|ezés vagy az alany antigénnel történő éríntköztétésének aktív lépésére, vágy az alany antigénnek történő ?« vme passzív exponálására utal Az alany tuttigénnek történő aktív exponálására tptlgáló eprások jöl isméik a ttaíömán^rülsfen. Általánosságban az antigént jdi^lenü! bármely mód-mmX például intavénásan, mírranuszkulárfsao, tuálisan, transzdermálisan. mukozállsan, inlranazálísan, intra-iekálisan vagy szubkinán beadással beadjuk az alanynak. Az amígén beadható szisztémásán vagy helyileg. Az antigén és a CpG ímínunstimuláns oílgonukleotid beadására szolgáló eljárásokat lent részletezzük. Az alany passzív módon antigénnek kitett, amennyiben az antigén a testben az Immunsejteknek kitette válik. Az alany antigénnek passzív módon kptté ¥Äf pehSání ΐ$$$βι paíogért testbe tőAéső béléf^sével, vagy Ődszinén idegen antígépt expresszáíó tumorsejt feiÉjlŐídésévei.
Az alany antigénnel passzív mődon; tődluő exponálására szó|gáló ejjórások Mlöbősen ftlggnek a CpG Immnnstitüuláns oligohükleotid beadásának Időzítésből. Példán! rák, fertőző betegség, allergic Vagy asztmás válasz killjfedése kockázatának 'kfteô alanyban a €pö ímmunsbínofens oîlpmAfeotid rendszeresen beadható, ättikbr a kockázat a legnagyobb, azaz az allergiás ídő&amp;zák alatt vagy rákkeltő ápnshék történő expozíció után. Ezenkívül a Cptbimmanstímuláns oMgenökleótíí! beaébato utazóknak, mielőtt olyan Idegén országba utaznak, ahol fertőző ágens expozíció: kcmkázaiának vannak kitéve. Hasonlóképpen, az tmmunstínntiáló CpG oligonukle-odd beadható az antigénre sÉo&amp;'gzásztétsás vagy mukozálís immunválasz indukálására katonáknak vagy polgári személyeknek, akik biológiai hadviselés kockázatának vannak kitéve, amikor és amennyiben az alany ennek kiteli
Antigén alatt a leírásban immunválasz kiváltására képes molekulát értünk, Az antigének közé tartoznak a korlátozás szándéka nélküle sejtek. sejtkivonaíok, feltörjék, pdlipépíldek, peptidék, poiíszaeharídok, poliszaeha-riá-konjugáíok, polismchárldok és más molekulák pepiid él nem*pptid lítliuedfcumai, kis molekulák, Üpidsk,-giikolipídek, szénhidrátok, ylittsók és vírus kivonatok és többsejíÖ órpmztnusok, így paraziták és allergénék. Az antigén kifejezés tág értelemben óságában foglal bármely típusú molekulát, amit a gazdaszervezet immunrendszere idegenként ismer fék Az antigének közé tartoznak, a korlátozás szándéka nélkül, a rákanfígének, míkro-biális antigének és alléfgénék. A rákantigén kifejezés jélemése a leírásban olyan vegyület, például pepiid vagy fehérje, amely tumor vagy ráhfcjí felszínéhez: kapcsolódik, és amely képes immunválasz: kiváltására, amennyiben MHC molekula ifeszéklní anfígénprezenláló: sejt felszínén expresszáíódik. A rákantigének előiiillíhatók ráksejtekből ráksejtek nyers hlvtmaíánafe előállításával, példán! Goben,, és munkatársak 1994, Cancer Research, 54:1055, áltál leit* módon, az antigének részleges tisztításával, rekombmáus technológiával, vagy istnert antigének de mvo szintézisével. A ráknníigének közéi tartoznak, a korlátozás szándéka nélkül a fékömhloáus módon exprésszálí antigének. immunogén részük, vagy egy te|es ítptér vagy ï#e,· iybn il$àgése&amp; tífolSlSÉÉt; Vágy' rekómblnáns módon vagy bármely, a tudományterületen janiért elíirássál eldállítbatők,
Mikrobíáiis antigén alatt a leírásban mikíoorgantzmus antigénjét értjük, és a korlátozás szándéka nélkül Prágában fegM yírnst, bakfertuffioí, parazitái és gombát. Az ilyen antigének magukban foglalják az intakt mik-coötpniÄusf. vaiarónf természetes izolátumaíí és fragmenseit vagy származékait, és azon szintetikus yégyüíe-teheí, amelyek azotmsak vágy hasonlóak a természetes miteoorganizmns-suú^éni^tbez és az ama a mikroorga-nlzm«a sbeéiftns immunválaszt indukálják. Egy vegyidet hasonló egy természetes náikroorgairizmus^ántígén-· hez, amennyiben fermészetes mlkToorgamzmus antigénre immunválaszt {htüüötáis és/vagy celittíárlsj inda-feáí. Az ilyen anügéneket á tudomány területén rutinszerűen alkalmazzák, és a szákémber számára jói ismertek. A vsasók kis fertőző ágensek, amelyek általánosságban aukiemsáv magot ïs :iKteíjéíi«rtíöttá^ft9íB5«)ídt, de nein önállóan: élő organizmusok. A vfeasok előfordulhatnak fehérjemenlcs jertőtő nbkicinsav formájában Is. A vírusok ne® képesek túlélni olyan élő sejt: hiányában, amelyben replikáiódháínafe, A vírusok az adott élő sejtbe eadöcMzis, vagy direkt DNS injektálás (fogj útján lépnek be, és sokszorozödnafc, ezáltal betegséget okozva. A megsokszorozódott virus: ezután Mléphet, és további sejteket1 íertőzhet meg. Egyes vírusok DNS-tanaímú vírusok, mások RNS-t tartalmazó vírusok. A DNS-vírusok közé tartoznak: Pox, Herpes, Adeno, Papova, Parvo és Hcpadna. Az RNS-virusok közé tartoznak: Ficama, Caiíd, Astro, Toga, Fíavi, Corona, Paramyxo, Orthomyxo, Eunyä, Arena, Rhabdo, Ft So, Borna, Reo és Retro. Egyes szempontok szerint a találmány szerinti megoldás olpb betegségek kezeléséi célozza* amely betegségprögmssziépban prlonokat feltételeznek, például a szarvasmarhák spongiform enkeiálopáuáia (azaz kergeraarha kór, BSE) vagy suriókór álatokban, vagy Creatz-feldy ákob betegség emberekben. A vírusok közé tteíopák, a korlátozás; szárKféka héiktii, az enierovirusok pbzlhk a korlátozás: szándéka nélkül a piéornavMdae vtosesaÄ például; polio vírus* Coksaokie yfrus,. éehó vims), ^ôtavfepÉs, adehövfrusofc ás hepatitisz virus, például hepatitisz A, S, ÇI) és £, Az emberben talált vírusok speoiirkux, óéi«; korlátozó pél-éái^ Betwviridm (például otnbed ímmunbiányt előidéző vírusok, így H1V4, másiiéven ItTE^ÏIE LAV vagy íölAI-lIHLAkí, vagy HiV-Il; és más izolátumok, például HÍV-LF); Pimmmiridne (például poliovírusok, hsjpatMs» A. ipgsg ;'ia|eipvte©k,. .tomâg: Coxsackie vírusok, rhinovírusok, eshövírasoh); Caicmiridae (példáid gasztroentriiiszt ókezó törzsek); TogmdriddP (például Iá ^cephalitis vírusok, Âéia vírusok); FiavMridae (például φ-nguMz vírusok, encephalitis: yímsok, sárgaláz vírusok); Coromrviridm (például kpronavírusok); iihçàdmiridae (például vszikulárís szíómaíhisz vírusok., veszettség 'vkmok); .'MmMé&amp;e (például ebola vírusok); Parcmyxoviridae (például paÄfijptet vírusok,, mgn^szvírus, kanyaplvlrus,: légúti; óríássejtes vírus); Orihomyxovirídae (például míluenzavínisok); BmyavMdke (például Hantaan Vírusok, banya vírusok, ílebovírusofc és Kairo vírusok); Aremviridae (hsmorrágiás iáz vírusok); Reoviridae (például reovirosok. orbmrasok és roiavírusok); Bímmmám; Eepadnavirtdae (Hepatitis B vírus); Pdrv&amp;víridm {psrvovitasok); Fapovüviridm (papiilomavírusok, pollbma vírusok); M&amp;mvMéœ (a legtöbb adenovirus); fh^emmdm perpes simpiex vírds (HSV) ! és 2, varicella zoster vírus; eyíosuegalovirus {hhnldvirusok; vaccinia yíruSök, pöMituSbk); iridmmdae (például afrikáí sertósíáz vírus); és egyéb Vírusok, akut l&amp;ryogo-tracheobronchitis vírus, Áiphavirus, Kapösí-szarkémához; kötődő herpesvlrusy Hevteasde-lígícgség viras, Nipalv vírus, Horwalk^ítus;, pgpillomavÍRís, paraiolluenza-vírus, madártnfíueaza, SA.Rs vírus, pytrgaí:«íí:usí vírus.
Az itt leírt: ef órások kölörtősen alkalmasak egyes megvalósítási trAdok szerint a humán ímmenhiányt pkozó vírus (HÍV) és hepgtíiiszvírús kezdésére. A HÍV, másnéven humán îïksejt limfotrop vírus Ili (HTLVlií), amely egy retrovirus faj, felelős az AlDS-kéní ismert rendellenességben UIV: megfér* tőzi és elpusztítiá g T^sejteket, ezzel felborítva az immunrendszer egyensúlyát, eredípényeként a; beteg elveszíti azt a képességét, hogy megbirkózzon egyéb; más fertőzésekkel, és predíszponága a betegeket gyakran fatálisnak bizonyuló fertőzéseknek. A vírusos hepatitisz á iM) gyulladása; amely duzzanatot, érzékenységet s&amp;ozhat és egyes esetekben permanens módon karosltjä á tbájsit Amennyiben a májgyulladás legalább hat hónapig vagy hosszabb Ideig tart, krónikus hepáptitisnek oevezzök. kegaighb Öt kSibnbözö vírusról ismert, hogy vírusos hepatitist 0¾¾¾ köztük a kepátitts; A, B, C D és Ë4, A hepatitis A4 többnyire emberi széklettel fertőződött élelmiszer vagy Ivóvíz közvetíti A hepatitis B4 általában festfelyadékok, például vér terjesÁí. Mldául áíi«{je<&amp;et anyáról gyermekre szüléskor, széauáí is kontaktussal, fertőzőit yéfáiímiíesziéseel és tűkkel- A hepamls C megiéhetosen gyakori és g hepatitis Brhez hasonlóan gyakran vérÉötnlesztéssel és; fertőzött tövei terjed. A hepatitis fi gyakran előfordul iv. drog használóknál, akik a hepaí itis B vírus hordozói, amellyel közmsnikődik. A hepatitis E hasonló « vtrálts hepatitis A-hoz és többnyire a fejletlen higiéniához kapcsolódik.
Mind a gram negatív, mind a gram pozitív baktériumok lehetnek antigénekgerinces állatokba®, A gram pozitív baktérimnok közé tartozîîak, a korlátozás szándéka bélköl, a FastÄeife fejok, Sogfetloeocei és StrepíocPCéus ittpk; A korlátozás szándéka néikííi a gram negatív baktériumok közé tartoznak EstMeticMa coli Pseudommm fajok, és S&amp;im&amp;mtta fajok. Fetíózé; baktériumokra példák, a kmíátozás szándéka nélkdí: Eclkohaetitrpdom, Bőreim b&amp;rgd&amp;ifitrii fJg0meêfrphëumop$Mei· Mycobâcierhd^dpèiâml M. tulmmhsis, Μ, avium, Μ, immceilulare. Μ, kamaii,. Μ. g&amp;rdoméí, Síaphílocmms aureus, Neimemi gonorrhoea^ Meissene meningitidis. Listeria mmeeylogenes, &amp;rupiwuaeem pyogenes (Strepioeoccm A csoport), Sireptemccm agataetiae {Étreptoeöeeus ß csoport), (widens csoportba tartozó làjok), Streptococcus fimMà,
Streptoeocem èociy. Slcepio«« fámmék ibjökk Êfae&amp;fococcw pncamoniae, patogén CatrjAiobacier sp,, Entermpecus sp-, Bdemaphthis mßimmae, iBaciUm antraeis, mry-nehaeterîum difterme, cmymimtierhm sp., Erysipelpihrix rhmtopatiae, Ctosíridmn perfrmgers,. Clostridium mmi, Enterobacter aerogenes, Klebsiella ppmmodlae, Pmhmtfto muUodä^ iBmtermdes ψ., Füsolmcseritm nucleaium, Sttepiohapillm mmlUßmtiSi: treponema pallidmm, lleponetna perieme, Leptospira, Rickettsia és Actinomyces lsra0L A gombák közé tartozó példák: Cryptococcus mtßtrmans, Histoplasma ippml&amp;íám, ChemSoidès immittl Blastomyees dermatithljs, Chlamydia trachomatis, Candida albicans.
Egyéb fertőző organizmusfik (például prodszsäk) közé tartoznak: Plasmodium spp., így Plasmodium ßtkiparúm, Plasmodium maláriáé, Flasmodmm male ős Flmmodium mm, valamint Tmepímma gondii Vért re! terjedő és/vsgy szöveti paraziták közé tartoznak: Flmmodhm spp>, Babesia microti, Babesia divergens, Leishmania tropica, Leishmania spp.s Leishmania hraziiiemis, Leishmania dottovant, Trypanosoma gambleme da Trypanosoma rhodmensetgfrikar álomkór), Lryprnmama ormi (Chagas betegség) és
Egyéb, orvosi szempontból releváns tmii^otgg^ kiőtórgőep tárgya! a szakirodalom, js^tdáu! lásd Cd3.A Thomas, Medical Microbiology, Bail! iere Tindall, Great Britain 1983, melybék tefès tartalma referenda útján a kiianMs részér képezi, M;ttifergÄ?tö|E!je#s olyan anyagra (anEg&amp;e) utal, amely allergiás vagy asztmás választ képes indukálni áréá érréírény álábybam Az állefgébek listája hatalmas, és Mkré|Sk tarteztebmk a polieoek, rovarmérgek, állati saÄöi keletkező por, gomhaspórák, és drogok (például penlctiMrl, A természetes, állati és növényi eredetű a! lengének közé tartóznak, a korlátozás szándéka nélkül, a következő genusekfá specifikus fehérjék: Canine {Timis ßtmiliaris): Denpatophagoides ipMMiá Bemaiophagmdes jármmT> ?«Ife (Felis domesdem); Ambrosia {Ambrosia artemihfo$g)l Loliam fpéldáál LoBumiperenne vagy Laliim .imbtßommß Cryptomeria (Cryptomema japonieä); Alternana (Altemaria aliermttdß Aider; Âfeas (Aihm gullbîoasd); Betula (Betula verrucam); Quercus {ßtwrcus dlhap Olea {Olea eumpd); Artemisia (Artemisia vulgarity Plantage (például Fiardagp lattemlata); Parietarta (például Parietaria oßamdis vagy Parietaria Jadmeat); Pattella (példái# Blahella germanica); Apis (például Apis mtdtißömm); Cupressus (például Cuprassus sempervirètts·, Cbpressm arisonlea dk:(^res$mmd<RGOmpaß> Ittíuperus (példátû Jmißtras sabinoldes, Juniperus Virginiám·, Jmlperm eottmatm és; dimiperiis mkeiß Tbüyá (például Thuya mismai is): Cbámaecypáris (példást CkdmdecypdriS Pblmd); Feriplaneta (például Feriplaneta ameriama); Agropiron (például A grop iron rejtem); Seeaíe (például Secede eeredky. Trätest» (például Tritieum aesiivumü Dactilís (példáét Dactilis glomerate)·, #és$$éï éttiiory Poa (például Fm pratensis vagy Föd eompressdp Avena (például Ayem llolétis (példáSl iïalcm ianaOís); Aíttboxantum (például Andmantam Odomtmn); Arrheßatbeftitrt (például Arrbenátbédürt: eíatius); Agrostis ;(piíáául: Agroslls albag Pideúm (például Phieurn praiemép Phalarls (például ÄSfam armdmaced); Faspalum (például Paspahm notaiúm); Sorghum (példánl Sorghum hakpensis); és Bromús (pél-: dáu! Bramas imrmis), A lényegéheft tisztított ..kifejezés a leírásban olyan peiipeptidet jelent, amely lényegében mentes tttás prö-reinektői, lípídektöl, széultídrájoktól, vagy egyéb anyagoktól, .amelyekkel természetesen kapcsolatban van, A szakember képes viráiis vagy bakteriális göligeptrdeket tisztitam, a fehérje tisztításra szolgáld szokásos teclrnh kák alkaitnazásávaL A lényegében tiszta polipéptrd általában egyetlen Ιδ sávot eredményez nem-redtrkálő pnlialcrilamid gélért. A részlegesen gfikozilált pollpeptidek vagy azok, amelyeknek több start ködöüjkk van, több sávét sferihferiyexhéínek a nem~reddfcáló poliaktílsmiá gélen, de ezek arra a pol [pepiidre jellemző mintázatot képeznék.: Jk virálls vagy bakteriális pölipepíid tisztaságit atBinoterramállS aOrinasav-szidi vénein. analízissel ük meghatározható. Más típusú., nem noklébisav vektor által kódolt antigének:, például pölíSzaéharidöfekis nfelefeö“ lak, mimetikumok. stb, a találmány Itőrébe tartoznak. A találmány szerintii oligondkieaiidOfc az alanynak beadhatók antimíkrobiál is- hálöfesyaggai egyöfe Az aritimifcröhiáMs a leírásban természetesen előforduló vagy szintetikus vegyllfeí, atnely képes fertőző míkrporghíitatitiSpiíat elpusztítani vagy gátolni, A találmány szerint aikáhnazhatO atkimikrobíális hatóanyag; típusa fegg: 8200 mskroorganiznms típusától, amellyel az alany fertőzöd, vagy amely-lyel történő meg fertőződés kockázatának ki van téve, A korlátozás szándéka nélkül az ami-mikrobiális hatóanyagok közé íartöznÉt áz ánribaktoriáhs haÄnyagok, antivlrálls: hatóanyagok, ami&amp;ngálís hatóanyagok és parazitaellenes hatóanyagok. A„íeitözés elleni hatóanyag“, „sntlbakferiális hatőanyagy, „antiviráíís hatóanyag“ „anüíungáiís Míóatóyág** ,:,gamzllaeifehes hatóanyag”, és „parazitaSlSsaef’ kifefezések jelentése a szakember számára jól meghatározod: és standard gyógyászati szövegekben definiáit. Ssviáen, az áPtibaktenáíis hatóanyagok elpusztítják vagy gátolják a bakferinmokat &amp; lőréjük tataswk az anthsoikomok, miamim egy#i,hasonló íunkdójú szintetikus vagy íeratsészefes vagytlletek. Az antiéiotikursiok kis molekalatömegő molekulák, amelyek sejtek, például tnlkroorganízmusok szekunder metaboíítkén t termelnek, Általánosan jellemző, hogy az antíbíötb· húrnak egy vagy több bakteriális fankeiővaí vagy szerkezettel: interferáSnak, amely a nnfeoorganlzmusaa speeife· kas és nincs jelest a gazdasejtben. Az anri vitális hatóanyagok természetes: forrásokból Izolálhatok vagy zálhatók, es alkalmasak vírusok megölésére vagy gátlására. Az antifttpgális hatóanyagok alkalmazhatók felületi gonthafertőzések kezelésére, valamint opportonsta és primer szisztémás getnbaferie^s^ ímzelesére. A paräzk taelleses hatóanyagok elpnsztilják vagy gátolják a parazitákat.
Az emberi beadásra alkalmas paráziíaejléoes szerek, másként párazitairtó szerek közé tajtóstak a ksriáttk zás szándéka nélkül: albendazol, amfotericip B, benznidazol, bitlönol, kiorokin HC1, klorokio-fesziii, klmcía* micin, dehidroemeiin, didflkarbamaptviÍÍÍi|ai$id*tun>ák efiornittp, furazolidaon, giükokortikoídok, haioflintrin, jjódkinol, ivemtekítn. mebendazoí, rncijpkitp meglooiirvantirnoniât, meíarsoproi, metrifonát, metronidazol, nik-lozamid, oifurtimox, oxamßlkin. paromdPiiöin, pemamidin-izotiógáí, piperazin, prazikvantel, primakin-ibszlät, iproguanil, piramel-parnoát, pirimetaniprszulfenamidok, pirimétámine-szalfádoxin, kinakrin HCi, kinin-sztjifáí, kmidm-giükonäi, spiramicin, nátrinm-stiboglükonát, suraminytetrpclkiin, doxíciklin, tíabendazol, tlnldazol,.tri» metrOprim^szitiiametoxazol éa íríparsamtii, amelyek közöl néhányat önmagában vagy másokkal együtt alkalma-zunk:
Akjábtíbakteríáíís hatóanyagok a baktériumokat elpusztítják, vágy növekedésüket gátolják. Az ahtibakfe-mils: hatóányngök égy nagy osztálya az antibiotikumok. Azokat az antibiotikumokat, amelyek hatékonyán ptsz-titják.el vagy gátolják baktériumok széles tartományát, széles spektrum)ú antibiotikumnak nevezzük. Aziáídi-hítetikompk mis típusai tőként a gram pozitív vagy gram negatív baktérium ellen hatékonyak. Agfekéri. tipUsú antibloikumökaí szik spektrumú antibiotikumnak nevezzük. Más antibiotikumokat, amelyek egyétlép prgsnlz-mus vagy betegség ellen hatékonyak, dériem hatékonyak tnás tlpBsö baktériumok ellet·, limitait spektrumú ami-biptikmmtäk: nevezzük. Az amibakteriális hatóanyagokat néha primer hatásmechanizmusuk alapján osztályozzák,: Áitaiánossághán az antihakieriáíls hatóanyagok sejífelsztntézis-tííltibiíörok, sejmternbrán-inhibitorok, feher-jeszüttézis-irórlbitorók, nukléinsavszintézis-mhifeítorok vagy funkcionális inhibitorok és kompetitiv inhibitorok»
Az. antívMÍls.hatóanyagok olystn vegylíletók, áirielyek megakádályözzák a sejtek vírusfertőzését, vagy a vitások relációját a sejteti feéM. Lényegesen kevesebb antiviráUs gyógyszer van, íéí antifeakteriálls gyógyszer, mivel a virusrepiikáesö fölpteta olyan szorosan kapcsolódik a DNS replikáciőhöz a: gazdasejten bélül, bogy a mm speci fikus antivlráíls hatóanyagok gyakran toxlkifsak lennének a gazdám A vírasmíefeeió iblyama-iában febb mkssz is gátolható Vagy blokkolható antíviráiis hatóanyagokkal. Ezen szakaszok köze bötozik a víisp gaZdasejthez csatiakozasa {immunglobulin vagy kötőpeptidek:), a vírus kicsomagolása (például am&amp;ntadin), « vit® mRNS szintézise vágy transzlációja {például interferon), a vitális RNS vagy DNS regíikáetöja i'péidáuí »öMeptidtatalogok), az öj vlusfehétpk érése (például protetemhibítorok), a virus sarjadzása és kifeoesálása, Λ tmkleoiíd-analógök a nteleotídokhoz hasonló szintetikus vegyöletek, amelyek; irfeompfett ysgy abnormális de20xirihóz- vagy riltecsoportot tartalmaznak, Ha a riukleoííd-analögok bekerültek a sejtbe, loszíbri-iálödnak, kialakítva a tótedite, ately a normál nukíeötidókkai verseng a vitális DNSte vagy ENSte történő bekerülésért Amint a nukleotidraneá^ triibsziat tonnája beépült a növekvő ntdílemsav&amp;ebaj a vhális polüné·* rázza! okoz, és ezáltal iásctermmációt A korlátozás szándéka nélkül a nukleoiiö- amdőgök közé tartoznak äz acikkmr {a herpes simplex, vírus és varicella zoster virus kezelésére alkalmazzák), ganéikiovir {alkalmazható citomegaiovírus keze!ésére)( jodoxuridin, ribavirin (alkalmazható a légzőszerv! sz.incitMlís vírus kezdésében), didezoxiinoztn, didezoxiehsdin, ztdovudín {aztdoítmídm}, ímÍ&amp;vn»o4 és reziraikvhnod. A ciiokinek olyan interferonok, amelyekét a ylrasfertőzőtt sejtek valamint imnmnsejtek termetek. Az interferonok a fertőzött sejtekkel szomszédos sejfek spéétflíos reóeptoraiboz kötődnek, így előidézik a sejten a változást, amely megvédi őket a vírasferiőzésíőh Az o; ás f-interíeron az 1. és 11, osztály« MMC molekulák ekpresszióját indukálja a fertőzött sejtek felszínén, ami fokozott amtgénprezentáeióf eredosényez a gazda* szervezet immunsejtjei által történő felismeréshez. Az « és jkinterfertmok hozzáférhetők rekombináhs íőrtnábáít, és alkalmazzák őket kterkus hepatitis D és € fertőzés kezelésére, Antivlráüs terápiában hatékony dózisban az irderSeronoknak súlyos mellékhatásaik vadnak, például láz, rossz közérzet és sülyvesszíés. A találmány szerinti megoidäshsn alkalmazható antiyirá|s hatóanyagok közé tartoznak, a köt&amp;ózás szándéka nélkül, az imtengiohulfepk, amautadln, ínlerferonök, stifeieotid-analogok és proteáz inhibitorok. Az antlviráijs hatóanyagok specifikus példát közé tartoznak, a korlátozás szándéka nélkül: ueetnahhän; aéikkmr; acíkíövir nátrium; adefovir; alovudm; sdyjrcegt sudofex; amanfedm-hidrokiorid: aranotín; anidon; atevirdib mezÄ, ayridjn; cidoípvú; cipamíiilmj; eisarabin-hidrokferíd; défevirdímmezilát; bezcikioyjr;: didanozm;: dlzökaríl; edöküdín; enviradén; envirökífe; femciklovir; femöiin hidrokiorid; fiaeitabin; fisluridío; fözatÄ; íbzkamet nátrium; íószíunermatóum:;; gancikiovir; gancíkfeyír-náírium; idejűméin; ketox&amp;l;: íaauvadm; lobukavífemémotm bidrokloríd; metizpon;: nevirapin; pencikfeyir;, piródavk; ribavirin; rimantadm bídrskíbríd; szakvínavir meziíát; scunaniadin índrokiorkl; sörivudin; státófó«;: síavadin; tiforon hidrokktríd; tntlnridin; valaciklovír hidróklorid; . vídarábin; vibarabín foszfát; vidambih nátrium foszfát; Vlroxint; Zaléríabm; zsdevudm; ék zínviroxun.
Az aníiíungális .hatóanyagok alkalmazhatók a fertőző gombák kezelésére és prevenciójára. Az ami* fungális hatóanyagokat időnként hatásmechanizmusuk alapján osidájyopák, Egyes antltetgáiii hatóanyagok sgjtíálinbíbhörképí műkődnek a glühóz-színtáz géskiséval. Ezek közé -«Éto!, é hazlungits/ECÖ, jyíás antiíüttgáiis hatóanyagök a memhrtóntegritás desíábibzálásfet keress®® isőköteek. Ezek közé tartoznak, a korlátozás szándéká nélkül, m itnitfezoiók, például kloüímazoí, szstakoszoi, flukonazoL llrakonázoi, ketokonazol, mikímazied, és voríkomfeol, tov^sbá FK 4Ő3, ámlótetsem E, BAS' 3S*9áb2, MK 991, praditmein,: 392,: fettíénáiin és terbináSu. MM ánöimgális hatóanyagok a kitin; lebontásával halnak (például kMnáz) vagy nnmunszupresszioo keresztül (50 í krém) À Cfö.5 !»Híysssíí8öMns oí|pba1ífeöíi|ök; kondnnáihaíök egyéb terápiás hatóanyagokkal, például adjuvánsokkái az immunválasz fokozására, A €p€ï íbaíiabsíiíBálábs öligöatikiéöÉíi és egyéb terápiás hatóanyag beadható egyidejűleg vagy egymást kővetően, Ámmn^bm- az egyéb terápiás hatóanyagokat egyídejölsg adjuk be, beadhatok ugyanabban vágy tóba kiszerelésben, de ugyanabban az időben. ,Az egyéb terápiás hatéanyago-kaf egymássaí vagy a Cp6 im:numsimmlá«8 oligtmukleoliddal szekveaeiáiísan acijuk be, .mmnyíbm az egyéb terápiás hatóanyagok és a GpCI ínnnunsllimdáns oiigonukleoíici beapsa ideiglenesen elválasztott A. vegyüíetok beadása közötti idöküionbsége lehet percek vagy lehet hosszabb. Ak egyéb terápiás batöányagok közé tartoznak, a korlátozás szándéka nélkül* az adjuvaasok, clíokmek, ellenanyagok, antigének, stfc> A találmány 'szerinti készítmények beadhatók nem. mikfemsav í«|wpspkkái együtt is, A nép málemsav sdjuváns Mrtnely, az itt leírt €pö kototmsiimuláns oMgtmuklemídtél külbhböáS molekula vágy vegyüíet, amely képes stimulálni a immorális és/vagy ceilulárls immunválaszt. A nem rnikiemsav adjuvánsok közé tartoznak példáid a depohatást kiváltó adjuvánsok, az immunstimuláns adjavánsok és a depohatást kiváltó és az immunrendszert stimuláló adjuvánsok, A '£$($ immmiitmäm .#ij|b»okleotide&amp; mufcozäÄ á^iváfiskérít is alkamazhatók.. Korábban leírtát, lidgy iá Cipő nttkioinsávák bejtíltátása mind a szisztémás, mind a nmkozáiis Immunitást indukálja. Azaz, az öfigonukleóíidók béadbátök egyéb mukozáíis udjuvánsokkaí együtt. ínmpnválasznk indukálhatok vagy fokozhatok cítokinek (Briefer &amp; Maligas, 1990: Chew és munka* torsai: 1997:; Gslsslec és nmnkatorsai: 1997; Iw&amp;sakl és munkatársai;: 1997; Kim és munkatársai: 1997) vagy B-7 le-siitnulálÓ molekulák flwasakl és munkatársai: 1997; Tsuji és munkatársai: 1997} és CpC immunpstitnaldns oligomAleotidok kolioeáns expresszíójával vagy együttes beadásával. A eítekm fogalmát nano- és plkíunpiáris ifemcerarációbaa Immorális reguláimként ható nomsál vagy patológiád körülményeik között az egyedi se|tok; és szövetek finskeitsnálts aktivitását mmluiáíö oldható fehérjék és pepiMek változatos csoportjának gy^ongvehést használjuk, Ezen fehérjék közvetlenül is közvetítik a sejtek közti interakciókat és az eztraeelnlárts környezetben zajló fbiyamatokaí is szabályozzák. A cítokinek közé tartoznak példánk a korlátozás szándéka nélkül, az íL-k IL-2, IL-4, 11..-5, IL-ó, 1L-7, 1L-Í0, 1L-12, IL-iS, 1L-IS, granutodta-makrofág kolónia stimuláló faktor (GM->€SF), gramiloctlá kolónia stimuláló faktor íö-CSP), ihierferon-y (γ-IFN), IFN-s, tumor nekrozis Ätor (TNF), TOF*ß, FLT-3 iigahdum és CSD40 iigauöum.
Az oiigonakleotidok atkáhnMhatök atra is,.högy égy ifofonuválaszí a Th2 immunválasz felöl: a Thl immunválasz irányába irányítsanak át. Ennek eredménye egy yjszóbyjágosán kjégyesknlyozöií Thl/fhl környezet. Az immunválasz Th2 típusból Ibi típusú immunválasz irányába töítéhöÉirányhása yízsgáíhato a mskleinsavra válaszúi tennelt citokinek szintének tnérásével (például tnonocilák és más sejtek iíidakálása, így Thl cítokinek, köztük 11..-12, IFN-γ és öM-CSF). Az ítotnenyálasz:Th2 tipttsbóí Thl típusúvá átirápyhása vagy átsúlyozása .különösen jól alkaitnazhaiO asztma kezelésére vagy megelőzésére.. Például asztma kézeiésére hatékony dózis lebet az $ #ps, amely alkajihás az asztmához kapcsolódó Th2 típusú itnmunváiasz átirányítására Thl típusú válasszá vagy kt-epeitsűlyozza "Fb:37|i2 köntyezeíté történd átirányitásm. A Th2 ciíOkmék, kilönösen az 11,-4 és 11..-5 szintje asztmás alanyok léguiaibau megemeikedett, A íaláltnány szermti Cpö hntotínsllinaláns oligomikieotidok a Thl eitokinek szintjének emelkedését okozzák, amely elősegíti az Immttorendszet egyensúlyának vísszaáílhásák meg-akadályozva vagy csökkentve a túlnyomórészt a Th2 ímmnuváíaszhoz kötődő kedvezótlett hatásokaí. Â találmány szeri rá i oíigonukleoudok alkalmazhatók a légiit! átrendeződés kezelésére, A légúti átrendeződés a simaízömsejtek pfóliferáejőjának ésÁpgy a Mgutokfeáü: a nyálkahártya alatt kialakuló megyastagodásoak az eredménye, és végső soron a légutak csökkeni iégáfmnlásáhöz: vezető szűkülését okozza. A találmány szériát! oligpnukieotidok megakadályozlátíák: a további átrendeződése éS: valószínűleg csökkenthetik az átrendeződés folyamataként bekövetkező szövetfdépülésí.
Az oligotnikleottdrik álkafeóuzbaíök: óeodritíkus: sejtek túlélésének, difiereneiádójának, aktiváeiójának és érésének javitására, A Cpö immnnsti mutáns öSigonuk ieotídok egyedülálló képessége, hogy elősegítik a dendri-tifcus sejlék túlélését, differensíádóját, akíiváeiójáí és érését A Cpö inrnunsthmdáns oiigonukleotídok fokozzák a természetes őlősejíek sejtiitikos aktivitását és az el* ienanyagtói független sejtes éitetoxícitést jAElCC). Az APESC megvalósítható CpG Immunsífetmlans oMgötmkle-otíid A sejtes eélpördrti, példáéi ráksejtté specifikus eileháhyaggá! együtt történő alkalmazásával. Amennyiben a Cpg iotnumsíinmláns oilgonukieotkio! az eiíenanyággáÍ kapcsoltait adjuk be az alanynak, az alany immunrendszerét indukáljuk, hogy :¾ a ísmíórSSjiet. Az APCC-idyamaifesm alkalmazható ellenanyagok közé tartoznak s testben sejttel ínföraimióba lépő élilétiányagok, A szakirodalotübán számos ilyen sejtes célpontra specifikus öllénaneagöt álak lé, és számos káplpé kéraskedelrntdőrgalómbít«:, A Cpö: ittimússíimuláns dligohlskieotidok y adhatók rákellenes: terápiához kapcsolódóan is. A rákellenes terápiák közé tartoznak a rákgyógyszerek, sugárterápiák és: sebészeti eljárások. A leírásba» a „rákgyógyszer* kifejezés olyan festőanyagra utak amelyet rák kezelésének céléból adunk be. egy alanynak, A leírásban a „rák kezelése"" kllfejezés magában fbgta§a a rak kifejlődésének: megakadályozását, rák tüneteinek csökkentesét,, és/vsgy kislakai!: rák növekedésének gátlását. A találmány más szempotjál szerint a rákgyó^zert ráfe kr^ilódé-gének kockázatát .hordozd- alanynak,adjuk be a rák kifhjlődése kockázatának csökkentésére. A leírásban különbö-ző, rák kezelésére szolgáié gyógyszertípusokat Irank le. A leírásban a rákgyógyszereket a kővetkezőképpen osztályozzak: kemoterápiás sasr^ szerek, nákeíle«es oííópyugok, hormonterápia és biológiát választ módosító szerek. A feltárt ellátások egynél több rákgyógyszer CpG rtnraunstlmnläns piigpnukiepriddai együttes alkalmazását fáglapk magukban, Példán! adott esetben a Cpö immunstjömlÉ® pligondkletnäd beadható kemoterápiás és immunterápíás szerre! is. Más esetben a rákgyógyszer jelentheti immnnterápiás szer és rákellenes oltóanyag vagy kemoterápiás szer és rákellenes oltóanyag, vagy kemoterápiás szer, inóóuntfÉpils szer és rákellenes oltóanyag mindegyikének beadását egyetlen alanynak, rákban szenvedő vagy rák kifejlődése kockázatot hordozó alany kezelésére, A kemoterápiás szer a következők alkotta csoportból választott lehet: metotrexát, vinkrísztin, adriamkín, ciszplatits, cukrot nem tartalmazó kióreíil-nitTozokarbamidok, 5-flaoruracik nütomfcm C, bieomsem, doxorubicin. dakarbazin, íaxol, Iragiim, Meglamin CILA, valrnbkin, ksrmoszíam és peliferpozan, MM 127Ô, BAY 12--9566, RAS iamezif trauszferáz inhibitor, &amp;nezii transzieráz inhibitor, MMP, MTA/LY231514. LY264618/Lo-metexol, G iatnolee, 0-994, TNP*47Öv Bycamtin/topotekan, PKC412, Va!spodar/PS€s33, Novantron/mitro-xattron, Metarehsuramin, Batlmastat. E707Û, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG334Ö, AG3433, incd/VX-710, V.X-85.3. ZDOiOt, 1S164Í, ÖDN 698, TA 2516/marmistat, ΒΒ25ΐ6Αβ;»ό»ΐο!, GDP 845, D2163, PBÍ83S05, D.XS951f„ Lemönai DP 2202, FK. 317, PierharnkÖK~432, AD 32/valmhkín, Mélastrxm^stroncíam-szánnazék, Temodairtemozoiomtd, Ivacebllposzomálís doxorubicin, Yevvtaxan/pakiitaxeí, Taxoi/pakUtaxel, Xeload/kape-eitabin, Furtalon/doxídnriáirt, Ciklopax/oráiis paklifaxek Qpi| Taxölát HMR 1275/flavo- päridoi. CP-35B P74)»R, CP-609 (754)#ÄS onkogén inhibitor, BM$~ 18275!/orális platina, UFT •ÇP^fur/uracü), :Íif^|göL<'!^]|!ii?óí}. enítanszer, Camplo/ievarmzol, CtmiptosarM- noiekao, TporodexÉalitrexéd, Leostatísí/kkclrihin, Paxex^akliiaxél DoxllMposzornálís doxorubicin, Gaelyx/ Hposzomális doxorubicin, Flndam/îludâi-abin, Pharrnarubicsn/epirabieir., DepoCyt. ZD 1839, LU 79553/Bís-dr^siaipidy LÖ ÍÖ3793Alölastaís, Caetyxílipoaxoú^lis doxortíhieiu, Gentzar/gemcitabin, W M7$ká®tÉM, ¥M i iöi p, CDK4 és CBIÉ2. inhibitorok, PARE inhibitorok, IMSÖPMexííbsamid, ites/Mesnox/iibszaíníd, VotHOítÁepiptelíi, Pip^tainliiarboplatin, PlaminoEeiszplafin, \^peside/etopozid, ZD 933 1, Taxetere/doeetaxel, gnsmo^blpbzïd prodrogjai,; Taxán-tmaióg, nitrozokarbamidok., alkilező szerek, igy tmsIMan és ciklo-toszlmhid,: aaoinogiutetimid, aszparagináz, btisztdfan, karböplatip, klmombueil, eitarabin HCI, daldinotmcm, daonorahicjn BCf, esztramttsztindbsztät-natdsrm, dopozitfc (WIA"2)3j, lioxdridtn, ßaornracil (5-fu), flatamid, hidroxlkarbanddi (bklroxikarbamid}, ifosz&amp;raiá, interferon a!Ét“2a, áll»~2h, ieoproUb-aeetät (LHRH-releasing lektor anaiég), lonmsztin {C€NU), mekiorettuoln BCl merkaptopttrin, tnesda, mítotaa (0.14 -DPP), mitoxantron HG, okireotid, piikamidn, prokafbaátn ip, íSíféptozóeín, tamoxifen-dudt, tiogtsaíÉi, tiotcpa, vinhiasztin-szulfát, Aíbsaeríne (m-AMSA), AzaékíÖ«,: eÁb^ i HMM), h\W~
SetÉiP 2, railoguaam {meííÍ-C5AG; metibglioxal bisz^guanilisidrazbn; ÄM), Pemostalm (2'dezoxí colban lein), Sémpstíoe nnetíí-CCNU), Tepiposiáe (VM-26) és vmdezin-szulltí:,
Az immunterápiás szer a következők alkotta, nem korlátozó jeüegő csoportból válaszúm lehet: Ributaxin, Hereupon, Quadramet, kánórex, 1DEG-Y2BB, BEC2, €225, Oneolym, SMART MIPS, A.TRAGEN, Gvarex, Bcxx&amp;r, LDP-03, ior tó, MDX-2H), MDX-H, MDX-22, OV;i03, 3022W94, suti-VEGE, Zenppax, MDX-22ÍX, MDX-447, MBÏ.TM«»2, MELMMimßU, CEACYDË, Pretarget,NovoMAb-GS, 4¾ Gliomab-B, GM--2SÍS, EMD--72Ö0O, LymphoCídei GMA 676, Monopharrn-C, 4BS, ior egte.» tor öS, BÄBS, aníBFLK-2, MD3C--2#» ANA Ab, SMART IDS Ö Ab, SMART ÂBL 364 Ab ésdímnoRAÍT-ClA, A rákellenes oltóanyag: a következő, nem korlátozó jellegé csoportból: vàlæztott lehet: ΕΛ1Ε, Anti-idiötí-pusos rák oltóanyagok, Gp7S antigén;, GMK melanóma elíóaswag, MOV gangiíozid konjogát oltóanyag, Ber2/nsu, Ovarex, M~Vax}; Ö-Vax,; E-Váx, STn-KHL thpratope, BLP25 (MUC-l). iíposzotoális iidimlpsps|fe anyag, Melacín, pepridantlgén2 oítőanyag, toxia/amigérr oltóanyagok, MVA-bads» oltóanyag, PAGÎS, BGö vakcina, lAAlPVj TArGlN,TíÍSGkyiruá és ipnmsCysÄepäGys, A CpG immunstimuiáns oligonukleotidok immunterápiás szerrel, például mortoklomtlis ellenanyagai töríénó égytlttéS: alkalmazása lépés: megnövelni a hösszíMvit Íóíéist szátnos mechaniznmsöö kérésztől kóztíik az ADCC szignifikáns fokozásán keresztül (ahogy azt fém bemutattuk), a természetes olôsejiek (NK) akiiváció-ján kereszílll:, és az IFNo szint obyeiéséri keresztül. HdldlPláiíiiiÉ ellenanyaggal egytií alkaimáztm c.sOkkentik a biológiai eredfrtény eléréséhez szükséges elletisnyaidoalst, A icirásban a J0mtq0it*:4&amp; „tumorangitérs” ki{e|ezéSékeí egptáSSal feleserélbetó módon alkalmazzuk, jelentésük olyari antigéíl antelyeket | ráksejtek eltérő ntódon exprésszálnák; és így felhisszriáibaíók a ráksejtek ímgetálásám. A rákamígének olyan antigónek, amelyek képesek lehetnék stlrtmlálni nyilváíivnlömt ttnnorspe* ciltkus immnnválaszokat Ezen antigének közti! néhányát kődbitak a noémál sejtek, bár nem szükségszerűen éxprésszáinak. Ezeket az antigéneket a tóveáékil|^peftj^ÍSi«gpfe nórtni: sejtekben normális esetben ésea-des (azaz nem expresszit) andgéttek, csak a dífféfenesáeió blzöriyrB s^käskalbati expresszált antigének és át-iPéítetieg expresszáll antigének, például az embrionális és ÍÖtális amlgének, Más rákantigéneket mutáns eeilutá-ris gének kódolnak, például, az onkogének (így aktivált ras: onkogért). szopprasszor gének (példás! mniáírs p53>, belsA déléciök vagy kramoszomáils uansztokáeiö eredményeként létrejövő íózlós feltorfék. Egyéb rák snögdm*» kei kódolhatnak viráMs gének, ilyenek m. RNS és EMkS tumorvípsök: által jftöiioäic» piték. A GpG: imnumsiííoaláos oligonnkleotidok aíkalnmalúitók aotoínmmh beiégSégék kézéiéséfe; és feépiöké^ sere, Az áutöunínan betegségek a betegségek olya» osztálya, amelybe« egy alany saját ellespyalái reakcióba lépnek a gazdasxövöífei, vagy amelyben az immuneflfektor T sejtek aotoreaktfvak az (^dogéïts Sípt pégtlPkre és a szövet destrukcióját ökoz-tok. Azaz immunválasz alakul ki az alany saját antigénjei elle», amelyeket saját antigéneknek: névez&amp;nk. Az aatoimsnnn betegségek köp tartoznak, a korlátozás szándéká nékhk reimtos: artritisz, Gtoim-heíegség, szklerózfe maliplex, szisztémás lapas entematózsísz (SÍJE). autoimmun eokeMotaieliSisz, myasthenia gtavis (MG), Mashitnsttb^reéps, Soodpastare^zhtiMma, pemphigus (példáé!, pemphigus vulgáris). Grpe-^etegség, atodimm«« anémia* autoimmun ttomhögitopéniás perpttp, astikoliagp- antitestes szkietodérora, kevert kSiOmtoveil ifetéiség, polknyoiatis, vészes vérszegénység, idiopátiás Addisöó-kér, autoimmun betegséggel: társait meddőség, gtomemloneíníisz (például, crescent gfemerulonefeitisz, proliferativ gfemémlboeíritisz), ftolyagus pemfígöid, Epgren-szfedróma. iPzul tnrezíSíáencta és autoimmun diábefesz meíiüusz, A leírásban a „saját uníigén" kifejezés normái psteM antigénjére utal:, A normál gazdaszÓVet kept foglaip papban a rákos sejteket, Azaz, egy saját antigén elten kialakuló infflnnpktsz autoimmun betegség kontextusában nem kívánatos immunválasz és hozzájárul a normális szövet pusztulásához és sérííléséhez, míg egy rákastlgé» elten kialakuló immunválasz kívánatos immunválasz és hozzájárul a imner vagy rák etf «szidásához. Azaz a találmány egyes, aaímmpnn renPUépsségáp irányuló s;rempontjaí szeúmCpQ inmtenslimuláns nukleinsayak stgát ptípnnek kölöndsen m ittppnn«s mnptlenesség targeíjekéot szmgáló antipnnet történő együttes beadása nem ajánlott. Más esetekben a CpG !mmunsíimuíáns nnkleinsavak beadhatók alacsony dőzisá saját antigénnek Több állatkísérletes vizsgálat bizonyltja, hogy alacsony dfepá antigén pakozátis beadása az immunválasz alulmükö* dósét vagy „toleranciát” eredményezhet. Úgy tűnik, iái aktiv meéfeamzmus cltokm közvetítette Immuneliérés 1¾¾ irányból táinyömörész Th2 és ΓΗ3 (azaz Í GF-p dommátt) válasz Isdnyába^ Az alacsony dóztsá antigénnel kiváltott aktív szupresszió Sziípmsszáíbtá Ihgptlen ihimunPI^Zt Is E^sbarder kívülálló szupresszió), ami jelentős érdeklődésre lart számot autoimmun betegségek, például reumás artritisz és SLE terápiájában. A hystabdé? Snppresszió magálxm foglalja ?b 1 elled szabályozó szupressaw eitokinek szekrécióját a helyi környezetben, ahol a proinEammâtoros és Thl eitokinek vagy antjgétopeeifikus vagy mm ant^ia:peciijkus módon szabadulnak fék Ä „tolerancia" kifejezés a leírásban erre a jelenségre mai. Valóban, az orális tolerancia állatokba» számos autoimmun, bétogség, köztok a kísérletes ,(EÄ®» Msédeiss autoimmun myasthenia gravis, kollagéndmlaMlta arírftísz (GíA), és Inzulin dépendons diabétesz médiusz kezelésében hatékony volt. Ezekben a modéllekbeo az aaidlmnmn betepég megelőzése és szopressadjó összeliigg az anttiénspeelíikas humorál is és eeUidáris válászbkjThl-rói IMrIM válaszra változásával.
A találmány feltár továbbá « CpG óligómfeleetidok alkatmazásáváí fertózó ágensP adott netö antigénspeeihktri, fermészetes inmmaákiiváeíó és széles spékfmmö rezisztencia índultoíásáp szölplö eljárási A iékásban a nem aniigéhspecifite veleszölefed immunválasz kifejezés a B sqMl ktiibnMzd Inmmn-sejiek tottivácfójára utal, és például magában foglalhatja MR s^tek, T sejtek vagy más hmmtßsejtok aktiválását, amelyek képesek antigémől feggellendl módon választ adni, vagy ezen sejtek kombinációjának aktiválását, Fer» tözó ágensre széles spekftomá rezlszíeneja usdukálódik, amikor az mmmniæjfek aktív lllápótban: véstták és bár- mely htvsZiv vegyüieho vagy mlluoerganizmusra adott válaszra indukáltak. Mem szükséges a :se)|dk antigén eite speoilkus aídiíkáiááás Bt klemében előnyös biológiai hadviselés és egyéb, példán 1 utazás, között. A CpG imnmosdhiütáhS dligonukleotidok az alanynak beadhatók közvetlenül víágy beadhatók nokieinsav Imjutiaíókomplexszel kapcsolva, A tuskleinsav hejnttatókomplex jelentése tíukleinsav molekula, amely targetálö eszközzel (például molektda, amely a célsejthez történő nagyobb afíinitásá kötődést emdményéipí} kapcsokklik (például soros vagy kovalens kölessel vagy beágyazva}. A aöktesav' bGutíaíókemglexek példái közé mrtOZnak a szterineldsez (például kotesztstinj kapesolMô nnkleiosavak, a lipídhez (például kattpíms lipid, viroszöma, vagy liposzóma} kapcsolt nakielpsavak, vagy célsejtspeeifikus kötömsyaghoz (például eéís^t^ecifikus receptor áW felismert ligand) kapcsolt noklemsavak. Az előnyösen alkalmazható komplexek in vivő megfelelően stabilak lehetitek ábhox, hogy megakadályozzák a eélstpje történő internalizáeiót sstegelözl jeleÄs: mértékő szélkap-csoiódást. A komplex azonban a sejtest bellii megfelelő körülmények között hasítható, hogy az oiigonukleotid működőképes formában felszabaduljon.
Az antigének és oitgontäkleoildok felszínre jtíltáíására szolgáló hordozók vagy szállítóeszközök Ismertek. A CpG immunsííomláas oligößukfeötid és/vagy m ánigén és/vagy egyéb terapestikam Ideadható önmagában (például sóoldaíban vágy puffetbénA vagy a szskíertdéten Ismert bármely hordozó alkalmazásával. Ismerték például a következő bejsíítatásra alkalmas vivöanysgók; spirál formában fekekeredett membrán („coéHleale”) emulszómák, iSCOMmkt iijmszómák; élő bakteriális vektorok (például SémmeUk Escherichia call, ßmillm: cííkmka-gríerm, ShígeMm Eack&amp;aeiihts}; élő virasvekíotok (például Vaccinia, adenovirus, Herpes smplmfr mlktogömbök;: nukleiusntv-vákcinák; polimerek; polimer gyűrűk; proteoszómák; nátrium-iTuorid; transzgenikus növények; viroszómák; vírusszerő részecskék. A szakterületen ismertek egyéb hordozók is, és néhány további példát ismertetünk a; vektorok bemutatása során. A CpG Innmmstimúláns ohgonukieoisdok hatékony amely szükséges vagy elegendő a kivárd biológiai Itatás megvalöshásához, Például a antigénnel együtt beadott hatékony CpG immlmstimnlánsóligtmufclém dózisa az a mennyiség, amely antigénre válaszul adott IgA termelést váltja ki, míg á szisztémás immunitás hxdnkálásához szükséges metmyúíég az a píkunyiség, amely anrigéncxpoziciő éSéíéít áz aotlgéitre adott válaszként IgG termelését váltja ki, A leírás bizio-sltótta kítanifás segítségével számos hatóanyag közöl választva, ós az olyan íakíorök;,: mint pofertciái, relatív biológiai hozzáférhetőség, a beteg testtömege, a nem kívánatos mellékhatások súlyossága, és az előnyös beadási mód mérlege lésével hatékony, prörtiaktikus és terápiás kezelési rend tervezhető, amêly nem okoz lényeges toxi-élíásk de teljes ménekben hatékonyan kezeli az adott tdanyi A halekony mennyiség bármely adott alkalmazás esetéi) olyan faktorok függvénye lebet, mint a kezelni kivám betegség vagy állapot, az adott, beadni kívánt CpG imnomstimuláns olsgomtkleoÄ az alany mérete vagy á betegség vagy állapot súlyossága. Az átlagos tudású, szakember képes emphikos rnodön meghatározni az adott CpG umoaushmuiáus oligonukleoíid és/vagy antigén és/vagy egyéb terápiás anyag hatékony mennyiségét, tőlzott mennyiségé kísérletezés szükségessége nélkül. AZ itt leirt vegyülsfek áláüyra vonatkoztatott dózisa muközáits vágy lokális beadás esetén jellemzően beadásonként a S,1 pg és 1A mg közötti tartományba esik, mnely az állmlmazásídi íéggően naponta, hetente, havonta vagy bármely ezek közötti időmtervail untban beadhálÉ Méglökább jellemző módon a mnkozális vagy helyt beadás dózisa a beadásonkéntl 10 pg és 5 mg közötti tartományba esik, és különöset) jellemző módon a mintegy 1ÖÖ pg és I mg közötti tartományba, 2-4 beadással* amelyeket napok vagy hetek választattak el egymás tél. Még iaMfefe jellemző módon az innnunstiinnfáns dózis a beadásonkénti 1 gg és i 0 mg közötti tartományba esik, és különösen jellemző módón a 3ő pg és i mg közötti tartománybá; naponia vagy hetente történő beadással. Az: itt Mît vegyiihstek alanyra voaMköztäiött dózisa antigénspeeidkus Immunválasz kiváltására szolgáló parenterális bejuttatás esetén, amikor a végyüleíef antigénnel együtt, dé thás terápiás hatôauÿàg nélkül adjuk be, jslleojzően 5-ÍÖŐÍiÚ~szér «ágyöbb, tarnt az ôlîô&amp;nyag-adjnvâns, vagy immuhstiteláns alkalmazások hatékony nuíkozálfg |$3dsa és még inkább jeliemé módot) iO-10 (100-szer és különösé« jellemzően 2S-lÖÖ-szor nagyobb. Az itt iéift vegyü leiek patenteráiis bejuttatást» szolgáló dózisa természetéi immímváiasz indakálásáfa vagy az At>C€ fokozására, vagy antigén specifikus immunválasz indukálására a ágii Immunstímnláns oliganukleotldók egyéb terápiás hatórntyággal kombinációban: történő vagy speciális btehatómndszerekkel történő beadása esetén jeíiémzően a beadásOhkéhii 0,1 gg és 1Ö mg közötti tartományba esik, amely az alkalmazástól függően naponta, hetente, havonta vagy bármely ezek közötti tdöintervallombars beadható. Még inkább jellemző módon az ezen célokra szolgáló párehterálís dózis a beadásonként* 10 gg és 5 mg közötti, és különösen jellemző módon a beadásonként! mintegy löö gg és 1 mg M2!M tartományba esik, 2-4 beadással, amelyeket napok vagy hetek válás*· tasak el egymástól Egyes megvalósítást módok szerint azonban az ezen -célokra szolgáló garenteráis dózis alkalmazható S- lö: ÖÖÖ-szer aat^ohb mennyiségben, mint a ient megadott jellemző dózisok.
Valamennyi I« isin vegyüteíre vonalkózó terápiásán hatékony mennyiség kezdetben meghatározható áf-lainiódéilek aiuppn, A terápiásán hsiíékóny dózis meghatározható olyan CpG oiigonukleoridők humán adátál alapján is, atnelyekeí teszteltek etóberen jelkézdödtek a humán klinikai vizsgálatok!, és olyan vegy öletek humán adatai alapján, amelyekről ismert, hogy hasonló fhrmakológi&amp;i aktivitást fejtenek ki, például egyéb adjuvánsok, így L? és egyéb oltást célra atkaíteázott antigének. A parenterális alkalmazáshoz magasabb dózis lehet szükséges, Az aikalmszott dőzisí a beadott vegyülét relatív biológiai hozzalérbetósége és potenciálja alapján állóhatjuk be, A dózis ntipÉnális hatékonyságot bizfesító beállitása a fém leírt eljárások és egyéb módszerek alapján a szakterületen közismert, és a ^kepÉter közlés tudásához tartozik, A találmány szerimt kdszkminyek gyögyászatiíag elfogadható oldatban kerülnek beadásra, amely szokásosán tatemazbátjá sók, pöbfetek, tartóshöszefék, konjpatíhiis hordozok, adjuvánsok és adott esetben egyéb terápiás összmévőkg^gyástóíiií^ éílógadhmó koneerilTációják
Terápiás alkalmazás esetén a £lp£l immanslhmdáns oíigonukleotid hatékony mennyisége bármely módon beadható az alanynak, amely e§jóitatja az öiigonnkíéoíidot a kívánt felületre, például mukozáiss, szkzténrás beadással A találmány szerinti gyógyászati készítmény beadása megvalósítható bármely, a szakember által ismert módon. A beadás előnyős, dfe nem köríáídzó jetlegö mödjaj: orális, pareaterális, iatfátnaszkuláris, latrarfazális, tepngváhs, infe&amp;fekáhs, inhalöeiós, öMä ysptólís és rektálk
Szájon át történő beadásra a ye^üieték fazaz a ep<3 immanstlmtdáns ollgonukleotldok, antigének és egyéb terápiás hatóanyagok) kiszerelhetik beadásra kész teáiban az aktív hatóanyagfok) kombinálásával a tu-dteáíéidorüléién Ismert gyógyászatilag eifegááhtáó bötezökkäl. A hordozók lehetővé teszik a találmány szerinti vegyüfeíek: az airnty kezelésére szájon át bevehető feldetta, plinia, drazsé, kapszula, folyadék, gél, szirup, emulzió, szöszpazm, stb. formájában történő Mteretését. A szájon át íőrfeoő alkalmazásra szolgáló gyógyászati készhmények elöállttate szilárd segédanyaggal, adott esetben a kelelkezó keverék Őrlésével és a granulum-keverék feldolgozásával megfelelő kiegészítő anyagok hozzáadása után, aíhenny tben szükséges, tabletta- vagy drazsémag előállításához, A megfelelő segédanyapk kiernelfen kitöltő anyagok, például cukor, beleértve a íaktozt, szacharózt, marmitot vagy szerbitől, eellulózkészíímények, pőldáht feakorieakeményító, bózakeményiiő, nzskeméhyítö, burgonyakeményítő, zselatin, ttagantmézga, iftÄ-eeiiuliÖZi |IÉ«)tÿr<^nïô«lfl^iIul5% náínom* -karboximetilcelMôz és/vagy polivinilgirroltdoa (EVP). Amménylbsn kiváöátós, szétesést segítő aipgőfe hez-záadhaíők, például kemsztkóiöit polivmíkpUTolidon, ugar vagy alginsav vagy sója, például nátHütó-algjnát. Adott esetben az orális feeadasta alkalmas kiszerelési forma kiszerelhető söőldath&amp;n vagy pufferen, például EITTA-fean, a belső savas körülmények semlegesítésére, vagy beadhatók bármilyen hordozó nélkül. A fent leírt komponens vagy komponensek orális beadásra alkalmas adagolási formái kiemelten a táíáÍ-raány szerinti megoldás részét képezik. A komponens vagy komponensek kénuailag módosíthatók úgy, ho|f a: származék szájon történő beadása hatékony legyen. Általánosságban a találmány szerinti megoldás részét képező kémiai módosítás legalább egy csoport magához a komponensmolekulához kapcsolása, ahol a csoport lehetővé teszi (aj jnoleoíizis gátlását;: és (b) a véráramba történő felvételt gyopárból: vagy a bélből, Szintén kívánatos a komponens vagy komponensek általános stabilitásának növelése és: a eirkuiámós idő növelése a testben, Azilyen csoportok közé tartóznak: pöiieíilén-giikoh eóién-glikoi és prs^vfei^ÎÂ' kópoiiráér^ karboxímetii-eeÉtdóz, dextrán, poíiviníi-aikohol, poíivinil-pírroiídon és poíiprolín. Abúehotvskt és Davis..: "Soluble Polimer- -Enzyme Adducts’' in: Enzymes as Drugs, Hocenberg and Roberts, eds,, W.tfey4B«*síáe38?í|.Pesé ^ác,· ΙίίΥ, pp. 367-383; Newinark, és mtmkatársai: 1982, J. Appî. Bioehem. 4:185-189. Egyéb ajkáítóazhaíő poltsterek a polk - 1,3-dioxolán és poli-1,3,ő-tíoxokán. Gyógyászati alkalmazásra a fentieknek megfelelően előnyösek a polietiié n-gíikol csoportok, A komportens (vágy szártnazék) leadásának helye lehet a gyomor, vékonybél (duodenum, jejtmasa, vagy íleum), vagy a vastagbél, A szakember számára hozzáférhetőek olyan kiszerelési formák, amik nem oldíklnak a gyomorhtm, de a duodeoumban vagy a bélben belül máshol leadják afőanyagot, Előnyösen a leadás élkéröli a gyomor környezetének káros hatásait vagy az oHgónákleöíid (vagy szátármzék) prötékeiójával, vagy azáltal, hogy a biológiailag aktív anyagot a gyomron tál, például a bélben adja le. A teljes gyoojömedv-ellenáíióság biztosításához elengedhetetlen egy, legalább pH 5,Ö-ig hapeftneábllls bevonat. Az enteralis bevonatként leggyakrabban alkalmazott inert összetevőkre példa a céSnlóz-acetát-tóthéííi-tát (GAT), hidroxipropilmetííeelíuíöz-ífaiát (HBh#CP), 1-lPMCP SÖ, llPlviCp 55, poiívíníí-aceiát-galat (ÉVÁÉ}, Eudragit L3ÖD, Aqoateríe, eelMOz-acetát-Mlát (GAP), Eudragit 1,, Gudrtígit S, és Shellac. Ezek a bevonatok kevert filmként is alkalmazhatók. A Mdettákon alkamazbató olyan bevonat, vagy bevonatok ; keveréké is, amelyek nem a pmmoroedv elleni védekezést szolgálják. Ezek közé tartózhatnak a eukorbe vonatok vagy a tabletta leöyéiését köärnyitö ivottatok. Száraz tempcutikom, azaz por bejuttatására szolgáló feipszulik álibátnak kemésry héjból (például zselatin), folyékony formák esetén puha zséíaiphéj alkalmazható. A kapszulák héjának ahyáp lehet: vastag keményítő vagy ep:éb ébetó papír. Pílula, szopogató tabletta, olvasztott tablettái, vágy tableítótfítátóf ésefét* nedves tömörítő technológiák alkalinazhatők. A íerapeotífcnm a készimőoybe mintegy 1 mm részeeskemérefS granulum vagy pellet; tóppijn őöötn multlreszecskekéní Is jelen lehet. Az anyag kapszalakéot történő beadásra szolgáló kiszerelési formája leltet pót;, enyhén összenyomott dugó vagy akárísbletía. A terajjeutíkum elMlltthátó kompresszióval.
Alkalmazhatók szmezőmfyagpk és ízesítöanyagok. Például tórmuláíhafjufe (például lípöszómaként vagy mikrogöínb enkagszüiáeióval) m oligonukieotidet (vagy szápuazékát), amely ezután ehető termékbe, például színezéket és ízeskőahyágokát íaiSsdma^ hűtött halba kerülhet, A terápiás szer MgíthaíA vagy térfogata növelhető inén anyaggal. A Mgttószerek köké tartosmak a szén- hidrátok, különösen a manóit, a-laktóz, vízmentes laktőz. cellulóz, szacharóz, módosított dextrán és keményítő. Bizonyos szervetlen sók Is alMmazluüdkkitöltő anyagként, köztük á Meiünt-üfiósziát, s8apózÍ»'ksÉó»ót; és ítatmon-klorid. bíéhány kecskédéiről íörplombon beszerezhető jttgitôszër: Fast-Fio, Etüdex» STA-Sa 1300, Fmeotnpress és Avicell. &amp; terápiás anyag szilárd adagöiásj formája: tattalthazhat szétesést segítő anyagokat A szétesést segítő anyagok közé tartóznák, a korlátozás szándéka nélkül: keotényítő, például ti kereskedelmi forgalomban kapható keményítő .alapé szétesést elősegitö anyagj :»Z Editet#:.: Alkajtháéhatók a uátritim-kétoéhgftttrgitkolátj Aotbeslti% .Rátriom-karfKtxira«tÍée^fe ttiiräntiiöpekt?b,:: oátnuntealgmát, zselatin, narancshéj, savas k&amp;rboxF tneíiFceifoióz, természetes szivacs és bentonlt A szétesést segítő anyagok másik, formál» az oldhatatlan kation iööeserélő gyanták. A porított göftil alkalmazható szétesést segítő anyagként ós kötőanyagként» és közéjük tartoznak az olyas porított gumik. mint az »gar, Karsyä vagy izagakarsí, Az alginsav és nálriumsója szintén alkalmazható szétesést elősegítő szerként. A terápiás szer szilárd tabletta formájában történd egybentartására alkalmazhatók kötőanyagoké és: közéjük tartóknak téérttészeies anyagok, példáid álcáéi», íragakam, keményítő és zselatin. Egyéb kötőanyagok a ttteil&amp;eiiuiőz IMÉj, az (ütíselMóz (BCj és: a teboxteii-eelhtlöz (CMC). Mind a pölívisíi-fin-ídidon (PVPj, «dpi: (IfPMC) tdkaimazhaíók a terápiás szer gramilélására alkoholos oldatban. A terápiás attyag kiszerelése iartaltnaáhaí töredozésgailó szert, hogy megakadályozna a tap^fást a kiszed lés során. Aíkaíntazhatók kenőanyagok « terápiás anyag és a sajtold fala közötti rétegként» epkköáé: tartozik a korlátozás szándéka nélküli sztérínsay, beleértve pagsézom- és .káiciomsóít, pólítétpfínopftíéü ÍFfTFEk fo!|é> korty paralïm, sövényt olajok és viaszok. Alkalmazhatók folyékony kenőanyagok is, mimt például a nátrium-· riaurii-szisifäi, m&amp;gnézttmMauril-szoliot:, különböző molekmiatötsegö poiietilén-glíkolök, Karböwax óOÜŐ és 6000. iiozzáaditstök esisztató asyagok, iapelyok jayithatják a gyógyszeikáJiplásí tulajdonságait a fbrmuiázás közben, és elősegíthetik az A|sípiüőipsli|ls * ilönáp'Ptóé ködben. A esüsziaíö anyagok közé tartozik a kémé' nyitó, táikum, pirogén sziiíka. és iadtatáii: szílíkóábnaínát:. A terápiás anyag vizes köíöyoáétbe történő öidődását elősegítendő felületaktív anyagot adhatunk hozzá nedvesítő szerkőm, A felületaktív anyagok közé täriözbäiüak az anionos déiérgensek, mint például a náírinm---laurii-szttitai, dio,kti!-náttiittnssz.u:ifoszokcíoát és díófctl-nátriom-szülfdttát. Alkalmazhatók káíionos détergeo-sek, áthelyek közé tartozhatnak a bes«alkó»mm-kinrid: vagy benzetómiutosklorid. Felületaktív attysgkéni a ki-szerelesfefi® álkáioiazteó lehetséges fcmíojms detergénsék listája: laurotnakrogoi 400, po(k»s.il 40 sKíearáí:,: pöitexisíilén hidrogénezett néittttsolaj iö, Sö és óíi, glieerih jnenosztesrát, políszorbát 40, 60, 65 és:Ili szacharóz zsirsav-észíef, roetiieellolóz és fcarhöxtmetii cellulóz. Ezen felületaktív anyagok az olígonttfeiéoid vagy szárraazéMoákklszerelésébeo akár önmagukban, akár különböző arányé keverékkért lehetnek jeled,: A szájón át alkalmazható gyógyászati készítmények közé tartoznak a tölthető zselatmkapszóiőic valamint a zselatinból és iágyítöszerhöl, például giieodnböl vagy szőrökből készült puha, zárt kapszulák, A aárltáfó kap-szülék az aktiv hatóahyagot töiiéntnyaggai, például iaktózzai, kötőanyaggal;, például keményítőkkel és;·vagy ke-nöáüyaggák például iáíkummal vagy mágnéziünt-sátetíráttal, és adott esetben síahilizálöszerrel összekeverve tartálmásthátpk, A pajta kapszolábán az aktív hatóanyag megfelelő: folyadékban, például zsíros Olajban, folyékony paraiíiodan vagy íolyékony polletllés-gllkoibart oldva vagy szttszpendáiva lehet, i lozzáadhattátk továbbá stabilizáló szereket is. Orális beadást^ kiszerelt mikrogőmbökeí Is ál-kaUnazhatank. -A szakterületed a rnikfo“ gyöngyök jeiemése jólömghatórozmb A szájon át íöftébő beadásra szóigálő kiszerelések dérisa mbtdeu «seihen a szájon történő Iftäädäsm megfelelő Ml legyen, A bukkáíls beadásra szolgáló készítmények léhetnek a szokásos módon kiszerelt tablette ’vagy szopogató tabletta.
Beiégz#npft történő beadásra á találmány szériád vegyületék bejuttathatok aeroszol spray formájában, nyomás alatt álló palackból vagy pótfesztóból megfelelő hajtóanyag, példáid dikíöfolfíuormetán, íriklárfiöör-metán, diklórtetráSubretáa, széndlöxiá vagy egyéb megfelelő gáz alkalmazásával Nyomás alatt álM aeroszol esetért az adagolási egység meghmárózható az egységnyi adag bejuttatását biztosító szeleppel. A vegyidet és megísléiő poralap, példáid laktöz vagy keményítő porkeverékét tartalmazd kapszulák és patronok állíthatók éld például zselaíinbői: az ínbalálő készülékben történő alkalmazásra, A találmány szerinti megoldás részét képezi az oligonnkleotidok (vagy származékaik) puimonáhs bejuttatása is, Az oligonukíeptld fvagy származéka) &amp; belégzés soráti jtít el. az emlős tüdejébe és a tüdő epúéllumát átlépve jut a véráramba, Egyéb inhalait molekulákról szóié leírások; AdjeiéSmUftkatámai: 1990, Pharmaceutical Research, 7:565-56¾ Adjel és »munkatársai 19¾¼ international Journal of Rharmaeeutics, 63:135-144 (Seuprolld aeéiÉ): Braquet és mttnkaiäfSäi: 1989, Journal df Cärlfeväseftiar FbartWäcology, 13 fsuppl, 5):143-146 (endtaelin-l); Hubbárd és muiÉ$áesas:: 1989, Annals of Ifttef Médium, VöL 111, pp, 296-212 tab- antitrypsin); Smith és munkatársak 1989, J, Clin. Invest. 84::1 145-:11:46 fa-!-proteinase); Oswela és munkatársai: 1990, "Aérosolization of Próteffis'VBröeeediogs of Sympósiftíft: oft: Respiratory JPrng Delivery 11, Keystone, Colorado, Marók, (rekombitíátts hutftáft növekedési hormon); Déhs és atnrtkatársai: 1988, J. immunoi, 149:3482-2488 fínlérSeroo-g és ídtttör trókfözis faktor alfa) és Platz és mtmfeaíársai: U.S. Patent bio. 5,284,656 fgranuloeita kolónia stmutlálö faktor). CyógySáerek.szisztémás hatásé, pulmonális bejuttatására szolgáló eljárást és fceszlíoíényt ír le Wong és munkatársa) 1995, szeptember 19-én megadott, 5451569 számú egyesült államokbeli szabadálma. A találmány szerinti megöldáslmz tartozik a terápiás termékek; tüdőbe történő bejuttatására szolgáló mechanikus készülékek széles köre, közlőik, a korlátozás szándéka nélkül, a porlasztó egységadagolásó inbalálő készülékek és porinhalálö készülékek, amelyek mindegyike jól Ismert a szakember számára. A kereskedelmi forgalomban kapható a taiálmárty szerinti megoldás magvalósítására alkalmas néhány specifikus példa: liltraveot poriaS/dô» gyártó «ég: Máiimekrodt, Inc., St, Louis, Missouri; az Aeom 11 pMasztó, gyártó cég; Marquest Medical Rrödóéís, Englewood,. Colorado; a Mrittólm egységadágolö inhalatori gyágó cég: <H»xö Inc., Research triangle Park, North Carolina; és a Spmfeaier-porinftaláló, gyártó eég: PÍsöös Cörge, Bedford, Massachusetts.
Valamenayi ilyen készülékhez szükséges m oíigottaMeotíd (vagy skármazóka) disípergáiásáfa alkalmas készítmények alkalmazása. Mlömzőeft minden készítmény specifikus az alkalmazott készülék típusára, és a terápiába« alkalmazható szokásos hlgitószerek, :at|uvártsök ésAagy hordozók méílett magábar! Ibgkilha^a megfelelő hajtóanyag alkalmazását. Azaz, a találmány szerinti megoldás kiterjed a iiposzómák, mikfokapszuSák vagy mik-rogömbök, zárványkomplexek vagy egyéb típusö Srordbzók alkalmazására. Kémiailag módosított oligonokleoti-dök előáliítftatők különböző kisírórelésekben, a kémia! módosiíás típusától vagy az alkalmazóit készüléktől függően.
Az akár jeles, ákár uhráltaiígos pötlásztéváí íöfíéftő alkalmazásra mégfelelő kÍS#féÍésék jellemzően vízben oldott öllgoftufcleótidöt (vagy származékot) tartalmaznak az oldat 1 ml-ében mintegy 0,1-2:5 mg biológiailag aktív olígonukleoíid-kpneemráelóbpi, A kiszerelés tarialmazltat pufiért és egyszerű cukrot (például az oiigonnk- leorkl stsbázációjáfa és m ozmotikus nyomás szábáiyozásárak A porlasztóban alkalotazhatő kiszerelés tartalmazhat lÄeiÄiiv anyngçfi az aeroszol képződése során az ol#t afesnizácl^a okossá öllpáiáileotid^ggregáeló csökkentésére vagy .megakadályozására.
Egységnyi dózis adagolására Szolgáló thhaláeiós koszülékto történő alkalmazásra szolgáié kaszereiések általánosságban mmtimaZMk m oiigonukfeohdot (vagy szárpfozékát) tartalmazó írnom eloszlásó port folölélak-f ív anyag; segítségével hájtóanyaghan SZnszpéhdáíS formában. láápóáöyagkéM bármely erre a célra alkalmazott szokásos anyag alkalmazható,, például klórílnorkarboo, hídróklörtluorkarbon. hidroiluorkarbon, vagy hidro-karbon, beleértve: a fríklórfomrmeíáhi, dikiótdi ílaomtctánt, diklorlétraílaorotanolt és az I,i,l,2~i8trallaófotáat vagy kenfomáelőikat. A megfej: felületaktív anyagok közé tartozik a szorbiíán-trfoieát és a szójaiedtm, Az ölájsay sziliéit; álkai mázható foliletakiv anyagként,
Apönnhaládós készülékből történő; adagolásra szolgáié kiszerelések az oiígoonkieotláot (vagy származékát} tartalmazó fűmen; eloszlású: száraz port tartalmaznák, és íartaininzhstnak tömegnövelő szert, mist a laktéz, szerbit, szacharóz v%y mminít, olyan memtyífogben, arnei^ elősegíti a pornak az eszközábeí történő adagolását, példái! a készítmény tömegére vetítve :5:ö-9ö%-ban. Az ollgonukleotid (vagy származéka) igen eíényösen szmn-esés alapban áilllandó elő, kevesebb mint lí) mm (vagy mikron}, Igen előnyösen 0,5-5 mm átlagos szemesemé-rebel, a disztális tüdőbe történő leghatékonyabb bejuttatás céljából. A találmány szerinti gyógyászati készítmény nazális bejuttatása szintén a találmány szerinti megoldás re-szét képezi. A nazális bejuttatás lehetővé teszi a találmány szerinti gyógyászati készömÉry belépését a véráramba a terápiás dózis orrba történd beadását követően azonnal, anélkül, hogy a termék lerákódna a tüdőbe®, A nazális bejuttatásra alkalmas kiszerelési fonnák közé tartoznak a dextránt vagy cíklodextránt tartalmazók. A nazális beadásra alkalmas eszköz egy kis, kémény fálaek, amelyhez adágölöszelepes szóróié} csatlakom zik. Egy megvalósítás! mód szerint az adagolt dózist a tdáimány: szerinti gyógyászati fcészítmÉfy Öldáíinak megbatározott térfogatú kamrába vezetésével állítjuk elő, ahol a kamra olyan kialakítású réssel rendelkezik, amely alkalmas arra, hogy amennyiben egy folyadékot a kamrában összenyormmk, sprayt képezve, aeroszol kiszerelési formât képezzen és poriasszon. Egy adott megvalósítást mód szerint a kamra dugattyú elrendezés. A kereskedelmi forgalomba® fezerezhetők ilyen készülékek. Más esetekben összenyomható műanyag palackot alkalmazunk olyan kiaíafcMső réssel vagy nyílással, amely amennyiben a palackot összenyomjuk, spray képzősével porlasztja az aeroszol; kiszerelést formát. A nyílás szokásosan a palack tetején található, és a palack teteje Almiéiban elkeskenyedik, hogy' részben beilleszkedjen az OApmtba áz áeöroszol kiszerelési fonna hatékony tkódása érdekében. Előnyösen á nazális mhaláclős készülék az aeroszol kiszerelési forma egységnyi mennyiséit biztosítja m egységnyi dózrsógyógyszer beadása érdekében,
Amennylhett szisztémás beadás kívánatos, az rmmnnstímuiáns oií^mukleotidok kiszerelhetők Injekció-ként paréoteráiis beadásra alkaimás formában, például hy^imfonl; vagy folyamatos infúzióként. Az injekciós kiszefoiésí forma jelenthet egységdózís-ktszereiést, például papulát, vagy több dózist tartalmazó tárolót, hozzáadott tmlosítőszerrel. A készfonénvék kíszerefoetőfc olajos vagy vizes vívöanyagban, szuszpenziö, oldat vagy enmlzió foraaájáhan, és tartalmazhatnak fersnűláláshoz szükséges anyagokat például szuszpendáiő, stabilizáló és/vagy diszpergáió szereket. A prertíeráiís beadásra aíkataas gyógyászati; kiszerelési formák közé tartozik a hatóanyagok vizoldható formájának vizes oldata. Továbbá, a hatóanyagok szuszpenziői megfelelő olajos iiyehcíó-szuszpenztőfcőní is elŐáMífeatök, A lipeflï oldószerek vagy yivéanyagők közé tartoznak a zsíros $aJsÉ* pétilal szezáto- olaj vagy IttttlK zsírsav-észterek, mmS: az etil-oleÉ vagy jripeertdek, vagy liposzómák, A, Vizes ipekció-szuszpenziók tartalmazhatnak a szoszpenZíó viszkozitását növelő anyagokat, mim náíríum-ká rbokhnetil-cel 1 n -Ida, szóróit vagy dextrán, Adóit eseti)«« a szuszpenziö megfelelő sfabiíizálószerekeí Vagy á vegyöleiék öfdő-konyságának növelésével «agy töménységű óidat előállítását lehetővé tévő anyagokat is förtalmásÉIk
Mas «seihen a hatóanyagok megfelelő vivöanyaggal, például steril, pirogénmenles vízzel történő; oldathoz pór íprtnáiában is kiszereiheiőh. :4 vegyíiietek kiszerelhetek rektáiis Vagy vaginalis kéazlönénykéot, például kúpként vagy retenetós beős-iíéskéíit, amelyek például szokásos köp alapot, mint kakaóval vagy egyéb glieeridek íartalmazhateak. A iení leiit kiszerelési fonoákon kívöl a vegyúietek kiszerglsetők depokésztínfenyként is. Az ilyen hosszú hatású kiszerelési fotmák megfelelő polimer vagy hidrafeh anyagokkal (péídátd emulzió el fogadható olajban) vagy ioncserélő gyantákkal alakíthatók ki, vagy lassan oldódó származékként, például lassan oldódó sóként A gyógyászati készítmények tartalmazhatnak megfelelő szilárd vagy géiíázisú hordozókat vágy segédanyagokat Ilyen hordozók vagy segédanyagok a korlátozás szándéka nélkül: Mleittüi-karbonát, kálohm-feszfek különböző enkrok, keményítők, eellulóz származékok, zselatin és polimerek, például poílétilén-giikólöio
Megfelelő folyékony vagy szilárd gyógyászati kiszerelési formák például; vizes oldatok vagy sőöldáföh kihalásához, nikrokapszulázoú, spirál teöá&amp;sa. {,,e?mochaleated,Í isikns- sídtópos amoyrészeeskékre bevonatként felvitt, llpószópábá zárt, nebnlizált, aeroszol, bőrt)« ültethető pelei, vagy bősbe kaeeöiásra szolgáló, éles eszközre saártfott, A gyógyászati: készitmények. közé: tartoznak a gronuio-pok, porok, tabletták, bevonatos tabletták ^PÍkío|káps#lák, kúpok, szbpppk, emulziók, szuszpenziók, krémek, cseppek, vagy a hatóanyagók elhúzódó felszivódását &amp;1i|0|$éú :kdS2fepénÿek* #iM8f$sdN» segédanya-gókat és adalékanyágökaí ésfvagy kisegltöanyagokaí, nini Szétesést elősegítő anyagok, kötőanyagok, bevonó?· anyagok, Ppzadő anyagok, kötőanyagok, Ízesítőszerek, édesítik és oldószerek, a feni leírtaknak megfelelően szokásosan alkaltnazunk. A gyógyászati készítmények alkalmasak különböző győgyszefszátltíé rendszerben történő alkalmazásra, A gyógyszer szállítás módszereinek rövid iósszetóglalásért lásd: Langer, Seience 249:1527--1533,1991), mely hivatkozás útján a kianítás részét képezi A Cpö mnnunstimuláns otigonnkleotidok és adott esetben egyéb terápiás szerek és/vagy antigének beadhatók pér£e (tisztán) vagy gyógyászatilag elfogadható só alakjában. Amennyiben gyógyszerben aitálmazzuk, a sóoák gyögyászatilag elfogadhatónak keli lennie, de nem gyógyászati: sók aikahnazhatók belőlük gyógyászatilag: elfegadbpö :SÓ elöáifítósái-a. Az ilyen sók közé taiiozipk, á korlátozás szándéka nélkül, a következő savakból éiőólított sók: sósav, kiőrogén-bromidi, kénsav, salétromsav, fóezÉmav, maleinsav, ecetsav, szalfellsav, :p--tóluól-szpfensav, borkősav, ettromsav, rnefen-sztdfensav, hatigysáv., »stow, borostyánkősav* na8áÍio-2-rszüflonsav és bénZokszuilónsav. Ilyén sók előáíkthatók álkáhfeP vagy alkáli-földfém .sójaként például a karboxiisav csoport: nátrium, kálium vágy kálélóm sóiként. A megfelelő poíferek közé tartoznak: éeétsav és só .(1-¾ vegyesük); eiiromsav és sója (1-3 vegyésüó); bőr· sav és sója 10,3-2,3 vegyes?!»); és ioszforsav és sója (Ö,§-2 vegyes%). A m^feíslő tartósítószerek közé tartozik a benzalkó®íun5A:Prtd: (0,803-0,03 vegyes?»); kiórbuíanol (8,3-0,9 vegyesüö); parabének (0:01-0,25 vegyes?») ás íimerosal f,W5|g Vegyesünk A találmány szerinti gyógyászati készítmények CpG immunstimuläns oiigonukleotíd és adott ésefeén antigének és/vagy egyéb terápiás hatóanyagok hatékony mennyiségét tartalmazzák, adott esetben gyógyászatilag elfogadható hmäazMm*. À. gyógyászait lag elfogadható hordozó 'kifejezési egy vagy 'több, kompatíbilis, sziláid vagy folyékony kítöltőanyagot higltószc« vágy kapszulázóanyapt jelent* amely alkalmas embernek vagy egy vb gerinces állatnak történő 'beadásra, Á hordozó kifejezés szerves vagy sxezvéílsrv, természetes vagy srintetikas összetevőt jelent, amellyel a hatóanyagot kombináljak az alkalmazás elősegítése érdekében. A gyógyászati ké-SKÍitítéóyék összetevői ÖsszekeverhetÖk a találniány szerinti vegyületekkeí és egymással oly módón, begy béé jön létre a kívánt gyógyászati hatékonyságot lényegében károsító imerákeió. .A találmányi a továbbiakban a követkéZö péklákkákszemlébetjak, atsélyok. semmilyen. módon :nem::to* kiüthetek korlátozó jellegűnek .
PÉLDÁK
Anyagok és módszerek OMgeéezoxina kléoíklelk (ÖDNy és reagensek
Valamennyi ÖDbi;-í a Coley Pharmaeeutteaí QtnbB szinicdizáli statfoard szerint, és ellenőrzőit azonosságés tisztaság Utempospifol, és valmnenoyi ÖlTN-ban könnteÖlatatian veS a Línniliís assay-veLfBlöÄiltafcer, Venders, Belghna) mért mtdőíóxte szM C<0JEU/ml). Az ÖöN-ekai steril, endoloíi in-mentes Tris-EDTA-ban (Sigma, Deisenhofen, Németország) szuszpendáltok, és aszeptikus körülmények között iároltak és kezeltük a mikrobiális és endotoxm-szeunyezödés megakadályozása végett. Valamennyi hígítást endoioximméiés Tris-EDTA-vál végeztük, TLR vizsgtlaiöis HLK293 sejteket transzfektáitenk elektroporácsöva!, a megfelelő barnán TLR-t és óxNF~kB~í ueiferáz ri-porter plazmldot expresszáió vektorokkal. A »labil transzfekíánsokat (3 x 104 sejt/lyuk) inkubáltuk jelzett meny-nyiségd ÖDN-dal ló órán keresztül, 3? °C böinérsékíefen, párásítóit inkubátorban.Valamennyi adafoontoi Uípítkátemhae vettük fel. A. sejteket: lizáituk és vizsgáltak » Inclferáz gén aküvMsát (Britekbe kit alkalmazásával: Peikm-Elrner, Zavmtem, BelgsmöT A siimolációs indexeket tsz ODN hozzáadása nélküli közeg riporteren aktivitásának függvényében számítottek.
Az egészséges humán donoroktól származó perifériás vér „boííy eoaf! készítményeket a Düsseldorfs Egyetem (Németország) vérhankjától kaptuk, és a PEKáC-í PieoilTlypaque (SignuO eentrifugáiással tfszsüotiafe. A sejteket pârMfôtt' iukuMtorban 37 °C hőmérsékleten, S térfŐgái% hővel iaaltïvâit human AS sxéfemisál (BlölVhiterker) vagy 10 tömegei hővel ÍOaktiváll: FCS-vel, 2 iomol L-glatamiunál, IÖ0 E/ml pénieilíiSóéi és íOŐggdni streptxíttiteinnei tvalateeonyî Sigma) kiegészített RPMi Íó4ö közegben tenyésztettek.
Otoklnkimatatás és áramlási citometrlás elemzés A PSMCT 5 X 1# sejt/rnl koncemráciöbaít resznszpendáltuk és 9f lyuÉ|i* ;j^$gfipekft femézhez adlak (350 uhlyok). A FBMC-S ÖÖN-dai mkubáhuk, és a tenyészet fefüiüszóját (SN) a j elzett időpontok nián hegyüj-töltök. Amennyiben nem használtuk fel azonnal, m Ä-K hőmérsékleten tároltuk felhasználásig.
Az Ibí-ben lévő eitokinek mennyiségét kereskedelmi forgalomban kapható ellenanyag felhászrtáláááyal (PBL, New Brunswick, Ml, USA) IFN-u kimutatására szolgáló belső fejlesztésű EOSA-vai vagy kimnnex multiplex rendszerrel (Lumlnex Corporation, 12212 Teehooiogy Boulevard, Aiisím, Texas 78727-όί 15) ylzsgaltnk. Állatok A nőstény JitiSîiîSèlÇj); ά C^iïSî Icü- jR.îVÎîî C~-viri<iciüy Cvi^toî vàîiàrôliuîV) 0¾ hdyvzx&amp;k d ft-'Cpky Sbannac«îiîfeai örmíp €smâà- ÂÎM?4fesn, Víaía-m^míyí vm* gál^ot a Cofeÿ jKííníida Állatvédelmi Bizottságának OîegfeSisffet, a Eanadai Állmvédehni Tanács mmataiöja szëflni yá^e>3íük> CpG ODN-ok szénporából vaPmennyíáliaí naiv volt. ;SAh34 támonnodell; nőstény A/Ï egereket (csoportonként IQ) injektáltunk szahkuián f xlö5 SAf/N tzímörséjítei a:%. napom Az állatokat szubkután 1Ö0 pg ÖBP-dai vagy önmagában adott EBÉ-sel kezeltük hetente egyszer, a tumor indukcióját követő 8. napon kezdve. Az állami tiklését és a {«mór térfèpait rnonttoroztófe A tumor méretét (hossz és szélesség) digitális sőniuszos tofóméreével mértül, A tumor térfogatát a követkézé képlettel: számoltak;
Tinnor térfogat ~ (0,4) (ab-2), ahol a ~ nagy átmérő és h ~ kisebb átmérő.
In v&amp;#» vízsgá latok
Az ín vtim vizsgálatokhoz naiv BALB/c egérből szártoázó lépsejíeket (3-5 állatból szármázó készletből) alkalmaztmik. Az lilátokat izóűnráhnal érzéstelenítnek. epikáig diszíokáeiőval feláldoztuk. A lépekéí aszeptikus köiilmények között kivettük, és PBS t (E2% szMvástoafhá szérum albumin (Sigma Chemical Company ) keverékbe helyeztük, Ezután a lépeket immogemzáltok is a iépsejteket 2% normál egér szárammal (Cedariane LáfeórátörieSi Ontario, Canada), penieilínssfeptomfeín oldattal pégsó koncentráció rendre; 1000 ftl és I mgópk Sigma 'Chemical Company), és 5 x W* M b-merkí^tpefeuroW (Sigma Chemical Company) sznpiementàif RPMÎ tó4Ö (í-iíe Technology Grand Island, ΗΎ) szövettenyésztő közegbe helyeztük. B sej t proi ífer á«íős vizsgálatok iKarboxt-fluoreszoeia-dlacetättal, szukelmidii-cszterrs! (CFSE) (fnvitrogsn. Epgene, Oregon, HSA) festett; BALB/c egér iépsejteket (4 x I ö'Vlyuk) inkuháitnnk különböző koncentrációjú ODM-dal párásított, $% CCb itdtobátorfean 3? -C höinéísékfeien, 5 napig. A sesieket ezután FE-konjogált ta«r-CD19 eífcnanyaggai (BD Pharmingea, :Ssn Diego. €A, USA) fesfetíök a Çp If kinmlatárói és a követő Módi it Software V3.0 (Verity Software House lue,, Topshatn, ME, pSA) L példa; A szerkezet-sktivitás összefüggésének vizsgálata a CpP-mötivamoál Ismen, hogy a ípetiialmimr Cpömiötívumpkat; tepalmazó ollgomddeotidek képesek stimulálni az Immunválaszt a f-ss Töll~szsrS receptor (TlJtő) feönaSon keresztül. Átfogó szerkeKm-aktmíás-ósszeíhggés (SÁR ) vizsgálatot végeztönk á CpG motívumon azéri, bogy a TLR9 útvonalat legnagyobb mértékben stimulálni képes öligóöakfeotídokat azonosítsak. Az eredmények azt matatták, bogy guanin helyettesítse hípoxantlnnal és d-tiogaanlnnal hasonló altovitáshöz vezet a MTR9 assay-hen, míg. a helyettesítés pnrinnal, S-ammopurinnal,. S,ő-dlaainoparhmal, S-oxo-ASMihidroguaninnal és 2-deazagoaníonal a líTí,S9-sdmaiáeió Mire csökkenését eredményezte:. Továbbá a Gő~néí és hl4~néí röriént módosítás nem eredményezett stimulálást a hTLR9-t'itvonalon. Ezen megfigyelések olyan SAR-modelihez vezettek, amelyben a gaanin a Hoogsteen felismerő helyen keresztül felismert, mig a citozin a CH-szélnél kötődik a TLR9 receptorhoz (lásd la ábra). Azaz. sem a Poogsfeen felismerő helyen, sem a OftíAzéíen nem volt lehetséges olyan módosítás, amely nem okozta a hTLR9-a!IMtás szignifikáns csökkenését. Egyik, a diónkieotid-motl vumban lévő vizsgált házlsmódoshas sem volt aktívabb, mintá Mödöshatláh CpP-tnetívom, 2, ÖmMhsMs-fermasttmlog hatása Több tímmbázisiSsrnaaaalögot, mini: például 2,4-drfluortokmit (FE) (SE0 IP FIO;3-9), 5rbröm-2·-dezoxíuridlru: (BU) és S^d-2:-dezöxioridint (ili), építettünk be a CpG-motivumon klvil (lásd I. tábiázaí és 4, ábra) a epG-motfvnm :szóMíP^^teié##'-c$opmlok hatásának vizsgálatához. Meglepő módon valameny-nyi vizsgált hrdróiöb títnlnanalóg beépítése a hlLRÖ-síámuláció szokídkinul nagy mértékű fokozódásához veze- tett A TLE9-stimuláep növekedése MfejS&amp;É; vo|, » módosítás 5’ îApaft volt a ÇpÇI- motívumhoz képest A CpG-motfvum 5’ és 1' irányú dupla szubsztitúciója 5-jódpacillat (Ili): eredményezte a teszteltek közöli a legerősebb stimulációt. Ezzel szemben gumón és 3ifPÉÍtoorl»{wó®tí'.a
CpC-motívumnal mindkét vezetett,
Hidrofób T-anaiogok beépítése az IEN»áiia iudiíkció erős fokozásához ís vezéíetí kcmán PBMC-I>e8, Váratlanul azt találtak, hogy egy IFN-aíía ttulukáiása szempontjából gyakorlatilag InakBv (3Mi (SEQ ÍD MD: i) PddösiiÄ 5"hrömuridíhneí: és 5dódnrÍÉnneÍ kiemelten fokozott TE&amp;9Ämlsk>i<S és íEbbalía taáikctóú ered» ményezett. Azon Gpö ODN-ofc esetén, amelyek nem tartalmazzák ezen módosításokat, általában fordított korreláció van a TLR9 és IFN-a!ia iodaketója között, L táblázat: st CpG-fRotívumhoz közel hsdrofób timinMzis-forraasnalógökat tartalmazó, ntódosítött oligomíkleötklök példái
X példa; a TLR9 aktiválása lipofii bázis-formasmalógükkaí bűvel a CpG-motívamtói 5' irányban lévő bázis fcölönböző tratst lipoftl szubszíítűcktt iiáció szignifikáns emelkedését ofezíák, vizsgáltuk egyéb bázisasalogpk, pint az S-kíór-ipieíí:, 5»ttáfbprpetib macii, fenti, arii és szubsztituált Ml csoportok blXR9-sdmaíáló Mpességét (3, táblázat). A MM ilpoÜ bázispaiógqkkal mpdodfott B osztatyö oilgonukieotidok humán TO^ivà«»|^,Âgà&amp;«'.:a MQ1B Mf);| szerinti B osztályúBI3bi-ot médösítotttík 5-kfór-2‘~dezöZÍ«r)dimt«l(CB), S-bróm-SMIczoxiundlTutsléBBk S-j«d~2-dezosjutidoméi és S^#l*2^demsjöriílijíí5S!j (Eü). hTíJl9^FkB-293 síteket MaiWkmk aJelzett QDN-okkai 0. ábra) 16 óráit keresztül A seylsketeztÄ lkaitok, és a htelferáz-aláMiást meghaíároztA A CU-mm mu (SfcQ 3B ΝΟ:4ί% »módosított (ÉEQ í:ÓiNO:IO> M-mMm&amp;m (SEQ ID fcKfc 13) és Bii-módösitott (sl# m NO:42) oitgonukieotidok mind nagyok TU&amp;^tffadM: aktivitási tmjíartak, mint a koaírol! (SEQ IP HQ:ilJ> Az ôriÉiî Âdôsitâst tartalmazó SEQ ID NO:J Ó aktivitása jelentős mértekben csökketti Így második kisárietfceu az ÍFN-al&amp;-termeídst mértük (5b ábra). Humán PBMC-t íakufeálámk a jéízett ODN-ofckal 24 érán kereszí&amp;k tnít|í siéiülászót EIJSA-vaí teszíeltSk. A HJ-módosított, Bü-módpsdöíl és EU~m»<te$ftbti QBN-ök eredményezték a kontrolihoz képst a legnagyobb ïFN~»!fô növekedj Ezett adatok megmutatják, hogy dií S-szubsztitúciója B osztályú OONpait itpeí a tÎÂaktivhâsi és az llN^aiÉdenríéiést.
Az BU-módositás TtföraQiyáólÖm gyákörelkbatásának további yizsgálatáboz a kisárieiot megistítéteiíOk a Cpü-tői 5'-;rányban (SEQ ID 710:42), .V-irányban (SEQ ID NÖ:29), és 51- és Bárányban (SEQ ID NO 30) BU-táidá&amp;Msi; tartalmazd A SEQ 10 HOs 42 és 3Ö szekvetmía TLE9-akb válása szignifikáns növekedést matatott a médosltatíao SEQ P NO; I és :módnsítaiía% B-osztályá SEQ 1D NO: 37 OBM-boz képest (6. ábta). 2. táblázat: Lipofil bázisanaiég szubsztltádókkal módosított oligono tdeotidnk példái
&amp; példa : Â, B, C, P és T-osztályd n»pn«kf«öfidö!k SipoEl SZabsztltáeiÓI 4 üpotMbázis-analógokkal törtasKl sztibszíltóetá:kÜlótibözÖ: BBN-osziályokrtt gyakorolt hatásának vizsgálatához A-osztályba, B-oszíályha, C-osztályha, Főosztályba és Oosziáiyha tartózd oligomtkleoiMokat módosítottunk. A 3. táblázatban ezen oligomAieotidok néhány példáiét mulatjhk be. % táblázat:; A, B, C, F és T osztályé* JB-mődösBoiföiigöEukleottdök
A.ο 1 IgotnuMeolidök temáw TLR9-afetiváIásásíak vipgálatáboz SiläQ ffî KO:à'? á-jód^kdmjxsaridinad módosított, B^ösaíályá sxámíaaéksíoak TLR9~akdváks képesság^k »iiisgáRiiik iucifer&amp;r. assaj&amp;hsa {iásd agyagok: &amp; imádssetdí). Valamennyi módosított, Brosïïîâiyü OÍigeaöklsotíd szignifikánsan iiövekedetf TBR9-aklM!M matatod a mödösitatias SBQ1D Nô:37~feeæ képest (?. ábra)·,. A módosított, Aáosztáíyb oligenakleotidok humán TLRS-atóísátósára gyateolt halasának vizsgálatához a $BQ ID NO:43 S^t^-S^demxiuridia-modosRoti, A-ösgíályá: $3#itta&amp;5kämäk TLR9-ét akbv<pó képessegét vizsgáitok p 5, ábrás bemutató?;. kcifek assay-¾¾ (8a ábra) ès PBMC assay-ben (Sb ábra), Amennyiben a KÄSÄ S CpG-moíivumkt! S'-irányfean iídyezkedsít él. a T LR9.$ífeiálÉÉ· nôvÂiêà# aid á |ögőrötő|ssebb siimuiàdôî a CpG-raotf vámtól 5'- és á'-íránybao c4he3ye:díedík dopla 5-jodoradi OiJ) módosítás A módosított, C-osztályö olgonukleotidok hpnán hatásának vizsgáltához a SEQ ID MÖ:46, SIQ iö MÖ:44 és 45 CmszDiyö számmzékaioak TLR§-e? aktiváló képességét vizsgáltuk. Egyidejűleg teszteitak az A-oszíályú SEQ ID N0.43 (módosíimlao) és SEQ ID NO:35 és 36 szekvenciákat. Amint a« a 9. ábra mutatja, valamennyi módosítóit, SEQ ÎD NO:35, 36, 44, és 45 ODN fokozott TLR9~ak?ivá1ást mutatott a luciieráz; assay-ben a módosítatlan · és C osztályhoz képest, A Pö~ dositott, FmsAályá óligomÉísotídök humán TI >R9~aktívátására gyakorolt hatásának vizsgálatához a SEQ ID |ÎO;40S«|i^iàfe^Wd^8Â!à8e^ Emsztályá származékainak TLR9-et aktiváló képességét vizsgáltuk fuelíeráz ássay-hen. Amink azt a íf). álra mutatja, a módosított SEQ ID NO: 31-33 ÖDN-ok a módosítatlan QDN-okhoz képest a TLR9 tokozott aktiválását mutatták. A módosított, T-osztályu öilgosukleotidok hmaán TLRS-aktiválására gyakorolt hatásának viksgáiáptdz s SEQ ID ND:52 5^óá-2,-dezim)mádlmmótfesdóh, Tmsztalyd származékapák TLRÍMt aktiváló képességét vizsgáltuk. Amint azt a 11. ábra tnuíafa, á módösiteö SEQ IPNÖ: 4?~5ö ÖDN-ok a módosítatlan, T-osztályú O0N-hoz képest a TLR9 fokozott aktiválását mutatták a luciíeráz assay-ben. Az midi« származék SEQ ÍD NO:5I TLR9 csökkend: mértékű aktiválását matatta.
Amint az? a fenti példák szemléltetik, a CpGmmtívumtól S’-írányban elhelyezkedő iípofil T-amdog-s&amp;thsztiMeió; yalátpenttyi osztáiyfeau a fokozódását eredményezi, és azJENpl&amp;vtmíoeíés képességénék Rikózódásáí eredményezte. 5, példa: A TLR9 szimulálása rl>vid, módositoti oligonakleotidokkal
Mivel a 2Ô pátadd hosszúságii, módosított €pö QDN-ok szokatlan aftmitást mutattak, a TLR9-aktiválás irányában,, viipgglfeäk a nagyon rövid €pö ÖDN-ofc TLR9-ef aktiváló képességét. A nagyon rövid oligouakleotidok igen előnyösek lennének kezelésen történő alkalmazásra a hosszabb oligömMemidokhöz képest, mivel &amp; aejtek könnyebben veszik fel őket, valamint DÖTAP alkalmazása nélkül valószínűleg könnyebb ölet formuláim, Három rövid CpG ÖIW· („sftórtméreket") vizsgálfptk (3. táblázat): egy ó-mer CpQ^ttvöm besamen (SEQ ii> NO:38>, a hexamer ó'JU-módositását (SEQ ID NO:39), és a hexamer 5‘3' JU-módosítását (SEQ ID NÖ:4G) (4. táblázat),A shmtnpmk aktivitását hjeileráz vizsgálatban a módosítathp, B-osztályú SEQ M> Amist az a (2, ábrán iáiható, a módósimtt shotthierek, különö sen a SEQ IQ NQ:4Ö alkabnazása javított immunterápiás gyógyszerként nagy lehetőségeket kínál. 4. táblázat; Módosított rövid oiigonakleotiáok
Ói példa: A TURÖMjtvoual aktiválása Pddpsíloíí oilgoaufcleotMokfcal ín vim A találmány szerími pMpsftEát ODN m wm baÂonysâgânak meghatározásához lipóll 'páhalógokát ítaMmazé ÖDN-ofcaí teszteltünk Izolált egér fépssjtekbem BALB/e és módosiiott, B-
osztályú (SEQ ÎD NO: 13), módosítatlan, B-osztályó {SEQ ID NO:37) és nem-CpG ODN-daS (SEQ ID NO:26) infenbálmk <5, táblázat), A tenyésztőt fclülúsxéját 6 óra múlva (TNF-aífá) vagy 24 óra múlva {!L~ó,IL-íO, ÍL-12) begyípőitak, és &amp; citokmdúúicéntttciót EEISA-Vál Amint az: a ö. ábrán látható, a módosított, SEQ 1D NO: 13 szekvenciával való inkúbálás άΦΜ módo&amp;sövéít« valamennyi tesztelt diókra szmfpt
Teszteltük az OON-ok B sejt pmiiferàckpt feéMÏS képességét iépsejiekbem OHM festett, BALSm egérből Ä-ihazd Íéps#teket (4x105 lyuk} mkubáítirnfc a jelzett ODN 0,001, 0,01,0,1,0*3., i„3:Vägy I0pg/ml~ évéi (fA, ábra). M órával az mktíbálás mán &amp; sejteket £1M3 sejíidszlót marksrre (estettük, és a B sejtek proliferáeióíáí F&amp;OS-ot követő ModFst Software-es elemzéssel meghatároztuk. Amint az a 14., ábrán látható, a módosított,: Äj 1D NO: 13 szekvenciával mióíttkobálás a i seftsk pröbfoíúeiéj&amp;íak jelentiB fokozódását eredményezte.. A növekedés még alacsony CAlN-koncentrációk mellett is kifejezett veit. A módosított ÖDN-ok in vívó Imtáslnak méréshez BABBTc egereket {5/esoporí} se. l^ktáftlmk 10,50 vagy lööpg SEQ; p NÖ; 1.3, szekvenciával vagy pOpg SEQ ID NÖ:37 szekvenciával, lüüpi se, teljés tétíégat-bast. A fcomrdilesoport löögl PBS-t kapott önípagafeast. Az állatoktól kárüfális punkcióval vért vettünk az tájék-elő titán I 6t|ysE|TOfÄj y^' 3 A plaztnamimákaí: ELI SA-vak TNF-alfára (ISaibra) és ÍP10-re (15 b »# vls^gitök, A BALBA: egerek injektálása a módosított, SEQ ID NO: 13 szekvenciával magasabb TNF-aífe és IP-10 termelést eredményezett, mint a nem múfeltott SBQ ÍD NÖ:37 szekvencia, bizonyítva, hogy a találmány szerinti, iipo® bázis-fomtaanalögpl asdfestáimáB ÖDN ?» vmo nagyobb imnutnstimwlálást eredményez, mint a módosítatlan immanstimidánsÜDN, 5, táblázat; m vívó tesz te lí oíigon u kieoi ide k
7. példa: További módosításokat tartalmazó ölige«ukleotídok
Elpoíií bázisánalőgokaf tartalmazó ÖDN-ok TLBÚAoediáka NF-kB-álBIkitást indukáló képességét; teszteltük: laciferáz vizsgálatban (lásd anyagok és módszerek). A további módosításokat tartalntszó OPN-ok aktivitását a íó-23, ábrán mutatjuk be (lásd ő. táblázat).
Egyéb bázisanalógok aktivitásának teszteléséhez a bmbBbbenzimidazel-módpsíteít (őNB). SEQ ID NO: 178 ODN-oí és a: módosítatlan SEQ ID NÖ: í szülószekvenciáí hasonlitotmk Össze, Amint a 12. ábrás látható, a SFQ ID NO: 178 a módosítatlan szÜíöszekyeneiávai összehasonlítható mértékben volt képes aktiválni a Tl,:R9-medíálta NF-áfSA· Ezüfán az $;-Í|!-bróö}vMÍ)-uridínne| lóódosiíotí ÖDN^okiSEQ IQ NO: i 53-154) aktivi-tását básopllMtak össze a módosítatlan SEQ 1D NQ:1 'S^^kyettpäg aktibÄdval, Amint a 17, ábrán látható, mindkét módosított ÖDN aktlváhb volt a vizsgálatban, mint a szölószekveoela, Ezótán a szSlöszekvescia (SEQ ID NO: i ) timi«)e helyett S-prohni-dP szabsztíiöeióí tarlaiiaazé feâ B-ös^íál^ ÖDN (SEQ IÏ) NO: H 6 és l W) aktivitását vizsgáitok, Amint a 21. ábrán látható, mindkét «MÜ WàÉisa öasäfchasonlithato mértékű voit a szűlöszekvenels aktivitásával. A módosítást a CG dinnkisMidtóí SNíányhaa tartalmaié NBQ ID NO: 116 szekvencia aktivitása kissé javult a szüiöszekvene iához képest.
Egy második típosá módosítás JO-mödóslisit OOM-ra gyakorolt htsíáSáaak vizsgálatához 2'Ö-niáííl· goansizlaokatápíisítilhklOonédösitott ODN-ha. A 2í-ö-meíiiguanazisv''Jü ÖDN SEQ ID NO: 11 1-Ü3 aktivitását hasonlítottak össze a szöíőszekvencía, SEQ ID NO: l,ésa JU-mödosüolt SEQ ID NO: 13 szekvencia aktivitásával. Amist a IS. ábrán látható, valamennyi JU-tnódosüoü ODN aktívabb volt, mint a szülő OÖN. A 2'0~ -meíilgnaaozm módosítást a CG dinukleotidtól 3-irányban tartalmazó ODN-ok (ÊEQ IP M0:112-1I31 kissé aktívabbak voltak, mim a 2’0-metilgnanozin módosítást a CG d&amp;ükleptidtól ó-hányban hatalmazó QQN (§10 II) NO: 1 í 1} vagy a csak JU-módosításí tartalmazó ODN (SEQ IP NO:!3).
Ezótán a JQ-módosiíöík elágazó ÖDN-ok (SEQ ÍP NQ:66, '$%. IS)!, ós 1Ô2) ás a SEQ IP NÖ:1 szerinti szekvencia aktivitását hassnlfíöttdk össze, Amint az a ÎS, ábrán látható, a vizsgálatban a két hozzáférhető 5'-vé-get íartáimazó elágazó ÖON-ók ugyanolyan aktivak vagy aktívabbak volták, mint a módosítatlan SEQ IP NO:l sáettbíl SKékveneiá:, A trletilénglikei-fosziát távközt tartalmazó SEQ ffiKOill és 102 aktívabb volt, mint &amp; 3!-*D-mNÍ3d3 íávközt tartalmazó SEQ ID Nö:96 és 97.
Ezután egy rövid, módos italian, S-oszíályó ÖDN (SEQ ID NÖ::3S) és: egy lipofil, szabsrtiínáit mikleötid* analógot és ipoöl, 3-címkét tartalmazó, azonos szekvenciáid ODN (SEQ ID dsszSrMinéketíöí előállítóink DOTAP-pal és DOTAB nélkül, Amint az a 2Ö> abr^ látható, a &amp;NmédosítáS és a lipöfíi címke hozzáadása a DOTAP imzzáadásáhöz hasonlóan az ODNáktivMsát»
Ezután a iipolíl, saubszíáuált intkieoiid-tmaiögpü kívöl második nsÄetid-anätoget is tartalmazó, B-psZ-táiyö ODN (SEQ 1D NO: 138, 7-deaza~dÖ; SEQ IP NO:t39, mozin;. SEQ ID t*Öi|4% £*«!$£$ -ÄvMs# hásoniitottuk össze a szlilöszekveociáévai (SEQ ÍD NON) és.azîœpaosszekveM&amp;Jíkszabsztö ipáit nukleotid-analógot tartalmazó szekvenciával (SEQ IP NO: 13). Amint az a 22, ábrán látható, valamennyi módosított ODN nagyobb aktivitást mutatott a vizsgálatban, mint a szülő-ÖDN.
Ezután lipofíl, szubsztiíuáit oukleötid-anaiógöt tartalmazó T-osztáiyü ÖPN (SEQ 1D NO: 132-134) aktivitását liasonlítoítök össze: ismerten inmnmstitimláns C-osztáiyó ODN-évaí (SEQ ID NO: IDS). Amint az a 23. ábrán láihatö, vaiatnettítyi módosított ÖDN sokkal nagyobb aktivitást matatott a vizsgálatban, mint a módnsitat-laa, C-osztáiyó ODN . ó, táblázat; 6, táblázni: Lipoíll mödösftótt oligonnkleotldok további módosításokkal
&amp; példa: Módosított, P-oszíályá ollgomikieotidok aktivitása liipoil btósanalógofcat isrialmazéi; P-osztályú CíD^-e^ itïc^râ^vizsgâlaîîal méri, 7Elt9~eh keresstOl a NFAS-dtvoasktí aktiváló képessegét Utfik. Aiipöi% szsl^i^áS F-osxtályö ÖDN (SEQ ID NO:58-6h aki I vitását ö-osztályá. pozitív kontrollal (SEQ !D NO:5S>. és módosítatlan, P-rosziályó <i>ÖN-íla1 (SEQ 1D HCS:57> hasonlítottuk Össze. Amint m a M. ábrán íá&amp;afe&amp;. tMii módosított, P^osziáSyö ODH BAxszBít 7IyR9~sitmmiáeíót matatott a koatrollokihoK késest A 24a ábra a JO-módositott, P~ osztályú QPM-«í, a 24trábra az. EU-mMosítoit. B-östólya ODBÍ-oí mutaífa fe.
Ezután a módosított, P~os?.?áíyó ODN-okst (SBQ ïD 140:64 (EíEmődösitoíD, 66-67 plï-modositoît) hasonlítotok össze S-ostólyö, pozitív kontrollal (SEQ ID MMS|, C-osztályó QDÖl-dat |SEQM>240:68} és módosítatlan, P-oszíályú ODM-dal (SBQ I© NQ:57), Amint az a 25. ábrán lathato, valamennyi módosított ODN: nagyobb &amp;ká Ti>iS9-stini:öÍ:áeiM matatott, mint a módosítatlan, B-osztáíyu OEM. A SEQ ÍD M):66, amely a €ö dinukleotidhan fosdoditótsr kötést iÄjnaz,. esökktó tótvitást mottód a telesen fösafmotloát SEQ .© NO:67-hez képest.
Ezután a módosított, P-osztáíyó CPN-ok iM-altá sxpós$zk|át indukáló képességét teszteltük. A lipoíi, szülstóöáíi nukleoíid-arialögóí tartalmasé, P-osztályu ÖtM (SEQ ID ÖIQiSÍEő1) ELIS Átvizsgálásai mért akti- vitását feastmlttoitttfe. össze B-esí#!yö, pozitív tenö^Ha! (SEQ IQ NÍM5) és módosfisílan, INosziályó: ÖDN-dai (SEQ 1D M>:57), Amint az a 26. ábrán látható, valamennyi módosított, P-oszíáíyú ODN fokozott IFN-alía-indukclót mutatod A 26a ábra a iúrmödösitott, &amp; 26b ábra m EDsmöáaslIsít,, P-osztályó ODN-ot mulatja be.
Ezután a módositotí, INetsztáíyU QDN SEQ ID NQ: 66-6? (JD-módosltott) ODN EEISA- vat mért IFN-aitáí iodtdcáló képességéi hasonlítottuk össze BHSSzíályih pozitív kontrollal (SEQ ÍD N£3:S5), C--osztályu QQN-dal (SEQ 112 NQ:ó8) és nmdösítatlan, ÍNosztályé ODN-dal (SEQ ID NÖ:57). Amint az a 27. ábrán látható, a niédösífoit, P-osztályó ODN IFN-aÄ indukáló képessege erősödőt. Amist a 24 . ábrán látható, la $EQ U)N$ >:6ő a SEQ ID NÖ:67-4ísz képest esőkként aktivitást mutatót.
Ezután d módosított, F-osKíályu ÖÖN-ök ÍL-6^ot isdiáíSló képessegét teszteltük humán PBMC-ben. Há-rom donorból származó ÍIBMC4 taktbákunk a jelzet lourceatrfei^d QDM-da! 24 órán kereszti!, amit a feiÜ* ászó lL«6-ra történő lumlnex 2S-plex elemzése követett, A Utedoteiott, P osztályt! oílgomddeotídok (SEQ ID NÖ:5S, ŐŐ-62, 28a ábra) aktivitását módosítatlan, B-oszíályú ODN-dal (SEQ JD NO:55> és tnódosüatían, C-osztályú QÖN-da! (SEQ IQ NQ;S4), negativ kontrol! QDM-dái (SEQ ÍD NO:S3) és módosítatlan, P-osztályú ODN-dal (SEQ © N0.56) hasonlítottuk össze. A .IH-tnódositott QDN-ök (SEQ 1D NO: 58, 60-6í és 67) IL-6 kissé nagyobb aktiválását mutatták, ouat az EtJ-mÖdösittnt OI5N^k:(SEQiD NO:62 és )Maménnyi mötto-sitoit ODN íbkőzou aktiyitást umn^ a módosltatiarí ODN-htxz képest.
Ezután: módosított, P-ósziáíyú OEM (SEQ ÏD NQ:58, 60-62, 29a ábra) (SEQ !D NO;64 és 67,2<>b ábra) aktivitását hasonlítottak össze módosítetias, B-osztá!yú ODN (SEQ ID MO:55), modositadan, O-osztályi OÖM (lEQ ÍD NO:54g negatív fcoalroi ODN (SEQ !D NÖ:S3), módosítatlan, P-osztályó QDN (SEQ TU 240:56), LPS, R-848, SEB és poí!(íj:ií?j ODN aktivitásával. Három donorból származó, CPSB-jeiöit PfíMC-ei íttkuhál-tttnk ODN-dal 5 napig, majd CDlŐ-clIenanyaggal: iestettük. Meghatároztuk a csökkent CESE-tostodésir B-sejtek százalékát. A B-osztályú ODN-dal való kezelés eredményezte az osztódás utáni legmagasabb 8 sep százalékot. A JD-módőSííött QDNrda! való: kezelés magasabb ÍB sejt százalékot eredményezett, mint az Eö-módosltott ODN-daí való kezelés. A módosított, P osztályú ODN-ok in viva 'hatásának meghatározásához BALB/e egereket (5/csoport) injektáltunk se. különböző ODN-dózisokkai. Az állatoktól az Injektálást 3 órával követőéit vért vettünk, és a plazmát EUSA-val A módosított, P osztályú oligonukleotidok (SEQ ID NO:58, 60-62, 64, és 67) aktivitását B osztályá negativ kontroliéval (SEQ 1D >10:55) és negatív kontrollal (SEQ ÍD NO:26) hasonlítottuk össze. Amim »30. ábrán látható, a várakozásnak megfetetOen a SEQ NO:58, 00. és őt szerinti, lU-mó-doxított OöN-da! való kezelés aem lndiÉélta túlzottan az:; egér IFN-alfát,
Ezután a módositotí., P-osztályó O.DN-ok SAI/N üimotpodelfoeu a tutnor térfogatát csökkente képességét értékeltük. Nőstény A(J egereket (csoportonként lő) so. iniekíáítask Sxldó Sai/N imxtpt-seittei a 0. napon:. Az egereket 35pg (3la ábra) vagy íöögg (31h ábra) P-osztályó, lípoEI, szubsztíörált tttAelötidaaalógöt tartalmazó ÖDN-dai (SEQ ID NO:6Ö, 64 és 67), módosítatlan G-osztályU ODN-dak médositatlaa B-osztályá ODN-dal (SEQ ID NQilS) vagy PÖS-se! önmagában kezeltük! Az QDN-ot heti egyszek se> ádtak a tumórindukciót követő 8. hápöl kezdve, -M állatok túlélését és a tumortérfóptot monitorozmfc. Amint az a 3la ábrán látható, a mó-dosított P-oszialyCä ODN-dal történ; alacsony dózisú kezelés mutatta a tumóríéríogat tegaagyöbb csökkenését, aittí aiapjíán lélélelezbeíó, hogy ez az ODN hatékótty lehet rák kezelésében. A 31 b ábrán látható, hogy ntaga-sabb áózháían vaiameany i P-oszíályü ODN és a C-oszíáíyá ODN hatékonyan csökkentette a twmortérfógsíoí. 7. íáMázst: MédösítotiF-assöályé öiígMHi&amp;teotidok
A 8. táfeíássat a példáké«! médosSoS ÖÖW-ok összegzés# ramatp fee;
Λ SZÉK VENC1AUSIÂ köteífes szövegrésze im;k (22:3-as· kódok) fordítósa: < 210 > 1 <223> Szintetikus oligonukisofcid <21ö> 2 < 2 23> Szí n t e t i ko s oi 1 gonu k.1 e o t id <21Q> 3 <223> Sz.iutetikus o.l igein; k 2 ént id < 22:; > ahol n j ® leütése 2, 4-di ·: luortoiuoi <210 4 <22i:· Szintetikus ciigonuk1 eoiid <223> aboi h ye i öntése 2:, 4 0:i£iuorfc0luol <210 5 <22 3 > S X i fît s t 1 ky s ol igqnukleot id <223> ahol n jelentése 2, 4~d:Lhluostoluoi <223> ahol π jelentése 2,4-difiuortoluol <210> 6 <22 3> Szintetikus oligocrakleotid. <223> aboi n jelentése 2,4-diiiuortoizKÙ <210> ?
<2 23> Színá e t i kus cinsonuhieat id <223> ahol n jelenkése 2,4-difiyortoluoi <2IG> S <22 3 > S zin t e t i kus οI i gon n ki eot i d <223> ahol n jelentése 2,4-difluortoluol <2I0> § <2 2 3 > St in te t i kas o 1 igonu k 3. e o t: i d <223> ahol n jelentése 2, Odiid.uortoluol < 21o > ie <22 3> Szintetikus oligonukleotid < 223> ahoi, n j e 1 en::éee 5 ~ï>ï;ô:n-·2: aessxô-dezoxiuridin <2 !6> 11 <223> Szintetikus oligonukieotία <223> ahoi. :n jelentése 5-Ό0ει~2 sessxô--sietot:ie3:-:i.d:ln <210> 12 <22 3> S eintet i kus ο 1Igone k ieotid <22 3> ahol n jelentése 5~brőí»~2 -/ess; tô-desοχ i ο ?: i din <22 3> a-hôl n jelentése 5-bróís~2 ve s s z ő ·· de z c x i u r dis <210 13 < 2 2 3> S z .in t e t i k ï: s ο I. i g oh u k le ot 1 d <223> aboi n jelentése 5~jód-2 vessző-dexoxiuridin <210> 14 <2.2 3> 3 s i nt et i tus ol igon akieot J. ci <223> aboi n je : eru.ese 3-jod-2 vessxöOexoxiuridi a <£!(':> 15 <223·> Szintet:.).kas ο 1. i. go nu ki can: id <223> ahol n jelentése S~-j6d-2 vessződezoxi.nridin <22.0 ahol n jelentése S~jód~2 vessz0~desos.iuri.din <2:I0> 1,6 <220 i nteti íoís ol í oonu kl eot 1 d <223> ahol λ jelentése ősiéin. <21Q> 1? <223> Szintetikus oiigonufcieotid <223> ahol n jelentése úriéin <21(î> 18 <223> Szifh.etikus oligonukleotid: <223> ahol a jelentése uridin <223> ahol a jelentése uridin <210> 19 <22 3 > S K l ot: etikus oligonufcieot le <223> ahoi n jelentése 5-jod-2 vesszd-dezoxi urd.din <21D> 26 <223> Sainte!: ikus oligonukleotid <223a ahö1 o jelentése 5-jód-2 vesszö-dszoxiuridin <210> 21 <.223> Szintetikus oligonukleotid <223> aho 1 o jelentése 3-163-2 eesszd-dezoxíuridin <21θ> 22 <223 > Bz 1 rit:et: i kur; ο 11 gönn k l eotid <223> ahoi a jelentése S~jôd~2 vessző-desoxinriditt: <223> ahol n jelentése S-joé-2 ^essaő-desoxiutridin <2:I0> 23 <22 3> S n Int e 11 kas ο 1 i gone ki eo t lé <223> ahol. n jelentése 5.-jód-2 vesss6—dezox:U:n'idin <223> ahol π jelentése :i~ j6d-2 v e s s a o- d e z o a 1 a r. ;. d : <2:1 ö> 24 <223> Szintetikán oligonukleotid <223> ahol n jelentése 5~jód-2 vessző-dezoxiaridin <223> ahol n jelentése 5~jód-2 ve s s z ő - de xox inxd.d i o <2lö> 25 <223> .Szintetikus ollgonukleotid <210> 26 <223> Szintetikus oligonukleot:id <21§> 27 <223> Szintet:ikus oligonukiaoiid <223.> ahol a jelentése· 5-jőd~2 vesszd-dezoxiuridin < 21 ß > 2 y <223> Szintet i kas olígonukiectid <223> ahol n jelentése 5-jód·-2 vessző-dezoxíuridin <2Ié> 23 <223> Szintetikus eiiaonakleot: iű
<223> ahol π jelentése 5~etíl-2 v«S'S2&amp;“-desdss:iuridi d <21ö> 3G <223> Szintet!>cus ollgonufcLeot:id <22 3> ahol n jelentése 5-etiI~2 vesszö^dezoxiariáin <223:> ahol n jelentése S-etil-2 vesszo-dexoxlu>: 1 dir: <2l9:> 31 <223> Szintetikus oligonukieotíd <223> ahol n jelentése 5-jód--2 vessze··dezoxlu.ridin <21ö> 32 <223> Szintetikus oiigonukleotid <223'· ahol n jelentésé 5-jód-2 vessxő--déEöxiuridin <21G> 33 <223> :S:·:inteti kt!s Oligomikleótid <223> ahol n jelentése 5-jód-2 'v.esszé-de-soai-uridi® <223> ahol n jelentése 5-jód-2 eesszé--de<a<>sí.uxriciiu·. <223> n jelentése A, C, G vagy T <21D> 34 <2:2S:zi:nz etikus oligonukleotlei <223> ahol n jeleütése ö-jód~2 vesszo-dezoxitiridin <2i0> 35 < 22:3 > Bz in fc e t i k>, · s o1i g on ukie ot id <223> ahol n jelentése 5-jód-2. vessző-dezoxiuridin <210> 36 <223 > Szi ntetikus cl egem: ki-sót: in <223> ahol n je Leütése 5-jóé-2 vessző-dezoxinridin <22 3> ahol n jelentése 5~j6d-2 vessző-dezoxlurldio <210> 3? <223> Szinleéikus oi igonuki eotid tngtcgtttt teggtcgtfct t 21 <210 > 38 <223> Szintezikus: oiigönnkleöt id <310> 33 <223> Szintetikus oiigonukleotid <223> ahol n jelentése 5-jód-2· v o s s z 3 ~ d e z o x i a r i d i n <2 !·');> 4Ö <223> SEintetlküs oiigonukleotid <223> ahol n jelentése S-jód-2 eessző-dezoxiúridén <223> ahol u ja i estese 5-- jód-2 yessző-dezoginridin <210> 11 <222> Szintetí kas oligonukleotid <223> ahol n jelentése 5-k!ó.Jc-2 vessző-dszoxluridia <21C<> 42 <225> Szintetikus cOigonakieotid <223> ahol n jelentés® S-et il--2 vessző-dezoxiuridíη <21ö> 43 <223> Szintet!kas oilgonakleotid <2 ;.ö> 11 <223> Sdintsfcíkos oligonnkieorid <223> ahol n jelentése 5-jód--2 vesszd*-dezoxiuridln <223> ahol π jelentése 5~;}6d-2 resszd-dezoxiuridín <223> B jelentése d.· C, G vagy· T <210> 15 <22 3> S z i rît et i ka s α 1 i g o nu k le ot i d <223> ahol n jelentése 5-jód--2 vesxOOiezoxiuridin <22.3> ahol a jelentése 5-iőd--2 vessző-dezoxiu.ridiπ <210 16 <£23> Szí eteti kas oligoiuikleat id <21ö> 17 <22 3> Sziötetikas oligooukleot íd <223> ahol n jelentése 5~jód~2 vesszOdezoxiurídin <2 lö> 18 <223> Szí ni. et i kas oi igonukleok í d <223> ahol n jelentése 5~jód-2 v&amp;sisKŐ-dszox kariéin <223> aho.l n jelentése 5 -j 6d-2 vessső-dezoxlatídir·: <210 12 <223> Stinte ti kas el igenül Lent id <223> ahol n jelentése 5--jód-2 tessaő-dezoxíuridin <210 sfi <223> Szintetikus oiígonakleotid <223> ahol n jelentése 5“jód--2 vessző-dezoxlaridin <21 {» 51 <2 2 3> 2 sla t e t i kus e ligonukleotid <223> adói n jelentése áriéin <210 52 <223> Szintet ikus oligonukieotid < 210 > S3 <22 3:> S z int el í kus; öli genu k Leotid-<210:> 54 <2.2 3> S z i n t é t i. kus öli g o nu k 1 eo t id' <210> 55 <223> Szintetikus oligonukieotid <210> 56 <223> Szintetikus öl igonuk.leofcid <21ö> 5? <223> Szintetikus oligonakieotid <210> 58 <223> Szintetikus oligonukleotid <223> ahol n jelentése 5—;jód-2 ve.88'xő—de.s-öxi«r.3.di'fi <21G> 59 <223> Szintetikus oligonukleotid <223> dói n jelentése· 5- jód-·2 v e s s x o ·· d e x o x n r 1 o i n <223> utol valamennyi internek ieotiddötés foszforét inat kötés
<210 SS <223> Szintetikus oligonukleotid <223> adói n jelentése 5~jód-£ vessző-dezoxiuridín <210 61 <2:215> Szintetikus: oiigoOkieotiö: <223> add n jelentése S~jéd-2 vessző-dexoxiaridín <22:3> adói vaiamennyi irtaernukleot íd-kozés foszforod inát kötés <219> 62 <22:3> Szintetikus· ol igoruikleotid: <223> ahol n jelentése S-étii~2 v e a s z 5 d e x o x 1 u r i d i n <210 63 <223 > Szintetikus oiigonnkleotid: <223> ahol n jelentése 5-stii-'2 vexszö'-dezoxiur: idin <210 64 < 223 > Szintetikus öli gora;ki eot id <223> ahol n jelentése 5-etil-2 véssz-ő-~dexoxlexí diri <210 65 <2 2 3 > 3 z int e t ikus o1i gon aki eot i d <223> ahol valamennyi inxernukleotiddöfcés foszforotíoát kötés <223> add n jelentése 5-eti.i--2 vesszö-dezoxiurídin <210> 66 <2 2 3 > S z i r ΐ el i ku s ο·Ii go nu k 1 eo 11 d <223;> ahol n jsilentése 5-el:í.I~2 vessző-dezoxiuridin <21O 67 <223> Szintetikus oiigonnkleotid <223> adói n jelentése ö-jód-2 vessző-dezoxiurídin o 210 o 68 <2,23> Szintetikus oiigonnkleotid <210 63 <2 2 3 > S xi.nl·: éti kus; öli gon u k1eot i d <21Q> 70 <223> Szintetikus oiigonukieotid <21G> 71 <223> Szintetikus oligenukleotld <21G> 72 <223> Sz int st.ikus o 1 igonuk l aotid <21G> 73 <223> Szí nzet.i kus oligonuklsotid <210> 74
<223> Szintetikus oligonnkleotid <270 7 S <223> Szintetikus- oiígonukleotiá <210> 73 <223> Szintetikus öligon.ukle-otid <210> 77
<223> Szintetikus 01 igonuki estid <223> ahol a jel.entése S-tluor-dd <210> ?S <223> Szinteti kas; cl igenü kLeotid <223> ahol n ;|elöntése S-fioou~dü <2Í0> 79 <223> Szintetikus cl igenük leoti.d <223:> ahol n jelentése 5--tInor-dü <223> ahoi n j elentéee Otioor-dtj <210> 30 <223:> Szintetikus oi igenük leotid <223> ahol n jelentése úridig <223> ahol a jelentése- uridin <270 öl <223.> Szintetikus oligonukleotid
<223> ahol a jelentése OnitroOíenzímidazoX <21Ö> 82 <223> Szintet 1 k.u.% oli§ona-kieotid <223> ahol n jelentése 6 ·· ; ; 7. t ·: o-ten z irai daze i <223n ahol a kötés föszfodiészter kötés <21(0 83 <'223> Szintet i kus ol igene kleotid <223> ahol n jelentésé o-nitra-beíszímidazol •<223> ahol a kötések foszfodiészter kötések. <2 ÍG> Ó <223> Szintetikus oligonukleotid <223> ahoi n ielentése 3~iód~2 sesszö-Oezoxla;;Óin <210.> 85 <22 3 > 3 zi n t e t i ka s ο I i g ο η n k l e o t id <22 3'- ahoi n jelentése S~jód~2 vess zOdesoxiüriáin <223> ahol h jelentése 3~j6d~2 vesszd-dszoxiuríáin <2Ka- 86 < 2 2 3 > Szí n t a 11 ka s o II g one ki e o ti d <223> ahol n jelentése 5~jdd~2 vess zdOezoxiurí din ·= : 2 :i 0 > 8? <223> Szintetikus oligonukleotid <22 3> a tol n jelentése af a., a~tri,f,Iuor--dï <21C> 88 < 2 28 > Szirtié t i ka: g o i lg on uk1e otId <223> ahol n jelentése: a,a,a-trifluor-dT <21 Go 8 8 <223o Szint etikus: oligoírnk-I-aotid <223 > ahol ο jelentése a,asä~tritiuor~d? <2.2 3 > ahol η jelentése a, á , a~trif luor-dl < 2 i û :> S Ö <223.> Szintetikus oligonnkleotid <223> ahol n jelentése h~kiór~2 vessző-dézoxiuridiri <21 Oo 21 <223> Szintetikus cligonnkleotid <223> ahol n jelentése 5--klón-2 ves-sz-ő-ds-zoxiur 1 din < 23. 00 92 <223> Szintetikus oligonukleotid <223> ahol n jelentése .5-klór-2 vessxő-<k5xoxiurid±n <22:3> ahol n jelentése S~ki6r--2 vessző--dezoxiutidin <2:10> 93 <22:3o Szintetikus oligonukleotid <223> ahol n je ; öntése 5·· jód-2 vasszo--detoxiuridí a <21Q:> 34 <22;3> Szintetikus oligonukleotid
<22i> ahol n jelentése 5~jód~2 vessző-dezoxiuridin <210 3S <2 2 3> S zí.n t et:í kus ο Iigonu ki e öt id <223> ahol o jelentése 5·· jód-2 v « s s z ő ··· d e z c x i a r 1 d i 5;. <21öo 96 <223‘> Stitietíkas olígotiuk,!epti.d <2235' ahol fi jelentése 3--jód-2 éessso-dezosiutzldin <223> ahol n jelentése hexaetílengiikol~£osziát <223> ahol n ielentése dtí&amp;iaz.ód <22 3> ahol π jelentése 3 vosszi-O-oxer i i -· rG <210> 97 <2235 Sointe1 itus ο 1igenuk 1 sot id <2235·- n jelentése A, Ci 9 vagy ï <223> o hal π le le ni, és s-: 5- j ód-· 2 veaszo-dexoxiuridío <22 35- ahoi n jelentése nexaoti lengi i tol »őszié i: <223> ahoi ti jelentése duplázót
<22 35' ahol n jelentése 3 vess zö---0---í;;eti 1 -···G <21ö> 33 <2235- Szintetikus ο! igoxn: k.leoí. Ld <223> ahol n jelentésé 3-; 6d~2 vesaxo-dezoxiuridin <210> 99 < 2 2 3 > S z I n te l i hu s cl I y era; 1 so t. 1 d <223> ahol n jelentése S—bï:ôm--2 sessxö-dexox.: ur : dl n <21G > 190 <223> Szintetikus oligonnkleotid <223> ahoi n jelentése 5—jod-2 vessső-dezoxáaxd.din. <215» 101 <223> Sóin;:etikus oligoxinklsotid: <223> ahol n j eieo ·: ése 5-jád~2 neaszö-dezoxiurldin < 2 2 3> a ho I n je 1 en t:é s ¢: he xa et .1.1 én g i. i k a 1 ~ fos z £ át <223> ahol n jelentése daplá2có2 <223 > ahol n je;.! exilé se tr ieki iéx-ql i koi-ioszfát <21ö> 102
<223> Szintetikus oligcuiuií:Ieot.j.d <223 > n jelentése A, C, G '<agy T <223 > ahol n je i en lése 5- jód ~2 vessző--de xoxiuridln <223> ahol n jelentése: hexaetiléngiikel-íősziét <223> ahol n jelentése duplázón <223> ahol n jelentésé tríetiiéiKglikoI-Kosxfát <2105- 103 <2235- Szintetikus oligennkleotid <223> ahol n jelenkése 5~jód~2 eessző-dezoxiuzidin <21 Q> 104 <223> Szintetikus oxigénnélestid <223 > ahol h jelen tése S·· jód··· 2 vessse--dezo.KX nx'id.m <2:1D> 1.Ô.5 <223> Szintetikus oligonukleotid: <223> ahol h jelentése 5—jód™ 2! vessxö-dezosíi ur i d is; <210 > 1.06 <22 3> Szintet 1 kos öl inonükleöttd <223> ahoi o jelentés® 1 ·· jód-2 vessed-dezoziuridln <223> ahoi n jelentése 5-j6d~2 vés éző~4e eo jd <>x.-id S. n <21 On A 07 <2 23'·- S z i ntet i ku s o 1A gor· o k 1 aot i ci <223> a bol n jelentése 3- jód-2 eesszö-dezoxiuridin <223> ahol. n jelentése :S-jôd--2 nessza-dexoxiuridin <210> 163 <223> Szintetikus oligonukleotid <223> ahol n jelentése 5--jéd~2 vessző-dexoxíuridín <223> éhol n jelentése I··· jôd--2 vessző-dezoxliaridin <210> 109 <223> Szintetikus eïi.górtuklentid: <223> ahol n jelentése 5·-jód-2 v e s a z ô ~ ci e e o x i · :i r i a i η <210 > 110 <22 3 > S 2 int: et i tes ol too: sut i eo t. i d <223> ahol n jelentése t··jód-2 vesszd-dexoninridin <223s ahol n jelentése l-deaza-dG < 210> 111. <2 2 3> Bz i.u t e t i kus o i i gonnk 1 e st it! <223> ahol n jelentése 3 oesszó-C-ner. iI-rG <223> ahol n -jelentése 5—jód-2 vesszd-deXoxíuridin <210> 112 < 223> Szintet I kas oilgenusleotld <223> ahol η jelentése S-jód-2 vessző-dexoxíuridin <223> ahol n jelentése 3 ciesazâ-G-raetii-rG <21G> 113 <223> Szinteti kas: o! igenük ieotid
<223> ahol n jelentése 3 vessao-O-PU?':i j.~ rG <223> ahol n jelentése 5··jód-2 vessxo~de zoziuradln
<223> ahoi n jelentése 3 vesszô-O-meti I-rG <2 A 0:> 114 <223> Szintetikus ol igonok : eotid <223> ahol n, jelentése S-jéd-2 vesszo-dezoxiurid.in <223> ahoi. n jelentése S~jéd"2 vesszG-dezoxiuridln <2.10> lis <223> Szintét!kns oiiqcînaklecttid <223> ahol n jelentése 3·--jód"2 vessző-dez-oxiuridin <223> ahol gaj.amennyi internukieotid-kdfcés fosztorotiorat intemaklsotid-kötés <223> ahol n jelentése 5-j6d--2 vessző-4eto-siaridin <2in> m <22:3> S Ointid.ikis s oligonukleotid <223> ahol a jelentésé S-proinii-dij <210> 117 <22 3> Szintet ikus oligonukleot id <223> ahol n jelentés« 3~pro li-dU <210> 118 <223> Szintetikus oligonukleotíd <223> ahoi n jelentése S-brórn··! vesszd-xiezoxiuridin <21ö> 119 <223> Szintetikus oligonukleotid <223> ahol n jelentése S~j-ód-2 veasxő-desoxiu.riáln <21(e· '1.2,0 <22 3 > S a 1 a feet i kos o 3.1 g en n k I e o t i d <223> ahol n jelentés-« 5—jód-2· vessző-desoxi.uridía <2 B» 121 <223> Ssi Élteti kns oligonukleot id <22.5> ,Eihol π jelentése ö-ez.ii-2 vasssó-dezoxiuridig <2l!)> 122 <2 2 3 > S s i n ta 11 ko s ο 11 g on. u kl eot i d <223> ahdl n jelentése S~etil~2 v'ess:iö~dezox ja;ri din <2!3> 123 <223> Szintetikus oligonukleotíd <223> ahol a jelentése S-j6d-2 vess ző^dez-oxiu ri din <2 :·ο> 124 <223 > .Szintetikus oligeniikleotid <223> ahol o jelentése S-etii-2 «esszo-'dexox.iuridir· <21ü> 125 <223> Bz íntetikus oiigomiklaotld <223> .ahol n jelentése 5-jód--2 vesszd-dezoxiuridíri <223> ahol n jelentése hexadecíIglieeríl <2ie> 126 <£23> Szintetikus űlígonokieotid <223> ahol ez jelentése S-jéd~2 vessxő~d©zoxiariáin <223> ahol n jelentés« 3~jóí4-2 vessző-'dezox::uridin <223> ahol n jelentése hexadeeiigliesril <2!ö> 127 <22 3 > Selats t i kus o ii górta kieot i d <223> ahol n jelentése 5·-et i -2 vessző-desoxiu ·: :u:ii u <2.2 3 :> ahol n jelentése &amp;~efci 1-2 vessző-denoxieurdín <223> ahol n jelentése hexadeciigiícerii <210> 128 <2 2 3 > S 2 int:e t :t kun o 1 i gomt kl eo t id <223> ahol n jelentése 5~étü~2 úessző-dezoxiuridin <210> 129 <223> Szintetikus oligonukieotld <223> ahoi a jelentése S-etil--2 aesszd-nkszoxiuridin <210 130 <223> 3e in K etikus oligonukleoitid <223 > ahol n jelentése 5-etii--2 vesssd-Oexctxiuridi a <210> 131 <223> Se int etikus ο λ .i - jeun: kl· est: id <223> ahoi a jelentése 5-jód-2 eessző-desoxiuridín <210> 132 <223> Szintetikus oligonukleotid <223> ai:ci a jelentése S-jóe-l eessxő-dezoxiuridía <21Ο 133 < 2 2 3 > Sei n i e t. i kus n 1 Iggnu fc le e t i d <223> ahol a j-edentése S-;|6d—2 vessző-dezoxiuridia <210 > 134 <223> Szintetikus oligenukleotld <223> ahol a jelentése 5-jód~2 eessző-dezoxiuridin <'223:> ahol a jelentése 5-jód~2 eessző-dezoxiuridia <21ß;> 135 < 2 2 3 .> Szí n te ti. kus: ο 1. igen o kleet 1 d <223> ahol a jelentése 5“jöd"2 vessző··desoxiurldia <2X01 135 <223> Szintetikus oiigenukieotid <223> ahol a jelentése S-jód-l <essző--desoxiu:t:ldin <210 137 <223> Szintetikus oiigonakieotid
<223> ahol n jelentése S-jéd-2 vesszo-Oeaexiuridtn <223> ahol π jelentése S--jc<d-2 eesszéOezoxiuridin <21Q> 13B <223> Szintet! kus öli gonoki esstId <223> ahol n jelentése 5-jéd~2 v&amp;s.s%ő-~d&amp;.spsd.«r.idin <223> ahol n jelentése 7-deaza-dö <2I3> 139 <2 23 > Ss1n t e11ku s öli gonu k1eot id <223> ahol 0 jelentése 5-jód-2: vesstd-uezox::unidia <223> wherein ti is iaosine <210> 140 <223> S zintet i kus: o Ugornak 1 eotid
<223> ahol π jelentése s-Jó'd-2 vessO-dezoxiuridln <223> viharéin π Is n~bethyi -dC < 2 ! 0 > 141 <223> Szintetikus oligonokleotid <2.23> ahol n jelentése S-jód-2 vessző-dez-oxlaridín <2 i 0> 142 <3 2 3 > S s i b i: e t i k u s ο I i gon u k i e o 11 d <223> ahol n jelentése 5“ jód···2· vesszó-dezoxiuridin <210> 143 < 2 2 3> S z I of: e t :i. ka s ο 1i qonu kl. a et: I d <223> ahol n ja i en rés a 3-- jód~2 vessső-dezoxiuridib <21Q> 144 <223> Szintetikus oligonufclsot id •'223> ahol b jelentés« 5~eti.í.-2 vessxo-dexox.iurídin <210> 14.5 < 2 23 > S 2 i n t e t i kon o 1 i g on o k 1 e ot id <223> ahol b jelentés« S-etii-2 vesszö-dezoxiuEidih <210 146 <223:> SX10 teld.kon o 1 ig'osa.uk 1 avat:.id <223> ahol b jelentése Ojéd-2 vesszé-deaoxiuridin <210 14? <223> Szintetikus oligonos.1 estid. <223> ahol π j elentése 5~8t.il-2. vessző-deaoxlur. ϊdin <2.10 148 <223> Szintetikus eiigonnkieoticl <2.20 ahol n jelentése ö~ei il~2 vesszo-dezoxiuridin <223> ahol. n jelentése S-etii-2: vesssó-dezox iuridin <2I0> 142 <223> Szintetikus öLigobukleoiid
<223> ahol n jelentése 8-81:11-2 vesssó-dézoxluridin <220 ahol n j elent ése 3 ··e t i 1 ··· 2 vesszó-dez.oxí uridin <2lö> ISO < 2 23> Szintet!kas o1igönnk1eotid <223> ahol n jelentésé 5--jôd~2 vesszOdesoO.ur.idib <22.3> ahol n jelentése 5~etii~2 vessző-dezoxiurídin <210 131 <22.0 Sz intetikus oligonnkleot id <223> ahol n jelentése 5-jód-2 vessző-dózoxiurldín <210 152 <223> Szintetikus oligonuklentid <223> ahol n fel.enté se 5-et.11-2 ve.s s-ző-de so xiuridi n <210.> 153 < 22 3 > Szin te t i ku s ·» I :i. g on u fc 1 s ot: i d <223> ahol n jelentése S-d-bróí?.--vinil--m:idin <210> 154 <223> .Szintetikus oiigornikleot bd <223> ahol a jelentése 5·· d-b:t:6;"-vir: i .1 ~ori ;:iin <2l0> 155 <2 2 3> 3 1 n te t i kus o i i g onu k 1 e o t i d <223> ahol n jelentőse 5--jöd-2 vesszö-dezoxiuridin <2 K» 156 < 2 2 3 > Soi n. te t i k os dig onu kl e o t .i. d <223> ahol n jelentése S-jód-l vesszői-afezoxlutidin <223> ahol n jelentése 3 vesszö-ö-metl1-r-G <21ö> 157 <223> Szintetikus oligonukieotid <223> ahol n jelentése S-jéd-2 vesszö—dexoxiuzidin
<223> ahol » jelentése 3 vessző-Ö-ntefci 1 *·rQ <210> 153 <223> Szintetikas olígonukleotid <223> ahol valamennyi inter.aukieoéid~kötés fossforot:ioát kötés <223> ahol n jelentése 5-eti2~2: vessző-detoxiotidin <223> ahcd. n. jelentése 5--et .1..1.--2 vesszŐ—desoxiurídin <223> a ht: ; n j ezen tése 3 vesszo-O-sietil-rö <2lö> 153 <22 3> Szán let ikus ol igonn fcleot Id <2 2 3 :> a hol n j el entés« 5 - etil- 2 ve s ö - de zox i u r i dl n <223> ahol n jelentést: 5-et:i.i.~2 vesszö-~dezox.luridin <223> ahol n jelentés« 3 zesszd-O-oaet 11-rG' <21D:> 160 <223> Szintetikus eiigonaklaotíd <223> ahol n jelentése 5~éti!~2 ves-sző-dezoxiuridin <223> ahol n jc.leütése 5 vessző - 5 vessed kapcsolt timidin <21ö> 161 <22 3 > 6 z 1 a t e t: lka s ol 1 go nukl eo fc i d <223> ahol n jelentése S-jód-2 vessto-dezoKiúridba <223> ahol ti jelentése 3 vessző-G-metil-rG <2;G> 162 <223> Szintetikus oligonukleoéid <223> ahol a jelentés© S-atil-2 ye.sss.e-dez.oxieridin <223> ahol a jelentése 3 vessső-O-metil-rG <210> 163 <223> Skinketikus oligonuklaotid <223'· ahol a jelentése 5~eti.I~2 vessző-dezoxiuridin <2£3> ahol a jelentése 3 vessEŐ“0-oset:l.l---rG <21Ü> 164 <22 3> Szintet ifcus oilgonukleotid <223> ahoi valamennyi L n k o r rn; k X e o i .1 d -- k ö e 3 foszforotloát kötés <223> ahol a jelentése 5-et:i.i-2 vassző-dezoxluridin <223> ahol π jelentése: 5-etii-2 vesszo-olazoxlnridin
<223> ahol a jelentése 3 vesszó-~ü~íí:eti X~rG <210 > 165 <223> Szintetikus oligonakleotíd <223> ahol n jelentése 5-etii--2 ve s s z o ··· de z o x 1 υ >: i dl n <223> ahol n jelentése 5-eliI-2 vessxö-dezoxiu·:i-din <223> ahol n jelentése· 3 vess ző-O-taet ii ~rß <21Q> 166 <223> SEintetikiJs o.i Xgonukieoiid <223> ahol. n jelentésé S-etil-2 vesszó-dezoxiuridin <223> ahol n jelentése S~etil~2 vesssö-dezoxluridin <223> ahol n jelentése 3 vesssö-O-meti 1-rG <210> 167 <223> B z inteti kus o.i igenük i eo t: i d <223> ahol a jelentése 5- hid·· 2 vesszö-oiezoxiurldin <223> ahol a jelentése 5-jód-2 vessxö-dexoxio>: idin <:223> ahol a jelentése 3 vsssssíő-O-'met 11 ~rG <210·· 168 <223> Szintetikus ollgonokleotíd <223> ahol a jelentése 5~et:ii~2 vessző-Oezoxiiiridin <223> ahol a jelentése 5 vessző -·· 5 vessző kapcsolt: éimidin <210 169 <22:3> :Szí ntet i kos oi igonukleotíd <223> ahol n jelentésé .5-~jöd~2 vesszö-dezoni oridim <223> ahol n jelentése 5 vessző - 5 vessző kapcsolt tivolin <210> 170 <2 2 3 > 3in t: e t i k u s ο 1 :L g on n k le o t i. d <223> ahol a jelentése: 5-etiI-2 vesszŐ-'-dézaxiutidin <223> ahol n jelentése 3 vessző-O-metil-rG <210 171 < 2 23> 8 zI n te tikus ο1igona kle o t i d <223> ahol :n jelentése 5--;iőd--2 véss ző-désoxiéri-din <223> áhoi n jelemese 3 vessző--0---metJ. l-rG <210 :> 172 <223 > S;· i ntetikns o 1 iuc-oo k.1 eot: J, ci <2.2 3 > a h si n jelentése 5~ j ôd~2 v e :ns z ő ~ d e z o x i u r J, ci .i n <22 3> n jelentése Ä, C, G vagy T <2iö:> 173 <223:> Szintetikas oligonukiectid <223> ahol n jelentése 5~eti.l~2 v e s s z 5 ·- de z o x i t · -: i d i n <223> ahol n jelentése 3 vessző-O-metíl-tG <2 i0> 174 <223> Saint et í kas oi Lqouak Lee k i d <223> ahol n jelentése 3-et;1-2 vessző-dexoxiurídin <223> ahol n jelentése 5 messed - 3 vessző kapcsolt tirai din <210.> 175 <223> Szintetikus o.:. iqonakieot xd <2230- ehol n jelentése S-etil-2 vesszö-ciezoXihridih <223> ahol n jelentése 5 vessző - 5 vessző kapcsolt; timldin <213> 170 <22.3> Szintetikas oligosrakleotíd <223> ahol n jelentése: eitroisdol <210> 177 <2 2 3> Szintet ikhs cl í gonvxkleot id <223> ahol n jelentése ni.trepirrol <210,- 17« <223> Szintetikus olígonakieotid <223> ahol n jelentése «-nit.ro-bení'imidazci <213> 17:9 <2.23> Szintezikus oiigonnkleotid <223> ah·:;:·!, n jelentése S-etil-2 vess ző-dezoxixvri din <210> 130 <22 3> Szinteti kas ο1igonukieotíd <223,- ahol n jelentése 3-jód-2' vessző-dezoxiurídin <2io> im <2 2 3> Szín é et i. fcu s ο 1 lg orvok 1 eot i d <2£3> ahol n jelentése 5-et:i.i~2 vessző-dezoxiurldín <2 Kis 182 <223> Gz:í nte t i nas o.i i.qonak loot id <2i0> 183 <223> Szintetikus oligonukieetid <£23> ahol n jelentése 5~atil~2 vesszq-dezoxiuridin <£1G> 184 < 2 2 33- :S s i n fc el; :i,k o s o 1 i. genu k 1 e ot ici <22.3> ahol n jelentése 5~jod-£ vessző-dezoxiuridln <210> 1 δ 5 <223> Szintét:i kas oiigoaukisotíd <223> ahol n jeleni: ése 3--161-2 veaszo-dezozzni' Ldi η <2i:0> 186 <2 2 3> Szí nt et i k a s o 1 i g on a kl. o o t1 d <223> ahol n jelentése 5~jéd-2 vesssö-dozoxltiridin <210> 18? <223> Szintet! kas oi igonukleot i d <223> ahol π jeieekése S-eixl~2 yeaezo-dezoxinrldin <210> 188 < 22 3> S zi nt et 1 tus ο 1 i gonu kl e oi id <223> ahol n jelentés« 8-etlJ.-2 vess KÔ-dazos inrí diri <210> 189 <22 3> 'Szintetikus ciigonukieofcid <22 3> ahol n jelentőse d-jéd-2 v e s a z d ·· de z o a i u ,r i. d :t n <210> 3.90 <223> Szintetikus »iigcuinkleot: id <223:> ahol a aaxoidékok dezozrribonukl ont idok <223> ahol. n jelentése S~j6d-2 vesszo-dezoxiuridin <223> ahoi a oaradèkok r i.bonnk : eot rdok <23 0 131 <223:> Szintetikus oligonnkleotid <223> ahol n jelentése 5-etil-2 vessző-dezoxiuridin <210 n Ia 2 <22 3> Szintet:! kas oligonukisotid <223> ahol n jelentése S~etíl~2 vessső-dezoxiatidín <21ö> 133 < 2 2 3 > S s i t r i: e t i ko s ο 1 i gone k: 1 e at 1 d <223> ahol n. jelöntése 5“etil~2 vesazó-dezoxinridin <210> 194 <22 3> Szíren::ikas o i Igornak léc kid <223> ahol n jelentése 5~et:i!~2 vosszd-dezoxixnridín <23 Q,> 1.95 <223> Szintetikus olígonukieotid <228> ahol. n jelentése oridin <210 136 <223> Szív:·:etikus oiígonukieotid <223> ahol. n jelentése: áriéin <210> 197 <223> Színtotikus oligounkleotid <21ö> 198 <223> Színtotikus oiigonukleot.id

Claims (7)

  1. Szabadalmi igénypontok 1, Ohgortukieoíiíl amely tartalmazza m RjYZRj szekvenciát, ahöl Rä és R?. JeÍöÉése .* kivetkezők alkotta csoportból választolt: lipofll, szubszíituáit nukleeiid-analög (L), mskieotid és kötés; ahol Rs és R2 legalább egyike tipofil, szubszíituáit niáleoid-analóg 41% aböl Y jelentése citozm, és ahol Z jelentése guanón ahol (L) 5-kl0r~urac.il, 5~bróm~urac?l. S-iód-erassi, S-etií-mneii és {E)-5-(2*brômv5nH}-uractl közül választott. ®Kalafé|ételÍ«h hogy azoligotiukleood nem d[GCGAA<BrUXBrlíjCGC], ahol jtefafö&amp;g
  2. 3. Az 1. igénypont szerinti öligpstíkleoíiá, áhol: (1) mind R(, mind R> jelentése vagy (ii) Rj jelentése L és Rj jelentése nukleotid; vágy (ni) Rj jelentése L és^ jelentése kötés, oly módon, hogy az oligonufeleetid tartalmaz $' RRlö 3: szerkezetet; vagy (ívj jelentése L és R2 jelentése kötés, és ahol RjYZ-tőí 5’ Mnyban* egy N mtkíeotiddal elválasztva^ második Rj van, oly mádon, hogy m öligonokleotM 5' RtNRjYZ V szerkezetet tartalmaz.
    3. Az 1. igénypont szerinti olsgonukleotid, amely két 5’ RíNR^YZ 3' motívumot tarmbeaz, ahol bi jelentése nukieotid.
  3. 4. Az I, igénypont szetlmi olígöttükleotid, ahoi; (i) R> jelentése L és R; jelentése nnkleotid; vagy fii) az oligonukleotid 3 nukleotki hosszúságú; vágy (iii) az oligomskleotíd 3-6 nukieotid hosszúságú; vagy (ív> az oligonukleotid 3-ÍÖÖ hykleodd hosszúságú; vagy (v's azoligmmkleotíd 7-100 nokleotid hosszúságú; vagy (vi) az olígooakieoiid T-ben gazdag; vagy (vií) az oligonukkoíid legalább 80% T-t tartalmaz.
  4. 5. Az 1, igénypónt szerimi olgönokieotid, (i) amely legalább egy p&amp;lindróm szekvenciát taAalnmz; vagy (iij amely két plindrom szekvenciát tartalmaz;: vagy (iii) amely egy-négy meíiláiáthm CG diftakieoíídpt tartalmaz; vagy (ivj amely legalább egy(Gjm szekveneiái tartalmaz, ahol int érieke 4-1U; vagy' (vj Amely legalább egy metiláit CG dlnnkjeotidot tartalmaz; vagy ívíj ahol valamennyi CG vagy (vil) amely nem-nukieotid módosítást is tartalmaz, amely a köyeílméSk: MZÖÍ választott; CóRj^^íietiángíikol, €rCs5"áÍkándlol, GrGfji-alkilnmino-kSRiesoport és Cj-C^rsÖdítid-kötöcseport, koleszterin, egesav, telített vagy telítetlen zsírsav, és lelát; előnyösen henadeeil-giieerin- vagy difeepdeeit---glieerm-esogort vagy oktadeeíl-gMcerin- vagy díö^adeeil-gllceAn-esopoA vágy B-vitamin-eA?port; vagy vvlii) ââtnelÿ Itiato töváÉbá mtkleoüdtöi különböző eíágaztatö esôptîÂ; vagy (îx) amely továbbá: itukleotid elágaztató csoportot; vagy (X) amely tartalmaz továbbá elágaztató csoportok aM az oligoniteobdoalc legalább Mt S'-vege vas; vagy M) ahol az' bllgbtmkiemM legalább Mi nakleoíidjártak a kővetkezők közöl választói! stabilizált kötése vas: Éssífeo&amp;át, &amp;Szibfftxlitiosí, íhedíteszfonát, meíílfoszfonötíoái: feomno&amp;fôzioôàt, lészfojatmdát, vagy döfoszfekötés, fcèvëiék» akár «naatiotner szempontjából tiszta S~ vagy R-konfípsráeiolsas, vagy tgs|> aboi az Ej YEBy:¥2t csoportba ibszíbdíészter kötést tartalmaz; vagy (xlli) ahol az wpstja- fosz&amp;roticát. kötést tataimat; vagy (kik) ahol az R;¥21Q E*¥ csoportja ibszforotíoát kötést tartalmaz; vagy Qty) ahol a RSYZI% 2.1¾ csoportja foszförotioál kötést tartalmaz; vagy Cxvtiaboí valamennyi egyéb nokleotld íoszforotktát kötést tartalmaz; vágy tail) ahol az oligoimkleoiid mikrohotdozótöi K?e«tes, élöayöseo lipidöordozótoí mentes; vagy (xvlífahöl az otigootskleotid legalább egy 3-3’ kötést tartalmaz; vagy' |xix) áhöi az oligsaakleotid legalább egy SQT kötést tartalmaz. '6, Az 1. igénypont szeriMi:ollgonufcieotid, amely az alábbiak közöl választott: SEQ IP No 1 0 - 15, SEQ ÍD No 19 - 24, SEQ 11) No 2? * 36, BBQ ÍD No 39- 42, SEQ ID No 44, S£Q ID No 45, SEQ ID No 47, SEQ; IP No 48„ SEQ ÍD No 58, SEQ IP No 60, SEQ íD No 62, SEQ ÍD No 64, SEQ ID No m, SEQ ID No 6?.. SEQ 1D No 85, SEQ ÍD No 90 - 99, SEQ ÎD No 101 -115, SEQ ID No 118-12 L SEQ ÎD No 123 « 139, SEQ ID No 133 -137, SEQ ÍD No 143 - 125, SEQ 1D No 179-181 és SEQ ® No 1S3-194 szeritttí szekvéttelák.
  5. 7, Az: 1. igénypont szeriöE öligoapklooiíd, amely az alábbiak közöl viásztött;
    "ï&amp;F jelentése 5-eöi~2'-dsze:dntidin; "KJ" jelentése 5(jéd-2t-dezöxíi«í&amp;; "BVü" jelentése S-(d-{»öiö-vMI)”öríKín; *Ímg* jelentése 3--€)-&amp;Îeîil-îG «s, "if* jelentése: inverz nukleotid (felcserek Ύ és 5’}.
  6. 8. An ϊ. igénypont szerinti oligonukleotid, amely az alábbiak közül válaszíöít:
    alsóijelentése foszforotioátiníetnnfeleöty-kötés, jelentése fosziídjteer,^^ '"EU" jelentése 5~etil-2’-äöZö:dvKsdiß; és "ÍU* jelentése S-lód-S'-dezöxí ®ídin. % Az 1-&amp; igénypontok bármelyike .szaÜ oligös^Ískleoíiditnínssnválasz kiváltásában történő alkalmazásra, Ili, Az !$f, ígésypotnok bármelyike szeritf i oilgomtkleoM 9 9. igénypont szerinti, ssamaöSflasz fâvâlîâ-sába« történő aikálttiákáára, i i) aísol az immunválasz IFN-u indukciója; vagy (ö) amely teriálitraz továbbá antigént; vagy (síi) ahol ai ölígOítukleotídoí a következők alkotta esoporiböl választolt úkm jidia|«k be: orális, nazális, szoblíngvális, intravénás* szubkuíáá, mnkózá% öktíláris, respiráeids, közvetlen injekíálás és tstfeíUÍoitnális; vagy (tv) ahol az oilgonnkleotidot vagy készltmétsyt elíokin- ésívagy keraokinsxpresszló mdefeálásárss baté-kony mennyiségben jaltatjuk be az alanynak; vagy jv) amely inagában ibgia|a további immtmmoduláos beadását is az alanynak; vagy (yij aboi m sllgöitakleötitlöí az alanynak aAslányöari áutoimömn betegség kezelésére jnttapk be; vagy (vb) ahol m öHgönáklébtldöi az alanynak is alanyban legM átrendeződés kezelésére Jattatjök be; vagy (viiijabol aáiblipdökiéQtidotosdipn nélkül adjuk be az alanynak. II, Az 1-8. igényponiök bánnelyrke szerinti oitgpntilieotid rák kezelésébe« iöríénS alkalmazásra. Ο. Az-Î4L igényimsiok báiRBelyiké széfM: oiigonukleotid a. I L Igénypont szerinti, rák feezelésébéb történő alkalmazásra, fi) aböl i iák a következők alkotta csoportból választolt: basáiséft&amp;s karemótnái epeutak rákja, Mgyholyag-rák, csontfák, agy- és központi jdegtraedázert .8$* mellrák, méhnyakrák, koriolarcinérna, vastagbél- és végbélrák, kőtőszőveti rák,, m «sató&amp;mkwt rákja, mélmyáikaháríyarák, nyelöesőrák. szeotrák, fej«· jg^ssSoïïl^ JmraepitelBáits neoptazma, ve.serak, gegerák, leukémia, la^r^b tüdőrák, linvfömák, köztük Hodgkin- és oent-Hodgkin-liohoma, melanoma, írsielóma, neuroblasztöma, szájüregi: rák, peteie-szskrák, bssoyáimifjgyrák; prosztatarák, mtmoblaszíóffia,. t'ltabdomioszaifcbma, rektálls rák, tonális rák, a iépbrendsxér bkja, szarkába^ bőrrák, gyomorrék, hererák, pajzsmitigyrál, méhrák, a Mgyôîi rendszer ráhjs és egyéb kareiriömákéS: szarkómák: vagy (if) aböl: az álkabíiazás magában foglalja rákellenes gyógyszer vagy kezelés, például kemoterápiás szerek, sugárzás beadásás is az alanynak; vagy (b| ahsïl az biigbeoklebtidar a, kővetkezők alkotta csoportból váíasztölí ütőn juttatjuk be;: orális, nazális, szíÉíiáivaiS, intravénás: sZubkuíáo, nmkozális, okoláris iospiráelős, közvetlen injektálás és: dermálís; vágy f)v) aböl azóbgansikfeokíl míltéítel kezelt alanyba« történő aíkalmszásra szolgál. 13, èz ! -8. igénypontok bármelyike szerinti oligönukleotid vírusíertözés kezelésében vagy megetőzésé'- ben történő alkalmazásra.
  7. 14. Az 1-8. oíig^nökleötíd a 13, igénypont szermit, vbosíertőzés kezelé sében vagy megelőzésében történő alkalmazásra: (i) aboi a vbsísfertözést hepatitisz B viras (RBV), hepatitisz € virus (BGV), embed iínmnnWányt okozó virus (HÍV), in&amp;esza vírus, respirációs syneiîlals viras (RSV) vagy humán papilhtmavírus (HFV) okoz-za; vagy $t ahol áz; bligonakleotldot a kővetkezők alkotta csoportból: választott hton juttatjuk be: orális, nazális, szublatgvális, intravénás,: szubfcoián, mukozális, okaláris respirációs, közvetlen injektálás és deonáilsi vagy (ílt} iából. á kezdés vagy megeílzés tbafábanítöglai vSruselMss szert Is; vagy (iv) iából az ollg<)nakie<aid îteb^Gpû sátlvirális terápiára nem reagáló alanyban történő alkalmazásra szolgál.
HUE07870434A 2006-09-27 2007-09-27 Fokozott immunstimuláns aktivitású, hidrofób T-analógokat tartalmazó CPG oligonukleotid-analógok HUE027064T2 (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US84781106P 2006-09-27 2006-09-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HUE027064T2 true HUE027064T2 (hu) 2016-09-28

Family

ID=39492695

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUE07870434A HUE027064T2 (hu) 2006-09-27 2007-09-27 Fokozott immunstimuláns aktivitású, hidrofób T-analógokat tartalmazó CPG oligonukleotid-analógok

Country Status (22)

Country Link
US (3) US8580268B2 (hu)
EP (2) EP2078080B1 (hu)
JP (2) JP5455629B2 (hu)
KR (2) KR101251707B1 (hu)
CN (1) CN101517082B (hu)
AU (1) AU2007330410B2 (hu)
BR (1) BRPI0717510B8 (hu)
CA (1) CA2664219C (hu)
DK (1) DK2078080T3 (hu)
ES (1) ES2544958T3 (hu)
HK (1) HK1133440A1 (hu)
HU (1) HUE027064T2 (hu)
IL (1) IL197549A (hu)
MX (1) MX2009003398A (hu)
NO (1) NO342465B1 (hu)
NZ (1) NZ575437A (hu)
PL (1) PL2078080T3 (hu)
PT (1) PT2078080E (hu)
RU (1) RU2477315C2 (hu)
SI (1) SI2078080T1 (hu)
WO (1) WO2008068638A2 (hu)
ZA (1) ZA200901735B (hu)

Families Citing this family (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US7935675B1 (en) 1994-07-15 2011-05-03 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20030026782A1 (en) 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
SI1077722T1 (sl) 1998-05-22 2007-02-28 Ottawa Health Research Inst Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti
EP1176966B1 (en) * 1999-04-12 2013-04-03 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
US20030129251A1 (en) * 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US20030199466A1 (en) * 2001-06-21 2003-10-23 Fearon Karen L. Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same - ll
DE60229422D1 (de) 2001-08-17 2008-11-27 Coley Pharm Gmbh Kombinations-motif-immunstimulierende oligonukleotide mit verbesserter wirkung
US7276489B2 (en) * 2002-10-24 2007-10-02 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends
EP1499187B1 (en) 2002-04-04 2015-06-17 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory g,u-containing oligoribonucleotides
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
AR040996A1 (es) 2002-08-19 2005-04-27 Coley Pharm Group Inc Acidos nucleicos inmunoestimuladores
EA008777B1 (ru) 2002-10-29 2007-08-31 Коли Фармасьютикал Груп, Лтд. Способы и продукты, относящиеся к лечению и предупреждению инфекции вируса гепатита c
MXPA05005192A (es) 2002-11-15 2005-09-08 Idenix Cayman Ltd Nucleosidos ramificados en la posicion 2' y mutacion de flaviviridae.
CA2502015A1 (en) 2002-12-11 2004-06-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5' cpg nucleic acids and methods of use
US8158768B2 (en) * 2002-12-23 2012-04-17 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same
US7354907B2 (en) * 2003-02-07 2008-04-08 Idera Pharmaceuticals, Inc. Short immunomodulatory oligonucleotides
JP4989225B2 (ja) * 2003-09-25 2012-08-01 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 核酸親油性接合体
OA13278A (en) 2003-10-30 2007-01-31 Coley Pharm Gmbh C-Class oligonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory potency.
MY159370A (en) 2004-10-20 2016-12-30 Coley Pharm Group Inc Semi-soft-class immunostimulatory oligonucleotides
NZ575437A (en) * 2006-09-27 2012-02-24 Coley Pharm Gmbh Cpg oligonucleotide analogs containing hydrophobic t analogs with enhanced immunostimulatory activity
EP2190440A1 (en) * 2007-08-13 2010-06-02 Pfizer Inc. Combination motif immune stimulatory oligonucleotides with improved activity
RU2010112771A (ru) 2007-10-09 2011-11-20 Коули Фармасьютикал ГмбХ (DE) Иммуностимулирующие аналоги олигонуклеотидов, содержащие модифицированные сахарные группировки
US8541569B2 (en) * 2008-09-06 2013-09-24 Chemgenes Corporation Phosphoramidites for synthetic RNA in the reverse direction, efficient RNA synthesis and convenient introduction of 3'-end ligands, chromophores and modifications of synthetic RNA
JP5645840B2 (ja) 2008-12-02 2014-12-24 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ リン原子修飾核酸の合成方法
KR100998365B1 (ko) * 2009-06-29 2010-12-06 압타바이오 주식회사 치료 효능이 있는 변형핵산 및 구아노신을 함유하는 올리고뉴클레오티드 변형체
CN102596204B (zh) 2009-07-06 2016-11-23 波涛生命科学有限公司 新的核酸前药及其使用方法
BR112012030337B1 (pt) 2010-05-28 2021-04-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc Vacina compreendendo um ou mais oligonucleotídeo(s) de cpg isolado(s) ou um agonista de tlr e colesterol, e uso da mesma
EP2620428B1 (en) 2010-09-24 2019-05-22 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
WO2012154321A1 (en) 2011-03-31 2012-11-15 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
JP6128529B2 (ja) 2011-07-19 2017-05-17 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． 官能化核酸の合成のための方法
US9403863B2 (en) * 2011-09-12 2016-08-02 Idenix Pharmaceuticals Llc Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
JP6165848B2 (ja) 2012-05-22 2017-07-19 イデニク ファーマシューティカルズ エルエルシー 肝疾患のためのｄ−アミノ酸化合物
US9109001B2 (en) 2012-05-22 2015-08-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphoramidate prodrugs for HCV infection
US9296778B2 (en) 2012-05-22 2016-03-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphate prodrugs for HCV infection
PL2872485T3 (pl) 2012-07-13 2021-05-31 Wave Life Sciences Ltd. Asymetryczna grupa pomocnicza
AU2013287630B2 (en) 2012-07-13 2017-05-25 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant
WO2014012081A2 (en) 2012-07-13 2014-01-16 Ontorii, Inc. Chiral control
WO2014052638A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Esters and malonates of sate prodrugs
AU2013329521B2 (en) 2012-10-08 2018-04-19 Centre National De La Recherche Scientifique 2'-chloro nucleoside analogs for HCV infection
CN104837996A (zh) 2012-11-15 2015-08-12 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 抗apob反义缀合物化合物
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
US20140271547A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Amino acid phosphoramidate pronucleotides of 2'-cyano, azido and amino nucleosides for the treatment of hcv
BR112015028748A2 (pt) * 2013-05-14 2017-09-19 Zoetis Services Llc Composições de vacina compreendendo oligonucleotídeos imunoestimulantes
WO2014197578A1 (en) 2013-06-05 2014-12-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
EP3027636B1 (en) 2013-08-01 2022-01-05 Idenix Pharmaceuticals LLC D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
KR20200039025A (ko) * 2013-09-19 2020-04-14 조에티스 서비시즈 엘엘씨 유성 아쥬반트
CN105936906B (zh) * 2013-11-08 2019-06-21 上海交通大学 被修饰的含CpG序列单元的寡聚脱氧核苷酸分子及其用途
CN105899199A (zh) 2013-11-26 2016-08-24 硕腾服务有限责任公司 诱导免疫应答的组合物
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
EP3095460A4 (en) 2014-01-15 2017-08-23 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
US10160969B2 (en) 2014-01-16 2018-12-25 Wave Life Sciences Ltd. Chiral design
WO2015161137A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
PT3240801T (pt) 2014-12-31 2021-02-18 Checkmate Pharmaceuticals Inc Imunoterapia antitumoral combinada
CN114699518A (zh) * 2015-01-16 2022-07-05 硕腾服务有限责任公司 ***疫苗
US10456459B2 (en) 2015-07-20 2019-10-29 Zoetis Services Llc Liposomal adjuvant compositions
EP3431591B1 (en) * 2016-03-09 2020-09-16 Tokyo University of Science Foundation Nucleic acid oligomer for rna hybrid formation
CN109152829A (zh) 2016-06-02 2019-01-04 硕腾服务有限责任公司 针对传染性支气管炎的疫苗
GB201703529D0 (en) 2017-03-06 2017-04-19 Cambridge Entpr Ltd Vaccine composition
BR112019021520A2 (pt) 2017-04-14 2020-08-04 Tollnine, Inc. oligonucleotídeo, composto, polinucleotídeo imunomodulador, composição, conjugado, método para modular um receptor, método de tratamento de um tumor, método de tratamento de câncer, método para tratar um tumor, método de prevenção de câncer, método para induzir uma resposta imune
CN107090009B (zh) * 2017-04-14 2019-10-25 佛山科学技术学院 一种二糖核苷化合物及其制备方法
CR20200260A (es) 2017-12-15 2020-08-01 Bayer Animal Health Gmbh Composiciones inmunoestimulantes
JP7370983B2 (ja) 2017-12-20 2023-10-30 ゾエティス・サービシーズ・エルエルシー ヘンドラウイルス感染症及びニパウイルス感染症に対するワクチン
EP3746457A1 (en) 2018-01-29 2020-12-09 Stichting Katholieke Universiteit New potent sialyltransferase inhibitors
TW202206098A (zh) 2020-08-11 2022-02-16 美商碩騰服務公司 抗冠狀病毒疫苗
WO2024077025A1 (en) 2022-10-04 2024-04-11 Zoetis Services Llc Poultry vaccines and methods of protecting poultry

Family Cites Families (166)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
JP2547714B2 (ja) 1981-10-23 1996-10-23 モルキユラ− バイオシステムズ インコ−ポレテツド オリゴヌクレオチド治療剤及びその製法
CA1339596C (en) 1987-08-07 1997-12-23 New England Medical Center Hospitals, Inc. Viral expression inhibitors
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
EP0544824B1 (en) 1990-07-27 1997-06-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
CA2082951C (en) 1991-03-15 1999-12-21 Robert M. Platz Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
ATE162198T1 (de) 1992-07-27 1998-01-15 Hybridon Inc Oligonukleotid alkylphosphonothiate
DE4321946A1 (de) 1993-07-01 1995-01-12 Hoechst Ag Methylphosphonsäureester, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
US6605708B1 (en) 1993-07-28 2003-08-12 Hybridon, Inc. Building blocks with carbamate internucleoside linkages and oligonucleotides derived therefrom
US5859231A (en) 1993-09-03 1999-01-12 Duke University Synthesis of oligonucleotides with boranophosphonate linkages
DE4338704A1 (de) 1993-11-12 1995-05-18 Hoechst Ag Stabilisierte Oligonucleotide und deren Verwendung
US5646126A (en) 1994-02-28 1997-07-08 Epoch Pharmaceuticals Sterol modified oligonucleotide duplexes having anticancer activity
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US6727230B1 (en) 1994-03-25 2004-04-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5451569A (en) 1994-04-19 1995-09-19 Hong Kong University Of Science And Technology R & D Corporation Limited Pulmonary drug delivery system
US5658738A (en) 1994-05-31 1997-08-19 Becton Dickinson And Company Bi-directional oligonucleotides that bind thrombin
US5696248A (en) 1994-06-15 1997-12-09 Hoechst Aktiengesellschaft 3'-modified oligonucleotide derivatives
US20030050263A1 (en) 1994-07-15 2003-03-13 The University Of Iowa Research Foundation Methods and products for treating HIV infection
US7935675B1 (en) 1994-07-15 2011-05-03 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6194388B1 (en) 1994-07-15 2001-02-27 The University Of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
US20030026782A1 (en) 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
DE19502912A1 (de) 1995-01-31 1996-08-01 Hoechst Ag G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide
US5968909A (en) 1995-08-04 1999-10-19 Hybridon, Inc. Method of modulating gene expression with reduced immunostimulatory response
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
US6030955A (en) 1996-03-21 2000-02-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York And Imclone Systems, Inc. Methods of affecting intracellular phosphorylation of tyrosine using phosphorothioate oligonucleotides, and antiangiogenic and antiproliferative uses thereof
US5856462A (en) 1996-09-10 1999-01-05 Hybridon Incorporated Oligonucleotides having modified CpG dinucleosides
WO1998016247A1 (en) 1996-10-11 1998-04-23 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
CA2281838A1 (en) 1997-02-28 1998-09-03 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated cpg dinucleotide in the treatment of lps-associated disorders
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6426334B1 (en) 1997-04-30 2002-07-30 Hybridon, Inc. Oligonucleotide mediated specific cytokine induction and reduction of tumor growth in a mammal
WO1998052962A1 (en) 1997-05-19 1998-11-26 Merck & Co., Inc. Oligonucleotide adjuvant
DE69838294T2 (de) 1997-05-20 2009-08-13 Ottawa Health Research Institute, Ottawa Verfahren zur Herstellung von Nukleinsäurekonstrukten
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US20040006034A1 (en) 1998-06-05 2004-01-08 Eyal Raz Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US6221882B1 (en) 1997-07-03 2001-04-24 University Of Iowa Research Foundation Methods for inhibiting immunostimulatory DNA associated responses
ATE356630T1 (de) 1998-04-03 2007-04-15 Univ Iowa Res Found Verfahren und produkte zur stimulierung des immunsystems mittels immunotherapeutischer oligonukleotide und zytokine
CA2328602A1 (en) 1998-05-06 1999-11-11 University Of Iowa Research Foundation Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides
EP1674574A1 (en) 1998-05-14 2006-06-28 Coley Pharmaceutical GmbH Methods for Regulating Hematopoiesis using CpG-Oligonucleotides
SI1077722T1 (sl) 1998-05-22 2007-02-28 Ottawa Health Research Inst Metode in produkti za induciranje sluznicne imunosti
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
US20040247662A1 (en) 1998-06-25 2004-12-09 Dow Steven W. Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes
AU764532B2 (en) 1998-07-27 2003-08-21 University Of Iowa Research Foundation, The Stereoisomers of CpG oligonucleotides and related methods
CA2341338A1 (en) 1998-09-03 2000-03-16 Coley Pharmaceutical Gmbh G-motif oligonucleotides and uses thereof
FR2783170B1 (fr) 1998-09-11 2004-07-16 Pasteur Merieux Serums Vacc Emulsion immunostimulante
US6207819B1 (en) 1999-02-12 2001-03-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds, processes and intermediates for synthesis of mixed backbone oligomeric compounds
AU3760100A (en) 1999-03-16 2000-10-04 Panacea Pharmaceuticals, Llc Immunostimulatory nucleic acids and antigens
EP1176966B1 (en) 1999-04-12 2013-04-03 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
US6977245B2 (en) 1999-04-12 2005-12-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
US6558670B1 (en) 1999-04-19 2003-05-06 Smithkline Beechman Biologicals S.A. Vaccine adjuvants
AU4978100A (en) 1999-04-29 2000-11-17 Coley Pharmaceutical Gmbh Screening for immunostimulatory dna functional modifyers
CA2372960C (en) 1999-05-06 2006-03-28 The Immune Response Corporation Hiv immunogenic compositions and methods
WO2000076982A1 (en) 1999-06-16 2000-12-21 University Of Iowa Research Foundation Antagonism of immunostimulatory cpg-oligonucleotides by 4-aminoquinolines and other weak bases
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
EP2314693A3 (en) 1999-08-13 2012-11-28 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of oligonucleotide CpG-mediated immune stimulation by positional modification of nucleosides
EE200200158A (et) 1999-09-25 2003-06-16 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatoorsed nukleiinhapped
US6949520B1 (en) 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
MXPA02003059A (es) 1999-09-27 2002-09-30 Univ Iowa Res Found Metodos relacionados con interferon inducido por acido nucleico inmunoestabilizador.
US7223398B1 (en) 1999-11-15 2007-05-29 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
WO2001045750A1 (en) 1999-12-21 2001-06-28 The Regents Of The University Of California Method for preventing an anaphylactic reaction
CA2396871A1 (en) 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
ATE382690T1 (de) 2000-01-26 2008-01-15 Idera Pharmaceuticals Inc Modulierung der durch cpg-oligonukleotide verursachte immunstimulierung durch positionsbedingte veränderung von nukleosiden
US7585847B2 (en) 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
US20020156033A1 (en) 2000-03-03 2002-10-24 Bratzler Robert L. Immunostimulatory nucleic acids and cancer medicament combination therapy for the treatment of cancer
US20040131628A1 (en) 2000-03-08 2004-07-08 Bratzler Robert L. Nucleic acids for the treatment of disorders associated with microorganisms
US7129222B2 (en) * 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
EP1278761B1 (en) * 2000-05-01 2005-04-06 Hybridon, Inc. MODULATION OF OLIGONUCLEOTIDE CpG-MEDIATED IMMUNE STIMULATION BY POSITIONAL MODIFICATION OF NUCLEOSIDES
AU2001259706A1 (en) 2000-05-09 2001-11-20 Reliable Biopharmaceutical, Inc. Polymeric compounds useful as prodrugs
CA2412026A1 (en) 2000-06-07 2001-12-13 Biosynexus Incorporated Immunostimulatory rna/dna hybrid molecules
EP1296714B1 (en) 2000-06-22 2009-08-26 University Of Iowa Research Foundation Combination of CpG and antibodies directed against CD19,CD20, CD22 or CD40 for the treatment or prevention of cancer.
US20020165178A1 (en) 2000-06-28 2002-11-07 Christian Schetter Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of anemia, thrombocytopenia, and neutropenia
US20020198165A1 (en) 2000-08-01 2002-12-26 Bratzler Robert L. Nucleic acids for the prevention and treatment of gastric ulcers
US20020091097A1 (en) 2000-09-07 2002-07-11 Bratzler Robert L. Nucleic acids for the prevention and treatment of sexually transmitted diseases
ATE510850T1 (de) 2000-09-15 2011-06-15 Coley Pharm Gmbh Verfahren zum hochdurchsatzscreening von auf cpg basierenden immunagonisten und -antagonisten
EP1322656B1 (en) 2000-09-26 2008-01-16 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory activity of immunostimulatory oligonucleotide analogs by positional chemical changes
FR2814958B1 (fr) 2000-10-06 2003-03-07 Aventis Pasteur Composition vaccinale
GB0025577D0 (en) 2000-10-18 2000-12-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU2001297693A1 (en) 2000-12-08 2002-09-12 Coley Pharmaceutical Gmbh Cpg-like nucleic acids and methods of use thereof
WO2002053141A2 (en) 2000-12-14 2002-07-11 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Inhibition of angiogenesis by nucleic acids
US20030050268A1 (en) 2001-03-29 2003-03-13 Krieg Arthur M. Immunostimulatory nucleic acid for treatment of non-allergic inflammatory diseases
US7176296B2 (en) 2001-04-30 2007-02-13 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of oligonucleotide CpG-mediated immune stimulation by positional modification of nucleosides
US7105495B2 (en) 2001-04-30 2006-09-12 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of oligonucleotide CpG-mediated immune stimulation by positional modification of nucleosides
US20030129605A1 (en) 2001-05-04 2003-07-10 Dong Yu Immunostimulatory activity of CpG oligonucleotides containing non-ionic methylphosophonate linkages
US20030199466A1 (en) 2001-06-21 2003-10-23 Fearon Karen L. Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same - ll
US20040132677A1 (en) 2001-06-21 2004-07-08 Fearon Karen L. Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same-IV
AU2002318944A1 (en) 2001-08-01 2003-02-17 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods and compositions relating to plasmacytoid dendritic cells
CA2456328C (en) 2001-08-07 2015-05-26 Dynavax Technologies Corporation Complexes of a short cpg-containing oligonucleotide bound to the surface of a solid phase microcarrier and methods for use thereof
DE60229422D1 (de) 2001-08-17 2008-11-27 Coley Pharm Gmbh Kombinations-motif-immunstimulierende oligonukleotide mit verbesserter wirkung
IL160837A0 (en) 2001-10-05 2004-08-31 Coley Pharm Gmbh Toll-like receptor 3 signaling agonists and antagonists
AU2002360278A1 (en) 2001-10-12 2003-11-11 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods and products for enhancing immune responses using imidazoquinoline compounds
US7276489B2 (en) 2002-10-24 2007-10-02 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
AU2003203079B9 (en) 2002-02-04 2009-01-15 Oncothyreon Inc. Immunostimulatory, covalently lipidated oligonucleotides
EP1499187B1 (en) 2002-04-04 2015-06-17 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory g,u-containing oligoribonucleotides
KR101092043B1 (ko) 2002-04-22 2011-12-12 바이오니취 라이프 사이언시즈 인코포레이티드 올리고뉴클레오티드 조성물 및 면역 반응 조절시 이의 용도
MXPA04011127A (es) 2002-05-10 2005-07-01 Inex Pharmaceuticals Corp Oligonucleotidos inmuno estimuladores metilados y metodos para utilizar los mismos.
CA2388049A1 (en) 2002-05-30 2003-11-30 Immunotech S.A. Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof
US20040009949A1 (en) 2002-06-05 2004-01-15 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Method for treating autoimmune or inflammatory diseases with combinations of inhibitory oligonucleotides and small molecule antagonists of immunostimulatory CpG nucleic acids
EP1551221A4 (en) * 2002-07-03 2007-08-01 Coley Pharm Group Inc NUCLEIC ACID COMPOSITIONS FOR STIMULATING IMMUNE RESPONSES
US7576066B2 (en) 2002-07-03 2009-08-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7569553B2 (en) 2002-07-03 2009-08-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7605138B2 (en) 2002-07-03 2009-10-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
WO2004007743A2 (en) 2002-07-17 2004-01-22 Coley Pharmaceutical Gmbh Use of cpg nucleic acids in prion-disease
AR040996A1 (es) * 2002-08-19 2005-04-27 Coley Pharm Group Inc Acidos nucleicos inmunoestimuladores
GT200300176A (es) * 2002-08-19 2004-03-29 Acidos nucleicos inmunoestimuladores
AU2003278845A1 (en) 2002-09-19 2004-04-08 Coley Pharmaceutical Gmbh Toll-like receptor 9 (tlr9) from various mammalian species
EA008777B1 (ru) 2002-10-29 2007-08-31 Коли Фармасьютикал Груп, Лтд. Способы и продукты, относящиеся к лечению и предупреждению инфекции вируса гепатита c
CA2502015A1 (en) 2002-12-11 2004-06-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5' cpg nucleic acids and methods of use
EP1625140A4 (en) 2002-12-23 2008-06-18 Dynavax Tech Corp BRANCHED IMMUNOMODULAR COMPOUNDS AND METHOD OF USE THEREOF
WO2004064782A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by utilizing modified immunostimulatory dinucleotides
WO2004087203A2 (en) 2003-04-02 2004-10-14 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations for topical application
WO2005016235A2 (en) 2003-04-14 2005-02-24 The Regents Of The University Of California Combined use of impdh inhibitors with toll-like receptor agonists
WO2004094671A2 (en) 2003-04-22 2004-11-04 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods and products for identification and assessment of tlr ligands
JP2006528697A (ja) 2003-05-16 2006-12-21 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド イムノマーを化学療法剤と組み合わせて用いる、癌の相乗的処置
CA2528597C (en) 2003-06-11 2014-08-05 Hybridon, Inc. Stabilized immunomodulatory oligonucleotides
WO2005007672A2 (en) 2003-06-20 2005-01-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Small molecule toll-like receptor (tlr) antagonists
CN1822856B (zh) 2003-07-11 2010-04-28 英特塞尔股份公司 Hcv疫苗
US20050013812A1 (en) 2003-07-14 2005-01-20 Dow Steven W. Vaccines using pattern recognition receptor-ligand:lipid complexes
EP1648913A4 (en) 2003-07-15 2008-09-10 Idera Pharmaceuticals Inc SYNERGISTIC STIMULATION OF THE IMMUNE SYSTEM WITH IMMUNOSTIMULATING OLIGONUCLEOTIDES AND / OR IMMUNOMER COMPOUNDS RELATED TO CYTOKINES AND / OR CHEMOTHERAPEAN MEDICAMENTS OR RADIATION THERAPY
WO2005023289A1 (ja) 2003-09-08 2005-03-17 Intellectual Property Consulting Incorporated 慢性ｃ型肝炎を治療するための医薬組成物
JP4989225B2 (ja) 2003-09-25 2012-08-01 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 核酸親油性接合体
US20050215501A1 (en) 2003-10-24 2005-09-29 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods and products for enhancing epitope spreading
OA13278A (en) 2003-10-30 2007-01-31 Coley Pharm Gmbh C-Class oligonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory potency.
US20050239733A1 (en) 2003-10-31 2005-10-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Sequence requirements for inhibitory oligonucleotides
US20050100983A1 (en) 2003-11-06 2005-05-12 Coley Pharmaceutical Gmbh Cell-free methods for identifying compounds that affect toll-like receptor 9 (TLR9) signaling
CN101094594B (zh) 2003-12-08 2012-08-15 海布里顿公司 通过基于小寡核苷酸的化合物调节免疫刺激性质
TW200533750A (en) 2004-02-19 2005-10-16 Coley Pharm Group Inc Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides
JP2008500963A (ja) 2004-03-12 2008-01-17 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 第二世代免疫調節性オリゴヌクレオチドを用いて増幅されたｈｉｖワクチン活性
WO2005111057A2 (en) * 2004-04-02 2005-11-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for inducing il-10 responses
CA2567789A1 (en) 2004-06-08 2006-08-03 Coley Pharmaceutical Gmbh Abasic oligonucleotide as carrier platform for antigen and immunostimulatory agonist and antagonist
CA2570786C (en) 2004-06-15 2013-05-28 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modified cpg-containing oligonucleotide multimers in immune stimulation
KR100958505B1 (ko) 2004-07-18 2010-05-17 씨에스엘 리미티드 면역자극 복합체 및 향상된 인터페론-감마 반응을 유도하기위한 올리고뉴클레오티드 제제
EP1776105A2 (en) 2004-07-18 2007-04-25 Coley Pharmaceutical Group, Ltd Methods and compositions for inducing innate immune responses
MY159370A (en) 2004-10-20 2016-12-30 Coley Pharm Group Inc Semi-soft-class immunostimulatory oligonucleotides
JP2008531018A (ja) 2005-02-24 2008-08-14 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 免疫刺激性オリゴヌクレオチド
EP1874325A2 (en) 2005-04-08 2008-01-09 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods for treating infectious disease exacerbated asthma
WO2006116458A2 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhances immunostimulatory activity
AU2006269555A1 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Anti-CTLA-4 antibody and CpG-motif-containing synthetic oligodeoxynucleotide combination therapy for cancer treatment
EA013468B1 (ru) 2005-09-16 2010-04-30 Коли Фармасьютикал Гмбх Иммуностимулирующая одноцепочечная рибонуклеиновая кислота с фосфодиэфирным остовом
CN101321868A (zh) 2005-09-16 2008-12-10 科利制药公司 通过核苷酸修饰调节短干扰核糖核酸(siRNA)的免疫刺激特性
WO2007050405A2 (en) 2005-10-21 2007-05-03 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. The induction of indoleamine 2,3-dioxygenase in dendritic cells by tlr ligands and uses thereof
US20070093439A1 (en) 2005-10-25 2007-04-26 Idera Pharmaceuticals, Inc. Short immunomodulatory oligonucleotides
US7470674B2 (en) 2005-11-07 2008-12-30 Idera Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds comprising modified immunostimulatory dinucleotides
ES2536103T3 (es) 2005-11-25 2015-05-20 Zoetis Belgium S.A. Oligorribonucleótidos inmunoestimuladores
JP2009521218A (ja) 2005-12-20 2009-06-04 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 異なる長さのパリンドロームセグメントを含むパリンドローム免疫調節オリゴヌクレオチド（ｉｍｏ（ｔｍ））の免疫賦活作用
CA2642152C (en) 2006-02-15 2016-11-01 Coley Pharmaceutical Gmbh Compositions and methods for oligonucleotide formulations
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
US8027888B2 (en) 2006-08-31 2011-09-27 Experian Interactive Innovation Center, Llc Online credit card prescreen systems and methods
WO2008033432A2 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune modulation by chemically modified ribonucleosides and oligoribonucleotides
NZ575437A (en) * 2006-09-27 2012-02-24 Coley Pharm Gmbh Cpg oligonucleotide analogs containing hydrophobic t analogs with enhanced immunostimulatory activity
CA2664156A1 (en) 2006-09-27 2008-04-03 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Compositions of tlr ligands and antivirals
AU2007353120A1 (en) 2006-10-26 2008-11-20 Coley Pharmaceutical Gmbh Oligoribonucleotides and uses thereof
US20090142362A1 (en) 2006-11-06 2009-06-04 Avant Immunotherapeutics, Inc. Peptide-based vaccine compositions to endogenous cholesteryl ester transfer protein (CETP)
AU2008252577A1 (en) 2007-05-17 2008-11-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Class A oligonucleotides with immunostimulatory potency
RU2010112771A (ru) 2007-10-09 2011-11-20 Коули Фармасьютикал ГмбХ (DE) Иммуностимулирующие аналоги олигонуклеотидов, содержащие модифицированные сахарные группировки
US9968305B1 (en) 2014-10-02 2018-05-15 James S Brown System and method of generating music from electrical activity data

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0717510A2 (pt) 2013-11-19
KR20090058581A (ko) 2009-06-09
DK2078080T3 (en) 2015-08-24
HK1133440A1 (en) 2010-03-26
WO2008068638A8 (en) 2011-12-22
CA2664219C (en) 2013-12-17
AU2007330410A8 (en) 2012-05-03
KR20130014620A (ko) 2013-02-07
MX2009003398A (es) 2009-08-12
CN101517082A (zh) 2009-08-26
CA2664219A1 (en) 2008-06-12
AU2007330410B2 (en) 2012-07-26
AU2007330410A1 (en) 2008-06-12
US20160348115A1 (en) 2016-12-01
US10260071B2 (en) 2019-04-16
BRPI0717510B1 (pt) 2021-01-12
JP6006183B2 (ja) 2016-10-12
ZA200901735B (en) 2010-05-26
CN101517082B (zh) 2014-01-22
PT2078080E (pt) 2015-09-18
US20100166780A1 (en) 2010-07-01
WO2008068638A2 (en) 2008-06-12
NZ575437A (en) 2012-02-24
US20140163213A1 (en) 2014-06-12
EP2960332A1 (en) 2015-12-30
ES2544958T3 (es) 2015-09-07
SI2078080T1 (sl) 2015-09-30
PL2078080T3 (pl) 2015-12-31
EP2078080B1 (en) 2015-06-17
JP5455629B2 (ja) 2014-03-26
US9382545B2 (en) 2016-07-05
IL197549A (en) 2016-04-21
NO342465B1 (no) 2018-05-28
RU2009109098A (ru) 2010-11-10
KR101251707B1 (ko) 2013-04-11
WO2008068638A3 (en) 2008-11-13
JP2014036652A (ja) 2014-02-27
US8580268B2 (en) 2013-11-12
BRPI0717510B8 (pt) 2021-09-14
NO20091218L (no) 2009-04-21
IL197549A0 (en) 2011-08-01
RU2477315C2 (ru) 2013-03-10
JP2010504750A (ja) 2010-02-18
EP2078080A2 (en) 2009-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUE027064T2 (hu) Fokozott immunstimuláns aktivitású, hidrofób T-analógokat tartalmazó CPG oligonukleotid-analógok
ES2248126T3 (es) Acidos nucleicos inmunoestimuladores.
KR100969727B1 (ko) 면역자극 핵산
ES2307568T3 (es) Acidos nucleicos de tipo cpg y metodos de uso de los mismos.
TW200916115A (en) Class a oligonucleotides with immunostimulatory potency
ES2486298T3 (es) Análogos de oligonucleótidos inmunoestimuladores que contienen azúcares modificados
US20090017021A1 (en) Methods and compositions for inducing innate immune responses
JP2010148524A (ja) ５’ｃｐｇ核酸およびその使用方法
BRPI0616069A2 (pt) modulação de propriedades imunomoduladoras de ácido ribonucléico interferente pequeno (sirna) através de modificação de nucleotìdeo
PT2405002E (pt) Composições e métodos para formulações de oligonucleotídeos
JP2008516634A (ja) セミソフトｃクラス免疫刺激性オリゴヌクレオチド
TW200914033A (en) Combination motif immune stimulatory oligonucleotides with improved activity
BRPI0616770A2 (pt) modulação de respostas imunes mediadas por tlr empregando oligonucleotìdeos adaptadores
TWI468166B (zh) 具有增強之免疫刺激活性之經磷酸鹽修飾之寡核苷酸類似物
ES2703876T3 (es) Motivos de secuencia de ARN en el contexto de enlaces internucleotídicos definidos que inducen perfiles inmunomoduladores específicos
CN1688192B (zh) 免疫刺激核酸
MXPA06004891A (en) C-class oligonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory potency